CN110787195A - 锡叶藤及其提取物在制备治疗和/或预防化学性肝损伤药物方面的应用 - Google Patents
锡叶藤及其提取物在制备治疗和/或预防化学性肝损伤药物方面的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及药物应用领域,特别是锡叶藤及其提取物在制备治疗和/或预防化学性肝损伤药物的应用。本发明所述锡叶藤提取物选自以下任一种或一种以上的混合:锡叶藤水提取物、锡叶藤醇提取物、锡叶藤乙酸乙酯提取物、锡叶藤正丁醇提取物。本发明提供的锡叶藤提取物能明显升高CCl4急性肝损伤小鼠血清的白蛋白含量,通过修复损伤细胞的内质网、高尔基体、核糖体等,改善肝合成白蛋白的能力,从而给肝脏提供保护。
Description
技术领域
本发明涉及药物应用领域,特别是锡叶藤及其提取物在制备治疗和/ 或预防化学性肝损伤药物方面的应用。
背景技术
锡叶藤为五桠果科锡叶藤Tetracera asiatica(Lour.)Hoogland的根。其性凉,味苦,具有收敛止泻,消肿止痛之功。常用于治疗腹泻、痢疾、脱肛等症。其药材中富含鞣质、黄酮、萜类类物质等多种生物活性成分,具有明显的抑菌、抗炎、抗肿瘤等活性[国家中医药管理局中华本草编委会. 中华本草[M].第3卷.上海:上海科学技术出版社,1999:510-511.]。锡叶藤药材资源丰富,我国南部与西南各省均产,为民间常用的中草药之一。
如公布号为CN106236795A的中国专利申请公开了一种具有抑菌作用的中药制剂,特别是一种以锡叶藤(五桠果科锡叶藤Tetracera asiatica(Lour.)Hoogland的根)的提取物制成的中药制剂;研究结果表明,该中药制剂能对贺氏痢疾杆菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和伤寒杆菌具有抑菌活性作用,显示出良好的抑菌消炎作用。
目前尚未有锡叶藤及其提取物在制备治疗和/或预防化学性肝损伤药物的应用的报道。
发明内容
为了克服现有技术存在的不足,本发明提供锡叶藤及其提取物在制备治疗和/或预防肿瘤药物的应用。
本发明所述锡叶藤,均为五桠果科锡叶藤Tetracera asiatica(Lour.)Hoogland的根。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现:
锡叶藤在制备治疗和/或预防肝损伤药物的应用。
优选地,取锡叶藤,加溶剂提取,得锡叶藤提取物。
优选地,所述锡叶藤提取物选自以下任一种或一种以上的混合:锡叶藤水提取物、锡叶藤醇提取物、锡叶藤乙酸乙酯提取物、锡叶藤正丁醇提取物。
优选地,所述锡叶藤水提取物由以下方法制得:取锡叶藤并粉碎,每次按料液比1:20~30加入纯化水,在90~110℃煎煮1~2h,重复2~4次,合并,即得。
优选地,所述锡叶藤醇提取物由以下方法制得:取锡叶藤并粉碎,每次按料液比1:20~30加入体积百分比为40~60%的乙醇,在70~90℃水浴回流提取1~2h,重复2~4次,合并,即得。
优选地,所述锡叶藤乙酸乙酯提取物由以下方法制得:取所述锡叶藤醇提取物分散于体积百分比为40~60%的乙醇中,用乙酸乙酯连续萃取 10~20次,每次40~60mL,乙酸乙酯萃取液合并,即得。
优选地,所述锡叶藤正丁醇提取物由以下方法制得:取所述锡叶藤醇提取物分散于体积百分比为40~60%的乙醇中,用乙酸乙酯连续萃取10~20 次,每次40~60mL,乙酸乙酯萃取液舍去;剩余物用正丁醇连续萃取10~20 次,每次40~60mL,正丁醇萃取液合并,即得。
优选地,所述锡叶藤水提取物由以下方法制得:取锡叶藤并粉碎,每次按料液比1:25加入纯化水,在100℃煎煮1h,重复3次,合并,即得。
优选地,所述锡叶藤醇提取物由以下方法制得:取锡叶藤并粉碎,每次按料液比1:25加入体积百分比为50%的乙醇,在80℃水浴回流提取1h,重复3次,合并,即得。
优选地,所述锡叶藤乙酸乙酯提取物由以下方法制得:取所述锡叶藤醇提取物分散于体积百分比为50%的乙醇中,用乙酸乙酯连续萃取15次,每次50mL,乙酸乙酯萃取液合并,即得。
优选地,所述锡叶藤正丁醇提取物由以下方法制得:取所述锡叶藤醇提取物分散于体积百分比为50%的乙醇中,用乙酸乙酯连续萃取15次,每次50mL,乙酸乙酯萃取液舍去;剩余物用正丁醇连续萃取15次,每次50mL,正丁醇萃取液合并,即得。
优选地,所述肝损伤包括化学性肝损伤或药物性肝损伤。
优选地,所述肝损伤包括急性肝损伤或慢性肝损伤。
优选地,所述肝损伤为机体肝脏组织发展成为肝炎、肝硬化、肝纤维化、肝癌前的其中一个进程。
本发明还提供一种药物组合物,所述药物组合物由所述锡叶藤与药学上可接受的辅助性成分或治疗性成分配伍而成。
本发明还提供一种药物组合物,所述药物组合物由任一所述锡叶藤提取物与药学上可接受的辅助性成分或治疗性成分配伍而成。
与现有技术比较,本发明的方法具有以下优点:
1.本发明提供的锡叶藤提取物对CC14所致急性肝损伤,在检测的十个指标中,对ALT、ALB、MDA、NO、CAT、IL-6这6个指标的效果都优于了阳性药联苯双酯。
2.本发明提供的锡叶藤醇提物能显著降低CC14所致急性肝损伤小鼠肝血清中ALT、AST的含量,说明锡叶藤具有保肝降酶的作用;升高ALB 含量,说明锡叶藤能够修复损伤细胞内的核糖体、粗面内质网、高尔基体,恢复肝脏的蛋白质合成功能;又可降低MDA、NO含量,提高SOD、CAT 活性,提示锡叶藤的保肝作用是通过抗自由基,抑制脂质过氧化机制来发挥作用;同时降低血清中IL-6、TNF-α、IFN-γ的含量,显示锡叶藤能够抑制炎症因子的产生,保护细胞膜,促进细胞的再生和修复。
3.本发明提供的锡叶藤提取物能明显降低CCl4急性肝损伤小鼠血清的转氨酶含量,具有很好的抗化学性、酒精性肝损伤的作用,明显减轻急性肝损伤的程度,给保护肝脏提供了一种新的、有效的方法,具有研究意义和应用前景。
4.本发明提供的锡叶藤提取物能明显升高CCl4急性肝损伤小鼠血清的白蛋白含量,通过修复损伤细胞的内质网、高尔基体、核糖体等,改善肝合成白蛋白的能力,从而给肝脏提供保护。
5.本发明提供的锡叶藤各部分提取物对CCL4造成的急性肝损伤有一定的保护作用,能增强SOD、CAT的活性,降低MDA和NO的含量。
6.本发明提供的锡叶藤各部分提取物对CCL4造成的急性肝损伤有一定的保护作用,能降低IL-6、TNF-α、IFN-γ在血清中的含量,减少炎症因子的产生,降低炎症的发生,减轻毒性细胞对肝细胞膜的损害,维持结构,起到保肝的效果。
附图说明
图1为空白对照组小鼠肝小叶组织HE染色图。
图2为模型组小鼠肝小叶组织HE染色图。
图3为阳性药组小鼠肝小叶组织HE染色图。
图4为水提物高剂量组小鼠肝小叶组织HE染色图。
图5为正丁醇提取物高剂量组小鼠肝小叶组织HE染色图。
图6为乙酸乙酯提取物高剂量组小鼠肝小叶组织HE染色图。
图7为乙醇提取物高剂量组小鼠肝小叶组织HE染色图。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明,但不用来限制本发明的范围。
实施例1锡叶藤水提取物的制备
锡叶藤采于广西武鸣高峰林场,经广西中医药大学滕建北副教授鉴定为五桠果科植物锡叶藤Tetracera asiatica(Lour.)Hoogland茎。取粉碎后的锡叶藤药粉200g,每次加入5000mL纯水,在100℃煎煮1h,重复3次,合并3次所得提取液,浓缩成水提取物浸膏,使每1g水提取物浸膏含生药量为7.0771g。
实施例2锡叶藤醇提取物的制备
锡叶藤采于广西武鸣高峰林场,经广西中医药大学滕建北副教授鉴定为五桠果科植物锡叶藤Tetracera asiatica(Lour.)Hoogland茎。取粉碎后的锡叶藤药粉100g,每次加入2500mL,50%乙醇,在80℃水浴回流提取1h,重复3次,合并3次所得提取液,浓缩得锡叶藤乙醇提取物浸膏,使1g醇提取物浸膏含生药量为6.9638g。
实施例3锡叶藤乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物的制备
取实施例2所得醇提取物浸膏,分散于50%乙醇中,用乙酸乙酯连续萃取15次,每次50mL,萃取液合并,得锡叶藤乙酸乙酯提取物浸膏;剩余物用正丁醇连续萃取15次,每次50mL,萃取液合并,得锡叶藤正丁醇提取物浸膏。随后在80℃浓缩,使1g乙酸乙酯提取物浸膏含生药量为52.0833g,使1g正丁醇提取物浸膏含生药量为41.6667g。
实施例4药效实验
1.实验动物
SPF级昆明小鼠,体重为18-22g,雌雄各半,由广西医科大学实验动物中心提供。实验动物生产许可证:SCXK桂2014-0002。实验单位使用许可证编号为SYXK桂2010-0001。饲养于广西中医药大学SPF级动物房,室温控制在22~25℃,湿度为60~70%,每天光照12小时。
2.实验试剂
谷草转氨酶(AST/GOT)试剂盒(96T,赖氏法):南京建成生物工程研究所,货号C010-1;谷丙转氨酶(ALT/GPT)测试盒(96T,微板法):南京建成生物工程研究所,货号C009-2;白蛋白(ALB)测定试剂盒(96T,比色法):南京建成生物工程研究所,货号A028-1;丙二醛(MDA)测定试剂盒(96T,TBA法):南京建成生物工程研究所,货号A003-1;过氧化氢酶(CAT)测定试剂盒(96T,可见光法):南京建成生物工程研究所,货号A007-1;一氧化氮(NO)测定试剂盒(96T,一步法):南京建成生物工程研究所,货号A013-2;总超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒(96T,WST-1法):南京建成生物工程研究所,货号A001-3;小鼠白细胞介素-6(IL-6)、小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)、小鼠γ干扰素(IFN- γ):96T,X-Y Biotechnology;石蜡,甲醛,二甲苯,无水乙醇,氨水,乙醇,正丁醇,乙酸乙酯,四氯化碳(上海国药集团化学试剂有限公司,分析纯);苏木素,伊红(BASO,货号714094、BA4099);中性树脂(北京索莱宝,货号G8590);联苯双酯滴丸:北京协和药厂,批准文号:国药准字H11020980;52%白酒(红星二锅头),花生油(鲁花),水为超纯水。
3.实验仪器
酶标仪:美国BIO-TEK,型号:ELX680;
紫外分光光度计:美国安捷伦科技公司,型号:Agilent8453;
超声仪:上海必能信超声有限公司,型号:B2200S-T;
电子分析天平:北京赛多利斯仪器系统有限公司,型号:BT224S;
台式高速离心机:北京京立离心机有限公司,型号:LG16-WA;
真空泵:郑州长城科工贸有限公司,型号:SHB-Ⅲ;
电热恒温水浴锅:上海精密实验设备有限公司,型号:DK-S26;
37℃恒温孵育箱:上海易扩仪器有限公司,型号:1-35RPM;
旋涡混合器:上海环球物化仪器厂,型号:WH-861;
正置显微镜:NIKON公司,型号:ECLIPSE Ni;
移液器:吉尔森P型移液器公司,型号:P2、P10、P20、P100、P200;
恒温烘箱:上海恒一科学仪器有限公司,型号:DHG-9023A;
石蜡切片机:徕克公司,型号:SQ2125;
摊片机:徕克公司,型号:PPTHK-21B;
显微图像分析系统:NIKON公司,型号:DS-Ri2。
4.实验方法
(1)分组及给药:
取健康小鼠90只,20g±2g,雌雄各半,随机分为15组,每组6只,小鼠实验室饲养7d后,按表1给药,各组灌胃给药,每日1次,空白对照组和模型组给予等体积水,连续14d。
表1 CC14肝损伤模型分组及给药剂量表
(2)造模及取材:末次给药1h后,一次性腹腔注射0.1%CCl4花生油,以诱导制造急性肝损伤模型;空白组腹腔注射等体积生理盐水。禁食不禁水, 16h后,摘除眼球取血,3000r/min离心,取上清,-20℃冰箱中保存,分离出血清,按照试剂盒说明测定ALT、AST、ALB、IL-6、TNF-α、IFN-γ指标,10%肝组织匀浆溶液测定SOD、MDA、NO、CAT生化指标。
(3)样本制备
1)摘除小鼠眼球取血,用1.5mLEP管接取血液,血液凝固后以3000rpm, -4℃离心15min,用移液枪将血清收集于0.5mLEP管中,-80℃冰箱保存备用。
2)快速解剖,取出小鼠胸腺、肝脏和脾脏,冰生理盐水洗去积血,于滤纸上吸干水分后分别称重并记录。
3)称重小鼠肝脏后取约0.3g,置于10mLEP管中,加适量冰生理盐水制备成10%肝匀浆,以3000rpm转速离心15min,吸取上清液,置于1.5mLEP管中,-80℃冰箱保存。
4)另剪取约1*1*1cm大小肝左叶2份,分别使用4%多聚甲醛中固定48h。
(4)指标观察与检测
1)实验前后各观察小鼠毛发、精神、体型等指标一次;试验后观察肝组织颜色及形态。
2)生化免疫指标检测:药物及造模后,禁食不禁水,16h后,摘除眼球取血,3000r/min离心,取上清,-80℃冰箱中保存,分离出血清,测定ALT、 AST、ALB、IL-6、TNF-α、IFN-γ指标,10%肝组织匀浆溶液测定SOD、 MDA、NO、CAT生化指标,肝匀浆中蛋白浓度用BCA法测定。按各指标试剂盒的方法进行加样测定,从而计算结果。
3)病理切片的制备:快速取出肝脏,肝组织放于4%的多聚甲醛溶液固定 48h,备用,HE染色,-80℃贮存用于匀浆测定生化指标。制备肝脏病理切片,在光学显微镜下观察病理切片的情况,并采集图像,据Ishak评分系统评分。
(5)统计学处理用SPSS 20.0软件进行单因素方差分析,结果以表示,P<0.05为呈显著性差异,P<0.01为呈呈现了极显著性差异。方差齐性,用LSD两两比较;方差不齐时,用Dunnett T3法。
5.实验结果
(1)锡叶藤对急性肝损伤病理变化的影响
1)肉眼观察
小鼠肝CCl4损伤前皮毛整洁光亮,浓密而有光泽,精神充沛,活动迅速灵敏,体型正常,肝脏呈鲜红色,质软富有弹性,大便呈黑褐色颗粒状。被CCl4损伤后,除空白组外,其余每组均有不同程度的精神不振、迟缓、懒动、聚集等现象,模型组最明显,小鼠精神萎靡,毛发稀疏,毛色较为晦暗且无光泽,体型消瘦,活动稍显迟缓,眼睛浑浊,解剖见其肝脏灰红色,明显肿胀,无光泽且昏暗,被膜表面不顺滑,略硬的质地,钝圆的边缘。锡叶藤水提取物、醇提取、乙酸乙酯提取、正丁醇提取物高剂量及联苯双酯组小鼠精神欠佳、活动减少、皮毛无光泽、体型未见明显改变,解剖见肝脏略微肿胀,颜色变浅,表面粗糙;锡叶藤水提取物、醇提取、乙酸乙酯提取、正丁醇提取物中、低剂量组精神萎靡,活动减少,皮毛无光泽,体型未见明显改变,肝脏肿胀,颜色变浅,表面粗糙。
2)显微观察
如图1所示,显微镜下观察,空白组小鼠肝小叶的结构清晰完整,肝细胞在小叶里排列整齐,细胞核大而圆,核仁明显,肝细胞大小相近,胞浆很丰富,放射状排列以中央静脉为中心呈现,无纤维组织增生在汇管区,无炎性细胞出现。模型组鼠肝小叶结构破坏严重,肝窦结构和肝索不清晰,排列杂乱的肝索,成纤维细胞较多的出现,增生的纤维结缔组织,多发性汇管区-中心静脉(P-C)桥接出现,并可见部分不同程度灶性坏死及形成假小叶,呈空泡状的脂肪变性,扩大的肝脏汇管区,明显炎性细胞浸润在肝组织中。联苯双酯组有结构完整肝小叶和汇管区,假小叶形成未见,出现少量炎性细胞浸润在部分汇管区,减少的纤维结缔组织增生,明显轻于模型组在整体病变程度上。
CCl4致肝损的小鼠肝小叶结构轻度杂乱在锡叶藤乙醇提取物高剂量组、乙酸乙酯高剂量组、水提高剂量组,较正常的肝细胞索排列,较少炎细胞浸润,脂肪变性及明显的灶性坏死未见,减少的汇管区纤维结缔组织增生,明显轻于模型组在整体病变程度上。小鼠肝小叶结构比较杂乱在锡叶藤正丁醇部中、低剂量组,部分区域3区-中心静脉(P-C)桥接坏死出现,脂肪变性及假小叶形成部分可见,较明显炎性细胞浸润在肝组织中,较多的纤维结缔组织增生,整体病变程度与模型组接近。小鼠肝小叶结构杂乱程度较为严重在锡叶藤水部位低剂量组,多发性汇管区-中心静脉 (P-C)桥接出现,脂肪变性及假小叶形成部分可见,有明显炎性细胞浸润在肝组织中,较多的纤维结缔组织增生,整体病变程度比模型组严重。
3)HE染色病理切片评分结果的影响
如表2所示,与空白组比较,模型组评分明显高于空白组,结果有非常显著性差异(P<0.01),由此显示,模型建立成功。联苯双酯组评分与模型组相比,结果有显著差异性(P<0.01),水高、乙醇高、乙酸乙酯高、乙醇中评分与模型组相比,结果有差异性(P<0.05)。
注:与空白组比较,#P<0.05,##P<0.01;
与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01
(2)锡叶藤血清生化指标观察
1)血清中ALT、AST、ALB的变化
从表3可以看出,模型组与空白对照组比较,血清ALT活性呈现了极显著提高(P<0.01),表明急性肝损伤模型造模成功。与模型组相比,锡叶藤水提高中组、正丁醇高中低组、乙酸乙酯高中低组、乙醇高中组血清 ALT水平均呈现了降低,统计学差异呈现了极显著(P<0.01),不显著是水提取物低剂量组。从表3可以看出,模型组与空白对照组比较,血清AST 活性极其显著升高(P<0.01),表明急性肝损伤模型造模成功。与模型组比较,联苯双酯组小鼠血清中AST的含量均低于模型组,结果有极其显著性差异(P<0.01)。与模型组相比,水提取物高中剂量组、正丁醇提取物高中低剂量组、乙酸乙酯提取物高中低剂量组、乙醇提取物高中低剂量组血清AST水平均呈现了降低,统计学比较差异呈现了极显著(P<0.01),水提取物低剂量组差异显著(P<0.05)。从表3可以看出,模型组与空白对照组比较,血清ALB活性呈现呈现了极显著升高(P<0.01),表明急性肝损伤模型造模成功。与模型组相比,锡叶藤水提高中组、正丁醇高中低组、乙酸乙酯高中低组、乙醇高中组血清ALB水平均明显升高,统计学比较差异呈现了极显著(P<0.01)。
注:与空白组比较,#P<0.05,##P<0.01;
与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01
2)血清中IL-6、TNF-α、IFN-γ的变化
从表4可以看出,模型组小鼠血清中IL-6的含量高于空白组,结果有显著性差异(P<0.01),由此显示模型建立成功。与模型组比较,联苯双酯组小鼠血清中IL-6的含量均低于模型组,结果有非常显著性差异(P<0.01)。与模型组比,锡叶藤水提取物高中剂量组、正丁醇提取物高中低剂量组、乙酸乙酯提取物高中低剂量组、乙醇提取物高中低剂量组血清IL-6含量均明显降低,结果有非常显著性差异(P<0.01)。水提取物低剂量组有显著性差异(P<0.05)。从表4可以看出,与空白组比较,模型组小鼠血清中 TNF-α的含量明显高于空白组,结果有显著性差异(P<0.01),由此显示模型建立成功。与模型组比较,联苯双酯组小鼠血清中TNF-α的含量均低于模型组,结果有非常显著性差异(P<0.01)。与模型组相比,锡叶藤乙酸乙酯提取物高剂量组、乙醇提取物高剂量组血清TNF-α含量降低特别显著(P<0.01);水提取物高中剂量组、正丁醇提取物高中剂量组、乙酸乙酯提取物中低剂量组血清TNF-α含量降低,结果有显著性差异(P<0.05)。从表4可以看出,与空白组比较,模型组小鼠血清中IFN-γ的含量明显高于空白组,结果有非常显著性差异(P<0.01),由此显示模型建立成功。与模型组相比,锡叶藤水提取物高中剂量组、正丁醇提取物高中低剂量组、乙酸乙酯提取物高中低剂量组、乙醇提取物高中剂量组血清IFN-γ水平均明显降低,统计学比较差异呈现了极显著(P<0.01),乙醇提取物低剂量组差异显著(P<0.05)。
注:与空白组比较,#P<0.05,##P<0.01;
与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01
(3)锡叶藤肝组织生化指标观察
SOD的变化:从表5可以看出,模型组与空白对照组比较肝组织SOD 活性显著降低(P<0.01)。表明急性肝损伤模型造模成功。与模型组相比,锡叶藤各剂量组肝组织SOD水平均显著升高(P<0.01)。
MDA的变化:从表5可以看出,模型组与空白对照组比较肝组织MDA 活性显著升高(P<0.01)。表明急性肝损伤模型造模成功。与模型组相比,锡叶藤水提取物高剂量组、正丁醇提取物高中剂量组、乙酸乙酯提取物高中低剂量组、乙醇提取物高中剂量组肝组织MDA水平均显著降低(P< 0.01),水提取物中剂量组、正丁醇提取物低剂量组MDA水平降低(P<0.05)。
NO的变化:从表5可以看出,模型组与空白对照组比较,肝组织NO 活性呈现显著升高(P<0.01)。表明急性肝损伤模型造模成功。与模型组相比,锡叶藤各剂量组肝组织NO水平均呈现显著降低(P<0.01)。
CAT的变化:从表5可以看出,模型组与空白对照组比较,肝组织CAT 活性显著降低(P<0.01)。表明急性肝损伤模型造模成功。与模型组相比,锡叶藤各剂量组肝组织CAT水平均显著升高(P<0.01)。
注:与空白组比较,#P<0.05,##P<0.01;
与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01
虽然,上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验,对本发明作了详尽的描述,但在本发明基础上,可以对之作一些修改或改进,这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此,在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进,均属于本发明要求保护的范围。
Claims (12)
1.锡叶藤在制备治疗和/或预防肝损伤药物的应用。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,取锡叶藤,加溶剂提取,得锡叶藤提取物。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述锡叶藤提取物选自以下任一种或一种以上的混合:锡叶藤水提取物、锡叶藤醇提取物、锡叶藤乙酸乙酯提取物、锡叶藤正丁醇提取物。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述锡叶藤水提取物由以下方法制得:取锡叶藤并粉碎,每次按料液比1:20~30加入纯化水,在90~110℃煎煮1~2h,重复2~4次,合并,即得。
5.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述锡叶藤醇提取物由以下方法制得:取锡叶藤并粉碎,每次按料液比1:20~30加入体积百分比为40~60%的乙醇,在70~90℃水浴回流提取1~2h,重复2~4次,合并,即得。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述锡叶藤乙酸乙酯提取物由以下方法制得:取所述锡叶藤醇提取物分散于体积百分比为40~60%的乙醇中,用乙酸乙酯连续萃取10~20次,每次40~60mL,乙酸乙酯萃取液合并,即得。
7.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述锡叶藤正丁醇提取物由以下方法制得:取所述锡叶藤醇提取物分散于体积百分比为40~60%的乙醇中,用乙酸乙酯连续萃取10~20次,每次40~60mL,乙酸乙酯萃取液舍去;剩余物用正丁醇连续萃取10~20次,每次40~60mL,正丁醇萃取液合并,即得。
8.根据权利要求2~7任一所述的应用,其特征在于,所述肝损伤包括化学性肝损伤或药物性肝损伤。
9.根据权利要求2~7任一所述的应用,其特征在于,所述肝损伤包括急性肝损伤或慢性肝损伤。
10.根据权利要求2~7任一所述的应用,其特征在于,所述肝损伤为机体肝脏组织发展成为肝炎、肝硬化、肝纤维化、肝癌前的其中一个进程。
11.一种药物组合物,其特征在于,所述药物组合物由权利要求1所述锡叶藤与药学上可接受的辅助性成分或治疗性成分配伍而成。
12.一种药物组合物,其特征在于,所述药物组合物由权利要求2~7任一所述锡叶藤提取物与药学上可接受的辅助性成分或治疗性成分配伍而成。
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