CN101933973A - 防治肝损伤的药物组合物 - Google Patents
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Abstract
防治肝损伤的药物组合物,以黄芩黄酮和五味子木脂素为有效药用成分,与药物中可以接受的辅助添加成分共同组成,有效药物成分黄芩黄酮和五味子木脂素分别以其提取用原料生药黄芩和五味子的重量份计的比例为1/(0.2~5)。该组合物特别适用于对急慢性肝炎、肝纤维化,特别是肝纤维化的防治,试验结果显示,在用于该适应症方面,两有效药物成分能产生显著的协同增效作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种防治肝损伤、特别是适用于防治急慢性肝炎、肝纤维化的药物组合物。
背景技术
肝硬化的发病遍布世界各国,严重危害人身体的健康。肝硬化是肝脏疾病的终末期,目前尚无办法使其逆转。防治肝硬化的最佳治疗方法是去除病因。目前西医针对病毒性肝炎的治疗主要是采用抗用抗病毒类药物如干扰素(INF)、胸腺素、核苷类(拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦、泛昔洛韦等)等进行治疗,尽管拉米夫定等药物具有一定的抗病毒作用,但由于肝炎病毒本身的多变性,很易产生耐药性,且其作用谱窄,仅对部分乙型肝炎病毒有效,如果长期服用还可出现淋巴结肿大、水肿、腹水、血尿等不良反应,一旦停药还会产生反跳现象,严重者可因肝功衰竭而死亡。而对于脂肪肝的治疗,目前并无疗效肯定的西药或中药。显然,目前单从病因治疗还远远不能阻止肝硬化的发生。
研究表明:慢性肝炎致肝组织受损后,在肝星状细胞(HSC)、肝细胞及中性粒细胞等共同作用下,可使胶原等细胞外基质(ECM)合成增多或降解减少,ECM大量沉积导致肝纤维化的形成,而如果再生的肝细胞被增加的ECM包绕则可形成假小叶造成肝硬化。显然肝纤维化是慢性肝病发展为肝硬化必经的病理过程。最新研究成果表明肝纤维化阶段具有可逆性的特点,故对此阶段的干预治疗将有利于阻止向肝硬化的转变。
目前西医抗纤维化主要通过抑制炎症反应,减少ECM的生成或促进ECM的降解以及改善微循环与代谢障碍,减少并发症等步骤治疗肝纤维化。常用INF、前列地尔、己酮可可碱、马洛替酯、维生素E、卤呋酮及肝素等药物治疗HF,尽管这些药物具有一定的作用,但由于疗效有限,且部分药物具有一定的毒副作用,如注射前列地尔会导致静脉炎、心悸、皮疹等反应。双环醇具有良好的保肝、降酶作用,临床上用于急、慢性肝损伤取得良好效果,但目前在防治肝纤维化方面的作用还有待进一步研究。
中医学中并无肝纤维化的病名,据其临床表现一般多归属于臌胀、虫臌、水臌等范畴。究其病因,有人认为肝纤维化病因包括情志不和而肝郁气滞,水毒之邪侵袭脏腑经络(感染虫毒),以及黄疽迁延日久等。认为肝纤维化属本虚标实之证。标实即邪气实,为痰饮湿浊瘀血内阻。治疗则常采用活血化瘀等方法,兼用扶正、补益、健脾、疏肝、利湿等方法;取得较好疗效。现代实验研究表明许多中药及其有效部位或成分具有明显的抗纤维化作用,如丹参、三七、桃仁、苦参、川芎、莪术、当归及汉防己甲素、丹参酮II A、氧化苦参碱[13]以及绞股蓝皂苷等。人们经过大量的努力,已经成功开发出几种抗肝纤维化的中药新药,如益肝灵片(水飞蓟素)、乙肝宁颗粒、护肝片、肝泰宝胶囊、少阳肝泰冲剂、肝苏颗粒、强肝糖浆以及扶正化瘀胶囊等。在这些药物当中,部分药物主要是保肝药物,对肝纤维化的作用未见相关报道;只有扶正化瘀胶囊的研究报道较多,目前报道显示该药对肝纤维化具有一定的防治作用,但有一定的不良反应(如引起上消化道不适和轻度排气增多等)。因此,目前尚缺乏能有效防治肝纤维化的药物。
发明内容
针对上述情况,本发明将提供一种经试验证实在防治急慢性肝炎、肝纤维化等肝病方面具有积极和可靠效果的药物组合物。
本发明防治肝损伤的药物组合物,是以黄芩黄酮和五味子木脂素为有效药用成分,与药物中可以接受的辅助添加成分共同组成。其中,所说有效药物成分黄芩黄酮和五味子木脂素分别以其提取用原料生药黄芩和五味子的重量份计的比例为1/(0.2~5),更好的所说比例是1/(0.5~2),优选的所说比例1/1。
黄芩黄酮是药用植物黄芩中的主要有效成分,其主要成分是黄芩苷。黄芩为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根,为常用中药,具有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎等功效,广泛应用于湿温、暑湿、胸闷呕恶,湿热痞满、黄疸泻痢、肺热咳嗽、高热烦渴、血热吐衄,痈肿疮毒、胎动不安等症,取得良好效果。黄芩主要含黄酮类成分,如黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、黄芩新素等,现代药理研究表明黄芩及其提取物具有抑菌、抗过敏,对杆菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、肺炎双球菌、脑膜炎球菌、霍乱弧菌等有不同程度的抑制作用,黄芩苷、黄芩素对豚鼠离体气管过敏性收缩及整体动物过敏性气喘,均有缓解作用。黄芩还有解热、降压、镇静、保肝、利胆、抑制肠管蠕动、降血脂、抗氧化、调节cAMP水平、抗肿瘤等作用。黄芩提取物收载于《中国药典》2005年一部,含黄芩苷不得少于85.0%。黄芩苷具有消炎抗菌、退黄、降谷丙转氨酶(ALT)及抗过敏的作用,其抗变态反应的机制可能系抑制肥大细胞巯基酶的活化,从而抑制组胺、5-羟色胺等过敏反应介质的释放。部分病人应用本品后血清IgG、1gM浓度上升,表明特异性体液免疫作用增强。黄芩苷的临床适应症包括急性、慢性迁延性和慢性活动性肝炎,也可用于肾炎、肾盂肾炎及过敏性疾病,具有较好的降ALT作用。用药期间可见乙肝表面抗原(HBsA,阳性滴度下降,但不巩固。目前上市的药品有黄芩苷片。
五味子可有北五味子和南五味子之分。习称的北五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinesis(Turcz.)Baill的干燥成熟果实;南五味子为木兰科植物华中五味子Schisandra sphenanthera Rehd.et Wils.的干燥成熟果实。二者均收载于现行版《中国药典》,具有相同的功能与主治,收敛固涩,益气生津,补肾宁心,可用于久咳虚喘、自汗、盗汗、遗精、滑精、久泻不止、津伤口渴、消渴、心悸、失眠、多梦等。目前研究表明,两种五味子含有相同或相似的化学成分,如木脂素、挥发油、有机酸等,能利胆,降低血清转氨酶,对肝细胞有保护作用,能增加细胞免疫功能,使脑、肝、脾脏SOD活性明显增强,故具有提高免疫,抗氧化、抗衰老作用。因此,在本发明中一般不再区分而统称为五味子。五味子及其种仁乙醇提取物对四氯化碳所致兔、大鼠和小鼠肝损害引起谷丙转氨酶升高有明显的降低作用。制药工业中常使用的由五味子提取得到的五味子木脂素提取物(或醇提取物)中,含总木脂素≥10.0%。有报道从五味子中得到的木脂素及其衍生物22种,发现几乎所有木脂素对CCl4及半乳糖胺肝损害均有抑制作用,从中分离得到的(五味子)酯甲、酯乙、酯丙和酯丁都有降酶作用。五味子制剂和五味子乙素、华中五味子酯甲等还能减轻或抑制CCl4或硫代乙胺所致肝损害。目前以五仁醇浸膏(五味子仁醇提取物,本品含五仁醇按五味子乙素计算,不得低于9.0%)制成的药品有五仁醇胶囊,功能主治为滋补肝肾,用于急慢性、迁延性肝炎(GPT偏高)而具肝肾阴虚之症者;以南五味子醇浸膏制成的药品有五酯胶囊,能降低血清谷丙转氨酶,可用于慢性、迁延性肝炎谷丙转氨酶升高者。
试验结果显示,在本发明上述的药物组合物中,所说有效药物成分黄芩黄酮替换为含有所说量黄芩黄酮的黄芩提取物,和/或所说有效药物成分五味子木脂素替换为含有所说量五味子木脂素的五味子提取物,不会对所说药物组合物的功效和作用产生显著的不利影响。其中,所说的黄芩提取物可为常用的水提取物,所说的五味子提取物可以为已有报道和使用的乙醇提取物。
如上述,目前研究表明两种五味子含有相同或相似的化学成分和相同的功能与主治,因此在本发明中所说的五味子提取物,可以来源于北五味子和/或南五味子而无需区分,至少在能实现本发明目的的药物组合物中其无需特别区分。
所说的两类有效药物成分,或所说的其相应提取物,均可以按目前已有文献报道的方法制备。例如,五味子提取物可按《中药成方制剂》第11册中的方式,用生药五味子加水煎煮1小时,滤过,弃去滤液,药渣烘干,粉碎,用70%乙醇回流提取2次,每次1.5小时,滤过,合并滤液,浓缩,即得;或按照《中药成方制剂》第19册中的方式,采用干燥、粉碎后的五味子,用75%乙醇回流提取三次,第一次加4倍量75%乙醇,回流3小时,第二次加3倍量75%乙醇,回流2小时,第三次加3倍量75%乙醇,回流1小时,合并提取液,静置48小时,吸取上清液,减压回收乙醇,再加90%乙醇回流2小时,滤过,收集滤液,减压回收乙醇,即得。
黄芩提取物可以参照《中国药典》2005年版一部第280页“黄芩提取物”项下的【制法】,由黄芩加水煎煮,合并煎液,浓缩至适量,用盐酸调节PH值至1.0~2.0,80℃保温,静置,滤过,沉淀物加适量水搅匀,以40%氢氧化钠调节PH值至7.0,加等量乙醇,搅拌使溶解,滤过,滤液用盐酸调节PH值至1.0~2.0,60℃保温,静置,滤过,沉淀依次用适量水及不同浓度的乙醇洗至PH值至7.0,挥尽乙醇,减压干燥,即得。
发明人的深入研究发现,本发明上述形式药物组合物中的两类有效药物成分,在对急慢性肝炎、肝纤维化,特别是肝纤维化的防治上,能产生显著的协同增效作用。
本发明上述的药物组合物,根据使用需要,可以按目前的常规方式,由所说的药效药物成分与药物中可以接受的相应辅助添加成分,如崩解剂、赋形剂、润滑剂、粘合剂、填充剂等,共同制备成可供使用的包括片剂、滴丸、胶囊剂、微丸等常用剂型在内的口服型药物制剂。
以下通过实施例的具体实施方式再对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。在不脱离本发明上述技术思想情况下,根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更,均应包括在本发明的范围内。
具体实施方式
实施例1
取黄芩10kg,加水煎煮,合并煎液,浓缩至适量,用盐酸调节pH值至1.0~2.0,80℃保温,静置,滤过,沉淀物加适量水搅匀,以40%氢氧化钠调节pH值至7.0,加等量乙醇,搅拌使溶解,滤过,滤液用盐酸调节批pH值至1.0~2.0,60℃保温,静置,滤过,沉淀依次用适量水及不同浓度的乙醇洗至pH值至7.0,挥尽乙醇,减压干燥,得黄芩黄酮,其中黄芩苷的含量≥90.0%。
取南五味子(或北五味子)10kg,加水煎煮1小时,滤过,弃去滤液,药渣烘干,粉碎,用70%乙醇回流提取2次,每次1.5小时,滤过,合并滤液,回收乙醇至无醇味,加水适量,充分搅拌,静置过夜,倾出上清液,下层油状沉淀经硅胶柱层析分离,先用石油醚-乙酸乙酯(10∶1)洗脱除杂,再用石油醚-乙酸乙酯(10∶4)洗脱,薄层层析检查,合并含木脂素部分,除去溶媒,得五味子木脂素,其中总木脂素含量≥95.0%。
取上述黄芩黄酮(相当于1kg黄芩)和五味子木脂素(相当于1kg五味子),加入溶融的聚乙二醇中,搅匀,制成滴丸,即得到相应的滴丸口服药物。
实施例2
取黄芩10kg,加水煎煮,合并煎液,浓缩至适量,用盐酸调节pH值至1.0~2.0,80℃保温,静置,滤过,沉淀物干燥,即得黄芩提取物,其中黄芩苷含量≥50.0%。
取北五味子(或南五味子)10kg,加水煎煮1小时,滤过,弃去滤液,药渣烘干,粉碎,用70%乙醇回流提取2次,每次1.5小时,滤过,合并滤液,浓缩,即得五味子提取物,其中的总木脂素含量≥10.0%。
取上述黄芩提取物(相当于1kg黄芩)和五味子提取物(相当于1kg五味子),混合,加入淀粉适量,混合均匀,制粒,装入胶囊,制成1000粒,即得所述的胶囊剂口服药物。
实施例3
取按上述实施例1或实施例2方式制备得到的黄芩黄酮(相当于1kg黄芩)和五味子提取物(相当于2kg五味子),混合,加入淀粉和糖粉适量,混合均匀,制粒,压片,制成2000片,即得所述的片剂口服药物。
实施例3
取按上述方式得到的黄芩提取物(相当于1kg黄芩)和五味子木脂素(相当于0.5kg五味子),混合,加辅料适量,混合均匀,挤压制丸,即得所述的丸剂口服药物。
实施例4
取上述形式的黄芩提取物(相当于1kg黄芩)和五味子提取物(相当于0.2kg五味子),混合均匀,制粒,压片,制成1000片,即得所述的片剂口服药物。
实施例5
取上述形式的黄芩黄酮(相当于1kg黄芩)和五味子木脂素(相当于5kg五味子),加入溶融的聚乙二醇中,搅匀,制成滴丸,即得所述的滴丸口服药物。
以黄芩提取物和五味子提取物为有效药用成分的不同比例组成形式的药物组合物作为试验药物进行下述实验。
1材料
1.1实验药物
黄芩提取物(以下简称黄芩):本试验剂量按原生药g/kg计算。
五味子提取物(以下简称五味子):本试验剂量按原生药g/kg计算。
Con A:Sigma产品,临用前用灭菌生理盐水配成所需浓度的溶液备用。
对乙酰氨基酚:化学纯,由国药集团化学试剂有限公司出品,批号为F20041216,临用前用温热的蒸馏水配成所需浓度的溶液备用。
CCl4:临用前用橄榄油配成所需浓度的溶液备用。
硫代乙酰胺:分析纯(AR),25g/瓶,天津大茂化学试剂厂出品,批号为2004,1,11,临用前用灭菌生理盐水配成所需浓度的溶液备用。
谷丙转氨酶测定试剂盒(ALT),谷草转氨酶测定试剂盒(AST),甘油三酯(TG)测定试剂盒,总胆固醇(TC)测定试剂盒(COD-CE-PAP法):批号为0805031,均购自四川省迈克科技有限责任公司。
1.2实验动物
小鼠:ICR小鼠,雄性,一级动物,中国医学科学院简阳分院实验动物中心提供,昆明种一级小鼠,雄性,由四川省中医药科学院实验动物中心提供。
2方法与结果
2.1对Con A致小鼠肝损伤模型的影响
取体重为22-24g的雄性ICR小鼠,随机分为10组,分别灌胃黄芩1g/kg、黄芩5g/kg、五味子1g/kg、五味子5g/kg、黄芩1g/kg+五味子1g/kg、黄芩1g/kg+五味子1g/kg、黄芩5g/kg+五味子1g/kg和黄芩5g/kg+五味子5g/kg及等量0.5%CMC,每天一次,连续5次,末次给药后40min除对照组外,其余各组动物均静脉注射Con A 25mg/kg,对照组则给以等体积的生理盐水,然后动物禁食不禁水16h,取血测定其血清AST和ALT活性。
从表1、表2及表3可见,黄芩、五味子单用或合用均可显著减少Con A小鼠血清AST及ALT的活性,且合用较单用的作用明显增强,与模型组比较有统计学差异。从表2可见,黄芩和五味子在降低Con A小鼠血清AST活性上存在显著的协同作用;从表3可见,黄芩和五味子在降低ConA小鼠血清ALT活性上存在显著的协同作用。当黄芩与五味子的剂量均为5g/kg时,其抗急性肝损伤作用与目前市场抗肝损伤西药新药双环醇的作用相当。
表1黄芩、五味子不同比例对ConA致小鼠肝损伤模型的影响(x±S)
注:与模型组比较:*P<0.05,***P<0.001。
表2 对AST指标方差分析表
表3 对ALT指标方差分析表
2.4对四氯化碳加苯巴比妥致小鼠肝纤维化模型的影响
取体重为22-24g的雄性ICR小鼠,随机分为10组,分别分别按表4灌胃给药,模型组对照组灌胃等量0.5%CMC,每天一次,连续60天,同时除对照组外,其余各组动物均每周腹腔注射四氯化碳0.13ml/kg两次,连续8周,同时给予0.1%苯巴比妥钠溶液作为饮水。在末次给药后24小时并禁食不禁水后16h,取血测定其血清AST和ALT活性;取约300mg重量的肝组织测定其羟脯氨酸含量,结果见表4、5。
从表4、表5可见,五味子单用或与黄芩合用均可显著降低肝纤维化小鼠肝脏羟脯氨酸水平,与模型组比较有显著作用,而黄芩单用无明显作用;五味子的作用较强,而黄芩的作用较弱,二者之间具有明显的协同作用。当五味子和黄芩均为4g/kg时,其抗肝纤维化损伤作用明显优于目前市面抗肝损伤西药双环醇,与双环醇比较有统计学差异。
表4 黄芩、五味子不同比例对肝纤维化小鼠模型的影响(x±S)
注:与模型组比较:*P<0.05,***P<0.001。与双环醇比较:@P<0.05。
表5 对四氯化碳加苯巴比妥致小鼠肝纤维化肝脏羟脯氨酸含量方差分析表
2.5对CCl4致小鼠急性肝损伤模型的影响
取体重为22-24g的雄性ICR小鼠,按表6灌胃给药,每天一次,连续5次,末次给药后40min除对照组外,其余各组动物均腹腔注射CCl40.13ml/kg(稀释在橄榄油中,给药体积均为10ml/kg),然后动物禁食不禁水16h,取血测定其血清AST和ALT活性,结果见表6。
从表4、表5和表6可见,黄芩、五味子单用或合用均可显著减少CCl4小鼠血清AST及ALT的活性,与模型组比较有统计学差异;合用其作用显著增强,当其重量比为1∶1时效果最佳。
表6黄芩、五味子不同比例对CCl4致小鼠肝损伤模型的影响(x±S)
注:与模型组比较:*P<0.05,***P<0.001。
2.6对CCl4致小鼠急性肝损伤模型的影响
取体重为22-24g的雄性ICR小鼠,各组分别按表7方式灌胃给药,每天一次,连续5次,末次给药后40min除对照组外,其余各组动物均腹腔注射CCl40.13ml/kg(稀释在橄榄油中,给药体积均为10ml/kg),然后动物禁食不禁水16h,取血测定其血清AST和ALT活性,结果见表7。
表7 黄芩、五味子不同比例对CCl4致小鼠肝损伤模型的影响(x±S)
注:与模型组比较:*P<0.05,***P<0.001。
从表7可见,无论是黄芩黄酮或是黄芩提取物与五味子木脂素或五味子提取物配伍均有相似的抗肝损伤作用,与模型组比较有统计学差异,表明在本发明的药物组合物中,有效药物成分中的黄芩黄酮替换为含有所说量黄芩黄酮的黄芩提取物,和/或五味子木脂素替换为含有所说量五味子木脂素的五味子提取物,可具有基本一致的效果,不会对所说药物组合物的功效和作用产生显著的不利影响。
上述实验结果清楚显示,由黄芩提取物和五味子提取物为有效药用成分的本发明药物组合物,在综合的保肝、降酶和抗肝纤维化作用方面可具有显著的协同增效作用,其结果明显优于其中有效药用成分黄芩提取物和五味子提取物的单独作用,因而具有令人满意的开发前景和价值。
Claims (7)
1.防治肝损伤的药物组合物,其特征是以黄芩黄酮和五味子木脂素为有效药用成分,与药物中可以接受的辅助添加成分共同组成,有效药物成分黄芩黄酮和五味子木脂素分别以其提取用原料生药黄芩和五味子的重量份计的比例为1/(0.2~5)。
2.如权利要求1所述的防治肝损伤的药物组合物,其特征是所说的有效药物成分黄芩黄酮和五味子木脂素分别以其提取用原料生药黄芩和五味子的重量份计的比例为1/(0.5~2)。
3.如权利要求1所述的防治肝损伤的药物组合物,其特征是所说的有效药物成分黄芩黄酮和五味子木脂素分别以其提取用原料生药黄芩和五味子的重量份计的比例为1/1。
4.如权利要求1至3之一所述的防治肝损伤的药物组合物,其特征是所说的有效药物成分黄芩黄酮允许替换为含有所说量黄芩黄酮的黄芩提取物。
5.如权利要求1至3之一所述的防治肝损伤的药物组合物,其特征是所说的有效药物成分五味子木脂素允许替换为含有所说量五味子木脂素的五味子提取物。
6.如权利要求1至3之一所述的防治肝损伤的药物组合物,其特征是所说的五味子为北五味子或南五味子中的至少一种。
7.如权利要求1至3之一所述的防治肝损伤的药物组合物,其特征是所说的药物组合物为口服型药物制剂。
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