CN110864957A - 一种不含甲醛的组织固定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明“一种不含甲醛的组织固定方法”旨在提供一种由正丙醇、硼酸、L‑(‑)木糖、壬基酚聚氧乙烯醚、缩乙二醇醚混合物、碳酸盐、纯化水混合组成的不含甲醛的组织固定液及其制备方法，上述固定液中包括如下质量分数的组份：正丙醇650‑780份，硼酸60‑120份，L‑(‑)木糖2‑10份，壬基酚聚氧乙烯醚1‑10份，缩乙二醇醚混合物30‑90份，碳酸盐2‑12份，纯化水180‑280份，该方法可用于病理染色、免疫组织化学、体外诊断试剂。
Description
技术领域：
本发明属于生物样本处理技术领域，具体涉及一种新型的不含甲醛的组织固定液及制备方法。
背景技术：
福尔马林即甲醛的水溶液，一般含有37～40％甲醛气体，一般情况下40％的甲醛水溶液叫做福尔马林，是有刺激性气味的无色有毒液体。甲醛能够阻止细胞核蛋白的合成，抑制细胞分裂及抑制细胞核和细胞浆的合成，导致微生物的死亡，具有易燃和腐蚀性，在空气里一般能测出微量，呈弱酸性，若将它在低温存储或在室温下存储较久，水溶液中可析出白色沉淀，即为多聚甲醛，若将其加热又可变成液体，因此福尔马林不适宜置于低温存放，否则容易发生凝聚。在剂量相同的情形下，以对人体毒性而言，毒性比约为甲醇∶甲醛∶甲酸＝1∶30∶6，即甲酸毒性为甲醇6倍，而甲醛毒性为甲醇30倍。甲醛固定液在使用过程中极易挥发至空气中，从而易危害人体健康，另外单纯的甲醛固定液固定时间相对长，这样更易污染环境，更不利于工作人员的身体健康。
基于常规甲醛固定液上述不足，寻找甲醛的替代品用于组织固定已经成为急需要解决的问题。发明专利号为CN201010291911.6的专利文献公开了一种标本防腐固定促进剂，虽然不含甲醛，但其更为强调防腐和促进作用，而非固定作用。发明申请号为CN201810479749.7的专利文献公开了一种无甲醛组织标本固定液，申请号为CN201510200832.2的专利文献公开了一种无甲醛动物标本固定液及其制备方法，但均含有易制毒化学品丙酮，且丙酮腐蚀性很强，有强烈的刺激性气味，虽然不含甲醛，但对人和环境的危害甚至比甲醛更大。申请号为CN201711172988.X“的专利文献公开了一种无甲醛组织固定液及其制备方法，含有微生物易于生长的蔗糖，会影响其防腐性能，另外更为强调促进剂。
发明内容：
为了解决上述技术的不足，本发明“一种不含甲醛的组织固定方法”旨在提供一种由正丙醇、硼酸、L-(-)木糖、壬基酚聚氧乙烯醚、缩乙二醇醚混合物、碳酸盐、纯化水混合组成的不含甲醛的组织固定液对组织进行固定的方法，包括其制备方法，该方法实现了无色、低毒，可用于病理染色、免疫组织化学、体外诊断试剂。
本发明所采用的技术方案是：
一种不含甲醛的组织固定方法，其特征在于，是指由正丙醇、硼酸、L-(-)木糖、壬基酚聚氧乙烯醚、缩乙二醇醚混合物、碳酸盐、纯化水混合组成的新型的不含甲醛的组织固定液对组织进行固定的方法，包括不含甲醛的组织固定液及其制备方法，上述固定液中包括如下质量分数的组份：正丙醇650-780份，硼酸60-120份，L-(-)木糖2-10份，壬基酚聚氧乙烯醚1-10份，缩乙二醇醚混合物30-90份，碳酸盐2-12份，纯化水180-280份。该方法实现了无色、低毒，可用于病理染色、免疫组织化学、体外诊断试剂。
一种不含甲醛的组织固定方法，其特征在于，所述的正丙醇是指不低于分析纯级别的正丙醇，所述的硼酸是指不低于分析纯级别的硼酸，所述的L-(-)木糖是指不低于生物试剂级别的L-(-)木糖。
一种不含甲醛的组织固定方法，其特征在于，所述的缩乙二醇醚混合物是指由缩乙二醇醚800和缩乙二醇醚1000按5∶1～2比例混合而成的混合物，其中缩乙二醇醚800是指平均分子量在730-870之间的缩乙二醇醚，缩乙二醇醚1000是指平均分子量在910-1090之间的缩乙二醇醚，且缩乙二醇醚800和缩乙二醇醚1000室温下均应为膏状物。
其中优选的方案是，缩乙二醇醚800采用平均分子量在750-850之间的缩乙二醇醚，缩乙二醇醚1000采用平均分子量在930-1070之间的缩乙二醇醚。
一种不含甲醛的组织固定方法，其特征在于，所述的碳酸盐是指碳酸氢钠、碳酸钠的一种或两种，且碳酸氢钠和碳酸钠均不低于分析纯级别。
一种不含甲醛的组织固定方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下操作步骤：取上述正丙醇、硼酸、L-(-)木糖、壬基酚聚氧乙烯醚、缩乙二醇醚混合物、碳酸盐、纯化水，依次混合，充分混匀，密闭保存，即为不含甲醛的组织固定液。
一种不含甲醛的组织固定方法，其特征在于，该方法用于动物、植物组织样本的固定。
一种不含甲醛的组织固定方法，其特征在于，该方法用于病理染色、免疫组织化学、体外诊断试剂。
本发明“一种不含甲醛的组织固定方法”中的不含甲醛的组织固定液制备方法，包括如下步骤：正丙醇650-780份，硼酸60-120份，L-(-)木糖2-10份，壬基酚聚氧乙烯醚1-10份，缩乙二醇醚混合物30-90份，碳酸盐2-12份，纯化水180-280份，依次混合，充分混匀，密闭保存，即为不含甲醛的组织固定液。
需要说明的是，在上述不含甲醛的组织固定液的制备过程中，各所述的试剂应分批依次加入。
需要说明的是，采用所述的一种不含甲醛的组织固定方法配置的不含甲醛的组织固定液进行固定时，本领域技术人员可以根据固定情况及要求对固定时间和温度等进行适当调整，可用于动物、植物等样本等的固定。
对于本领域的技术人员来说，可以根据本发明的技术方案和构思，上述组成的用量和配比可根据具体需要进行调整，从而制备出不同特点的不含甲醛的组织固定液。
本发明“一种不含甲醛的组织固定方法”与现有方法相比具有以下优势：
1、以正丙醇、硼酸、L-(-)木糖、壬基酚聚氧乙烯醚、缩乙二醇醚混合物、碳酸盐、纯化水混合组成的新型的不含甲醛的组织固定液对组织进行固定的方法，具有无色、低毒的特性，对人体和环境影响也极小。
2、不含甲醛的组织固定液的固定效果与常规甲醛固定液基本一致，可替代常规甲醛固定液。
3、不含甲醛的组织固定液固定速度比常规甲醛固定液快。
附图说明：
图1为本发明“一种不含甲醛的组织固定方法”处理动物组织进行石蜡切片HE染色显微镜示意图。其中图A为实施例一以不含甲醛的组织固定液进行固定后的石蜡切片HE染色显微镜观察结果，图B为实施例一以常规甲醛固定液进行固定后的石蜡切片HE染色显微镜观察结果。
具体实施方式：
以下具体实施方式进一步阐明本发明“一种不含甲醛的组织固定方法”的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、条件、步骤及应用所做的修改或替换，均属于本发明的范围。
实施例一
本发明“一种不含甲醛的组织固定方法”，用于动物固定组织后进行石蜡切片HE染色，按如下组份和步骤配制：正丙醇710份，硼酸70份，L-(-)木糖4份，壬基酚聚氧乙烯醚6份，缩乙二醇醚混合物75份，碳酸盐3份，纯化水220份，依次加入，充分混匀，密闭保存，即为不含甲醛的组织固定液。以下实施例均以相同处理时间、温度的常规甲醛固定液操作为对照，结果见附图1。
实验结果显示，以上述不含甲醛的组织固定液固定组织后进行石蜡切片HE染色时，在同等条件下，以实施例一的不含甲醛的组织固定液与常规甲醛固定液进行对比，未见明显差异，结果基本一致。
实施例二
本发明“一种不含甲醛的组织固定方法”，用于植物组织固定，按如下组份和步骤配制：正丙醇690份，硼酸110份，L-(-)木糖9份，壬基酚聚氧乙烯醚4份，缩乙二醇醚混合物90份，碳酸盐6份，纯化水190份，依次加入，充分混匀，密闭保存，即为不含甲醛的组织固定液。以下实施例均以相同处理条件的常规甲醛固定液操作为对照。
实验结果显示，以植物固定时，在同等条件下，以实施例二的不含甲醛的组织固定液与常规甲醛固定液进行对比，未见明显差异，结果基本一致。
对于本领域的技术人员来说，可以根据本发明的技术方案和构思，上述脱蜡和透明的时间与温度可根据具体需要进行调整，而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍应属于本发明创造的保护范围内。
Claims (7)
1.一种不含甲醛的组织固定方法，其特征在于，是指由正丙醇、硼酸、L-(-)木糖、壬基酚聚氧乙烯醚、缩乙二醇醚混合物、碳酸盐、纯化水混合组成的新型的不含甲醛的组织固定液对组织进行固定的方法，包括不含甲醛的组织固定液及其制备方法，上述固定液中包括如下质量分数的组份：正丙醇650-780份，硼酸60-120份，L-(-)木糖2-10份，壬基酚聚氧乙烯醚1-10份，缩乙二醇醚混合物30-90份，碳酸盐2-12份，纯化水180-280份。
2.根据权利要求1所述的一种不含甲醛的组织固定方法，其特征在于，所述的正丙醇是指不低于分析纯级别的正丙醇，所述的硼酸是指不低于分析纯级别的硼酸，所述的L-(-)木糖是指不低于生物试剂级别的L-(-)木糖。
3.根据权利要求1所述的一种不含甲醛的组织固定方法，其特征在于，所述的缩乙二醇醚混合物是指由缩乙二醇醚800和缩乙二醇醚1000按5∶1～2比例混合而成的混合物，其中缩乙二醇醚800是指平均分子量在730-870之间的缩乙二醇醚，缩乙二醇醚1000是指平均分子量在910-1090之间的缩乙二醇醚，且缩乙二醇醚800和缩乙二醇醚1000室温下均应为膏状物。
4.根据权利要求1所述的一种不含甲醛的组织固定方法，其特征在于，所述的碳酸盐是指碳酸氢钠、碳酸钠的一种或两种，且碳酸氢钠和碳酸钠均不低于分析纯级别。
5.根据权利要求1所述的一种不含甲醛的组织固定方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下操作步骤：取上述正丙醇、硼酸、L-(-)木糖、壬基酚聚氧乙烯醚、缩乙二醇醚混合物、碳酸盐、纯化水，依次混合，充分混匀，密闭保存，即为不含甲醛的组织固定液。
6.根据权利要求1所述的一种不含甲醛的组织固定方法，其特征在于，该方法用于动物、植物组织样本的固定。
7.根据权利要求1所述的一种不含甲醛的组织固定方法，其特征在于，该方法用于病理染色、免疫组织化学、体外诊断试剂。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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