CN110794065A - 利用双三元检测骨化三醇软胶囊含量的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及药品技术领域，尤其涉及一种检测骨化三醇软胶囊含量的测定方法。本发明的发明名称为利用双三元高效液相色谱法检测骨化三醇软胶囊含量的方法，使用高效液相色谱分析仪进行测定，分别测定供试品与对照品的峰面积，外标法计算样品的含量。本方法提高了样品测定的灵敏度，样品为定量限的2000倍以上，准确度有明显的提高，准确、灵敏、耐用性均较好，为药品的检测提供了可靠的含量数据，便于指导骨化三醇软胶囊的生产和质量考察，以及指导临床上用药安全。

Description

利用双三元检测骨化三醇软胶囊含量的方法
技术领域
本发明涉及药品技术领域，尤其涉及一种检测骨化三醇软胶囊含量的测定方法。
背景技术
骨化三醇在调节钙平衡方面的关键作用，包括对骨骼中成骨细胞活性的刺激作用，为治疗骨质疏松症提供充分的药理基础。适应于绝经后骨质疏松；慢性肾功能低下；术后甲状腺功能低下；特发性甲状旁腺功能低下；假性甲状腺功能低下；维生素D依赖性佝偻病；低血磷性维生素D抵抗型佝偻病等。
骨化三醇软胶囊的规格为0.5ug和0.25ug。目前常见的方法有高效液相法。由于每粒胶囊中含骨化三醇的量较小，此方法灵敏度不高，基线对含量测定的干扰较大，准确度较差等问题。
发明内容
针对上述技术问题，本发明目的是提供利用双三元高效液相色谱法检测骨化三醇软胶囊含量的方法，该方法定量准确，灵敏度高，耐用性好。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的:
本发明的利用双三元高效液相色谱法检测骨化三醇软胶囊含量的方法，包括如下步骤：
（a）供试品的制备：取骨化三醇软胶囊适量，加稀释剂稀释后作为供试品溶液；
（b）对照品溶液的制备：取骨化三醇对照品适量，加稀释剂稀释后作为对照品溶液；
（c）利用双三元高效液相色谱法，进行二维色谱柱分离，通过多波长紫外检测器或二极管阵列检测器测定，用外标法计算待测溶液中骨化三醇的含量。
采用C18 二维色谱柱测定；
第一维色谱柱为富集柱C18 柱，内径为4.6mm，柱长为100mm，填料粒径为5μm，第二维色谱柱为分析柱C18 柱，内径为4.6mm，柱长为250mm，填料粒径为5μm ；高效液相色谱分析仪包括：双三元泵、在线过滤器、富集柱和分析柱；供试品溶液和供试品溶液分别通过双三元泵依次进入在线过滤器、富集柱和分析柱。
本发明的一种利用双三元泵在线检测骨化三醇软胶囊药物含量的方法，其特征在于：步骤（a）中所用的稀释剂1由甲醇、乙醇、正己烷、正丁醇、异丙醇、乙酸乙酯、正丙醇等中的一种或者多种混合溶剂，作为稀释剂，也可以不稀释作为供试品溶液。
本发明的一种利用双三元泵在线检测骨化三醇软胶囊药物含量的方法，其特征在于：步骤（b）中对照品溶液的浓度与供试品溶液浓度相差不超过10倍。
本发明的一种利用双三元泵在线检测骨化三醇软胶囊药物含量的方法，其特征在于：步骤（c）中流动相为甲醇、乙醇、正己烷、正丁醇、异丙醇、乙酸乙酯、正丙醇中一种或者多种混合溶剂，可以进一步优化为乙酸乙酯-异丙醇-正己烷（20:40:40）。
本发明的一种利用双三元泵在线检测骨化三醇软胶囊药物含量的方法，其特征在于：流动相进行梯度洗脱，洗脱程序见下表：
Figure DEST_PATH_IMAGE002
本发明的一种利用双三元泵在线检测骨化三醇软胶囊药物含量的方法，其特征在于：六通阀切换时间如下：
时间（min） 阀
0 6-1
5 1-2
8 6-1
本发明的一种利用双三元泵在线检测骨化三醇软胶囊药物含量的方法，其特征在于：所述的柱温为25-45℃，优选35℃。
本发明的一种利用双三元泵在线检测骨化三醇软胶囊药物含量的方法，其特征在于：所述的检测波长为254nm- 270nm，优选265nm。
本发明的一种利用双三元泵在线检测骨化三醇软胶囊药物含量的方法，其特征在于：所述的进样体积为0.2ml – 20ml，优选ml。
本发明有益效果：
骨化三醇软胶囊的规格较小，为0.5ug和0.25ug两个规格，普通测定方法测定误差较大，本发明所述的检测骨化三醇软胶囊含量的方法，提高了样品测定的灵敏度，样品为定量限的2000倍以上，准确度有明显的提高，准确、灵敏、耐用性好，为药品的检测提供了可靠的含量数据，便于指导骨化三醇软胶囊的生产和质量考察，以及指导临床上用药安全。
附图说明:
图1骨化三醇的化学结构式；
图2实施例1中骨化三醇对照品定量限色谱图。
具体实施方式
通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的发明并不限于下面的实施例，这些实施例不以任何方式限制本发明的范围。本领域的技术人员在权利要求的范围内所作出的某些改变和调整也应认为属于本发明的范围。
本发明利用双三元高效液相色谱法检测骨化三醇软胶囊含量的方法，该方法定量准确，灵敏度高，耐用性好。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的:
本发明的利用双三元高效液相色谱法检测骨化三醇软胶囊含量的方法，包括如下步骤：
（a）供试品的制备：取骨化三醇软胶囊适量，加稀释剂稀释后作为供试品溶液；
（b）对照品溶液的制备：取骨化三醇对照品适量，加稀释剂稀释后作为对照品溶液；
（c）利用双三元高效液相色谱法，进行二维色谱柱分离，通过多波长紫外检测器或二极
管阵列检测器测定，用外标法计算待测溶液中骨化三醇的含量；
采用C18 二维色谱柱测定；
第一维色谱柱为Hypersil GOLD Silica富集柱，第二维色谱柱为Syncronis Silica分析柱；
高效液相色谱分析仪包括：双三元泵、在线过滤器、富集柱和分析柱；供试品溶液和供试品溶液分别通过双三元泵依次进入在线过滤器、富集柱和分析柱。
流动相为乙酸乙酯-异丙醇-正己烷（20:40:40） ，进行梯度洗脱，洗脱程序见下表：柱温：35℃，检测波长265nm。
Figure DEST_PATH_IMAGE002A
本发明的一种利用双三元泵在线检测骨化三醇软胶囊药物含量的方法，其特征在于：六通阀切换时间如下：
时间（min） 阀
0 6-1
5 1-2
8 6-1
1、本发明方法的检测限和定量限
取骨化三醇对照品溶液，加稀释剂稀释，依据色谱峰信噪比S/N＞3 时作为检测限，S/N＞10时作为定量限，得到本方法的检测限0.2ng ,定量限为0.7ng
2、本方法的精密度试验
将供试品溶液，对照品溶液分别进样5ml,重复测定6份，计算RSD值，结果见下表：
样品 含量
第1份 98.68%
第2份 99.38%
第3份 99.53%
第4份 99.26%
第5份 99.06%
第6份 98.86%
平均值 99.13%
RSD 0.33%
3、回收率试验
采用三个不同浓度水平加标试验，回收率试验结果见下表：
Figure DEST_PATH_IMAGE005
计算结果显示，骨化三醇软胶囊加标回收率范围为：95.05% ~ 105.38%。

Claims (10)

1.一种利用双三元泵在线检测骨化三醇软胶囊药物含量的方法，其特征在于：它包括以下步骤：
（a）供试品的制备：取骨化三醇软胶囊适量，加稀释剂稀释后作为供试品溶液；
（b）对照品溶液的制备：取骨化三醇对照品适量，加稀释剂稀释后作为对照品溶液；
（c）利用双三元高效液相色谱法，进行二维色谱柱分离，通过多波长紫外检测器或二极管阵列检测器测定，用外标法计算待测溶液中骨化三醇的含量；
采用C18 二维色谱柱测定；
第一维色谱柱为富集柱C18 柱，内径为4.6mm，柱长为100mm，填料粒径为5μm，第二维色谱柱为分析柱C18 柱，内径为4.6mm，柱长为250mm，填料粒径为5μm ；高效液相色谱分析仪包括：双三元泵、在线过滤器、富集柱和分析柱；供试品溶液和供试品溶液分别通过双三元泵依次进入在线过滤器、富集柱和分析柱。
2.如权利要求1所述的利用双三元泵在线检测骨化三醇软胶囊药物含量的方法，其特征在于：步骤（a）中所用的稀释剂1由甲醇、乙醇、正己烷、正丁醇、异丙醇、乙酸乙酯、正丙醇等中的一种或者多种混合溶剂，作为稀释剂，也可以不稀释作为供试品溶液。
3.如权利要求1所述的利用双三元泵在线检测骨化三醇软胶囊药物含量的方法，其特征在于：步骤（b）中对照品溶液的浓度与供试品溶液浓度相差不超过10倍。
4.如权利要求1所述的利用双三元泵在线检测骨化三醇软胶囊药物含量的方法，其特征在于：步骤（c）中流动相为甲醇、乙醇、正己烷、正丁醇、异丙醇、乙酸乙酯、正丙醇中一种或者多种混合溶剂。
5.如权利要求4所述的流动相可以进一步优化为乙酸乙酯-异丙醇-正己烷（20:40:40）。
6.如权利要求1所述的利用双三元泵在线检测骨化三醇软胶囊药物含量的方法，其特征在于：流动相进行梯度洗脱，洗脱程序如下：
Figure DEST_PATH_IMAGE001
。
7.如权利要求1所述的利用双三元泵在线检测骨化三醇软胶囊药物含量的方法，其特征在于：六通阀切换时间如下：
时间（min） 阀 0 6-1 5 1-2 8 6-1
。
8.如权利要求1所述的利用双三元泵在线检测骨化三醇软胶囊药物含量的方法，其特征在于：所述的柱温为25-45℃，优选35℃。
9. 如权利要求1所述的利用双三元泵在线检测骨化三醇软胶囊药物含量的方法，其特征在于：所述的检测波长为254nm- 270nm，优选265nm。
10.如权利要求1所述的利用双三元泵在线检测骨化三醇软胶囊药物含量的方法，其特征在于：所述的进样体积为0.2ml-20ml ，优选5ml。
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