CN110824066B - 一种头孢噻肟钠有关物质的检测方法 - Google Patents

一种头孢噻肟钠有关物质的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种头孢噻肟钠有关物质的检测方法，采用高效液相色谱法进行检测，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以流动相A和流动相B的混合液为流动相，所述流动相A为磷酸盐缓冲液，pH为6.0～7.0，所述流动相B为甲醇，pH为6.0～6.5，色谱柱选自CAPCELL PAK MG系列，通过梯度洗脱的方式对待测样品进行检测。本发明提供的方法可在高效液相色谱图中将头孢噻肟钠有关物质(包含头孢噻肟钠和12种杂质)分离开来；并通过方法学验证，使得对各组分检测的灵敏性和准确性进一步得到提升。

Description

一种头孢噻肟钠有关物质的检测方法
技术领域
本发明涉及药物制剂领域，具体涉及一种头孢噻肟钠有关物质的检测方法。
背景技术
头孢噻肟(Cefotaxime)的发明专利由赛诺菲-安万特公司(Sanofi-Aventis)的前身法国罗素-卡夫(Roussel Uclaf)公司获得。其德国专利号DE2702501(eidem)；相同发明人的美国专利号为：US4152432；分别于1977年、1979年申请，1980年德国上市。
头孢噻肟为第三代头孢菌素，抗菌谱广，对大肠埃希菌、奇异变形杆菌、克雷伯菌属和沙门菌属等肠杆菌科细菌等革兰阴性菌有强大活性。注射用头孢噻肟钠对普通变形杆菌和枸橼酸杆菌属亦有良好作用。阴沟肠杆菌、产气肠杆菌对本品比较耐药。本品对铜绿假单胞菌和产碱杆菌无抗菌活性。头孢噻肟对流感杆菌、淋病奈瑟菌(包括产β内酰酶株)、脑膜炎奈瑟菌和卡他莫拉菌等均有强大作用。本品对金黄色葡萄球菌的抗菌活性较差，对溶血性链球菌、肺炎链球菌等革兰阳性球菌的活性强，肠球菌属对本品耐药。
目前，现有的头孢噻肟钠杂质检测方法不能对头孢噻肟钠中12个已知杂质进行有效的分离和检测，无法进行严格的质量控制，因此亟需提供一种对头孢噻肟钠中12个杂质均适用的检测方法。
发明内容
针对现有技术中存在的缺陷和不足，本发明提供了一种头孢噻肟钠有关物质的检测方法。
本发明的目的之一在于提供一种头孢噻肟钠有关物质的检测方法，采用高效液相色谱法进行检测，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以流动相A和流动相B的混合液为流动相，所述流动相A为磷酸盐缓冲液，pH为6.0～7.0，所述流动相B为甲醇，pH为6.0～6.5，色谱柱选自CAPCELL PAK MG系列，通过梯度洗脱的方式对待测样品进行检测。
根据本发明的一些优选实施方式，在紫外检测波长为230nm～240nm的波长条件下进行检测，优选的，在紫外检测波长为235nm的条件下进行检测。
本发明中，头孢噻肟钠中含有的12种相关已知杂质，分别为：
Figure BDA0002309313160000021
Figure BDA0002309313160000031
以上12种杂质的，采用常规的方法极难将其进行分离，因此也无法对其含量进行准确地测定，本发明发现，采用230nm～240nm波长下质控杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H、杂质I、USP-杂质A、USP-杂质B和USP-杂质D等12个杂质，其中杂质D有两个色谱峰，相当于在此条件下分离13个已知杂质色谱峰，在选择本发明所述的固定相和流动相的情况下，可实现上述12种已知杂质的有效分离和检测。
根据本发明的一些优选实施方式，色谱柱规格为：CAPCELL PAKMGⅡC18，4.6×250mm，5μm。
根据本发明的一些优选实施方式，所述梯度洗脱(的具体操作)为：
以所述流动相的总体积为100％计，
0～9min，所述流动相A的体积分数由90％降至85％，所述流动相B的体积分数由10％增加至15％；
9～20min，所述流动相A的体积分数由85％降至82％，所述流动相B的体积分数由15％增加至18％；
20～45min，所述流动相A的体积分数由82％降至60％，所述流动相B的体积分数由18％增加至40％；
45～55min，所述流动相A的体积分数维持在60％，所述流动相B的体积分数维持在40％；
55～60min，所述流动相A的体积分数由60％增加至90％，所述流动相B的体积分数由40％降至10％；
60～70min，所述流动相A的体积分数维持在90％，所述流动相B的体积分数维持在10％；本发明中，采用上述梯度洗脱的操作可更理想地对产品进行分离。
根据本发明的一些优选实施方式，所述流动相A用磷酸调至pH为6.0～6.5，和/或，所述流动相B用磷酸调节pH为6.0～6.5；优选的，所述流动相A通过将无水磷酸氢二钠与水按质量体积比为(6～7.5)g:(950～1050)ml优选7.1g:1000ml进行混合、溶解，然后用磷酸调至pH为6.0～6.5优选6.25。本发明中，将pH调整至6.25为最优的pH，各已知杂质的分离能达到良好的分离效果，主峰峰形良好，而验证的pH为6.0～6.5范围均能满足本品的良好分离效果，故本发明优选的pH为6.0～6.5。
根据本发明的一些优选实施方式，柱温为20～30℃，优选为23～27℃。
根据本发明的一些优选实施方式，所述流动相的流速为0.8～1.2mL/min，优选为0.9～1.1mL/min。
根据本发明的一些优选实施方式，所述色谱柱的规格为：CAPCELL PAK MGⅡC18，4.6×250mm，5μm。
根据本发明的一些优选实施方式，所述待测样品用溶剂进行溶解，所述溶剂为所述流动相A(磷酸盐缓冲液)与所述流动相B(甲醇)的混合流动相；优选的，所述流动相A与流动相B的体积比为60～90：40～10，优选为90:10。本发明中，选择以上溶剂，在235nm波长条件下，所述溶剂不干扰供试品溶液中各已知杂质的有关物质测定。
根据本发明的一些优选实施方式，包括如下步骤：
色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，选择规格CAPCELL PAK MGⅡC18 4.6×250mm，5μm的色谱柱；
流动相A：磷酸盐缓冲液(称取无水磷酸氢二钠7.1g，加水1000ml使溶解，用磷酸调节pH值至6.0～6.5)；
流动相B：甲醇；
柱温：20～30℃；
检测波长1：230～240nm；
流速：0.9～1.1mL/min；
溶剂：[流动相A：流动相B(60～90:40～10)]
采用梯度洗脱。
梯度洗脱的程序为：
表1梯度洗脱程序
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0 90 10
9 85 15
20 82 18
45 60 40
55 60 40
60 90 10
70 90 10
根据本发明的一些优选实施方式，包括如下步骤：
色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，选择规格CAPCELL PAK MGⅡC18 4.6×250mm，5μm的色谱柱；
流动相A：磷酸盐缓冲液(称取无水磷酸氢二钠7.1g，加水1000ml使溶解，用磷酸调节pH值至6.25)；
流动相B：甲醇；
柱温：25℃；
检测波长1：235nm；
流速：1.0mL/min；
溶剂：[流动相A：流动相B(90:10)]；
采用梯度洗脱；
梯度洗脱的程序为：
表2梯度洗脱程序
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0 90 10
9 85 15
20 82 18
45 60 40
55 60 40
60 90 10
70 90 10
根据本发明的一些优选实施方式，供试样品的制备方法为，将头孢噻肟钠溶于所述溶剂中形成浓度为1mg/mL的溶液，优选采用临用新制、4℃进样；和/或，对照品溶液的制备方法为将所述供试样品稀释100倍。
根据本发明的一些优选实施方式，将12种相关已知杂质和头孢噻肟对照品配制成混合溶液；优选的，所述混合溶液中12种相关物质的浓度为杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F各10μg/mL，杂质G、杂质H、杂质I各2μg/mL，杂质USP-A、杂质USP-B、杂质USP-D浓度各1.5μg/mL的混合溶液，所述头孢噻肟的浓度为1mg/mL。
本发明的有益效果至少在于：本发明提供的方法可在高效液相色谱图中将头孢噻肟钠有关物质(包含头孢噻肟钠和12种杂质)分离开来；该方法对各组分检测的灵敏性和准确性均能满足对头孢噻肟钠的有关物质质控要求。该方法能够更好的控制头孢噻肟钠的质量，同时分析速度快、专属性好、重现性高，便于对头孢噻肟钠的质量检测与监控，有利于头孢噻肟钠的安全推广与应用。
附图说明
图1为本发明提供的一种头孢噻肟钠系统适用性色谱图。
图2为本发明提供的一种头孢噻肟钠系统适用性试验结果。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。
本发明中，所用仪器等未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。本发明中所用的原料均可在国内产品市场方便买到。
实施例1
本实施例提供一种高效液相色谱法测定头孢噻肟钠有关物质的方法，采用以下条件进行测定：
色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，选择规格CAPCELL PAK MGⅡC18 4.6×250mm，5μm的色谱柱；
流动相A：磷酸盐缓冲液(称取无水磷酸氢二钠7.1g，加水1000ml使溶解，用磷酸调节pH值至6.25)；
流动相B：甲醇；用磷酸调节pH为6.0～6.5；
柱温：25℃；
检测波长1：235nm；
流速：1.0mL/min；
溶剂：以体积比计，流动相A：流动相B(90:10)；
进样量：10μL
采用梯度洗脱。
梯度洗脱的程序为：
表3梯度洗脱程序
Figure BDA0002309313160000071
Figure BDA0002309313160000081
供试样品的制备方法为，将头孢噻肟钠溶于所述溶剂中形成浓度为1mg/mL的溶液；
对照品溶液的配制方法为将所述供试样品稀释100倍。
系统适用性溶液的制备方法为：将12种相关物质和头孢噻肟对照品配制成混合溶液，所述混合溶液中12种相关物质的浓度为杂质A、B、C、D、E、F各10μg/mL，杂质G、杂质H、杂质I各2μg/mL，杂质USP-A、USP-B、USP-D浓度各1.5μg/mL的混合溶液，所述头孢噻肟浓度为1mg/mL。
各溶液的具体配置过程及本发明方法的试验验证过程及结果见实验例1～4。
实验例1系统适用性试验
各杂质定位溶液的配制：精密称取头孢噻肟钠杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H、杂质I、USP-杂质A、USP-杂质B、USP-杂质D和头孢噻肟对照品各适量，分别加溶剂[以体积比计，流动相A：流动相B(90:10)]溶解并稀释制成每1mL约含杂质A、B、C、D、E、F各10μg，杂质G、杂质H、杂质I各2μg，杂质USP-A、USP-B、USP-D浓度各1.5μg的溶液，作为各杂质定位溶液；
供试品溶液的配制：取头孢噻肟钠约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加溶剂[以体积比计，流动相A：流动相B(90:10)]使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；
对照品溶液的配制：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加溶剂[以体积比计，流动相A：流动相B(90:10)]稀释至刻度，摇匀，即得(1.0％)；
系统适用性溶液的配制：精密称取头孢噻肟对照品杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H、杂质I、USP-杂质A、USP-杂质B、USP-杂质D和头孢噻肟对照品各适量，加溶剂[以体积比计，流动相A：流动相B(90:10)]溶解并稀释制成每1mL约含杂质A、B、C、D、E、F各10μg，杂质G、杂质H、杂质I各2μg，杂质USP-A、USP-B、USP-D浓度各1.5μg的混合溶液，作为系统适用性溶液；
测定：按照实施例1测定方法条件进行测定。
精密量取上述各杂质定位溶液及系统适用性溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。结果见表4，系统适用性色谱图见图1-图2，如图2中，Result表示检测结果，RT表示保留时间，Area表示峰面积，Height表示峰高，％Area表示峰面积百分比，Resdution表示分离度，Plate court表示理论塔板数，Tailing表示拖尾因子。
表4专属性试验结果
Figure BDA0002309313160000091
结论：235nm波长条件下，溶剂不干扰供试品溶液中各已知杂质的有关物质测定，出峰顺序依次为USP-A、USP-B、USP-D前峰、杂质B、杂质H、USP-D后峰、杂质A、E、I、C、F、D、G，杂质USP-D前峰与杂质B的分离度不小于1.2，其他各杂质峰之间，杂质与主峰之间的分离度应符合要求，各拖尾因子，理论踏板数均满足有关物质测定的要求。
实验例2线性与范围试验
溶剂：[以体积比计，流动相A：流动相B(90:10)]
线性样品溶液：精密称取头孢噻肟钠杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H、杂质I、USP-杂质A、USP-杂质B、USP-杂质D和头孢噻肟钠对照品各适量，分别加溶剂[以体积比计，流动相A：流动相B(90:10)]溶解制成稀释成一系列线性样品溶液，摇匀，即得。
测定：按照实施例1测定方法条件进行。
精密量取上述各溶液10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果见表5～6。
表5线性与范围试验结果
Figure BDA0002309313160000101
Figure BDA0002309313160000111
表6线性与范围试验结果
Figure BDA0002309313160000112
结论：(1)头孢噻肟钠对照品在0.132μg/mL～18.326μg/mL的范围内，线性回归方程为y＝20986.5113x+7112.6611 R2＝0.9998，线性回归显著。
(2)杂质A在0.001μg/mL～18.074μg/mL的范围内，线性回归方程为y＝23507.3371x+9228.0380 R2＝0.9996，线性回归显著。
(3)杂质B在0.416μg/mL～17.815μg/mL的范围内，线性回归方程为y＝23811.4104x-1065.7244 R2＝0.9999，线性回归显著。
(4)杂质C在0.422μg/mL～19.009μg/mL的范围内，线性回归方程为y＝19920.4161x+2041.9158 R2＝0.9999，线性回归显著。
(5)杂质D在0.463μg/mL～17.740μg/mL的范围内，线性回归方程为y＝18743.3887x+1200.4359 R2＝0.9999，线性回归显著。
(6)杂质E在0.646μg/mL～18.768μg/mL的范围内，线性回归方程为y＝17817.7730x+3084.6173 R2＝0.9996，线性回归显著。
(7)杂质F在0.441μg/mL～16.889μg/mL的范围内，线性回归方程为y＝18337.5219x+1679.9752 R2＝0.9999，线性回归显著。
(8)杂质G在0.607μg/mL～3.416μg/mL的范围内，线性回归方程为y＝21360.0545x-65.1422 R2＝0.9995，线性回归显著。
(9)杂质H在0.841μg/mL～3.606μg/mL的范围内，线性回归方程为y＝11255.3037x+602.8162 R2＝0.9995，线性回归显著。
(10)杂质I在0.509μg/mL～3.665μg/mL的范围内，线性回归方程为y＝21958.5450x+200.0420 R2＝0.9998，线性回归显著。
(11)USP-杂质A在0.738μg/mL～2.657μg/mL的范围内，线性回归方程为y＝34710.8607x+1265.6723 R2＝0.9992，线性回归显著。
(12)USP-杂质B在0.741μg/mL～2.667μg/mL的范围内，线性回归方程为y y＝13398.5168x-279.8445 R2＝0.9994，线性回归显著。
(13)USP-杂质D前峰在0.740g/mL～2.693μg/mL的范围内，线性回归方程为y＝10215.6453x-3873.5672 R2＝0.9997，线性回归显著。
(14)USP-杂质D后峰在0.740g/mL～2.693μg/mL的范围内，线性回归方程为y＝10054.4731x-4258.3424 R2＝0.9993，线性回归显著。
实验例3回收率试验
溶剂：[以体积比计，流动相A：流动相B(90:10)]；
杂质对照品贮备液1：取各杂质A～G、USP-杂质A、USP-杂质B和USP-杂质D对照品各适量，用溶剂溶解制成含杂质A浓度100μg/ml、EP杂质B浓度100μg/ml、EP杂质C浓度100μg/ml、EP杂质D浓度100μg/ml、EP杂质E浓度100μg/ml、EP杂质F浓度100μg/ml、EP杂质G浓度20μg/ml、杂质1浓度20μg/ml、杂质2浓度20μg/ml、USP杂质A浓度15μg/ml、USP杂质B浓度15μg/ml和USP杂质D浓度15μg/ml的混合对照品溶液，即得。
杂质对照品液1：精密量取1ml杂质对照品贮备液1，置于10mL量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，作为杂质对照品混合溶液1；
杂质对照品贮备液2：取各杂质A～G、USP-杂质A、USP-杂质B和USP-杂质D对照品各适量，用溶剂溶解制成含杂质A浓度100μg/ml、EP杂质B浓度100μg/ml、EP杂质C浓度100μg/ml、EP杂质D浓度100μg/ml、EP杂质E浓度100μg/ml、EP杂质F浓度100μg/ml、EP杂质G浓度20μg/ml、杂质1浓度20μg/ml、杂质2浓度20μg/ml、USP杂质A浓度15μg/ml、USP杂质B浓度15μg/ml和USP杂质D浓度15μg/ml的混合对照品溶液，即得。
杂质对照品液2：精密量取1ml杂质对照品贮备液2，置于10mL量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，作为杂质对照品混合溶液2。
准确度溶液的配制：
50％准确度溶液：取本品约20mg，精密称定，置20mL量瓶中，加混合溶剂适量使溶解，精密加入1mL杂质对照品贮备液1，用溶剂稀释至刻度，摇匀，记得。平行配制3份。
100％准确度溶液：取本品约20mg，精密称定，置20mL量瓶中，加溶剂适量超声使溶解，精密加入2mL杂质对照品贮备液1，用溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。平行配制3份。
150％准确度溶液：取本品约20mg，精密称定，置20mL量瓶中，加溶剂适量超声使溶解，精密加入3mL杂质对照品贮备液1，用溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。平行配制3份。
本底溶液的配制：
取本品约20mg，精密称定，置20mL量瓶中，加溶剂适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为本底溶液。
测定：按照实施例1测定方法条件进行测定。
精密量取上述溶液各10μL，分别注入液相色谱仪，结果见表7～20。
表7有关物质方法验证-准确度本底溶液结果
名称 含量(％)
杂质A 0.20
杂质B 0.22
杂质C 未检出
杂质D 未检出
杂质E 0.12
杂质F 0.12
杂质G 0.02
杂质H 未检出
杂质I 0.01
USP-杂质A 0.01
USP-杂质B 未检出
USP-杂质D前峰 未检出
USP-杂质D后峰 未检出
本品本底溶液中12个已知杂质除杂质C、杂质D、杂质H、USP-杂质B和USP-杂质D未检出外，其他已知杂质均有检出本底杂质含量，故在本品分析方法准确度计算时，勿需扣除本底量。
表8有关物质方法验证-杂质A回收率结果
Figure BDA0002309313160000141
表9有关物质方法验证-杂质B回收率结果
Figure BDA0002309313160000151
表10有关物质方法验证-杂质C回收率结果
Figure BDA0002309313160000152
表11有关物质方法验证-杂质D回收率结果
Figure BDA0002309313160000153
表12有关物质方法验证-杂质E回收率结果
Figure BDA0002309313160000154
Figure BDA0002309313160000161
表13有关物质方法验证-杂质F回收率结果
Figure BDA0002309313160000162
表14有关物质方法验证-杂质G回收率结果
Figure BDA0002309313160000163
表15有关物质方法验证-杂质H回收率结果
Figure BDA0002309313160000164
表16有关物质方法验证-杂质I回收率结果
Figure BDA0002309313160000171
表17有关物质方法验证-USP-杂质A回收率结果
Figure BDA0002309313160000172
表18有关物质方法验证-USP-杂质B回收率结果
Figure BDA0002309313160000173
表19有关物质方法验证-USP-杂质D前峰回收率结果
Figure BDA0002309313160000174
Figure BDA0002309313160000181
表20有关物质方法验证-USP-杂质D后峰回收率结果
Figure BDA0002309313160000182
结论：杂质回收率试验结果显示，杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H、杂质I、USP-杂质A、USP-杂质B、USP-杂质D前峰和后峰回收率测定9份样品的均值在93.0％～102.7％之间，平均回收率分别为101.3％、102.7％、101.3％、101.9％、101.1％、101.1％、93.6％、101.5％、100.6％、95.1％、96.0％，93.0％和101.6％，上述试验结果数据表明，各杂质组间回收率满足本品对各已知杂质的测定要求，表明本方法准确度良好。
实验例4耐用性试验
溶剂：[流动相A：流动相B(90:10)]；
供试品溶液的配制：取头孢噻肟钠约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加溶剂[流动相A：流动相B(90:10)]使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；
对照品溶液的配制：精密量取上述供试品溶液1.0ml，置100ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
系统适用性溶液的配制：头孢噻肟钠杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H、杂质I、USP-杂质A、USP-杂质B和USP-杂质D对照品及头孢噻肟钠各适量，精密称定，加溶剂使溶解并稀释成每1mL含杂质A、杂质B、杂质C、杂质D溶液、杂质E、杂质F分别各10μg/ml，含杂质G、杂质H、杂质I各2μg/ml，含USP-杂质A、USP-杂质B和USP杂质D各1.5μg/ml，含头孢噻肟钠1mg/ml的混合溶液，作为系统适用性溶液。
测定法：精密量取上述溶液各10μL，分别在检测波长变化±5nm、流动相pH值变化±0.25、流速变化±0.2、柱温±5℃、不同批号色谱柱的条件下(其它条件均按照实施例1测定方法条件进行测定)，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果见表21～23。
表21有关物质方法验证-耐用性拖尾因子结果
Figure BDA0002309313160000191
表22有关物质方法验证-耐用性分离度结果
Figure BDA0002309313160000192
Figure BDA0002309313160000201
表23有关物质方法验证-耐用性测定结果(％)
Figure BDA0002309313160000202
结论：由试验结果可知，在检测波长变化±5nm、流动相pH值变化±0.25、流速变化±0.2、柱温±5℃、不同批号色谱柱的条件下，有关物质检测结果基本一致，无明显差异，且理论理论塔板数、拖尾因子及各组分间的分离度均符合要求，表明本有关物质方法耐用性良好。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (14)

1.一种头孢噻肟钠有关物质的检测方法，采用高效液相色谱法进行检测，其特征在于，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以流动相A和流动相B的混合液为流动相，所述流动相A为磷酸盐缓冲液，pH为6.0~7.0，所述流动相B为甲醇，所述流动相B用磷酸调节pH为6.0~6.5，色谱柱的规格为：CAPCELL PAK MGⅡ C18，4.6×250mm，5μm，通过梯度洗脱的方式对待测样品进行检测；
所述梯度洗脱为：以所述流动相的总体积为100%计，
0~9 min，所述流动相A的体积分数由90%降至85%，所述流动相B的体积分数由10%增加至15%；
9~20 min，所述流动相A的体积分数由85%降至82%，所述流动相B的体积分数由15%增加至18%；
20~45 min，所述流动相A的体积分数由82%降至60%，所述流动相B的体积分数由18%增加至40%；
45~55 min，所述流动相A的体积分数维持在60%，所述流动相B的体积分数维持在40%；
55~60 min，所述流动相A的体积分数由60%增加至90%，所述流动相B的体积分数由40%降至10%；
60~70 min，所述流动相A的体积分数维持在90%，所述流动相B的体积分数维持在10%；
所述待测样品用溶剂进行溶解，所述溶剂为体积比为60~90：40~10的所述流动相A与所述流动相B的混合流动相；
所述有关物质为杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H、杂质I、杂质USP-A、杂质USP-B和杂质USP-D；
Figure DEST_PATH_IMAGE001
杂质A
Figure 562206DEST_PATH_IMAGE002
杂质B
Figure DEST_PATH_IMAGE003
杂质C
Figure 72822DEST_PATH_IMAGE004
杂质D
Figure DEST_PATH_IMAGE005
杂质E
Figure 321401DEST_PATH_IMAGE006
杂质F
Figure DEST_PATH_IMAGE007
杂质G
Figure 310086DEST_PATH_IMAGE008
杂质H
Figure DEST_PATH_IMAGE009
杂质I
Figure 842567DEST_PATH_IMAGE010
杂质USP-A
Figure DEST_PATH_IMAGE011
杂质USP-B
Figure 868292DEST_PATH_IMAGE012
杂质USP-D。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，在紫外检测波长为230nm～240nm的波长条件下进行检测。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，在紫外检测波长为235nm的条件下进行检测。
4.根据权利要求1~3任一项所述的检测方法，其特征在于，所述流动相A用磷酸调至pH为6.0~6.5。
5.根据权利要求1~3任一项所述的检测方法，其特征在于，所述流动相A通过将无水磷酸氢二钠与水按质量体积比为(6~7.5)g:(950~1050)ml进行混合、溶解，然后用磷酸调至pH为6.0~6.5。
6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述流动相A通过将无水磷酸氢二钠与水按质量体积比为7.1g:1000ml进行混合、溶解，然后用磷酸调至pH为6.25。
7.根据权利要求1~3任一项所述的检测方法，其特征在于，柱温为20~30℃。
8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，柱温为23~27℃。
9.根据权利要求1~3任一项所述的检测方法，其特征在于，所述流动相的流速为0.8~1.2mL/min。
10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述流动相的流速为0.9~1.1mL/min。
11.根据权利要求1~3任一项所述的检测方法，其特征在于，所述溶剂为所述流动相A与所述流动相B为体积比为90:10的混合流动相。
12.根据权利要求11所述的检测方法，其特征在于，供试样品的制备方法为，将头孢噻肟钠溶于所述溶剂中形成浓度为1mg/mL的溶液；和/或，对照品溶液的制备方法为将所述供试样品稀释100倍。
13.根据权利要求11所述的检测方法，其特征在于，系统适用性溶液的制备方法为：将12种相关已知杂质和头孢噻肟对照品配制成混合溶液。
14.根据权利要求13所述的检测方法，其特征在于，所述混合溶液中12种相关物质的浓度为杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F各10μg/mL，杂质G、杂质H、杂质I各2μg/mL，杂质USP-A、杂质USP-B、杂质USP-D浓度各1.5μg/mL的混合溶液，所述头孢噻肟的浓度为1mg/mL。
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