CN110691611A - 多价疫苗组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及包含抗原混合物的稳定的免疫原性的(一种或多种)联合疫苗，其用于防治和预防由轮状病毒、脊髓灰质炎病毒、流感嗜血杆菌、白喉棒杆菌、破伤风梭菌、百日咳博德特氏菌和乙型肝炎病毒引起的感染。本发明特别提供了一种多价联合疫苗，其包含i)显著剂量减少的Salk IPV或Sabin IPV(IPV)抗原，其通过利用改进的甲醛灭活和氢氧化铝吸附方法制备，导致D‑抗原的最大回收，和ii)可注射的热灭活的从轮状病毒(CDC‑9)病毒株获得的(一种或多种)轮状病毒抗原，其提供针对人轮状病毒株的广泛的交叉保护性免疫，iii)具有改进的稳定性和免疫原性的Hib PRP‑载体蛋白缀合物，其中所述Hib PRP‑载体蛋白缀合物最初是通过使用新的缀合方法制备，并随后在稳定剂存在下在低温混合以最小化游离PRP释放，iv)具有改进的免疫原性和稳定性的全细胞百日咳抗原，其通过在混合后期添加全细胞百日咳抗原获得，从而最小化基于水解的降解，v)通过使用凝胶渗透层析除去不需要的聚集体而获得的白喉类毒素和破伤风类毒素的均匀级分。还公开了通过以下制备这种稳定和免疫原性疫苗组合物的方法：i)分别在氢氧化铝上的吸附剂量减少的IPV、IRV抗原并且保持其他(一种或多种)抗原不被吸附或吸附在磷酸铝、氢氧化铝上、氢氧化铝和磷酸铝的组合上，以及ii)在混合过程中使用特定顺序添加抗原。

Description

多价疫苗组合物
发明领域
本发明涉及包含抗原混合物的稳定的(一种或多种)联合疫苗，其用于防治和预防由轮状病毒、脊髓灰质炎病毒、流感嗜血杆菌(Haemophilus influenza)、白喉棒杆菌(Corynebacterium diphtheriae)、破伤风梭菌(Clostridium tetani)、百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)(全细胞)和乙型肝炎病毒引起的感染。本发明特别涉及稳定的多价联合疫苗，其包含显著剂量减少的Salk IPV或Sabin IPV(IPV)抗原和可注射的热灭活的从轮状病毒(CDC-9)病毒株获得的(一种或多种)轮状病毒抗原。
背景技术
脊髓灰质炎病毒侵入神经系统，并能在数小时内引起不可逆转的麻痹。全球存在三种类型的脊髓灰质炎病毒，即1型、2型和3型。
通过使用口服脊髓灰质炎疫苗(OPV)(基于活减毒的Sabin脊髓灰质炎病毒株)已经大大降低了脊髓灰质炎病毒的流行率。然而，OPV对后根除时代有限制。OPV含有循环疫苗衍生的脊髓灰质炎病毒(cVDPV)，它们是可传播的并且能具有神经毒力(类似于野生脊髓灰质炎病毒)，导致疫苗相关的麻痹性脊髓灰质炎。这些病毒株能潜在地使脊髓灰质炎病毒重新播向世界并使根除的成就无效。为防止循环疫苗衍生的脊髓灰质炎病毒(cVDPV)的出现，WHO战略咨询专家组(Strategic Advisory Group of Experts,SAGE)在目前使用OPV的国家推荐至少一剂量的IPV伴随口服脊髓灰质炎疫苗(OPV)。(参考：World HealthOrganization.Meeting of the Strategic Advisory Group of Experts onImmunization,November 2012-conclusions and recommendations.Wkly Epidemiol Rec2013；88:1-16；PMID:23311010)。
目前，使用野生脊髓灰质炎病毒株(即Salk病毒株和较新的sabin病毒株，其由与减毒活OPV中使用的那些相同的减毒Sabin病毒株制备)制备IPV。通过肌肉注射(IM)或深部皮下(SC)注射递送的批准的标准剂量的脊髓灰质炎疫苗含有D抗原，即40单位灭活脊髓灰质炎病毒1型(Mahoncy)、8单位灭活脊髓灰质炎病毒2型(MEF-I)和32单位灭活脊髓灰质炎病毒3型(Saukett)(例如Infanrix-IPVTM)。但与OPV相比，IPV的生产成本较高，主要由于每剂量需要更多的病毒；额外的下游处理(即浓缩、纯化和灭活)和相关的QC测试；抗原损失或下游恢复不良；和遏制。
目前IPV的生产成本估计比OPV贵约20倍。根除脊髓灰质炎病毒后未来全球对IPV的需求可从目前的每年8000万剂量增加到45000万剂量。因此，为了降低IPV的最终成本，正在努力减少抗原组分的量，即产生剂量减少的IPV制剂。
在全球范围内，轮状病毒是严重急性腹泻的主要原因，并且疫苗被发现是减轻疾病负担的有希望的解决方案。据估计，自从在>60个国家引入轮状病毒疫苗后，2000年至2013年的13年期间全世界轮状病毒死亡人数从528 000减少到215 000。出于这一点，据估计2013年印度有47 100(22％)例轮状病毒死亡发生。印度、尼日利亚、巴基斯坦和刚果民主共和国这四个国家占2013年估计的轮状病毒死亡的约一半(49％)。
在世界范围内进行的最近研究中，观察到4种轮状病毒血清型(即G1、G2、G3和G4)占超过88％的全球分析的病毒株。轮状病毒A的G1血清型是导致全世界疾病的最常见病毒形式之一，而相关的血清型G9病毒自20世纪90年代后期以来已经出现，并且现在占全球分离株的约4％。针对轮状病毒介导的疾病的疫苗接种是解决这一重大健康问题的一种策略。目前获批的两种口服轮状病毒疫苗RotaTeq和Rotarix在减少发达国家和中等收入国家儿童严重腹泻病例方面非常有效，但在非洲和亚洲的低收入国家则效果较差(～50％)。[参阅Tate JE et al."Sustained decline in rotavirus detections in the United Statesfollowing the introduction of rotavirus vaccine in 2006.Pediatr Infect Dis J2011；30:S30-4；and Yen C et al."Decline in rotavirus hospitalizations andhealth care visits for childhood diarrhea following rotavirus vaccination inEl Salvador".Pediatr Infect Dis J 2011；30:S6-10]，此外，目前的两种轮状病毒疫苗都与接种疫苗的婴儿的肠套叠的风险相关。[参考Patel MM et al."Intussusceptionrisk and health benefits of rotavirus vaccination in Mexico and Brazil.N EnglJ Med 2011；364:2283-92and Buttery JP et al."PAEDS/APSU StudyGroup.Intussusception following rotavirus vaccine administration:post-marketing surveillance in the National Immunization Programin Australia".Vaccine 2011；29:3061-6]。
Bharat Biotech International的候选轮状病毒疫苗之一是基于116E轮状病毒株G9P[11]，其是含有一个牛轮状病毒基因P[11]和10个人轮状病毒基因的天然存在的重配株。通过这种疫苗在出生后的头两年提供的保护针对一系列循环基因型，包括G1P[8]、G2P[4]、G12P[6]、G12P[8]和G9P[4]。因此它不能为其他病毒株(如G3、G4、G5、G6、G8、G10、G11、G13和G14)提供交叉保护。此外，基于116E的疫苗在出生后的头两年中的效力与其他许可疫苗一样适中(48％至55％)。[参阅Nita Bhandari et al."Efficacy of a monovalenthuman-bovine(116E)rotavirus vaccine in Indian children in the second year oflife"；Vaccine.2014Aug U；32Suppl 1:A110-6]。此外，基于G1、G3或G6的几种其他肌肉内施用的IRV候选的临床前测试仅显示出部分保护。
此外，用β-丙内酯(BPL)(一种常用于灭活许多病毒的试剂)灭活轮状病毒也已经显示出对轮状病毒颗粒的完整性和生化组成造成严重损害。此外，BPL处理的轮状病毒显示出降低的病毒凝集活性，并且用这种物质在小鼠中肌内注射引起的中和抗体比用活病毒免疫引起的中和抗体更少。[参考Offit PA et al"Noninfectious rotavirus(strain RRV)induces an immune response in mice which protects against rotaviruschallenge".J Clin Microbiol1989；27:885-8]。
在世界许多地方，用IPV免疫已经取代了OPV，因此在几年内，轮状病毒疫苗将成为唯一增加递送成本的口服疫苗。因此，若干运营和物流方面的考虑因素有利于IRV在发展中国家和工业化国家的使用。
D/T中二聚体的出现似乎是通过福尔马林的解毒过程的结果。二聚体的存在可影响缀合方法的效率(假定通过蛋白质表面的空间位阻)而导致活性损失，并且认为单体水平不应低于80％是期望的。以前据报道，通过使用HIC然后进行离子交换能获得具有至少60％单体的T；通过仅使用HIC苯基琼脂糖凝胶能获得具有73％单体含量的T，通过仅使用硫酸铵能获得具有55％单体含量的T。因此，需要另外的单步方法来获得具有至少80％单体的D/T。
联合疫苗包含两种或更多种疫苗，它们能单独给予并将它们置于单一组合物中。已接种者获得与分开给予单独疫苗相同的保护，但注射次数较少。因此联合疫苗提供针对大量疾病的免疫原性，并且总是优于单价疫苗，因为通过减少分开的疫苗接种数量增加了依从性。
Bharat Biotech International正在开发一种七价联合疫苗，其由D、T、无细胞百日咳、Sabin IPV(1型：40DU、2型：8DU，3型：32DU)、单株灭活轮状病毒(G9病毒株即116E病毒株)、与TT缀合的b型流感嗜血杆菌PRP缀合物和重组乙型肝炎疫苗组成。如前所述，这种包含基于116E的疫苗的七价联合疫苗不能为其他病毒株如G3、G4、G5、G6、G8、G10、G1l、G13和G14提供交叉保护。此外，联合疫苗的所述IRV组分在出生后的最初2年内的效力将与其他许可疫苗一样适中(48％至55％)。
来自Sanofi Pasteur的另一种联合疫苗
Figure BDA0001978363770000041
(也称为
Figure BDA0001978363770000042
和
Figure BDA0001978363770000043
)含有aP。这种疫苗很可能目标在于欧洲和全球私人市场。另一种由Merck和Sanofi Pasteur联合开发的具有aP抗原的六价联合疫苗目前正在进行III期临床研究。
目前，GSK的Infanrix是全球唯一市售的含有IPV的六价儿童联合疫苗。这种疫苗含有无细胞百日咳(aP)组分，并且由于Hib组分的不稳定性而以注射器加冻干的小瓶形式呈现。在发展中国家环境中使用Infanrix
Figure BDA0001978363770000045
(GSK)的主要障碍是疫苗产品的价格、冻干形式重构的要求、以及发展中国家对aP疫苗有效性的担忧。从成本的角度来看，由于制造差异和专利权使用费成本，aP抗原在历史上已超过wP抗原的成本10倍至30倍以上。因此，因为成本和对aP疫苗的长期有效性出现的担忧(特别是在发展中国家的环境中)，在用于发展中国家的多价联合疫苗中使用全细胞百日咳(wP)已经变得重要。
几种具有wP和IPV的多价联合疫苗正在开发中。然而，IPV抗原与常见的疫苗防腐剂硫柳汞不相容，硫柳汞是一种具有抗菌活性的含汞化合物，其导致脊髓灰质炎衣壳失去其抗原性。硫柳汞被许多疫苗生产商用于灭活活百日咳博德特氏菌生物体以制造wP疫苗原液(vaccine bulk)，这种原液进入最终产品但也导致IPV的抗原性损失，并因此IPV可能需要在与含硫柳汞的wP分开的小瓶中呈现以随时间保持其效力。
GSK的全细胞联合疫苗(DTwP-IPV-HBV//Hib)据报道在几个早期临床试验中。然而，该产品的脊髓灰质炎免疫原性不如比较疫苗好，并且发现IPV剂量的最低需求将与目前的标准IPV剂量疫苗相同或可能需要增加。
在传统疫苗的供应不足以满足全球需求或传统疫苗的制造成本阻止疫苗在发展中国家以可承受的价格出售的情况下，使用较低剂量的IPV抗原来提供针对感染的保护的减少剂量的有效疫苗制剂是期望的。此外，暴露于较低剂量的IPV；与现有市售制剂相比可能更安全。多价联合疫苗可以简化复杂的儿科常规免疫计划、提高依从性并降低递送成本。然而，因为自20世纪90年代初开始的联合儿科疫苗的工作，含IPV的多价疫苗对疫苗生产商来说是一项技术挑战。
在铝佐剂(更具体地是氢氧化铝)存在下Hib抗原的不稳定性是主要的技术问题。因此，如果疫苗原液进入已经基于不同的铝化学物质的联合疫苗，生产商将要解决的技术挑战将是避免不同的铝佐剂。因此，添加抗原的顺序成为重要因素，因为不相容的抗原或佐剂的混合可能导致最终产品的不期望的物理外观(例如额外的沉淀物和难以再悬浮)，进一步导致无法接受最终的联合疫苗产品[参考Malecker et al 1996,"Factors affectingthe ability of experimental vaccines to protect guinea pigs against lethalchallenge with Diphtheria Toxin"；presented at WHO/IABS/NIBSC Internationalmeeting on the control and standardization of Acellular pertussis Vaccines,UK,Sep 26-271996]。
目前已知和可用的联合疫苗可能不包含适当免疫原形式的适当抗原的适当制剂，以在易感人群中实现期望水平的效力和免疫原性，以在一次注射中针对多种疾病。最重要的是，没有具有剂量减少的IPV(IPV)、广泛交叉保护的IRV和全细胞百日咳(wP)的多价联合是可商购的。鉴于上面讨论的关于联合疫苗的情况，仍然明显需要适用于发展中国家的可负担的全液体多价联合疫苗，其为缺乏抗原性干扰的各个抗原提供等同或改进的血清保护作用。
发明内容
本发明涉及包含抗原混合物的稳定的免疫原性的(一种或多种)联合疫苗，其用于防治和预防由轮状病毒、脊髓灰质炎病毒、流感嗜血杆菌、白喉棒杆菌、破伤风梭菌、百日咳博德特氏菌和乙型肝炎病毒引起的感染。本发明特别提供了一种多价联合疫苗，其包含i)显著剂量减少的Salk IPV或Sabin IPV(IPV)抗原，其通过利用改进的甲醛灭活和氢氧化铝吸附的方法制备，导致D-抗原的最大回收，和ii)可注射的热灭活的从轮状病毒(CDC-9)病毒株获得的(一种或多种)轮状病毒抗原，其提供针对人轮状病毒株的广泛的交叉保护性免疫，iii)具有改进的稳定性和免疫原性的Hib PRP-载体蛋白缀合物，其中所述Hib PRP-载体蛋白缀合物最初是通过使用新的缀合方法制备，并随后在稳定剂存在下在低温混合以最小化游离PRP释放，iv)具有改进的免疫原性和稳定性的全细胞百日咳抗原，其通过在混合后期添加全细胞百日咳抗原获得，从而最小化基于水解的降解，v)通过使用凝胶渗透层析除去不需要的聚集体而获得的白喉类毒素和破伤风类毒素的均匀级分。还公开了制备这种稳定和免疫原性的疫苗组合物的方法，通过i)分别在氢氧化铝上吸附剂量减少的IPV、IRV抗原并保持其他(一种或多种)抗原不吸附或吸附在磷酸铝或氢氧化铝、或两者的组合上，和ii)在混合期间使用特定的顺序添加抗原。此外，本发明提供适用于发展中国家的可负担的(一种或多种)联合疫苗，其为缺乏抗原性干扰的各个抗原提供等同或改进的血清保护。
附图简述
图1：白喉类毒素的凝胶过滤层析Sephacryl S-300HR，层析柱XK 26/70的纯化-层析图。
具体实施方案
本发明涉及(一种或多种)多价联合疫苗，其包含(i)选自sabin或salk病毒株的剂量减少的灭活脊髓灰质炎病毒疫苗；(ii)可注射的热灭活的轮状病毒CDC-9病毒株；以及(iii)任选地，一种或多种选自以下的抗原：D、T、wP、HBsAg、Hib PRP-载体蛋白缀合物、(一种或多种)脑膜炎奈瑟氏球菌(Neisseria meningitidis)A抗原、(一种或多种)脑膜炎奈瑟氏球菌C抗原、(一种或多种)脑膜炎奈瑟氏球菌W-135抗原、(一种或多种)脑膜炎奈瑟氏球菌Y抗原、(一种或多种)脑膜炎奈瑟氏球菌X抗原、(一种或多种)肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)抗原、(一种或多种)脑膜炎奈瑟氏球菌B小粒(bleb)或纯化抗原、(一种或多种)金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)抗原、炭疽、BCG、(一种或多种)甲型肝炎抗原、(一种或多种)乙型肝炎抗原、人乳头瘤状病毒、(一种或多种)伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)抗原、无细胞百日咳、修饰的腺苷酸环化酶、疟疾抗原(RTS,S)、麻疹、腮腺炎、风疹、登革热、寨卡病毒、埃博拉病毒、切昆贡亚热(Chikungunya)、日本脑炎(Japanese encephalitis)、腹泻抗原等。
联合疫苗组合物的组分：
·灭活的脊髓灰质炎病毒
脊髓灰质炎(Polio)(脊髓灰质炎(Poliomyelitis))是一种高度传染性的病毒。脊髓灰质炎病毒侵入神经系统，并能在数小时内引起不可逆转的麻痹。全球存在三种类型的脊髓灰质炎病毒，即1型、2型和3型。
本发明的第一实施方案包括在TRIS缓冲剂存在下通过甲醛灭活脊髓灰质炎病毒(salk或sabin病毒株)的改进的方法，导致D-抗原的最大回收。随后在氢氧化铝上吸附所述IPV提供了显著剂量减少的IPV组合物。本发明提供了福尔马林灭活和氢氧化铝吸附的改进的方法，其中D-抗原灭活后的回收在50-80％的范围内，并且氢氧化铝的吸附百分比在70-99％的范围内。
在第一实施方案的一方面中，CCL81-VERO(猴肾)细胞用作宿主细胞，用于生长脊髓灰质炎病毒，即sabin和salk病毒株。用所需的脊髓灰质炎病毒株感染宿主细胞并孵育72小时后，合并含有病毒和细胞碎片的培养基并收集在单个容器中。
在第一实施方案的第二方面中，对收获物进行一系列过滤(6μ和0.45μ装置(assembly))；并将滤液收集在玻璃容器中。将滤液用100kDa盒进行切向流过滤；使用磷酸盐缓冲剂渗滤并使用阴离子交换层析纯化。
在第一实施方案的第三方面中，用TFF系统(100kDa，0.1m2)将纯化的病毒库进一步从磷酸盐缓冲剂到Tris缓冲剂(30到50mM，pH：7到7.5)进行缓冲剂交换，然后加入M-199和0.1-1.0％甘氨酸。
在第一实施方案的第四方面中，将Tris缓冲剂中的纯化病毒库用0.01-1.0％福尔马林灭活并连续搅拌病毒原液，并在环境温度下孵育13天，并在第7天进行中间过滤。此外，将灭活的原液进行最终过滤并然后在2-8℃储存。
在第一实施方案的第五方面中，将最终纯化的原液在Al(OH)3上进行吸附，其中最终的明矾(Al3+)浓度为0.1-1.5mg/剂，使用M-199+0.5％甘氨酸填充体积并且使用1N HCl/NaOH将pH调节至6-7，进一步在2-8℃搅动过夜。
本发明人惊奇地观察到甲醛灭活后的D-抗原损失是由于磷酸盐缓冲剂的存在，其意外地引起脊髓灰质炎病毒的不希望的聚集。本发明提供了在TRIS缓冲剂存在下甲醛灭活的改进过程，从而确保最小的表位修饰并随后使D-抗原损失最小化。
·灭活的轮状病毒：
轮状病毒是全世界幼儿严重腹泻病的最常见原因。口服减毒活轮状病毒疫苗可在国际上获得；并被认为在预防胃肠道疾病中是安全和有效的。
本发明的第二实施方案包括轮状病毒的制备、纯化和制剂。所述制备具有新病毒株即CDC-9的可注射的热灭活的轮状病毒抗原的方法利用热灭活和吸附在氢氧化铝佐剂上。
在第二实施方案的第一方面中，使用Vera细胞(CCL-81)作为宿主细胞培养轮状病毒，并使用30μ和2μ过滤器装置澄清收获物以除去细胞碎片。
在第二实施方案的第二方面中，用Benzonase(2000-10000单位/升)处理澄清的收获物，在37℃孵育4小时并连续搅拌。更具体地，所用的benzonase浓度为5000单位每升。
在第二实施方案的第三方面中，使用具有100kDa盒的'HBSS(Hanks平衡盐溶液)+10％山梨糖醇'将Benzonase处理的原液进一步浓缩10X并渗滤4X。
在第二实施方案的第四方面中，能使用稀释缓冲剂任选地透析渗滤的原液，并使用亲和层析进一步纯化，优选使用硫酸纤维素作为柱层析树脂。
在第二实施方案的第五方面中，使用改进的轮状病毒热灭活方法。该方法快速，简单，并且能保持完整性并从而保持轮状病毒颗粒的抗原性。用于热灭活的温度在60℃至70℃之间的范围内；并且孵育时间在约10分钟-24小时的范围内(包括端点)。优选地，所述孵育时间在约30分钟至10小时的范围内。更优选地，使用60℃加热5小时进行纯化的CDC-9的灭活，两小时后更换一次容器。将灭活的CDC-9原液储存在-80℃直至进一步使用。
在第二实施方案的第六方面中，在氢氧化铝上进行灭活的轮状病毒抗原的吸附，其中最终的铝(AT+++)浓度为0.2mg/剂至0.8mg/剂之间。
·流感嗜血杆菌b PRP-蛋白缀合物：
b型流感嗜血杆菌是革兰氏阴性细菌，其主要在儿童中引起脑膜炎和急性呼吸道感染。b型流感嗜血杆菌的最外层结构由多核糖基-核糖醇-磷酸(PRP)组成，PRP是一种负责毒力和免疫力的多糖。PRP是半抗原，其在性质上被认为免疫原性不良，因此PRP与载体蛋白共价连接以产生高免疫原性Hib抗原。该过程将多糖从T非依赖性抗原改变为T依赖性抗原并且极大地改进了免疫原性，特别是在幼儿中。
本发明的第三实施方案包括制备Hib PRP-蛋白质缀合物。可以注意到，用于缀合Hib抗原的载体蛋白可以选自以下：CRM197(交叉反应材料197，遗传解毒形式的白喉类毒素)、白喉类毒素、脑膜炎奈瑟氏球菌外膜复合物、破伤风类毒素片段C、百日咳类毒素、流感嗜血杆菌蛋白D、大肠杆菌LT、大肠杆菌ST、和来自铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)的外毒素A、外膜复合物c(OMPC)、孔蛋白、转铁蛋白结合蛋白、肺炎球菌溶血素、肺炎球菌表面蛋白A(PspA)、肺炎球菌表面粘附素A(PsaA)、肺炎球菌PhtD、肺炎球菌表面蛋白BVH-3和BVH-11、炭疽杆菌(Baccillus anthracis)的保护性抗原(PA)和炭疽杆菌的解毒水肿因子(EF)和致死因子(LF)、卵清蛋白、匙孔虫戚血蓝蛋白(KLH)、人血清白蛋白、牛血清白蛋白(BSA)和结核菌素(PPD)的纯化蛋白衍生物、合成肽、热休克蛋白、百日咳蛋白、细胞因子、淋巴因子、激素、生长因子、包含来自多种病原体衍生的抗原的多种人CD4+T细胞表位的人工蛋白(例如N19)、铁摄取蛋白、来自艰难梭菌(C.difficile)的毒素A或B和无乳链球菌(S.agalactiae)蛋白或其任何等同物。优选地，缀合物中的载体蛋白选自TT或CRM197。
在第三实施方案的第一方面中，Hib抗原衍生自B型流感嗜血杆菌菌株的荚膜多糖。为了产生PRP多糖，b型流感嗜血杆菌细菌在一定温度、搅动和光密度等条件下在半合成培养基中生长。PRP是外膜结合多糖，在搅动条件下在发酵过程中释放到培养基中。发酵的生物质分离的发酵液含有粗PRP，其通过使用洗涤剂N,N,N-三甲基-1-十六烷基溴化铵通过沉淀来再次纯化，然后进行乙醇梯度沉淀和过滤。根据WHO、BP、EP、IP等测试最终纯化的PRP多糖是否符合规格如内毒素、核酸和蛋白质。
在第三实施方案的第二方面中，通过多糖(PRP)与载体蛋白的偶联制备多糖-蛋白质缀合物。使用缀合方法将Hib PRP与载体蛋白缀合，所述缀合过程包括以下步骤：包括使用碱性缓冲剂解聚PRP以获得PRP尺寸减小；用氰化剂如CDAP(1-氰基-4-二甲氨基吡啶鎓四氟硼酸盐)处理以形成氰酸酯；将活化的氰基化多糖与载体蛋白的氨基偶联；使用超滤纯化最终的缀合物。
更优选地，选择以1：1.5：1比率的反应物(即PRP、CDAP和CRM197)的最佳输入比率用于缀合反应。在缀合期间，使用碱性缓冲剂(0.4M Carb-Bicarbonate缓冲剂，pH 10.5±0.1)使纯化的PRP多糖解聚，以获得尺寸减小的PRP。使用CDAP(1-氰基-4-二甲氨基吡啶鎓四氟硼酸盐)化学处理尺寸减小的PRP进行氰基化以形成氰酸酯。活化的氰基化多糖直接与载体蛋白CRM197上的氨基偶联。通过使用HPLC的离线测试证实了Hib缀合物的转化程度。通过达到所需的缀合物转化水平来淬灭缀合反应，其中Hib缀合物的转化规格不低于65％，并且然后通过加入甘氨酸(2M)中和缀合物反应。将Hib PRP-CRM197缀合物在超滤膜过滤器(300kDa和100kDa)上进一步纯化以去除非反应性试剂和副产物。将最终的缀合物原液以0.22μm过滤并在2-8℃储存。
在第三实施方案的第三方面中，Hib PRP与载体蛋白缀合，其中糖：蛋白质比率(w/w)在0.4和1之间；并且最终Hib PRP-蛋白质缀合物原液中的游离PRP含量不超过5％，更优选小于2％。
·白喉类毒素(D)
白喉是一种由细菌白喉棒杆菌引起的传染病，主要感染喉咙和上呼吸道，并产生影响其他器官的毒素。白喉毒素是由白喉棒杆菌分泌的外毒素，具有抗原特性并且在性质上是有毒的。为了降低毒性，通过使毒素灭活将毒素转化为灭活类毒素。灭活过程可以选自一种或多种用热、UV、福尔马林/甲醛、乙酰氮丙啶等的处理。为了增加免疫原性，类毒素被吸附到佐剂上。由此形成的类毒素能够诱导针对白喉棒杆菌的抗毒素抗体。二聚体的存在可导致不良反应。
在本发明的第四实施方案中，制备了白喉类毒素。
在第四实施方案的第一方面中，白喉毒素(外毒素)从白喉棒杆菌获得并使用合适的灭活剂解毒。合适的灭活剂的实例包括甲醛。
在第四实施方案的第二方面中，使用凝胶过滤层析纯化获得的白喉类毒素，所述凝胶过滤层析以Sephacryl S-300HR作为树脂，线性流速为2-5ml/min。由此获得的纯化的D包含不含不需要的聚集体的均质级分(参见图1)，其中至少80-90％的单体白喉类毒素进一步用于(一种或多种)多价疫苗的制剂。另外的PLgel、Sephacryl S-200HR、Sephadex、Bio-Gel(交联聚丙烯酰胺)、琼脂糖凝胶和/或Styragel也可用于使用凝胶渗透层析纯化的目的。
在第四实施方案的第三方面中，白喉类毒素被吸附在一种或多种铝盐上，所述铝盐包括氢氧化铝和磷酸铝，优选在磷酸铝上。
·破伤风类毒素(T)
破伤风是由细菌破伤风梭菌(C.tetani)的产毒菌株引起的急性传染病，所述破伤风梭菌是一种革兰氏阳性、孢子形成的、严格厌氧的细菌。破伤风毒素是破伤风梭菌分泌的外毒素，具有抗原特性并且在性质上是有毒的。为了降低毒性，通过使毒素灭活将毒素转化为灭活类毒素。灭活过程可以选自一种或多种用热、UV、福尔马林/甲醛、乙炔亚胺等的处理。为了增加免疫原性，类毒素被吸附到佐剂上。由此形成的类毒素能够诱导针对破伤风梭菌的抗毒素抗体。二聚体的存在可导致不良反应。
在本发明的第五实施方案中，制备了破伤风类毒素，
在第五实施方案的第一方面中，破伤风毒素是从破伤风梭菌中获得的，并使用合适的灭活剂进行解毒。合适的灭活剂的实例包括甲醛。
在第五实施方案的第二方面中，使用凝胶过滤层析纯化获得的破伤风类毒素，所述凝胶过滤层析以Sephacryl S-300HR作为树脂，线性流速为2-5ml/min。由此获得的纯化T是不含不需要的聚集体的均质级分，其中至少80-90％的单体破伤风类毒素进一步用于(一种或多种)多价疫苗的制剂。另外的PLgel、Sephacryl S-200HR、Sephadex、Bio-Gel(交联聚丙烯酰胺)、琼脂糖凝胶和Styragel也可用于使用凝胶渗透层析纯化的目的。
在第四实施方案的第三方面中，破伤风类毒素被吸附在一种或多种铝盐上，所述铝盐包括氢氧化铝和磷酸铝，优选在磷酸铝上。
·百日咳抗原
百日咳(百日咳)是由百日咳博德特氏菌引起的，这是一种小的革兰氏阴性球菌，其感染人体呼吸道的粘膜层。使用两种形式的疫苗，全细胞百日咳疫苗(wP)和无细胞百日咳疫苗(aP)。全细胞百日咳疫苗是通常用福尔马林灭活的整个百日咳博德特氏菌生物体的悬浮液。用wP疫苗免疫相对便宜且高效。此外，联合疫苗中wP的存在充当许多其他抗原组分的佐剂。
无细胞百日咳(aP)疫苗含有百日咳博德特氏菌的纯化组分(例如灭活的百日咳毒素)，其单独或与其他百日咳博德特氏菌组分(如丝状血凝素、菌毛抗原、百日咳杆菌粘附素和修饰的腺苷酸环化酶)组合。与wP疫苗相比，无细胞百日咳疫苗提供较少的不良反应。
在本发明的第六实施方案中，百日咳疫苗是选自全细胞百日咳或无细胞百日咳中的一种或多种的百日咳抗原。
在第六实施方案的第一方面中，百日咳疫苗是无细胞百日咳抗原，其选自丝状血凝素、菌毛抗原、百日咳杆菌粘附素和修饰的腺苷酸环化酶中的一种或多种。可以使用重组DNA技术在合适的宿主中表达无细胞百日咳抗原。
在第六实施方案的第二方面中，百日咳疫苗是全细胞百日咳，其包含特定比率的百日咳博德特氏菌菌株134、509、25525和6229，并随后通过利用缺乏硫柳汞的改进灭活方法灭活；因此导致反应原性降低和效力增加。优选地，wP抗原由百日咳博德特氏菌菌株134、509、25525和6229以1：1：0.25：0.25的比率混合制成。
在第六实施方案的第三方面中，wP灭活过程包括在甲醛存在下在56±2℃热灭活10至15分钟；其中wP原液保持非块状并且容易均质化，从而导致反应原性降低并且在更长的持续时间内提供更好的wP效力。
·乙型肝炎表面抗原(HBsAg)
乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的潜在地危及生命的肝脏感染。乙型肝炎表面抗原(HBsAg)是一种表面蛋白，也充当高效疫苗中的免疫原用于预防HBV感染。HBsAg蛋白能在合适的宿主微生物中重组表达；或者能从慢性乙型肝炎患者/携带者的血浆中分离出来。
在本发明的第七实施方案中，制备了乙型肝炎表面抗原(HBsAg)。
在第七实施方案的一方面中，使用重组DNA技术在多形汉逊酵母(Hansenulapolymorpha)酵母细胞中表达HBsAg。其他酵母如酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)也可用作宿主细胞，用于重组表达HBsAg。
在第七实施方案的一方面中，乙型肝炎抗原(HBsAg)吸附在一种或多种铝盐上，所述铝盐包括氢氧化铝和磷酸铝，优选在磷酸铝上。
二价联合疫苗组合物及其制备方法
在本发明的第八实施方案中，多价疫苗是全液体二价联合疫苗。二价联合疫苗包含灭活的I、II和III型脊髓灰质炎病毒；和灭活的轮状病毒(IRV)。
在第八实施方案的第一方面中，灭活的脊髓灰质炎病毒选自Salk和Sabin病毒株的组；基于Salk或Sabin病毒株的IPV的1型、2型和3型的各浓度不超过20D抗原单位。
在第八实施方案的第二方面中，灭活的脊髓灰质炎病毒是Salk病毒株，并且基于Salk病毒株的IPV的1型、2型或3型的各浓度选自以下的剂量组合物：7.5-16-10、8-2-5、10-2-5、10-2-10、10-2-12、10-2-16、7.5-16-10、5-2-5D抗原单位；更具体地，基于Salk病毒株的IPV的1型、2型或3型的各浓度选自8-2-5和10-2-10D抗原单位。
在第八实施方案的第三方面中，灭活的脊髓灰质炎病毒是Sabin病毒株，并且基于Sabin病毒株的IPV的1型、2型和3型的各浓度选自以下的剂量组合物：5-16-10、2.5-8-5、5-8-10D抗原单位；更具体地，基于Sabin病毒株的IPV的1型、2型和3型的各浓度为5-16-10D抗原单位。
在第八实施方案的第四方面中，可注射的热灭活的轮状病毒(IRV)是轮状病毒CDC-9或CDC-66株，并且IRV的浓度在5-50μg/剂的范围内，更具体地IRV的浓度是10μg/剂。
在第八实施方案的第五方面中，通过将IPV(Sabin/Salk病毒株)原液和IRV原液分别吸附在一种或多种铝盐(包括氢氧化铝和磷酸铝)上，优选在氢氧化铝上，制备二价组合物。将各个单价吸附的IPV和IRV原液进一步混合在一起，并在2-8℃振荡器上保持1-4小时。
六价联合疫苗组合物及其制备方法
在本发明的第九实施方案中，全液体六价(DTwP-IPV-IRV-Hib)疫苗制剂如下制备：
a)将IPV(Sabin/Salk病毒株)原液和IRV原液分别吸附在氢氧化铝上，然后将pH调节至6.2-6.6。
b)将D吸附在磷酸铝上，然后将pH调节至5.5-6.5，加入T并在室温搅动混合18-24小时。
c)将步骤a和b中获得的溶液混合，然后将pH调节至6.4-6.6并在室温搅动60分钟。
d)将wP抗原和组氨酸加入上述混合物中，然后搅动60分钟并在2-8℃静置条件下放置过夜。
e)在2-8℃将Hib PRP缀合物和2-苯氧基乙醇1(2-PE)加入到步骤d获得的混合物中，然后将pH调节至6.4-6.6。
f)将NaCl和WFI(q.s.)加入到步骤e获得的混合物中，然后搅动2小时。
在本发明的第十实施方案中，多价疫苗组合物是全液体六价疫苗制剂。全液体六价疫苗制剂包含白喉类毒素(D)；破伤风类毒素(T)；灭活的全细胞百日咳博德特氏菌抗原(wP)；灭活的I、II和III型脊髓灰质炎病毒salk病毒株；灭活的轮状病毒(IRV)；和B型流感嗜血杆菌PRP-TT缀合物和其他赋形剂如基于铝的佐剂(磷酸铝、氢氧化铝)、2-苯氧基乙醇、L-组氨酸和WFI。
在第十实施方案的一个优选方面，多价疫苗组合物是六价疫苗组合物，其中D的存在量为1-50Lf的范围；T的存在量为1-30Lf的范围；wP的存在量为10-50IOU的范围；剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒Salk病毒株1型的存在量为1-20D抗原单位的范围、2型的存在量为1-20D抗原单位的范围、3型的存在量为1-20D抗原单位的范围；IRV的存在量为1-30μg的范围；b型流感嗜血杆菌PRP-TT缀合物的量为2-20μg PRP含量的范围；铝含量(Al 3+)的存在量为0.4-1.5mg的范围；2-苯氧基乙醇的存在量为2-6mg的范围；L-组氨酸的存在量为0.5-5mg的范围和WFI。
在第十实施方案的一个最优选的方面，多价疫苗组合物是六价疫苗组合物，其中D的存在量为22.5Lf；TT的存在量为7.5Lf；wP的存在量为15IOU；剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒Salk病毒株1型的存在量为10D单位、2型的存在量为2D单位、3型的存在量为10或16D单位；IRV的存在量为10μg；b型流感嗜血杆菌PRP-TT缀合物的量为5μg；铝含量的存在量不超过0.9mg；2-苯氧基乙醇的存在量为3.25mg；L-组氨酸的存在量为1.55mg和WFI。
在本发明的第十一实施方案中，多价疫苗组合物是全液体六价疫苗制剂。全液体六价疫苗制剂包含白喉类毒素(D)；破伤风类毒素(T)；灭活的全细胞百日咳博德特氏菌抗原(wP)；灭活的I、II和III型脊髓灰质炎病毒salk病毒株；灭活的轮状病毒(IRV)；和b型流感嗜血杆菌PRP-CRM197缀合物和其他赋形剂如基于铝的佐剂(磷酸铝、氢氧化铝)、2-苯氧基乙醇、L-组氨酸和WFI。
在第十一实施方案的一个优选方面，多价疫苗组合物是六价疫苗组合物，其中D的存在量为1-50Lf的范围；T的存在量为1-30Lf的范围；wP的存在量为10-50IOU的范围；剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒Salk病毒株1型的存在量为1-20D单位的范围、2型的存在量为1-20D单位的范围、3型的存在量为1-20D单位的范围；IRV的存在量为1-30μg的范围；b型流感嗜血杆菌PRP-CRM197缀合物的量为2-20μg PRP含量的范围；铝含量(Al3+)的存在量为0.4-1.5mg的范围；2-苯氧基乙醇的存在量为2-6mg的范围；L-组氨酸的存在量为0.5-5mg的范围和WF1。
在第十一实施方案的一个最优选方面，多价疫苗组合物是六价疫苗组合物，其中D的存在量为22.5Lf；T的存在量为7.5Lf；wP的存在量为15IOU；剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒Salk病毒株1型的存在量为10D单位、2型的存在量为2D单位、3型的存在量为10或16D单位；IRV的存在量为10μg；b型流感嗜血杆菌PRP-CRM197缀合物的量为10μg；铝含量的存在量不超过0.9mg；2-苯氧基乙醇的存在量为3.25mg；L-组氨酸的存在量为1.55mg的范围和WFI。
在本发明的第十二实施方案中，多价疫苗组合物是全液体六价疫苗制剂。全液体六价疫苗制剂包含白喉类毒素(D)；破伤风类毒素(T)；灭活的全细胞百日咳博德特氏菌抗原(wP)；灭活的I型、Π型和III型脊髓灰质炎病毒sabin病毒株；灭活的轮状病毒(IRV)；和b型流感嗜血杆菌PRP-TT缀合物和其它赋形剂如基于铝的佐剂(磷酸铝、氢氧化铝)、2-苯氧基乙醇、L-组氨酸和WFI。
在第十二实施方案的一个优选方面，多价疫苗组合物是六价疫苗组合物，其中D的存在量为1-50Lf的范围；T的存在量为1-30Lf的范围；wP的存在量为10-50IOU的范围；剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒sabin病毒株1型的存在量为1-20D抗原单位的范围、2型的存在量为1-20D抗原单位的范围、3型的存在量为1-20D抗原单位的范围；IRV的存在量为1-30μg的范围；b型流感嗜血杆菌PRP-TT缀合物的量为2-20μg的PRP含量的范围；铝含量(Al3+)的存在量为0.4-1.5mg的范围；2-苯氧基乙醇的存在量为2-6mg的范围；L-组氨酸的存在量为0.5-5mg的范围和WFI。
在第十二实施方案的一个最优选的方面，多价疫苗组合物是六价疫苗组合物，其中D的存在量为22.5Lf；T的存在量为7.5Lf；wP的存在量为15IOU；剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒sabin病毒株1型的存在量为5D单位、2型的存在量为16D单位、3型的存在量为10D单位；IRV的存在量为10μg；b型流感嗜血杆菌PRP-TT缀合物的量为5μg；铝含量的存在量不超过0.9mg；2-苯氧基乙醇的存在量为3.25mg；L-组氨酸的存在量为1.55mg的范围和WFI。
在本发明的第十三实施方案中，多价疫苗组合物是全液体六价疫苗制剂。全液体六价疫苗制剂包含白喉类毒素(D)；破伤风类毒素(T)；灭活的全细胞百日咳博德特氏菌抗原(wP)；灭活的I型、Π型和III型脊髓灰质炎病毒sabin病毒株；灭活的轮状病毒(IRV)；和b型流感嗜血杆菌PRP-CRM197缀合物和其他赋形剂如基于铝的佐剂(磷酸铝、氢氧化铝)、2-苯氧基乙醇、L-组氨酸和WFI。
在第十三实施方案的一个优选方面，多价疫苗组合物是六价疫苗组合物，其中D的存在量为1-50Lf的范围；T的存在量为1-30Lf的范围；wP的存在量为10-50IOU的范围；剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒sabin病毒株1型的存在量为1-20D抗原单位的范围、2型的存在量为1-20D抗原单位的范围、3型的存在量为1-20D抗原单位的范围；IRV的存在量为1-30μg的范围；b型流感嗜血杆菌PRP-CRM197缀合物的量为2-20μg的PRP含量的范围；铝含量(Al 3 +)的存在量为0.4-1.5mg的范围；2-苯氧基乙醇的存在量为2-6mg的范围；L-组氨酸的存在于0.5-5mg的范围和WFI。
在第十三实施方案的一个最优选的方面，多价疫苗组合物是六价疫苗组合物，其中D的存在量为22.5Lf；T的存在量为7.5Lf；wP的存在量为15IOU；剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒sabin病毒株1型的存在量为5D单位、2型的存在量为16D单位、3型的存在量为10D单位；IRV的存在量为10μg；b型流感嗜血杆菌PRP-CRM197缀合物的量为10μg；铝含量的存在量不超过0.9mg；2-苯氧基乙醇的存在量为3.25mg；L-组氨酸的存在量为1.55mg的范围和WFI。
七价联合疫苗组合物及其制备方法
在本发明的第十四实施方案中，七价(DTwP-HBsAg-IPV-IRV-Hib)疫苗制剂如下制备：
a)将IPV(Sabin/Salk病毒株)原液和IRV原液分别吸附在氢氧化铝上，然后将pH调节至6.2-6.6。
b)将HBsAg吸附在磷酸铝上，然后将pH调节至6.0-6.5。
c)将D吸附在磷酸铝上，然后将pH调节至5.5-6.5并加入T。
d)步骤b和c中获得的溶液，然后在室温混合搅动18-24小时。
e)加入上述混合物[如步骤a和d中获得的]，然后将pH调节至6.4-6.6并在室温搅动60分钟。
f)将wP抗原和组氨酸加入上述混合物中，然后搅动60分钟并在2-8℃静置条件下放置过夜。
g)在2-8℃将Hib PRP蛋白质缀合物和2-PE加入步骤f中获得的混合物中，然后将pH调节至6.4-6.6。
h)将NaCl和WFI(q.s.)加入到步骤g获得的混合物中，然后搅动2小时。
在本发明的第十五实施方案中，多价疫苗组合物是全液体七价疫苗制剂。全液体七价疫苗制剂均包含白喉类毒素(D)；破伤风类毒素(T)；灭活的全细胞百日咳博德特氏菌抗原(wP)；灭活的I、II和III型脊髓灰质炎病毒salk病毒株；灭活的轮状病毒(IRV)；和b型流感嗜血杆菌PRP-TT缀合物；乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和其他赋形剂如基于铝的佐剂(磷酸铝、氢氧化铝)、2-苯氧基乙醇、L-组氨酸和WFI。
在第十五实施方案的一个优选方面，多价疫苗组合物是七价疫苗组合物，其中D的存在量为1-50Lf的范围；T的存在量为1-30Lf的范围；wP的存在量为10-50IOU的范围；剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒Salk病毒株1型的存在量为1-20D抗原单位的范围、2型的存在量为1-20D抗原单位的范围、3型的存在量为1-20D抗原单位的范围；IRV的存在量为1-30μg的范围；b型流感嗜血杆菌PRP-TT缀合物的存在量为2-20μg的PRP含量的范围；乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的存在量为5-30μg的范围；铝含量(Al 3+)的存在量为0.4-1.5mg的范围；2-苯氧基乙醇的存在量为2-6mg的范围；L-组氨酸的存在量为0.5-5mg的范围和WFI。
在第十五实施方案的一个最优选的方面，多价疫苗组合物是七价疫苗组合物，其中D的存在量为22.5Lf；T的存在量为7.5Lf；wP的存在量为15IOU；剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒Salk病毒株1型的存在量为10D单位、2型的存在量为2D单位、3型的存在量为10或16D单位；IRV的存在量为10μg；b型流感嗜血杆菌PRP-TT缀合物的量为5μg；乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的存在量为12.5μg；铝含量的存在量不超过0.9mg；2-苯氧基乙醇的存在量为3.25mg；L-组氨酸的存在量为1.55mg的范围和WFI。
在本发明的第十六实施方案中，多价疫苗组合物是全液体七价疫苗制剂。全液体七价疫苗制剂均包含白喉类毒素(D)；破伤风类毒素(T)；灭活的全细胞百日咳博德特氏菌抗原(wP)；灭活的I、II和III型脊髓灰质炎病毒salk病毒株；灭活的轮状病毒(IRV)；和b型流感嗜血杆菌PRP-CRM197缀合物；乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和其他赋形剂如基于铝的佐剂(磷酸铝、氢氧化铝)、2-苯氧基乙醇、L-组氨酸和WFI。
在第十六实施方案的一个优选方面，多价疫苗组合物是七价疫苗组合物，其中D的存在量为1-50Lf的范围；T的存在量为1-30Lf的范围；wP的存在量为10-50IOU的范围；剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒Salk病毒株1型的存在量为1-20D抗原单位的范围、2型的存在量为1-20D抗原单位的范围、3型的存在量为1-20D抗原单位的范围；IRV的存在量为1-30μg的范围；b型流感嗜血杆菌PRP-CRM197缀合物的量为2-20μg的PRP含量的范围；乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的存在量为5-30μg的范围；铝含量(Al3+)的存在量为0.4-1.5mg的范围；2-苯氧基乙醇的存在量为2-6mg的范围；L-组氨酸的存在量为0.5-5mg的范围和WFI。
在第十六实施方案的一个最优选的方面，多价疫苗组合物是七价疫苗组合物，其中D的存在量为22.5Lf；T的存在量为7.5Lf；wP的存在量为15IOU；剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒Salk病毒株1型的存在量为10D单位、2型的存在量为2D单位、3型的存在量为10或16D单位；IRV的存在量为10μg；b型流感嗜血杆菌PRP-CRM197缀合物的量为10μg的PRP含量；乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的存在量为12.5μg；铝含量的存在量不超过0.9mg；2-苯氧基乙醇的存在量为3.25mg；L-组氨酸的存在量为1.55mg的范围和WFI。
在本发明的第十七实施方案中，多价疫苗组合物是全液体七价疫苗制剂。全液体七价疫苗制剂均包含白喉类毒素(D)；破伤风类毒素(T)；灭活的全细胞百日咳博德特氏菌抗原(wP)；灭活的I、II和III型脊髓灰质炎病毒sabin病毒株；灭活的轮状病毒(IRV)；和b型流感嗜血杆菌PRP-TT缀合物；乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和其他赋形剂如基于铝的佐剂(磷酸铝、氢氧化铝)、2-苯氧基乙醇、L-组氨酸和WFI。
在第十七实施方案的一个优选方面，多价疫苗组合物是七价疫苗组合物，其中D的存在量为1-50Lf的范围；T的存在量为1-30Lf的范围；wP的存在量为10-50IOU的范围；剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒sabin病毒株1型的存在量为1-20D单位的范围、2型的存在量为1-20D单位的范围、3型的存在量为1-20D单位的范围；IRV的存在量为1-30μg的范围；b型流感嗜血杆菌PRP-TT缀合物的量为2-20μg的PRP含量的范围；乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的存在量为5-30μg的范围；铝含量(Al 3+)的存在量为0.4-1.5mg的范围；2-苯氧基乙醇的存在量为2-6mg的范围；L-组氨酸的存在量为0.5-5mg的范围和WFI。
在第十七实施方案的一个最优选的方面，多价疫苗组合物是七价疫苗组合物，其中D的存在量为22.5Lf；T的存在量为7.5Lf；wP的存在量为15IOU；剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒sabin病毒株1型的存在量为5D单位、2型的存在量为16D单位、3型的存在量为10D单位；IRV的存在量为10μg；b型流感嗜血杆菌PRP-TT缀合物的量为5μg的PRP含量；乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的存在量为12.5μg；铝含量的存在量不超过0.9mg；2-苯氧基乙醇的存在量为3.25mg；L-组氨酸的存在量为1.55mg的范围和WFI。
在本发明的第十八实施方案中，多价疫苗组合物是全液体七价疫苗制剂。全液体七价疫苗制剂均包含白喉类毒素(D)；破伤风类毒素(T)；灭活的全细胞百日咳博德特氏菌抗原(wP)；灭活的I型、II型和III型脊髓灰质炎病毒sabin病毒株；灭活的轮状病毒(IRV)；b型流感嗜血杆菌PRP-CRM197缀合物；乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和其他赋形剂如基于铝的佐剂(磷酸铝、氢氧化铝)、2-苯氧基乙醇、L-组氨酸和WFI。
在第十八实施方案的一个优选方面，多价疫苗组合物是七价疫苗组合物，其中D的存在量为1-50Lf的范围；T的存在量为1-30Lf的范围；wP的存在量为10-50IOU的范围；剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒的sabin病毒株1型的存在量为1-20D抗原单位的范围、2型的存在量为1-20D抗原单位的范围、3型的存在量为1-20D抗原单位的范围；IRV的存在量为1-30μg的范围；b型流感嗜血杆菌PRP-CRM197缀合物的量为2-20μg的PRP含量的范围；乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的存在量为5-30μg的范围；铝含量(Al 3+)的存在量为0.4-1.5mg的范围；2-苯氧基乙醇的存在量为2-6mg的范围；L-组氨酸的存在量为0.5-5mg的范围和WFI。
在第十八实施方案的一个最优选方面，多价疫苗组合物是七价疫苗组合物，其中D的存在量为22.5Lf；T的存在量为7.5Lf；wP的存在量为15IOU；剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒sabin病毒株1型的存在量为5D抗原单位、2型的存在量为16D抗原单位、3型的存在量为10D抗原单位；IRV的存在量为10μg；b型流感嗜血杆菌PRP-CRM197缀合物的量为10μg的PRP含量；乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的存在量为12.5μg；铝含量的存在量不超过0.9mg；2-苯氧基乙醇的存在量为3.25mg；L-组氨酸的存在量为1.55mg的范围和WFI。
在本发明的第十九实施方案中，联合疫苗组合物/制剂包含一种或多种选自由以下的防腐剂：苄索氯铵(Phemerol)、硫柳汞、苯酚和2-苯氧基乙醇(2-PE)。更优选地，联合疫苗组合物/制剂包含2-苯氧基乙醇(2-PE)作为防腐剂。
在本发明的第二十实施方案中，联合疫苗组合物/制剂含有一种或多种药学上可接受的赋形剂，所述赋形剂选自由以下：糖和多元醇、表面活性剂、聚合物、盐、氨基酸、pH调节剂等。
在第二十实施方案的第一方面中，糖和多元醇包括蔗糖、海藻糖、乳糖、麦芽糖、半乳糖、甘露醇、山梨糖醇、甘油等。在第二十实施方案的第二方面中，表面活性剂包括非离子表面活性剂，例如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80等。在第二十实施方案的第三方面中，聚合物包括葡聚糖、羧甲基纤维素、透明质酸、环糊精等。盐的实例可包括NaCl、MgCl2、KCl、CaCl2等。在第二十实施方案的第四方面中，氨基酸包括精氨酸、甘氨酸、组氨酸等。在第二十实施方案的第五方面中，pH调节剂包括氢氧化钠、盐酸等。
在本发明的第二十一实施方案中，最终联合疫苗组合物/制剂的pH在pH6.0至pH7.5的范围内；更优选在pH 6.2至pH 7.2的范围内；并且最优选在pH6.4至pH6.6的范围内。
实施例
实施例1：剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒(Salk/Sabin)抗原的制备
印度血清研究所(Serum Institute of India)根据以下方案已开发灭活的脊髓灰质炎病毒的灭活和吸附：
·CCL81-VERO(猴肾)细胞用作宿主细胞，用于生长脊髓灰质炎病毒(即sabin和salk病毒株)。
·IPV的纯化
·使用具有100KDa盒(0.5m2)的切向流过滤系统将澄清的收获库浓缩至10X，并且然后用磷酸盐缓冲剂(40mM，pH:7.0)渗滤3倍的收获体积。
·浓缩物通过离子交换层析(EEC)纯化。使用Akta explorer(OE Healthcare)将10X TFF浓缩物通过填充在柱xk-26中的DEAE Sepharose快速流(弱阴离子交换器)。带负电荷的杂质与柱结合，而脊髓灰质炎病毒用磷酸盐缓冲剂40mM而被收集于流出物(flowthrough)。
·为了在非常麻烦的灭活过程(13天)中使抗原损失最小化，将纯化的病毒库用TFF系统[100KDa，0.1m2)从磷酸盐缓冲剂缓冲交换至TRIS缓冲剂(40mM，pH：7)。将纯化的病毒库与三倍体积的tris缓冲剂交换。
·IPV的灭活
·加入含有0.5％甘氨酸的10X浓缩M-199，以达到最终浓度1X。将灭活剂福尔马林(0.025％)加入到纯化的病毒原液中，同时恒定混合。灭活在37℃进行同时连续搅拌13天，包括在第7天和第13天进行0.22u过滤。
结果和结论
当在磷酸盐缓冲剂存在下特别进行甲醛灭活方法时，观察到Sabin和Salk病毒株显著的D-抗原损失，而发现在TRIS缓冲剂存在下进行甲醛灭活导致D-抗原的最小损失。
Figure BDA0001978363770000221
实施例2：可注射热灭活的轮状病毒(IRV)抗原的制备
使用2010年5月12日提交的名称为“New Human Rotavirus Strains andVaccinea”的PCT专利申请No.PCT/US2010/034537中公开的轮状病毒株(CDC-9)；2008年9月4日提交的名称为“Thermal Inactivation of Rotavirus”的PCT专利申请No.PCT/US2008/075239。
疾病控制和预防中心(Centers for Disease Control，CDC)已开发了一种轮状病毒灭活方法。CDC还已开发了用于测试轮状病毒特异性IgG和中和抗体的测定。
·使用Vero细胞(CCL-81)作为宿主细胞培养轮状病毒(CDC-9病毒株)，并使用30+2μ过滤器澄清收获物以除去细胞碎片。
·用Benzonase(5000单位每升)处理澄清的收获物，在37℃连续搅拌孵育4小时。
·使用'HBSS(Hanks平衡盐溶液)+10％山梨糖醇'和100KDa盒，将Benzonase处理的原液进一步10X浓缩并进行4X渗滤。
·使用稀释缓冲剂透析渗滤的原液，并使用亲和层析(cellufine硫酸树脂)进一步纯化。
·使用60℃加热5小时进行纯化的CDC-9的灭活，两小时后更换一次容器。将灭活的CDC-9原液储存在-80℃直至进一步使用。
实施例3：白喉类毒素的纯化
使用凝胶过滤层析纯化白喉类毒素，方法参数设定如下：
表1：方法参数
Figure BDA0001978363770000222
Figure BDA0001978363770000231
合并No 6至11级分并分析单体含量(参见图1)。
结果与解释：
使用上述相同参数进行多次运行。CRM197原液浓缩物用作标记物以比较％单体含量。单体CRM197能被认为是最纯净形式的DT。发现单体含量百分比在80-90％的范围内。
表2：获得的纯化DT的％回收和单体含量
Figure BDA0001978363770000232
实施例4：破伤风类毒素的纯化
使用凝胶过滤层析/HIC(Phenyl Sepharose)纯化破伤风类毒素，其方法参数设定如下：
表3：方法参数
结果：
使用上述相同参数进行多次运行。发现单体含量百分比在80-90％的范围内。
实施例5：Hib PRP-蛋白质缀合物的制备
PRP多糖如下产生：
b型流感嗜血杆菌细菌在一定温度、搅动和光密度等条件下在半合成培养基中生长。PRP是外膜结合多糖，在搅动条件下在发酵过程中释放到培养基中。发酵的生物质分离的发酵液含有粗PRP，其使用洗涤剂N,N,N-三甲基-1-十六烷基铵溴化物通过沉淀来再次纯化，然后进行乙醇梯度沉淀和过滤。根据WHO、BP、EP、IP等测试最终纯化的PRP多糖是否符合规格如内毒素、核酸和蛋白质。
Hib PRP-蛋白质缀合物如下制备；
通过将PRP多糖与CRM 197载体蛋白偶联来制备多糖缀合物。选择以1：1.5：1比率的反应物(即PRP多糖、CDAP和CRM197)的输入比率用于缀合反应。在缀合期间，使用碱性缓冲剂(0.4M Carb-Bicarbonate缓冲剂，pH 10.5±0.1)使纯化的PRP多糖解聚，以获得尺寸减小的PRP。使用CDAP(1-氰基-4-二甲基氨基吡啶鎓四氟硼酸盐)化学处理尺寸减小的PRP进行氰基化以形成氰酸酯。因此，活化的氰基化多糖可以与载体蛋白CRM197上的氨基直接偶联。通过HPLC确认Hib缀合物的转化程度。通过实现所需的缀合物转化水平来淬灭缀合反应，其中Hib缀合物的转化规格不低于65％，然后通过加入甘氨酸(2M)中和缀合物反应。Hib PRP-CRM197缀合物在超滤膜过滤器(300kDa和100kDa)上纯化，以去除非反应性试剂和副产物。将最终的缀合物原液以0.22μm过滤并在2-8℃储存。
获得的Hib PRP-CRM197缀合物抗原的质量特征如下：
Figure BDA0001978363770000251
实施例6：二价(IPV-IRV疫苗)组合物
印度血清研究所根据以下方案已开发了包含剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒和灭活的轮状病毒的二价组合物：
二价疫苗的组合物如下
表4二价组合物
Figure BDA0001978363770000252
Figure BDA0001978363770000261
实施例7：二价(IPV-IRV)疫苗的制备
二价(IPV-IRV)疫苗是按照以下程序制备的：
·IPV的吸附
·在容器中取所需体积的Al(OH)3。
·加入所需体积的单价Salk/Sabin IPV原液并用稀释剂制成最终体积
·用1N NaOH/1N HCl将最终制剂pH调节至6.5。
·将单价制剂原液在磁力搅拌器/振荡器上于2-8℃保持过夜。
·IRV的吸附
·在容器中取所需体积的Al(OH)3。
·加入所需体积的IRV原液，并用稀释剂制成最终体积。
·用1N NaOH/1N HCl将最终制剂pH调节至6.5。
·将单价制剂原液保持在磁力搅拌器/振荡器上于2-8℃保持过夜。
·二价(EPV-IRV)疫苗的配制
·混合IPV和IRV制剂的单价原液。
·在振荡器上于2-8℃保持2小时。
·将最终制剂储存在2-8℃直至进一步使用。
实施例8：二价疫苗的效力测试
通过使用微中和测定测试血清样品针对脊髓灰质炎病毒Sabin 1、2和3型以及轮状病毒株Wa的中和抗体来检测二价疫苗的效力。以log2格式报告针对脊髓灰质炎病毒的中和滴度。中和滴度为2.5被认为是阴性。对于轮状病毒，中和滴度<20被认为是阴性的。
表5
Figure BDA0001978363770000271
表6
Figure BDA0001978363770000281
表7
Figure BDA0001978363770000282
Figure BDA0001978363770000291
结果和解释：
1.与第0天相比，二价疫苗(IPV+IRV)在第42天产生显著更高的血清转化。
2.与商业IPV相比，在SIIL开发的具有5:16:10DU和明矾的单剂量的三价SabinIPV产生更好的血清转化。
3.与商业IPV相比，在SIIL开发的具有2.5：8：5DU与明矾的双倍剂量的三价SabinIPV产生优异的血清转化。
4.与商业IPV相比，在SIIL配制的具有8:2:5DU与明矾的单剂量的三价Salk IPV产生更好的血清转化。
5.与商业IPV相比，在SIIL配制的具有5:2:5DU与明矾的双倍剂量的三价SabinIPV产生优异的血清转化。
实施例9：包含剂量减少的IPV、灭活的轮状病毒、D、T、wP和Hib PRP-蛋白质缀合物的六价联合疫苗组合物如下所示：
表8：具有剂量减少的Salk IPV的六价制剂-1
Figure BDA0001978363770000292
表9：具有剂量减少的Salk IPV的六价制剂-2
Figure BDA0001978363770000302
表10：具有剂量减少的Sabin IPV的六价制剂-3
Figure BDA0001978363770000303
Figure BDA0001978363770000311
表11：具有剂量减少的Sabin IPV的六价制剂-4
Figure BDA0001978363770000312
实施例10：制备包含剂量减少的IPV、灭活的轮状病毒、D、T、wP和Hib PRP-蛋白缀合物的六价联合疫苗组合物的过程如下：
a)将IPV(Sabin/Salk病毒株)原液和IRV原液分别吸附在氢氧化铝上，然后将pH调节至6.2-6.6。
b)将D吸附在磷酸铝上，然后将pH调节至5.5-6.5，加入T并在室温搅动混合18-24小时。
c)将步骤a和b中获得的溶液混合，然后将pH调节至6.4-6.6并在室温搅动60分钟。
d)将wP抗原和组氨酸加入上述混合物中，然后搅拌60分钟并在2-8℃静置条件下放置过夜。
e)在2-8℃将Hib PRP缀合物和2-PE加入到步骤d中获得的混合物中，然后将pH调节至6.4-6.6。
f)将NaCl和WFI(q.s.)加入到步骤e中获得的混合物中，然后搅动2小时。
通过使用新的缀合方法制备的并随后在稳定剂存在下在低温混合的Hib PRP-载体蛋白缀合物显示出具有最小的游离PRP释放的更高的稳定性以及改进的免疫原性。此外，在混合的后期添加全细胞百日咳抗原使基于水解的降解最小化并提供稳定的和免疫原性的wP抗原。
实施例11：包含剂量减少的IPV、灭活的轮状病毒、D、T、wP、HBsAg和Hib PRP-蛋白质缀合物的七价联合疫苗组合物如下所示：
表12：具有剂量减少的Salk IPV的七价制剂-5
Figure BDA0001978363770000321
表7：具有剂量减少的Salk IPV的七价制剂-6
Figure BDA0001978363770000341
表8：具有剂量减少的Sabin IPV的七价制剂-7
Figure BDA0001978363770000342
表9：具有剂量减少的Sabin IPV的七价制剂-8
实施例12：制备包含剂量减少的IPV、灭活的轮状病毒、D、T、wP、HBsAg和Hib PRP-蛋白质缀合物的七价联合疫苗组合物的过程如下：
a)将IPV(Sabin/Salk株)原液和IRV原液分别吸附在氢氧化铝上，然后将pH调节至6.2-6.6。
b)将HBsAg吸附在磷酸铝上，然后将pH调节至6.0-6.5。
c)将D吸附在磷酸铝上，然后将pH调节至5.5-6.5并加入T。
d)将步骤b和c中获得的溶液混合，然后在室温搅动混合18-24小时。
e)加入上述混合物[如步骤a和d中获得的]，然后将pH调节至6.4-6.6并在室温搅动60分钟。
f)将wP抗原和组氨酸加入上述混合物中，然后搅动60分钟并在2-8℃静置条件下放置过夜。
g)在2-8℃将Hib PRP蛋白质缀合物和2-PE加入步骤f中获得的混合物中，然后将pH调节至6.4-6.6。
h)将NaCl和WFI(q.s.)加入到步骤g中获得的混合物中，然后搅动2小时。
通过使用新的缀合方法制备的随后在稳定剂存在下在低温混合的Hib PRP-载体蛋白缀合物显示出具有最小的游离PRP释放的更高的稳定性以及改进的免疫原性。此外，在混合的后期添加全细胞百日咳抗原使基于水解的降解最小化并提供稳定的和免疫原性的wP抗原。

Claims (39)

1.一种联合疫苗，其包含：
i)灭活的选自Salk或Sabin病毒株的脊髓灰质炎病毒抗原；
ii)灭活的轮状病毒抗原；
iii)任选地，一种或多种选自以下的抗原：白喉类毒素、破伤风类毒素、全细胞百日咳、HBsAg、Hib PRP-载体蛋白缀合物、脑膜炎奈瑟氏球菌(Neisseria meningitidis)A抗原、脑膜炎奈瑟氏球菌C抗原、脑膜炎奈瑟氏球菌W-135抗原、脑膜炎奈瑟氏球菌Y抗原、脑膜炎奈瑟氏球菌X抗原、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)抗原、脑膜炎奈瑟氏球菌B小粒或纯化抗原、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)抗原、炭疽、BCG、甲型肝炎抗原、乙型肝炎抗原、人乳头瘤状病毒、伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)抗原、无细胞百日咳、修饰的腺苷酸环化酶、疟疾抗原(RTS,S)、麻疹、腮腺炎、风疹、登革热、寨卡病毒、埃博拉病毒、切昆贡亚热、日本脑炎、腹泻抗原；和
iv)一种或多种选自铝盐的佐剂，例如氢氧化铝或磷酸铝，
其中所述脊髓灰质炎病毒抗原是剂量减少的组合物，其具有至少一种选自Sabin的1型、2型或3型；或Salk的Mahoney 1型、MEF 2型或Saukett 3型的灭活的脊髓灰质炎病毒病毒株。
2.如权利要求1所述的疫苗，其中所述剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒抗原吸附在具有Al3+浓度为0.1-2.5mg/剂和至少70％吸附百分比的氢氧化铝佐剂上。
3.如权利要求2所述的疫苗，其中所述剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒抗原吸附在具有Al 3+浓度为0.1-0.7mg/剂和至少90％吸附百分比的氢氧化铝佐剂上。
4.如权利要求1所述的疫苗，其中所述剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒抗原选自以下：
i)具有选自5-16-10D-抗原单位的Sabin 1型、2型、3型组合的剂量组合物；
ii)具有选自2.5-8-5D-抗原单位的Sabin 1型、2型、3型组合的剂量组合物；
iii)具有选自5-8-10D-抗原单位的Sabin 1型、2型、3型组合的剂量组合物；
iv)具有选自7.5-16-10D-抗原单位的Salk 1型、2型、3型组合的剂量组合物；
v)具有选自8-2-5D-抗原单位的Salk 1型、2型、3型组合的剂量组合物；
vi)具有选自10-2-5D-抗原单位的Salk 1型、2型、3型组合的剂量组合物；
vii)具有选自10-2-10D-抗原单位的Salk 1型、2型、3型组合的剂量组合物；
viii)具有选自10-2-12D-抗原单位的Salk 1型、2型、3型组合的剂量组合物；
ix)具有选自10-2-16D-抗原单位的Salk 1型、2型、3型组合的剂量组合物；
x)具有选自7.5-16-10D-抗原单位的Salk 1型、2型、3型组合的剂量组合物；
xi)具有选自5-2-5D-抗原单位的Salk 1型、2型、3型组合的剂量组合物。
5.如权利要求1所述的疫苗，其中所述轮状病毒抗原是选自CDC-9、CDC-66或任何其它灭活的轮状病毒病毒株的可注射的热灭活的轮状病毒，并且吸附在具有Al3+浓度为0.1-2.5mg/剂并提供至少70％的吸附百分比的氢氧化铝佐剂上。
6.如权利要求5所述的疫苗，其中所述轮状病毒抗原是热灭活的CDC-9轮状病毒病毒株，并且吸附在具有Al3+浓度为0.1-0.5mg/剂并提供至少90％的吸附百分比的氢氧化铝佐剂上。
7.如权利要求1所述的疫苗，其中所述D和T抗原吸附在磷酸铝佐剂上。
8.如权利要求1所述的疫苗，其中使用凝胶渗透层析纯化所述D和T，所述凝胶渗透层析使用的树脂选自以下：Sephacryl S-300HR、PLgel、Sephacryl S-200HR、Sephadex、Bio-Gel(交连聚丙烯酰胺琼脂糖凝胶)和Styragel。
9.如权利要求1所述的疫苗，其中所述百日咳抗原是无细胞抗原，其包含至少一种或多种选自以下的抗原：修饰的腺苷酸环化酶、百日咳类毒素(PT)、丝状血凝素(FHA)、百日咳杆菌粘附素(P69或PPN)、菌毛蛋白(FTM 1、2和3)。
10.如权利要求1所述的疫苗，其中所述百日咳抗原是灭活的全细胞百日咳，其包含百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)菌株134、509、25525和6229中的一种或多种。
11.如权利要求1所述的疫苗，其中Hib抗原是使用氰基化缀合化学与载体蛋白缀合的Hib PRP多糖，其中所述氰基化试剂选自：1-氰基-4-二甲氨基吡啶鎓四氟硼酸盐(CDAP)、1-氰基-4-吡咯烷基吡啶鎓四氟硼酸盐(CPPT)、1-氰基咪唑(即1-Cl)、1-氰基苯并三唑(1-CBT)或2-氰基哒嗪-3(2H)酮(2-CPO)；且载体蛋白选自以下：CRM 197、白喉类毒素、脑膜炎奈瑟氏球菌外膜复合物、破伤风类毒素片段C、百日咳类毒素、流感嗜血杆菌蛋白D、大肠杆菌LT、大肠杆菌ST和来自铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)的外毒素A、外膜复合物c(OMPC)、孔蛋白、转铁蛋白结合蛋白、肺炎球菌溶血素、肺炎球菌表面蛋白A(PspA)、肺炎球菌表面粘附素A(PsaA)、肺炎球菌PhtD、肺炎球菌表面蛋白BVH-3和BVH-11、炭疽杆菌(Baccillus anthracis)的保护性抗原(PA)和炭疽杆菌的解毒水肿因子(EF)和致死因子(LF)、卵清蛋白、匙孔虫戚血蓝蛋白(KLH)、人血清白蛋白、牛血清白蛋白(BSA)和结核菌素(PPD)的纯化蛋白衍生物、合成肽、热休克蛋白、百日咳蛋白、细胞因子、淋巴因子、激素、生长因子、包含来自多种病原体衍生抗原的多种人CD4+T细胞表位的人工蛋白质例如N19、铁摄取蛋白、来自艰难梭菌(C.difficile)的毒素A或B和无乳链球菌(S.agalactiae)蛋白。
12.如权利要求1所述的疫苗，其中HBsAg抗原是乙型肝炎的表面抗原，并且单独吸附在磷酸铝上。
13.如权利要求1所述的疫苗，其中疫苗包含至少一种选自以下的防腐剂：2-苯氧基乙醇、苯酚、硫柳汞、甲醛。
14.如权利要求1-6所述的疫苗，其中所述联合疫苗是二价疫苗组合物，其包含剂量减少的IPV和灭活的IRV。
15.如权利要求14所述的疫苗，其中基于Salk病毒株的IPV的1型、2型和3型的各浓度不超过20D抗原单位。
16.如权利要求1所述的疫苗，其中基于Salk病毒株的IPV的1型、2型和3型的剂量浓度选自i)8D抗原单位、2D抗原单位、5D抗原单位；ii)10D抗原单位、2D抗原单位、10D抗原单位；和iii)10D抗原单位、2D抗原单位、16D抗原单位。
17.如权利要求14所述的疫苗，其中基于Sabin病毒株的IPV的1型、2型或3型的各浓度不超过20D抗原单位。
18.如权利要求17所述的疫苗，其中基于Sabin病毒株的IPV的1型、2型和3型的浓度是5-16-10D抗原单位。
19.如权利要求14-18所述的疫苗，其中基于Salk或Sabin病毒株的IPV的1型、2型和3型的浓度是如权利要求4所述的剂量。
20.如权利要求14所述的疫苗，其中灭活的轮状病毒的浓度为10μg/剂。
21.如权利要求14所述的疫苗，其中明矾(Al 3+)用作佐剂，其浓度不大于1mg/剂。
22.如权利要求1所述的疫苗，其包含D、T、wP、Hib B、IPV和IRV，其中D的存在量为1-50Lf的范围；T的存在量为1-30Lf的范围；wP的存在量为10-50IOU的范围；剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒Salk病毒株1型的存在量为1-20D抗原单位的范围、2型的存在量为1-20D抗原单位的范围、3型的存在量为1-20D抗原单位的范围；IRV的存在量为1-30μg的范围；b型流感嗜血杆菌PRP-蛋白质缀合物的量为2-20μg的PRP含量的范围；总铝含量(Al 3+)的存在量为0.4-1.5mg的范围；2-苯氧基乙醇的存在量为2-6mg的范围；L-组氨酸的存在量为0.5-5mg的范围。
23.如权利要求22所述的疫苗，其包含D、T、wP、Hib B、IPV和IRV，其中D的存在量为约22.5Lf；T的存在量为约7.5Lf；wP的存在量为约15IOU；剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒Salk病毒株1型的存在量为约10D抗原单位、2型的存在量为约2D抗原单位、3型的存在量为约10或16D抗原单位；IRV的存在量为约10μg；b型流感嗜血杆菌PRP-TT缀合物的存在量为约5μg的PRP含量；总铝含量(Al3+)的存在量不超过0.9mg；2-苯氧基乙醇的存在量为约3.25mg；L-组氨酸的存在量为约1.55mg。
24.如权利要求22所述的疫苗，其包含D、T、wP、Hib B、IPV和IRV，其中D的存在量为约22.5Lf；T的存在量为约7.5Lf；wP的存在量为约15IOU；剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒Salk病毒株1型的存在量为约10D抗原单位、2型的存在量为约2D抗原单位、3型的存在量为约10或16D抗原单位；IRV的存在量为约10μg；b型流感嗜血杆菌PRP-CRM197缀合物的存在量为约10μg的PRP含量；总铝含量(Al3+)的存在量不超过0.9mg；2-苯氧基乙醇的存在量为约3.25mg；L-组氨酸的存在量为约1.55mg。
25.如权利要求1所述的疫苗，其包含D、T、wP、Hib B、IPV和IRV，其中D的存在量为1-50Lf的范围；T的存在量为1-30Lf的范围；wP的存在量为10-50IOU的范围；剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒Sabin病毒株1型的存在量为1-20D抗原单位的范围、2型的存在量为1-20D抗原单位的范围、3型的存在量为1-20D抗原单位的范围；IRV的存在量为1-30μg的范围；b型流感嗜血杆菌PRP-蛋白质缀合物的量为2-20μg的PRP含量的范围；总铝含量(Al 3+)的存在量为0.4-1.5mg的范围；2-苯氧基乙醇的存在量为2-6mg的范围；L-组氨酸的存在量为0.5-5mg的范围。
26.如权利要求25所述的疫苗，其包含D、T、wP、Hib B、IPV和IRV，其中D的存在量为约22.5Lf；T的存在量为约7.5Lf；wP的存在量为约15IOU；剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒Sabin病毒株1型的存在量为约5D抗原单位、2型的存在量为约16D抗原单位、3型的存在量为约10D抗原单位；IRV的存在量为约10μg；b型流感嗜血杆菌PRP-TT缀合物的存在量为约5μg的PRP含量；总铝含量(Al3+)的存在量为不超过0.9mg；2-苯氧基乙醇的存在量为约3.25mg；L-组氨酸的存在量为约1.55mg。
27.如权利要求25所述的疫苗，其包含D、T、wP、Hib B、IPV和IRV，其中D的存在量为约22.5Lf；T的存在量为约7.5Lf；wP的存在量为约15IOU；剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒Sabin病毒株1型的存在量为约5D抗原单位、2型的存在量为约16D抗原单位、3型的存在量为约10D抗原单位；IRV的存在量为约10μg；b型流感嗜血杆菌PRP-CRM197缀合物的存在量为约10μg的PRP含量；总铝含量(Al 3+)的存在量为不超过0.9mg；2-苯氧基乙醇的存在量为约3.25mg；L-组氨酸的存在量为约1.55mg。
28.如权利要求1所述的疫苗，其包含D、T、wP、Hib B、HBsAg、IPV和IRV，其中D的存在量为1-50Lf的范围；T的存在量为1-30Lf的范围；wP的存在量为10-50IOU的范围；剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒Salk病毒株1型的存在量为1-20D抗原单位的范围、2型的存在量为1-20D抗原单位的范围、3型的存在量为1-20D抗原单位的范围；IRV的存在量为1-30μg的范围；b型流感嗜血杆菌PRP-蛋白质缀合物的量为2-20μg的PRP含量的范围；乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的量为5-30μg的范围；总铝含量(Al3+)的存在量为0.4-1.5mg的范围；2-苯氧基乙醇的存在量为2-6mg的范围；L-组氨酸的存在量为0.5-5mg的范围。
29.如权利要求28所述的疫苗，其包含D、T、wP、Hib B、HBsAg、IPV和IRV，其中D的存在量为约22.5Lf；T的存在量为约7.5Lf；wP的存在量为约15IOU；剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒Salk病毒株1型的存在量为约10D抗原单位、2型的存在量为约2D抗原单位、3型的存在量为约10或16D抗原单位；IRV的存在量为约10μg；b型流感嗜血杆菌PRP-TT缀合物的存在量为约5μg的PRP含量；乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的存在量为约12.5μg；总铝含量(Al3+)的存在量为不超过0.9mg；2-苯氧基乙醇的存在量为3.25mg；L-组氨酸的存在量为约1.55mg。
30.如权利要求28所述的疫苗，其包含D、T、wP、Hib B、HBsAg、IPV和IRV，其中D的存在量为约22.5Lf；T的存在量为约7.5Lf；wP的存在量为约15IOU；剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒Salk病毒株1型的存在量为约10D抗原单位、2型的存在量为约2D抗原单位、3型的存在量为约10或16D抗原单位；IRV的存在量为约10μg；b型流感嗜血杆菌PRP-CRM197缀合物的存在量为约10μg的PRP含量；乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的量为约12.5μg；总铝含量(Al3+)的存在量为不超过0.9mg；2-苯氧基乙醇的存在量为约3.25mg；L-组氨酸的存在量为约1.55mg。
31.如权利要求1所述的疫苗，其包含D、T、wP、Hib B、HBsAg、IPV和IRV，其中D的存在量为1-50Lf的范围；T的存在量为1-30Lf的范围；wP的存在量为10-50IOU的范围；剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒Sabin病毒株1型的存在量为1-20D抗原单位的范围、2型的存在量为1-20D抗原单位、3型的存在量为1-20D抗原单位的范围；IRV的存在量为1-30μg的范围；b型流感嗜血杆菌PRP-蛋白质缀合物的量为2-20μg的PRP含量的范围；乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的量为5-30μg的范围；总铝含量(AT3+)的存在量为0.4-1.5mg的范围；2-苯氧基乙醇的存在量为2-6mg的范围；L-组氨酸的存在量为0.5-5mg的范围。
32.如权利要求31所述的疫苗，其包含D、T、wP、Hib B、HBsAg、IPV和IRV；其中D的存在量为约22.5Lf；T的存在量为约7.5Lf；wP的存在量为约15IOU；剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒Sabin病毒株1型的存在量为约5D抗原单位、2型的存在量为约16D抗原单位、3型的存在量为约10D抗原单位；IRV的存在量为约10μg；b型流感嗜血杆菌PRP-TT缀合物的存在量为约5μg的PRP含量；乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的量为约12.5μg；总铝含量(Al3+)的存在量为不超过0.9mg；2-苯氧基乙醇的存在量为约3.25mg；L-组氨酸的存在量为约1.55mg。
33.如权利要求31所述的疫苗，其包含D、T、wP、Hib B、HBsAg、IPV和IRV；其中D的存在量为约22.5Lf；T的存在量为约7.5Lf；wP的存在量为约15IOU；剂量减少的灭活的脊髓灰质炎病毒Sabin病毒株1型的存在量为约5D抗原单位、2型的存在量为约16D抗原单位、3型的存在量为约10D抗原单位；IRV的存在量为约10μg；b型流感嗜血杆菌PRP-CRM197缀合物的存在量为约10μg的PRP含量；乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的量为约12.5μg；总铝含量(Al3+)的存在量为不超过0.9mg；2-苯氧基乙醇的存在量为约3.25mg；L-组氨酸的存在量为约1.5mg。
34.如权利要求1-33所述的疫苗，其中所述IPV和IRV抗原分别吸附在氢氧化铝上；且其他抗原未吸附或吸附在铝盐上，所述铝盐选自磷酸铝、氢氧化铝及其组合的一种或多种。
35.如权利要求1-33所述的疫苗，其中所述疫苗任选地包含选自以下的赋形剂：组氨酸、蔗糖、甘氨酸和氯化钠；更优选浓度范围为5-40mM的组氨酸，最优选浓度为20mM的组氨酸。
36.一种制备如权利要求1和14所述的联合疫苗的方法，包括以下步骤：
a)将IPV(Sabin/Salk病毒株)原液和IRV原液分别吸附在氢氧化铝上；
b)混合IPV和IRV的单价原液，并将混合物在振荡器上于2-8℃保持2小时。
37.一种制备如权利要求1和22-27所述的(六价)联合疫苗的方法，包括以下步骤：
a)将IPV(Sabin/Salk病毒株)原液和IRV原液分别吸附在氢氧化铝上，然后将pH调节至6.2-6.6，更优选6.5；
b)将D吸附在磷酸铝上，然后将pH调节至5.5-6.5并加入T，并在室温搅动混合18-24小时；
c)加入上述混合物[如步骤a和步骤b中获得的]，然后将pH调节至6.4-6.6并在室温搅动60分钟；
d)将wP抗原和稳定剂加入上述混合物中，然后搅动60分钟，并在2-8℃静置条件下放置过夜；
e)在2-8℃将Hib PRP缀合物和2-PE加入到步骤d中获得的混合物中，然后将pH调节至6.4-6.6；
f)将NaCl和WFI(q.s.)加入到步骤e中获得的混合物中，然后搅动2小时。
38.一种制备如权利要求1和28-33所述的(七价)联合疫苗的方法，包括以下步骤：
a)将IPV(Sabin/Salk病毒株)原液和IRV原液分别吸附在氢氧化铝上，然后将pH调节至6.2-6.6
b)将HBsAg吸附在磷酸铝上，然后将pH调节至6.0-6.5；
c)将D吸附在磷酸铝上，然后将pH调节至5.5-6.5并加入T；
d)通过在室温搅动18-24小时，将步骤b和c中获得的混合物混合；
e)加入上述混合物[如步骤a和d中获得的]，然后将pH调节至6.4-6.6并在室温搅动60分钟；
f)将wP抗原和稳定剂加入上述混合物中，然后搅动60分钟，并在2-8℃静置条件下放置过夜；
g)在2-8℃将Hib PRP缀合物和2-PE加入到步骤d中获得的混合物中，然后将pH调节至6.4-6.6
h)将NaCl和WFI(q.s.)加入到步骤e中获得的混合物中，然后搅动2小时。
39.如权利要求1-38所述的疫苗，其中i)通过使用凝胶渗透层析获得的所述纯化的白喉类毒素和破伤风类毒素具有至少80％的单体含量；ii)通过使用氰基化缀合方法制备的并随后在赋形剂存在下在低温混合的所述Hib PRP-载体蛋白缀合物显示出具有最小的游离PRP释放的更高的稳定性以及改进的免疫原性；iii)在混合的后期加入的所述全细胞百日咳抗原使基于水解的降解最小化并提供稳定的和免疫原性wP抗原。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2776196C1 (ru) * 2021-08-24 2022-07-14 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Институт экспериментальной медицины" (ФГБНУ "ИЭМ") Штамм вируса гриппа ИнфлюБакт-H7/PspA для производства комбинированной вакцины против вируса гриппа А и бактериальной пневмонии, вызываемой Streptococcus pneumoniae

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR112019003419A2 (pt) * 2016-08-26 2019-05-21 Serum Institute Of India Private Limited composição de vacina multivalente
US11793873B2 (en) 2017-05-10 2023-10-24 University Of Massachusetts Bivalent dengue/hepatitis B vaccines
JOP20190242A1 (ar) * 2018-10-12 2020-04-12 Serum Institute Of India Pvt Ltd تركيبة لقاح توليفي تشمل فيروس شلل الأطفال ذو جرعة مخفّضة خاملة التنشيط وطريقة لتحضيرها
JOP20200214A1 (ar) 2019-09-03 2021-03-03 Serum Institute Of India Pvt Ltd تركيبات مولدة للمناعة ضد الأمراض المعوية وطرق لتحضيرها

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008028956A1 (en) * 2006-09-07 2008-03-13 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vaccine
CN102196817A (zh) * 2008-10-24 2011-09-21 万能药生物有限公司 具有全细胞百日咳的联合疫苗
CN102695522A (zh) * 2009-05-12 2012-09-26 美国政府(由卫生和人类服务部、疾病控制和预防中心的部长所代表) 新的人轮状病毒株和疫苗
CN103442730A (zh) * 2011-01-05 2013-12-11 巴拉特生物技术国际有限公司 组合七价疫苗
WO2016063291A1 (en) * 2014-10-07 2016-04-28 Serum Institute Of India Private Limited Improved methods for enterovirus inactivation, adjuvant adsorption and dose reduced vaccine compositions obtained thereof

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2605179A1 (en) 2005-04-18 2006-10-26 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Expressing hepatitis b virus surface antigen for vaccine preparation
ES2681698T3 (es) * 2011-03-02 2018-09-14 Glaxosmithkline Biologicals Sa Vacunas de combinación con menores dosis de antígeno y/o adyuvante
BR112019003419A2 (pt) * 2016-08-26 2019-05-21 Serum Institute Of India Private Limited composição de vacina multivalente

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008028956A1 (en) * 2006-09-07 2008-03-13 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vaccine
CN102196817A (zh) * 2008-10-24 2011-09-21 万能药生物有限公司 具有全细胞百日咳的联合疫苗
CN102695522A (zh) * 2009-05-12 2012-09-26 美国政府(由卫生和人类服务部、疾病控制和预防中心的部长所代表) 新的人轮状病毒株和疫苗
CN103442730A (zh) * 2011-01-05 2013-12-11 巴拉特生物技术国际有限公司 组合七价疫苗
WO2016063291A1 (en) * 2014-10-07 2016-04-28 Serum Institute Of India Private Limited Improved methods for enterovirus inactivation, adjuvant adsorption and dose reduced vaccine compositions obtained thereof

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BAOMING JIANG等: "Does a monovalent inactivated human rotavirus vaccine induce heterotypic immunity?", 《HUMAN VACCINES & IMMUNOTHERAPEUTICS》 *
BAOMING JIANG等: "Does a monovalent inactivated human rotavirus vaccine induce heterotypic immunity?", 《HUMAN VACCINES & IMMUNOTHERAPEUTICS》, vol. 9, no. 8, 8 August 2013 (2013-08-08), pages 1 - 4, XP055430376, DOI: 10.4161/hv.24958 *
M GAUTAM等: "Immune response modulation to DPT vaccine by aqueous extract of Withania somnifera in experimental system", INTERNATIONAL IMMUNOPHARMACOLOGY, vol. 4, no. 6, pages 841 - 849 *
PRASHANT BAGHERWAL等: "Immune Response modulation to DPT (Diphtheria, Pertussis, Tetanus) vaccine by NDL from Calotropis Procera", INTERNATIONAL JOURNAL OF PHARMA AND BIO SCIENCES, vol. 4, no. 2, pages 852 - 859 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2776196C1 (ru) * 2021-08-24 2022-07-14 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Институт экспериментальной медицины" (ФГБНУ "ИЭМ") Штамм вируса гриппа ИнфлюБакт-H7/PspA для производства комбинированной вакцины против вируса гриппа А и бактериальной пневмонии, вызываемой Streptococcus pneumoniae

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