CN110693937A - 黄芪三七组合物作为减轻雷公藤甲素引起的急性肝损伤药物的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中医药技术领域,具体涉及黄芪三七组合物作为减轻雷公藤甲素引起的急性肝损伤药物的用途,其中,黄芪三七组合物由黄芪与三七组成,且黄芪与三七的重量份比为6:1~3:1。本发明采用现有药物来减轻雷公藤甲素引起的急性肝损伤,可以有效防治和缓解临床中需要雷公藤治疗的相关疾病(如:类风湿性关节炎、肾病综合症、白塞氏三联症、麻风反应、自身免疫性肝炎等)在治疗过程中出现的因雷公藤甲素所造成的肝损伤。
Description
技术领域
本发明属于中医药技术领域,具体涉及黄芪三七组合物作为减轻雷公藤甲素引起的急性肝损伤药物的用途。
背景技术
雷公藤二萜化合物雷公藤甲素(TP)是雷公藤的主要活性成分,它具有多项生物活性:抗炎、抗肿瘤和免疫抑制活性,在治疗肿瘤、肾病、银屑病和风湿病等疾病方面非常有潜力。但其毒性也不容小觑,尤其是肝毒性,使其临床应用受到限制,如何减轻及治疗雷公藤甲素引起的肝损伤,是目前急需解决的问题。
现有技术中,周聪等(基于肝毒性的雷公藤复方配伍减毒作用及机制研究[J].中药药理与临床,2013(5):106-109.)、刘蒙竹等(清络通痹方中雷公藤配伍减毒的化学基础研究[J].中国实验方剂学杂志,2014,20(7):107-112.)的研究表明:将三七配伍雷公藤使用能明显改善肝损伤状况,减轻雷公藤肝毒性,对抗雷公藤引起的脂质过氧化损伤,其主要原因可能在于三七水提液呈酸性,能显著减少雷公藤甲素的溶出。
许坡(雷公藤与黄芪配伍中雷公藤指标性成分变化规律的研究[D].合肥:安徽中医药大学,2017:53.)研究的实验结果推测:雷公藤与黄芪混合制备过程中,黄芪中含有的某单一成分或某些成分抑制的存在抑制了雷公藤指标性成分(雷公藤甲素、雷公藤红素等)溶出或合成了新的物质,进而达到了相对减毒的作用。
上述现有技术对雷公藤甲素降毒方式均是将缓解毒性的中药与雷公藤同时配伍服用,通过降低雷公藤甲素溶出率或生成新物质来降低其对肝的损害,旨在降低药物毒性,但对于雷公藤甲素已经引起的急性肝损伤如何用中医药治疗,特别是利用现有药物来治疗,却是一项急需解决的难题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种现有药物用于减轻雷公藤甲素引起的急性肝损伤,特别是黄芪三七组合物的一种新用途,即黄芪三七组合物作为减轻雷公藤甲素引起的急性肝损伤药物的用途,以解决上述问题中的一个或几个。
根据本发明的一个方面,提供了黄芪三七组合物在制备减轻雷公藤甲素引起的急性肝损伤药物中的用途。
具体地,本发明所说的“肝损伤”是指由雷公藤甲素导致血浆中血清谷丙转氨酶显著升高并且使肝脏细胞损伤坏死。
在一些实施方式中,黄芪三七组合物由黄芪与三七组成,且黄芪与三七的重量份比为6:1~3:1。
在一些实施方式中,黄芪三七组合物是由黄芪和三七中提取有效部位复方黄酮与复方皂苷配置而成,其中,复方黄酮与复方皂苷的配伍比为1:4~8。
在一些优选的实施方式中,复方黄酮与复方皂苷的配伍质量份比为1:5~7。将复方黄酮与复方皂苷配伍后,采用口服液现有制备方法制成口服液时,口服液每支以10ml计,含有复方黄酮5~8mg,含有复方皂苷20-56mg。
具体地,复方黄酮按下述方法提取而成:将黄芪和三七加水浸泡提取后过滤得滤液,将滤液浓缩至0.5~1.2g生药/ml,加无水乙醇至含醇量60~80%,静置过夜,倾出上清液,浓缩至0.1~1.0g生药/ml,先后上弱极性大孔吸附树脂柱、聚酰胺树脂柱,所得解析液经减压干燥,即得。其中:
复方黄酮提取过程中,加水浸泡提取的具体步骤为:向黄芪和三七中加两者总重量的8~18倍量水浸泡1~24h,提取1~3次,每次提取1~3h,提取后过滤,将每次滤液合并后使用。
复方黄酮提取过程中,弱极性大孔树脂柱为市售HPD722大孔树脂,上柱吸附2~3次,以0.5-0.6ml/min速度上样,蒸馏水除杂,65-85%乙醇解吸附,收集解析液,旋转蒸发,浓缩至0.1~1.0g生药/ml;然后将浓缩液继续上聚酰胺柱吸附2~3次,以0.5-0.6ml/min速度上样,25-35%乙醇除杂,80-95%乙醇解吸附,收集解析液,减压干燥,即得。
复方皂苷按下述方法提取而成:取黄芪和三七加水浸泡提取后过滤,得提取液,冷存,离心,取上清液,浓缩至0.5~1.2g生药/ml,加入75~95%乙醇至含醇量达60~80%,静置冷藏过夜,离心,倾出上清液,浓缩至0.1~1.0g生药/ml,浓缩液上大孔树脂柱,30-45%乙醇除杂,65-85%乙醇解吸附,流出液减压干燥,即得。其中:
复方皂苷提取过程中,加水浸泡提取的具体步骤为:向黄芪和三七中加两者总重量的8~18倍量水浸泡1~24h,提取1~3次,每次提取1~3h,提取后过滤得提取液,将每次提取液合并后使用;
复方皂苷提取过程中,离心时,以3000~6000r/min离心10~15min;浓缩液上大孔树脂柱吸附2~3次,每次1~2h,流出速度为0.5~0.6mL/min;大孔树脂柱为D101型大孔树脂柱。
在一些实施方式中,药物为胶囊剂、颗粒剂、片剂或口服液。由此,可以根据患者或市场需求,将药物制成不同剂型便于患者服用、携带和保存。
在一些实施方式中,药物为胶囊剂、颗粒剂或片剂时,药物还包括医学上可接受的载体和辅料;其中所用到的载体和辅料均为现有技术中常用载体和辅料,比如要制成胶囊剂时,载体可以为明胶,辅料可以为改性淀粉、乳糖、微晶纤维素等;比如药物为颗粒剂时,辅料可以为淀粉、乳糖、微晶纤维素、甘露醇、糊精、羟丙基纤维素等。
本发明所采用的黄芪三七组合物为广东省中医院院内制剂处方,以前称通脉口服液(后改为三芪口服液),为现有临床使用药物,通常用于治疗慢性肾炎。该方通过益气活血法达到调节机体的免疫能力,增强免疫稳定性,抑制已发生的免疫反应,减轻免疫复合物对肾小球的直接损伤,降低肾小球滤过膜的通透性,改善体内微循环,降低血液高凝状态,并抑制系膜细胞增生和系膜基质的分泌,缓解肾小球纤维、硬化的发生,以达到改善或稳定肾功能的目的。而雷公藤甲素是雷公藤制剂治疗慢性肾脏病的主要成分,其副作用主要是肝损伤、生殖毒性等,因此,申请人在探讨两种药物是否可以协同作用,增强两者治疗慢性肾脏病的疗效过程中,意外发现黄芪三七组合物对雷公藤甲素引起的肝损伤有很好的缓解作用。
本发明的有益效果在于:采用现有药物来减轻雷公藤甲素引起的急性肝损伤,可以有效防治和缓解临床中需要雷公藤治疗的相关疾病(如:类风湿性关节炎、肾病综合症、白塞氏三联症、麻风反应、自身免疫性肝炎等)在治疗过程中出现的因雷公藤甲素所造成的肝损伤。
附图说明
图1为各组血ALT含量,其中*表示与正常组相比p<0.05,#表示与模型组相比p<0.05。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。若无特殊说明,以下化学试剂均为市购。
实施例1
黄芪三七组合物由以重量份计的20克黄芪与6克三七组成,将该组合物制成黄芪三七口服液,采用如下方法制备而得:
(1)取10克黄芪和3克三七,加两者总重量8倍的水浸泡24h,提取2次,每次提取3h,然后过滤取滤液,将每次滤液合并后浓缩至0.5g生药/ml,再将该浓缩物加无水乙醇至含醇量60%,静置,过夜,倾出上清液,浓缩至1.0g生药/ml,上HPD722弱极性大孔树脂柱吸附2次,以0.6ml/min速度上样,蒸馏水除杂,75%乙醇解吸附,收集解析液,旋转蒸发,浓缩至1.0g生药/ml。继续上聚酰胺柱吸附2~3次,以0.6ml/min速度上样,30%乙醇除杂,90%乙醇解吸附,收集解析液,减压干燥,,得到复方黄酮;
(2)取黄芪10克、三七3克,加两者总重量8倍的水浸泡24h,提取2次,每次提取3h,将每次提取液合并,提取液以纱布夹棉花过滤,取滤液置冰箱冷存(0~4℃),然后以6000r/min速度离心10min,取上清液浓缩至1.0g生药/ml,向所得第一浓缩物中加入95%乙醇至含醇量达80%,边加边搅拌,然后静置冷藏(0~4℃)过夜,离心,倾出上清液浓缩至0.5g生药/ml,将所得第二浓缩物上D101型大孔树脂柱,吸附2次,每次2h,流出速度为0.6mL/min,35%乙醇除杂,75%乙醇解吸附,过柱所得产品置于蒸发皿中,水浴蒸干,置于恒温干燥箱中,50℃烘干至恒重,得到复方皂苷;
(3)取7mg复方黄酮与45mg复方皂苷,按现有方法制备成口服液10ml/只。
实施例2
黄芪三七组合物由以重量份计的40克黄芪与10克三七组成,将该组合物制成黄芪三七口服液,采用如下方法制备而得:
(1)取20克黄芪和5克三七,加两者总重量12倍的水浸泡24h,提取2次,每次提取3h,然后过滤取滤液,将每次滤液合并后浓缩至1.0g生药/ml,再将该浓缩物加无水乙醇至含醇量70%,静置,过夜,倾出上清液,浓缩至1.0g生药/ml,上HPD722弱极性大孔树脂柱吸附2次,以0.6ml/min速度上样,蒸馏水除杂,75%乙醇解吸附,收集解析液,旋转蒸发,浓缩至1.0g生药/ml。继续上聚酰胺柱吸附2~3次,以0.6ml/min速度上样,30%乙醇除杂,90%乙醇解吸附,收集解析液,减压干燥,,得到复方黄酮;
(2)取黄芪20克、三七5克,加两者总重量12倍的水浸泡24h,提取2次,每次提取3h,将每次提取液合并,提取液以纱布夹棉花过滤,取滤液置冰箱冷存(0~4℃),然后以5000r/min速度离心10min,取上清液浓缩至1.0g生药/ml,向所得第一浓缩物中加入95%乙醇至含醇量达80%,边加边搅拌,然后静置冷藏(0~4℃)过夜,离心,倾出上清液浓缩至0.5g生药/ml,将所得第二浓缩物上D101型大孔树脂柱,吸附2次,每次2h,流出速度为0.6mL/min,35%乙醇除杂,75%乙醇解吸附,过柱所得产品置于蒸发皿中,水浴蒸干,置于恒温干燥箱中,50℃烘干至恒重,得到复方皂苷;
(3)取8mg复方黄酮与52mg复方皂苷,按现有方法制备成口服液10ml/支。
在其他实施方式中,还可以取5mg复方黄酮、25mg复方皂苷,或6mg复方黄酮、32mg复方皂苷,或7mg复方黄酮、41mg复方皂苷,或6mg复方黄酮、36mg复方皂苷,按现有方法制备成口服液10ml/支。
下面通过动物实验,来说明实施例1制备的黄芪三七组合物以口服液形式服用时,减轻雷公藤甲素引起的急性肝损伤的效果。
一、实验材料
1实验动物
SPF级雄性BALB/c小鼠(体重18-22g,1.5-2月龄),恒温20-25℃、恒湿65-70%、12h昼夜交替光照,标准的饲养条件饲养动物,自由进食饮水,每天更换垫料一次。
2实验药材
本实施例1制备的黄芪三七口服液(简称三芪口服液),雷公藤甲素(Triptolide,T9/TP)购自南狄尔格医药有限公司。
3实验仪器
实验仪器种类、型号以及厂家见表1所示。
表1仪器信息
仪器 | 型号 | 厂家 |
恒温干燥箱 | DHG-9140A | 中国,上海一恒科技有限公司 |
恒温水浴锅 | HH-4 | 中国,常州国华电器有限公司 |
可见分光亮度计 | 722S | 中国,上海菁华科技仪器有限公司 |
电子天平 | BL-220H | 日本,SHIMADZU |
涡旋仪 | HYQ-2121A | 中国,苏州捷美电子有限公司 |
二、实验方法
1、药物溶解方式
使用DMSO将雷公藤甲素制备成储备液,-20℃保存,终浓度≤0.5%。用0.9%生理盐水将T9储备液制备成腹腔注射液。
2、动物的分组给药
将实验动物随机分为3组:空白组、模型组(TP 1.5mg/kg)、三芪口服液干预组(根据临床使用剂量,折算为小鼠剂量12mL/kg),每组10只,共30只小鼠。空白组、模型组给予蒸馏水灌胃,三芪口服液干预组预防性给予三芪口服液连续灌胃7天,最后一次灌胃1h后,模型组、三芪口服液组腹腔注射TP建立急性药物性肝损伤模型,24h后解剖动物。解剖前24h禁食不禁水。
3、动物血清及肝脏标本收集
动物取材时,首先用苯巴比妥钠(45mg/kg)麻醉小鼠,摘眼球取血,将收集到的血液4℃冰箱静置1h后,3000rpm/min离心15min,取血清-80℃保存备用,全自动生化分析仪检测血清谷丙转氨酶(ALT)。
三、实验结果
实验结果如表2所示,数据显示黄芪三七口服液可以减轻雷公藤甲素引起的肝损伤,降低血中ALT水平,下降幅度达50%左右。
表2各组血ALT含量
组别 | ALT含量(单位:U/L) |
正常组 | 8.27±5.57 |
模型组(雷公藤甲素造成的急性肝损伤组) | 75.01±24.11<sup>*</sup> |
三芪口服液干预组 | 34.06±17.47<sup>#</sup> |
注:*表示与正常组相比p<0.05,#表示与模型组相比p<0.05。
Claims (9)
1.黄芪三七组合物在制备减轻雷公藤甲素引起的急性肝损伤药物中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,所述黄芪三七组合物由黄芪与三七组成,且黄芪与三七的重量份比为6:1~3:1。
3.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,所述黄芪三七组合物是由黄芪和三七中提取有效部位复方黄酮与复方皂苷配置而成,所述复方黄酮与复方皂苷的配伍比为1:4~8。
4.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,所述复方黄酮与复方皂苷的配伍比为1:5~7。
5.根据权利要求3所述的用途,其特征在于,所述复方黄酮按下述方法提取而成:将黄芪和三七加水浸泡提取后过滤得滤液,将滤液浓缩至0.5~1.2g生药/ml,加无水乙醇至含醇量60~80%,静置过夜,倾出上清液,上清液先后上弱极性大孔吸附树脂柱、聚酰胺树脂柱,所得解析液经减压干燥,即得。
6.根据权利要求3所述的用途,其特征在于,所述复方皂苷按下述方法提取而成:取黄芪和三七加水浸泡提取后过滤,得提取液,冷存,离心,取上清液,浓缩至0.5~1.2g生药/ml,加入75~95%乙醇至含醇量达60~80%,静置冷藏过夜,离心,倾出上清液,浓缩至0.1~1.0g生药/ml,浓缩液上大孔树脂柱,流出液水浴蒸干,烘干至恒重,即得。
7.根据权利要求5或6所述的用途,其特征在于,取黄芪和三七加水浸泡提取后过滤的具体步骤为:向黄芪和三七中加两者总重量的8~18倍量水浸泡1~24h,提取1~3次,每次提取1~3h,提取后过滤得提取液,将每次提取液合并后使用。
8.根据权利要求1~6任一项所述的用途,其特征在于,所述药物为胶囊剂、颗粒剂、片剂或口服液。
9.根据权利要求7所述的用途,其特征在于,所述药物为胶囊剂、颗粒剂或片剂时,药物还包括医学上可接受的载体和辅料。
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20200117 |
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