CN110806436A - 一种基于硒掺杂碳量子点的多巴胺检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物检测技术领域，针对多巴胺检测选择性差、灵敏度低的问题，提供了一种基于硒掺杂碳量子点的多巴胺检测方法，该技术方案如下：包括以下步骤：S1.电极抛光处理，接着进行超声清洗；S2.制备硒掺杂碳量子点；S3.将硒掺杂碳量子点混合β‑环糊精即得β‑CD/Se‑CQDs溶液，然后将步骤S1超声清洗后的电极置于β‑CD/Se‑CQDs溶液中，以形成硒掺杂碳量子点混合β‑环糊精处理后的电极；S4.将步骤S3所得的硒掺杂碳量子点混合β‑环糊精处理后的电极放入多巴胺溶液中，测定多巴胺电化学响应信号；该电信号与多巴胺的浓度在60‑1000μM范围内呈现良好的线性关系，其检测限达100nM，采用标准加入法测定尿样中的多巴胺，回收率在102.5％‑107.1％，实现高选择性和高灵敏检测多巴胺。

Description

一种基于硒掺杂碳量子点的多巴胺检测方法

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，尤其是涉及一种基于硒掺杂碳量子点的多巴胺检测方法。

背景技术

多巴胺(DA)是哺乳动物中枢神经系统中的儿茶酚胺神经递质，是一种用来帮助细胞传送脉冲的化学物质，在中枢神经系统中起着关键作用，多巴胺可传递兴奋、开心的信息，在体液和脑组织中，多巴胺异常可能会导致神经系统疾病，比如帕金森病、癫痫、老年痴呆症和精神分裂症等，因此确定生物体系中多巴胺的浓度具有很重要的意义，目前，检测多巴胺的方法主要有高效液相色谱法、化学发光法、荧光测定法和电泳法等；尿酸(UA)是鸟类和爬行类的主要代谢产物，微溶于水，易形成晶体，正常人体尿液中产物主要为尿素，含少量尿酸，尿酸是嘌呤代谢的终产物，在人体中具有重要功能，尿酸过高常常会导致痛风和高尿酸血症等疾病；抗坏血酸(AA)是人体新陈代谢中必不可少的物质，缺少抗坏血酸会导致坏血病、胶原代谢紊乱、女性生育能力降低。

多巴胺、尿酸和抗坏血酸共存于人体体液中，尿酸和抗坏血酸的存在将会干扰对多巴胺的检测，使得多巴胺检测灵敏度较低，进而使得检测多巴胺的结果不准确，导致对疾病的诊断、预防和治疗产生很严重的影响，因此还有改善的空间。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种基于硒掺杂碳量子点的多巴胺检测方法，具有检测结果准确的优点。

为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：

一种基于硒掺杂碳量子点的多巴胺检测方法，包括以下步骤：

S1.将电极进行抛光处理，接着进行超声清洗；

S2.制备硒掺杂碳量子点，包括以下步骤：

S21.在搅拌装置中加入浓度为0.2g/L-4g/L的柠檬酸、0.2g/L-4g/L的亚硒酸钠以形成预混液；

S22.将步骤S21所得的预混液位于140-170℃条件下，反应120min-150min；

S23.将步骤S22所得预混液降至室温，取出离心分离上清液，透析冻干，即得硒掺杂碳量子点；

S3.将硒掺杂碳量子点混合β-环糊精即得β-CD/Se-CQDs溶液，然后将步骤S1超声清洗后的电极置于β-CD/Se-CQDs溶液当中，以形成硒掺杂碳量子点混合β-环糊精处理后的电极；

S4.将步骤S3所得的硒掺杂碳量子点混合β-环糊精处理后的电极放入多巴胺溶液中，测定多巴胺在硒掺杂碳量子点混合β-环糊精处理后的电极上的电化学响应信号，所述电化学响应信号与多巴胺的浓度呈正相关。

通过采用上述技术方案，先用氧化铝粉浆液对电极做抛光处理，在蒸馏水和乙醇超声清洗，用氮气将电极表面吹干，通过制备的硒掺杂碳量子点Se-CQDs在超音波条件下混合β-环糊精(β-CD)以修饰电极，运用微分脉冲伏安法可实现多巴胺、尿酸和抗坏血酸的同时检测，即使在尿酸和抗坏血酸大量存在下也不会干扰多巴胺的检测，可准确监控人体中多巴胺的浓度，使得多巴胺的检测结果较为准确，进而使得较好的控制多巴胺的浓度，减少由于多巴胺的浓度异常产生疾病的情况，使用该检测方法可较好的检测多巴胺的浓度，监控疾病的效果较佳。

通过将预混液放置于140-170℃条件下，反应120min-150min，使得制备的硒掺杂碳量子点Se-CQDs生物相容性较高，且较好的修饰至电极上，使得硒掺杂碳量子点与电极结合的较为紧密，使得尿酸和抗坏血酸不会干扰多巴胺的检测，可较为准确的记录多巴胺的浓度，使得多巴胺的检测结果较为准确，且检测结果较为迅速，进而使得更好的预防和治疗疾病。

本发明进一步设置为：所述多巴胺溶液的浓度为60-1000μM。

通过采用上述技术方案，通过多巴胺的浓度为60-1000μM，当同时存在尿酸、抗坏血酸和多巴胺时，使得检测出多巴胺的结果更为准确，检测速度较快。

本发明进一步设置为：所述步骤S1中的电极为玻碳电极。

通过采用上述技术方案，通过电极为玻碳电极，材料成本较低，化学稳定性较佳，导电性较好，降低了实验成本，同时使得硒掺杂碳量子点修饰玻碳电极较为稳定。

本发明进一步设置为：所述步骤S23中，加入PH为6.4-7.4的磷酸缓冲盐溶液。

通过采用上述技术方案，通过在修饰电极中加入PH为6.4-7.5的磷酸缓冲盐溶液，有利于多巴胺的选择性检测而不受尿酸、抗坏血酸的干扰，同时也可实现三种混合物的同时检测。

本发明进一步设置为：所述步骤S22中，将步骤S21的预混液转移至聚四氟乙烯内衬中，然后装入反应釜中。

通过采用上述技术方案，通过将预混液转移至聚四氟乙烯内衬中，使得预混液具有较高的质量，较好的保护预混液的品质。

本发明进一步设置为：所述反应釜由不锈钢材料制成。

通过采用上述技术方案，通过反应釜由不锈钢材料制成，使得反应釜的导热效果较好，有利于反应的进行，使得反应的速度加快。

本发明进一步设置为：所述电化学响应信号由微分脉冲伏安法获取，所述硒掺杂碳量子点混合β-环糊精以修饰的电极位于-0.2v～0.6v电压范围内，扫描速率为50mV/s，扫描10圈。

通过采用上述技术方案，通过采用微分脉冲伏安法在-0.2v～0.6v电压范围内；电位增量为0.004V；振幅为0.05V；脉冲宽度为0.2s；采样宽度为0.0167s；脉冲周期为0.5s；静置时间为2s，可很好的区分多巴胺、尿酸和抗坏血酸。

本发明进一步设置为：所述步骤S23中，取出预混液后，在8000r/min条件下离心20-30min。

通过采用上述技术方案，通过预混液在8000r/min条件下离心20-30min，使得预混液混合的更较均匀，有利于实验测定多巴胺浓度的结果。

综上所述，本发明具有以下有益效果：

1.本发明提供一种基于硒掺杂碳量子点的多巴胺检测方法，可准确记录多巴胺的浓度，使得较好的控制多巴胺的浓度，减少由于多巴胺的浓度异常产生疾病的情况；

2.本发明提供一种基于硒掺杂碳量子点的多巴胺检测方法，实验成本较低，实验结果更为准确、操作简便、反应速度快，同时检测DA、UA、AA时线性范围较宽，实验重复性较佳；

3.本发明还提供了一种硒掺杂碳量子点的制备方法，制备出来的硒掺杂碳量子点生物相容性较高，产品质量优异。

附图说明

图1为本发明硒掺杂碳量子点(Se-CQDs)红外光谱图；

图2为本发明硒掺杂碳量子点修饰玻碳电极的流程示意图；

图3为尿酸、多巴胺和尿酸在本发明硒掺杂碳量子点修饰玻碳电极的微分脉冲伏安图；

图4为不同浓度多巴胺在本发明硒掺杂碳量子点修饰玻碳电极上的微分脉冲伏安图。

具体实施方式

以下结合附图及实施例，对本发明作进一步详细说明。

本发明中，硒掺杂碳量子点是采用本发明实施例1-5制备所得；

本发明中，柠檬酸采用上海麦克林生化科技有限公司出售的C805019货号的柠檬酸；

本发明中，亚硒酸钠采用上海金锦乐实业有限公司出售的亚硒酸钠五水化合物。

本发明中，磷酸缓冲盐溶液采用东莞市斯巴达化学有限公司出售的磷酸缓冲盐溶液。

本发明中，三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液采用东莞市斯巴达化学有限公司出售的磷酸缓冲盐溶液。

本发明中，氧化铝粉采用上海宜鑫化工有限公司出售的氧化铝粉。

本发明中，无水乙醇采用东莞市斯巴达化学有限公司出售的无水乙醇。

实施例1

制备硒掺杂碳量子点修饰电极：

1.一种硒掺杂碳量子点的制备方法，包括以下步骤：

S1.在搅拌釜中加入0.2g/L柠檬酸、0.2g/L亚硒酸钠溶于40mL纯水中，以形成预混液；

S2.将预混液转移至50mL的聚四氟乙烯内衬中，将内衬装入不锈钢反应釜后置于烘箱中，在140℃条件下反应120min；

S3.反应结束后，待烘箱的温度降至室温取出预混液，在8000r/min条件下离心20min，分离上清液，用200Da透析袋透析2天，每5h换一次水，最后冻干得到以形成硒掺杂碳量子点(Se-CQDs)。

S4.将Se-CQDs用纯水配制成2mg/mL的溶液，然后用0.1M、PH＝6.4的磷酸缓冲盐溶液稀释10倍，放冰箱备用。

2.硒掺杂碳量子点修饰电极的制备，包括以下步骤：

(1)清洗电极：用0.05μm的氧化铝粉浆液抛光打磨玻碳电极，然后在超声条件下，用无水乙醇洗两次，再用纯水洗1次，每次5min，接着再用氮气将玻碳电极表面吹干。

(2)修饰电极：

称取40mgβ-CD和5mL、2mg/mL的Se-CQDs溶液于25mL的0.1M、pH＝6.4的磷酸盐缓冲溶液中，超声波分散30min，即得β-CD/Se-CQDs溶液。将清洗好的玻碳电极置于β-CD/Se-CQDs溶液中，在-1.0V～1.0V电压范围内进行循环伏安法扫描，扫描速率为50mV/s，扫描段数为2W，采样间隔为0.001V，静置时间为2s，进行扫描10圈后，形成β-CD/Se-CQDs/GCE，自然晾干10min，然后进行化学测定。

实施例2

制备硒掺杂碳量子点修饰电极：

1.一种硒掺杂碳量子点的制备方法，包括以下步骤：

S1.在搅拌釜中加入2.0g/L柠檬酸、1.5g/L亚硒酸钠溶于40mL纯水中，以形成预混液；

S2.将预混液转移至50mL的聚四氟乙烯内衬中，将内衬装入不锈钢反应釜后置于烘箱中，在150℃条件下反应130min；

S3.反应结束后，待烘箱的温度降至室温取出预混液，在8000r/min条件下离心23min，分离上清液，用200Da透析袋透析2天，每5h换一次水，最后冻干得到以形成硒掺杂碳量子点(Se-CQDs)。

S4.将Se-CQDs用纯水配制成2mg/mL的溶液，然后用0.1M、PH＝6.6的磷酸缓冲盐溶液稀释10倍，放冰箱备用。

2.硒掺杂碳量子点修饰电极的制备，包括以下步骤：

(1)清洗电极：用0.05μm的氧化铝粉浆液抛光打磨玻碳电极，然后在超声条件下，用无水乙醇洗两次，再用纯水洗1次，每次5min，接着再用氮气将玻碳电极表面吹干。

(2)修饰电极：

称取40mgβ-CD和5mL、2mg/mL的Se-CQDs溶液于25mL的0.1M、pH＝6.6的磷酸盐缓冲溶液中，超声波分散30min，即得β-CD/Se-CQDs溶液。将清洗好的玻碳电极置于β-CD/Se-CQDs溶液中，在-1.0V～1.0V电压范围内进行循环伏安法扫描，扫描速率为50mV/s，扫描段数为2W，采样间隔为0.001V，静置时间为2s，进行扫描10圈后，形成β-CD/Se-CQDs/GCE，自然晾干10min，然后进行化学测定。

实施例3

制备硒掺杂碳量子点修饰电极：

1.一种硒掺杂碳量子点的制备方法，包括以下步骤：

S1.在搅拌釜中加入3.5g/L柠檬酸、3.0g/L亚硒酸钠溶于40mL纯水中，以形成预混液；

S2.将预混液转移至50mL的聚四氟乙烯内衬中，将内衬装入不锈钢反应釜后置于烘箱中，在160℃条件下反应140min；

S3.反应结束后，待烘箱的温度降至室温取出预混液，在8000r/min条件下离心26min，分离上清液，用200Da透析袋透析2天，每5h换一次水，最后冻干得到以形成硒掺杂碳量子点(Se-CQDs)。

S4.将Se-CQDs用纯水配制成2mg/mL的溶液，然后用0.1M、PH＝7.0的磷酸缓冲盐溶液稀释10倍，放冰箱备用。

2.硒掺杂碳量子点修饰电极的制备，包括以下步骤：

(1)清洗电极：用0.05μm的氧化铝粉浆液抛光打磨玻碳电极，然后在超声条件下，用无水乙醇洗两次，再用纯水洗1次，每次5min，接着再用氮气将玻碳电极表面吹干。

(2)修饰电极：

称取40mgβ-CD和5mL、2mg/mL的Se-CQDs溶液于25mL的0.1M、pH＝7.0的磷酸盐缓冲溶液中，超声波分散30min，即得β-CD/Se-CQDs溶液。将清洗好的玻碳电极置于β-CD/Se-CQDs溶液中，在-1.0V～1.0V电压范围内进行循环伏安法扫描，扫描速率为50mV/s，扫描段数为2W，采样间隔为0.001V，静置时间为2s，进行扫描10圈后，形成β-CD/Se-CQDs/GCE，自然晾干10min，然后进行化学测定。

实施例4

制备硒掺杂碳量子点修饰电极：

1.一种硒掺杂碳量子点的制备方法，包括以下步骤：

S1.在搅拌釜中加入4.0g/L柠檬酸、4.0g/L亚硒酸钠溶于40mL纯水中，以形成预混液；

S2.将预混液转移至50mL的聚四氟乙烯内衬中，将内衬装入不锈钢反应釜后置于烘箱中，在170℃条件下反应150min；

S3.反应结束后，待烘箱的温度降至室温取出预混液，在8000r/min条件下离心30min，分离上清液，用200Da透析袋透析2天，每5h换一次水，最后冻干得到以形成硒掺杂碳量子点(Se-CQDs)。

S4.将Se-CQDs用纯水配制成2mg/mL的溶液，然后用0.1M、PH＝7.4的磷酸缓冲盐溶液稀释10倍，放冰箱备用。

2.硒掺杂碳量子点修饰电极的制备，包括以下步骤：

(1)清洗电极：用0.05μm的氧化铝粉浆液抛光打磨玻碳电极，然后在超声条件下，用无水乙醇洗两次，再用纯水洗1次，每次5min，接着再用氮气将玻碳电极表面吹干。

(2)修饰电极：

称取40mgβ-CD和5mL、2mg/mL的Se-CQDs溶液于25mL的0.1M、pH＝7.4的磷酸盐缓冲溶液中，超声波分散30min，即得β-CD/Se-CQDs溶液。将清洗好的玻碳电极置于β-CD/Se-CQDs溶液中，在-1.0V～1.0V电压范围内进行循环伏安法扫描，扫描速率为50mV/s，扫描段数为2W，采样间隔为0.001V，静置时间为2s，进行扫描10圈后，形成β-CD/Se-CQDs/GCE，自然晾干10min，然后进行化学测定。

实施例5

制备硒掺杂碳量子点修饰电极：

1.一种硒掺杂碳量子点的制备方法，包括以下步骤：

S1.在搅拌釜中加入3.5g/L柠檬酸、1.2g/L亚硒酸钠溶于40mL纯水中，以形成预混液；

S2.将预混液转移至50mL的聚四氟乙烯内衬中，将内衬装入不锈钢反应釜后置于烘箱中，在150℃条件下反应150min；

S3.反应结束后，待烘箱的温度降至室温取出预混液，在8000r/min条件下离心20min，分离上清液，用200Da透析袋透析2天，每5h换一次水，最后冻干得到以形成硒掺杂碳量子点(Se-CQDs)。

S4.将Se-CQDs用纯水配制成2mg/mL的溶液，然后用0.1M、PH＝6.5的磷酸缓冲盐溶液稀释10倍，放冰箱备用。

2.硒掺杂碳量子点修饰电极的制备，包括以下步骤：

(1)清洗电极：用0.05μm的氧化铝粉浆液抛光打磨玻碳电极，然后在超声条件下，用无水乙醇洗两次，再用纯水洗1次，每次5min，接着再用氮气将玻碳电极表面吹干。

(2)修饰电极：

称取40mgβ-CD和5mL、2mg/mL的Se-CQDs溶液于25mL的0.1M、pH＝6.5的磷酸盐缓冲溶液中，超声波分散30min，即得β-CD/Se-CQDs溶液。将清洗好的玻碳电极置于β-CD/Se-CQDs溶液中，在-1.0V～1.0V电压范围内进行循环伏安法扫描，扫描速率为50mV/s，扫描段数为2W，采样间隔为0.001V，静置时间为2s，进行扫描10圈后，形成β-CD/Se-CQDs/GCE，自然晾干10min，然后进行化学测定。

实施例1-5制备的Se-CQDs用红外图进行分析，其中实施例5制备的产品红外图如图1。

对比例1

制备硒掺杂碳量子点修饰电极：

1.硒掺杂碳量子点的制备方法与实施例1相同。

2.硒掺杂碳量子点修饰电极的制备，包括以下步骤：

(1)清洗电极：用0.05μm的氧化铝粉浆液抛光打磨玻碳电极，然后在超声条件下，用无水乙醇洗两次，再用纯水洗1次，每次5min，接着再用氮气将玻碳电极表面吹干。

(2)修饰电极：

将清洗好的玻碳电极置于用0.1M、pH＝6.4的磷酸盐缓冲溶液稀释10倍后的Se-CQDs溶液中，在0～1.0V电压范围内进行循环伏安法扫描，扫描速率为50mV/s，扫描段数为2W，采样间隔为0.001V，静置时间为2s，进行扫描20圈后，形成Se-CQDs/GCE，自然晾干10min，然后进行化学测定。

对比例2

制备硒掺杂碳量子点修饰电极：

1.硒掺杂碳量子点的制备方法与实施例2相同。

2.硒掺杂碳量子点修饰电极的制备，包括以下步骤：

(1)清洗电极：用0.05μm的氧化铝粉浆液抛光打磨玻碳电极，然后在超声条件下，用无水乙醇洗两次，再用纯水洗1次，每次5min，接着再用氮气将玻碳电极表面吹干。

(2)修饰电极：

将清洗好的玻碳电极置于用0.1M、pH＝6.6的磷酸盐缓冲溶液稀释10倍后的Se-CQDs溶液中，在0～1.0V电压范围内进行循环伏安法扫描，扫描速率为50mV/s；扫描段数为2W；采样间隔为0.001V；静置时间为2s；进行扫描20圈后，形成Se-CQDs/GCE，自然晾干10min，然后进行化学测定。

对比例3

制备硒掺杂碳量子点修饰电极：

1.硒掺杂碳量子点的制备方法与实施例3相同。

2.硒掺杂碳量子点修饰电极的制备，包括以下步骤：

(1)清洗电极：用0.05μm的氧化铝粉浆液抛光打磨玻碳电极，然后在超声条件下，用无水乙醇洗两次，再用纯水洗1次，每次5min，接着再用氮气将玻碳电极表面吹干。

(2)修饰电极：

将清洗好的玻碳电极置于用0.1M、pH＝7.0的磷酸盐缓冲溶液稀释10倍后的Se-CQDs溶液中，在0～1.0V电压范围内进行循环伏安法扫描，扫描速率为50mV/s；扫描段数为2W；采样间隔为0.001V；静置时间为2s；进行扫描20圈后，形成Se-CQDs/GCE，自然晾干10min，然后进行化学测定。

对比例4

制备硒掺杂碳量子点修饰电极：

1.硒掺杂碳量子点的制备方法与实施例4相同。

2.硒掺杂碳量子点修饰电极的制备，包括以下步骤：

(1)清洗电极：用0.05μm的氧化铝粉浆液抛光打磨玻碳电极，然后在超声条件下，用无水乙醇洗两次，再用纯水洗1次，每次5min，接着再用氮气将玻碳电极表面吹干。

(2)修饰电极：

将清洗好的玻碳电极置于用0.1M、pH＝7.4的磷酸盐缓冲溶液稀释10倍后的Se-CQDs溶液中，在0～1V电压范围内进行循环伏安法扫描，扫描速率为50mV/s，扫描段数为2W，采样间隔为0.001V，静置时间为2s，进行扫描20圈后，形成Se-CQDs/GCE，自然晾干10min，然后进行化学测定。

对比例5

制备硒掺杂碳量子点修饰电极：

1.硒掺杂碳量子点的制备方法与实施例1相同。

2.硒掺杂碳量子点修饰电极的制备，包括以下步骤：

(1)清洗电极：用0.05μm的氧化铝粉浆液抛光打磨玻碳电极，然后在超声条件下，用无水乙醇洗两次，再用纯水洗1次，每次5min，接着再用氮气将玻碳电极表面吹干。

(2)修饰电极：

将清洗好的玻碳电极置于用0.1M、pH＝6.5的磷酸盐缓冲溶液稀释10倍后的Se-CQDs溶液中，在0～1.0V电压范围内进行循环伏安法扫描，扫描速率为50mV/s，扫描段数为2W，采样间隔为0.001V，静置时间为2s，进行扫描20圈后，形成Se-CQDs/GCE，自然晾干10min，然后进行化学测定。

对比例6

β-环糊精(β-CD)修饰电极的制备，包括以下步骤：

(1)清洗电极：用0.05μm的氧化铝粉浆液抛光打磨玻碳电极，然后在超声条件下，用无水乙醇洗两次，再用纯水洗1次，每次5min，接着再用氮气将玻碳电极表面吹干。

(2)修饰电极：

称取β-环糊精(β-CD)40mg于25mL、0.1M、pH＝6.4的磷酸盐缓冲溶液中，超声波分散30min，即得β-CD溶液。将清洗好的玻碳电极置于β-CD溶液中，在-1.0V～1.0V电压范围内进行循环伏安法扫描，扫描速率为50mV/s，扫描段数为2W，采样间隔为0.001V，静置时间为2s，进行扫描4圈后，形成β-CD/GCE，自然晾干10min，然后进行化学测定。

对比例7

β-环糊精(β-CD)修饰电极的制备，包括以下步骤：

(1)清洗电极：用0.05μm的氧化铝粉浆液抛光打磨玻碳电极，然后在超声条件下，用无水乙醇洗两次，再用纯水洗1次，每次5min，接着再用氮气将玻碳电极表面吹干。

(2)修饰电极：

称取β-环糊精(β-CD)40mg于25mL、0.1M、pH＝6.6的磷酸盐缓冲溶液中，超声波分散30min，即得β-CD溶液。将清洗好的玻碳电极置于β-CD溶液中，在-1.0V～1.0V电压范围内进行循环伏安法扫描，扫描速率为50mV/s，扫描段数为2W，采样间隔为0.001V，静置时间为2s，进行扫描4圈后，形成β-CD/GCE，自然晾干10min，然后进行化学测定。

对比例8

β-环糊精(β-CD)修饰电极的制备，包括以下步骤：

(1)清洗电极：用0.05μm的氧化铝粉浆液抛光打磨玻碳电极，然后在超声条件下，用无水乙醇洗两次，再用纯水洗1次，每次5min，接着再用氮气将玻碳电极表面吹干。

(2)修饰电极：

称取β-环糊精(β-CD)40mg于25mL、0.1M、pH＝7.0的磷酸盐缓冲溶液中，超声波分散30min，即得β-CD溶液。将清洗好的玻碳电极置于β-CD溶液中，在-1.0V～1.0V电压范围内进行循环伏安法扫描，扫描速率为50mV/s，扫描段数为2W，采样间隔为0.001V，静置时间为2s，进行扫描4圈后，形成β-CD/GCE，自然晾干10min，然后进行化学测定。

对比例9

β-环糊精(β-CD)修饰电极的制备，包括以下步骤：

(1)清洗电极：用0.05μm的氧化铝粉浆液抛光打磨玻碳电极，然后在超声条件下，用无水乙醇洗两次，再用纯水洗1次，每次5min，接着再用氮气将玻碳电极表面吹干。

(2)修饰电极：

称取β-环糊精(β-CD)40mg于25mL、0.1M、pH＝7.4的磷酸盐缓冲溶液中，超声波分散30min，即得β-CD溶液。将清洗好的玻碳电极置于β-CD溶液中，在-1.0V～1.0V电压范围内进行循环伏安法扫描，扫描速率为50mV/s，扫描段数为2W，采样间隔为0.001V，静置时间为2s，进行扫描4圈后，形成β-CD/GCE，自然晾干10min，然后进行化学测定。

对比例10

β-环糊精(β-CD)修饰电极的制备，包括以下步骤：

(1)清洗电极：用0.05μm的氧化铝粉浆液抛光打磨玻碳电极，然后在超声条件下，用无水乙醇洗两次，再用纯水洗1次，每次5min，接着再用氮气将玻碳电极表面吹干。

(2)修饰电极：

称取β-环糊精(β-CD)40mg于25mL、0.1M、pH＝6.5的磷酸盐缓冲溶液中，超声波分散30min，即得β-CD溶液。将清洗好的玻碳电极置于β-CD溶液中，在-1.0V～1.0V电压范围内进行循环伏安法扫描，扫描速率为50mV/s，扫描段数为2W，采样间隔为0.001V，静置时间为2s，进行扫描4圈后，形成β-CD/GCE，自然晾干10min，然后进行化学测定。

实验：检测方法和样品的测定。

实验1：多巴胺、尿酸和抗坏血酸的区分度。

正常实验条件的情况下，先将配制好的0.3mM UA和1mM AA置于小烧杯中，然后将新鲜配制的0.5mM多巴胺置于小烧杯中，利用微分脉冲伏安法DPV分别将实施例1-5及比较例1-10修饰的硒掺杂碳量子点修饰电极进行扫描，扫描范围为-0.2V～0.6V，电位增量为0.004V，振幅为0.05V，脉冲宽度为0.2s，采样宽度为0.0167s，脉冲周期为0.5s，静置时间为2s，实施例5对应的实验结果如图3。

由实验结果可知，实施例1-实施5中的硒掺杂碳量子点修饰玻碳电极在同时存在多巴胺(DA)、抗坏血酸(AA)以及尿酸(UA)的情况下，实施例1-实施5多巴胺所呈现的峰形优于与比较例1-比较例10多巴胺呈现的峰形，实施例1-实施例5多巴胺的峰值高于比较例1-比较例10多巴胺的峰值，其中实施例1-实施例5中以实施例5呈现的峰值最高，可表明多巴胺能与抗坏血酸和尿酸产生较好的分离，进而使得尿酸和抗坏血酸不会干扰多巴胺的检测，β-环糊精(β-CD)配合硒掺杂碳量子点可较佳的修饰电极，使得可准确记录多巴胺的浓度。

实验2：多巴胺的检测限与理想线性范围。

正常实验条件的情况下，挑选50个相同的小烧杯，编号为1、2、3至50，分别在50个烧杯中加入配制好的0.3mM UA和1mM AA，然后每10个小烧杯分为一组，共5组，然后每一组不同的烧杯分别加入新鲜配制好的0.06mM DA、0.15mM DA、0.25mM DA、0.35mM DA、0.45mMDA、0.55mM DA、0.65mM DA、0.75mM DA、0.85mM DA和1.0mM DA不同浓度进行，利用微分脉冲伏安法DPV分别将实施例1-5修饰的硒掺杂碳量子点修饰电极分别放入不同组中的不同烧杯中，每一组检测一个实施例或者对比例，然后分别取个小烧杯的样品，对样品进行扫描，扫描范围为-0.2V～0.6V，电位增量为0.004V，振幅为0.05V，脉冲宽度为0.2s，采样宽度为0.0167s，脉冲周期为0.5s，静置时间为2s，实施例5对应的实验结果参照图4。

由实验结果可知，在1.0mM DA浓度条件下，β-环糊精(β-CD)配合硒掺杂碳量子点可较佳的修饰电极，实施例1-实施例4产生的波峰较高，且实施例5产生的波峰最高，硒掺杂碳量子点修饰玻碳电极在同时存在多巴胺(DA)、抗坏血酸(AA)以及尿酸(UA)的情况下，能同时测量多巴胺的浓度，且实施例1-实施例4所测量的多巴胺浓度较为准确，实施例5测量的多巴胺浓度更为精确，进而使得更好的控制多巴胺的浓度，减少由于多巴胺的浓度异常产生疾病的情况，使用该检测方法可较好的检测多巴胺的浓度，监控疾病的效果较佳，且检测的电信号与多巴胺的浓度在60-1000μM范围内呈现良好的线性关系，其多巴胺的检测限达100nM。

实验3：尿样检测。

取尿液样本进行实验，先将尿液样本用磷酸盐缓冲溶液稀释20倍，通过标准加入法进行回收率的计算，将实施例5通过硒掺杂碳量子点修饰的电极放入尿液样本中，每个加入浓度点重复做3次(n＝3)，实验数据如下所示：

表1尿样中3个检测指标分析。

由实验结果可知，可准确的测量多巴胺DA、尿酸UA及抗坏血酸AA同时存在时，可较好的检测出DA浓度，尿酸UA及抗坏血酸AA不会干扰DA浓度的检测，采用标准加入法测定尿样中的多巴胺,回收率在102.5％-107.1％,实现高选择性和高灵敏检测多巴胺。

实验4：

检测方法相关指标分析，如表2：

由表2可知，在同时检测DA、UA、AA时，使用实施例11-实施例15制备的电极，使得较好的分离DA、UA、AA，可精确的记录三者的浓度，并且具有线性范围较宽、选择性较高及重现性较好的效果。

本具体实施方式的实施例均为本发明的较佳实施例，并非依此限制本发明的保护范围，故：凡依本发明的结构、形状、原理所做的等效变化，均应涵盖于本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种基于硒掺杂碳量子点的多巴胺检测方法，其特征是：包括以下步骤：

S1.将电极进行抛光处理，接着进行超声清洗；

S2.制备硒掺杂碳量子点，包括以下步骤：

S21.在搅拌装置中加入浓度为0.2g/L-4g/L的柠檬酸、0.2g/L-4g/L的亚硒酸钠以形成预混液；

S22.将步骤S21所得的预混液位于140-170℃条件下，反应120min-150min；

S23.将步骤S22所得预混液降至室温，取出离心分离上清液，透析冻干，即得硒掺杂碳量子点；

S3.将硒掺杂碳量子点混合β-环糊精即得β-CD/Se-CQDs溶液，然后将步骤S1超声清洗后的电极置于β-CD/Se-CQDs溶液当中，以形成硒掺杂碳量子点混合β-环糊精处理后的电极；

S4.将步骤S3所得的硒掺杂碳量子点混合β-环糊精处理后的电极放入多巴胺溶液中，测定多巴胺在硒掺杂碳量子点混合β-环糊精处理后的电极上的电化学响应信号，所述电化学响应信号与多巴胺的浓度呈正相关。

2.根据权利要求1所述的一种基于硒掺杂碳量子点的多巴胺检测方法，其特征是：所述多巴胺溶液的浓度为60-1000μM。

3.根据权利要求1所述的一种基于硒掺杂碳量子点的多巴胺检测方法，其特征是：所述步骤S1中的电极为玻碳电极。

4.根据权利要求1所述的一种基于硒掺杂碳量子点的多巴胺检测方法，其特征是：所述步骤S23中，加入PH为6.4-7.4的磷酸缓冲盐溶液。

5.根据权利要求1所述的一种基于硒掺杂碳量子点的多巴胺检测方法，其特征是：所述步骤S22中，将步骤S21的预混液转移至聚四氟乙烯内衬中，然后装入反应釜中。

6.根据权利要求5所述的一种基于硒掺杂碳量子点的多巴胺检测方法，其特征是：所述反应釜由不锈钢材料制成。

7.根据权利要求1所述的一种基于硒掺杂碳量子点的多巴胺检测方法，其特征是：所述电化学响应信号由微分脉冲伏安法获取，所述硒掺杂碳量子点混合β-环糊精以修饰的电极位于-0.2v～0.6v电压范围内，扫描速率为50mV/s，扫描10圈。

8.根据权利要求1所述的一种基于硒掺杂碳量子点的多巴胺检测方法，其特征是：所述步骤S23中，取出预混液后，在8000r/min条件下离心20-30min。

Images