CN101698085B - 一种治疗肝纤维化或肝硬化失代偿早期的药物组合物及制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种治疗肝纤维化或肝硬化失代偿早期的药物组合物，它是由下述重量配比的原料药制备而成的制剂：大黄5-15份、三棱5-15份、莪术5-15份。本发明还提供了该药物组合物的制备方法和用途。本发明药物中诸原料药合用，破血消积为主，旨在救急，即能够直接针对病因施治，也能快速改善肝硬化失代偿早期的危急症状，保护肝功能，祛瘀生新，寓补于泻，共奏化浊解毒，破气消瘀，保肝之功，具有协同增效作用，用于治疗肝纤维化或肝硬化失代偿早期诸症。

Description

一种治疗肝纤维化或肝硬化失代偿早期的药物组合物及制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种治疗肝纤维化和肝硬化失代偿早期的药物组合物，属药物领域。

背景技术

各种原因引起的慢性肝炎使肝细胞发生炎症坏死，炎症及坏死时刺激肝脏内纤维结缔组织异常增生，此病理过程称为肝纤维化(hepaticfibrosis)，重者进而使肝小叶结构改建，假小叶及结节形成发展为肝硬化，引起门脉高压症及肝功能衰竭等严重后果。纤维化是肝脏对慢性损伤的一种修复反应，是慢性肝病共有的病理改变，其特征是以胶原为主的细胞外基质(extracellular matrix，ECM)在肝内过多沉积。肝脏炎症激活肝星状细胞(hepatic stellate cell，HSC)导致胶原生成、沉积形成肝纤维化，进一步发展到肝硬化。肝纤维化是慢性肝炎发展到肝硬化的必经阶段，一般认为肝硬化为不可逆阶段，肝纤维化为一动态过程，属可逆性病变，阻止或延缓肝纤维化的发生是慢性肝病的治疗目标之一。

目前最有效的抗肝纤维化的措施就是积极有效地根除或控制慢性肝病的始发因素，对原发病的有效治疗本质上就是阻止细胞外基质(ECM)沉积或是促进其降解。肝纤维化的药物治疗主要集中在控制肝脏炎症；抑制HSC激活和增殖以及降解肝脏ECM，目前疗效确切、副作用少的抗纤维化西药很少，大多还处在实验研究阶段。如：抑制或减轻炎症反应类药物：熊脱氧胆酸、解热抗炎药甲苯吡啶酮、马洛替酯、白介素-1受体拮抗剂、重组白介素-10(一种强抗炎和抗纤维化因子)；抑制肝星状细胞(HSC)激活药物：抗氧化剂(包括α-胡萝卜素，维生素E)、水飞蓟素、γ型干扰素(IFN)、维甲酸(ATRA)；促进肝脏细胞再生类药物：支链氨基酸。由于西药抗肝纤维化治疗的种种限制，自20世纪70年代开始，国内外学者致力于中医药抗肝纤维化的研究，中医药理论有其独特的辨证论治理论体系和丰富的临床经验，中医药治疗肝纤维化已有确切的疗效。肝纤维化归属于中医理论癥瘕积聚、胁痛等范畴，其病理过程的发展是一个动态过程，中医病机也是一个动态演变过程。目前认为肝纤维化的病机有以下几类：气虚兼血瘀证、痰湿血瘀证、肝郁脾虚证、血瘀热结证、气阴两虚瘀热互结之证，在药物方面，如丹参、三七、甘草、桃仁及其提取物，五仁醇(五味子提取物)等在实验研究中证实具有明显抗肝纤维化作用，许多中药或其中的有效部分或有效成分已用于临床，并取得了较好的疗效，呈现广阔的应用前景。如：甘草甜素、氧化苦参碱、汉防己甲素、大黄素、牛磺酸、丹参单体IH76423及丹酚酸、己酮可可碱(pentoxifylline)、冬虫夏草、水飞蓟素(Silymarin)等。中药复方是中医治疗疾病的重要特点之一，其多成分可能是其多靶点、多途径、多层次药理作用的基础，迄今报道有代表性的复方有强肝软坚汤(由黄芪、白术、茯苓、生地、当归、白芍、丹参、郁金、牡丹皮、栀子、鳖甲、茵陈等组成)；桃仁提取物合人工虫草菌丝扶正化瘀319方(肝平胶囊)；复方861合剂(由黄芪丹参、鸡血藤等10味药物组成)；复方鳖甲软肝片(由鳖甲、赤芍、三七及冬虫夏草等11味中药组成)；传统中药大黄虫丸等。此外，还有基因治疗药物，其成分是特定的核苷酸序列。如双环醇由中国医学科学院药物研究所研制北京协和药厂独家生产的国家一类抗肝炎新药双环醇(百赛诺)。

治疗肝硬化的中药报道较多，如：申请号：200810228585.7，发明名称：治疗脂肪肝的中药，该发明涉及一种治疗脂肪肝的中药，它是由下列重量份数配比的组分组成：黄芪50-80、女贞子20-30、柏子仁10-15、酸枣仁10-15、砂仁18-20、柴胡15-18、郁金15-18、山豆根8-10、大黄8-10、番泻叶10-15、莱菔子15-20、五味子12-15、决明子30-40、枸杞子15-25、覆盆子15-20、金樱子15-20、山茱萸15-20、桑椹20-30、桑螵蛸10-15、三棱18-20、莪术18-20、赤芍15-18、泽泻15-20、野菊花15-20、金银花10-15、杜仲15-20、黄芩15-20、茵陈10-15、金钱草30-40、夏枯草15-20。本发明能够减少或消除脂肪肝给患者带来的痛苦，治疗效果好，无毒副作用，并且有效预防肝硬化、肝癌的发生。申请号：200510010596.4，发明名称：治疗肝硬化腹水的中药配方，治疗肝硬化腹水的中药配方是由荆三棱10-15克、莪术10-15克、郁金10-15克、茵陈30-35克、板蓝根15-20克、柴胡10-15克、白芍10-15克、玄参10-15克、郁李仁10-15克、宣木瓜10-15克、腹皮10-15克、甘草5-10克、苍术10-15克、大黄5-10克、陈皮10-15克，各味药在市场均有售，易购买且价格低，常规方法煎煮，方便易操作，治疗效果好，不反弹。申请号：01117623.7，发明名称：乙肝康复颗粒，一种治疗乙肝的纯中药制剂“乙肝康复颗粒”该药物是以人参、黄芪、贯仲、蚤休、半枝莲、板蓝根、赤芍、丹皮、茵陈、茯苓、丹参、牛膝、大黄、别甲、三棱、莪术、龟板、枸杞、白芍、柴胡、血竭、三七、白术、冬虫草、组合而成。按照特定工艺制备而成的药剂，本发明药物组合物的优选重量比是：人参100，黄芪100，贯仲100，蚤休100，半枝莲100，板蓝根100，赤芍50，丹皮50，茵陈50，茯苓50，丹参50，牛膝50，大黄50，别甲50，三棱50，莪术50，龟板50，枸杞50，白芍50，柴胡50，血竭50，三七50，白术50，冬虫草50(重量份)，该药治疗乙肝，具有杀灭乙肝病毒，调整免疫功能，扶正固本，抗肝纤维化，逆转肝纤维化和阻止延缓其向肝硬化发展，并且具有扶正不留邪，祛邪而不伤正，不但有扶正固本，活血化瘀，清热解毒之功，还有增强肝脏血流量，促进受损肝细胞恢复的作用。申请号：99109172.8，发明名称：治疗肝硬化腹水药丸的制备方法，该发明涉及的是一套两种治疗肝硬化腹水及腹水消退后的肝硬化康复药丸的制备方法，他针对病因机理和药理，选用中药：黑丑、面裹煨甘遂、醋炒芫花、醋炒大戟、大黄、陈皮、青皮、槟榔、琥珀、冬虫夏草、穿山甲制、鳖甲制、龟板制、桃仁、丹参、枳壳灼、三棱、莪术、丹皮、炒青皮，合理组方成加减车舟丸和虫草软肝丸内服中成药丸。

目前尚无文献报道仅仅由大黄、三棱、莪术三味原料药制备成制剂。

发明内容

本发明的技术方案是提供了一种治疗肝硬化的药物组合物。本发明的另一技术方案是提供了该药物组合物的制备方法和用途。

本发明提供了一种治疗肝硬化的药物组合物，它是由下述重量配比的原料药制备而成：

大黄5-15份、三棱5-15份、莪术5-15份。

进一步优选地，它是由下述重量配比的原料药制备而成：

大黄15份、三棱10份、莪术10份。

本发明药物是由大黄、三棱、莪术的水或有机溶剂提取物为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。

其中，所述的制剂是片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂或口服液。

本发明还提供了一种制备所述的药物组合物的方法，它包括如下步骤：

a、取下述重量配比的原料药：大黄5-15份、三棱5-15份、莪术5-15份

b、取大黄，加水或30～80％乙醇，煎煮提取，滤过，滤液浓缩，得清膏；

c、三棱、莪术加水蒸馏，收集挥发油；所得的水煎液浓缩，得清膏；

d、将b、c步骤制备的清膏、挥发油混合，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而药学上常用的制剂。

本发明还提供了该药物组合物在制备治疗肝硬化的药物中的用途。其中，所述的药物是用于改善肝硬化失代偿早期的危急症状。

本发明还提供了所述的药物组合物在制备治疗肝纤维化的药物中的用途。

本发明药物原料性辛温，力俊猛，破血消积，适用于肝硬化失代偿期早期，临床主要以肝功能减退和门脉高压为主要表现，浊毒亢盛，正气尚能耐受攻伐者。原料组方中莪术行气破血、消积散结，《医学心悟》谓之“治积聚诸气，为最要之药”，《罗氏会约医镜》“能血中之气，治一切有形之血积”；三棱辛开苦泄，既能破血逐瘀，又能行气散结，为治疗气滞血瘀日久，积于体内而成症瘕积聚的要药，《医学衷中参西录》谓之“虽坚如铁石，亦能徐徐消除”大黄泻毒消瘀，推陈出新，《神农本草经》谓之“下瘀血、血闭、寒热、破症瘕积聚，……，推陈致新，通利水谷，……”。三者合用，气滞消、瘀血去、浊毒除，达到治疗的目的。现代研究表明，莪术对多种癌细胞有直接的破坏作用，也能促进宿主特异性免疫增强；此外能抑制血小板聚集、抑制血栓形成、改善局部微循环，降低转氨酶等作用；三棱能使血栓形成时间延长、血栓长度缩短，抑制血小板聚集，延长凝血酶时间；大黄有利胆降压止血的作用，也能降低肝脏转氨酶作用，具有显著的保肝作用。三者药理作用相互补充，既能直接的抑制或破坏导致肝硬化的病原，也能显著改善肝硬化失代偿早期的临床表现，使门脉高压降低，转氨酶降低，保护肝功能。

本发明药物中诸原料药合用，破血消积为主，旨在救急，即能够直接针对病因施治，也能快速改善肝硬化失代偿早期的危急症状，保护肝功能，祛瘀生新，寓补于泻，共奏化浊解毒，破气消瘀，保肝之功，具有协同增效作用，用于治疗肝纤维化或肝硬化失代偿早期诸症。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用技术手段，在不脱离本发明上述基本技术思想的前提下，还可以作出其他多种形式的修改、替换和变更。

以下通过实施例的形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再做进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明的上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

具体实施方式

实施例1本发明药物片剂制备方法

处方：大黄15g三棱10g  莪术10g

制法一：大黄药材饮片，以水为提取溶媒，加水煎煮三次，第一次2小时，第二次1小时，第三次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.38～1.40(50℃)的清膏，备用。另取三棱、莪术药材饮片，以水为溶媒，加8倍量水，共水蒸馏，收集挥发油，水煎液滤过，滤液浓缩至相对密度为1.38～1.40(50℃)的清膏。合并上述清膏，加辅料适量，混匀，真空干燥，粉碎成细粉，制粒，将挥发油以乙醇溶解，喷入颗粒，60℃干燥，整粒，压制成片，包薄膜衣即得。

制法二：大黄药材饮片，以60％(V/V)浓度乙醇为提取溶媒，提取三次，每次1小时，合并提取液，回收乙醇，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.38～1.40(50℃)的清膏，备用。另取三棱、莪术药材，以水为溶媒，加8倍量水，共水蒸馏，收集挥发油，水煎液滤过，滤液浓缩至相对密度为1.38～1.40(50℃)的清膏。合并上述清膏，加辅料适量，混匀，真空干燥，粉碎成细粉，制粒，将挥发油以乙醇溶解，喷入颗粒，60℃干燥，整粒，压制成片，包薄膜衣即得。

实施例2本发明药物胶囊剂制备方法

处方：大黄50g三棱150g  莪术150g

制法一：大黄药材饮片，以水为提取溶媒，加水煎煮三次，第一次2小时，第二次1小时，第三次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.38～1.40(50℃)的清膏，备用。另取三棱、莪术药材饮片，以水为溶媒，加8倍量水，共水蒸馏，收集挥发油，水煎液滤过，滤液浓缩至相对密度为1.38～1.40(50℃)的清膏。合并上述清膏，加辅料适量，混匀，真空干燥，粉碎成细粉，制粒，将挥发油以乙醇溶解，喷入颗粒，60℃干燥，整粒，装胶囊。

制法二：大黄药材饮片，以30％(V/V)浓度乙醇为提取溶媒，提取三次，每次1小时，合并提取液，回收乙醇，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.38～1.40(50℃)的清膏，备用。另取三棱、莪术药材，以水为溶媒，加8倍量水，共水蒸馏，收集挥发油，水煎液滤过，滤液浓缩至相对密度为1.38～1.40(50℃)的清膏。合并上述清膏，加辅料适量，混匀，真空干燥，粉碎成细粉，制粒，将挥发油以乙醇溶解，喷入颗粒，60℃干燥，整粒，装胶囊即得。

实施例3本发明药物颗粒剂制备方法

处方：大黄150g三棱50g  莪术50g

制法一：大黄药材饮片，以水为提取溶媒，加水煎煮三次，第一次2小时，第二次1小时，第三次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.38～1.40(50℃)的清膏，备用。另取三棱、莪术药材饮片，以水为溶媒，加8倍量水，共水蒸馏，收集挥发油，水煎液滤过，滤液浓缩至相对密度为1.38～1.40(50℃)的清膏。合并上述清膏，加辅料适量，混匀，真空干燥，粉碎成细粉，制粒，将挥发油以乙醇溶解，喷入颗粒，60℃干燥，整粒，分装即得。

制法二：大黄药材饮片，以80％(V/V)浓度乙醇为提取溶媒，提取三次，每次1小时，合并提取液，回收乙醇，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.38～1.40(50℃)的清膏，备用。另取三棱、莪术药材，以水为溶媒，加8倍量水，共水蒸馏，收集挥发油，水煎液滤过，滤液浓缩至相对密度为1.38～1.40(50℃)的清膏。合并上述清膏，加辅料适量，混匀，真空干燥，粉碎成细粉，制粒，将挥发油以乙醇溶解，喷入颗粒，60℃干燥，整粒，分装即得。

以下通过药效学试验证明本发明的有益效果。

试验例1本发明药物颗粒抗肝纤维化作用的试验

透明质酸(HA)为基质成分之一，由间质细胞合成，可较准确灵敏地反映肝内已生成的纤维量及肝细胞受损状况，是肝纤维化和肝硬变的敏感指标。在急肝、慢迁肝时轻度升高；慢活肝时显著升高；肝硬化时极度升高。透明质酸水平与血清胆红素、谷丙转氨酶、γ-球蛋白呈正相关，与血清白蛋白、凝血酶原时间呈负相关，故血清透明质酸水平也是反映肝损害严重程度、判断有无活动性肝纤维化的定量指标。肝病时合成HA明显增多，同时肝细胞受损，对血中的HA摄取及降解障碍，血清HA随着肝病的发展而逐渐增高；同时又随着病情的好转而逐渐下降。故选择HA作为考核指标来进行大黄、三棱和莪术三味中药配伍配比比例筛选。

1实验材料

1.1动物

KM小鼠，体重18-22g，SPF级，由四川省医学科学院实验动物研究所提供，动物合格证号：川实动管质SCXK(川)2004-16。小鼠在室温22-24℃，明暗周期12h/12h条件下饲养，除给药、造模及试验程序外均自由饮水摄食。实验场地为国家中医药管理局成都中医药大学中药药理三级实验室，编号：TCM-2009-315。

1.2药物

大黄、莪术、三棱均购自成都同仁堂药店，经成都中医药大学生药教研室王光志博士鉴定，均为药典正品，按照不同的剂量配伍配比比例，常规方法制备成100％标准煎液备用。秋水仙碱(购自昆明制药集团股份有限公司)1mg溶于100mL蒸馏水中，冰箱保存备用。

1.3试剂和仪器

四氯化碳(CCL₄)，分析纯，天津乐凡科技公司提供，批号20060122；橄榄油，化学纯，北京化工厂生产，批号810711。透明质酸(HA)和IV型胶原(IV-C)肝纤维化ELISA试剂盒，购自上海森雄科技实业有限公司。

1.4主要仪器

Multiskan MK3型酶标，Thermo公司产品；LRH-150S型恒温恒湿培养箱，广东省医疗器械厂产品；Wellwash4MK2型洗板机，Thermo公司产品；Biofuge stratus型台式高速冷冻离心机，德国Heraeus公司产品。

2实验方法

2.1、药物配比的正交设计

选L9(33)正交设计表进行实验，见表1.

表1大黄、莪术和三棱配比比例(g)

实验号	大黄	莪术	三棱
				1	5	5	5
2	5	10	10
				3	5	15	15
4	10	5	10
				5	10	10	15
6	10	15	5
				7	15	5	15
8	15	10	5
				9	15	15	10

2.1模型制备

20％CCL₄橄榄油溶液以0.05Ml/10g体重给小鼠皮下注射，1次/周，连续6周。

2.2分组与给药

120只小鼠随机分成12组，10只/组，即正常对照组(A)、模型组(B)、1mg/kg的秋水仙碱阳性对照组(C)和大黄∶三棱∶莪术不同配比剂量组(D～L)。正常对照组动物以生理盐水灌胃，仅皮下注射橄榄油溶液；模型组和药物组动物皮下注射20％CCL₄橄榄油溶液(0.05ml/10g体重)，1次/周，连续6周。造模当日即开始给予药物，模型组动物以生理盐水灌胃，给药体积为10ml/kg，1次/d，连续6周

2.3标本采集与观测指标

末次给药后1h剖杀动物，剖杀前24h禁食不禁水，剖杀时先以乙醚吸人麻醉后摘眼球用毛细玻管眼眶取血供生化检测。采用ELISA法测定血清HA和IV-C水平。

2.4统计学方法

数据采用“均数±标准差”(X±SD)表示，运用SPSS11.5统计软件进行数据统计分析。

3结果

3.1各组小鼠血清肝纤维化指标HA和IV-C含量变化

与正常对照组比较，模型对照组小鼠血清HA和IV-C含量均显著显升，有显著的统计学意义(P＜0.01)。与模型对照组比较，大黄∶三棱∶莪术不同配比方组和阳性药对照组血清HA和IV-C含量均明显下降，有明显的统计学意义(P＜0.05)。见表2

表2大黄∶三棱∶莪术不同配伍比例对小视血清肝纤维化指标HA的影响(X±SD)

注：与模型对照组比较，^*P＜0.05；^**P＜0.01

3.2大黄∶三棱∶莪术剂量配伍比例方差分析

表3大黄∶三棱∶莪术剂量配伍比例方差分析表

4、结论

以血清透明质酸含量为考察指标，由表中极差大小显示，各影响因素作用主次为A＞B＞C；方差分析结果表明：A因素有显著性意义(P＜0.05)，即大黄用量为主要影响因素，B和C因素无显著性意义(P＞0.05)，即莪术和三棱用量影响较小，考虑以A3B3C2为佳，但考虑到B因素即莪术用量没有显著性差异，其用量可以选择次优水平，即B2，同时，考虑到莪术三棱临床一般都是作为药对出现，因此，最终确定A3B2C2为最佳配伍，即大黄∶莪术∶三棱的最终重量配伍比例为15∶10∶10。

试验例2本发明药物颗粒对肝硬化的防治作用

临床观察证实，本发明药物对肝硬化失代偿期早期具有较好的疗效。本研究从实验角度就本发明药物颗粒治疗肝纤维化药效学作用进行了探讨，为临床应用提供理论依据。

1、实验材料

1.1动物

健康SD大鼠，SPF级，雌雄各半，180±20g，(四川省医学科学院实验动物研究所，实验动物合格证号为：SCXK(川)2004-16)。均在恒温恒湿的动物室饲养1周后进行实验。

1.2药物

本发明药物颗粒方由熟大黄15g、三棱10g、莪术10g三味中药组成，以上述比例药物制备的浸膏粉为实验药物，由我校制剂教研室制备，每克相当于原生药7克。实验时用蒸馏水将其配制成所需浓度的混悬液。复方鳖甲软肝片，内蒙古福瑞制药有限责任公司产品，批号20060610。实验时用蒸馏水将其配制成所需浓度的混悬液。

1.3试剂

丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒(批号20061101)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒(批号20061101)，均购自南京建成生物工程研究所；总胆红素(Tbil)试剂盒、白蛋白/总蛋白(A/G)试剂盒(批号20061203)，均购自北京中生生物工程高技术公司；III型前胶原(PCIII)放免药盒(批号20061103)、IV型胶原(IV-C)放免药盒(批号20061103)、透明质酸(HA)放免药盒(批号20061103)、层黏连蛋白(LN))放免药盒(批号20061103)，购白天津九鼎医学生物工程有限公司。

1.4主要仪器

722型分光光度计，上海第三分析仪器厂产品；B iofuge stratus型台式高速冷冻离心机，德国Heraeus公司产品；GC1500型γ射线免疫计数器，成都中宇仪器有限公司产品。

2实验方法

2.1模型制备70只SD大鼠适应性喂养1w，其中60只造模，10只作为正常对照。造模方法参考文献造模，50只造模大鼠首次皮下注射40％四氯化碳(CCl₄)花生油溶液0.5ml/100g体重，以后每周2次皮下注射0.3ml/100g体重，共9周。造模开始前2周均以20％猪油、0.5％胆固醇、79.5％玉米面混合饲料(由四川省医学科学院实验动物研究所加工)喂养，第3～9周以0.5％胆固醇和99.5％玉米面混合饲料(由四川省医学科学院实验动物研究所加工)喂养。整个造模期间以30％乙醇作为饮料让大鼠自由饮用。正常组则以正常饲料和纯净水喂养。实验9周末确认造模成功后予以分组给药治疗。

2.2分组与给药造模结束后，将造模成功大鼠随机抽取50只，并随机分为5组，即正常对照组、模型对照组、复方鳖甲软肝片对照组、本发明药物颗粒高、中、低剂量组，每组10只，雌雄各半。各组大鼠给药相应的药物，给药剂量见表4，给药体积为10ml/kg，1次/d灌胃，连续给药4周。

2.3标本制备末次给药禁食12h后用10％水合氯醛(0.2ml/kg体重)麻醉大鼠，腹主动脉取血，3500r/min离心5min，分离血清，密封，-20℃冻存待检。检测时将冻存的血清放置于37℃恒温水浴箱解冻，分别依据试剂盒要求采用比色法，测定ALT、AST、Alb、TP。IV-C、LN采用液相平衡竞争放射免疫分析法，HA、PCIII采用竞争法。

2.4统计学方法数据采用“均数±标准差”(X±SD)表示，运用SPSS11.5统计软件进行数据统计分析。

3结果

3.1各组血清ALT、AST活性和Alb、TP含量的变化

与正常对照组比较，模型对照组大鼠血清ALT、AST活性和Tbil含量均显著升高，A/G比例显著降低，有显著的统计学意义(P＜0.01)。与模型组比较，本发明药物颗粒高、中、低剂量组和对照组血清ALT、AST活性和Tbil含量明显下降，A/G比例明显升高，有明显的著统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。见表4。

表4大鼠血清ALT、AST活性和Tbil、A/G含量变化比较(X±SD)

注：与模型对照组比较，^*P＜0.05；^**P＜0.01；^***P＜0.001

3.1各组大鼠血清肝纤维化指标含量变化

与正常对照组比较，模型对照组大鼠血清PCIII、HA、IV-C、LN含量均显著显升，有显著的统计学意义(P＜0.01或P＜0.001)。与模型对照组比较，本发明药物颗粒高、中、低剂量组和阳性药对照组血清PCIII、HA、IV-C、LN含量均明显下降，有明显的统计学意义(P＜0.05或P＜0.01或P＜0.001)。见表5

表5大鼠血清肝纤维化指标比较(X±SD)

注：与模型对照组比较，^*P＜0.05；^**P＜0.01；^***P＜0.001

4、结论

本发明药物颗粒能降低肝硬化大鼠血清中HA、LN、PCHI、IV-C的含量，从而减轻细胞外基质(ECM)在肝内的沉积，同时通过降低血清转氨酶活性和总胆红素水平，升高白蛋白/总蛋白比例来改善肝功能，提示本发明药物颗粒具有显著的抗肝脏纤维化、逆转肝硬化的作用。

试验例3本发明药物颗粒对DMN肝硬化模型大鼠门静脉压力的影响

1实验材料

1.1动物

健康SD大鼠，SPF级，全雄，200±20g，(四川省医学科学院实验动物研究所，实验动物合格证号为：SCXK(川)2004-16)。均在恒温恒湿的动物室饲养1周后进行实验。

1.2药物

本发明药物颗粒方由熟大黄15g、三棱10g、莪术10g三味中药组成，以上述比例药物制备的浸膏粉为实验药物，由我校制剂教研室制备，每克相当于原生药7克。实验时用蒸馏水将其配制成所需浓度的混悬液。复方鳖甲软肝片，内蒙古福瑞制药有限责任公司产品，批号20060610。实验时用蒸馏水将其配制成所需浓度的混悬液。

1.3试剂与仪器

二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine，DMN)，东京化成工业株式会社产品；Power Lab生理数据处理和分析系统(澳大利亚ADI公司产品膜状内翳剪(苏州医疗器械总厂).

2实验方法

2.1模型制备造模大鼠按2Ml/kg的剂量ip 5g/L DMN，首次注射剂量为全剂量的2/3，连续注射3d后停药4d，共4wk，第4周最后两次分别按全量的2/3，1/2注射；所有造模大鼠均采用此法造模，正常组ip等量的生理盐水。

2.2分组与给药取SPF级SD大鼠50只，随机分为正常对照组、模型对照组、本发明药物颗粒高、中、低剂量组，每组10只。造模结束后，除正常对照组和模型对照组每天给予等量的饮用水外，本发明药物颗粒各组大鼠给药相应的药物，给药剂量见表6，给药体积为10ml/kg，1次/d灌胃，连续给药4周。

2.3大鼠门静脉压力的测定以20g/L戊巴比妥钠按2ml/kg剂量麻醉大鼠，将麻醉好的大鼠置于保温毯上，温度维持在37℃左右，固定好四肢，沿大鼠腹壁正中线剪开长约2cm的“一”字形小口，打开腹腔，暴露门静脉主干，分离出肠系膜上静脉，结扎远离门静脉的一端，然后用膜状内翳剪于静脉血管上剪开一“v”形小缺口，插入PE-10管至门静脉正中，固定后接通压力换能器测定门静脉压力并记录之。

2.4肝组织ET-1和Hyp的测定门静脉压力测定完之后，无菌取肝组织待测肝组织内皮素-1(endothelin-1，ET-1)和肝组织羟脯氨酸(hydroxyproline，Hyp)。肝组织Hyp测定采用Jamall氏法测定，肝组织ETol测定采用放免法测定。

2.5统计学方法数据采用“均数±标准差”(X±SD)表示，运用SPSS11.5统计软件进行数据统计分析。

3结果

3.1门静脉压力的变化经DMN造模以后，模型组大鼠门静脉压力显著升高，与正常组比较，升高幅度达到了9mmHg，为正常组的2.56倍；本发明药物颗粒治疗4周后，大鼠门静脉压力显著下降，高、中、低剂量组分别下降了34.95％、46.71％和37.27％，与模型组比较有显著的统计学意义，见表6。

3.2肝组织Hyp含量的变化与正常组比较，模型组肝组织Hyp含量显著升高，本发明药物颗粒治疗4周后，各组大鼠肝组织Hyp含量均较模型组明显降低，见表6。

3.3肝组织ET-1含量的变化与空白对照组比较，模型组肝组织中ET-1含量明显增高，本发明药物颗粒治疗4周后，肝组织中ET-1含量显著下降，与模型组比较有统计学意义，见表6。

表6各组大鼠门静脉压和肝组织Hyp、ET-1含量的变化(X±SD)

注：与模型对照组比较，^*P＜0.05；^**P＜0.01；^***P＜0.001

4、结论

在肝硬化失代偿早期，肝硬化门静脉压力较高，近年来研究发现活化的肝星状细胞造成肝窦毛细血管化以及在内皮细胞作用下的细胞收缩是肝硬化门静脉高压的重要病理生理机制。而肝组织Hyp的含量与肝纤维化程度呈正相关；肝硬化时大鼠门静脉压力升高与肝组织ET-1含量的增高呈正相关。本发明药物颗粒能降低DMN肝硬化门静脉压力，降低肝组织中Hyp和ET-1含量。提示本发明药物颗粒可以通过抗肝纤维化而显著降低肝硬化模型大鼠升高的肝组织ET-1含量和门静脉压力。本发明药物对肝硬化失代偿早期的的危急症状有显著改善作用。

综上所述，本发明药物用于治疗肝纤维化和肝硬化，也适用于肝硬化失代偿期早期诸症，三个原料药大黄、三棱、莪术配伍使用，具有协同增效作用。

Claims (7)

1.一种治疗肝纤维化或肝硬化失代偿早期的药物组合物，其特征在于：它是由下述重量配比的原料药制备而成的制剂：

大黄5份、三棱5份、莪术5份。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：它是由大黄、三棱、莪术的水或有机溶剂提取物为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。

3.根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于：所述的制剂是片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂或口服液。

4.一种制备权利要求1-3任意一项所述的药物组合物的方法，它包括如下步骤：

a、取下述重量配比的原料药：大黄5份、三棱5份、莪术5份；

b、取大黄，加水或30％～80％乙醇，煎煮提取，滤过，滤液浓缩，得清膏；

c、三棱、莪术加水蒸馏，收集挥发油；所得的水煎液浓缩，得清膏；

d、将b、c步骤制备的清膏、挥发油混合，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用的制剂。

5.权利要求1-3任一项所述的药物组合物在制备治疗肝硬化的药物中的用途。

6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于：所述的药物是用于改善肝硬化失代偿早期的危急症状。

7.权利要求1-3任意一项所述的药物组合物在制备治疗肝纤维化的药物中的用途。