CN110713527A - Bin2及其编码基因在调控植物耐盐中的应用 - Google Patents

Bin2及其编码基因在调控植物耐盐中的应用 Download PDF

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CN110713527A
CN110713527A CN201810757655.1A CN201810757655A CN110713527A CN 110713527 A CN110713527 A CN 110713527A CN 201810757655 A CN201810757655 A CN 201810757655A CN 110713527 A CN110713527 A CN 110713527A
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plant
protein
bin2
sequence
stress tolerance
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杨永青
李建芳
郭岩
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China Agricultural University
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
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    • C12N15/8273—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for drought, cold, salt resistance

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Abstract

本发明公开了BIN2蛋白及其编码基因在调控植物耐盐中的应用。本发明提供了BIN2蛋白及其编码基因或含有编码蛋白BIN2的DNA分子的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌在调控植物耐逆性中的应用。本发明的实验证明，BIN2功能缺失的突变体表现出较野生型对盐胁迫的更加耐受，而其功能获得突变体及BIN2的过表达转基因株系则表现为较野生型对盐胁迫更加敏感，从而说明BIN2及其编码基因负调控植物的耐盐性。

Description

BIN2及其编码基因在调控植物耐盐中的应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及BIN2及其编码基因在调控植物耐盐中的应用。
背景技术
土壤盐碱化趋势在世界范围内不断扩展，严重限制了农作物的生长，已经成为制约农业生产的重要因素。盐碱胁迫对植物造成的危害在于盐碱化土壤中高浓度的Na+和过高的pH。随着植物细胞内盐离子的积累，将对细胞产生离子毒害效应，从而在多方面影响细胞发挥正常功能。在碱土环境中,除碱金属元素外的大部分金属元素都会形成不溶性盐,Na+作为自然界中含量最高的碱金属元素,则会富集在碱土中造成土壤的盐化。
随着分子生物学、基因组学、遗传学、生物化学以及基因编辑技术的快速发展，对植物抵抗盐胁迫的分子机制研究得以不断深入。盐超敏(Salt Overly Sensitive，SOS)途径是植物应对外界盐胁迫的一条重要机制。SOS2是SOS途径中的核心激酶，其活性受盐胁迫特异性激活。
发明内容
本发明的一个目的是提供如下1)-3)中任一种物质的用途。
本发明提供了如下1)-3)中任一种物质在调控植物耐逆性中的应用：
1)蛋白BIN2；
2)编码蛋白BIN2的DNA分子；
3)含有编码蛋白BIN2的DNA分子的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌；
所述蛋白BIN2为如下(1)或(2)：
(1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(2)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由(1)衍生的蛋白质。
上述应用中，所述DNA分子是如下1)-4)中任一种的DNA分子：
1)编码区为序列表中序列3所示的DNA分子；
2)编码区为序列表中序列1所示的DNA分子；
3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交且编码具有相同功能蛋白质的DNA分子；
4)与1)或2)限定的DNA序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性且编码具有相同功能蛋白质的DNA分子。
上述严格条件为在6×SSC，0.5％SDS的溶液中，在65℃下杂交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。
上述应用中，所述调控植物耐逆性为降低植物耐逆性；
和/或，所述耐逆性为耐盐性。
上述应用中，所述植物为双子叶植物或单子叶植物；
或所述植物为双子叶植物，所述双子叶植物具体为十字花科植物；所述十字花科植物具体为拟南芥。
抑制BIN2蛋白活性的物质或抑制BIN2蛋白编码基因表达的物质在如下a)-c)中任一中的应用也是本发明保护的范围；
或，抑制BIN2蛋白活性或抑制BIN2蛋白编码基因表达在如下a)-c)中任一中的应用也是本发明保护的范围；
a)提高植物耐逆性；
b)培育耐逆性植物；
c)培育高耐逆性植物；
所述蛋白BIN2为如下(1)或(2)：
(1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(2)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由(1)衍生的蛋白质。
上述应用中，所述BIN2蛋白编码基因是如下1)-4)中任一种的DNA分子：
1)编码区为序列表中序列3所示的DNA分子；
2)编码区为序列表中序列1所示的DNA分子；
3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交且编码具有相同功能蛋白质的DNA分子；
4)与1)或2)限定的DNA序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性且编码具有相同功能蛋白质的DNA分子。
上述应用中，所述耐逆性为耐盐性。
上述应用中，所述植物为双子叶植物或单子叶植物；
或所述植物为双子叶植物，所述双子叶植物具体为十字花科植物；所述十字花科植物具体为拟南芥。
本发明另一个目的是提供一种培育高耐逆性转基因植物的方法。
本发明提供的方法，包括如下步骤：降低目的植物中编码蛋白BIN2的DNA分子的表达量和/或活性，得到转基因植物，所述转基因植物的耐逆性高于所述目的植物；
或本发明还提供一种培育低耐逆性转基因植物的方法，包括如下步骤：提高目的植物中编码蛋白BIN2的DNA分子的表达量和/或活性，得到转基因植物，所述转基因植物的耐逆性低于所述目的植物；
或本发明还提供一种培育低耐逆性转基因植物的方法，包括如下步骤：提高目的植物中蛋白BIN的活性，得到转基因植物，所述转基因植物的耐逆性低于所述目的植物；
所述蛋白BIN2为如下(1)或(2)：
(1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(2)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由(1)衍生的蛋白质。
上述提高目的植物中编码蛋白BIN2的DNA分子的表达量和/或活性为将序列3所示的BIN2基因导入目的植物中；
上述或提高目的植物中蛋白BIN的活性可以为将野生型体内蛋白BIN2的第263位谷氨酸突变为赖氨酸。
上述方法中，所述植物为双子叶植物或单子叶植物；
和/或，所述植物为双子叶植物，所述双子叶植物具体为十字花科植物；所述十字花科植物具体为拟南芥；
和/或，所述耐逆性为耐盐性。
本发明的实验证明，BIN2蛋白功能缺失的突变体表型与未突变前的野生型拟南芥相比较，突变体表现出显著的盐胁迫耐受性。从而证明，BIN2蛋白的功能缺失可以提高植物对高盐的耐逆性。
附图说明
图1为野生型拟南芥和BIN2相关突变体及过表达转基因株系在含盐培养基上的表型及表型分析。
图2为4个独立的BIN2过表达转基因株系(pro35S:6MYC:BIN2in Col-0)中6Myc-BIN2蛋白表达鉴定分析。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中，除特殊说明外，定量试验均设5个以上的重复实验。
实施例1、BIN2基因在调节植物耐盐性中的应用
一、BIN2基因负调控植物耐盐性
1、BIN2相关突变体的获取
以生化数据为依据，对与SOS2存在相互作用的BIN2及其同家族成员的突变体进行盐胁迫表型鉴定。
已报道突变体FLAG_593C09(可从INRA订购)是T-DNA插入到拟南芥At4g18710基因(BIN2基因)造成的突变，导致蛋白BIN2功能缺失，将其命名为bin2-3，该突变体与野生型Ws-2相比，仅BIN2基因发生突变，其余基因不变；
突变体WiscDsLoxHs220_12G(可从ABRC订购)是T-DNA插入到拟南芥AT2G30980基因(BIL1基因)造成的突变，导致蛋白BIL1功能缺失，将其命名为bil1，该突变体与野生型Ws-2相比，仅BIL1基因发生突变，其余基因不变；
突变体Wiscseq_DsLox457-460O20.1(可从ABRC订购)是T-DNA插入到拟南芥AT1G06390基因(BIL2基因)造成的突变，导致蛋白BIL2功能缺失，将其命名为bil2，该突变体与野生型Ws-2相比，仅BIL2基因发生突变，其余基因不变。
已报道体内蛋白BIN2的第263位谷氨酸突变为赖氨酸，致使BIN2的激酶活性升高，蛋白稳定性增强，该功能获得型突变体被命名为bin2-1(文献：Li J,Nam KH,Vafeados D,Chory J.BIN2,a new brassinosteroid-insensitive locus in Arabidopsis.PlantPhysiol.2001；127(1):14–22.；公众可从中国农业大学获得)，该突变体与野生型Col-0相比，仅BIN2基因发生突变，其余基因不变。此外，bin2-1突变体纯和致死，其杂合体与纯和体均表现出地上部分叶片小而卷曲的表型。
BIN2基因的核苷酸序列为序列1，其CDS序列为序列3，其编码的蛋白的氨基酸序列为序列2。
2、BIN2基因在植物耐盐性中的应用
将生长在普通MS培养基上5天的野生型拟南芥(Ws-2)和BIN2及其同源基因BIL1或BIL2的双突材料bin2-3bil1以及bin2-3bil2，分别转移到盐浓度为0mM和100mM NaCl的MS培养基上，光箱中培养观察表型。双突材料由三突材料bin2-3bil1bil2(文献：Yan Z,ZhaoJ,Peng P,Chihara RK,Li J.BIN2functions redundantly with other ArabidopsisGSK3-like kinases to regulate brassinosteroid signaling.Plant Physiol.2009；150(2):710–721.)通过与野生型Ws-2进行回交后分离得到，并对基因组DNA进行PCR鉴定得到纯合的双突(公众可从中国农业大学获得)。
结果如图1A-图1D所示，在盐浓度为0mM的条件下，蛋白BIN2的功能缺失突变体bin2-3bil1以及bin2-3bil2和野生型拟南芥Ws-2无显著差异，在盐浓度为100mM的条件下，突变体表现出比野生型拟南芥更强的耐盐性，突变体的主根长度显著长于野生型。
将生长在普通MS培养基上5天的野生型拟南芥(Col-0)和蛋白BIN2的功能获得突变体bin2-1的杂合体(-/+)，分别转移到盐浓度为0mM和100mM NaCl的MS培养基上，光箱中培养观察表型。
结果如图1E-图1F所示，在盐浓度为0mM的条件下，BIN2的功能获得突变体bin2-1的杂合体(-/+)和野生型拟南芥Col-0无显著差异，在盐浓度为100mM的条件下，突变体表现为比野生型拟南芥对盐胁迫更加的敏感，突变体的主根长度显著短于野生型。
二、BIN2蛋白及其编码基因在降低植物耐盐性中的应用
1、过表达载体的制备
过表达载体pro35S:6MYC:BIN2为将序列3所示的BIN2基因替换pCM1307-6Myc载体(载体购于BioVector质粒载体菌株细胞基因保藏中心)的BamH I和Sal I酶切位点间的DNA分子，得到的载体，BIN2基因与载体上的6Myc标签共表达。
2、蛋白BIN2的过表达转基因植株的制备
1)过表达转基因植株的制备
将过表达载体pro35S:MYC:BIN2转入农杆菌GV3101，得到农杆菌GV3101/pro35S:MYC:BIN2。
将农杆菌GV3101/pro35S:MYC:BIN2采用花序浸泡法转化48株哥伦比亚生态型拟南芥Col-0(以下简称为野生型拟南芥)(文献：Xia T,Xiao D,Liu D,Chai W,Gong Q,WangNN.Heterologous expression of ATG8c from soybean confers tolerance tonitrogen deficiency and increases yield in Arabidopsis.PLoS One.2012；7(5):e37217.)，获得T3代纯合转基因BIN2的拟南芥株系。
2)过表达转基因植株的鉴定
T3代纯合转基因BIN2的拟南芥转基因株系在含有潮霉素的MS培养基上进行筛苗，在T3代得到抗潮霉素不分离的为纯和的BIN2的过表达转基因株系：BIN2-OE。
Western鉴定纯和的BIN2的过表达转基因株系BIN2-OE的6Myc-BIN2表达情况(使用的抗体为Myc抗体，Sigma-Aldrich,Cat#M4439)。
部分结果如图2所示，4个独立的BIN2过表达转基因株系BIN2-OE 4#、BIN2-OE 9#、BIN2-OE 10#、BIN2-OE 16#表达得到大小在63-70kD的融合蛋白6Myc-BIN2，表明BIN2在转基因植株中表达。
采用同样的方法将空载体转入野生型拟南芥中，得到转空载体拟南芥。
3、蛋白BIN2的过表达转基因植株的表型
将生长在普通MS培养基上5天的野生型拟南芥(Col-0)和T3代纯合转基因BIN2的拟南芥株系BIN2-OE 9#和BIN2-OE 10#(pro35S:6MYC:BIN2 in Col-0)，分别转移到盐浓度为0mM和100mM NaCl的MS培养基上，光箱中培养观察表型。以转空载体拟南芥为对照。
结果如图1G-图1H所示，在盐浓度为0mM的条件下，BIN2的过表达转基因株系BIN2-OE 9#和BIN2-OE 10#和野生型拟南芥Col-0无显著差异，在盐浓度为100mM的条件下，过表达转基因株系表现为比野生型拟南芥对盐胁迫更加的敏感，其主根长度显著短于野生型。
转空载体拟南芥与野生型结果无显著差异。
上述结果表明，BIN2负调控植物抗盐性。
序列表
<110> 中国农业大学
<120> BIN2蛋白及其编码基因在调控植物耐盐中的应用
<160> 3
<170> Patent In version 3.5
<210> 1
<211> 2440
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223>
<400> 1
atggctgatg ataaggtaaa gctgcttgtg ttccttttgc tgtcttttga agaagaagat 60
cctgtttttt ggtttttcca catttgaccc ttcaattagt tgtcttgaga ttcctgttct 120
tacagatgtt ttgtgataat aaatctagtt tagttagtac tcttgaagtt gaacggtttt 180
gagttctggg tttgtccaaa gttttgagct ttcgttaact ttttgactta ccctgagatc 240
tctgagggtt ttgagttctg agcttagaat tttctaagtt agctctgttg ggatgatcca 300
tgtctatata tctcgatctg tgattaatcc agagtttata caagctgcta gatccataat 360
tgaacataga ttagtccttg tttggtttgt tatatgtatt tgttttgttt accattcttt 420
tggcgtgaca aaagtatata tttttagttt taactaaatc agattcactc tgcgtaacgg 480
ttattttgta accactcttt taggataaaa gtttccttct ttagactttt gattctcaga 540
caagcattat tcttttagct tttgataatg gttttgtgct gatattaaag cttttctctt 600
tcaggagatg cctgctgctg tagttgatgg acatgatcaa gtcactggtc atattatttc 660
caccacaatc ggtggcaaaa atggtgaacc aaaacaggta tttttaaggc ttttaaccaa 720
atagactcac ttttatgtat atgcaagatt ttgatggtta ccaatacatt tttctatgtt 780
gttgttagac aattagttac atggcggagc gagttgttgg tacaggctcg ttcgggatcg 840
ttttccaagc aaaatgtttg gagactggag aaaccgtggc gataaagaag gttttgcaag 900
atagaagata caagaaccga gaacttcagt tgatgcgtgt gatggatcat ccgaatgtgg 960
tttgtttgaa gcattgcttc ttttcgacta caagtaaaga cgagcttttc ttgaacttgg 1020
ttatggagta tgtccctgag agcttgtatc gagttctgaa acattatagt agtgcaaacc 1080
aaagaatgcc tcttgtctat gttaaacttt acatgtatca ggtaataaca acacacattc 1140
atatcttcca tttccaaagt tgatgtacat aagattgttc ttatgctgat attacttcct 1200
tttgttatgt tagatcttcc ggggacttgc ttacattcac aatgttgctg gagtttgtca 1260
cagagatcta aagcctcaaa atcttctggt atgtgtaaca ttttaagatt gaactctttg 1320
ttttttttct tgcctttgtt tctttcgttc ttaatgtatc tcttctggtc tctttctata 1380
ggttgatcct cttactcatc aagtcaaaat ctgtgacttt ggcagtgcga aacagctcgt 1440
aagactttgt gacatataaa ctcattcgac ttgtagcggt tgttgttttc tgtgatcttg 1500
tcatttactg ttgaaatcta cttttgcttc aggttaaagg tgaagccaac atttcttaca 1560
tctgctcacg attctaccgt gcacccgagc tcatatttgg tgccactgag tacacaactt 1620
ctattgatat ctggtctgct ggttgtgttc ttgctgagct tcttcttggt caggtaaaca 1680
attctttcag taaccagctt attcaatctc catgtgtata tttgcattag gactcattgt 1740
gactatatca tgttcttatg cagccattat ttcccggaga aaatgctgtg gatcagctcg 1800
ttgaaattat aaaagtaaga atctttaaac gatgattcct tgcaaattac attctttggc 1860
tacaaaatcc tcactgtata gttgttgtac acaggttctt ggtacaccaa ctcgagaaga 1920
aatccgttgt atgaatccac attacacaga tttcaggttt ccacagataa aggcacatcc 1980
ctggcacaag gttagtgtct tttctctttt tgcatgtgtt cttgtttcag tttctttctt 2040
cacacatcaa ctgatcataa ttacgttttg gtttagatct tccacaaaag gatgccccca 2100
gaagcgattg attttgcatc aaggctgctt caatactctc caagtctaag atgcacagcg 2160
gtaagcattg gtcttgaggt ttcttcagtc tctaagaatc caactgaatc cttactatat 2220
attttgtttc ctcgtatttc agctcgaagc ttgtgcacat ccgttctttg atgaactcag 2280
agaaccaaac gctcgtttac caaatggacg gcctttcccg cctctcttca acttcaaaca 2340
agaagtagct ggatcatcac ctgaactggt caacaagttg attccagacc atatcaagag 2400
acaattgggt ctaagcttct tgaatcaatc tggaacttaa 2440
<210> 2
<211> 380
<212> PRT
<213>人工序列
<400> 2
Met Ala Asp Asp Lys Glu Met Pro Ala Ala Val Val Asp Gly His Asp
1 5 10 15
Gln Val Thr Gly His Ile Ile Ser Thr Thr Ile Gly Gly Lys Asn Gly
20 25 30
Glu Pro Lys Gln Thr Ile Ser Tyr Met Ala Glu Arg Val Val Gly Thr
35 40 45
Gly Ser Phe Gly Ile Val Phe Gln Ala Lys Cys Leu Glu Thr Gly Glu
50 55 60
Thr Val Ala Ile Lys Lys Val Leu Gln Asp Arg Arg Tyr Lys Asn Arg
65 70 75 80
Glu Leu Gln Leu Met Arg Val Met Asp His Pro Asn Val Val Cys Leu
85 90 95
Lys His Cys Phe Phe Ser Thr Thr Ser Lys Asp Glu Leu Phe Leu Asn
100 105 110
Leu Val Met Glu Tyr Val Pro Glu Ser Leu Tyr Arg Val Leu Lys His
115 120 125
Tyr Ser Ser Ala Asn Gln Arg Met Pro Leu Val Tyr Val Lys Leu Tyr
130 135 140
Met Tyr Gln Ile Phe Arg Gly Leu Ala Tyr Ile His Asn Val Ala Gly
145 150 155 160
Val Cys His Arg Asp Leu Lys Pro Gln Asn Leu Leu Val Asp Pro Leu
165 170 175
Thr His Gln Val Lys Ile Cys Asp Phe Gly Ser Ala Lys Gln Leu Val
180 185 190
Lys Gly Glu Ala Asn Ile Ser Tyr Ile Cys Ser Arg Phe Tyr Arg Ala
195 200 205
Pro Glu Leu Ile Phe Gly Ala Thr Glu Tyr Thr Thr Ser Ile Asp Ile
210 215 220
Trp Ser Ala Gly Cys Val Leu Ala Glu Leu Leu Leu Gly Gln Pro Leu
225 230 235 240
Phe Pro Gly Glu Asn Ala Val Asp Gln Leu Val Glu Ile Ile Lys Val
245 250 255
Leu Gly Thr Pro Thr Arg Glu Glu Ile Arg Cys Met Asn Pro His Tyr
260 265 270
Thr Asp Phe Arg Phe Pro Gln Ile Lys Ala His Pro Trp His Lys Ile
275 280 285
Phe His Lys Arg Met Pro Pro Glu Ala Ile Asp Phe Ala Ser Arg Leu
290 295 300
Leu Gln Tyr Ser Pro Ser Leu Arg Cys Thr Ala Leu Glu Ala Cys Ala
305 310 315 320
His Pro Phe Phe Asp Glu Leu Arg Glu Pro Asn Ala Arg Leu Pro Asn
325 330 335
Gly Arg Pro Phe Pro Pro Leu Phe Asn Phe Lys Gln Glu Val Ala Gly
340 345 350
Ser Ser Pro Glu Leu Val Asn Lys Leu Ile Pro Asp His Ile Lys Arg
355 360 365
Gln Leu Gly Leu Ser Phe Leu Asn Gln Ser Gly Thr
370 375 380
<210> 3
<211> 1143
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223>
<400> 3
atggctgatg ataaggagat gcctgctgct gtagttgatg gacatgatca 50
agtcactggt catattattt ccaccacaat cggtggcaaa aatggtgaac 100
caaaacagac aattagttac atggcggagc gagttgttgg tacaggctcg 150
ttcgggatcg ttttccaagc aaaatgtttg gagactggag aaaccgtggc 200
gataaagaag gttttgcaag atagaagata caagaaccga gaacttcagt 250
tgatgcgtgt gatggatcat ccgaatgtgg tttgtttgaa gcattgcttc 300
ttttcgacta caagtaaaga cgagcttttc ttgaacttgg ttatggagta 350
tgtccctgag agcttgtatc gagttctgaa acattatagt agtgcaaacc 400
aaagaatgcc tcttgtctat gttaaacttt acatgtatca gatcttccgg 450
ggacttgctt acattcacaa tgttgctgga gtttgtcaca gagatctaaa 500
gcctcaaaat cttctggttg atcctcttac tcatcaagtc aaaatctgtg 550
actttggcag tgcgaaacag ctcgttaaag gtgaagccaa catttcttac 600
atctgctcac gattctaccg tgcacccgag ctcatatttg gtgccactga 650
gtacacaact tctattgata tctggtctgc tggttgtgtt cttgctgagc 700
ttcttcttgg tcagccatta tttcccggag aaaatgctgt ggatcagctc 750
gttgaaatta taaaagttct tggtacacca actcgagaag aaatccgttg 800
tatgaatcca cattacacag atttcaggtt tccacagata aaggcacatc 850
cctggcacaa gatcttccac aaaaggatgc ccccagaagc gattgatttt 900
gcatcaaggc tgcttcaata ctctccaagt ctaagatgca cagcgctcga 950
agcttgtgca catccgttct ttgatgaact cagagaacca aacgctcgtt 1000
taccaaatgg acggcctttc ccgcctctct tcaacttcaa acaagaagta 1050
gctggatcat cacctgaact ggtcaacaag ttgattccag accatatcaa 1100
gagacaattg ggtctaagct tcttgaatca atctggaact taa 1143

Claims (10)

1.如下1)-3)中任一种物质在调控植物耐逆性中的应用：
1)蛋白BIN2；
2)编码蛋白BIN2的DNA分子；
3)含有编码蛋白BIN2的DNA分子的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌；
所述蛋白BIN2为如下(1)或(2)：
(1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(2)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由(1)衍生的蛋白质。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：
所述DNA分子是如下1)-4)中任一种的DNA分子：
1)编码区为序列表中序列3所示的DNA分子；
2)编码区为序列表中序列1所示的DNA分子；
3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交且编码具有相同功能蛋白质的DNA分子；
4)与1)或2)限定的DNA序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性且编码具有相同功能蛋白质的DNA分子。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：
所述调控植物耐逆性为降低植物耐逆性；
和/或，所述耐逆性为耐盐性。
4.根据权利要求1-3中任一所述的应用，其特征在于：
所述植物为双子叶植物或单子叶植物；
或所述植物为双子叶植物，所述双子叶植物具体为十字花科植物；所述十字花科植物具体为拟南芥。
5.抑制BIN2蛋白活性的物质或抑制BIN2蛋白编码基因表达的物质在如下a)
-c)中任一中的应用；
或，抑制BIN2蛋白活性或抑制BIN2蛋白编码基因表达在如下a)-c)中任一中的应用；
a)提高植物耐逆性；
b)培育耐逆性植物；
c)培育高耐逆性植物；
所述蛋白BIN2为如下(1)或(2)：
(1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(2)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由(1)衍生的蛋白质。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：
所述BIN2蛋白编码基因是如下1)-4)中任一种的DNA分子：
1)编码区为序列表中序列3所示的DNA分子；
2)编码区为序列表中序列1所示的DNA分子；
3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交且编码具有相同功能蛋白质的DNA分子；
4)与1)或2)限定的DNA序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性且编码具有相同功能蛋白质的DNA分子。
7.根据权利要求5或6所述的应用，其特征在于：所述耐逆性为耐盐性。
8.根据权利要求5-7中任一所述的应用，其特征在于：所述植物为双子叶植物或单子叶植物；
或所述植物为双子叶植物，所述双子叶植物具体为十字花科植物；所述十字花科植物具体为拟南芥。
9.一种培育高耐逆性转基因植物的方法，包括如下步骤：降低目的植物中编码蛋白BIN2的DNA分子的表达量和/或活性，得到转基因植物，所述转基因植物的耐逆性高于所述目的植物；
或一种培育低耐逆性转基因植物的方法，包括如下步骤：提高目的植物中编码蛋白BIN2的DNA分子的表达量和/或活性，得到转基因植物，所述转基因植物的耐逆性低于所述目的植物；
或一种培育低耐逆性转基因植物的方法，包括如下步骤：提高目的植物中蛋白BIN2的活性，得到转基因植物，所述转基因植物的耐逆性低于所述目的植物；
所述蛋白BIN2为如下(1)或(2)：
(1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(2)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由(1)衍生的蛋白质。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：
所述植物为双子叶植物或单子叶植物；
和/或，所述植物为双子叶植物，所述双子叶植物具体为十字花科植物；所述十字花科植物具体为拟南芥；
和/或，所述耐逆性为耐盐性。
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