CN110777155B

CN110777155B - 最小霉素生物合成基因簇、重组菌及其应用

Info

Publication number: CN110777155B
Application number: CN201911156223.6A
Authority: CN
Inventors: 陈文青; 孔丽媛; 邓子新; 徐顾丹; 刘小琴; 王静雯; 唐曾琳
Original assignee: Wuhan University WHU
Current assignee: Wuhan University WHU
Priority date: 2019-11-22
Filing date: 2019-11-22
Publication date: 2021-08-10
Anticipated expiration: 2039-11-22
Also published as: CN110777155A

Abstract

本发明属于微生物基因资源和基因工程领域，具体涉及最小霉素生物合成基因簇、重组菌及其应用。所述基因簇的核苷酸序列为SEQ ID NO：1中所示第1694～11753位序列，包含6个基因，其中minA，minB，minC，minD，minT是最小霉素合成的必须基因，minR为调控基因。本发明提供了最小霉素生物合成基因簇及相关蛋白信息，帮助人们理解了核苷类抗生素最小霉素的生物合成机制，为进一步遗传改造提供了材料和方法。本发明所提供的基因及其编码的蛋白也可以用来体外合成最小霉素，也为寻找和发现可用于医药、工业或农业的化合物及其合成途径提供了一种思路。

Description

最小霉素生物合成基因簇、重组菌及其应用

技术领域

本发明属于微生物基因资源和基因工程领域，具体涉及最小霉素生物合成基因簇、重组菌及其应用。

背景技术

最小霉素最早是在1971年由日本科学家从吸水链霉菌(Streptomyceshygroscopicus)的发酵液中分离出来的(J Antibiot(Tokyo),1972,25,44-47)。1976年，实现了最小霉素的化学合成(J Org Chem,1977,42,109-112)。最小霉素是一种有活性的化合物，不仅可以抑制革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，还具有抗肿瘤活性(J Antibiot(Tokyo),1972,25,44-47)。

从化学结构上看，最小霉素与假尿苷结构类似，它们的1,3-恶嗪-2,4-二酮环与核糖基都是通过碳碳键相连，不同之处在于最小霉素的1,3-恶嗪2,4-二酮环中有氧原子的插入。在前期的研究中，同位素标记实验表明，最小霉素中的核糖来源于D-核糖，恶嗪环中的C-4,C-5,C-6来源于L-谷氨酰胺(J Antibiot(Tokyo),1977,30,272-273)、C2来源于二氧化碳(Ann N Y Acad Sci,1975,255,390-401)。尽管目前已经可以通过生物发酵与化学合成的手段获得最小霉素，但关于最小霉素的生物合成途径仍然了解甚少。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，以一种吸水链霉菌(S.hygroscopicus JCM 4712)产生的具有抑菌活性的天然产物碳核苷类抗生素最小霉素为目标分子，对其生物合成基因簇进行克隆，通过序列分析、功能验证、体外生化实验，揭示了其生物合成路径。

为实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案为：

最小霉素的生物合成基因簇，所述基因簇的核苷酸序列为SEQ ID NO：1中所示第1694～11753位序列，其负责最小霉素的生物合成，包含6个基因，其中minA，minB，minC，minD，minT是最小霉素合成的必须基因，minR为调控基因；所述minR基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1中第1694～2329位所示；所述minT基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1中第2439～3698位所示；所述minA基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1中第4003～8142位所示；所述minB基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1中第8174～9127位所示，所述minC基因包含MinC_N和MinC_C两个结构域，其中完整的minC基因核苷酸序列如SEQ ID NO：1中第9163～11004位所示，MinC_N的核苷酸序列如SEQ ID NO：1中第9163～9894位所示；所述minD基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1中第11031～11753位所示。

如SEQ ID NO：1中第1694～2329位所示minR基因编码的FadR家族转录调节因子，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

如SEQ ID NO：1中第2439～3698位所示minT基因编码的MFS转运蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。

如SEQ ID NO：1中第4003～8142位所示minA基因编码的非核糖体多肽合成酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。

如SEQ ID NO：1中第8174～9127位所示minB基因编码的C-糖苷酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示。

如SEQ ID NO：1中第9163～11004位所示minC基因包含MinC_N和MinC_C两个结构域，其中氮端结构域(MinC_N)基因编码HAD去磷酸化酶，碳端结构域(MinC_C)基因所编码的蛋白为DUF4243，所述完整的minC基因编码的蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示；所述MinC_N基因编码的HAD去磷酸化酶氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示。

如SEQ ID NO：1中第11031～11753位所示minD基因编码的尿嘧啶磷酸核糖基转移酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示。

含有上述最小霉素的生物合成基因簇的重组菌。

上述重组菌在合成最小霉素中的应用。

上述由minA基因编码的非核糖体多肽合成酶在合成最小霉素中的应用。

上述由MinC_N基因编码的HAD去磷酸化酶在合成最小霉素中的应用。

上述由MinD编码的尿嘧啶磷酸核糖基转移酶在合成最小霉素中的应用。

本发明从克隆生物合成基因簇出发，采用微生物学、分子生物学、生物化学及有机化学相结合的方法研究其生物合成，解析了由非核糖体多肽合成酶介导的氮杂环的形成，在此基础上，进一步对其生物合成机制进行探究，丰富了C-核苷类抗生素家族。

本发明的最小霉素生物合成基因簇的应用，包括(但不限于)：

(1)本发明还提供了产生最小霉素生物合成基因簇中断的微生物体的途径，至少其中之一的基因包含有SEQ ID NO.1中的核苷酸序列。

(2)包含本发明所提供的核苷酸序列或至少部分核苷酸序列可以被修饰或突变。这些途径包括插入、置换或缺失，聚合酶链式反应，错误介导聚合酶链式反应，位点特异性突变，不同序列的重新连接，序列的不同部分或与其他来源的同源序列进行定向进化，或通过紫外线或化学试剂诱变等。

(3)包含本发明所提供的核苷酸序列或至少部分核苷酸序列的克隆基因可以通过合适的表达体系在外源宿主中表达以得到相应的酶或其他更高的生物活性或产量。这些外源宿主包括链霉菌、假单孢菌、大肠杆菌、芽孢杆菌、酵母、植物和动物等。

(4)本发明所提供的氨基酸序列可以用来分离所需要的蛋白并可用于抗体的制备。

(5)包含本发明所提供的氨基酸序列或至少部分序列的多肽可能在去除或替代某些氨基酸之后仍有生物活性甚至有新的生物学活性，或者提高了产量或优化了蛋白动力学特征或其他致力于得到的性质。

(6)包含本发明所提供的核苷酸序列或至少部分核苷酸序列的基因或基因簇可以在异源宿主中表达并通过DNA芯片技术了解它们在宿主代谢链中的功能。

(7)包含本发明所提供的核苷酸序列或至少部分核苷酸序列的基因或基因簇可以通过遗传重组来构建重组质粒以获得新型生物合成途径，也可以通过插入、置换、缺失或失活进而获得新型生物合成途径。

(8)包含本发明所提供的核苷酸序列编码非核糖体多肽合成酶MinA，其可以催化L-谷氨酰胺生成靛蓝色化合物，作为最小霉素生物合成的起始步骤，可以通过与其他天然产物的生物合成途径或部分生物合成途径重组，来获得新的化合物。

(9)包含本发明所提供的核苷酸序列编码HAD去磷酸化酶MinC_N，其可以催化单磷酸最小霉素去磷酸化反应，生成终产物最小霉素。

(10)包含本发明所提供的核苷酸序列编码尿嘧啶磷酸核糖基转移酶MinD，其可以催化uracil(尿嘧啶)和PRPP(5-磷酸核糖-1-焦磷酸)反应生成UMP。

本发明的有益效果：本发明提供了最小霉素生物合成基因簇及相关蛋白信息，帮助人们理解核苷类抗生素最小霉素的生物合成机制，为进一步遗传改造提供了材料和方法。本发明所提供的基因及其编码的蛋白也可以用来体外合成最小霉素，也为寻找和发现可用于医药、工业或农业的化合物及其合成途径提供了一种思路。

附图说明

图1为最小霉素的化学结构。

图2为最小霉素生物合成基因簇的基因结构图。

图3为最小霉素生物合成基因簇中断发酵产物的高效液相色谱(HPLC)分析。

图4为MinA蛋白SDS-PAGE分析。

图5为MinA蛋白生化反应的HPLC分析。

图6为MinC_N蛋白生化反应的HPLC分析，MIN Std：最小霉素标准品，+Udk：以最小霉素为底物的Udk蛋白生化反应，-Udk：负对照，(+Udk)+MinC_N：以最小霉素为底物加入Udk、MinC_N蛋白生化反应，(+Udk)-MinC_N：负对照。

图7为MinD蛋白生化反应的HPLC分析。

图8为最小霉素生物合成途径推测。

具体实施方式

为了更好地理解本发明，下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明的内容不仅仅局限于下面的实施例。

以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。以下实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1克隆、分析最小霉素的生物合成基因簇

(1)首先提取吸水链霉菌JCM 4712的总DNA：取30μL吸水链霉菌JCM 4712的孢子至50mL的TSB培养基中，30℃，200rpm，培养24～36h，至培养基呈现浑浊状态。取50mL的吸水链霉菌JCM 4712菌液，4000rpm，4℃，10min离心去上清，收集菌体。将菌体溶于25mL的10.3％蔗糖溶液中，震荡混匀洗涤菌体，4000rpm，4℃，10min离心去上清；再将菌体溶于15mL的setbuffer中振荡混匀，4000rpm，4℃，10min离心去上清，重复两次；将菌体溶于10mL的setbuffer中震荡混匀后，加入50μL的溶菌酶溶液(100mg/mL)置于37℃水浴锅中温浴30min；随后加入280μL蛋白酶K溶液(50mg/mL)，混匀后加入600μL 10％SDS，颠倒混匀后置于55℃温浴4h，此期间每隔15min颠倒混匀，每隔30min添加蛋白酶K溶液100μL，直至菌丝体裂解变透明；之后加入4mL 5M的NaCl，颠倒混匀，室温下放置菌液至37℃左右；加入10mL的氯仿颠倒混匀至乳白色，4000rpm，4℃，10min，取出上清液后加入0.6倍体积的异丙醇混匀；混匀后，有絮状DNA析出，将析出的DNA小心挑出并用75％的乙醇洗涤两次，置于通风处吹干，溶于适量的超纯水中。核酸电泳(40v，12h)检测DNA的大小，并用Nanodrop 2000测定其浓度及OD值确定提出总DNA的纯度。

(2)利用测序技术对其总DNA进行全基因组扫描测序。由于最小霉素与假尿苷的结构类似，都属于碳核苷类抗生素，因此它们可能使用功能类似的酶进行碳碳键的连接。我们采用假尿苷5'-磷酸糖苷酶YeiN为探针与吸水链霉菌JCM 4712总DNA的测序结果进行序列分析比对，找到与其同源的编码蛋白MinB，从而确定了最小霉素生物合成基因簇在基因组上的大概位置。本发明采用两步PCR策略直接克隆出最小霉素的基因簇，将其连接在pSET152载体上。DNA测序分析了约11kb的染色体区域，生物信息分析包含了6个开放读码框。详细的分析结果列于表1。

表1最小霉素生物合成基因簇中各基因及编码蛋白的功能分析

^a括号中提供NCBI登记号

实施例2最小霉素生物合成相关基因的体内功能确定

(1)体外构建含有最小霉素生物合成基因簇的重组质粒：我们推测负责最小霉素生物合成的基因簇大约为11.2kb，且通过对序列的分析发现负责最小霉素生物合成的基因簇中间自带一个BglII的酶切位点，故本发明将基因簇以BglII为分界点分为两部分(大小分别为5290bp，6089bp)进行PCR扩增，大小为5290bp的片段在5’端添加SpeI的酶切位点，大小为6089-bp的片段在3’端添加EcoRI的酶切位点。以吸水链霉菌JCM 4712总DNA为模板分别扩增出两个片段，将大小为5290-bp的片段用SpeI、BglII酶切，大小为6089-bp的片段用EcoRI、BglII酶切，将处理后的片段直接克隆到pSET152载体的XbaI、EcoRI位点。

(2)对构建的重组质粒上的基因进行依次逐个敲除，并将其接合转移到宿主菌M1154中进行异源表达，同时将未敲除的完整重组质粒与pSET152载体也分别接合转移到宿主菌M1154中作为对照，宿主菌M1154为天蓝色链霉菌，本身不产生最小霉素。正负对照菌株与突变株的发酵液利用高效液相色谱(HPLC)进行检测分析。结果如如图3所示，从图3可知：确定minA,minB,minC,minD,minT是最小霉素合成的必须基因，minR为调控基因。

所述重组质粒上的基因进行敲除采用体外CRISPR/Cas9编辑方法，具体操作为：①通过高保真酶扩增得到模板DNA，使用T7High Yield Transcriptio-n Kit试剂盒将双链DNA转录形成sgRNA；对转录形成的sgRNA进行进一步纯化：加入2μL DNase(RNase free)37℃反应15min除DNA，2μL EDTA(0.5M，pH＝8)65℃反应10min除蛋白，加入111μL DEPC-treated water、15μL 3M NaAc(pH＝5.2)使其终浓度为0.3M，混匀后加入等体积pH<5的酚-氯仿-异戊醇洗1次，等体积氯仿洗2次，2倍体积乙醇在-20℃，30min下沉淀RNA，1ml 75％乙醇洗2遍，烘干后用20μLDEPC-treated water溶解。最后用100℃干浴锅放置10min，取出放至室温，测浓度。③将处理好的sgRNA和Cas9蛋白按照50μL酶切体系：Cas9蛋白(3μg)、sgRNA(10μg)、3μg重组质粒、5μL Buffer 3.1，水补至50μL在37℃过夜反应。反应完成后向反应体系中加入终浓度为0.2mg/ml RNase 37℃消化RNA15min，再加入终浓度分别为1％SDS、1mg/ml proteinase K和10mM CaCl2在55℃下反应30min消化蛋白，反应完成后补水至500μL，加入100μL酚-氯仿洗1次，100μL氯仿洗2次，加1/10体积的3M NaAc，0.8倍体积异丙醇室温沉淀2h，12000r/min离心5min后用1ml 75％乙醇洗2遍，烘干后用15μL DEPC-treated water溶解。④取上述溶好的DNA 5μL、T4连接酶1μL、T4连接酶Buffer 1μL、PEG4000 1.5μL、ddH2O1.5μL混匀后于16℃过夜反应，将反应混合物全部转入DH10B感受态中，待长出转化子后进行后续验证，验证基因是否敲除成功。

所述重组质粒接合转移到宿主菌M1154的操作过程为：①将要接合转移的目标质粒先转化到大肠杆菌E.coli ET12567/pUZ8002感受态中，待长出转化子后验证，将阳性单克隆接种于5mL的LB培养液中，37℃过夜培养，将菌液按10％接种于5mL LB培养液中37℃培养3～5h；②取宿主菌M1154链霉菌孢子5000rpm离心3min，去上清后超纯水洗涤两次，5000rpm离心3min去上清，加入700μL的TES，混匀后根据受体链霉菌的不同以不同的温度(45℃或50℃)热击激5min或者10min，再加入700μL 2x孢子预萌发液，30℃培养3～5h。③将培养好的大肠杆菌于4℃，4,000rpm离心3min，去上清加入20mL LB洗涤两次后离心去上清，加入1mL LB培养基混匀大肠杆菌细胞；将培养好的链霉菌的受体孢子5,000rpm离心3min，去上清后用20mL LB洗涤两次，将上述处理好的大肠杆菌与处理好的孢子混匀，涂布于MS培养皿上，24h后加入1mL含适量用于筛选的抗生素的超纯水来覆盖，置于30℃培养数天至接合子长出。

实施例3最小霉素生物合成相关基因minA编码的非核糖体多肽合成酶MinA的体外功能验证

将minA基因利用PCR扩增后克隆至表达载体，再转化到大肠杆菌E.coli BAP1中，在大肠杆菌中异源过量表达、纯化，通过SDS-PAGE分析后得到较纯的蛋白MinA，具体操作为：①挑取阳性单克隆于5mL LB培养基中37℃过夜培养，按1％转接于500mL LB中，37℃培养到菌体OD₆₀₀至0.5～0.8，加入IPTG(终浓度0.1～0.2mM)诱导，18℃培养20h，6000rmp离心15min收集菌体；②向上述收集到的菌体中加入适量(20mL～30mL)的裂解buffer，震荡混菌后用超声破碎仪超声破碎大肠杆菌细胞，4℃12000rpm离心20min取上清，在4℃条件下，将上清液装入有镍填料的重力柱中，用含有不同浓度(20mM～200mM)咪唑的Tris buffer洗脱，对不同浓度下洗脱的样品进行SDS-PAGE分析，收集较纯的蛋白样品。通过生物信息学分析，发现MinA是非核糖体多肽合成酶，且含有FMN辅因子。本发明以L-谷氨酰胺为底物，在MgCl₂、FMN与ATP、O₂的条件下，MinA催化L-谷氨酰胺的体外生化反应经过液相及质谱检测后，分析形成了靛蓝色化合物。如图5所示。由此，可知MinA可催化L-谷氨酰胺的反应，并且作为最小霉素生物合成路径的第一步。随后，在不同温度下对MinA生化反应活性研究表明，在18℃时MinA的反应活性较好。

实施例4最小霉素生物合成相关基因minC_N编码的HAD去磷酸化酶MinC_N的体外功能验证

将minC_N基因利用PCR扩增后克隆至表达载体，转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，在大肠杆菌中异源过量表达、纯化，通过SDS-PAGE分析后得到较纯的蛋白MinC_N，具体操作为：①挑取阳性单克隆于5mL LB培养基中37℃过夜培养，按1％转接于500mL LB中，37℃培养到菌体OD₆₀₀至0.5～0.8，加入IPTG(终浓度0.1～0.2mM)诱导，18℃培养20h，6000rmp离心15min收集菌体；②向上述收集到的菌体中加入适量(20mL～30mL)的裂解buffer，震荡混菌后用超声破碎仪超声破碎大肠杆菌细胞，4℃12000rpm离心20min取上清，在4℃条件下，将上清液装入有镍填料的重力柱中，用含有不同浓度(20mM～200mM)咪唑的Tris buffer洗脱，对不同浓度下洗脱的样品进行SDS-PAGE分析，收集较纯的蛋白样品。通过生物信息学分析，发现MinC_N是去磷酸化酶。本发明以单磷酸最小霉素(MIN-MP)为底物，在FastAP buffer(Thermo Scientific)的缓冲条件下，MinC_N催化单磷酸最小霉素(MIN-MP)去磷酸后产生最小霉素，如图6所示。由此可知MinC_N可催化MIN-MP的去磷酸化反应，并且作为最小霉素生物合成的最后一步。

实施例5

将minD基因利用PCR扩增后克隆至表达载体，转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，在大肠杆菌中异源过量表达、纯化，通过SDS-PAGE分析后得到较纯的蛋白MinD，具体操作为：①挑取阳性单克隆于5mL LB培养基中37℃过夜培养，按1％转接于500mL LB中，37℃培养到菌体OD₆₀₀至0.5～0.8，加入IPTG(终浓度0.1～0.2mM)诱导，18℃培养20h，6000rmp离心15min收集菌体；②向上述收集到的菌体中加入适量(20mL～30mL)的裂解buffer，震荡混菌后用超声破碎仪超声破碎大肠杆菌细胞，4℃12000rpm离心20min取上清，在4℃条件下，将上清液装入有镍填料的重力柱中，用含有不同浓度(20mM～200mM)咪唑的Tris buffer洗脱，对不同浓度下洗脱的样品进行SDS-PAGE分析，收集较纯的蛋白样品。通过生物信息学分析，发现MinD是尿嘧啶磷酸核糖基转移酶。本发明以uracil(尿嘧啶)和PRPP(5-磷酸核糖-1-焦磷酸)作为底物，MinD催化uracil和PRPP的体外生化反应经过液相及质谱检测后，分析形成了UMP(尿苷单磷酸)。如图7所示。由此，可知MinD可催化uracil和PRPP的生化反应。

最小霉素在体内合成的路径推测如图8所示：以L-谷氨酰胺为起始底物，非核糖体多肽合成酶MinA催化L-谷氨酰胺进行氧化脱氢以及环化反应形成化合物2；再以化合物2和五磷酸核糖为底物，在C-糖苷酶MinB的催化下，进行碳碳键的连接形成化合物3；化合物3在MinC蛋白DUF4243结构域的催化下，1,3-恶嗪-2,4-二酮环完成氧原子的插入形成MIN-MP；最后在MinC蛋白HAD去磷酸化酶的作用下MIN-MP脱去磷酸基团形成最小霉素。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的实例，而并非对实施方式的限制。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。因此所引申的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之内。

序列表

<110> 武汉大学

<120> 最小霉素生物合成基因簇、重组菌及其应用

<160> 8

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 11753

<212> DNA

<213> 吸水链霉菌JCM 4712(Streptomyces hygroscopicus JCM 4712)

<400> 1

ctacgcggtt ccgagggcgt tgcgcaggaa cgcggttgcc tggtcgatgg ctccgcgtgc 60

ggctttggac cgactcagcg agttgagcat catgaagtcg tggaccgtgc cgtcgtagcg 120

caccgtggtc accggaacgc cggctgctcg gagcttggcg gcgtacgcct cgccctcgtc 180

gcgcagcacg tcggcctcgt cgacgatcag cagagcgggc ggcaggccgg aaagctgctc 240

gatggtggcg tggttgggag acgcggtgat ctcggcgcgt tggttcgggt cggtcgtgta 300

ggcgtcccag aaccattcca tcagctcgcg gctcaggtag tagccggtgg cgaactggtc 360

gtaggaatcg gtgttcatgg cggcatccgt gaccgggtag tacatcgact gctgtacgaa 420

cttgaggtca ccgcgctcct tggccatgag ggcgagtgcg gcggtcatgt tcccgccgac 480

cgattccccc gccactgcca tgcgctgtgc atccaacccc ttggacgccc cctcgcggac 540

gatccactgc gcggtggcgt agccctgctc gatggccaca gggtagtgcg cctcgggaga 600

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caccgacgag cggatacgcc gaccgaccgt cactggcgcc gcgtgggatc caactgtctc 1260

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gttgcgggga cctgcggtgc gccgactgct ggtcttgcgg cgtgagcaga agctgacggc 1560

ctgccatgtg cggttgatgg cagagccgtt gggggtgacc gagcacacgg tgtggcgtgg 1620

tcggctgttg ccgagcgtga tgaggccgcg gccgacgagc ccggggcgca ggcccggacc 1680

aggcaggaac cggtcagtcg tcaccctggg tgggagcgca gcccatatag gacccggatt 1740

cgtaggccgc cctgtcgctg tcgcggtcac ggagggcctc gacgaggcgt gagtggtcct 1800

ggaactgctc ggggcgtagt tcctcaccga agtggtccag gagcgaggcc cggatcactt 1860

cgcccaggtc cgcgtgcaac tgggccagga ccgtgttgtg ggacgcggcg acgacagcca 1920

ggtgaaaggc cacgtccgag ttgacgaaag cgacccggtc cccgtccgac caggccttgt 1980

cccgttgggt cagcagggcg tccagccgct ccaggtcctc cagcgtgcgg cgtgcgcagg 2040

ccaggcgggc cgcgcggact tccagggcgc cgcgcacttc ggcgatgtcg tccgtgtgcg 2100

ccttctcgaa acgggtccgc atcattccgg ccagttcgct ggtcgctcgg acatacgacc 2160

cggagccgtg gcggatgtcc agcaggcccg tatgggccag ggcccgcacc gcctcgcgca 2220

ccgtgttgcg cgccacaccg agctgctcga cgagctccgt ctcggtgggg atgcgcgagc 2280

ccacgggcca ggtgccggag gtgatctgcc gtcggaggcg ggcaatcacc tggtttgaca 2340

gtggttcacg gcgaacggga tccatagtca tcccatcatc atatgagcct gcatgaaagt 2400

tgtatgaatc actagaccta gagtcatggg atgagtctat gatctgccgt gtgacgaagg 2460

aagagctcaa gaacaccgtc ttacgcaccg gcccggcggc gtaccccgac cgctcacagc 2520

gggtgcgcag actgacgctc gtggcgcttg tgatcgcggc gctgaacctg cgcccgggcg 2580

tcaccagcct tgggcccgtc ctcgaagagg tccgtcacag ccttgccatg agcggcacgg 2640

tcgccgggct gctgacgtcc atcccggccg tgtgcttcgc cctggtcggc tccacggctc 2700

ccgccctcgc ccggcggtac ggcgcgagcg gcgcgatcgc ggccggtgcc gcgttggtga 2760

cggccgggct cgtgacacgt ccgttcgcca ccgacgccgc cctgttcgtc gcgctgaccg 2820

ccctgtcact ggccggcatc gccatcgcga acgtgctgct cccggccgtt gtcaagcatc 2880

gcttccccga ccgggtgggc gcggtgacgg ggctgtactc catggcactg aacgtcggcg 2940

cctcgaccgc tgccgccgtc accgtgcccc tgaccgaggc tttcggccac gactggcgat 3000

acggcctggg ggtctgggcc atcctggccg cgatcgccgt tccgccctgg ctcgccgccg 3060

cccgcctcca gggacgggcg gcggcaggtg cggcggacga cggaggcgaa tcgcagacac 3120

atccgcgaag ccggatctcc cgcgacccca ccgcctgggc gctcaccgcc tacttcgggc 3180

tgcaggcgag ttccgcctac gtcatcatcg gctggctgcc acagatgttc cgcgatgccg 3240

gactgtccgc acagagtgcc ggcctgttgt tctccggcac ctcgctcctc ggcgtaccgc 3300

tgtccttcgc cctgtcggcc gcggccggaa agctgcgcag ccagagcggg atcgcggcgg 3360

gaatcggcct gtgcggcctg gctggattcg cggggctgtg ggcctccgcc tccaccacgc 3420

cctggctgtg ggcgttcctg ctcggcgtgg ccaactgttc cttcccactg gccctgacga 3480

tgatcagcat gcgcggccgc gacagcgcca ccgtcgtccg gctctccggg ttcgtgcaga 3540

gcttcggcta cctgctctcg attcccggcc ccctcgtcgt cggcgtcctc tacggccaca 3600

cgggcggctg gcgtgcgccc ctggccttca tcctggtgat gaccctgatg cagatcggag 3660

ccggtctgct cgccggccgc aaccgccaga tcggctgagc agctctcgtc gccacagcga 3720

atttcacacc ggctcgacct ccgtcaaggg accgaaataa ttgttccctt gtttcccgcc 3780

ctgccatgca gagggcgtga atttgcttcg ccatgcccgg aattaacagc cgcgctcgcg 3840

cggtgaattc ccgaagaagt cggggtcaat ttccgcgaac gcgcacagaa tttattgacc 3900

tggccggaaa attcgtccta gccttccatc agcgatgagc tcagggcacc acaagtgcgc 3960

gagttcccgg gaaatgcccg ctactgcgga aaagagaggt ccatgagccc ccacgtgatt 4020

ccccatactc aacgtggtga cgtctgcctg accgcgctgc tcgccgaaca ggcgagtgcc 4080

gcaccacatc ggaccgccgt ggtccacgag gaccagagcc tgacgttcgc ccaactgctg 4140

gaccacagcc gcttactggg agcccgcctg aggcgcgccg gagtgaccag aggcagccgt 4200

gtcggcgtgt tcatggaacc ctcgctggag ctgatgacga acgtctgggg aatcctctgg 4260

gccggcggtt cgtatgtccc gctctccccg gaataccccg aggagcggat cgcgtacatg 4320

atggcggacg cgggggtgga agtcgtcctt acccaggaat tcttgcgttc ccgcctccag 4380

gaactgtcgc cggccggagt ccgcaccatc acttcggatg aagttttcca ttcggtggag 4440

agtgccgacg aggaaatttc gtcagcaggt ttggaatcct gccaagccgc ccgtccagaa 4500

gacctcgcgt acgtcatcta cacgtccggc agcaccggaa aaccgaaggg ggtgatgatc 4560

gagcaccgta gcatcgtcag ccagatgcgc tggctgacgg aagcctgcgg aatcgacggc 4620

ggaaggacga tcctccagaa gacccccctg agtttcgacg ccgcccagtg ggagatcctc 4680

gcccccgcct gcggcagcac cgtggtgatg ggtgcccccg gaatctaccg ggaccccgag 4740

gcgatcgtgg ccaccatcca acggcacggt gtgaccaccc tccagtgcgt ccccacgctc 4800

ctgcaggcac tcctcgacac cgagaccctc gccgggtgcg gctcgctgcg ccaggtattc 4860

agcgggggcg aggcgctgtc ccgcagcctc gccgctcagt tcctcgacac catgccggac 4920

tgctcgctcg tcaacctcta cggcccgacc gagtgcacca tcaacgcctc cgccttcgtc 4980

gtggaccgta ccgcggtgga ggacggcccc cgggtcatgc cgatcggcac gccggtcagc 5040

ggcaccacct tccacgtcct ggactcggcc ggacgggagg cgacggtcgg cgaggtcggc 5100

gaactgcaca tcggcggcat ccaggtggcc cgcggctacc tcggccgccc cgacctcacg 5160

gccgagaggt tcgtgcagga caccttctcg tccgtccccg gcgcccgcct gtaccgcacc 5220

ggcgacctcg cccacttcaa cgccgacggc acggtgcagt tcgtcgggcg gacggacaac 5280

caggtcaagc tgcgcggcta ccgggtcgag ctggacgaga tacgccaggc gatcgagacg 5340

cacgactggg tccgcagctc ggccgtcctg ctcagggacg acgaggccac cggcttccag 5400

aacctggtcg ccttcgtgga gctgaacccc aaggaagccg ccctgatgga ccagggcaac 5460

cacggcgccc accaccagtc caagcgcagc aggctccagg tcagggccca gctgtctcac 5520

gcgggctgcc gtgacgccgc ggacctggcc ggccgctcgg tgaccgcact ccccggcgcc 5580

gaggccacac ccgagcagcg ggcccgggcc ttcgcccgca agacgtaccg cttctacgag 5640

ggcggacagg tgagccggga ggacatcctg cgcctgctgg ccccgcccgg ccggccgggc 5700

gtcgccccgc gcaacccggg gagcctgagc cgggccgaac tcggcgggat cctgcggaac 5760

ttcggccagt acctcagcga ccagcggctg ctgcccaagt acgcctacgc ctcgcccggc 5820

tctctctacg ccacccagct gtacctcgaa ctcgacggca tcggcggcat cggcccgggc 5880

ctgtactact accacccgct ccaccaccac ctggtgctga tcggccccac cccccggcag 5940

tccggccccc gggcgagtat ccacctgctc ggcaagcaca gcgcgatcga gccggtctac 6000

cgcaacaaca tccgggaggt cctggagatc gaggccgggc acatggtcgg cctgttcgag 6060

gaggtgctcc ccgactacgg cctcggtatc gccgccgagt accggcccgc ggtcctgcac 6120

cgactcgagg gcgccgagga agaccactac ttgggcacga tcgatctcgt accgtacgac 6180

gcgaacgaga gcgccgacga gttggacatc tacgtccagg cgcacgcggg ccgggtcgac 6240

ggcctgcggg ccgggcagta ccggtacgcc gacggctccc tggtgcgcat ctcggacgac 6300

ttggtgctca agaagcacgt catcgccatc aaccagcggg tctacgagcg ggcgggcctc 6360

ggcatcagcc tggtcgccac cggcccggac tcctggcggc actacctcga cctgggccgc 6420

aagctgcagc gcctgcagat gaacggcctg aacctcggct tcatgtcctc gggctacagc 6480

tccaagagcg gcaacgacct gcccgcggcc aagcggctga acaggatcct caccgactgc 6540

ggactgccca cgggaccgtc gtacttcttc gtcggcgggc gcgtcagcga cgagcagctg 6600

cgcggcgagg acatgaagga ggacgtggtc catatgcagg gaccggccga gctgatcaag 6660

gaagacctcg ccggactgct gccccgctac atgctgccca accggatcgt cgtcctggac 6720

aggctgcccc tgaccgccaa cgggaagatc gacagcaagg ccctggaggc ctcgcagcaa 6780

gccgacctcg cactggccgc acggacgttc atcgcccccc gcacccgcgt cgagcgtcgc 6840

gtccgcgatc tctggcagac cgtcctcaag caggagcaga tctctgtcag ggacgacttc 6900

ttcgagctgg gcggcaactc cctgctcgcc gtggcgctcg tcaaccggat gaacaaggcg 6960

ttcgaaggaa cggttcctct ccaggtgctg ttcgacgccc ctaccgtcga gaagctcgcc 7020

gcccggctgg acgccgagcc gtcagggccc ctcacccggc tcgtcccgct ccagccggag 7080

ggcaccggca cgccgatcca ctgctggccc ggcctcggcg gctaccccat gaacctgcgc 7140

ccgctggccg ccgccctggg caaggaccgg cccgtccacg gcatccaggc acacggcatc 7200

aaccgcggcg aggaccccta cgccacggtc cgcgagatgg cgacggcgga cgtcgaggcc 7260

atccgcagcg cacagcccga aggcccctac atcctgtgcg gctattcgtt cggcgcccgg 7320

gtcgccttcg aggcggcccg acagctggag caggccggcc agcgggtgga acacctcttc 7380

ctcatcgccc cgggcatgcc gcgcctgcgc gaggaggaca cggccggccc gacgggccgg 7440

gcggacttcg ccgaccgggc cttcgtcgcc ctcctccact ccgtcttcgc cgggaccctc 7500

agcggcccgc aactggacga ctgcctgcgc accgtcaccg acgaggacag cttcgtcgac 7560

ttcgtcacca gccgctttcc cggcctcggc acggaactgg tccaggccgt caccggcata 7620

gtcaagcgca cctactcccc gacgtacgag ttccacgagc tgaccggacg acgtctgaac 7680

gcccccgtga ccctcgtcaa ggccaacgac gacaactact ccttcatcga gcaccaggac 7740

gccttctccg tccggccgcc gtctgtccac caactgccgt ccggccacta cgaactgctg 7800

cgcgagccgc acgtcaccga actcgccgcg ctggtcaacg accggctgcg caccgctgcc 7860

gggtcaccgt ttccgggcca ggtgtccctg tcccgcgtca tctcccagga ggccggagtg 7920

ccccacatca acatcaagca cttccccgtc gccctcagcg aggcacagga gaaggaactc 7980

ctcgccgcac tcacctccgc ggtgagcaac gccttcggat gcaaggagga cgtcgtctcc 8040

atcgccatcg agccggtcga gcaggaggcc tggcacgagc gggtctacga gcccgagatc 8100

gtccgccgcc aggacctgct ccgcaagacg cccaactact gaccgccgca ccccggttcc 8160

tggaaggaaa cccatgacca cacgaacacc cggcccgcat tccgtccccc tggtcttcac 8220

ggatgaggtg gccgcggccc tcgccgacgg cgagccggtg gtggccctgg agtcgaacgt 8280

catcacccac ggactccctt acccggacaa cgcggccacc gcccgcaagg tggaggaagc 8340

cgtaagggcc ggcggcgcgg tacccgccac catcggcatc gacgacggcc ggatcctgat 8400

cgggatgacc gacacggaca tcgagcgctt cgcctcgacc cccggcatcc ccaaggtcag 8460

cagcagggac ctgccggccg tcctcgcttc cggcggcacg ggcgccagca ccgtcgcctc 8520

ctcgctggtg gcggcggaac tcgccggcat caccttcttc tcctccgccg gcatcggcgg 8580

cgtccaccgc ggcgccgaga ccaccatgga catctcctcg gatctgattc agttcacccg 8640

ctccaaggtg gcggtggtct gcgccggcgc gaagaagatc ctcgacctcc gcctgaccat 8700

ggagttcctg gagacccact gcgttcccgt catctcctac ggcttcgacg acttcccagc 8760

cttctactgc cgttccagcg ggctgcgcgc cccgcaccgg ctggacgacg aaactcagat 8820

cgccagggcc gtggacaccc actgggccct gggcaacccc ggcggtgtcc tcatcaccag 8880

ccccacccgc gaggaggacg ccatcgacgg ggacgacatc gaggaagcca tcgccgcggc 8940

gctgcgcggt gccgaggccg acggggtgcg gggcggcgcc gtgacgaagt acgtcatgcg 9000

cgccgtggac cgcgccaccg agggccgctc cgccacggcc aacatggccg tcctcatcaa 9060

caccgccgag gtcggcggcc ggctcgccgc cgcccacgcc cggctccgac gcgaggagac 9120

gccgtgagca ccgccaggga aacggagagg gaagaggcag ctgtgacaca cgtggcgatg 9180

ttcgacctgg acgggacgct cgtcgactcc ccgcgcgcga tcgtcgagac cttcgccgcg 9240

gccttcgagg cgctcggcga gagcccccgg gacgaggcgg acgtccgggc caccatcggc 9300

ctcccactgg agcaggcgtt cgccaagctg ctgggcgtcc cgcaggacga cccccgcgtc 9360

gccgacggca tcgcgcgcta ccaggaggcg ttccgcaccg tcatcctgcc ccgcgcccgc 9420

tcgctggtct tccccggcgt cgccgaggga ctggccgaac tgcggcgcca cggcctgacg 9480

ttgacggtgg ccacgagcaa gttccacgcc agcgccgacg ccctgctcac cgcggccgga 9540

ctgcgtgacc acttcgccgt gctgatcggc gcggacgacg tcacccaccc caagccgcac 9600

cccgagtcgg ggctgcgcat cctccaacag ctgggcgccc gccccgagca cgccgtgatg 9660

gtcggtgaca ccacccacga cctgaagatg gcgcacgcgg ccgggaccag atcggtcgcg 9720

gtcacctacg gagtgcacgg gcgggcggaa ctcgcgtcgg cccggccgtc gtacacggcc 9780

gagaccttcc ccgaggtcgt ggcgtacatc accggcacgc tgcccgacag cgacgtggtc 9840

gaccggctgc tgaacgaccg cacgtaccac atcgagttca acggtcacct gaccaaccac 9900

gtcaaacacg ccgtcgtcgc gctcgccggc ctcggcgtcg cgccggagcg gatcaaggac 9960

tatcacgaca actacatcag gatgacgccg tacggctgcg cggtcgaacc ggccagggcg 10020

cccgggcgga ccatcgacga cgacaactgg ctccaactcg tcggcaggcg ccaggactgg 10080

gccgcctact gcgagttctt cgaccggcgc gagcgggagc tcgggatgcc cgaactgctg 10140

cgccgctacc tgccgcacct gctccccggc tgggccggag cgctccagca cgcgaccatc 10200

cacctgggct gggcactggc cgcccaccac cggtggatgg ccatcgaggg catctcctac 10260

ctggccttct cctctgtgag ttgccacccc gagcgctcag tcccctcggg cgcacacggc 10320

gcggaagagc cgaaggagtc gctgctgcgc atcgccggcc actgggaggc aaaccagccg 10380

cagctcggcg catgggtgga gaacctggtc ggcgagacct cgcccgagat ccacccggag 10440

ctgctcaggt ccggactcca gtaccggatc gcccgggtgc tcggcgaggg ccacccgctg 10500

atccacgaca cccccggctg gatcgaggga caagaccctg ctgacagttg ggaccagctc 10560

gcctacctgg tcaccctgct gtatctggcg gaaccagggg acttcctgct cctgcacctc 10620

atcaccgcac tgcacgcgat gcgggccatc tcggacgccc tccccgccgc ccagcgcccc 10680

gacgtggtca aggtctactg gaccggcatc ctgggcgtgc tgttctcccg cggacacttc 10740

tcacgccccg gaaagctgac cgcgctcgac gacctcttcg acaccgcgac ggacgacgtc 10800

tccgaccccc gctgggcccg cgaatgggac tggcacatcg ccagggccgt cgaggaggag 10860

gaagagcaca accccaagct cgtccacgtg atgcgcgagc tgtggcaacg cacgggcggc 10920

aggtcgatct accgggtcgc cgcgggccag ttcaccgcga ccccggagct tccgcccacc 10980

ttcgaacagc cgccggccga ctgaccaccc tccccacgca aggaccacag atgaccagcg 11040

cactccagca gaccaccgac gtgaccgcgt ggaccggccc cgcgcccgtc gcctccatcg 11100

agcagtacct cggccgcaac gtccacctgc tgccccagac gaaccagctg cgcgccctgc 11160

acaccgtcat ccgcaaccgt gaagccagcc gtcaggactt cgtcttccac gccggccgga 11220

tcatccgcct cctgaccgag gccgccctcg acctcctgcc cttcgagccg tacgacgtcc 11280

ggactcccgt cggcagcacg taccacgggc tgcgcttcac cgacgggctg ctcgcagtgc 11340

ccatcgtgcg tgccggggag agcatggaga gcgaactgcg cgcggtgatc ccggggatca 11400

ggatcggcaa aatcctcatt cagcggaaca aaacgaccaa gcgaccgcac ctgtactacc 11460

aggcgctccc cgacgacatc gccgaccgcc acgtcctcct gctcgacccg atgctggcga 11520

ccggcggcac ggcggtggcc gccatcgagc tgctgctcga actcggcgtg cccgaggagc 11580

acatcgtctt cgtcaacttc atcaccgtgc cggaaggcat cacggcagtg tgcgagcgct 11640

tcggccgggt gcggatcgtg acctccgcaa tcgaggagag gctcaacgag aacgcctaca 11700

tggtgcccgg catcggcgac ttcggagacc gctacttcgg aacggaccga tag 11753

<210> 2

<211> 211

<212> PRT

<213> 吸水链霉菌JCM 4712(Streptomyces hygroscopicus JCM 4712)

<400> 2

Val Ile Ala Arg Leu Arg Arg Gln Ile Thr Ser Gly Thr Trp Pro Val

1 5 10 15

Gly Ser Arg Ile Pro Thr Glu Thr Glu Leu Val Glu Gln Leu Gly Val

20 25 30

Ala Arg Asn Thr Val Arg Glu Ala Val Arg Ala Leu Ala His Thr Gly

35 40 45

Leu Leu Asp Ile Arg His Gly Ser Gly Ser Tyr Val Arg Ala Thr Ser

50 55 60

Glu Leu Ala Gly Met Met Arg Thr Arg Phe Glu Lys Ala His Thr Asp

65 70 75 80

Asp Ile Ala Glu Val Arg Gly Ala Leu Glu Val Arg Ala Ala Arg Leu

85 90 95

Ala Cys Ala Arg Arg Thr Leu Glu Asp Leu Glu Arg Leu Asp Ala Leu

100 105 110

Leu Thr Gln Arg Asp Lys Ala Trp Ser Asp Gly Asp Arg Val Ala Phe

115 120 125

Val Asn Ser Asp Val Ala Phe His Leu Ala Val Val Ala Ala Ser His

130 135 140

Asn Thr Val Leu Ala Gln Leu His Ala Asp Leu Gly Glu Val Ile Arg

145 150 155 160

Ala Ser Leu Leu Asp His Phe Gly Glu Glu Leu Arg Pro Glu Gln Phe

165 170 175

Gln Asp His Ser Arg Leu Val Glu Ala Leu Arg Asp Arg Asp Ser Asp

180 185 190

Arg Ala Ala Tyr Glu Ser Gly Ser Tyr Met Gly Cys Ala Pro Thr Gln

195 200 205

Gly Asp Asp

210

<210> 3

<211> 419

<212> PRT

<213> 吸水链霉菌JCM 4712(Streptomyces hygroscopicus JCM 4712)

<400> 3

Met Ile Cys Arg Val Thr Lys Glu Glu Leu Lys Asn Thr Val Leu Arg

1 5 10 15

Thr Gly Pro Ala Ala Tyr Pro Asp Arg Ser Gln Arg Val Arg Arg Leu

20 25 30

Thr Leu Val Ala Leu Val Ile Ala Ala Leu Asn Leu Arg Pro Gly Val

35 40 45

Thr Ser Leu Gly Pro Val Leu Glu Glu Val Arg His Ser Leu Ala Met

50 55 60

Ser Gly Thr Val Ala Gly Leu Leu Thr Ser Ile Pro Ala Val Cys Phe

65 70 75 80

Ala Leu Val Gly Ser Thr Ala Pro Ala Leu Ala Arg Arg Tyr Gly Ala

85 90 95

Ser Gly Ala Ile Ala Ala Gly Ala Ala Leu Val Thr Ala Gly Leu Val

100 105 110

Thr Arg Pro Phe Ala Thr Asp Ala Ala Leu Phe Val Ala Leu Thr Ala

115 120 125

Leu Ser Leu Ala Gly Ile Ala Ile Ala Asn Val Leu Leu Pro Ala Val

130 135 140

Val Lys His Arg Phe Pro Asp Arg Val Gly Ala Val Thr Gly Leu Tyr

145 150 155 160

Ser Met Ala Leu Asn Val Gly Ala Ser Thr Ala Ala Ala Val Thr Val

165 170 175

Pro Leu Thr Glu Ala Phe Gly His Asp Trp Arg Tyr Gly Leu Gly Val

180 185 190

Trp Ala Ile Leu Ala Ala Ile Ala Val Pro Pro Trp Leu Ala Ala Ala

195 200 205

Arg Leu Gln Gly Arg Ala Ala Ala Gly Ala Ala Asp Asp Gly Gly Glu

210 215 220

Ser Gln Thr His Pro Arg Ser Arg Ile Ser Arg Asp Pro Thr Ala Trp

225 230 235 240

Ala Leu Thr Ala Tyr Phe Gly Leu Gln Ala Ser Ser Ala Tyr Val Ile

245 250 255

Ile Gly Trp Leu Pro Gln Met Phe Arg Asp Ala Gly Leu Ser Ala Gln

260 265 270

Ser Ala Gly Leu Leu Phe Ser Gly Thr Ser Leu Leu Gly Val Pro Leu

275 280 285

Ser Phe Ala Leu Ser Ala Ala Ala Gly Lys Leu Arg Ser Gln Ser Gly

290 295 300

Ile Ala Ala Gly Ile Gly Leu Cys Gly Leu Ala Gly Phe Ala Gly Leu

305 310 315 320

Trp Ala Ser Ala Ser Thr Thr Pro Trp Leu Trp Ala Phe Leu Leu Gly

325 330 335

Val Ala Asn Cys Ser Phe Pro Leu Ala Leu Thr Met Ile Ser Met Arg

340 345 350

Gly Arg Asp Ser Ala Thr Val Val Arg Leu Ser Gly Phe Val Gln Ser

355 360 365

Phe Gly Tyr Leu Leu Ser Ile Pro Gly Pro Leu Val Val Gly Val Leu

370 375 380

Tyr Gly His Thr Gly Gly Trp Arg Ala Pro Leu Ala Phe Ile Leu Val

385 390 395 400

Met Thr Leu Met Gln Ile Gly Ala Gly Leu Leu Ala Gly Arg Asn Arg

405 410 415

Gln Ile Gly

<210> 4

<211> 1379

<212> PRT

<213> 吸水链霉菌JCM 4712(Streptomyces hygroscopicus JCM 4712)

<400> 4

Met Ser Pro His Val Ile Pro His Thr Gln Arg Gly Asp Val Cys Leu

1 5 10 15

Thr Ala Leu Leu Ala Glu Gln Ala Ser Ala Ala Pro His Arg Thr Ala

20 25 30

Val Val His Glu Asp Gln Ser Leu Thr Phe Ala Gln Leu Leu Asp His

35 40 45

Ser Arg Leu Leu Gly Ala Arg Leu Arg Arg Ala Gly Val Thr Arg Gly

50 55 60

Ser Arg Val Gly Val Phe Met Glu Pro Ser Leu Glu Leu Met Thr Asn

65 70 75 80

Val Trp Gly Ile Leu Trp Ala Gly Gly Ser Tyr Val Pro Leu Ser Pro

85 90 95

Glu Tyr Pro Glu Glu Arg Ile Ala Tyr Met Met Ala Asp Ala Gly Val

100 105 110

Glu Val Val Leu Thr Gln Glu Phe Leu Arg Ser Arg Leu Gln Glu Leu

115 120 125

Ser Pro Ala Gly Val Arg Thr Ile Thr Ser Asp Glu Val Phe His Ser

130 135 140

Val Glu Ser Ala Asp Glu Glu Ile Ser Ser Ala Gly Leu Glu Ser Cys

145 150 155 160

Gln Ala Ala Arg Pro Glu Asp Leu Ala Tyr Val Ile Tyr Thr Ser Gly

165 170 175

Ser Thr Gly Lys Pro Lys Gly Val Met Ile Glu His Arg Ser Ile Val

180 185 190

Ser Gln Met Arg Trp Leu Thr Glu Ala Cys Gly Ile Asp Gly Gly Arg

195 200 205

Thr Ile Leu Gln Lys Thr Pro Leu Ser Phe Asp Ala Ala Gln Trp Glu

210 215 220

Ile Leu Ala Pro Ala Cys Gly Ser Thr Val Val Met Gly Ala Pro Gly

225 230 235 240

Ile Tyr Arg Asp Pro Glu Ala Ile Val Ala Thr Ile Gln Arg His Gly

245 250 255

Val Thr Thr Leu Gln Cys Val Pro Thr Leu Leu Gln Ala Leu Leu Asp

260 265 270

Thr Glu Thr Leu Ala Gly Cys Gly Ser Leu Arg Gln Val Phe Ser Gly

275 280 285

Gly Glu Ala Leu Ser Arg Ser Leu Ala Ala Gln Phe Leu Asp Thr Met

290 295 300

Pro Asp Cys Ser Leu Val Asn Leu Tyr Gly Pro Thr Glu Cys Thr Ile

305 310 315 320

Asn Ala Ser Ala Phe Val Val Asp Arg Thr Ala Val Glu Asp Gly Pro

325 330 335

Arg Val Met Pro Ile Gly Thr Pro Val Ser Gly Thr Thr Phe His Val

340 345 350

Leu Asp Ser Ala Gly Arg Glu Ala Thr Val Gly Glu Val Gly Glu Leu

355 360 365

His Ile Gly Gly Ile Gln Val Ala Arg Gly Tyr Leu Gly Arg Pro Asp

370 375 380

Leu Thr Ala Glu Arg Phe Val Gln Asp Thr Phe Ser Ser Val Pro Gly

385 390 395 400

Ala Arg Leu Tyr Arg Thr Gly Asp Leu Ala His Phe Asn Ala Asp Gly

405 410 415

Thr Val Gln Phe Val Gly Arg Thr Asp Asn Gln Val Lys Leu Arg Gly

420 425 430

Tyr Arg Val Glu Leu Asp Glu Ile Arg Gln Ala Ile Glu Thr His Asp

435 440 445

Trp Val Arg Ser Ser Ala Val Leu Leu Arg Asp Asp Glu Ala Thr Gly

450 455 460

Phe Gln Asn Leu Val Ala Phe Val Glu Leu Asn Pro Lys Glu Ala Ala

465 470 475 480

Leu Met Asp Gln Gly Asn His Gly Ala His His Gln Ser Lys Arg Ser

485 490 495

Arg Leu Gln Val Arg Ala Gln Leu Ser His Ala Gly Cys Arg Asp Ala

500 505 510

Ala Asp Leu Ala Gly Arg Ser Val Thr Ala Leu Pro Gly Ala Glu Ala

515 520 525

Thr Pro Glu Gln Arg Ala Arg Ala Phe Ala Arg Lys Thr Tyr Arg Phe

530 535 540

Tyr Glu Gly Gly Gln Val Ser Arg Glu Asp Ile Leu Arg Leu Leu Ala

545 550 555 560

Pro Pro Gly Arg Pro Gly Val Ala Pro Arg Asn Pro Gly Ser Leu Ser

565 570 575

Arg Ala Glu Leu Gly Gly Ile Leu Arg Asn Phe Gly Gln Tyr Leu Ser

580 585 590

Asp Gln Arg Leu Leu Pro Lys Tyr Ala Tyr Ala Ser Pro Gly Ser Leu

595 600 605

Tyr Ala Thr Gln Leu Tyr Leu Glu Leu Asp Gly Ile Gly Gly Ile Gly

610 615 620

Pro Gly Leu Tyr Tyr Tyr His Pro Leu His His His Leu Val Leu Ile

625 630 635 640

Gly Pro Thr Pro Arg Gln Ser Gly Pro Arg Ala Ser Ile His Leu Leu

645 650 655

Gly Lys His Ser Ala Ile Glu Pro Val Tyr Arg Asn Asn Ile Arg Glu

660 665 670

Val Leu Glu Ile Glu Ala Gly His Met Val Gly Leu Phe Glu Glu Val

675 680 685

Leu Pro Asp Tyr Gly Leu Gly Ile Ala Ala Glu Tyr Arg Pro Ala Val

690 695 700

Leu His Arg Leu Glu Gly Ala Glu Glu Asp His Tyr Leu Gly Thr Ile

705 710 715 720

Asp Leu Val Pro Tyr Asp Ala Asn Glu Ser Ala Asp Glu Leu Asp Ile

725 730 735

Tyr Val Gln Ala His Ala Gly Arg Val Asp Gly Leu Arg Ala Gly Gln

740 745 750

Tyr Arg Tyr Ala Asp Gly Ser Leu Val Arg Ile Ser Asp Asp Leu Val

755 760 765

Leu Lys Lys His Val Ile Ala Ile Asn Gln Arg Val Tyr Glu Arg Ala

770 775 780

Gly Leu Gly Ile Ser Leu Val Ala Thr Gly Pro Asp Ser Trp Arg His

785 790 795 800

Tyr Leu Asp Leu Gly Arg Lys Leu Gln Arg Leu Gln Met Asn Gly Leu

805 810 815

Asn Leu Gly Phe Met Ser Ser Gly Tyr Ser Ser Lys Ser Gly Asn Asp

820 825 830

Leu Pro Ala Ala Lys Arg Leu Asn Arg Ile Leu Thr Asp Cys Gly Leu

835 840 845

Pro Thr Gly Pro Ser Tyr Phe Phe Val Gly Gly Arg Val Ser Asp Glu

850 855 860

Gln Leu Arg Gly Glu Asp Met Lys Glu Asp Val Val His Met Gln Gly

865 870 875 880

Pro Ala Glu Leu Ile Lys Glu Asp Leu Ala Gly Leu Leu Pro Arg Tyr

885 890 895

Met Leu Pro Asn Arg Ile Val Val Leu Asp Arg Leu Pro Leu Thr Ala

900 905 910

Asn Gly Lys Ile Asp Ser Lys Ala Leu Glu Ala Ser Gln Gln Ala Asp

915 920 925

Leu Ala Leu Ala Ala Arg Thr Phe Ile Ala Pro Arg Thr Arg Val Glu

930 935 940

Arg Arg Val Arg Asp Leu Trp Gln Thr Val Leu Lys Gln Glu Gln Ile

945 950 955 960

Ser Val Arg Asp Asp Phe Phe Glu Leu Gly Gly Asn Ser Leu Leu Ala

965 970 975

Val Ala Leu Val Asn Arg Met Asn Lys Ala Phe Glu Gly Thr Val Pro

980 985 990

Leu Gln Val Leu Phe Asp Ala Pro Thr Val Glu Lys Leu Ala Ala Arg

995 1000 1005

Leu Asp Ala Glu Pro Ser Gly Pro Leu Thr Arg Leu Val Pro Leu Gln

1010 1015 1020

Pro Glu Gly Thr Gly Thr Pro Ile His Cys Trp Pro Gly Leu Gly Gly

1025 1030 1035 1040

Tyr Pro Met Asn Leu Arg Pro Leu Ala Ala Ala Leu Gly Lys Asp Arg

1045 1050 1055

Pro Val His Gly Ile Gln Ala His Gly Ile Asn Arg Gly Glu Asp Pro

1060 1065 1070

Tyr Ala Thr Val Arg Glu Met Ala Thr Ala Asp Val Glu Ala Ile Arg

1075 1080 1085

Ser Ala Gln Pro Glu Gly Pro Tyr Ile Leu Cys Gly Tyr Ser Phe Gly

1090 1095 1100

Ala Arg Val Ala Phe Glu Ala Ala Arg Gln Leu Glu Gln Ala Gly Gln

1105 1110 1115 1120

Arg Val Glu His Leu Phe Leu Ile Ala Pro Gly Met Pro Arg Leu Arg

1125 1130 1135

Glu Glu Asp Thr Ala Gly Pro Thr Gly Arg Ala Asp Phe Ala Asp Arg

1140 1145 1150

Ala Phe Val Ala Leu Leu His Ser Val Phe Ala Gly Thr Leu Ser Gly

1155 1160 1165

Pro Gln Leu Asp Asp Cys Leu Arg Thr Val Thr Asp Glu Asp Ser Phe

1170 1175 1180

Val Asp Phe Val Thr Ser Arg Phe Pro Gly Leu Gly Thr Glu Leu Val

1185 1190 1195 1200

Gln Ala Val Thr Gly Ile Val Lys Arg Thr Tyr Ser Pro Thr Tyr Glu

1205 1210 1215

Phe His Glu Leu Thr Gly Arg Arg Leu Asn Ala Pro Val Thr Leu Val

1220 1225 1230

Lys Ala Asn Asp Asp Asn Tyr Ser Phe Ile Glu His Gln Asp Ala Phe

1235 1240 1245

Ser Val Arg Pro Pro Ser Val His Gln Leu Pro Ser Gly His Tyr Glu

1250 1255 1260

Leu Leu Arg Glu Pro His Val Thr Glu Leu Ala Ala Leu Val Asn Asp

1265 1270 1275 1280

Arg Leu Arg Thr Ala Ala Gly Ser Pro Phe Pro Gly Gln Val Ser Leu

1285 1290 1295

Ser Arg Val Ile Ser Gln Glu Ala Gly Val Pro His Ile Asn Ile Lys

1300 1305 1310

His Phe Pro Val Ala Leu Ser Glu Ala Gln Glu Lys Glu Leu Leu Ala

1315 1320 1325

Ala Leu Thr Ser Ala Val Ser Asn Ala Phe Gly Cys Lys Glu Asp Val

1330 1335 1340

Val Ser Ile Ala Ile Glu Pro Val Glu Gln Glu Ala Trp His Glu Arg

1345 1350 1355 1360

Val Tyr Glu Pro Glu Ile Val Arg Arg Gln Asp Leu Leu Arg Lys Thr

1365 1370 1375

Pro Asn Tyr

<210> 5

<211> 317

<212> PRT

<213> 吸水链霉菌JCM 4712(Streptomyces hygroscopicus JCM 4712)

<400> 5

Met Thr Thr Arg Thr Pro Gly Pro His Ser Val Pro Leu Val Phe Thr

1 5 10 15

Asp Glu Val Ala Ala Ala Leu Ala Asp Gly Glu Pro Val Val Ala Leu

20 25 30

Glu Ser Asn Val Ile Thr His Gly Leu Pro Tyr Pro Asp Asn Ala Ala

35 40 45

Thr Ala Arg Lys Val Glu Glu Ala Val Arg Ala Gly Gly Ala Val Pro

50 55 60

Ala Thr Ile Gly Ile Asp Asp Gly Arg Ile Leu Ile Gly Met Thr Asp

65 70 75 80

Thr Asp Ile Glu Arg Phe Ala Ser Thr Pro Gly Ile Pro Lys Val Ser

85 90 95

Ser Arg Asp Leu Pro Ala Val Leu Ala Ser Gly Gly Thr Gly Ala Ser

100 105 110

Thr Val Ala Ser Ser Leu Val Ala Ala Glu Leu Ala Gly Ile Thr Phe

115 120 125

Phe Ser Ser Ala Gly Ile Gly Gly Val His Arg Gly Ala Glu Thr Thr

130 135 140

Met Asp Ile Ser Ser Asp Leu Ile Gln Phe Thr Arg Ser Lys Val Ala

145 150 155 160

Val Val Cys Ala Gly Ala Lys Lys Ile Leu Asp Leu Arg Leu Thr Met

165 170 175

Glu Phe Leu Glu Thr His Cys Val Pro Val Ile Ser Tyr Gly Phe Asp

180 185 190

Asp Phe Pro Ala Phe Tyr Cys Arg Ser Ser Gly Leu Arg Ala Pro His

195 200 205

Arg Leu Asp Asp Glu Thr Gln Ile Ala Arg Ala Val Asp Thr His Trp

210 215 220

Ala Leu Gly Asn Pro Gly Gly Val Leu Ile Thr Ser Pro Thr Arg Glu

225 230 235 240

Glu Asp Ala Ile Asp Gly Asp Asp Ile Glu Glu Ala Ile Ala Ala Ala

245 250 255

Leu Arg Gly Ala Glu Ala Asp Gly Val Arg Gly Gly Ala Val Thr Lys

260 265 270

Tyr Val Met Arg Ala Val Asp Arg Ala Thr Glu Gly Arg Ser Ala Thr

275 280 285

Ala Asn Met Ala Val Leu Ile Asn Thr Ala Glu Val Gly Gly Arg Leu

290 295 300

Ala Ala Ala His Ala Arg Leu Arg Arg Glu Glu Thr Pro

305 310 315

<210> 6

<211> 613

<212> PRT

<213> 吸水链霉菌JCM 4712(Streptomyces hygroscopicus JCM 4712)

<400> 6

Val Thr His Val Ala Met Phe Asp Leu Asp Gly Thr Leu Val Asp Ser

1 5 10 15

Pro Arg Ala Ile Val Glu Thr Phe Ala Ala Ala Phe Glu Ala Leu Gly

20 25 30

Glu Ser Pro Arg Asp Glu Ala Asp Val Arg Ala Thr Ile Gly Leu Pro

35 40 45

Leu Glu Gln Ala Phe Ala Lys Leu Leu Gly Val Pro Gln Asp Asp Pro

50 55 60

Arg Val Ala Asp Gly Ile Ala Arg Tyr Gln Glu Ala Phe Arg Thr Val

65 70 75 80

Ile Leu Pro Arg Ala Arg Ser Leu Val Phe Pro Gly Val Ala Glu Gly

85 90 95

Leu Ala Glu Leu Arg Arg His Gly Leu Thr Leu Thr Val Ala Thr Ser

100 105 110

Lys Phe His Ala Ser Ala Asp Ala Leu Leu Thr Ala Ala Gly Leu Arg

115 120 125

Asp His Phe Ala Val Leu Ile Gly Ala Asp Asp Val Thr His Pro Lys

130 135 140

Pro His Pro Glu Ser Gly Leu Arg Ile Leu Gln Gln Leu Gly Ala Arg

145 150 155 160

Pro Glu His Ala Val Met Val Gly Asp Thr Thr His Asp Leu Lys Met

165 170 175

Ala His Ala Ala Gly Thr Arg Ser Val Ala Val Thr Tyr Gly Val His

180 185 190

Gly Arg Ala Glu Leu Ala Ser Ala Arg Pro Ser Tyr Thr Ala Glu Thr

195 200 205

Phe Pro Glu Val Val Ala Tyr Ile Thr Gly Thr Leu Pro Asp Ser Asp

210 215 220

Val Val Asp Arg Leu Leu Asn Asp Arg Thr Tyr His Ile Glu Phe Asn

225 230 235 240

Gly His Leu Thr Asn His Val Lys His Ala Val Val Ala Leu Ala Gly

245 250 255

Leu Gly Val Ala Pro Glu Arg Ile Lys Asp Tyr His Asp Asn Tyr Ile

260 265 270

Arg Met Thr Pro Tyr Gly Cys Ala Val Glu Pro Ala Arg Ala Pro Gly

275 280 285

Arg Thr Ile Asp Asp Asp Asn Trp Leu Gln Leu Val Gly Arg Arg Gln

290 295 300

Asp Trp Ala Ala Tyr Cys Glu Phe Phe Asp Arg Arg Glu Arg Glu Leu

305 310 315 320

Gly Met Pro Glu Leu Leu Arg Arg Tyr Leu Pro His Leu Leu Pro Gly

325 330 335

Trp Ala Gly Ala Leu Gln His Ala Thr Ile His Leu Gly Trp Ala Leu

340 345 350

Ala Ala His His Arg Trp Met Ala Ile Glu Gly Ile Ser Tyr Leu Ala

355 360 365

Phe Ser Ser Val Ser Cys His Pro Glu Arg Ser Val Pro Ser Gly Ala

370 375 380

His Gly Ala Glu Glu Pro Lys Glu Ser Leu Leu Arg Ile Ala Gly His

385 390 395 400

Trp Glu Ala Asn Gln Pro Gln Leu Gly Ala Trp Val Glu Asn Leu Val

405 410 415

Gly Glu Thr Ser Pro Glu Ile His Pro Glu Leu Leu Arg Ser Gly Leu

420 425 430

Gln Tyr Arg Ile Ala Arg Val Leu Gly Glu Gly His Pro Leu Ile His

435 440 445

Asp Thr Pro Gly Trp Ile Glu Gly Gln Asp Pro Ala Asp Ser Trp Asp

450 455 460

Gln Leu Ala Tyr Leu Val Thr Leu Leu Tyr Leu Ala Glu Pro Gly Asp

465 470 475 480

Phe Leu Leu Leu His Leu Ile Thr Ala Leu His Ala Met Arg Ala Ile

485 490 495

Ser Asp Ala Leu Pro Ala Ala Gln Arg Pro Asp Val Val Lys Val Tyr

500 505 510

Trp Thr Gly Ile Leu Gly Val Leu Phe Ser Arg Gly His Phe Ser Arg

515 520 525

Pro Gly Lys Leu Thr Ala Leu Asp Asp Leu Phe Asp Thr Ala Thr Asp

530 535 540

Asp Val Ser Asp Pro Arg Trp Ala Arg Glu Trp Asp Trp His Ile Ala

545 550 555 560

Arg Ala Val Glu Glu Glu Glu Glu His Asn Pro Lys Leu Val His Val

565 570 575

Met Arg Glu Leu Trp Gln Arg Thr Gly Gly Arg Ser Ile Tyr Arg Val

580 585 590

Ala Ala Gly Gln Phe Thr Ala Thr Pro Glu Leu Pro Pro Thr Phe Glu

595 600 605

Gln Pro Pro Ala Asp

610

<210> 7

<211> 244

<212> PRT

<213> 吸水链霉菌JCM 4712(Streptomyces hygroscopicus JCM 4712)

<400> 7

Val Thr His Val Ala Met Phe Asp Leu Asp Gly Thr Leu Val Asp Ser

1 5 10 15

Pro Arg Ala Ile Val Glu Thr Phe Ala Ala Ala Phe Glu Ala Leu Gly

20 25 30

Glu Ser Pro Arg Asp Glu Ala Asp Val Arg Ala Thr Ile Gly Leu Pro

35 40 45

Leu Glu Gln Ala Phe Ala Lys Leu Leu Gly Val Pro Gln Asp Asp Pro

50 55 60

Arg Val Ala Asp Gly Ile Ala Arg Tyr Gln Glu Ala Phe Arg Thr Val

65 70 75 80

Ile Leu Pro Arg Ala Arg Ser Leu Val Phe Pro Gly Val Ala Glu Gly

85 90 95

Leu Ala Glu Leu Arg Arg His Gly Leu Thr Leu Thr Val Ala Thr Ser

100 105 110

Lys Phe His Ala Ser Ala Asp Ala Leu Leu Thr Ala Ala Gly Leu Arg

115 120 125

Asp His Phe Ala Val Leu Ile Gly Ala Asp Asp Val Thr His Pro Lys

130 135 140

Pro His Pro Glu Ser Gly Leu Arg Ile Leu Gln Gln Leu Gly Ala Arg

145 150 155 160

Pro Glu His Ala Val Met Val Gly Asp Thr Thr His Asp Leu Lys Met

165 170 175

Ala His Ala Ala Gly Thr Arg Ser Val Ala Val Thr Tyr Gly Val His

180 185 190

Gly Arg Ala Glu Leu Ala Ser Ala Arg Pro Ser Tyr Thr Ala Glu Thr

195 200 205

Phe Pro Glu Val Val Ala Tyr Ile Thr Gly Thr Leu Pro Asp Ser Asp

210 215 220

Val Val Asp Arg Leu Leu Asn Asp Arg Thr Tyr His Ile Glu Phe Asn

225 230 235 240

Gly His Leu Thr

<210> 8

<211> 240

<212> PRT

<213> 吸水链霉菌JCM 4712(Streptomyces hygroscopicus JCM 4712)

<400> 8

Met Thr Ser Ala Leu Gln Gln Thr Thr Asp Val Thr Ala Trp Thr Gly

1 5 10 15

Pro Ala Pro Val Ala Ser Ile Glu Gln Tyr Leu Gly Arg Asn Val His

20 25 30

Leu Leu Pro Gln Thr Asn Gln Leu Arg Ala Leu His Thr Val Ile Arg

35 40 45

Asn Arg Glu Ala Ser Arg Gln Asp Phe Val Phe His Ala Gly Arg Ile

50 55 60

Ile Arg Leu Leu Thr Glu Ala Ala Leu Asp Leu Leu Pro Phe Glu Pro

65 70 75 80

Tyr Asp Val Arg Thr Pro Val Gly Ser Thr Tyr His Gly Leu Arg Phe

85 90 95

Thr Asp Gly Leu Leu Ala Val Pro Ile Val Arg Ala Gly Glu Ser Met

100 105 110

Glu Ser Glu Leu Arg Ala Val Ile Pro Gly Ile Arg Ile Gly Lys Ile

115 120 125

Leu Ile Gln Arg Asn Lys Thr Thr Lys Arg Pro His Leu Tyr Tyr Gln

130 135 140

Ala Leu Pro Asp Asp Ile Ala Asp Arg His Val Leu Leu Leu Asp Pro

145 150 155 160

Met Leu Ala Thr Gly Gly Thr Ala Val Ala Ala Ile Glu Leu Leu Leu

165 170 175

Glu Leu Gly Val Pro Glu Glu His Ile Val Phe Val Asn Phe Ile Thr

180 185 190

Val Pro Glu Gly Ile Thr Ala Val Cys Glu Arg Phe Gly Arg Val Arg

195 200 205

Ile Val Thr Ser Ala Ile Glu Glu Arg Leu Asn Glu Asn Ala Tyr Met

210 215 220

Val Pro Gly Ile Gly Asp Phe Gly Asp Arg Tyr Phe Gly Thr Asp Arg

225 230 235 240

Claims

1.最小霉素的生物合成基因簇，其特征在于，所述基因簇的核苷酸序列为SEQ ID NO：1中所示第1694~11753位序列，包含6个基因，其中minA，minB，minC，minD，minT是最小霉素合成的必须基因，minR为调控基因；所述minR基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1中第1694~2329位所示；所述minT基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1中第2439~3698位所示；所述minA基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1中第4003~8142位所示；所述minB基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1中第8174~9127位所示，所述minC基因包含MinC_N和MinC_C两个结构域，其中完整的minC基因核苷酸序列如SEQ ID NO：1中第9163~11004位所示，MinC_N的核苷酸序列如SEQID NO：1中第9163~9894位所示，所述minD基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1中第11031~11753位所示。

2.权利要求1所述 SEQ ID NO：1中第1694~2329位所示minR基因编码的FadR家族转录调节因子，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；所述SEQ ID NO：1中第2439~3698位所示minT基因编码的MFS转运蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示；所述SEQ ID NO：1中第4003~8142位所示minA基因编码的非核糖体多肽合成酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示；所述SEQ ID NO：1中第8174~9127位所示minB基因编码的C-糖苷酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示；所述SEQ ID NO：1中第9163~11004位所示minC基因包含MinC_N和MinC_C两个结构域，其中MinC_N基因编码HAD去磷酸化酶，MinC_C基因所编码的蛋白为DUF4243，所述完整的minC基因编码的蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示；所述MinC_N基因编码的HAD去磷酸化酶氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示；所述SEQ ID NO：1中第11031~11753位所示minD基因编码的尿嘧啶磷酸核糖基转移酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示。

3.含有权利要求1所述最小霉素的生物合成基因簇的重组菌。

4.权利要求3所述重组菌在合成最小霉素中的应用。

5.权利要求2所述SEQ ID NO：1中第4003~8142位所示minA基因编码的非核糖体多肽合成酶在合成最小霉素中的应用。

6.权利要求2所述MinC_N基因编码的HAD去磷酸化酶在合成最小霉素中的应用。

7.权利要求2所述SEQ ID NO：1中第11031~11753位所示minD基因编码的尿嘧啶磷酸核糖基转移酶在合成最小霉素中的应用。