具体实施方式
本发明的中药提取物、中药组合物或药物是针对脑损伤和/或脑水肿设立的系统治疗方药,其由中药有效成分黄芩苷、栀子苷和三七总皂苷或含有这三种有效成分的中药提取物组成,注重于减轻脑部及全身炎症反应。
本发明的中药提取物由包括以下中药的原料制成:黄芩5-120重量份、栀子5-120重量份、三七5-120重量份。
在一个实施方案中,本发明的中药提取物通过如下的方法制成,该方法包括以下步骤:
1)将黄芩药材用水提取提取三次,第一次以黄芩药材重量10倍量的沸水烫过煎煮1~2小时,第二、三次分别加8倍量水进行煎煮、每次1~2小时,合并煎液,滤过,将滤液于80℃调节pH值至2保温1小时,静置12小时,滤取沉淀,用水洗至pH5.0,继用70%乙醇洗涤至pH7.0,低温干燥;
2)将三七和栀子粉碎,用的水或者10-70%乙醇加热提取1~2h,过滤得澄清提取液;将澄清提取液通过大孔吸附树脂的树脂柱吸附,水洗涤,10-95%的乙醇溶液解吸;解吸液经减压浓缩、真空干燥,即得;
3)将步骤1)和步骤2)中获得的产物混合。
本发明的中药组合物包含以下的有效组分:黄芩苷5-120重量份,优选5-30重量份;栀子苷15-120重量份,优选15-60重量份;三七总皂苷5-120重量份,优选5-30重量份。
本发明中提到的黄芩苷(Baicalin)是指从黄芩根中提取分离出来的一种黄酮类化合物,具有显著的生物活性,具有抑菌、利尿、抗炎、抗变态及解痉作用,并且具有较强的抗癌反应等生理效能。黄芩苷还能吸收紫外线,清除氧自由基,又能抑制黑色素的生成,因此既可用于医药,也可用于化妆品,是一种很好的功能性美容化妆品原料(按照药典要求,本发明中使用的黄芩苷达到纯度85%以上)。
本发明中提到的栀子苷(geniposide)从茜草科植物栀子的干燥成熟果实中提取精制而成,为环烯醚萜苷类化合物,是用于治疗心脑血管、肝胆等疾病及糖尿病的原料药物(本发明中使用的栀子苷达到纯度91%以上)。
本发明中提到的三七总皂苷(Panax Notoginsenosides)是从三七提取的活性有效成份。其作用是活血祛瘀,通脉活络,具有抑制血小板聚集和增加脑血流量的作用,用于脑血管后遗症,视网膜中央静脉阻塞,眼前房出血等。三七总皂苷的主要成份为:人参皂苷Rbl、人参皂苷Rgl、三七皂苷R1、人参皂苷Re和人参皂苷Rd(本发明中使用的三七总皂苷中这五种成分共占85%以上)。
在一个优选实施方案中,本发明的中药组合物中的黄芩苷、栀子苷和三七总皂苷三种有效组分的配比为1~5∶5~15∶3~10,优选1∶12∶6。
本发明的中药提取物或中药组合物可进一步分别与一种或多种辅料、赋形剂、稀释剂、溶剂、稳定剂、崩解剂、调味剂、着色剂、PH调节剂、分散剂、等渗剂和/或其他添加剂等药用载体制成适当的药物剂型。在制备包括本发明的药物的剂型过程中,本发明的中药提取物或中药组合物通常与一种或多种药用载体通过常规的混合、溶解、制粒、制锭研磨、乳化、封装、包埋或冻干等工艺进行制备,本发明的有效成分(中药组合物或中药提取物)稀释或包封在其中(见Remington′s Pharmaceutical Sciences,第十五版,Hoover,J.E主编,Mack Publishing Co.(2003))。
上述剂型可采取任何合适的给药方式,该方式包括局部、经眼、经口、全身、经鼻、注射、透皮、直肠、阴道等途径,或吸入或吹入给药的形式。
对于局部给药,本发明的药物可制成溶液、凝胶、油膏、乳膏、悬浮液等。
全身制剂包括通过注射给药,例如皮下、静脉内、肌肉内、鞘内或腹膜内注射的剂型,以及用于透皮、透粘膜口腔或肺部给药的剂型。
可注射剂型包括本发明的药物在水性或油性媒介中的无菌悬浮液、溶液或乳液。所述剂型还可含有悬浮剂、稳定剂和/或分散剂等。注射剂型可以单位剂型提供,例如,在安瓿中或多次剂量容器中,可含有防腐剂。
可注射剂型也可选择粉末的形式,在使用前使用合适的媒介物,包括但不限于无菌无热源水、缓冲液、葡萄糖溶液等重新配制。可注射剂型可通过直接静脉内注射、静脉快速滴注给药,或通过加入输注溶液如0.9%氯化钠注射液或其他相容的输注溶液进行输注给药。
对于口服给药,本发明的药物可使用药用赋形剂和/或添加剂通过常规的方式制备成例如锭剂、片剂或胶囊的剂型。用于口服给药的液体剂型可采取例如酏剂、溶液、糖浆剂或悬液的形式,或可以是粉末,在使用前使用水或其他合适的媒介物进行配制。这种液体剂型可通过常规的方式使用药用添加剂来进行制备。
口服给药制剂可被配制成为可控释放剂型,其制备工艺和方法在本领域中是公知的
本发明的药物剂型优选为口服剂型或胃肠外剂型。口服剂型包括片剂、胶囊、锭剂、酏剂、糖浆剂、混悬剂和散剂等,优选片剂和胶囊剂型。胃肠外剂型包括可注射剂型、栓剂和喷雾剂,优选注射针剂、冻干粉针剂和注射液等。
本发明的中药提取物、中药组合物或药物可以用于治疗脑损伤和/或脑水肿。在优选的实施方案中,本发明的中药提取物、中药组合物或药物可以用于由脑血管疾病、颅内感染、颅脑外伤、颅脑占位性疾病或中毒等疾病引起的脑损伤和/或脑水肿,其中脑水肿可以是缺血性脑水肿和/或感染性脑水肿。
以下通过实施例对本发明做进一步说明。实施例仅用来说明本发明的实施方法和效果,并不以任何形式限制本发明。下面实施例中所提及的中药、原料、赋形剂、稀释剂、辅料、试剂或其他药物等,除非另外指明,均是市售产品。如未具体说明,则其中提到的物质的“%”为重量%,“份”为重量份。
[制备实施例]
制备实施例1含本发明中药组合物(有效成分)的胶囊剂
原料配比:
黄芩苷 50g(自制,达到纯度85%以上)
栀子苷 300g(自制,达到纯度91%以上)
三七总皂苷300g(自制,人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、
三七皂苷R1、人参皂苷Re和人参皂苷Rd共占85%以上)
混合上述成分并根据常规胶囊制备方法用该混合物填充明胶软胶囊,由此制备胶囊剂。
制备实施例2含本发明中药组合物(有效成分)的散剂
原料配比:
采用等量递加法将上述成分混合均匀,并分装制备散剂。
制备实施例3含本发明中药组合物(有效成分)的片剂
原料配比:
混合上述成分并根据常规片剂制备方法压片,由此制成片剂。
制备实施例4含本发明中药组合物(有效成分)的注射粉针剂型
原料配比:
黄芩苷 50g(市售)
栀子苷 400g(自制,同上)
三七总皂苷100g(市售)
按照常规注射粉针剂型配制方法(按照药监局批复的具有批准文号和GMP证书的药厂产品)将上述原料投料,调节pH值7.2~7.4,静置12小时以上,活性炭除热原,超滤,分装,冻干,检测合格即得。
制备实施例5含本发明中药组合物(有效成分)的注射液
原料配比:
黄芩苷 100g(市售)
栀子苷 1200g(自制,同上)
三七总皂苷600g(市售)
将上述原料混合,加入注射用水至400mL,搅匀,冷藏,滤过,滤液加注射用水至总体积1000mL,调节药液pH值至7.5,滤过,灌封,灭菌,即得。
制备实施例6本发明中药提取物的制备方法1
黄芩药材1kg,水提取提取三次,第一次以10倍量沸水烫过煎煮2小时,第二、三次分别加8倍量水进行煎煮、每次1小时,合并煎液,滤过,滤液加2mol/L盐酸(80℃)调节pH值至2保温1小时,静置12小时,滤取沉淀,用水洗至pH5.0,继用70%乙醇洗涤至pH7.0,低温干燥。
将三七1kg、栀子1kg粉碎,用水或者70%乙醇加热提取4h,过滤得澄清提取液;将澄清提取液通过大孔吸附树脂的树脂柱吸附,水洗涤,10-95%的乙醇溶液解吸;解吸液经减压浓缩、真空干燥。
将上面获得的产物混合即得。
制备实施例7本发明中药提取物的制备方法2
黄芩药材1kg,水提取提取三次,第一次以10倍量沸水烫过煎煮2小时,第二、三次分别加8倍量水进行煎煮、每次1小时,合并煎液,滤过,滤液加2mol/L盐酸(80℃)调节pH值至2保温1小时,静置12小时,滤取沉淀,用水洗至pH5.0,继用70%乙醇洗涤至pH7.0,低温干燥。
将三七1kg粉碎,用水加热提取4h,过滤得澄清水溶液;将澄清水溶液通过大孔吸附树脂的树脂柱吸附,水洗涤,10-95%的乙醇溶液解吸;解吸液经减压浓缩、真空干燥,即得白色产品。
栀子1kg 醇回流法或者水煎法。浸出物通过AB-8大孔吸附树脂法分离,采用3倍水量洗脱,再以30%的乙醇洗脱,解吸液经减压浓缩、真空干燥,得到有效成分栀子苷。
根据实测含量,按照处方:黄芩苷5mg,栀子苷60mg,三七总皂苷30mg比例投入上述提取物,加乙醇润湿,用30目药筛制粒,湿颗粒置60℃鼓风干燥箱中干燥,用20目筛整粒,装填胶囊,即得。
[试验实施例]
试验实施例1各有效组分的量效关系
1.1黄芩苷对脑缺血再灌注损伤的影响
参照Longa等方法经颈总动脉插入尼龙线栓制备大鼠局灶性脑缺血模型,1.5h拔出线栓形成再灌注,同时经静脉给予相应的实验药物。与模型组相比,阳性药尼莫地平可明显减少缺血面积百分比及脑指数(P<0.05),黄芩苷15mg/ml可明显减少缺血面积百分比及脑指数(P<0.05),黄芩苷60mg/ml可显著减少脑指数(P<0.01),黄芩苷120mg/ml可明显减少缺血面积百分比及脑指数(P<0.05)。
表1黄芩苷对脑缺血再灌注损伤的影响
注:与模型组比较:*P<0.05,**P<0.01
1.2栀子苷对脑缺血再灌注损伤的影响
造模方法同上。与模型组相比,阳性药尼莫地平可明显减少缺血面积百分比及脑指数(P<0.05),栀子苷30mg/ml可明显减少缺血面积百分比(P<0.05),栀子苷60mg/ml可显著减少缺血面积百分比及脑指数(P<0.01,P<0.05),栀子苷120mg/ml可明显减少脑指数(P<0.05)。
注:与模型组比较:*P<0.05,**P<0.01
1.3三七总皂苷对脑缺血再灌注损伤的影响
造模方法同上。与模型组相比,阳性药尼莫地平可明显减少缺血面积百分比及脑指数(P<0.05),三七总皂苷5mg/ml可明显减少脑指数(P<0.05),三七总皂苷15mg/ml可显著减少缺血面积百分比(P<0.05),三七总皂苷30mg/ml可明显减少缺血面积百分比及脑指数(P<0.05),三七总皂苷60mg/ml可明显减少脑指数(P<0.05),三七总皂苷120mg/ml可明显减少缺血面积百分比及脑指数(P<0.05,P<0.01)。
注:与模型组比较:*P<0.05,**P<0.01
试验实施例2有效组分配伍对脑缺血再灌注损伤的影响
根据黄芩苷、栀子苷、三七总皂苷量效关系筛选的结果,设计黄芩苷水平分别为30,15,5,0;栀子苷水平分别为60,30,15,0;三七总皂苷水平分别为30,15,5,0,形成三因素、四水平,进行正交实验设计。选用表头L1645,第一、二、三列分别设为黄芩苷、栀子苷、三七总皂苷,第四、五列为空白列,不考虑交互作用,共16次实验。实验结果见表4。
表4有效组分配伍对脑缺血再灌注损伤缺血面积和脑指数的影响
对缺血面积与脑指数结果进行方差分析,确定黄芩苷、栀子苷、三七总皂苷最佳配比为5,60,30mg/kg体重。
试验实施例3有效组分配伍对缺氧-复氧损伤培养大鼠脑血管内皮细胞的影响
培养大鼠脑血管内皮细胞,并建立缺氧-复氧损伤模型,设计黄芩苷水平分别为30,15,5,0;栀子苷水平分别为60,30,15,0;三七总皂苷水平分别为30,15,5,0,共进行64组完全实验,采用MTT法测定细胞活力,在酶标仪上检测波长490nm检测每孔光密度值(OD)。实验结果显示,除栀子苷与三七总皂苷交互效应不显著外,其余组合的交互效应均显著;由细胞实验得到最优配比为黄芩苷15,栀子苷30,三七总皂苷30mg/kg体重。
[药效学实验]
实验用药:上面制备实施例5制备的注射液(以下称为本发明药物);
对照药:
尼立苏(英文名:Nimodipine,正式品名:尼莫地平注射液,山东新华制药股份有限公司生产);
必存(英文名:Edaravone,正式品名:依达拉奉注射液,南京先声东元制药有限公司生产);
清开灵注射液(北京中医药大学药厂生产);
20%甘露醇注射液(英文名:Mannitol,北京双鹤药业股份有限公司生产);
地塞米松磷酸钠注射液(英文名:Dexamethasone Sodium Phosphate,天津金耀氨基酸有限公司生产)。
药效学实验1对脑缺血再灌注损伤的影响
1.1神经行为学评分
参照Longa[a]等方法经颈总动脉插入尼龙线栓制备大鼠局灶性脑缺血模型,1.5h拔出线栓形成再灌注,同时经静脉给予相应的实验药物。给药2h后,与模型组比较,阳性药依达拉奉可明显改善受损的神经功能(P<0.05);本发明药物7.8及95mg/kg剂量组(所述剂量为三种有效成分的混合总量,按照黄芩苷∶栀子苷∶三七总皂苷=1∶12∶6计算)神经行为评分明显降低(P<0.05)。给药24h后,与模型组比较,阳性药物尼莫地平及依达拉奉均可明显降低神经行为评分(P<0.05,P<0.01);本发明药物7.8及95mg/kg剂量组神经行为评分明显降低(P<0.05,P<0.01)。结果见表5。
注:与模型组比较:*P<0.05,**P<0.01
1.2缺血区面积百分比(%)与脑指数(脑重/体重×100%)
造模24h后,与模型组比较,阳性药尼莫地平和依达拉奉可明显减小缺血区面积百分比(P<0.05),本发明药物15.6、31.3、42.5、95mg/kg剂量组可显著减小缺血区面积百分比(P<0.01),95mg/kg剂量组还可显著降低脑指数(P<0.01)。结果见表6。
注:与模型组比较:*P<0.05,**P<0.01
a Longa EZ,Weinstein PR,Carlson S,et al.Reversable middle cerebral arteryocclusion with out cranietomy in rats[J].Stroke,1989,20(1):84~91
药效学实验2对LPS致感染性脑水肿的影响
2.1对脑含水量(%)、依文思蓝(EB)含量、体温的影响[b]
采用颈总动脉注射脂多糖(LPS)方法制备感染性脑水肿模型,同时经静脉给予相应的实验药物。造模6h后,与空白组相比,模型组大鼠脑含水量、脑内EB含量及体温明显增高(P<0.01)。经静脉给予药物后,阳性药物清开灵可显著降低脑内EB含量(P<0.01),甘露醇可显著降低脑含水量及脑内EB含量(P<0.01,P<0.05),地塞米松可明显降低脑含水量及体温(P<0.05),本发明药物高、中、低剂量组脑含水量明显减少(P<0.05~0.01),本发明药物高、中剂量组脑内EB含量明显减少(P<0.05),本发明药物高剂量组还能明显降低体温(P<0.05)。
结果见表7。
表7对LPS致感染性脑水肿的影响
注:与空白组比较,##P<0.01;与模型组比较:*P<0.05,**P<0.01
2.2对血清炎症因子TNF-α、IL-6水平的影响(检测方法按各试剂盒说明书进行)
造模6h后,与空白组相比,模型组大鼠血清TNF-α及IL-6水平显著升高(P<0.01)。经静脉给予药物后,与模型组比较,阳性药地塞米松可显著降低血清TNF-α水平(P<0.05)和IL-6水平(P<0.01),本发明药物中剂量组可显著降低血清IL-6水平(P<0.05)。结果见表8。
注:与空白组比较,##P<0.01;与模型组比较:*P<0.05,**P<0.01
b禚志红,赵晓明,王怀立,等.巨噬细胞炎症蛋白2在脂多糖致大鼠脑水肿中的表达.实用儿科临床杂志,2005,20(4):346-348
综上所述,本发明的中药提取物、中药组合物或药物对缺血性脑损伤及感染性脑水肿有明显的治疗作用,治疗后有明显效果改善。
本发明的中药组合物、中药提取物或药物主治的脑损伤和/或脑水肿主要责之于瘀热互结、气血逆乱、阻络壅窍,热毒之邪是其主要病理基础,贯穿始终。本发明的组方处方合理,按照传统医学的方解,栀子(有效成分为栀子苷)味苦性寒,可泻三焦之火,解气分血分之热毒,为君药;黄芩(有效成分为黄芩苷)味苦性寒,可逐水,并治血闭气逆,为臣药,助栀子清降肝胆之火;佐以三七(有效成分为三七总皂苷)甘苦微寒而温,散血止痛,去瘀消肿,“治一切血症甚效”,使之活血通窍而不伤新。全方共奏清热解毒,活血祛瘀之功,标本兼顾。现代研究证明,黄芩苷有显著的抗炎、抗变态反应作用,能抑制水肿和炎症。此外,还具有明显的抗血小板聚集作用和抗氧化作用;栀子苷亦有明显的抗炎及镇痛作用,对瘀血和出血性损伤均有治疗作用,而且发挥其抗炎作用不同于肾上腺素类激素药物;三七总皂苷对脑、肾等器官缺血再灌注损伤有明显保护作用,对毛细血管通透性增高,多种致炎剂所致的肿胀和塑料环肉芽组织增生均有显著的抑制作用。