CN101822762A - 一种用于治疗痛经的中药复方有效部位及其制备方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种中药复方的有效部位及其制备方法和其应用，该有效部位是由当归、川芎、熟地、白芍、香附、木香和延胡索组成的中药复方的水煎液通过乙醇沉淀去杂，然后上大孔吸附树脂柱，用乙醇梯度洗脱纯化，洗脱液回收溶剂制备得到。本发明根据中医药理论和痛经发病机制选取原料配伍组方，通过药理实验表明，本发明提供的中药复方有效部位具有很好的抗凝血，防治血瘀形成的作用，且成分更清楚，不良反应更低，有望开发成为新一代治疗痛经的药物。

Description

一种用于治疗痛经的中药复方有效部位及其制备方法与应用

技术领域

本发明涉及一种中药复方，具体涉及一种中药复方的有效部位及其制备方法和其在制备治疗痛经药物中的应用。

背景技术：

痛经为妇科最常见的症状之一，约有75％的妇女发生痛经。痛经分为原发性和继发性两大类；原发性痛经是指月经前及行经期间，下腹及腰部痉挛性疼痛，严重时伴有恶心、呕吐、肢冷，多由寒凝血瘀所致，尤其多见于未婚青年妇女。流行病学研究表原发性痛经是目前妇科最常见疾病，国外报道妇女原发性痛经的比例高达43％～90％，国内报道痛经发病率为33.1％，其中原发性痛经占53.2％，中医药治疗妇科疾病有悠久的历史，其治则为发时攻邪治标，未发之时扶正治本，从目前临床原发性痛经治疗来看，以辨证辨病结合，中医药愈加显现其独特的治疗优势，但目前治疗痛经的复方药物多存在使用不便、用药量大、成分复杂、有效部位不明确，复方中起疗效的物质基础不清楚，并存在一定的不良反应等问题，因此很有必要在中医药理论的指导下开发出一种有效物质明确、疗效确切，副作用小、服用方便的治疗痛经的药物。

发明内容：

发明目的：本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种有效成分明确、疗效好、副作用小、服用方便的中药复方的有效部位，本发明另一个目的是提供该中药复方的有效部位的制备方法和其在制备治疗原发性痛经药物中的应用。

技术方案：为了实现以上目的，本发明提供的中药复方的有效部位，它是通过以下方法制备得到的，取由16～20份当归、8～12份川芎、22～26份熟地、8～12份白芍、8～12份香附、5～9份木香、8～12份延胡索组成的中药复方，加入总药材6～10倍量的水煎煮1～3次，合并水煎液在20～70℃减压浓缩得浓缩液，再加入乙醇，使乙醇的浓度达到50～85％，沉淀，分离上清液，浓缩，得浓缩物上大孔吸附树脂柱，用浓度10％至60％的乙醇梯度洗脱，洗脱液回收溶剂，得有效部位。

作为优选方案，通过高效液相色谱测定，以上所述的有效部位中含有重量百分比5～20％的芍药内酯苷，2～15％的芍药苷和0.5～5％的阿魏酸。

作为优选方案，所述的中药复方由18份当归、9份川芎、24份熟地、9份白芍、9份香附、6份木香、9份延胡索组成。

作为优选方案，以上所述的大孔吸附树脂优选D101型大孔吸附树脂。

本发明在前期对古今治疗痛经方剂进行筛选，在中医药理论的指导下，辨证施治，结合痛经的发病机理和发病症状，以活血化瘀为治疗依据进行筛选处方，确定以当归、川芎、白芍、熟地配伍活血祛瘀药香附、木香、延胡索组成七味中药进行组方，整方具有活血化瘀、养血补血的双重功效，主用于妇科血虚血瘀病症，方中当归补血活血，调经止痛；熟地黄滋阴补血，益精填髓；白芍养血柔肝，缓急止痛；川芎活血祛瘀，行气止痛，四药相配，动静结合，滋而不腻，温而不燥，补而不滞，刚柔相济，阴阳调和，营血得生，共奏补血和血之功，再配伍香附、木香、延胡索，使组方补血而不留瘀，行血而不伤血，增加补气行气之功，主治经脉气血凝滞而痛胀者。本发明在中医药辨证施治的指导下组方，并根据组方药味的理化性质特点，对整方的提取物通过现代分离纯化手段进行去粗存精，根据药理筛选结果表明，所得的有效部位活性成分更明确，活血化瘀作用强，不良反应更低。

本发明提供的制备中药复方的有效部位的方法，其包括以下步骤：

(1)取由16～20份当归、8～12份川芎、22～26份熟地、8～12份白芍、8～12份香附、5～9份木香、8～12份延胡索组成的中药复方，加入总药材6～10倍量的水煎煮1～3次，合并水煎液在20～70℃减压浓缩得浓缩液；

(2)取步骤(1)得到的浓缩液加入乙醇，使乙醇的浓度达到50～85％，沉淀，分离上清液，浓缩，得浓缩物；

(3)取步骤(2)得到的浓缩物上大孔吸附树脂柱，用浓度10％至60％的乙醇梯度洗脱，洗脱液回收溶剂，得有效部位。

作为优选方案，以上所述的中药复方的有效部位的制备方法，步骤(1)浓缩后使浓缩液的浓度为每mL药液含生药1g。

并且步骤(2)中加入高浓度的乙醇，使乙醇的浓度达到85％进行沉淀，此操作的目的是加入乙醇使溶液中乙醇的浓度达到85％，放置，进行沉淀，可以沉淀去除大量极性大的大分子化合物，有利于后续的分离纯化工艺，提高纯化效率。

并且步骤(3)中所用到的大孔吸附树脂优选D101型大孔吸附树脂，通过对不同极性和不同型号树脂进行吸附和纯化能力的筛选，确定低极性且型号为D101的大孔吸附树脂吸附和纯化效果做好，同时本发明对不同浓度乙醇的洗脱能力进行了优选，以总洗脱物得率和芍药内酯苷、芍药苷和阿魏酸的含量作为指标，确定浓度为10％至60％的乙醇的洗脱物总含量高，且芍药内酯苷、芍药苷和阿魏酸等有效成分含量高、杂质少，确定浓度10％至60％的乙醇为最佳的梯度洗脱溶剂。

本发明提供的中药复方的有效部位在制备治疗痛经药物中的应用；作为优选方案，把中药复方的有效部位和药学上可接受的载体制成胶囊剂、喷雾剂、注射剂、微囊、片剂、软膏剂或透皮控释贴剂剂型的药物。

本发明提供的中药复方的有效部位在制成片剂时把中药复方的有效部位和载体乳糖或玉米淀粉，需要时加入润滑剂硬脂酸镁，混合均匀，然后压片制成片剂。本发明提供的中药复方的有效部位制成胶囊剂时把中药复方的有效部位和载体乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，然后装胶囊制成胶囊剂。本发明提供的中药复方的有效部位制成颗粒剂时，把中药复方的有效部位和稀释剂乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，干燥，制成颗粒剂。

有益效果：本发明提供的中药复方的有效部位和现有技术相比具有以下优点：

(1)本发明提供的中药复方的有效部位，根据中医药理论和痛经的发病机制选取原料配伍组方，各组份配比科学合理，并根据组方各药味化学成分的性质特点，对整方进行提取，并对提取物通过现代分离纯化手段进行去粗存精，根据药理筛选结果表明，所得的有效部位活性成分更明确、具有很好的活血化瘀、止痛作用，且长期使用无不良反应，且本发明提供的中药复方的有效部位可以方便的和药学上可接受的载体制备成各种剂型的药物，方便临床服用。

(2)本发明提供的中药复方的有效部位的制备方法，可操作性强，提取和分离纯化效率高，且制备方法成本低、环保、可实现工业化大生产。

具体实施方式：

根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。

实施例1中药复方有效部位的制备

取由90克当归、45克川芎、120克熟地、45克白芍、45克香附、30克木香、45克延胡索组成的中药复方共420克，浸泡2h后煎煮，第一次加入总药材10倍量的水煎煮3小时，第二次加入总药材8倍量的水煎煮2小时，合并水煎液在50℃减压浓缩得浓度为1g生药/mL的浓缩液420ml，再加入浓度为95％的乙醇，使浓缩液中乙醇的浓度达到85％，静置沉淀，分离上清液，浓缩，得浓缩物上D101型大孔吸附树脂柱，用浓度10％至60％的乙醇梯度洗脱，洗脱液回收溶剂，得有效部位5.5克，通过高效液相色谱确定其中有效部位中含有0.5克芍药内酯苷、0.3克芍药苷和0.15克阿魏酸。

实施例2中药复方有效部位的制备

取由200克当归、100克川芎、240克熟地、90克白芍、90克香附、60克木香、90克延胡索组成的中药复方共870克，浸泡2h后煎煮，第一次加入总药材8倍量的水煎煮3小时，第二次加入总药材6倍量的水煎煮2小时，合并水煎液在60℃减压浓缩得浓度为1g生药/mL的浓缩液870ml，再加入浓度为95％的乙醇，使浓缩液中乙醇的浓度达到80％，静置沉淀，分离上清液，浓缩，得浓缩物上D101型大孔吸附树脂柱，用浓度10％至60％的乙醇梯度洗脱，洗脱液回收溶剂，得有效部位10.2克，通过高效液相色谱确定其中有效部位中含有1.8克芍药内酯苷、0.6克芍药苷和0.4克阿魏酸。

取以上制备得到的有效部位10g，加入药用淀粉16g，混合均匀，加水制成软材，过20目筛制粒，干燥，制成颗粒，装入胶囊，每粒0.2g，或者取有效部位10g玉米淀粉20g，加入润滑剂硬脂酸镁5g，混合均匀，然后压片制成片剂。

实施例3中药复方有效部位的制备

取由200克当归、120克川芎、260克熟地、120克白芍、120克香附、90克木香、120克延胡索组成的中药复方共1030克，浸泡2h后煎煮，第一次加入总药材8倍量的水煎煮3小时，第二次加入总药材6倍量的水煎煮2小时，合并水煎液在50℃减压浓缩得浓度为1g生药/mL的浓缩液1030ml，再加入浓度为95％的乙醇，使浓缩液中乙醇的浓度达到80％，静置沉淀，分离上清液，浓缩，得浓缩物上D101型大孔吸附树脂柱，用浓度10％至60％的乙醇梯度洗脱，洗脱液回收溶剂，得有效部位16.8克，通过高效液相色谱确定其中有效部位中含有2.8克芍药内酯苷、1.6克芍药苷和0.8克阿魏酸。

取以上制备得到的有效部位15g，加入药用淀粉30g，混合均匀，加水制成软材，过20目筛制粒，干燥，制成颗粒，装入胶囊，每粒0.2g，或者取有效部位15g玉米淀粉30g，加入润滑剂硬脂酸镁6g，混合均匀，然后压片制成片剂。

实施例4中药复方有效部位的制备

取由180克当归、90克川芎、240克熟地、90克白芍、90克香附、60克木香、90克延胡索组成的中药复方共840克，浸泡2h后煎煮，第一次加入总药材10倍量的水煎煮3小时，第二次加入总药材6倍量的水煎煮2小时，合并水煎液在50℃减压浓缩得浓度为1g生药/mL的浓缩液840ml，再加入浓度为95％的乙醇，使浓缩液中乙醇的浓度达到85％，静置沉淀，分离上清液，浓缩，得浓缩物上D101型大孔吸附树脂柱，用浓度10％至60％的乙醇梯度洗脱，洗脱液回收溶剂，得有效部位11.5克，通过高效液相色谱确定其中有效部位中含有2.1克芍药内酯苷、0.75克芍药苷和0.51克阿魏酸。

实施例5中药复方有效部位对急性血瘀模型大鼠血液流变性及卵巢功能影响的实验研究

实验方法：选用健康清洁级SD雌性大鼠32只，适应性饲养1周后，按随机数字表法将其分为正常对照组、模型对照组、中药复方水煎液组、中药复方有效部位组，每组8只。正常对照组常规饲养，中药复方水煎液组和有效部位组每天按30.24g生药·kg^-1剂量(相当于临床成人剂量的8倍)灌胃给药4mL/只，模型对照组每天给予同体积生理盐水，连续7天。于第7天皮下注射肾上腺素注射液0.08mL/100g体重共2次，两次间隔4小时，在二次注射肾上腺素注射液之间(前后各间隔2小时)将大鼠浸入冰水(0～2℃)内5分钟，处置后停食，制备成寒凝血瘀模型大鼠，第二天早晨取大鼠在10％水合氯醛麻醉下，颈动脉插管取血，以枸橼酸钠(109mmol/L)1∶9抗凝，使用LG-R80电脑血液黏度测试仪(北京世帝科学仪器公司)测定全血黏度和血浆黏度，用温氏管法测定血沉、血球压积。血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)和纤维蛋白原(FIB)的测定按照试剂盒说明书严格进行。并采用SPSS16.0统计软件统计分析，所有数据以

表示，组间均数比较采用t检验，具体实验结果如表1至表3所示。

表1中药复方有效部位对模型大鼠全血黏度的影响结果(n＝8)

注：各组与模型对照组比较，^***p＜0.001，^**p＜0.01，^*p＜0.05。

通过表1实验结果表明，与模型组和中药复方水煎液组相比本发明提供的中药复方有效部位能够显著降低寒凝血瘀病理模型大鼠的全血黏度，从而可以起到防治血瘀形成的作用。

表2中药复方有效部位对模型大鼠血浆黏度、血沉、红细胞压积的影响结果(

n＝8)

通过表2实验结果表明，与模型组和中药复方水煎液组相比本发明提供的中药复方有效部位能够显著降低寒凝血瘀病理模型大鼠的血浆黏度，并能够有效使模型大鼠的血沉和红细胞压积值恢复到正常值，从而可以起到保持血流正常，防治血瘀形成的作用。

表3中药复方有效部位对对寒凝血瘀大鼠血浆凝血四项的影响(

n＝8)

通过表3实验结果表明，与模型组相比本发明提供的中药复方有效部位能够显著降低寒凝血瘀病理模型大鼠的血浆凝血因素中纤维蛋白原(FIB)的含量，并且中药复方有效部位组的血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血酶时间(TT)均低于模型组接近正常组，说明本发明提供的中药复方有效部位的抗凝血、抗血栓作用强，同时通过比较发现中药复方经过分离纯化得到的有效部位和原来中药复方水煎液相比具有更好的抗凝血、防治血瘀形成的作用，可以用于寒凝血瘀导致的痛经疾病的治疗。

实施例6中药复方有效部位对家兔体外血浆凝血酶时间(TT)影响的实验研究

实验方法：取新西兰白兔，雄性，5只，禁食8h后，用戊巴比妥钠麻醉，颈动脉取血，用3.8％枸橼酸钠(血与抗凝剂体积比为9∶1)抗凝收集于塑料离心管中，以3000r·min^-1离心10min，吸取上层溶液，制备成待测血浆，以5％DMSO作为空白对照，以中药复方水煎液作为对照组，在测试杯每个道中加入10μL不同浓度的中药复方有效部位提取物，空白对照组加入等量的溶解样品的5％DMSO，再加待测血浆50μL，37℃预温3min后，加入0.1mol·L^-1pH 7.4Tris-HCl缓冲液稀释的15U·mL^-1凝血酶溶液50μL。用LG-PABER-I型血小板聚集凝血因子分析仪测定凝血时间，并以[(给药组凝血时间-对照组凝血时间)/对照组凝血时间]×100％计算药物的凝血时间延长率。具体实验结果如表4所示。

表4中药复方有效部位对家兔体外血浆凝血酶时间(TT)的影响(

n＝8)

注：^*与空白对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

通过表4实验结果表明，本发明提供的中药复方有效部位能够显著延长家兔体外血浆凝血酶时间，具有统计学意义，并且通过比较发现中药复方经过分离纯化得到的有效部位和原来中药复方水煎液相比具有更好的延长家兔体外血浆凝血酶时间的作用，进一步表明本发明提供的有效部位活性更强，临床上用药更少更安全。

实施例7中药复方有效部位镇痛实验

1、小鼠原发性痛经试验

(1)小鼠原发性痛经模型的制备与实验

选用KM种雌性、体重18-22g的雌性小鼠，随机分组，以雌激素和缩宫素联合复制原发性痛经模型。以0.01mg·g^-1·d^-1给小鼠连续sc苯甲酸雌二醇8d，使小鼠子宫同步化，第8天，ip缩宫素0.01mL·g^-1，制造小鼠原发性痛经动物模型。

检测指标：扭体反应。

给药方法：将小鼠随机分成模型对照组、阳性药物对照组(西乐葆)、原中药复方水煎液组，有效部位组。正常对照组、模型对照组给予等容积生理盐水，阳性药物对照组给予西乐葆0.0411mg·g^-1·d^-1，原中药复方水煎液组和有效部位组给药37.0g生药/kg，各组小鼠每组10只。按上述方法复制原发性痛经模型。从第6天起，每日上午腹腔注射苯甲酸雌二醇，下午正常对照组给予生理盐水0.4mL/只，其余各组灌胃相应药物。连续3d，于末次给药后60min，ip缩宫素0.2mL/只，记录注射后20min内小鼠扭体次数及扭体反应抑制率。

(2)实验结果与分析

由表5实验结果表明，和模型组和原中药复方水煎液组相比，本发明提供的中药复方有效部位具有显著的抑制小鼠扭体反应的作用(P＜0.05或P＜0.01)；抑制率均在50％以上，结果表明本发明提供的中药复方有效部位具有很好的镇痛作用。

表5中药复方有效部位对原发性痛经模型小鼠扭体的抑制作用

组别	剂量(g/Kg)	扭体次数	扭体动物数	扭体发生抑制率(％)
					对照组	等体积生理盐水	0	0	-
模型组	等体积生理盐水	9.3±6.5	10	-
					西乐葆组	0.0411	4.73+3.87**	8	51.5

组别	剂量(g/Kg)	扭体次数	扭体动物数	扭体发生抑制率(％)
					中药复方水煎液组	37.0	4.89±2.9	8	50.8
有效部位组	37.0	2.5±2.3**	5	73.1

与模型组相比较，^*P＜0.05；^**P＜0.01

本发明根据中医药理论辨证施治，根据痛经的发病机理，进行科学组方，并采用优选的提取纯化方法制备得到有效部位，经实验结果表明本发明提供的中药复方的有效部位具有很好的抗凝血、抗血栓作用，能够有效抑制血瘀形成，从而起到很好的防治痛经的作用，并且由于去掉了大量非活性物质，有效部位中有效成分更清楚，含量更高，临床上用药更少更安全，不良反应更低，因此本发明提供的中药复方的有效部位有望开发成为新一代防治痛经的药物。

以上实施方式只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人了解本发明内容并加以实施，并不能以此限制本发明的保护范围，凡根据本发明精神实质所做的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims (10)

1.一种中药复方的有效部位，其特征在于，它是通过以下方法制备得到的，取由16～20份当归、8～12份川芎、22～26份熟地、8～12份白芍、8～12份香附、5～9份木香、8～12份延胡索组成的中药复方，加入总药材6～10倍量的水煎煮1～3次，合并水煎液在20～70℃减压浓缩得浓缩液，再加入乙醇，使乙醇的浓度达到50～85％，沉淀，分离上清液，浓缩，得浓缩物上大孔吸附树脂柱，用浓度10％至60％的乙醇梯度洗脱，洗脱液回收溶剂，得有效部位。

2.根据权利要求1所述的中药复方的有效部位，其特征在于，所述的有效部位中含有重量百分比5～20％的芍药内酯苷，2～15％的芍药苷和0.5～5％的阿魏酸。

3.根据权利要求1或2所述的中药复方的有效部位，其特征在于，所述的中药复方由18份当归、9份川芎、24份熟地、9份白芍、9份香附、6份木香、9份延胡索组成。

4.根据权利要求3所述的中药复方的有效部位，其特征在于，所述的大孔吸附树脂为D101型大孔吸附树脂。

5.一种制备权利要求1所述的中药复方的有效部位的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)取由16～20份当归、8～12份川芎、22～26份熟地、8～12份白芍、8～12份香附、5～9份木香、8～12份延胡索组成的中药复方，加入总药材6～10倍量的水煎煮1～3次，合并水煎液在20～70℃减压浓缩得浓缩液；

(2)取步骤(1)得到的浓缩液加入乙醇，使乙醇的浓度达到50～85％，沉淀，分离上清液，浓缩，得浓缩物；

(3)取步骤(2)得到的浓缩物上大孔吸附树脂柱，用浓度10％至60％的乙醇梯度洗脱，洗脱液回收溶剂，得有效部位。

6.根据权利要求5所述的中药复方的有效部位的制备方法，其特征在于，步骤(1)中得到的浓缩液的浓度为每mL药液含生药1g。

7.根据权利要求5所述的中药复方的有效部位的制备方法，其特征在于，步骤(2)中加入乙醇，使乙醇的浓度达到85％进行沉淀。

8.根据权利要求5所述的中药复方的有效部位的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述的大孔吸附树脂为D101型大孔吸附树脂。

9.权利要求1或2所述的中药复方的有效部位在制备治疗痛经药物中的应用。

10.根据权利要求9所述的中药复方的有效部位在制备治疗痛经药物中的应用，其特征在于把中药复方有效部位和药学上可接受的载体制成胶囊剂、喷雾剂、注射剂、微囊、片剂、软膏剂或透皮控释贴剂剂型的药物。