CN114656534A

CN114656534A - Bass6蛋白及其编码基因与调控植物耐盐碱性的应用

Info

Publication number: CN114656534A
Application number: CN202011525288.6A
Authority: CN
Inventors: 杨永青; 郭岩; 李钦沛
Original assignee: China Agricultural University
Current assignee: China Agricultural University
Priority date: 2020-12-22
Filing date: 2020-12-22
Publication date: 2022-06-24
Anticipated expiration: 2040-12-22
Also published as: CN114656534B

Abstract

本发明公开了BASS6蛋白及其编码基因与调控植物耐盐碱性的应用。本发明提供的BASS6蛋白为氨基酸序列为SEQ ID No.1或将其经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且来源于玉米具有相同功能或与其具有80％以上同一性且来源于玉米具有相同功能的蛋白质或在其N端和/或C端连接蛋白标签后得到的融合蛋白。本发明的实验证明，BASS6过表达株系与野生型B73‑329相比较，过表达株系表现出显著的盐碱胁迫耐受性。从而证明，BASS6蛋白的功能为提高植物对高盐碱的耐逆性。本发明对于培育高盐碱耐受性植物新品种具有重要意义。

Description

BASS6蛋白及其编码基因与调控植物耐盐碱性的应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及BASS6蛋白及其编码基因与调控植物耐盐碱性的应用。

背景技术

土壤盐碱化趋势在世界范围内不断扩展，严重限制了农作物的生长，已经成为制约农业生产的重要因素。盐碱胁迫对植物造成的危害在于盐碱化土壤中高浓度的Na⁺和过高的pH。随着植物细胞内盐离子的积累，将对细胞产生离子毒害效应，从而在多方面影响细胞发挥正常功能。在碱土环境中，除碱金属元素外的大部分金属元素都会形成不溶性盐，Na⁺作为自然界中含量最高的碱金属元素，则会富集在碱土中造成土壤的盐化。

随着分子生物学、基因组学、遗传学、生物化学以及基因编辑技术的快速发展，对植物抵抗盐碱胁迫的分子机制研究得以不断深入，许多新的基因或蛋白参与调控盐碱胁迫响应过程中。

以前的研究发现，BASS6为胆汁酸钠共转运蛋白，转运乙醇酸并参与拟南芥的光呼吸代谢。目前尚无关于BASS6参与盐碱胁迫响应过程，调控植物耐盐碱能力的相关报道。

发明内容

本发明的目的是提供BASS6蛋白及其编码基因与调控植物耐盐碱性的应用

第一方面，本发明要求保护一种蛋白质。

本发明要求保护的蛋白质，来自于玉米(Zea mays L.)，命名为BASS6蛋白。具体可为如下任一：

(A1)氨基酸序列为SEQ ID No.1的蛋白质；

(A2)将SEQ ID No.1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且来源于玉米具有相同功能的蛋白质；

(A3)与(A1)-(A2)中任一所限定的氨基酸序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同一性且来源于玉米具有相同功能的蛋白质；

(A4)在(A1)-(A3)中任一所限定的蛋白质的N端和/或C端连接蛋白标签后得到的融合蛋白。

在上述蛋白质中，所述蛋白标签(protein-tag)指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和/或纯化。所述蛋白标签可为Flag标签、His标签、MBP标签、HA标签、myc标签、GST标签和/或SUMO标签等。

在上述蛋白质中，同一性指氨基酸序列的同一性。可使用国际互联网上的同源性检索站点测定氨基酸序列的同一性，如NCBI主页网站的BLAST网页。例如，可在高级BLAST2.1中，通过使用blastp作为程序，将Expect值设置为10，将所有Filter设置为OFF，使用BLOSUM62作为Matrix，将Gap existence cost，Per residue gap cost和Lambda ratio分别设置为11，1和0.85(缺省值)并进行检索一对氨基酸序列的同一性进行计算，然后即可获得同一性的值(％)。

在上述蛋白质中，所述95％以上的同源性可为至少96％、97％、98％的同一性。所述90％以上的同源性可为至少91％、92％、93％、94％的同一性。所述85％以上的同源性可为至少86％、87％、88％、89％的同一性。所述80％以上的同源性可为至少81％、82％、83％、84％的同一性。

第二方面，本发明要求保护编码前文第一方面中所述蛋白质的核酸分子。

进一步地，所述核酸分子可以是DNA，如cDNA、基因组DNA或重组DNA；所述核酸分子也可以是RNA，如mRNA等。

更进一步地，所述核酸分子(BASS6基因)具体为如下任一：

(B1)SEQ ID No.2所示的DNA分子(BASS6基因的CDS序列)；

(B2)SEQ ID No.3所示的DNA分子(BASS6基因的基因组序列)；

(B3)在严格条件下与(B1)或(B2)限定的DNA分子杂交且编码且所述蛋白质的DNA分子；

(B4)与(B1)-(B3)中任一限定的DNA序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同一性且编码前文所述蛋白质的DNA分子。

在上述核酸分子中，所述严格条件可为如下：50℃，在7％十二烷基硫酸钠(SDS)、0.5M Na₃PO₄和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在50℃，2×SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5M Na₃PO₄和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在50℃，1×SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5M Na₃PO₄和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在50℃，0.5×SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5M Na₃PO₄和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在50℃，0.1×SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5M Na₃PO₄和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在65℃，0.1×SSC，0.1％SDS中漂洗；也可为：在6×SSC，0.5％SDS的溶液中，在65℃下杂交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。

在上述核酸分子中，同源性指核苷酸序列的同一性。可使用国际互联网上的同源性检索站点测定核苷酸序列的同一性，如NCBI主页网站的BLAST网页。例如，可在高级BLAST2.1中，通过使用blastp作为程序，将Expect值设置为10，将所有Filter设置为OFF，使用BLOSUM62作为Matrix，将Gap existence cost，Per residue gap cost和Lambda ratio分别设置为11，1和0.85(缺省值)并进行检索一对核苷酸序列的同一性进行计算，然后即可获得同一性的值(％)。

在上述核酸分子中，所述95％以上的同源性可为至少96％、97％、98％的同一性。所述90％以上的同源性可为至少91％、92％、93％、94％的同一性。所述85％以上的同源性可为至少86％、87％、88％、89％的同一性。所述80％以上的同源性可为至少81％、82％、83％、84％的同一性。

第三方面，本发明要求保护含有前文第二方面所述核酸分子的表达盒、重组载体、重组菌或转基因细胞系。

所述表达盒是指能够在宿主细胞中表达BASS6的DNA，该DNA不但可包括启动BASS6基因转录的启动子，还可包括终止BASS6转录的终止子。进一步，所述表达盒还可包括增强子序列。可用于本发明的启动子包括但不限于：组成型启动子，组织、器官和发育特异的启动子，和诱导型启动子。启动子的例子包括但不限于：泛生素基因Ubiqutin启动子(pUbi)；花椰菜花叶病毒的组成型启动子35S；来自西红柿的创伤诱导型启动子，亮氨酸氨基肽酶("LAP",Chao等人(1999)Plant Physiol120:979-992)；来自烟草的化学诱导型启动子，发病机理相关1(PR1)(由水杨酸和BTH(苯并噻二唑-7-硫代羟酸S-甲酯)诱导)；西红柿蛋白酶抑制剂II启动子(PIN2)或LAP启动子(均可用茉莉酮酸曱酯诱导)；热休克启动子(美国专利5，187，267)；四环素诱导型启动子(美国专利5，057,422)；种子特异性启动子，如谷子种子特异性启动子pF128(CN101063139B(中国专利2007 1 0099169.7))，种子贮存蛋白质特异的启动子(例如，菜豆球蛋白、napin,oleosin和大豆beta conglycin的启动子(Beachy等人(1985)EMBO J.4:3047-3053))。它们可单独使用或与其它的植物启动子结合使用。此处引用的所有参考文献均全文引用。合适的转录终止子包括但不限于：农杆菌胭脂碱合成酶终止子(NOS终止子)、花椰菜花叶病毒CaMV 35S终止子、tml终止子、豌豆rbcS E9终止子和胭脂氨酸和章鱼氨酸合酶终止子(参见，例如：Odell等人(I⁹⁸⁵)Nature 313:810；Rosenberg等人(1987)Gene,56:125；Guerineau等人(1991)Mol.Gen.Genet,262:141；Proudfoot(1991)Cell,64:671；Sanfacon等人Genes Dev.,5:141；Mogen等人(1990)Plant Cell,2:1261；Munroe等人(1990)Gene,91:151；Ballad等人(1989)Nucleic Acids Res.17:7891；Joshi等人(1987)Nucleic Acid Res.,15:9627)。

构建含有所述BASS6基因表达盒的重组表达载体。所利用的植物表达载体可为双元农杆菌载体或Gateway系统载体等，如pCXUN、pBin438、pCAMBIA1302、pCAMBIA2301、pCAMBIA1301、pCAMBIA1300、pBI121、pGWB411、pGWB412、pGWB405、pCAMBIA1391-Xa或pCAMBIA1391-Xb。使用ZmEREB167构建重组表达载体时，在其转录起始核苷酸前可加上任何一种增强型、组成型、组织特异型或诱导型启动子，如花椰菜花叶病毒(CAMV)35S启动子、泛生素基因Ubiqutin启动子(pUbi)等，它们可单独使用或与其它的植物启动子结合使用；此外，使用本发明的基因构建植物表达载体时，还可使用增强子，包括翻译增强子或转录增强子，这些增强子区域可以是ATG起始密码子或邻接区域起始密码子等，但必需与编码序列的阅读框相同，以保证整个序列的正确翻译。所述翻译控制信号和起始密码子的来源是广泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域或结构基因。

为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选，可对所用植物表达载体进行加工，如加入可在植物中表达的编码可产生颜色变化的酶或发光化合物的基因(GUS基因、萤光素酶基因等)、具有抗性的抗生素标记物(庆大霉素标记物、卡那霉素标记物等)或是抗化学试剂标记基因(如抗除莠剂基因)等。

第四方面，本发明要求保护前文第一方面中所述蛋白质或前文第二方面中所述核酸分子或前文第三方面中所述表达盒、重组载体、重组菌或转基因细胞系在调控植物耐盐碱性中的应用。

进一步地，在所述植物中，前文所述蛋白质的表达量和/或活性提高，所述植物的耐盐碱性提高。

第五方面，本发明要求保护一种培育耐盐碱性提高的植物的方法。

本发明要求保护的培育耐盐碱性提高的植物的方法，可包括使受体植物中前文第一方面所述蛋白质的表达量和/或活性提高的步骤。

所述方法可以通过杂交手段实现，也可以通过转基因手段实现。

第六方面，本发明要求保护一种培育耐盐碱性提高的转基因植物的方法。

本发明要求保护的培育耐盐碱性提高的转基因植物的方法，可包括如下步骤：向受体植物中导入能够表达前文第一方面所述蛋白质的核酸分子，得到转基因植物；所述转基因植物与所述受体植物相比耐盐碱性提高。

进一步地，能够表达前文第一方面所述蛋白质的核酸分子可通过重组表达载体导入所述受体植物中。

其中，所述核酸分子(BASS6基因)可先进行如下修饰，再导入所述受体植物中，以达到更好的表达效果：

1)修饰邻近起始甲硫氨酸的基因序列，以使翻译有效起始；例如，利用在植物中已知的有效的序列进行修饰；

2)与各种植物表达的启动子连接，以利于其在植物中的表达；所述启动子可包括组成型、诱导型、时序调节、发育调节、化学调节、组织优选和组织特异性启动子；启动子的选择将随着表达时间和空间需要而变化，而且也取决于靶物种；例如组织或器官的特异性表达启动子，根据需要受体在发育的什么时期而定；尽管证明了来源于双子叶植物的许多启动子在单子叶植物中是可起作用的，反之亦然，但是理想地，选择双子叶植物启动子用于双子叶植物中的表达，单子叶植物的启动子用于单子叶植物中的表达；

3)与适合的转录终止子连接，也可以提高本发明基因的表达效率；例如来源于CaMV的tml，来源于rbcS的E9；任何已知在植物中起作用的可得到的终止子都可以与本发明基因进行连接；

4)引入增强子序列，如内含子序列(例如来源于Adhl和bronzel)和病毒前导序列(例如来源于TMV、MCMV和AMV)。

在本发明的具体实施方式中，所述重组表达载体中启动BASS6基因转录的启动子为Ubi启动子，并由Nos终止子终止转录。

在上述各方面中，所述植物为单子叶植物或双子叶植物。

进一步地，所述植物为禾本科植物。

更进一步地，所述植物为玉蜀黍属植物，如玉米。

在本发明的具体实施方式中，所述植物为玉米B73-329。

本发明的实验证明，BASS6过表达株系与野生型B73-329相比较，过表达株系表现出显著的盐碱胁迫耐受性。从而证明，BASS6蛋白的功能为提高植物对高盐碱的耐逆性。本发明对于培育高盐碱耐受性植物新品种具有重要意义。

附图说明

图1为野生型B73-329和BASS6过表达株系在含NaHCO₃处理的土壤中的表型。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1、BASS6蛋白及其编码基因在调控植物盐碱耐受性中的应用

一、BASS6蛋白及其编码基因的发现

本发明从玉米(Zea mays L.)中发现一个新的蛋白质，命名为BASS6蛋白，其氨基酸序列为SEQ ID No.1。BASS6基因的CDS序列如SEQ ID No.2所示，对应的基因组序列如SEQID No.3所示。

二、BASS6过表达载体的构建

从玉米(Zea mays L.)B73-329(记载于“王芳,崔鹏娟,黄芸,王志文,王海峰,陈益芳.玉米磷吸收和再分配的分子机制[A],2018全国植物生物学大会论文集[C],2018年”一文，公众可从申请人处获得，仅可用于重复本发明实验使用不得他用)提取总RNA，反转录获得cDNA，以cDNA为模板，通过PCR扩增ZmOST1基因(SEQ ID No.2)，将扩增产物跑电泳切胶回收，回收方法参照天根公司试剂盒。

将回收的BASS6基因cDNA(SEQ ID No.2)克隆到pBCXUN载体，获得的测序正确的重组表达载体命名为pBCXUN-BASS6。重组质粒pBCXUN-BASS6中，SEQ ID No.2所示的BASS6基因由Ubi启动子启动转录并由Nos终止子终止，从而表达目的蛋白BASS6(SEQ ID No.1)。

pBCXUN载体是将pCXUN载体(GenBank:FJ905215.1，06-JUL-2009)的HYG基因(hptII，潮霉素抗性基因)替换为Bar基因(编码膦丝菌素乙酰转移酶)(SEQ ID No.4)，保持pCXUN的其它核苷酸不变得到的表达载体。

三、BASS6基因过表达植物的构建和检测

将步骤二中构建的pBCXUN-BASS6过表达质粒通过热激法转化到感受态农杆菌EHA105菌株中，菌落PCR鉴定出阳性克隆。将鉴定正确的农杆菌单菌落接种于2-3mL含有100μg/mL卡那霉素和50μg/mL利福平的液体培养基中，28℃振荡培养过夜，第二天转接大量含有抗生素的液体培养基中震荡培养，转接几次后收集菌体，重新悬浮至OD₆₀₀在0.8-1.0之间。采用获得的重组农杆菌菌悬液侵染无菌条件下扒出的B73-329玉米幼胚后，诱导愈伤成苗。转基因植株经自交繁种后获得T3代进行后续实验。

提取植株叶片的基因组DNA，采用UbiP-seq(对应于Ubi启动子中)和NosR-seq(对应于Nos终止子中)组成的引物对进行PCR扩增，如果得到特异性扩增产物，该植株为转基因植株。

UbiP-seq：5’-TTTTAGCCCTGCCTTCATACGC-3’；

NosR-seq：5’-AGACCGGCAACAGGATTCAATC-3’。

四、BASS6基因过表达植物的耐盐碱性鉴定

供试种子：经步骤三鉴定阳性的纯合的T₃代BASS6转基因玉米种子(OX-1、OX-2和OX-3)玉米种子，B73-329野生型对照。

将各供试种植于不含营养土的纯蛭石中，用二分之一玉米营养液(即1/2Hoagland’s营养液)浇灌。玉米生长约7天后(三叶期)浇灌含100mM NaHCO₃(盐碱胁迫)的二分之一玉米营养液(即1/2Hoagland’s营养液)，每7天浇灌一次，生长30天观察表型并统计株高。设置三次重复试验，每次重复试验每处理各20株。定量结果取多次重复的均值。

结果如图1所示，在100mM NaHCO₃处理的条件下，BASS6过表达株系表现出比野生型B73-329更强的耐盐碱性，叶片较绿，株高更高。经统计，BASS6过表达株系OX-1的株高较B73-329高出27±4％；OX-2的株高较B73-329高出29±3％；OX-3的株高较B73-329高出25±5％。

以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。

<110> 中国农业大学

<120> BASS6蛋白及其编码基因与调控植物耐盐碱性的应用

<130> GNCLN203348

<160> 4

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 409

<212> PRT

<213> Zea mays L.

<400> 1

Met Ala Pro Ala Pro Ala Leu Thr Ala Thr Ser Val Leu Lys Arg Ser

1 5 10 15

His Leu Pro Gly Val His Ser Leu Ala Cys Arg Arg Gln Pro Gly Ala

20 25 30

Asp Arg Val Ser Val Leu Ser Pro Ala Ile Pro Pro Pro Arg Val Ser

35 40 45

Trp Gln Gln Gly Ser Gly Val Val Ala Lys Arg Leu Leu Trp Ala Ser

50 55 60

Ala Ser Gly Ser Phe Glu Lys Asp Asn Ile Gly Glu Asp Ala Val Leu

65 70 75 80

Pro Ser Gln Ile Ala Val Glu Asn Lys Val Asp Phe Leu Lys Ile Leu

85 90 95

Lys Ser Ala Asn Ser Ile Ile Pro His Ile Val Leu Gly Ser Thr Ile

100 105 110

Leu Ala Leu Val Tyr Pro Pro Ser Phe Thr Trp Phe Thr Thr Arg Tyr

115 120 125

Tyr Ala Pro Ala Leu Gly Phe Leu Met Phe Ala Val Gly Val Asn Ser

130 135 140

Ser Ala Lys Asp Phe Ile Glu Ala Ile Lys Arg Pro Asp Ala Ile Ala

145 150 155 160

Ala Gly Tyr Ile Gly Gln Phe Val Ile Lys Pro Leu Phe Gly Phe Leu

165 170 175

Phe Gly Thr Leu Ala Val Ala Val Leu Asn Leu Pro Ala Ala Leu Gly

180 185 190

Ala Gly Ile Met Leu Val Ser Cys Val Ser Gly Ala Gln Leu Ser Asn

195 200 205

Tyr Ala Thr Phe Leu Thr Asp Pro His Met Ala Pro Leu Ser Ile Val

210 215 220

Met Thr Ser Leu Ser Thr Ala Thr Ala Val Phe Val Thr Pro Thr Leu

225 230 235 240

Ser Tyr Phe Leu Ile Gly Gln Lys Leu Pro Val Asp Val Lys Gly Met

245 250 255

Met Ser Ser Ile Val Gln Ile Val Val Ala Pro Ile Ala Ala Gly Leu

260 265 270

Leu Leu Asn Arg Phe Leu Pro Arg Leu Cys Ala Ala Ile Gln Pro Phe

275 280 285

Leu Pro Ser Met Ser Val Phe Val Thr Ala Leu Cys Val Gly Ser Pro

290 295 300

Leu Ala Ile Asn Ile Lys Ala Val Leu Ser Pro Phe Gly Leu Thr Ile

305 310 315 320

Val Leu Leu Leu Phe Ala Phe His Thr Ser Ser Phe Val Ala Gly Tyr

325 330 335

His Leu Ala Gly Thr Trp Phe Arg Lys Ser Asp Asp Val Lys Ala Leu

340 345 350

Gln Arg Thr Ile Ser Phe Glu Thr Gly Met Gln Ser Ser Leu Leu Ala

355 360 365

Leu Ala Leu Ala Asn Lys Phe Phe Pro Asp Pro Leu Val Gly Val Pro

370 375 380

Pro Ala Ile Ser Val Val Leu Met Ser Leu Met Gly Phe Ala Leu Val

385 390 395 400

Met Val Trp Ser Lys Lys Arg Glu Ala

405

<210> 2

<211> 1230

<212> DNA

<213> Zea mays L.

<400> 2

atggcccctg cccccgctct caccgccaca tccgtcctga agcgttccca cctacccggc 60

gtccactcgt tggcctgtcg ccggcagccg ggggcggacc gcgtctcggt gctttctcca 120

gcgatcccgc cgccccgcgt ttcatggcag caaggatctg gagtggttgc taagaggctc 180

ctctgggcga gtgcgagtgg ttccttcgag aaagataaca tcggggagga cgcggtgttg 240

ccttctcaga tagcggtgga gaataaagta gattttttga agattttaaa gagtgccaac 300

tccattattc cccatatagt gctggggagt acaattctcg ccctggtgta cccgccttcg 360

tttacatggt tcactaccag gtattatgca ccagctttgg ggttcttgat gtttgctgtt 420

ggtgtaaact caagtgccaa ggattttatt gaagcaataa agaggccaga tgctattgct 480

gcgggctata tcggacagtt tgtcatcaag cctttgtttg gattcctttt tggcactctt 540

gcggttgcag ttcttaacct cccagctgct ctaggcgctg gcataatgtt ggtttcatgc 600

gtgagcggag cacaactttc aaactatgca actttcttga cggatccaca tatggctcct 660

ctcagcattg ttatgacatc attgtcaaca gctactgcag tttttgtcac cccaacatta 720

tcttactttc ttattggcca gaaattacct gtagatgtca aagggatgat gtccagcatc 780

gttcaaatag ttgttgctcc aattgctgcc ggattgcttc tgaatagatt cctaccaagg 840

ctctgtgcag ctattcagcc atttctccct tcgatgtcgg tgtttgtcac tgccctgtgt 900

gttggctcac cattggcaat aaatatcaag gctgttttgt cgccatttgg attaaccata 960

gtgctgctcc tttttgcatt ccacacctca tcttttgtag ctggttatca tcttgctggt 1020

acttggtttc gcaagtcaga cgacgtaaag gcactacaaa ggacaatatc ttttgagaca 1080

ggaatgcaaa gcagccttct tgctcttgct ttagcaaata agttcttccc agatccacta 1140

gtgggtgtgc ctccagccat atcggttgtg ttgatgtcct taatgggatt tgctcttgtc 1200

atggtatggt ccaagaaaag agaagcctaa 1230

<210> 3

<211> 3054

<212> DNA

<213> Zea mays L.

<400> 3

gtccctgtcc gtcggttcaa gcttcccaac aatctctgcg gagtaggtcg cctgacgaac 60

taccgagacg tgcgtctcgc ttctcccttc ctcagctgct ggcccgctgc ctgcagccat 120

tgcccgctcc tcgaggtcaa atggcccctg cccccgctct caccgccaca tccgtcctga 180

agcgttccca cctacccggc gtccactcgt tggcctgtcg ccggcagccg ggggcggacc 240

gcgtctcggt gctttctcca gcgatcccgc cgccccgcgt ttcatggcgt aggtcctcca 300

gtctgatcta agagatcccc aatcttatgc tgctgtactg cgtgaattac agattggcga 360

tatcgccttt gtgtcaagag aacagtgatt gggttttggg gttcaacaat gggtatctta 420

tctatctatc ataagcttcg tcgtggcggg attgaaaatt tatgatgtag tctttctgtt 480

tgttctatac aatcagagca aggatctgga gtggttgcta agaggctcct ctgggcgagt 540

gcgagtggtt ccttcgagaa agataacatc ggggaggacg cggtgttgcc ttctcaggtg 600

cctttgtgat gcaattcctt tatgccttag ctagtgcgct tttgtactcg gggtggtcac 660

ttagtatctc tttttacact ttggattaaa ttcacagata gcggtggaga ataaagtaga 720

ttttttgaag attttaaaga gtgccaactc cattattccc catatagtgc tggggagtac 780

aattctcgcc ctggtgtacc cgccttcgtt tacatggttc actaccaggt ctgtcatgca 840

agttgttttt gctctctatt agtacaaatt cagttattgg tatgttagca tggaatatat 900

tcgttgggtc aatgatccat agaatttata tttcagctac acttaccccc ctgatgacag 960

tacctaagac cattttgatg tgcagttact ttttctcgaa cttacttctt gactcttctt 1020

ccagtcgcat aagtgtaggg gagttcgttt tctcagaaat atgcatataa ttggtacctg 1080

aaaaggcatt taaagttatg taccgattac atactaatca ccatatttcc attctctata 1140

tggtaatgct ttcttgttag atatcctctt ggtttatgct cactaataaa ctctgatatc 1200

tatttctgta acgattaatc atttcagggt cttacctctc tcagtctcac ttatcagctg 1260

gcttttatac aattagatag tttcatgttt ttgtcagtag cacagtgctc tatatttgga 1320

cctgttattt acatttccag ggtgtgtgtt attattgcag gtattatgca ccagctttgg 1380

ggttcttgat gtttgctgtt ggtgtaaact caagtgccaa ggattttatt gaagcaataa 1440

agaggccaga tgctattgct gcgggctata tcggacagtt tgtcatcaag cctttgtttg 1500

gattcctttt tggcactctt gcggttgcag ttcttaacct cccagctgct ctaggcaaga 1560

aattgagttc atgcattttt atatgcttta gaataagcat tgcagcatat gtagtgaatt 1620

ctgacgtgaa cttgtctgta ggcgctggca taatgttggt ttcatgcgtg agcggagcac 1680

aactttcaaa ctatgcaact ttcttgacgg atccacatat ggctcctctc agcattgtta 1740

tgacatcatt gtcaacagct actgcagttt ttgtcacccc aacattatct tactttctta 1800

ttggccagaa attacctgta gatgtcaaag ggatgatgtc cagcatcgtt caaatagttg 1860

ttgctccaat tgctgccgga ttgcttctga ataggtatcc cctccattgc cttgaactga 1920

agtataggac agagctgtgc tagattggat agttccctta tatttctgtt ttttggctcc 1980

cactttgagt gacttctgtt ttaaggtctt aattcatgct tctttatatt atgcagattc 2040

ctaccaaggc tctgtgcagc tattcagcca tttctccctt cgatgtcggt gtttgtcact 2100

gccctgtgtg ttggctcacc attggcaata aatatcaagg ctgttttgtc gccatttgga 2160

ttaaccatag tgctgctcct ttttgcattc cacacctcat cttttgtagc tggttatcat 2220

cttgctggta cttggtttcg caagtcagac gacgtaaagg cactacaaag gacaatatct 2280

tttgagacag gtgacttcct cttctataca cgaggatatg ttctttctaa tttgttttgt 2340

tgccttaccg gtatctcttg atgcaggaat gcaaagcagc cttcttgctc ttgctttagc 2400

aaataagttc ttcccagatc cactagtggg tgtgcctcca gccatatcgg tatgtgaact 2460

tttacccatc cactagcctc ttgcagattt atctcttacg aatggaacgt tcctgtcaat 2520

cggactcgga cattaacctt gggaacagct atggataggt caatacacag ctccacggaa 2580

ttaacatctg ttcagcagat acaaattatt actttgacct tattcacatg aaacgttgcc 2640

tgtggtctta gaaatcaaca caaactatgt aactatattc caagagtaac attactttag 2700

ttcagcacaa tttgaactct gaagagaggg ggtccatcct gttctgtctg cggagagatt 2760

aatgaggatc ttaccattgt taacttgatt catttctgca ggttgtgttg atgtccttaa 2820

tgggatttgc tcttgtcatg gtatggtcca agaaaagaga agcctaattt ccttaatcaa 2880

ttatgcgctg cgctgttgtt ttctgctctt atttatgtag agtaggtaga atttttcatg 2940

cttcaaattt gaaactcttg tagcgttcct tctctccatc tgagtgagct tgcaagtgct 3000

ttctttctct ctcactcact cactaaatta ttttccagat ttacattttt tttt 3054

<210> 4

<211> 552

<212> DNA

<213> Artificial sequence

<400> 4

atgagcccag aacgacgccc ggccgacatc cgccgtgcca ccgaggcgga catgccggcg 60

gtctgcacca tcgtcaacca ctacatcgag acaagcacgg tcaacttccg taccgagccg 120

caggaaccgc aggagtggac ggacgacctc gtccgtctgc gggagcgcta tccctggctc 180

gtcgccgagg tggacggcga ggtcgccggc atcgcctacg cgggcccctg gaaggcacgc 240

aacgcctacg actggacggc cgagtcgacc gtgtacgtct ccccccgcca ccagcggacg 300

ggactgggct ccacgctcta cacccacctg ctgaagtccc tggaggcaca gggcttcaag 360

agcgtggtcg ctgtcatcgg gctgcccaac gacccgagcg tgcgcatgca cgaggcgctc 420

ggatatgccc cccgcggcat gctgcgggcg gccggcttca agcacgggaa ctggcatgac 480

gtgggtttct ggcagctgga cttcagcctg ccggtaccgc cccgtccggt cctgcccgtc 540

accgagattt ga 552

Claims

1.蛋白质，为如下任一：

(A1)氨基酸序列为SEQ ID No.1的蛋白质；

2.编码权利要求1所述蛋白质的核酸分子。

3.根据权利要求2所述的核酸分子，其特征在于：所述核酸分子为如下任一：

(B1)SEQ ID No.2所示的DNA分子；

(B2)SEQ ID No.3所示的DNA分子；

(B3)在严格条件下与(B1)或(B2)限定的DNA分子杂交且编码权利要求1所述蛋白质的DNA分子；

(B4)与(B1)-(B3)中任一限定的DNA序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同一性且编码权利要求1所述蛋白质的DNA分子。

4.含有权利要求2或3所述核酸分子的表达盒、重组载体、重组菌或转基因细胞系。

5.权利要求1所述蛋白质或权利要求2或3所述核酸分子或权利要求4所述表达盒、重组载体、重组菌或转基因细胞系在调控植物耐盐碱性中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：在所述植物中，权利要求1所述蛋白质的表达量和/或活性提高，所述植物的耐盐碱性提高。

7.一种培育耐盐碱性提高的植物的方法，包括使受体植物中权利要求1所述蛋白质的表达量和/或活性提高的步骤。

8.一种培育耐盐碱性提高的转基因植物的方法，包括如下步骤：向受体植物中导入能够表达权利要求1所述蛋白质的核酸分子，得到转基因植物；所述转基因植物与所述受体植物相比耐盐碱性提高。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：能够表达权利要求1所述蛋白质的核酸分子是通过重组表达载体导入所述受体植物中的。

10.根据权利要求5-9中任一所述的应用或方法，其特征在于：所述植物为单子叶植物或双子叶植物；

进一步地，所述单子叶植物为禾本科植物；

更进一步地，所述禾本科植物为玉米。