EA043682B1 - Комбинированная вакцина и способ её производства (варианты) - Google Patents
Комбинированная вакцина и способ её производства (варианты) Download PDFInfo
- Publication number
- EA043682B1 EA043682B1 EA201900117 EA043682B1 EA 043682 B1 EA043682 B1 EA 043682B1 EA 201900117 EA201900117 EA 201900117 EA 043682 B1 EA043682 B1 EA 043682B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- present
- amount
- antigen
- type
- units
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 111
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 36
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 204
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 200
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 200
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 167
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 claims description 86
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 85
- 101000894412 Mycolicibacterium paratuberculosis (strain ATCC BAA-968 / K-10) Bacterioferritin Proteins 0.000 claims description 82
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 claims description 81
- 241000274177 Juniperus sabina Species 0.000 claims description 58
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 54
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 claims description 54
- QCDWFXQBSFUVSP-UHFFFAOYSA-N 2-phenoxyethanol Chemical compound OCCOC1=CC=CC=C1 QCDWFXQBSFUVSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 53
- 229960005323 phenoxyethanol Drugs 0.000 claims description 53
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 claims description 49
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 claims description 45
- 229940001442 combination vaccine Drugs 0.000 claims description 37
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 claims description 35
- 229960003983 diphtheria toxoid Drugs 0.000 claims description 34
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 claims description 29
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 29
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 27
- 241000588832 Bordetella pertussis Species 0.000 claims description 26
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 26
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 24
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 23
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 claims description 22
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 22
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 19
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 18
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 18
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 18
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 claims description 15
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 14
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims description 12
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 claims description 12
- 101001120172 Crotalus durissus cumanensis Basic phospholipase A2 9 Proteins 0.000 claims description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 10
- 229940031416 bivalent vaccine Drugs 0.000 claims description 10
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 claims description 10
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 claims description 9
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 8
- 241000709701 Human poliovirus 1 Species 0.000 claims description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 7
- -1 1-cyano-4-dimethylaminopyridinium tetrafluoroborate Chemical group 0.000 claims description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 5
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 4
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 claims description 4
- 230000003068 static effect Effects 0.000 claims description 4
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 claims description 3
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 claims description 3
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 claims description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 claims description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 claims description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 3
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 claims description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 3
- GNFTZDOKVXKIBK-UHFFFAOYSA-N 3-(2-methoxyethoxy)benzohydrazide Chemical compound COCCOC1=CC=CC(C(=O)NN)=C1 GNFTZDOKVXKIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 2
- 229940029583 inactivated polio vaccine Drugs 0.000 description 58
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 44
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 44
- 239000000463 material Substances 0.000 description 43
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 27
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 27
- 229940031348 multivalent vaccine Drugs 0.000 description 27
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 20
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 17
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 16
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 14
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 13
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 229940127241 oral polio vaccine Drugs 0.000 description 11
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 10
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 10
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 9
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 9
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 9
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 9
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 9
- XYSRHOKREWGGFE-UHFFFAOYSA-N 1-(4-chlorophenyl)cyclobutane-1-carboxylic acid Chemical compound C=1C=C(Cl)C=CC=1C1(C(=O)O)CCC1 XYSRHOKREWGGFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 8
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 8
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 8
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108010071134 CRM197 (non-toxic variant of diphtheria toxin) Proteins 0.000 description 7
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 7
- 241000193449 Clostridium tetani Species 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 6
- 229940124859 Rotavirus vaccine Drugs 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 6
- 229940066827 pertussis vaccine Drugs 0.000 description 6
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 6
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108010034546 Serratia marcescens nuclease Proteins 0.000 description 5
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 5
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 5
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 5
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 5
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 5
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 5
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 5
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 description 4
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 4
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 4
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 4
- OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[[5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-4-phosphonooxyhexanedioic acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C(C(C1O)O)OC1COC1C(CO)OC(OC(C(O)C(OP(O)(O)=O)C(O)C(O)=O)C(O)=O)C(O)C1O OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 3
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 3
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 3
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 3
- 241000617996 Human rotavirus Species 0.000 description 3
- 208000005168 Intussusception Diseases 0.000 description 3
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 description 3
- UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N adenosine 5'-monophosphate Chemical class C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 3
- 108060000200 adenylate cyclase Proteins 0.000 description 3
- 102000030621 adenylate cyclase Human genes 0.000 description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 3
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 3
- 239000004643 cyanate ester Substances 0.000 description 3
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 description 3
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 3
- 239000013014 purified material Substances 0.000 description 3
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 3
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 3
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 3
- 101710145634 Antigen 1 Proteins 0.000 description 2
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 241000186227 Corynebacterium diphtheriae Species 0.000 description 2
- 101710154643 Filamentous hemagglutinin Proteins 0.000 description 2
- 229940124915 Infanrix Drugs 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710087657 Manganese ABC transporter substrate-binding lipoprotein Proteins 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 description 2
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 102220498108 Transmembrane 4 L6 family member 20_G12P_mutation Human genes 0.000 description 2
- 229940124832 acellular pertussis vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000009831 antigen interaction Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 239000011545 carbonate/bicarbonate buffer Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 229940028617 conventional vaccine Drugs 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 229940047650 haemophilus influenzae Drugs 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 108010021711 pertactin Proteins 0.000 description 2
- 108010040473 pneumococcal surface protein A Proteins 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 2
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 229940118376 tetanus toxin Drugs 0.000 description 2
- 229960004906 thiomersal Drugs 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 229940031418 trivalent vaccine Drugs 0.000 description 2
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 229910018626 Al(OH) Inorganic materials 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 101000585552 Bacillus anthracis Protective antigen Proteins 0.000 description 1
- 241000702673 Bovine rotavirus Species 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101100499672 Candida albicans (strain SC5314 / ATCC MYA-2876) LIG4 gene Proteins 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241001502567 Chikungunya virus Species 0.000 description 1
- 208000000419 Chronic Hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 241000193163 Clostridioides difficile Species 0.000 description 1
- 108010060123 Conjugate Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 229920002271 DEAE-Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 241000725619 Dengue virus Species 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241001115402 Ebolavirus Species 0.000 description 1
- 206010014596 Encephalitis Japanese B Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 108010006472 Escherichia coli ribosome-associated protein SRA Proteins 0.000 description 1
- 241001290006 Fissurella Species 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 1
- 101100005713 Homo sapiens CD4 gene Proteins 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 1
- 241000709704 Human poliovirus 2 Species 0.000 description 1
- 241000709727 Human poliovirus 3 Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 201000005807 Japanese encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 241000710842 Japanese encephalitis virus Species 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 102000008072 Lymphokines Human genes 0.000 description 1
- 108010074338 Lymphokines Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 1
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 1
- 208000005647 Mumps Diseases 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 241000320412 Ogataea angusta Species 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 101150084044 P gene Proteins 0.000 description 1
- 108010081690 Pertussis Toxin Proteins 0.000 description 1
- 101710183389 Pneumolysin Proteins 0.000 description 1
- 208000000474 Poliomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 102000017033 Porins Human genes 0.000 description 1
- 108010013381 Porins Proteins 0.000 description 1
- 101710194807 Protective antigen Proteins 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 1
- 229940124941 Rotarix Drugs 0.000 description 1
- 241001137860 Rotavirus A Species 0.000 description 1
- 206010067470 Rotavirus infection Diseases 0.000 description 1
- 101100224233 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) CDC9 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000293871 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 101710084578 Short neurotoxin 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 241000193985 Streptococcus agalactiae Species 0.000 description 1
- 101000874347 Streptococcus agalactiae IgA FC receptor Proteins 0.000 description 1
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 101000588258 Taenia solium Paramyosin Proteins 0.000 description 1
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 1
- 101710182223 Toxin B Proteins 0.000 description 1
- 101710182532 Toxin a Proteins 0.000 description 1
- 102000010912 Transferrin-Binding Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010062476 Transferrin-Binding Proteins Proteins 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 241000907316 Zika virus Species 0.000 description 1
- 201000009840 acute diarrhea Diseases 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940065181 bacillus anthracis Drugs 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 1
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000012539 chromatography resin Substances 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229940031670 conjugate vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 230000000741 diarrhetic effect Effects 0.000 description 1
- 208000010643 digestive system disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 208000018685 gastrointestinal system disease Diseases 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 229940045808 haemophilus influenzae type b Drugs 0.000 description 1
- 230000007407 health benefit Effects 0.000 description 1
- 230000005802 health problem Effects 0.000 description 1
- 230000003067 hemagglutinative effect Effects 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- SPSXSWRZQFPVTJ-ZQQKUFEYSA-N hepatitis b vaccine Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC1N=CN=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)OC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C1=CC=CC=C1 SPSXSWRZQFPVTJ-ZQQKUFEYSA-N 0.000 description 1
- 229940124736 hepatitis-B vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 231100000225 lethality Toxicity 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 208000010805 mumps infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 1
- 201000006995 paralytic poliomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009522 phase III clinical trial Methods 0.000 description 1
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 229960001539 poliomyelitis vaccine Drugs 0.000 description 1
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 238000012805 post-processing Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 201000005404 rubella Diseases 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000026775 severe diarrhea Diseases 0.000 description 1
- 230000009528 severe injury Effects 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 231100000033 toxigenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001551 toxigenic effect Effects 0.000 description 1
- 229960001005 tuberculin Drugs 0.000 description 1
- 229940124972 vaccine preservative Drugs 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 239000012610 weak anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к стабильной комбинированной вакцине (вакцинам), содержащей смесь антигенов для предотвращения и профилактики инфекций, вызываемых ротавирусом, вирусом полиомиелита, Haemophilus influenzae, Corynebacterium diphtheriae, Clostridium tetani, Bordetella pertussis (цельноклеточный компонент) и вирусом гепатита В. В частности, настоящее изобретение относится к стабильной поливалентной комбинированной вакцине, содержащей существенно пониженную дозу антигенов Salk ИПВ или Sabin ИПВ (ИПВ) и пригодный для инъекционного введения инактивированный нагреванием ротавирусный антиген (антигены), полученный из штаммов ротавируса (CDC-9).
Предпосылки создания изобретения
Полиовирус проникает в нервную систему и может вызвать необратимый паралич в течение нескольких часов. В мире существует три типа полиовируса, т.е. Тип 1, Тип 2 и Тип 3.
Распространенность полиовируса была значительно снижена за счет применения оральной полиомиелитной вакцины (ОПВ) на основе живых ослабленных штаммов полиовируса Sabin. Однако ОПВ имеет ограничения для эпохи после искоренения заболевания. ОПВ содержит циркулирующие вакцинные полиовирусы (cVDPV), которые являются трансмиссивными и могут стать нейровирулентными (подобно диким полиовирусам), что приводит к паралитическому полиомиелиту, связанному с вакциной. Такие штаммы потенциально могут привести к повторному распространению полиовирусов по всему миру и свести на нет достижения в искоренении заболевания. Чтобы предотвратить появление циркулирующих вакцинных полиовирусов (cVDPV), Стратегическая консультативная группа экспертов ВОЗ (SAGE) рекомендовала введение, по меньшей мере, одной дозы инактивированной полиомиелитной вакцины (ИПВ) вместе с оральной полиомиелитной вакциной (ОПВ) в странах, которые в настоящее время используют ОПВ (см. World Health Organization. Meeting of the Strategic Advisory Group of Experts on Immunization, November 2012 - conclusions and recommendations. Wkly Epidemiol Rec 2013; 88:1-16; PMID:23311010).
В настоящее время ИПВ производят с использованием штамма дикого полиовируса типа, т.е. штамма Salk и более новых штаммов Sabin, которые получают из тех же аттенуированных штаммов Sabin, которые используют для производства живой аттенуированной вакцины ОПВ. Утвержденная стандартная доза вакцин против полиомиелита, вводимых внутримышечно (в/м) или глубоко подкожно (п/к), содержит антигены D в виде 40 единиц инактивированного полиовируса типа 1 (Mahoney), 8 единиц инактивированного полиовируса типа 2 (MEF-I) и 32 единиц инактивированного полиовируса типа 3 (Saukett) (например, Инфанрикс-ИПВ™). Однако ИПВ характеризуется высокой себестоимостью по сравнению с ОПВ, в основном из-за потребности в большем количестве вирусов на дозу; дополнительной последующей обработки (т.е. концентрирование, очистка и инактивация) и соответствующих испытаний контроля качества; потери антигена или низкого извлечения на последующих этапах обработки; а также сдерживания.
Согласно имеющимся оценкам, себестоимость ИПВ в настоящее время приблизительно в 20 раз превышает себестоимость ОПВ. В будущем во всем мире спрос на ИПВ после искоренения полиовирусов может возрасти с нынешнего уровня в 80 миллионов доз до 450 миллионов доз в год. Поэтому, для снижения конечной стоимости ИПВ, предпринимаются усилия в направлении уменьшения количества антигенных компонентов, т.е. делаются попытки производить вакцинные препараты с пониженной дозой ИПВ.
Во всем мире ротавирус является основной причиной тяжелой острой диареи, и вакцина является перспективным решением для снижения бремени болезни. Согласно оценкам, число смертей от ротавирусной инфекции в мире сократилось с 528000 до 215000 в течение тринадцати лет, с 2000 по 2013 год, поскольку вакцина против ротавируса была внедрена более чем в 60 странах. Из этого количества в 2013 году в Индии произошло 47100 (22%) смертей от ротавирусной инфекции. Индия, Нигерия, Пакистан и Демократическая Республика Конго - на эти четыре страны пришлась примерно половина (49%) всех случаев смерти от ротавирусной инфекции в 2013 году.
В недавних исследованиях, проведенных по всему миру, было показано, что 4 серотипа ротавируса, т.е. серотипы G1, G2, G3 и G4, представляют более 88% штаммов, проанализированных во всем мире. Серотип G1 ротавируса А является одной из наиболее распространенных форм вируса, которая вызывает заболевания по всему миру, тогда как вирусы серотипа G9 появились с конца 1990-х годов и в настоящее время представляют приблизительно 4% глобальных изолятов. Вакцинация против ротавирусной инфекции является одной из стратегий решения этой серьезной проблемы здравоохранения. Две зарегистрированные в настоящее время оральные ротавирусные вакцины, РотаТек и Ротарикс, которые очень эффективны в снижении частоты случаев тяжелой диареи среди детей в развитых странах и странах со средним уровнем дохода, являются гораздо менее действенными (~50%) в странах с низким уровнем дохода в Африке и Азии. (См. Tate JE et al. Sustained decline in rotavirus detections in the United States following the introduction of rotavirus vaccine in 2006. Pediatr Infect Dis J 2011; 30:S30-4; и Yen С et al. Decline in rotavirus hospitalizations and health care visits for childhood diarrhea following rotavirus vaccination in E1 Salvador. Pediatr Infect Dis J 2011; 30:S6-10.) Кроме того, две существующие в настоящее время ротавирусные вакцины были связаны с риском инвагинации у вакцинированных детей. (См. Patel MM et al. Intussusception risk and health benefits of rotavirus vaccination in Mexico and Brazil. N Engl J Med 2011; 364:2283-92 и But- 1 043682 tery JP et al. PAEDS/APSU Study Group. Intussusception following rotavirus vaccine administration: postmarketing surveillance in the National Immunization Program in Australia. Vaccine 2011; 29:3061-6.)
Одна из кандидатных ротавирусных вакцин компании Бхарат Биотек Интернешнл основана на штамме ротавируса 116Е, G9P [11], который является природным реассортантом, содержащим один ген ротавируса крупного рогатого скота Р [11] и десять генов ротавируса человека. Защита, обеспечиваемая этой вакциной в течение первых 2 лет жизни, направлена против ряда циркулирующих генотипов, включая G1P [8], G2P [4], G12P [6], G12P [8] и G9P [4]. Таким образом, она не в состоянии обеспечить перекрестную защиту от других штаммов, таких как G3, G4, G5, G6, G8, G10, G11, G13 и G14. Помимо этого, эффективность вакцины, основанной на ротавирусе 116Е, в первые 2 года жизни была умеренной (от 48 до 55%), как и для других зарегистрированных вакцин. (См. Nita Bhandari et al. Efficacy of a monovalent human-bovine (116E) rotavirus vaccine in Indian children in the second year of life; Vaccine. 2014 Aug 11;32 Suppl 1:А110-6.) Кроме того, доклинические испытания нескольких других предназначенных для внутримышечного введения кандидатных ИРВ, основанных на штаммах G1, G3 или G6, продемонстрировали только частичную защиту.
Также было показано, что инактивация ротавируса с помощью бета-пропиолактона (БПЛ), агента, широко используемого для инактивации многих вирусов, вызывает серьезные повреждения целостности и биохимического состава частиц ротавируса. Помимо этого, ротавирус, обработанный БПЛ, продемонстрировал пониженную гемагглютинирующую вирусную активность, внутримышечная инъекция такого материала мышам вызывала меньшее образование нейтрализующих антител, по сравнению с иммунизацией живым вирусом. (См. Offit PA et al Noninfectious rotavirus (strain RRV) induces an immune response in mice which protects against rotavirus challenge. J Clin Microbiol 1989; 27:885-8.)
Во многих регионах мира иммунизация с применением ИПВ уже заменила иммунизацию с применением ОПВ, так что через несколько лет ротавирусная вакцина будет единственной вакциной, вводимой перорально, что увеличивает стоимость доставки. Таким образом, ряд эксплуатационных и логистических соображений говорят в пользу применения ИПВ как в развивающихся, так и в развитых странах.
Появление димеров в D/T, по-видимому, является следствием процесса детоксикации под действием формалина. Существование димеров может повлиять на эффективность процесса конъюгации - предположительно, за счет стерических препятствий на поверхности белка - что приводит к потере активности, поэтому считается желательным, чтобы уровень мономеров не опускался ниже 80%. Ранее сообщалось, что Т, содержащий не менее 60% мономера, может быть получен с использованием хроматографии гидрофобных взаимодействий (ХГВ) с последующим ионным обменом; Т с содержанием мономера 73% можно получить, используя только ХГВ-фенилсефарозу, Т с содержанием мономера 55% можно получить, используя только сульфат аммония. Следовательно, необходим альтернативный одноэтапный метод для получения D/T с содержанием не менее 80% мономера.
Комбинированные вакцины создают следующим образом: берут две или более вакцины, которые можно вводить индивидуально, и объединяют их в одну композицию. Вакцины обеспечивают такую же защиту, кажую они обеспечивали бы при введении в виде отдельных вакцин, но при меньшем количестве прививок. Таким образом, комбинированная вакцина обеспечивает иммуногенность против большого числа заболеваний и всегда является предпочтительной по сравнению с одновалентными вакцинами, так как соблюдение плана иммунизации увеличивается за счет сокращения количества отдельных прививок.
Компания Бхараг Биотек Интернешнл разрабатывает семивалентную комбинированную вакцину, которая включает D, Т, бесклеточный коклюшный компонент, Sabin ИПВ (тип 1: 40 DU, тип 2: 8 DU, тип 3: 32DU), один штамм инактивированного ротавируса (штамм G9, т.е. штамм 116Е), конъюгированную вакцину против Haemophilus influenza типа b, конъюгат ПРФ со столбнячным анатоксином и рекомбинантную вакцину для профилактики гепатита В. Как обсуждалось ранее, такая семивалентная комбинированная вакцина, включающая в себя вакцину на основе 116Е, не сможет обеспечить перекрестную защиту от других штаммов, таких как G3, G4, G5, G6, G8, G10, G11, G13 и G14. Помимо этого, эффективность указанного ИПВ-компонента комбинированной вакцины в первые 2 года жизни будет умеренной (от 48 до 55%), как и для других зарегистрированных вакцин.
Другая комбинированная вакцина, Hexyon® (также называемая Hexacima® и Hexaxim®) компании Санофи Пастер, содержит аК. Эта вакцина, вероятно, будет предназначена для рынков частных покупателей в Европе и во всем мире. Еще одна шестивалентная комбинированная вакцина с антигеном аК в настоящее время находится в фазе III клинических исследований и является совместной разработкой компаний Мерк и Санофи Пастер.
В настоящее время вакцина Инфанрикс Гекса® компании ГСК является единственной на мировом рынке шестивалентной педиатрической комбинированной вакциной, содержащей ИПВ. Эта вакцина содержит ацеллюлярный коклюшный компонент (аК) и выпускается в форме шприц плюс флакон с лиофилизатом из-за нестабильности компонента Хиб. Основными препятствиями для использования вакцины Инфанрикс Гекса® (ГСК) в условиях развивающихся стран являются цена вакцинного препарата, требования к восстановлению лиофилизированной формы и сомнения по поводу эффективности вакцины аК в развивающихся странах. С точки зрения стоимости, стоимость антигенов аК исторически пре- 2 043682 вышала стоимость антигенов цК в 10-30 раз из-за производственных различий и роялти. Таким образом, использование цельноклеточного коклюша (цК) в поливалентных комбинированных вакцинах, предназначенных для развивающихся стран, стало важным как из-за стоимости, так и из-за возникающих опасений относительно долгосрочной эффективности вакцин аК, особенно в условиях развивающихся стран.
Несколько поливалентных комбинированных вакцин, содержащих цК и ИПВ, находятся в стадии разработки. Однако антигены ИПВ не совместимы с обычным вакцинным консервантом тимеросалом, ртутьсодержащим соединением с антибактериальной активностью, которое приводит к тому, что капсид полиовируса теряет свою антигенность. Тимеросал используют многие производители вакцин для инактивации живых микроорганизмов В. pertussis для изготовления вакцинного материала цК, который переносится в готовый продукт, но также приводит к снижению антигенности ИПВ, поэтому ИПВ, может быть необходимо выпускать в отдельном флаконе, отдельно от тиомерсал-содержащего цК, для сохранения его активности с течением времени.
Имеется информация о том, что проходит несколько ранних клинических исследований цельноклеточной комбинированной вакцины компании ГСК (цКДС-ИПВ-ВГВ//Хиб). Однако иммуногенность полиовирусного компонента этого вакцинного препарата была не такой высокой, как у вакцины сравнения, также было обнаружено, что необходимая доза ИПВ будет, как минимум, такой же, как текущая стандартная доза вакцины ИПВ, или, возможно, ее потребуется увеличить.
Эффективные вакцинные препараты с уменьшенной дозой, которые обеспечивают защиту от инфекции с использованием более низкой дозы антигена ИПВ, желательны в ситуациях, когда поставки обычной вакцины являются недостаточными для удовлетворения глобальных потребностей, или когда стоимость производства обычной вакцины препятствует продаже вакцины по цене, которая доступна для развивающихся стран. Также воздействие более низкой дозы ИПВ, по сравнению с существующими на рынке вакцинными препаратами, может быть более безопасным.
Поливалентная комбинированная вакцина может упростить сложные графики плановой иммунизации детей, улучшить соблюдение графиков иммунизации и снизить расходы на доставку. Однако поливалентные вакцины, содержащие ИПВ, были технической проблемой для производителей вакцин с тех пор, как в начале 1990-х годов они начали работу по комбинированию детских вакцин.
Нестабильность антигена Хиб в присутствии алюминиевого адъюванта, а именно, алюминия гидроксида, является серьезной технической проблемой. Таким образом, техническая задача, которую производитель должен решить, заключается в том, чтобы избежать использования различных алюминиевых адъювантов, если вакцинный материал, который планируется использовать в комбинации, уже основан на различных соединениях алюминия. Таким образом, последовательность добавления антигенов становится важным фактором, поскольку смешивание несовместимых антигенов или адъювантов может привести к нежелательным физическим характеристикам конечного продукта (например, к образованию избыточного осадка и трудностям при ресуспендировании) [См. Malecker et al 1996, Factors affecting the ability of experimental vaccines to protect guinea pigs against lethal challenge with Diphtheria Toxin; presented at WHO/IABS/NIBSC International meeting on the control and standardization of Acellular pertussis Vaccines, UK, Sep 26-27 1996].
Известные и доступные в настоящее время комбинированные вакцины могут не содержать подходящих составов соответствующих антигенов в подходящих иммуногенных формах, достаточных для достижения желаемых уровней эффективности и иммуногенности в восприимчивой группе людей, для нескольких заболеваний в одной прививке. Что наиболее важно, отсутствуют доступные на коммерческой основе поливалентные комбинации с пониженной дозой ИПВ (ИПВ), обеспечивающим обширную перекрестную защиту ИПВ и цельноклеточным коклюшным компонентом (цК). Учитывая обсуждаемый выше сценарий в отношении комбинированных вакцин, остается явная потребность в доступной жидкой поливалентной комбинированной вакцине (вакцинах), подходящей для развивающихся стран, обеспечивающей эквивалентную или улучшенную серопротекцию для отдельных антигенов, без негативного взаимовлияния антигенов.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение относится к стабильной, иммуногенной комбинированной вакцине (вакцинам), содержащей смесь антигенов для предотвращения и профилактики инфекций, вызываемых ротавирусом,, вирусом полиомиелита, Haemophilus influenzae, Corynebacterium diphtheriae, Clostridium tetani, Bordetella pertussis и вирусом гепатита В. В частности, в соответствии с настоящим изобретением предлагается поливалентная комбинированная вакцина, содержащая i) существенно пониженную дозу антигенов Salk ИПВ или Sabin ИПВ (ИПВ), полученных с использованием усовершенствованных методов инактивации путем воздействия формальдегида и адсорбции на гидроксиде алюминия, что приводит к максимальному извлечению D-антигена, и ii) пригодный для инъекционного введения инактивированный нагреванием ротавирусный антиген (антигены), полученный из штаммов ротавируса (CDC-9), который обеспечивает широкий перекрестный иммунитет к штаммам человеческого ротавируса, iii) конъюгат Хиб ПРФ-белок-носитель, имеющий повышенную стабильность и иммуногенность, при этом указанный конъюгат белка Хиб ПРФ-белок-носитель первоначально получают с использованием нового процесса конъюгации и затем смешивают при низкой температуре в присутствии стабилизатора для сведения к
- 3 043682 минимуму высвобождения свободного ПРФ, iv) цельноклеточный коклюшный антиген с повышенной иммуногенностью и стабильностью, полученный путем добавления цельноклеточного коклюшного антигена в смесь на более поздней стадии, что обеспечивает сведение к минимуму деградации путем гидролиза, v) гомогенные фракции дифтерийного анатоксина и столбнячного анатоксина, полученные путем удаления нежелательных агрегатов с использованием гель-проникающей хроматографии. Также в изобретении раскрывается способ изготовления такой стабильной и иммуногенной вакцины путем i) индивидуальной адсорбции антигенов ИПВ, ИРВ с пониженной дозой на гидроксиде алюминия и поддержания другого антигена (антигенов), либо в неадсорбированном состоянии, либо в адсорбированном на фосфате алюминия или гидроксиде алюминия, либо комбинации обоих веществ, состоянии и ii) использования определенного порядка добавления антигенов во время смешивания. Помимо этого, в соответствии с настоящим изобретением предлагается доступная комбинированная вакцина (вакцины), подходящая для развивающихся стран, обеспечивающая эквивалентную или улучшенную серопротекцию для отдельных антигенов, без негативного взаимовлияния антигенов.
Чертеж
На чертеже: очистка дифтерийного анатоксина - хроматограмма, полученная методом гельфильтрационной хроматографии, Sephacryl S-300 HR, колонка XK 26/70.
Подробное описание
Настоящее изобретение относится к поливалентной комбинированной вакцине (вакцинам), содержащей (i) характеризующийся пониженной дозой инактивированный полиовирус, выбираемый из штаммов sabin или salk; (ii) пригодные для инъекционного введения инактивированные штаммы ротавируса CDC-9; (iii) опционально, один или несколько антигенов, выбираемый из следующего списка: Д, С, цК, HBsAg, конъюгат Хиб ПРФ-белок-носитель, антиген(ы) Neisseria meningitidis А, антиген(ы) Neisseria meningitidis С, антиген(ы) Neisseria meningitidis W-135, антиген(ы) Neisseria meningitidis Y, антиген(ы) Neisseria meningitidis X, антиген(ы) Streptococcus Pneumoniae, мембранные пузырьки или очищенные антигены Neisseria meningitidis В, антиген(ы) Staphylococcus, сибирская язва, БЦЖ, антиген(ы) вируса гепатита А, антиген вируса гепатита В, вирус папилломы человека, антиген(ы) Salmonella Typhi, ацеллюлярный коклюш, модифицированная аденилатциклаза, антиген малярии (RTS,S), антигены возбудителей кори, эпидемического паротита, краснухи, вируса Денге, вируса Зика, вируса Эбола, вируса чикунгунья, японского энцефалита, диарейные антигены и т.д.
Компоненты, входящие в комбинированную вакцинную композицию Инактивированный вирус полиомиелита.
Полиовирус (вирус полиомиелита) является высокоинфекционным вирусом. Полиовирус проникает в нервную систему и может вызвать необратимый паралич в течение нескольких часов. В мире существует три типа полиовируса, т.е. Тип 1, Тип 2 и Тип 3.
Первый вариант осуществления настоящего изобретения включает улучшенные способы инактивации полиовируса (штаммы salk или sabin) путем воздействия формальдегида в присутствии буфера ТРИС, которые приводят к максимальному извлечению D-антигена. Последующая адсорбция указанного ИПВ на гидроксиде алюминия обеспечивает существенное снижение дозы ИПВ в вакцинной композиции. В соответствии с настоящим изобретением предлагается улучшенный процесс инактивации под действием формалина и адсорбции на гидроксиде алюминия, в котором процент извлечения D-антигена после инактивации находится в диапазоне 50-80%, а процент адсорбции на гидроксиде алюминия находится в диапазоне 70-99%.
В соответствии с одним из аспектов первого варианта осуществления изобретения клетки CCL81VERO (клетки почки обезьяны) использовали в качестве клеток-хозяев для выращивания полиовируса, т.е. штаммов sabin и salk. После заражения клеток-хозяев соответствующим штаммом полиовируса и инкубирования в течение 72 ч среду, содержащую вирус и клеточный дебрис, объединяли и собирали в один контейнер.
В соответствии со вторым аспектом первого варианта осуществления изобретения собранную среду подвергли серии фильтраций (фильтровальная установка с фильтрами с размером пор 6 мкм и 0,45 мкм); фильтрат был собран в стеклянный контейнер. Фильтрат подвергали фильтрации в тангенциальном потоке с использованием кассеты 100 кДа; диафильтрации с использованием фосфатного буфера и очистке с использованием анионообменной хроматографии.
В соответствии с третьим аспектом первого варианта осуществления изобретения очищенный пул вируса дополнительно подвергали буферному обмену из фосфатного буфера в Трис-буфер (от 30 до 50 мМ, pH 7-7,5) с использованием системы фильтрации в тангенциальном потоке (ФТП) (100 кДа, 0,1 м2) с последующим добавлением М-199 и 0,1-1,0% глицина.
В соответствии с четвертым аспектом первого варианта осуществления изобретения очищенный пул вируса в Трис-буфере подвергали инактивации под действием 0,01-1,0% формалина при непрерывном перемешивании вирусного материала и инкубировали при температуре окружающей среды в течение 13 дней с промежуточной фильтрацией на 7 день. Далее инактивированный материал подвергали конечной фильтрации и затем хранили при температуре 2-8°С.
В соответствии с пятым аспектом первого варианта осуществления изобретения конечный очищен- 4 043682 ный материал подвергали адсорбции на A1(OH)3, при этом конечная концентрация алюминия (Al3+) находилась в диапазоне 0,1-1,5 мг/доза, для доведения до необходимого объема был использован М199+0,5% глицина, значение рН было установлено на уровне 6-7 с использованием 1 н. HCl/NaOH, с последующим перемешиванием в течение ночи при температуре 2-8°С.
Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что потеря D-антигена после инактивации формальдегидом была вызвана присутствием фосфатного буфера, который неожиданно вызывает нежелательную агрегацию полиовирусов. В соответствии с настоящим изобретением предлагается усовершенствованный процесс инактивации формальдегидом в присутствии буфера ТРИС, что обеспечивает минимальные эпитопные модификации и, следовательно, сводит к минимуму потерю D-антигена.
Инактивированный ротавирус.
Ротавирусы являются наиболее распространенной причиной тяжелых диарейных заболеваний у детей младшего возраста во всем мире. Оральные, живые, аттенуированные ротавирусные вакцины доступны по всему миру и считаются безопасными и эффективными в профилактике желудочно-кишечных заболеваний.
Второй вариант осуществления настоящего изобретения включает приготовление, очистку и рецептуру состава ротавирусного материала. Указанный способ получения пригодных для инъекционного введения инактивированных нагреванием ротавирусных антигенов, относящихся к новому штамму, т.е. CDC-9, предусматривает использование термической инактивации и адсорбции на адъюванте - гидроксиде алюминия.
В соответствии с первым аспектом второго варианта осуществления изобретения ротавирус культивировали с использованием клеток Vero (CCL-81) в качестве клеток-хозяев, собранный материал осветляли с использованием фильтровальной установки с фильтрами с размером пор 30 мкм и 2 мкм для удаления клеточного дебриса.
В соответствии со вторым аспектом второго варианта осуществления изобретения осветленный собранный материал обрабатывали бензоназой (2000-10000 ед./л) с инкубированием при температуре 37°С в течение 4 ч при непрерывным перемешивании. В частности, используемая концентрация бензоназы составляла 5000 ед./л.
В соответствии с третьим аспектом второго варианта осуществления изобретения материал, обработанный бензоназой, подвергали концентрированию 10Х и диафильтрации 4Х с использованием буфера состава HBSS (сбалансированный солевой раствор Хэнкса) +10% сорбита и кассет 100 кДа.
В соответствии с четвертым аспектом второго варианта осуществления изобретения материал, полученный после диафильтрации, может быть опционально подвергнут диализу с использованием буфера для разведения и дополнительно очищен с использованием аффинной хроматографии, предпочтительно, с использованием целлуфина сульфата в качестве смолы для колоночной хроматографии.
В соответствии с пятым аспектом второго варианта осуществления изобретения был использован усовершенствованный способ термической инактивации ротавируса. Этот способ является быстрым, простым и позволяет поддерживать целостность и, таким образом, сохранять антигенность ротавирусных частиц. Температура, используемая для термической инактивации, находилась в диапазоне от 60°С до 70°С; время инкубирования находилось в диапазоне от приблизительно 10 мин до 24 ч включительно. Предпочтительно, время инкубирования находилось в диапазоне от приблизительно 30 мин до 10 ч. Более предпочтительно, инактивацию очищенного CDC-9 проводили с использованием нагревания при температуре 60°С в течение 5 ч с одной сменой контейнера через 2 ч. Инактивированный материал CDC9 хранили при температуре -80°С до момента дальнейшего использования.
В соответствии с шестым аспектом второго варианта осуществления изобретения адсорбцию инактивированного ротавирусного антигена проводили на гидроксиде алюминия, при этом конечная концентрация алюминия (Al+++) составляла от 0,2 мг/доза до 0,8 мг/доза.
Конъюгат Heamophillus influenzae b ПРФ-белок.
Haemophilus influenzae типа b является грамотрицательиой бактерией, вызывающей менингит и острые респираторные инфекции, преимущественно у детей. Внешняя оболочка Н. influenzae типа b состоит из полирибозил-рибитол-фосфата (ПРФ), полисахарида, который отвечает за вирулентность и иммунитет. ПРФ представляет собой гаптен, который считается слабо иммуногенным по природе, поэтому ПРФ ковалентно связан с белком-носителем для образования высокоиммуногенного антигена Хиб. Этот способ заменяет полисахарид с Т-независимого на Т-зависимый антиген и значительно повышает иммуногенность, особенно у маленьких детей.
Третий вариант осуществления настоящего изобретения включает приготовление конъюгата Хиб ПРФ-белок. Можно отметить, что белки-носители, используемые для конъюгации с антигеном Хиб, выбирают из группы, включающей следующие варианты: CRM197 (перекрестно-реактивный материал 197, генетически детоксифицированная форма дифтерийного анатоксина), дифтерийный анатоксин, комплекс белков наружной мембраны Neisseria meningitidis, фрагмент С столбнячного анатоксина,, коклюшный анатоксин, белок D H. influenzae, E. coli LT, E. coli ST, и эндотоксин A Pseudomonas aeruginosa, комплекс белков наружной мембраны с (ОМРС), порины, белки, связывающиеся с трансферрином, пневмолизин,
- 5 043682 пневмококковый поверхностный белок A (PspA), пневмококковый поверхностный адгезин A (PsaA), пневмококковый PhtD, пневмококковые поверхностные белки BVH-3 и BVH-11, защитный антиген (PA) Bacillus anthracis и детоксифицированный фактор отека (EF) и фактор летальности (LF) Bacillus anthracis, овальбумин, гемоцианин фиссуреллы (KLH), человеческий сывороточный альбумин, бычий сывороточный альбумин (БСА) очищенное белковое производное туберкулина (PPD), синтетические пептиды, белки теплового шока, коклюшные белки, цитокины, лимфокины, гормоны, факторы роста, искусственные белки, включая множественные человеческие CD4+ Т-клеточные эпитопы из различных антигенов патогенов, такие как N 19, белки, захватывающие железо, токсин А или В С. difficile и белки S.agalactiae или их эквиваленты. Предпочтительно, белок-носитель, входящий в состав конъюгата, выбирают из СА или CRM197.
В соответствии с первым аспектом третьего варианта осуществления изобретения антиген Хиб получают из капсульного полисахарида штамма Haemophilius influenzae типа b. Для получения полисахарида ПРФ бактерии Н. Influenzae типа b выращивали в полусинтетической среде при определенных условиях температуры, перемешивания, оптической плотности и т.д. ПРФ представляет собой внешний мембранно-связанный полисахарид, который высвобождается в среду во время культивирования в условиях перемешивания. Отделенный от биомассы культуральный бульон содержит неочищенный ПРФ, который был подвергнут очистке путем осаждения с использованием поверхностно-активного вещества N,N,N-триметил-l-гексадеканаминия бромид, с последующим осаждением в градиенте этанола и фильтрацией. Готовый очищенный полисахарид ПРФ был подвергнут испытаниям на соответствие спецификациям, таким как содержание эндотоксинов, нуклеиновых кислот и белка, в соответствии с требованиями ВОЗ, Британской фармакопеи, Европейской фармакопеи, Индийской фармакопеи и т.д.
В соответствии со вторым аспектом третьего варианта осуществления изобретения был приготовлен конъюгат полисахарид-белок путем соединения полисахарида (ПРФ) с белком-носителем. Хиб ПРФ был конъюгирован с белком-носителем с использованием процесса конъюгации, состоящего из этапов, включая следующие: деполимеризация ПРФ с использованием щелочного буферного раствора для получения ПРФ с уменьшенным размером молекул; обработка цианилирующим агентом, таким как ЦДАП (1циано-4-диметиламинопирйдиния тетрафторборат) для получения цианатного эфира; соединение активированного цианилированного полисахарида с аминогруппой белка-носителя; очистка готового конъюгата с использованием ультрафильтрации.
Более предпочтительно, в качестве оптимального соотношения реагентов для реакции конъюгации, т.е. ПРФ, ЦДАП и CRM197 было выбрано соотношение 1:1.5:1. Во время конъюгации очищенный полисахарид ПРФ был деполимеризован с использованием щелочного буферного раствора (0,4 М карбонатно-бикарбонатный буферный раствор, рН 10,5±0,1) для получения ПРФ с уменьшенным размером молекул. ПРФ с уменьшенным размером молекул был обработан веществом ЦДАП (1-циано-4диметиламинопиридиния тетрафторборат) для цианилирования, с образованием цианатного эфира. Активированный цианилированный полисахарид был напрямую соединен с аминогруппой белка-носителя CRM197. Степень преобразования конъюгата Хиб подтверждали путем испытаний отбираемых образцов методом ВЭЖХ. Реакция конъюгации была остановлена после достижения необходимого уровня преобразования конъюгата, соответствующего спецификации преобразование конъюгата Хиб не менее 65%, после достижения этого значения реакция конъюгации была остановлена путем прибавления глицина (2 М). Конъюгат Хиб ПРФ-СКМ197 был подвергнут дополнительной очистке путем ультрафильтрации через мембранные фильтры (300 кДа и 100 кДа) для удаления непрореагировавших реактивов и побочных продуктов. Готовый конъюгированный материал фильтруют через фильтр с размером пор 0,22 мкм и помещают на хранение при температуре 2-8°С.
В соответствии с третьим аспектом третьего варианта осуществления изобретения Хиб ПРФ конъюгирован с белком-носителем, при этом соотношение сахарид:белок (масса/масса) находится в диапазоне от 0,4 до 1; и содержание свободного ПРФ в готовом конъюгате Хиб ПРФ-белок составляет не более 5%, более предпочтительно, менее 2%.
Дифтерийный анатоксин (Д).
Дифтерия представляет собой инфекционное заболевание, вызываемое бактерией Corynebacterium diphtheria, которая поражает главным образом горло и верхние дыхательные пути и производит токсин, поражающий другие органы. Дифтерийный токсин является экзотоксином, секретируемым Corynebacterium diphtheria, обладает антигенными свойствами и токсичен по своей природе. Для уменьшения токсичности токсин преобразуют в неактивный анатоксин, подвергая его инактивации. Способ инактивации может быть выбран из следующего списка: одна или нескольких обработок нагреванием, УФ, формалином/формальдегидом, ацетилэтиленимином и т.д. Для увеличения иммуногенности анатоксин адсорбируют на адъюванте. Таким образом, формируется анатоксин, способный индуцировать образование антител к токсину С. diphtheria. Присутствие димеров может привести к нежелательньм реакциям.
В соответствии с четвертым вариантом осуществления настоящего изобретения был приготовлен дифтерийный анатоксин.
В соответствии с первым аспектом четвертого варианта осуществления изобретения дифтерийный
- 6 043682 токсин (экзотоксин) был получен из Corynebacterium diphtheria и подвергнут детоксикации с использованием подходящего инактивирующего агента.
Примером подходящего инактивирующего агента является формальдегид.
В соответствии со вторым аспектом четвертого варианта осуществления изобретения полученный дифтерийный анатоксин был очищен с использованием гель-фильтрационной хроматографии с использованием Sephacryl S-300 HR в качестве смолы с линейной скоростью потока 2-5 мл/мин. Полученный таким образом очищенный материал Д представляет собой гомогенную фракцию, не содержащую нежелательных агрегатов (см. чертеж) с содержанием мономерного дифтерийного анатоксина по меньшей мере 80-90%, в дальнейшем используемую для приготовления поливалентной вакцины (вакцин). Помимо этого, PLgel, Sephacryl S-200HR, Sephadex, Bio-Gel (поперечно-сшитый полиакриламид), агарозный гель и/или Styragel также могут быть использованы для очистки с использованием гель-проникающей хроматографии.
В соответствии с третьим аспектом четвертого варианта осуществления изобретения дифтерийный анатоксин адсорбировали на одной или нескольких солях алюминия, включая гидроксид алюминия и фосфат алюминия, предпочтительно, на фосфате алюминия.
Столбнячный анатоксин (С).
Столбняк представляет собой острое инфекционное заболевание, вызываемое токсигенными штаммами бактерии Clostridium tetani (С. tetani), грамположительной, спорообразующей, строго анаэробной бактерией. Столбнячный токсин является экзотоксином, секретируемым Clostridium tetani, обладает антигенными свойствами и токсичен по своей природе. Для уменьшения токсичности токсин преобразуют в неактивный анатоксин, подвергая его инактивации. Способ инактивации может быть выбран из следующего списка: одна или нескольких обработок нагреванием, УФ, формалином/формальдегидом, ацетилэтиленимином и т.д. Для увеличения иммуногенности анатоксин адсорбируют на адъюванте. Таким образом, формируется анатоксин, способный индуцировать образование антител к токсину Clostridium tetani. Присутствие димеров может привести к нежелательным реакциям.
В соответствии с пятым вариантом осуществления настоящего изобретения был приготовлен столбнячный анатоксин.
В соответствии с первым аспектом пятого варианта осуществления изобретения столбнячный токсин был получен из Clostridium tetani и подвергнут детоксикации с использованием подходящего инактивирующего агента. Примером подходящего инактивирующего агента является формальдегид.
В соответствии со вторым аспектом пятого варианта осуществления изобретения полученный столбнячный анатоксин был очищен с использованием гель-фильтрационной хроматографии с использованием Sephacryl S-300 HR в качестве смолы с линейной скоростью потока 2-5 мл/мин. Полученный таким образом очищенный материал С представлял собой гомогенную фракцию, не содержащую нежелательных агрегатов, с содержанием мономерного столбнячного анатоксина по меньшей мере 80-90%, в дальнейшем используемую для приготовления поливалентной вакцины. Помимо этого, PLgel, Sephacryl S-200HR, Sephadex, Bio-Gel (поперечно-сшитый полиакриламид), агарозный гель и Styragel также могут быть использованы для очистки с использованием гель-проникающей хроматографии.
В соответствии с третьим аспектом четвертого варианта осуществления изобретения столбнячный анатоксин адсорбировали на одной или нескольких солях алюминия, включая гидроксид алюминия и фосфат алюминия, предпочтительно, на фосфате алюминия.
Коклюшный антиген.
Коклюш (судорожный кашель) вызывается Bordetella pertussis, небольшой грамотрицательной коккобациллой, которая поражает слизистые оболочки дыхательных путей человека. Используются две формы вакцины: цельноклеточная коклюшная вакцина (цК) и ацеллюлярная коклюшная вакцина (аК). Цельноклеточные коклюшные вакцины представляют собой суспензии цельных микроорганизмов В. pertussis, которые были инактивированы, обычно с помощью формалина. Иммунизация вакциной цК является относительно недорогой и высокоэффективной. Кроме того, присутствие цК в комбинированных вакцинах действует как адъювант для многих других антигенных компонентов.
Ацеллюлярные коклюшные вакцины (аК) содержат очищенные компоненты В.pertussis, такие как инактивированный коклюшный токсин, отдельно или в сочетании с другими компонентами В. pertussis, такими как филаментозный гемагглютинин, фимбриальные антигены, пертактин и модифицированная аденилатциклаза. Ацеллюлярная коклюшная вакцина дает меньше нежелательных реакций, по сравнению с вакциной цК.
В соответствии с шестым вариантом осуществления настоящего изобретения вакцина против коклюша представляет собой коклюшный антиген, выбранный из одного или нескольких антигенов цельноклеточного коклюша или ацеллюлярного коклюша.
В соответствии с первым аспектом шестого варианта осуществления изобретения вакцина против коклюша представляет собой ацеллюлярный коклюшный антиген (один или несколько), выбранный из следующего списка: филаментозный гемагглютинин, фимбриальные антигены, пертактин и модифицированная аденилатциклаза Ацеллюлярные коклюшные антигены могут быть экспрессированы в культуре подходящих клеток-хозяев использованием технологии рекомбинантной ДНК.
- 7 043682
В соответствии со вторым аспектом шестого варианта осуществления изобретения вакцина против коклюша представляет собой цельноклеточный коклюшный антиген, состоящий из штаммов Bordetella pertussis 134, 509, 25525 и 6229 в определенном соотношении и впоследствии инактивированный с использованием улучшенных методов инактивации без применения тимеросала; что приводит к снижению реактогенности и увеличению активности. Предпочтительно, антиген цК получают из штаммов Bordetella pertussis 134, 509, 25525 и 6229, смешанных в соотношении 1:1:0,25:0,25.
В соответствии с третьим аспектом шестого варианта осуществления изобретения способ инактивации цК включает инактивацию нагреванием при температуре 56±2°С в течение 10-15 мин в присутствии формальдегида; при этом материал цК остается не комковатой и легко гомогенизируется, что приводит к снижению реактогенности и обеспечивает лучшую активность цК в течение более длительного периода времени.
Поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg).
Гепатит В является потенциально опасной для жизни инфекцией печени, вызываемой вирусом гепатита В (ВГВ). Поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg) представляет собой поверхностный белок, который также действует в качестве иммуногена в высокоэффективных вакцинах для профилактики инфекции ВГВ. Белок HBsAg может быть рекомбинантно экспрессирован в подходящем микроорганизме-хозяине; или может быть выделен из плазмы крови пациента с хроническим гепатитом В/носителя.
В соответствии с седьмым вариантом осуществления настоящего изобретения был приготовлен поверхностный антиген гепатита В (HBsAg).
В соответствии с первым аспектом седьмого варианта осуществления изобретения HBsAg экспрессировали в клетках дрожжей Hansenula polymorpha с использованием технологии рекомбинантной ДНК. В качестве клетки-хозяина для рекомбинантной экспрессии HBsAg также могут быть использованы другие дрожжи, такие как Saccharomyces cerevisiae.
В соответствии со вторым аспектом седьмого варианта осуществления изобретения антиген гепатита В (HBsAg) адсорбировали на одной или нескольких солях алюминия, включая гидроксид алюминия и фосфат алюминия, предпочтительно, на фосфате алюминия.
Двухвалентная комбинированная вакцинная композиция и способ ее приготовления
В соответствии с восьмым вариантом осуществления настоящего изобретения поливалентная вакцина представляет собой полностью жидкую двухвалентную комбинированную вакцину. Двухвалентная комбинированная вакцина включает инактивированный полиовирус типа I, II и III; инактивированный ротавирус (ИРВ).
В соответствии с первым аспектом восьмого варианта осуществления изобретения инактивированный полиовирус выбирают из группы, включающей в себя штаммы Salk и Sabin; а концентрации отдельных ИПВ, основанных на штаммах Sabin Типа 1, Типа 2 или Типа 3, не превышают 20 единиц антигена D.
В соответствии со вторым аспектом восьмого варианта осуществления изобретения инактивированный полиовирус представляет собой штамм Salk, концентрации отдельных ИПВ, основанных на штаммах Salk Типа 1, Типа 2 или Типа 3 выбирают из группы композиций доз включающей следующие варианты: 7,5-16-10, 8-2-5, 10-2-5, 10-2-10, 10-2-12, 10-2-16, 7,5-16-10, 5-2-5 единиц антигена D; более конкретно, концентрации отдельных ИПВ, основанных на штаммах Salk Типа 1, Типа 2 или Типа 3 выбирают из группы, включающей следующие варианты: 8-2-5 и 10-2-10 единиц антигена D.
В соответствии с третьим аспектом восьмого варианта осуществления изобретения инактивированный полиовирус представляет собой штамм Sabin, концентрации отдельных ИПВ, основанных на штаммах Sabin Типа 1, Типа 2 и Типа 3 выбирают из группы композиций доз включающей следующие варианты: 5-16-10, 2,5-8-5, 5-8-10 единиц антигена D; более конкретно, концентрации отдельных ИПВ, основанных на штаммах Sabin Типа 1, Типа 2 и Типа 3 составляют 5-16-10 единиц антигена D.
В соответствии с четвертым аспектом восьмого варианта осуществления изобретения пригодный для инъекционного введения инактивированный нагреванием ротавирус (ИРВ) представляет собой ротавирусный штамм CDC-9 или CDC-66, а концентрация ИРВ находится в диапазоне 5-50 мкг/доза, более конкретно, концентрация ИРВ составляет 10 мкг/доза.
В соответствии с пятым аспектом восьмого варианта осуществления изобретения двухвалентная композиция была приготовлена путем индивидуальной адсорбции материала ИПВ (штамм Sabin/Salk) и материала ИРВ на одной или нескольких солях алюминия, включая гидроксид алюминия и фосфат алюминия, предпочтительно, на гидроксиде алюминия. Затем индивидуальные одновалентные адсорбированные материалы ИПВ и ИРВ были смешаны друг с другом и помещены на качающуюся платформу при температуре 2-8°С на 1-4 ч.
Шестивалентная комбинированная вакцинная композиция и способ ее приготовления
В соответствии с девятым вариантом осуществления настоящего изобретения полностью жидкая шестивалентная (цКДС-ИПВ-ИРВ-Хиб) вакцина была приготовлена следующим образом.
a) Была проведена индивидуальная адсорбция материала ИПВ (штамм Sabin/Salk) и материала ИРВ на гидроксиде алюминия, с последующим установлением значения рН на уровне 6,2-6,6.
- 8 043682
b) Была проведена адсорбция Д на фосфате алюминия с последующим установлением значения рН на уровне 5,5-6,5 и добавлением С и смешивания путем перемешивания при комнатной температуре в течение 18-24 ч.
c) Растворы, полученные на этапе а и этапе b были смешаны, с последующим установлением значения рН на уровне 6,4 - 6,6 и перемешиванием при комнатной температуре в течение 60 мин.
d) К указанной выше смеси были добавлены цК и гистидин, с последующим перемешиванием в течение 60 мин и оставлением в статическом состоянии на ночь при температуре 2-8°С.
e) Конъюгат Хиб ПРФ и 2-феноксиэтанол (2-ФЭ) были добавлены к смеси, полученной на этапе d, при температуре 2-8°С с последующим установлением значения рН на уровне 6,4-6,6.
f) NaCl и ВДИ (в достаточном количестве) были добавлены к смеси, полученной на этапе е, с последующим перемешиванием в течение 2 ч.
В соответствии с десятым вариантом осуществления настоящего изобретения композиция поливалентной вакцины представляет собой полностью жидкую шестивалентную комбинированную вакцину. В состав полностью жидкой шестивалентной вакцины входят дифтерийный анатоксин (Д); столбнячный анатоксин (С); инактивированный цельноклеточный антиген В. pertussis (цК); инактивированные штаммы полиовируса salk Типа I, II и III; инактивированный ротавирус (ИРВ); а также конъюгат Н. influenzae типа b ПРФ-СА и другие вспомогательные вещества, такие как адъювант на основе алюминия (фосфат алюминия, гидроксид алюминия), 2-феноксиэтанол, L-гистидин и ВДИ.
В соответствии с одним из предпочтительных аспектов десятого варианта осуществления изобретения поливалентная вакцинная композиция представляет собой шестивалентную вакцинную композицию, в которой Д присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-50 Lf; С присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-30 Lf; цК присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 10-50 IOU; характеризующийся пониженной дозой инактивированный полиовирус штамма Salk Типа 1 присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-20 единиц антигена D, Типа 2 в диапазоне 1-20 единиц антигена D, Типа 3 в диапазоне 1-20 единиц антигена D; ИРВ присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-30 мкг; конъюгат Н. influenzae типа b ПРФ-СА присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 2-20 мкг содержания ПРФ; алюминий (Al3+) присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 0,4-1,5 мг; 2-феноксиэтанол присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 2-6 мг; L-гистидин присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 0,5-5 мг и ВДИ.
В соответствии с одним из наиболее предпочтительных аспектов десятого варианта осуществления изобретения поливалентная вакцинная композиция представляет собой шестивалентную вакцинную композицию, в которой Д присутствует в количестве 22,5 Lf; СА присутствует в количестве 7,5 Lf; цК присутствует в количестве 15 IOU; характеризующийся пониженной дозой инактивированный полиовирус штамма Salk Типа 1 присутствует в количестве 10 единиц антигена D, Типа 2 присутствует в количестве 2 единиц антигена D, Типа 3 присутствует в количестве 20 единиц антигена D; ИРВ присутствует в количестве 10 мкг; конъюгат Н. influenzae типа b ПРФ-СА присутствует в количестве 5 мкг; алюминий присутствует в количестве не более 0,9 мг; 2-феноксиэтанол присутствует в количестве 3,25 мг; Lгистидин присутствует в количестве 1,55 мг и ВДИ.
В соответствии с одиннадцатым вариантом осуществления настоящего изобретения композиция поливалентной вакцины представляет собой полностью жидкую шестивалентную комбинированную вакцину. В состав полностью жидкой шестивалентной вакцины входят дифтерийный анатоксин (Д); столбнячный анатоксин (С); инактивированный цельноклеточный антиген В. pertussis (цК); инактивированные штаммы полиовируса salk Типа I, II и III; инактивированный ротавирус (ИРВ); а также конъюгат Н. influenzae типа b ПРФ-CRM197 и другие вспомогательные вещества, такие как адъювант на основе алюминия (фосфат алюминия, гидроксид алюминия), 2-феноксиэтанол, L-гистидин и ВДИ.
В соответствии с одним из предпочтительных аспектов одиннадцатого варианта осуществления изобретения поливалентная вакцинная композиция представляет собой шестивалентную вакцинную композицию, в которой Д присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-50 Lf; С присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-30 Lf; цК присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 10-50IOU; характеризующийся пониженной дозой инактивированный полиовирус штамма Salk Типа 1 присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-20 единиц антигена D, Типа 2 в диапазоне 1-20 единиц антигена D, Типа 3 в диапазоне 1-20 единиц антигена D; ИРВ присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-30 мкг; конъюгат Н. influenzae типа b ПРФ-CRM197 присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 2-20 мкг содержания ПРФ; алюминий (Al3+) присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 0,4-1,5 мг; 2-феноксиэтанол присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 2-6 мг; L-гистидин присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 0,5-5 мг и ВДИ.
В соответствии с одним из наиболее предпочтительных аспектов одиннадцатого варианта осуществления изобретения поливалентная вакцинная композиция представляет собой шестивалентную вакцинную композицию, в которой Д присутствует в количестве 22,5 Lf; С присутствует в количестве 7,5 Lf; цК присутствует в количестве 15 IOU; характеризующийся пониженной дозой инактивированный полиовирус штамма Salk Типа 1 присутствует в количестве 10 единиц антигена D, Типа 2 присутствует в количестве
- 9 043682 единиц антигена D, Типа 3 присутствует в количестве 10 или 16 единиц антигена D; ИРВ присутствует в количестве 10 мкг; конъюгат Н. influenzae типа b ПРФ-СИМ197 присутствует в количестве 10 мкг; алюминий присутствует в количестве не более 0,9 мг; 2-феноксиэтанол присутствует в количестве 3,25 мг; Lгистидин присутствует в количестве 1,55 мг и ВДИ.
В соответствии с двенадцатым вариантом осуществления настоящего изобретения композиция поливалентной вакцины представляет собой полностью жидкую шестивалентную комбинированную вакцину. В состав полностью жидкой шестивалентной вакцины входят дифтерийный анатоксин (Д); столбнячный анатоксин (С); инактивированный цельноклеточный антиген В. pertussis (цК); инактивированные штаммы полиовируса sabin Типа I, II и III; инактивированный ротавирус (ИРВ); а также конъюгат Н. influenzae типа b ПРФ-СА и другие вспомогательные вещества, такие как адъювант на основе алюминия (фосфат алюминия, гидроксид алюминия), 2-феноксиэтанол, L-гистидин и ВДИ.
В соответствии с одним из предпочтительных аспектов двенадцатого варианта осуществления изобретения поливалентная вакцинная композиция представляет собой шестивалентную вакцинную композицию, в которой Д присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1 -50 Lf; С присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-30 Lf; цК присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1050 IOU; характеризующийся пониженной дозой инактивированный полиовирус штамма sabin Типа 1 присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-20 единиц антигена D, Типа 2 в диапазоне 1-20 единиц антигена D, Типа 3 в диапазоне 1-20 единиц антигена D; ИРВ присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-30 мкг; конъюгат Н. influenzae типа b ПРФ-СА присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 2-20 мкг содержания ПРФ; алюминий (Al3+) присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 0,4-1,5 мг; 2-феноксиэтанол присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 2-6 мг; Lгистидин присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 0,5-5 мг и ВДИ.
В соответствии с одним из наиболее предпочтительных аспектов двенадцатого варианта осуществления изобретения поливалентная вакцинная композиция представляет собой шестивалентную вакцинную композицию, в которой Д присутствует в количестве 22,5 Lf; С присутствует в количестве 7,5 Lf; цК присутствует в количестве 15 IOU; характеризующийся пониженной дозой инактивированный полиовирус штамма sabin Типа 1 присутствует в количестве 5 единиц антигена D, Типа 2 присутствует в количестве 16 единиц антигена D, Типа 3 присутствует в количестве 10 единиц антигена D; ИРВ присутствует в количестве 10 мкг; конъюгат Н. influenzae типа b ПРФ-СА присутствует в количестве 5 мкг; алюминий присутствует в количестве не более 0,9 мг; 2-феноксиэтанол присутствует в количестве 3,25 мг; Lгистидин присутствует в количестве 1,55 мг и ВДИ.
В соответствии с тринадцатым вариантом осуществления настоящего изобретения композиция поливалентной вакцины представляет собой полностью жидкую шестивалентную комбинированную вакцину. В состав полностью жидкой шестивалентной вакцины входят дифтерийный анатоксин (Д); столбнячный анатоксин (С); инактивированный цельноклеточный антиген В. pertussis (цК); инактивированные штаммы полиовируса sabin Типа I, II и III; инактивированный ротавирус (ИРВ); а также конъюгат Н. influenzae типа b ПРФ-СКМ197 и другие вспомогательные вещества, такие как адъювант на основе алюминия (фосфат алюминия, гидроксид алюминия), 2-феноксиэтанол, L-гистидин и ВДИ.
В соответствии с одним из предпочтительных аспекгов тринадцатого варианта осуществления изобретения поливалентная вакцинная композиция представляет собой шестивалентную вакцинную композицию, в которой Д присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1 -50 Lf; С присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-30 Lf; цК присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1050 IOU; характеризующийся пониженной дозой инактивированный полиовирус штамма sabin Типа 1 присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-20 единиц антигена D, Типа 2 в диапазоне 1-20 единиц антигена D, Типа 3 в диапазоне 1-20 единиц антигена D; ИРВ присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-30 мкг; конъюгат Н. influenzae типа b ПРФ-СИМлот присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 2-20 мкг содержания ПРФ; алюминий (Al3+) присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 0,4-1,5 мг; 2-феноксиэтанол присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 2-6 мг; L-гистидин присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 0,5-5 мг и ВДИ.
В соответствии с одним из наиболее предпочтительных аспектов тринадцатого варианта осуществления изобретения поливалентная вакцинная композиция представляет собой шестивалентную вакцинную композицию, в которой Д присутствует в количестве 22,5 Lf; С присутствует в количестве 7,5 Lf; цК присутствует в количестве 15 IOU; характеризующийся пониженной дозой инактивированный полиовирус штамма sabin Типа 1 присутствует в количестве 5 единиц антигена D, Типа 2 присутствует в количестве 16 единиц антигена D, Типа 3 присутствует в количестве 10 единиц антигена D; ИРВ присутствует в количестве 5 мкг; конъюгат Н. influenzae типа b ПРФ-СИМлот присутствует в количестве 10 мкг; алюминий присутствует в количестве не более 0,9 мг; 2-феноксиэтанол присутствует в количестве 3,25 мг; Lгистидин присутствует в количестве 1.55 мг и ВДИ.
Семивалентная комбинированная вакцинная композиция и способ ее приготовления
В соответствии с четырнадцатым вариантом осуществления настоящего изобретения полностью жидкая семивалентная (цКДС-HBsAg-ИПВ-ИРВ-Хиб) вакцина была приготовлена следующим образом.
a) Была проведена индивидуальная адсорбция материала ИПВ (штамм Sabin/Salk) и материала ИРВ
- 10 043682 на гидроксиде алюминия, с последующим установлением значения рН на уровне 6,2-6,6.
b) Была проведена адсорбция HBsAg на фосфате алюминия, с последующим установлением значения рН на уровне 6,0-6,5.
c) Была проведена адсорбция Д на фосфате алюминия, с последующим установлением значения рН на уровне 5,5-6,5 и добавлением С.
d) Растворы, полученные на этапах b и с, были объединены, с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 18-24 ч.
e) Были добавлены указанные выше смеси (полученные на этапах а и d), с последующим установлением значения рН на уровне 6,4-6,6 и перемешиванием при комнатной температуре в течение 60 мин.
f) К указанной выше смеси были добавлены цК и гистидин, с последующим перемешиванием в течение 60 мин и оставлением в статическом состоянии на ночь при температуре 2-8°С.
g) Конъюгат Хиб ПРФ и 2-ФЭ были добавлены к смеси, полученной на этапе d, при температуре 28°С, с последующим установлением значения рН на уровне 6,4-6,6.
h) NaCl и ВДИ (в достаточном количестве) были добавлены к смеси, полученной на этапе g, с последующим перемешиванием в течение 2 ч.
В соответствии с пятнадцатым вариантом осуществления настоящего изобретения композиция поливалентной вакцины представляет собой полностью жидкую семивалентную комбинированную вакцину. В состав полностью жидкой семивалентной вакцины входят дифтерийный анатоксин (Д); столбнячный анатоксин (С); инактивированный цельноклеточный антиген В. pertussis (цК); инактивированные штаммы полиовируса salk Типа I, II и III; инактивированный ротавирус (ИРВ); а также конъюгат Н. influenzae типа b ПРФ-СА; поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg) и другие вспомогательные вещества, такие как адъювант на основе алюминия (фосфат алюминия, гидроксид алюминия), 2феноксиэтанол, L-гистидин и ВДИ.
В соответствии с одним из предпочтительных аспектов пятнадцатого варианта осуществления изобретения поливалентная вакцинная композиция представляет собой семивалентную вакцинную композицию, в которой Д присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1 -50 Lf; С присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-30 Lf; цК присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1050 IOU; характеризующийся пониженной дозой инактивированный полиовирус штамма Salk Типа 1 присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-20 единиц антигена D, Типа 2 в диапазоне 1-20 единиц антигена D, Типа 3 в диапазоне 1-20 единиц антигена D; ИРВ присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-30 мкг; конъюгат Н. influenzae типа b ПРФ-СА присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 2-20 мкг содержания ПРФ; поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg) присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 5-30 мкг; алюминий (Al3+) присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 0,4-1,5 мг; 2-феноксиэтанол присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 2-6 мг; L-гистидин присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 0,5-5 мг и ВДИ.
В соответствии с одним из наиболее предпочтительных аспектов пятнадцатого варианта осуществления изобретения поливалентная вакцинная композиция представляет собой семивалентную вакцинную композицию, в которой Д присутствует в количестве 22,5 Lf; С присутствует в количестве 7,5 Lf; цК присутствует в количестве 15 IOU; характеризующийся пониженной дозой инактивированный полиовирус штамма Salk Типа 1 присутствует в количестве 10 единиц антигена D, Типа 2 присутствует в количестве 2 единиц антигена D, Типа 3 присутствует в количестве 10 или 16 единиц антигена D; ИРВ присутствует в количестве 10 мкг; конъюгат Н. influenzae типа b ПРФ-СА присутствует в количестве 5 мкг, поверхностный антиген гепатита В (HBsAg) присутствует в количестве 12,5 мкг; алюминий присутствует в количестве не более 0,9 мг; 2-феноксиэтанол присутствует в количестве 3,25 мг; L-гистидин присутствует в количестве 1,55 мг и ВДИ.
В соответствии с шестнадцатым вариантом осуществления настоящего изобретения композиция поливалентной вакцины представляет собой полностью жидкую семивалентную комбинированную вакцину. В состав полностью жидкой семивалентной вакцины входят дифтерийный анатоксин (Д); столбнячный анатоксин (С); инактивированный цельноклеточный антиген В. pertussis (цК); инактивированные штаммы полиовируса salk Типа I, II и III; инактивированный ротавирус (ИРВ); а также конъюгат Н. influenzae типа b ПРФ-CRM197; поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg) и другие вспомогательные вещества, такие как адъювант на основе алюминия (фосфат алюминия, гидроксид алюминия), 2феноксиэтанол, L-гистидин и ВДИ.
В соответствии с одним из предпочтительных аспектов шестнадцатого варианта осуществления изобретения поливалентная вакцинная композиция представляет собой семивалентную вакцинную композицию, в которой Д присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-50 Lf; С присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-30 Lf; цК присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 10-50 IOU; характеризующийся пониженной дозой инактивированный полиовирус штамма Salk Типа 1 присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-20 единиц антигена D, Типа 2 в диапазоне 1-20 единиц антигена D, Типа 3 в диапазоне 1-20 единиц антигена D; ИРВ присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-30 мкг; конъюгат Н. influenzae типа b ПРФ-CRM197 присутствует в количестве,
- 11 043682 находящемся в диапазоне 2-20 мкг содержания ПРФ; поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg) присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 5-30 мкг; алюминий (Al3+) присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 0,4-1,5 мг; 2-феноксиэтанол присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 2-6 мг; L-гистидин присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 0,5-5 мг и ВДИ.
В соответствии с одним из наиболее предпочтительных аспектов шестнадцатого варианта осуществления изобретения поливалентная вакцинная композиция представляет собой семивалентную вакцинную композицию, в которой Д присутствует в количестве 22,5 Lf; С присутствует в количестве 7,5 Lf; цК присутствует в количестве 15 IOU; характеризующийся пониженной дозой инактивированный полиовирус штамма Salk Типа 1 присутствует в количестве 10 единиц антигена D, Типа 2 присутствует в количестве 2 единиц антигена D, Типа 3 присутствует в количестве 10 или 16 единиц антигена D; ИРВ присутствует в количестве 10 мкг; конъюгат Н. influenzae типа b ПРФ-CRM197 присутствует в количестве 10 мкг содержания ПРФ, поверхностный антиген гепатита В (HBsAg) присутствует в количестве 12,5 мкг; алюминий присутствует в количестве не более 0,9 мг; 2-феноксиэтанол присутствует в количестве 3,25 мг; L-гистидин присутствует в количестве 1,55 мг и ВДИ.
В соответствии с семнадцатым вариантом осуществления настоящего изобретения композиция поливалентной вакцины представляет собой полностью жидкую семивалентную комбинированную вакцину. В состав полностью жидкой семивалентной вакцины входят дифтерийный анатоксин (Д); столбнячный анатоксин (С); инактивированный цельноклеточный антиген В. pertussis (цК); инактивированные штаммы полиовируса sabin Типа I, II и III; инактивированный ротавирус (ИРВ); а также конъюгат Н. influenzae типа b ПРФ-СА; поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg) и другие вспомогательные вещества, такие как адъювант на основе алюминия (фосфат алюминия, гидроксид алюминия), 2феноксиэтанол, L-гистидин и ВДИ.
В соответствии с одним из предпочтительных аспектов семнадцатого варианта осуществления изобретения поливалентная вакцинная композиция представляет собой семивалентную вакцинную композицию, в которой Д присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1 -50 Lf; С присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-30 Lf; цК присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1050 IOU; характеризующийся пониженной дозой инактивированный полиовирус штамма sabin Типа 1 присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-20 единиц антигена D, Типа 2 в диапазоне 1-20 единиц антигена D, Типа 3 в диапазоне 1-20 единиц антигена D; ИРВ присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-30 мкг; конъюгат Н. influenzae типа b ПРФ-СА присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 2-20 мкг содержания ПРФ; поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg) присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 5-30 мкг; алюминий (Al3+) присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 0,4-1,5 мг; 2-феноксиэтанол присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 2-6 мг; L-гистидин присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 0,5-5 мг и ВДИ.
В соответствии с одним из наиболее предпочтительных аспектов семнадцатого варианта осуществления изобретения поливалентная вакцинная композиция представляет собой семивалентную вакцинную композицию, в которой Д присутствует в количестве 22,5 Lf; С присутствует в количестве 7,5 Lf; цК присутствует в количестве 15 IOU; характеризующийся пониженной дозой инактивированный полиовирус штамма sabin Типа 1 присутствует в количестве 5 единиц антигена D, Типа 2 присутствует в количестве 16 единиц антигена D, Типа 3 присутствует в количестве 10 единиц антигена D; ИРВ присутствует в количестве 10 мкг; конъюгат Н. influenzae типа b ПРФ-СА присутствует в количестве 5 мкг содержания ПРФ, поверхностный антиген гепатита В (HBsAg) присутствует в количестве 12,5 мкг; алюминий присутствует в количестве не более 0,9 мг; 2-феноксиэтанол присутствует в количестве 3,25 мг; L-гистидин присутствует в количестве 1,55 мг и ВДИ.
В соответствии с восемнадцатым вариантом осуществления настоящего изобретения композиция поливалентной вакцины представляет собой полностью жидкую семивалентную комбинированную вакцину. В состав полностью жидкой семивалентной вакцины входят дифтерийный анатоксин (Д); столбнячный анатоксин (С); инактивированный цельноклеточный антиген В. pertussis (цК); инактивированные штаммы полиовируса sabin Типа I, II и III; инактивированный ротавирус (ИРВ); конъюгат Н. influenzae типа b ПРФ-CRM197; поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg) и другие вспомогательные вещества, такие как адъювант на основе алюминия (фосфат алюминия, гидроксид алюминия), 2феноксиэтанол, L-гистидин и ВДИ.
В соответствии с одним из предпочтительных аспектов восемнадцатого варианта осуществления изобретения поливалентная вакцинная композиция представляет собой семивалентную вакцинную композицию, в которой Д присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-50 Lf; С присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-30 Lf; цК присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 10-50 IOU; характеризующийся пониженной дозой инактивированный полиовирус штамма sabin Типа 1 присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-20 единиц антигена D, Типа 2 в диапазоне 1-20 единиц антигена D, Типа 3 в диапазоне 1-20 единиц антигена D; ИРВ присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-30 мкг; конъюгат Н. influenzae типа b ПРФ-CRM197 присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 2-20 мкг содержания ПРФ; поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg) присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 5-30 мкг; алюминий (Al3+) присутствует в количе- 12 043682 стве, находящемся в диапазоне 0,4-1,5 мг; 2-феноксиэтанол присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 2-6 мг; L-гистидин присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 0,5-5 мг и ВДИ.
В соответствии с одним из наиболее предпочтительных аспектов восемнадцатого варианта осуществления изобретения поливалентная вакцинная композиция представляет собой семивалентную вакцинную композицию, в которой Д присутствует в количестве 22,5 Lf; С присутствует в количестве 7,5 Lf; цК присутствует в количестве 15 IOU; характеризующийся пониженной дозой инактивированный полиовирус штамма sabin Типа 1 присутствует в количестве 5 единиц антигена D, Типа 2 присутствует в количестве 16 единиц антигена D, Типа 3 присутствует в количестве 10 единиц антигена D; ИРВ присутствует в количестве 10 мкг; конъюгат Н. influenzae типа b ПРФ-CRM197 присутствует в количестве 10 мкг содержания ПРФ, поверхностный антиген гепатита В (HBsAg) присутствует в количестве 12,5 мкг; алюминий присутствует в количестве не более 0,9 мг; 2-феноксиэтанол присутствует в количестве 3,25 мг; Lгистидин присутствует в количестве 1,55 мг и ВДИ.
В соответствии с девятнадцатым вариантом осуществления настоящего изобретения композиция/состав комбинированной вакцины содержит один или более консервантов, выбираемых из группы, включающей бензетония хлорид (Фемерол), тиомерсал, фенол и 2-феноксиэтанол (2-ФЭ). Более предпочтительно, композиция/состав комбинированной вакцины содержит 2-феноксиэтанол (2-ФЭ) в качестве консерванта.
В соответствии с двадцатым вариантом осуществления настоящего изобретения композиция/состав комбинированной вакцины содержит одно или более фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ, выбираемых из группы, включающей сахара и полиолы, поверхностно-активные вещества, полимеры, соли, аминокислоты, модификаторы рН и т.д.
В соответствии с первым аспектом двадцатого варианта осуществления изобретения сахара и полиолы включают сахарозу, трегалозу, лактозу, мальтозу, галактозу, маннитол, сорбитол, глицерол и т.д. В соответствии со вторым аспектом двадцатого варианта осуществления изобретения поверхностноактивные вещества включают неионные поверхностно-активные вещества, такие как полисорбат 20, полисорбат 80 и т.д. В соответствии с третьим аспектом двадцатого варианта осуществления изобретения полимеры включают декстран, карбоксиметилцеллюлозу, гиалуроновую кислоту, циклодекстрин и т.д. Примеры солей могут включать NaCl, MgCl2, KCl, CaCl2 и т.д. В соответствии с четвертым аспектом двадцатого варианта осуществления изобретения аминокислоты включают аргинин, глицин, гистидин и т.д. В соответствии с пятым аспектом двадцатого варианта осуществления изобретения модификаторы рН включают натрия, гидроксид, хлористоводородную кислоту и т.д.
В соответствии с двадцать первым вариантом осуществления настоящего изобретения значение рН композиции/состава готовой комбинированной вакцины находится в диапазоне значений рН от 6,0 до рН 7,5; более предпочтительно, в диапазоне значений рН от 6,2 до рН 7,2; и наиболее предпочтительно, в диапазоне значений рН от 6,4 до рН 6,6.
Примеры
Пример 1. Приготовление характеризующегося пониженной дозой инактивированного антигена полиовируса (Salk/Sabin).
Компания Serum Institute of India разработала способ инактивации и адсорбции инактивированного полиовируса в соответствии со следующим протоколом.
Клетки CCL81-VERO (клетки почки обезьяны) использовали в качестве клеток-хозяев для выращивания полиовируса, т.е. штаммов sabin и salk.
Очистка ИПВ.
Пул осветленной собранной культуральной жидкости подвергали концентрированию 10Х с использованием системы фильтрации в тангенциальном потоке с кассетами 100 кДа (0,5 м2), и затем трехкратной диафильтрации с фосфатным буфером (40 мМ, pH 7,0).
Концентрат был очищен методом ионообменной хроматографии (ИОХ) 10Х концентрат после ФТП пропускали через смолу DEAE Sepharose для быстрого потока (слабая анионообменная смола), помещенную в колонку xk-26 с использованием системы Akta explorer (GE Healthcare). Отрицательно заряженные примеси связывались на колонке, тогда как полиовирус был собран в проходящем потоке с фосфатным буфером 40 мМ.
Для сведения к минимуму потерь антигена в ходе весьма длительной процедуры инактивации (13 дней), очищенный пул вирусного материала подвергали буферному обмену из фосфатного буфера в ТРИС-буфер (40 мМ, pH 7) с использованием системы ФТП [100 кДа, 0,1 м2). Очищенный пул вирусного материала подвергали обмену с тремя объемами Трис-буфера.
Инактивация ИПВ.
К концентрированному10Х М-199 добавляли 0,5% раствор глицина для достижения итоговой концентрации 1X. К очищенному вирусному материалу был добавлен инактивирующий агент формалин (0,025%) при постоянном перемешивании. Инактивацию проводили при температуре 37°С при постоянном перемешивании в течение 13 дней, с проведением фильтрации через фильтр с размером пор 0,22 мкм на 7 и 13 день.
- 13 043682
Результаты и выводы.
Когда методы инактивации формальдегидом проводили в присутствии фосфатного буфера, наблюдались существенные потери антигена D штаммов Sabin и Salk, однако было показано, что инактивация формальдегиром в присутствии Трис-буфера приводила к минимальным потерям антигена D.
| Содержание антигена D (40 мМ фосфатный буфер во время инактивации) | Содержание антигена D (40 мМ Трис-буфер во время инактивации) | |
| Тип I | 52,70 единиц антигена D/мл | 408,19 единиц антигена D/мл |
| Тип II | 22,63 единиц антигена D/мл | 180,20 единиц антигена 1)/мл |
| Тип III | 4,21 единиц антигена D/мл | 21,50 единиц антигена 1)/мл |
Пример 2. Приготовление пригодного для инъекционного введения инактивированного нагреванием ротавирусного антигена (ИРВ).
Был использован штамм ротавируса (CDC-9), раскрываемый в заявке на выдачу патента РСТ № PCT/US 2010/034537, озаглавленной Новые штаммы человеческого ротавируса и вакцины, поданной 12 мая 2010 года; и в заявке на выдачу патента РСТ №PCT/US 2008/075239 озаглавленной Термическая инактивация ротавируса, поданной 4 сентября 2008 года.
Центры контроля и профилактики заболеваний США (CDC) разработали метод инактивации ротавируса. CDC также разработали анализ для проведения испытаний на специфичные IgG к ротавирусу и нейтрализующие антитела.
Ротавирус (штамм CDC-9) культивировали с использованием клеток Vero (CCL-81) в качестве клеток-хозяев, собранный материал осветляли с использованием фильтровальной установки с фильтрами с размером пор 30+2 мкм для удаления клеточного дебриса.
Осветленный собранный материал обрабатывали бензоназой (5000 ед./л) с инкубированием при температуре 37°С в течение 4 ч при непрерывном перемешивании.
Материал, обработанный бензоназой, подвергали концентрированию 10Х и диафильтрации 4Х с использованием буфера состава HBSS (сбалансированный солевой раствор Хэнкса) + 10% сорбита и кассет 100 кДа.
Материал, полученный после диафильтрации, был подвергнут диализу с использованием буфера для разведения и дополнительно очищен с использованием аффинной хроматографии (со смолой целлуфина сульфат).
Инактивацию очищенного CDC-9 проводили с использованием нагревания при температуре 60°С в течение 5 ч с одной сменой контейнера через 2 ч. Инактивированный материал CDC-9 хранили при температуре -80°С до момента дальнейшего использования.
Пример 3. Очистка дифтерийного анатоксина.
Дифтерийный анатоксин был очищен с использованием гель-фильтрационной хроматографии с применением параметров процесса, указанных ниже.
Таблица 1
Параметры процесса
| № | Параметр | Информация |
| 1 | Использованный нативный материал Д | — |
| 2 | Содержание (нативный материал Д) путем анализа | 11 мг/мл |
- 14 043682
| Лоури | ||
| 3 | LF/мл | 3000 |
| 4 | Метод очистки | Гель-фильтрационная хроматография (ГФХ) |
| 5 | Смола | Sephacryl S-300 HR |
| 6 | Использованная колонка | ХК 26/70 см |
| 7 | Высота слоя в колонке | - 50 см |
| 8 | Линейная скорость потока | 1-3 мл/мин. |
| 9 | Загрузка образца (Д) | 4% от общего объема слоя в колонке |
| 10 | Сбор фракций | 5 мл каждая (2 минуты) |
| 11 | Анализ | Анализ Лоури, определение LF, определение % мономера |
Фракции с 6 по 11 были объединены и подвергнуты анализу для определения содержания мономера, (см. чертеж).
Результаты и интерпретация.
Было проведено множество циклов с использованием указанных выше параметров. Концентрат CRM197 был использован в качества маркера для сравнения % содержания мономера. Мономерный CRM197 можно рассматривать как самую чистую форму ДА. Было показано, что процентное содержание мономера находилось в диапазоне 80-90%.
Таблица 2 % извлечения и содержание мономера для полученного очищенного ДА
| № | Испытуемый образец | Концентрация белка (мг/мл) | % мономера | % извлечения |
| 1 | Нативный ДА | — | 67,19 | — |
| 2 | Нативный CRM | — | 86,96 | — |
- 15 043682
| 3 | GFC DT FR 8 | 2,03 | 83,21 | Вводимое количество ДА 120 мг Полученное количество 75,1 мг (62,5%) |
| 4 | GFC DT FR 9 | 3,38 | 87,15 | |
| 5 | GFC DTFR 10 | 4,08 | 87,24 | |
| 6 | GFC DTFR11 | 3,52 | 86,60 | |
| 7 | GFC DT FR 12 | 2,01 | 89,97 | |
| 8 | GFC DT FR lOll | 3,83 | 86,03 | 31,6% |
| 9 | GFC DT FR 912 | 2,96 | 87,42 | 48,9% |
| 10 | GFC DT FR 713 | 2,19 | 86,24 | 63,3% |
Пример 4. Очистка столбнячного анатоксина.
Столбнячный анатоксин был очищен с использованием гель-фильтрационной хроматографии / ХГВ (Phenyl Sepharose) с применением параметров процесса, указанных ниже.
Таблица 3
Параметры процесса
| № | Параметр | Информация |
| 1 | Использованный нативный материал С | — |
| 2 | Содержание (нативный материал С) путем анализа Лоури | 11 мг/мл |
| 3 | LF/мл | 3000 |
| 4 | Метод очистки | Гель-фильтрационная хроматография (ГФХ) |
| 5 | Смола | Sephacryl S-300 HR |
| 6 | Использованная | ХК 26/70 см |
| колонка | ||
| 7 | Высота слоя в колонке | ~ 50 см |
| 8 | Линейная скорость потока | 1-3 мл/мин. |
| 9 | Загрузка образца (С) | 4% от общего объема слоя в колонке |
| 10 | Сбор фракций | 5 мл каждая (2 минуты) |
| 11 | Анализ | Анализ Лоури, определение LF, определение % мономера |
Результаты.
Было проведено множество циклов с использованием указанных выше параметров. Было показано,
- 16 043682 что процентное содержание мономера находилось в диапазоне 80-90%.
Пример 5. Приготовление конъюгата Хиб ПРФ-белок.
Полисахарид ПРФ был получен следующим образом.
Бактерии Н. influenzae типа b выращивали в полусинтетической среде при определенных условиях температуры, перемешивания, оптической плотности и т.д. ПРФ представляет собой внешний мембранно-связанный полисахарид, который высвобождается в среду во время культивирования в условиях перемешивания. Отделенный от биомассы культуральный бульон содержит неочищенный ПРФ, который был подвергнут очистке путем осаждения с использованием поверхностно-активного вещества N,N,Nтриметил-1-гексадеканаминия бромид, с последующим осаждением в градиенте этанола и фильтрацией. Готовый очищенный полисахарид ПРФ был подвергнут испытаниям на соответствие спецификациям, таким как содержание эндотоксинов, нуклеиновых кислот и белка, в соответствии с требованиями ВОЗ, Британской фармакопеи, Европейской фармакопеи, Индийской фармакопеи и т.д.
Конъюгат Хиб ПРФ-белок был приготовлен следующим образом.
Конъюгат полисахарида был приготовлен путем объединения полисахарида ПРФ с белкомносителем CRM197. В качестве оптимального соотношения реагентов для реакции конъюгации, т.е. ПРФ, ЦДАП и CRM197 было выбрано соотношение 1:1.5:1. Во время конъюгации очищенный полисахарид ПРФ был деполимеризован с использованием щелочного буферного раствора (0,4 М карбонатнобикарбонатный буферный раствор, рН 10,5 0,1) ля получения ПРФ с уменьшенным размером молекул. ПРФ с уменьшенным размером молекул был обработан веществом ЦДАП (1-циано-4диметиламинопиридиния тетрафторборат) для цианилирования, с образованием цианатного эфира. Активированный цианилированный полисахарид может, таким образом, быть напрямую соединен с аминогруппой белка-носителя CRM197. Степень преобразования конъюгата Хиб была подтверждена методом ВЭЖХ. Реакция конъюгации была остановлена после достижения необходимого уровня преобразования конъюгата, соответствующего спецификации преобразование конъюгата Хиб не менее 65%, после достижения этого значения реакция конъюгации была остановлена путем прибавления глицина (2 М). Конъюгат Хиб ПРФ-CRM197 был очищен путем ультрафильтрации через мембранные фильтры (300 кДа и 100 кДа) для удаление непрореагировавших реактивов и побочных продуктов. Готовый конъюгированный материал был профильтрован через фильтр с размером пор 0,22 мкм и помещен на хранение при температуре 2-8°С.
Были определены следующие характеристики качества антигенного конъюгата Хиб ПРФ-CRM197:
содержание ПРФ (мг/мл): 1,49;
содержание белка (мг/мл): 2,98;
отношение (Ps : белок): 0,52;
свободный ПРФ (%): 1,77;
молекулярная масса белка (кДа): 983;
средняя молекулярная масса (кДа): 752.
Пример 6. Композиция двухвалентной (ИПВ-ИРВ) вакцины.
Компания Serum Institute of India разработала двухвалентную композицию, содержащую пониженную дозу инактивированного полиовируса и инактивированный ротавирус, в соответствии со следующим протоколом.
Композиция двухвалентной вакцины описана ниже.
Таблица 4
Композиция двухвалентной вакцины
| Компоненты | Двухвалентная вакцина, состав I (Salk ИПВ + ИРВ) | Двухвалентная вакцина, состав II (Salk ИПВ + ИРВ) | Двухвалентная вакцина, состав III (Salk ИПВ + ИРВ) | Двухвалентная вакцина, состав IV (Sabin ИПВ + ИРВ) |
| Содержание антигена - ИПВ | Тип 1: > 8 единиц антигена D/доза Тип 2: > 2 | Тип 1: > 10 единиц антигена D/доза Тип 2: > 2 | Тип 1: > 10 единиц антигена D/доза Тип 2: > 2 | Тип 1: > 5 единиц антигена D/доза Тип 2: > 16 |
- 17 043682
| единиц антигена D/доза Тип 3: > 5 единиц антигена D/доза | единиц антигена D/доза Тип 3: > 10 единиц антигена D/доза | единиц антигена D/доза Тип 3: > 16 единиц антигена D/доза | единиц антигена D/доза Тип 3: > 10 единиц антигена D/доза | |
| Содержание антигена - ИРВ | Общий белок >10 мкг/доза | Общий белок >10 мкг/доза | Общий белок >10 мкг/доза | Общий белок >10 мкг/доза |
| Алюминий | 0,8 мг/доза | 0,8 мг/доза | 0,8 мг/доза | 0,8 мг/доза |
Пример 7. Приготовление двухвалентной (ИПВ-ИРВ) вакцины.
Двухвалентная (ИПВ-ИРВ) вакцина была приготовлена в соответствии с процедурой, описанной ниже.
Адсорбция ИПВ.
Помещают необходимый объем А1(ОН)3 в резервуар.
Добавляют необходимый объем одновалентного материала ИПВ Salk/Sabin и дополняют разбавителем до достижения итогового объема.
Доводят значение рН готового состава до 6,5 с использованием 1 н. раствора NaOH/1 н. раствора HCl.
Помещают одновалентный материал в магнитную мешалку/на качающуюся платформу на ночь при температуре 2-8°С.
Адсорбция ИРВ.
Помещают необходимый объем А1(ОН)3 в резервуар.
Добавляют необходимый объем материала ИРВ и дополняют разбавителем до достижения итогового объема.
Доводят значение рН готового состава до 6,5 с использованием 1 н. раствора NaOH/1 н. раствора HCl.
Помещают одновалентный материал в магнитную мешалку/на качающуюся платформу на ночь при температуре 2-8°С.
Приготовление готового состава двухвалентной (ИПВ-ИРВ) вакцины.
Смешивают одновалентные материалы ИПВ и ИРВ.
Выдерживают при температуре 2-8°С на качающейся платформе в течение 2 ч.
Хранят готовый состав при температуре 2-8°С до момента дальнейшего использования.
Пример 8. Испытания эффективности двухвалентной вакцины.
Активность двухвалентной вакцины оценивали путем испытаний образов сыворотки на содержание нейтрализующих антител к полиовирусу Sabin типа 1, 2 и 3, а также к ротавирусу штамма Wa с использованием анализов микронейтрализации. Титры нейтрализующих антител к полиовирусам указывают в формате Iog2. Титр нейтрализующих антител, равный 2,5 рассматривают как отрицательный. Для ротавируса титр нейтрализующих антител <20 рассматривают как отрицательный.
- 18 043682
Таблица 5
| Идент ифика тор образц а | Sabin 1 | Sabin 2 | Sabin 3 | ИРВ (Wa) | |||||
| ДО | Д42 | ДО | Д42 | до | Д42 | ДО | Д42 | ||
| Salk 8-2-5 + ИРВ 10 мкг | 7А | 2,5 | 6,17 | 2,5 | 10,5 | 2,5 | 7,83 | <20 | 320 |
| 7В | 2,5 | 4,5 | 2,5 | 7,17 | 2,5 | 2,5 | <20 | 1280 | |
| 8А | 2,5 | 7,83 | 2,5 | 9,5 | 2,5 | 8,83 | <20 | 320 | |
| 8В | 2,5 | 8,5 | 2,5 | 10,5 | 2,5 | 6,5 | <20 | 160 | |
| Salk 5-2-5 + ИРВ 10 мкг | 9А | 2,5 | 5,5 | 2,5 | 10,5 | 2,5 | 3,5 | <20 | 640 |
| 9В | 2,5 | 2,5 | 2,5 | 8,83 | 2,5 | 5,83 | <20 | 640 | |
| Sabin 5-16-10 + ИРВ 10 мкг | 10А | 2,5 | 7,5 | 2,5 | 9,5 | 2,5 | 6,5 | <20 | 640 |
| 10В | 2,5 | 10,5 | 2,5 | 10,5 | 2,5 | 10,5 | <20 | 320 | |
| 11А | 2,5 | 10,5 | 2,5 | 10,5 | 2,5 | 10,5 | <20 | 640 | |
| 11В | 2,5 | 10,5 | 2,5 | 10,5 | 2,5 | 9,17 | <20 | 640 | |
| Sabin 2,5-8-5 + ИРВ 10 мкг | 12А | 2,5 | 10,5 | 2,5 | 10,5 | 2,5 | 8,83 | <20 | 320 |
| 12В | 2,5 | 10,5 | 2,5 | 10,5 | 2,5 | 8,17 | <20 | 80 | |
| Живой ротавирус (Log 5,5 FFU) | 15А | 2,5 | 2,5 | 2,5 | 2,5 | 2,5 | 2,5 | <20 | 320 |
| 15В | 2,5 | 2,5 | 2,5 | 2,5 | 2,5 | 2,5 | <20 | 640 | |
| Отрицательно | 17А | 2,5 | 2,5 | 2,5 | 2,5 | 2,5 | 2,5 | <20 | <20 |
| 17В | 2,5 | 2,5 | 2,5 | 2,5 | 2,5 | 2,5 | <20 | <20 | |
| контро ль | 6,5 | 4,83 | 4,17 | <20 (отрицат ельный контроль ) | |||||
| 6,5 | 5,17 | 4,5 | 160 (положи тельный контроль 1) | ||||||
| 6,17 | 5,5 | 4,5 | 1280 (положи тельный контроль 2) | ||||||
| 5,83 | 4,5 | 5,5 |
Числовые значения (например, 8-2-5) в столбце А обозначают единицы антигена D полиовируса Типов 1-2-3, соответственно. Каждая морская свинка (с 7А по 12В) получила три дозы комбинированной вакцины, содержащей ИПВ и 10 мкг антигена инактивированного ротавируса (ИРВ) в день 1, день 14 и день 28, образцы сыворотки были взяты в день 42. Морских свинок 15А и 15В, которые получили три дозы живого ротавируса (log 5,5 FFU или 10 мкг), рассматривали в качестве положительного контроля. В группе отрицательного контроля (17А и 17В) для иммунизации использовали только состав, содержащий алюминий без антигена.
- 19 043682
Таблица 6
| SNT для трехвалентной вакцины Salk+ротавирус доза 1 и доза 2 | |||||||||||||
| Группа 7: Salk+ротавирус 8-2-5 | Группа Salk+ротавирус 8-2 | 8: -5 | Группа 9: Salk+ротавирус 5-2-5 | ||||||||||
| (1 доза) | (2 доза) | (2 доза) | |||||||||||
| Крыс а № | Тип 1 | Тип 2 | Тип 3 | Крыс а№ | Тип 1 | Тип 2 | Тип 3 | Крыс а№ | Тип 1 | Тип 2 | Тип 3 | ||
| 1 | 2 | 7 | 7 | 1 | 10 | 8 | 11 | 1 | 3 | 9 | 12 | ||
| 2 | 3 | 7 | 9 | 2 | 7 | 8 | 10 | 2 | 7 | 6 | 12 | ||
| 3 | 4 | 7 | 8 | 3 | 7 | 7 | 7 | 3 | 7 | 8 | 10 | ||
| 4 | 4 | 6 | 10 | ,4 | 10 | 7 | 10 | 4 | 11 | 9 | 8 | ||
| 5 | 0 | 7 | 8 | 5 | 9 | 7 | 12 | 5 | 5 | 6 | 10 | ||
| 6 | 0 | 9 | 10 | 6 | 5 | 8 | 9 | 6 | 10 | 9 | 12 | ||
| 7 | 5 | 7 | 10 | 7 | 5 | 6 | 10 | 7 | 6 | 6 | 12 | ||
| 8 | 8 | 9 | 6 | 8 | 10 | 8 | 11 | 8 | 2 | 10 | 12 | ||
| 9 | 4 | 8 | 5 | 9 | 6 | 9 | 11 | 9 | 9 | 9 | 10 | ||
| 10 | 6 | 8 | 10 | 10 | 7 | 9 | 10 | 10 | 5 | НЗ | НЗ |
Таблица 7
SNT для трехвалентной вакцины Sabin+ротавирус доза 1 и доза 2
| Группа Sabin+ротавирус 5-16-10 | 10: | Группа Sabin+ротавирус 5-16-10 | И: | Группа Sabin+ротавирус 2,5-8-5 | 12: | ||||||||
| (1 доза) | (2 доза) | (2 доза) | |||||||||||
| Крыс | Тип | Тип | Тип | Крыс | Тип | Тип | Тип | Крыс | Тип | Тип | Тип | ||
| а№ | 1 | 2 | 3 | а№ | 1 | 2 | 3 | а№ | 1 | 2 | 3 | ||
| 1 | 7 | 4 | И | 1 | 8 | 7 | 12 | 1 | 5 | 4 | И |
- 20 043682
| 2 | 10 | 5 | 11 | 2 | 5 | 7 | НЗ ! | 2 | 7 | 2 | 12 | |
| 3 | 7 | 3 | 10 | 3 | 8 | 4 | 12 j | 3 | 6 | 6 | 9 | |
| 4 | 8 | 5 | И | 4 | 6 | 7 | 12 | 4 | 6 | 8 | 9 | |
| 5 | 7 | 4 | 11 | 5 | 8 | 7 | 12 | 5 | 7 | 5 | 8 | |
| 6 | 8 | 4 | 11 | 6 | 8 | 7 | 12 s | 6 | 5 | 6 | 12 | |
| 7 | 6 | 3 | 12 | 7 | 8 | 4 | 10 | 7 | 8 | 6 | 10 | |
| 8 | И | 5 | 12 | 8 | 7 | 4 | 11 | 8 | 8 | 6 | 11 | |
| 9 | 7 | 7 | 10 | 9 | 8 | 4 | 12 | 9 | 10 | 7 | 12 | |
| 10 | 9 | 4 | 12 | 10 | 6 | 3 | 10 i | 10 | НЗ | НЗ | НЗ |
| Группа 13: Коммерческий Salk (доза 1) | Групш Комме (доза 2 | i 14: рческий Salk | Группа № 16 Отрицательный контроль | |||||||||
| Крыс а№ | Тип 1 | Тип 2 | Тип 3 | Крыс а№ | Тип 1 | Тип 2 | Тип 3 | Крыс а№ | Тип 1 | Тип 2 | Тип 3 | |
| 1 | 4 | 7 | 2 | 1 | 6 | 7 | НЗ | 1 | 0 | 0 | 0 | |
| 2 | 0 | 4 | 6 | 2 | 3 | 8 | 11 | 2 | 0 | 0 | 0 | |
| 3 | 0 | 6 | 5 | 3 | 1 | 7 | 8 | 3 | 0 | 0 | 0 | |
| 4 | 4 | 8 | 9 | 4 | 7 | 8 | 9 | 4 | 0 | 0 | 0 | |
| 5 | 0 | 7 | 3 | 5 | 2 | 5 | 7 | 5 | 0 | 0 | 0 | |
| 6 | 3 | 6 | 3 | 6 | 7 | 8 | 10 | 6 | 0 | 0 | 0 | |
| 7 | 3 | 6 | 6 | 7 | 7 | 6 | 9 | 7 | 0 | 0 | 0 | |
| 8 | 0 | 4 | 6 | 8 | 12 | 7 | 9 | 8 | 0 | 0 | 0 | |
| 9 | 5 | 8 | 5 | 9 | 10 | 9 | 11 | 9 | 0 | 0 | 0 | |
| 10 | 0 | 4 | 5 | 10 | 5 | 8 | 7 | 10 | 0 | 0 | 0 |
Результаты и интерпретация.
1. Для двухвалентной вакцины (ИПВ+ИРВ) была получена значимо более высокая сероконверсия в день 42, по сравнению с днем 0.
2. Одинарная доза трехвалентного ИПВ Sabin, разработанного в SIIL и содержащего 5:16:10 единиц антигена D с алюминием дает лучшую сероконверсию, по сравнению с коммерческим ИПВ.
3. Двойная доза трехвалентного ИПВ Sabin, разработанного в SIIL и содержащего 2,5:8:5 единиц антигена D с алюминием дает превосходную сероконверсию, по сравнению с коммерческим ИПВ.
4. Одинарная доза трехвалентного ИПВ Salk, разработанного в SIIL и содержащего 8:2:5 единиц антигена D с алюминием дает лучшую сероконверсию, по сравнению с коммерческим ИПВ.
5. Двойная доза трехвалентного ИПВ Sabin, разработанного в SIIL и содержащего 5:2:5 единиц антигена D с алюминием дает превосходную сероконверсию, по сравнению с коммерческим ИПВ.
Пример 9. Композиции шестивалентной комбинированной вакцины, содержащей пониженную дозу ИПВ, инактивированный ротавирус, Д, С, цК и конъюгат Хиб ПРФ-белок приведены ниже.
Таблица 8
Состав-1 шестивалентной вакцины с пониженной дозой ИПВ Salk
| № | КОМПОНЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ ВАКЦИНЫ | Состав 1А | Состав 1В | Состав 1С | Состав 1D | Состав 1Е | Состав 1F | Состав 1G | Состав 1Н |
| 1 | Дифтерийный анатоксин (Д) | 22,5 Lf | |||||||
| 2 | Столбнячный анатоксин (С) | 7,5 Lf | |||||||
| 3 | Инактивированный антиген В. pertussis (цК) | 15 lOU | |||||||
| 4 | Инактивированный штамм Salk полиовируса Тип I (единицы антигена D) Тип II (единицы антигена D) Тип III (единицы антигена D) | 10 | 7,5 | 8 | 10 | 10 | 7,5 | 5 | 10 |
| 2 | 16 | 2 | 2 | 2 | 16 | 2 | 2 | ||
| 10 | 10 | 5 | 5 | 12 | 10 | 5 | 16 | ||
| 5 | Инактивированный ротавирус (ИРВ) | 10 мкг | |||||||
| 6 | Конъюгат Н Influenzae b ПРФ - CRM197 | 10 мкг содержания ПРФ | |||||||
| 7 | Содержание алюминия | Не более 0,9 мг A1J' | |||||||
| 8 | 2-феноксиэтанол | 3,25 мг | |||||||
| 9 | L-гистидин | 1,55 мг | |||||||
| 10 | вди | В достаточном количестве |
- 21 043682
Состав-2 шестивалентной вакцины с пониженной дозой ИПВ Salk
Таблица 9
| № | КОМПОНЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ ВАКЦИНЫ | Состав 2А | Состав 2В | Состав 2С | Состав 2D | Состав 2Е | Состав 2F | Состав 2G | Состав 2Н |
| 1 | Дифтерийный анатоксин (Д) | 22,5 Lf | |||||||
| 2 | Столбнячный анатоксин (С) | 7,5 Lf | |||||||
| 3 | Инактивированный антиген В. pertussis (цК) | 15 lOU | |||||||
| 4 | Инактивированный штамм Salk полиовируса Тип I (единицы антигена D) Тип II (единицы антигена D) Тип III (единицы антигена D) | 10 | 7,5 | 8 | 10 | 10 | 7,5 | 5 | 10 |
| 2 | 16 | 2 | 2 | 2 | 16 | 2 | 2 | ||
| 10 | 10 | 5 | 5 | 12 | 10 | 5 | 16 | ||
| 5 | Инактивированный ротавирус (ИРВ) | 10 мкг | |||||||
| 6 | Конъюгат Н. Influenzae b ΠΡΦСА | 5 мкг содержания ПРФ | |||||||
| 7 | Содержание алюминия | Не более 0,9 мг А13+ | |||||||
| 8 | 2-феноксиэтанол | 3,25 мг | |||||||
| 9 | L-гистидин | 1,55 мг | |||||||
| 10 | ВДИ | В достаточном количестве |
Таблица 10
Состав-3 шестивалентной вакцины с пониженной дозой ИПВ Sabin
| № | КОМПОНЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ ВАКЦИНЫ | Состав ЗА | Состав ЗВ | Состав ЗС |
| 1 | Дифтерийный анатоксин (Д) | 22.5 Lf | ||
| 2 | Столбнячный анатоксин (С) | 7,5 Lf | ||
| 3 | Инактивированный антиген В. pertussis (цК) | 15 lOU | ||
| 4 | Инактивированный штамм Sabin полиовируса Тип I (единицы антигена D) Тип II (единицы антигена D) Тип III (единицы антигена D) | 5 | 2,5 | 5 |
| 16 | 8 | 8 | ||
| 10 | 5 | 10 | ||
| 5 | Инактивированный ротавирус (ИРВ) | 10 мкг | ||
| 6 | Конъюгат Н Influenzae b ПРФ CRM197 | 10 мкг содержания ПРФ | ||
| 7 | Содержание алюминия | Не более 0,9 мг А13+ | ||
| 8 | 2-феноксиэтанол | 3,25 мг | ||
| 9 | L-гистидин | 1,55 мг | ||
| 10 | ВДИ | В достаточном количестве |
- 22 043682
Таблица 11
Состав-4 шестивалентной вакцины с пониженной дозой ИПВ Sabin
| № | КОМПОНЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ ВАКЦИНЫ | Состав 4А | Состав 4В | Состав 4С |
| 1 | Дифтерийный анатоксин (Д) | 22,5 Lf | ||
| 2 | Столбнячный анатоксин (С) | 7,5 Lf | ||
| 3 | Инактивированный антиген В. pertussis (цК) | 15 ЮИ | ||
| 4 | Инактивированный штамм Sabin полиовируса Тип I (единицы антигена D) Тип II (единицы антигена D) Тип III (единицы антигена D) | 5 | 2,5 | 5 |
| 16 | 8 | 8 | ||
| 10 | 5 | 10 | ||
| 5 | Инактивированный ротавирус (ИРВ) | 10 мкг | ||
| 6 | Конъюгат Н. Influenzae b ПРФ-СА | 5 мкг содержания ПРФ | ||
| 7 | Содержание алюминия | Не более 0,9 мг А13+ | ||
| 8 | 2-феноксиэтанол | 3,25 мг | ||
| 9 | L-гистидин | 1,55 мг | ||
| 10 | вди | В достаточном количестве |
Пример 10. Процесс приготовления композиций шестивалентной комбинированной вакцины, содержащей пониженную дозу ИПВ, инактивированный ротавирус, Д, С, цК и конъюгат Хиб ПРФ-белок приведен ниже.
a) Была проведена индивидуальная адсорбция материала ИПВ (штамм Sabin/Salk) и материала ИРВ на гидроксиде алюминия, с последующим установлением значения рН на уровне 6,2-6,6.
b) Была проведена адсорбция Д на фосфате алюминия, с последующим установлением значения рН на уровне 5,5-6,5 и добавлением С и смешивания путем перемешивания при комнатной температуре в течение 18-24 ч.
c) Растворы, полученные на этапе а и этапе b, были смешаны, с последующим установлением значения рН на уровне 6,4-6,6 и перемешиванием при комнатной температуре в течение 60 мин.
d) К указанной выше смеси были добавлены цК и гистидин, с последующим перемешиванием в течение 60 мин и оставлением в статическом состоянии на ночь при температуре 2-8°С.
e) Конъюгат Хиб ПРФ и 2-ФЭ были добавлены к смеси, полученной на этапе d, при температуре 28°С, fc последующим установлением значения рН на уровне 6,4-6,6.
f) NaCl и ВДИ (в достаточном количестве) были добавлены к смеси, полученной на этапе е, с последующим перемешиванием в течение 2 ч.
Конъюгат Хиб ПРФ-белок, приготовленный с использованием нового процесса конъюгирования и впоследствии подвергнутый смешиванию при низкой температуре в присутствии стабилизатора демонстрирует более высокую стабильность при минимальном высвобождении свободного ПРФ и повышенной иммуногенности. Помимо этого, добавление цельноклеточного коклюшного антигена в смесь на более поздней стадии обеспечивает сведение к минимуму деградации путем гидролиза и обеспечивает получение стабильного и иммуногенного антигена цК.
Пример 11. Композиции шестивалентной комбинированной вакцины, содержащей пониженную дозу ИПВ, инактивированный ротавирус, Д, С, цК, HBsAg и конъюгат Хиб ПРФ-белок приведены ниже.
- 23 043682
Состав-5 семивалентной вакцины с пониженной дозой ИПВ Salk
Таблица 12
| № | КОМПОНЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ ВАКЦИНЫ | Состав 5А | Состав 5В | Состав 5С | Состав 5D | Состав 5Е | Состав 5F | Состав 5G | Состав 5Н |
| 1 | Дифтерийный анатоксин (Д) | 22,5 Lf | |||||||
| 2 | Столбнячный анатоксин (С) | 7,5 Lf | |||||||
| 3 | Инактивированный антиген В. pertussis (цК) | 15 lOU | |||||||
| 4 | Инактивированный штамм Salk полиовируса Тип I (единицы антигена D) Тип II (единицы антигена D) Тип III (единицы антигена D) | 10 2 10 | 7,5 16 10 | 8 2 5 | 10 2 5 | 10 2 12 | 7,5 16 10 | 5 2 5 | 10 2 16 |
| 5 | Инактивированный ротавирус (ИРВ) | 10 мкг | |||||||
| 6 | Конъюгат Н Influenzae b ПРФ - CRM197 | 10 мкг содержания ПРФ | |||||||
| 7 | Поверхностный антиген вируса гепатита В (HbsAg) | 12,5 мкг | |||||||
| 8 | Содержание алюминия | Не более 0,9 мг А13+ | |||||||
| 9 | 2-феноксиэтанол | 3,25 мг | |||||||
| 10 | L-гистидин | 1,55 мг | |||||||
| 11 | ВДИ | В достаточном количестве |
Состав-6 семивалентной вакцины с пониженной дозой ИПВ Salk
Таблица 7
| № | КОМПОНЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ ВАКЦИНЫ | Состав 6А | Состав 6В | Состав 6С | Состав 6D | Состав 6Е | Состав 6F | Состав 6G | Состав 6Н |
| 1 | Дифтерийный анатоксин (Д) | 22,5 Lf | |||||||
| 2 | Столбнячный анатоксин (С) | 7,5 Lf | |||||||
| 3 | Инактивированный антиген В. pertussis (цК) | 15 lOU | |||||||
| 4 | Инактивированный штамм Salk полиовируса Тип I (единицы антигена D) Тип II (единицы антигена D) Тип III (единицы антигена D) | 10 2 10 | 7,5 16 10 | 8 2 5 | 10 2 5 | 10 2 12 | 7,5 16 10 | 5 2 5 | 10 2 16 |
| 5 | Инактивированный ротавирус (ИРВ) | 10 мкг | |||||||
| 6 | Конъюгат Н. Influenzae b ПРФ-СА | 5 мкг содержания ПРФ | |||||||
| 7 | Поверхностный антиген вируса гепатита В (HbsAg) | 12,5 мкг | |||||||
| 8 | Содержание алюминия | Не более 0,9 мг А13+ | |||||||
| 9 | 2-феноксиэтанол | 3,25 мг | |||||||
| 10 | L-гистидин | 1,55 мг | |||||||
| И | вди | В достаточном количестве |
- 24 043682
Таблица 8
Состав-7 семивалентной вакцины с пониженной дозой ИПВ Sabin
| № | КОМПОНЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ ВАКЦИНЫ | Состав 7А | Состав 7В | Состав 7С |
| 1 | Дифтерийный анатоксин (Д) | 22,5 Lf | ||
| 2 | Столбнячный анатоксин (СА) | 7,5 Lf | ||
| 3 | Инактивированный антиген В. pertussis (цК) | 15 lOU | ||
| 4 | Инактивированный штамм Sabin полиовируса Тип I (единицы антигена D) Тип II (единицы антигена D) Тип III (единицы антигена D) | 5 16 10 | 2,5 8 5 | 5 8 10 |
| 5 | Инактивированный ротавирус (ИРВ) | 10 мкг | ||
| 6 | Конъюгат Н. Influenzae b ПРФ CRM197 | 10 мкг содержания ПРФ | ||
| 7 | Поверхностный антиген вируса гепатита В (HbsAg) | 12,5 мкг | ||
| 8 | Содержание алюминия | Не более 0,9 мг А13+ | ||
| 9 | 2-феноксиэтанол | 3,25 мг | ||
| 10 | L-гистидин | 1,55 мг | ||
| И | ВДИ | В достаточном: количестве |
Таблица 9
Состав-8 семивалентной вакцины с пониженной дозой ИПВ Sabin
| № | КОМПОНЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ ВАКЦИНЫ | Состав 8А | Состав 8В | Состав 8С |
| 1 | Дифтерийный анатоксин (Д) | 22,5 Lf | ||
| 2 | Столбнячный анатоксин (С) | 7,5 Lf | ||
| 3 | Инактивированный антиген В. pertussis (цК) | 15 lOU | ||
| 4 | Инактивированный штамм Sabin полиовируса Тип I (единицы антигена D) | 5 | 2,5 | 5 |
| Тип II (единицы антигена D) | 16 | 8 | 8 | |
| Тип III (единицы антигена D) | 10 | 5 | 10 | |
| 5 | Инактивированный ротавирус (ИРВ) | 10 мкг | ||
| 6 | Конъюгат Н. Influenzae b ПРФ-СА | 5 мкг содержания ПРФ | ||
| 7 | Поверхностный антиген вируса гепатита В (HbsAg) | 12,5 мкг | ||
| 8 | Содержание алюминия | Не более 0,9 мг А13+ | ||
| 9 | 2-феноксиэтанол | 3,25 мг | ||
| 10 | L-гистидин | 1,55 мг | ||
| И | ВДИ | В достаточном количестве |
Пример 12. Процесс приготовления композиций семивалентной комбинированной вакцины, содержащей пониженную дозу ИПВ, инактивированный ротавирус, Д, С, цК, HBsAg и коньюгат Хиб ПРФбелок приведен ниже.
a) Была проведена индивидуальная адсорбция материала ИПВ (штамм Sabin/Salk) и материала ИРВ на гидроксиде алюминия, с последующим установлением значения рН на уровне 6,2-6,6.
b) Была проведена адсорбция HBsAg на фосфате алюминия, с последующим установлением значения рН на уровне 6,0-6,5.
c) Была проведена адсорбция Д на фосфате алюминия, с последующим установлением значения рН на уровне 5,5-6,5 и добавлением С.
d) Растворы, полученные на этапах b и с, были объединены, с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 18-24 ч.
e) Были добавлены указанные выше смеси [полученные на этапах a b d], с последующим установлением значения рН на уровне 6,4-6,6 и перемешиванием при комнатной температуре в течение 60 мин.
-
Claims (21)
- f) К указанной выше смеси были добавлены цК и гистидин, с последующим перемешиванием в течение 60 мин и оставлением в статическом состоянии на ночь при температуре 2-8°С.g) Конъюгат Хиб ПРФ и 2-ФЭ были добавлены к смеси, полученной на этапе d, при температуре 28°С, с последующим установлением значения рН на уровне 6,4-6,6.h) NaCl и ВДИ (в достаточном количестве) были добавлены к смеси, полученной на этапе g, с последующим перемешиванием в течение 2 ч.Конъюгат Хиб ПРФ-белок, приготовленный с использованием нового процесса конъюгирования и впоследствии подвергнутый смешиванию при низкой температуре в присутствии стабилизатора демонстрирует более высокую стабильность при минимальном высвобождении свободного ПРФ и повышенной иммуногенности. Помимо этого, добавление цельноклеточного коклюшного антигена в смесь на более поздней стадии обеспечивает сведение к минимуму деградации путем гидролиза и обеспечивает получение стабильного и иммуногенного антигена цК.ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Комбинированная вакцинная композиция, содержащая:i) инактивированный полиовирусный (ИПВ) антиген, выбранный из штаммов Солка или Сэбина;ii) инактивированный ротавирусный (ИРВ) антиген; и iii) адъювант гидроксида алюминия;в которой указанный инактивированный полиовирусный (ИПВ) антиген выбран из группы, включающей:i. комбинацию штаммов Сэбина Типа 1, Типа 2, Типа 3 в соотношении 5:16:10 единиц антигенов D;ii. комбинацию штаммов Сэбина Типа 1, Типа 2, Типа 3 в соотношении 2,5:8:5 единиц антигенов D; iii. комбинацию штаммов Сэбина Типа 1, Типа 2, Типа 3 в соотношении 5:8:10 единиц антигенов D; iv. комбинацию штаммов Солка Типа 1, Типа 2, Типа 3 в соотношении 7,5:16:10 единиц антигенов D;v. комбинацию штаммов Солка Типа 1, Типа 2, Типа 3 в соотношени 8:2:5 единиц антигенов D;vi . комбинацию штаммов Солка Типа 1, Типа 2, Типа 3 в соотношении 10:2:5 единиц антигенов D; vii. комбинацию штаммов Солка Типа 1, Типа 2, Типа 3 в соотношении 10:2:10 единиц антигенов D;vi ii. комбинацию штаммов Солка Типа 1, Типа 2, Типа 3 в соотношении 10:2:12 единиц антигенов D;ix . комбинацию штаммов Солка Типа 1, Типа 2, Типа 3 в соотношении 10:2:16 единиц антигенов D;х. комбинацию штаммов Солка Типа 1, Типа 2, Типа 3 в соотношении 7,5:16:10 единиц антигенов D;xi . комбинацию штаммов Солка Типа 1, Типа 2, Типа 3 в соотношении 5:2:5 единиц антигенов D;при этом указанный инактивированный полиовирусный (ИПВ) антиген адсорбирован на адъюванте гидроксида алюминия, содержащего Al3+ в общей концентрации в диапазоне 0,4-1 мг/0,5 мл/доза, и с процентом адсорбации в диапазоне 70-99 %, пр ичем указанный инактивированный ротавирусный (ИРВ) антиген представляет собой пригодный для инъекционного введения инактивированный нагреванием ротавирус штамма CDC-9 с концентрацией, равной 10 мкг/доза, и адсорбирован на адъюванте гидроксида алюминия, содержащего Al3+ в общей концентрации в диапазоне 0,4-1 мг/0,5 мл/доза и с процентом адсорбации в диапазоне 70-99 %;при этом она представляет собой двухвалентную вакцинную композицию.
- 2. Композиция по п.1, в которой комбинированная вакцина содержит по меньшей мере один антиген, выбранный из группы, включающей дифтерийный анатоксин (Д), столбнячный анатоксин (С), цельноклеточный коклюшный компонент (цК), поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg), конъюгат Н. influenzae типа b (Хиб) ПРФ-белок носитель.
- 3. Композиция по п.2, в которой антигены дифтерийный анатоксин (Д) и столбнячный анатоксин (С) адсорбированы на адъюванте - фосфате алюминия.
- 4. Композиция по п.2, в которой Д и С очищены с использованием гель-проникающей хроматографии со сволой, выбранной из группы, включающей Sephacryl S-300 HR, PLgel, Sephacryl S-200HR, Sephadex, Bio-Gel (агарозный гель на основе поперечно-сшитого полиакриламида) и Styragel.
- 5. Композиция по п.2, в которой коклюшный антиген представляет собой инактивированный цельноклеточный коклюшный компонент (цК), содержащий по меньшей мере один штамм Bordetella pertussis из следующего списка: 134, 509, 25525 и 6229, смешанных в соотношении 1:1:0,25:0,25.
- 6. Композиция по п.2, в которой антиген Хиб представляет собой полисахарид Хиб ПРФ, конъюгированный с белком-носителем с использованием конъюгации на основе цианилирования, в которой указанный цианилирующий реактив представляет собой 1-циано-4-диметиламинопиридиния тетрафторборат (ЦДАП); а белок-носитель представляет собой CRM197 и, фрагмент С столбнячного анатоксина.
- 7. Композиция по п.2, в которой антиген HBsAg представляет собой поверхностный антиген вируса гепатита В и индивидуально адсорбирован на фосфате алюминия.
- 8. Композиция по п.2, в которой комбинированная вакцина содержит 2-феноксиэтанол консервант.
- 9. Композиция по любому из пп.1-8, которая представляет собой шестивалентную вакцинную композицию, содержащую дифтерийный анатоксин (Д), столбнячный анатоксин (С), цельноклеточный коклюшный компонент (цК), конъюгат Хиб ПРФ-белок носитель (Хиб В), инактивированный полиовирус-- 26 043682 ный (ИПВ) антиген и инактивированный ротавирусный (ИРВ) антиген, в которой Д присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-50 Lf; С присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-30 Lf; цК присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 10-50 IOU; инактивированный полиовирус штамма Солка Типа 1 присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-20 единиц антигена D, Типа 2 в диапазоне 1-20 единиц антигена D, Типа 3 в диапазоне 1-20 единиц антигена D; ИРВ присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-30 мкг; конъюгат Н. influenzae типа b ПРФ-белок носитель присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 2-20 мкг содержания ПРФ; общий алюминий (Al3+) присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 0,4-1 мг/0,5 мг/доза; 2-феноксиэтанол присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 2-6 мг; L-гистидин присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 0,5-5 мг и ВДИ.
- 10. Композиция по п.9, в которой Д присутствует в количестве около 22,5 Lf; С присутствует в количестве около 7,5 Lf; цК присутствует в количестве около 15 IOU; инактивированный полиовирус штамма Солка Типа 1 присутствует в количестве около 10 единиц антигена D, Типа 2 присутствует в количестве около 2 единиц антигена D, Типа 3 присутствует в количестве около 10 или 16 единиц антигена D; ИРВ присутствует в количестве около 10 мкг; конъюгат H. influenzae типа b ПРФ-СА присутствует в количестве около 5 мкг содержания ПРФ; общий алюминий (Al3+) присутствует в количестве не более 0,9 мг; 2-феноксиэтанол присутствует в количестве около 3,25 мг; L-гистидин присутствует в количестве около 1,55 мг и ВДИ.
- 11. Композиция по п.9, в которой Д присутствует в количестве около 22,5 Lf; С присутствует в количестве около 7,5 Lf; цК присутствует в количестве около 15 IOU; инактивированный полиовирус штамма Солка Типа 1 присутствует в количестве около 10 единиц антигена D, Типа 2 присутствует в количестве около 2 единиц антигена D, Типа 3 присутствует в количестве около 10 или 16 единиц антигена D; ИРВ присутствует в количестве около 10 мкг; конъюгат H. influenzae типа b ПРФ-CRM197 присутствует в количестве около 10 мкг содержания ПРФ; общий алюминий (Al3+) присутствует в количестве не более 0,9 мг; 2-феноксиэтанол присутствует в количестве около 3,25 мг; L-гистидин присутствует в количестве около 1,55 мг и ВДИ.
- 12. Композиция по любому из пп.1-8, которая представляет собой шестивалентную вакцинную композицию, содержащую дифтерийный анатоксин (Д), столбнячный анатоксин (С), цельноклеточный коклюшный компонент (цК), конъюгат Хиб ПРФ-белок носитель (Хиб В), инактивированный полиовирусный (ИПВ) антиген и инактивированный ротавирусный (ИРВ) антиген, в которой Д присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-50 Lf; С присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 130 Lf; цК присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 10-50 IOU; инактивированный полиовирус штамма Сэбина Типа 1 присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-20 единиц антигена D, Типа 2 в диапазоне 1-20 единиц антигена D, Типа 3 в диапазоне 1-20 единиц антигена D; ИРВ присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-30 мкг; конъюгат Н. influenzae типа b ПРФ-белок присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 2-20 мкг содержания ПРФ; общий алюминий (Al3+) присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 0,4-1 мг/0,5 мл/доза; 2-феноксиэтанол присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 2-6 мг; L-гистидин присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 0,5-5 мг и ВДИ.
- 13. Композиция по п.12, в которой Д присутствует в количестве около 22,5 Lf; С присутствует в количестве около 7,5 Lf; цК присутствует в количестве около 15 IOU; инактивированный полиовирус штамма Сэбина Типа 1 присутствует в количестве около 5 единиц антигена D, Типа 2 присутствует в количестве около 16 единиц антигена D, Типа 3 присутствует в количестве около 10 единиц антигена D; ИРВ присутствует в количестве около 10 мкг; конъюгат H. influenzae типа b ПРФ-СА присутствует в количестве около 5 мкг содержания ПРФ; общий алюминий (Al3+) присутствует в количестве не более 0,9 мг; 2-феноксиэтанол присутствует в количестве около 3,25 мг; L-гистидин присутствует в количестве около 1,55 мг и ВДИ.
- 14. Композиция по п.12, в которой Д присутствует в количестве около 22,5 Lf; С присутствует в количестве около 7,5 Lf; цК присутствует в количестве около 15 IOU; инактивированный полиовирус штамма Сэбина Типа 1 присутствует в количестве около 5 единиц антигена D, Типа 2 присутствует в количестве около 16 единиц антигена D, Типа 3 присутствует в количестве около 10 единиц антигена D; ИРВ присутствует в количестве около 10 мкг; конъюгат H. influenzae типа b ПРФ-СКМ197 присутствует в количестве около 10 мкг содержания ПРФ; общий алюминий (Al3+) присутствует в количестве не более 0,9 мг; 2-феноксиэтанол присутствует в количестве около 3,25 мг; L-гистидин присутствует в количестве около 1,55 мг и ВДИ.
- 15. Композиция по любому из пп.1-8, которая представляет собой семивалентную вакцинную композицию, содержащую дифтерийный анатоксин (Д), столбнячный анатоксин (С), цельноклеточный коклюшный компонент (цК), конъюгат Хиб ПРФ-белок носитель (Хиб В), поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg), инактивированный полиовирусный (ИПВ) антиген и инактивированный ротавирусный (ИРВ) антиген, в которой Д присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-50 Lf; С присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-30 Lf; цК присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 10-50 IOU; инактивированный полиовирус штамма Солка Типа 1 присутствует в количестве,- 27 043682 находящемся в диапазоне 1-20 единиц антигена D, Типа 2 в диапазоне 1-20 единиц антигена D, Типа 3 в диапазоне 1-20 единиц антигена D; ИРВ присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-30 мкг; конъюгат Н. influenzae типа b ПРФ-белок присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 2-20 мкг содержания ПРФ; поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg) присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 5-30 мкг; общий алюминий (Al3+) присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 0,4-1 мг/0,5 мл/доза; 2-феноксиэтанол присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 2-6 мг; L-гистидин присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 0,5-5 мг и ВДИ.
- 16. Композиция по п.15, в которой Д присутствует в количестве около 22,5 Lf; С присутствует в количестве около 7,5 Lf; цК присутствует в количестве около 15 IOU; инактивированный полиовирус штамма Солка Типа 1 присутствует в количестве около 10 единиц антигена D, Типа 2 присутствует в количестве около 2 единиц антигена D, Типа 3 присутствует в количестве около 10 или 16 единиц антигена D; ИРВ присутствует в количестве около 10 мкг; конъюгат H. influenzae типа b ПРФ-СА присутствует в количестве около 5 мкг содержания ПРФ; поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg) присутствует в количестве около 12,5 мкг; общий алюминий (Al3+) присутствует в количестве не более 0,9 мг; 2-феноксиэтанол присутствует в количестве около 3,25 мг; L-гистидин присутствует в количестве около 1,55 мг и ВДИ.
- 17. Композиция по п.15, в которой Д присутствует в количестве около 22,5 Lf; С присутствует в количестве около 7,5 Lf; цК присутствует в количестве около 15 IOU; инактивированный полиовирус штамма Солка Типа 1 присутствует в количестве около 10 единиц антигена D, Типа 2 присутствует в количестве около 2 единиц антигена D, Типа 3 присутствует в количестве около 10 или 16 единиц антигена D; ИРВ присутствует в количестве около 10 мкг; конъюгат H. influenzae типа b ПРФ-CRM197 присутствует в количестве около 10 мкг содержания ПРФ; поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg) присутствует в количестве около 12,5 мкг; общий алюминий (Al3+) присутствует в количестве не более 0,9 мг; 2-феноксиэтанол присутствует в количестве около 3,25 мг; L-гистидин присутствует в количестве около 1,55 мг и ВДИ.
- 18. Композиция по любому из пп.1-8, которая представляет собой семивалентную вакцинную композицию, содержащую дифтерийный анатоксин (Д), столбнячный анатоксин (С), цельноклеточный коклюшный компонент (цК), конъюгат Хиб ПРФ-белок носитель (Хиб В), поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg), инактивированный полиовирусный (ИПВ) антиген и инактивированный ротавирусный (ИРВ) антиген, в которой Д присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-50 Lf; С присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-30 Lf; цК присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 10-50 IOU; инактивированный полиовирус штамма Сэбина Типа 1 присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-20 единиц антигена D, Типа 2 в диапазоне 1-20 единиц антигена D, Типа 3 в диапазоне 1-20 единиц антигена D; ИРВ присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 1-30 мкг; конъюгат Н. influenzae типа b ПРФ-белок присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 2-20 мкг содержания ПРФ; поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg) присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 5-30 мкг; общий алюминий (Al3+) присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 0,4-1 мг/0,5 мл/доза; 2-феноксиэтанол присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 2-6 мг; L-гистидин присутствует в количестве, находящемся в диапазоне 0,5 - 5 мг и ВДИ.
- 19. Композиция по п.18, в которой Д присутствует в количестве около 22,5 Lf; С присутствует в количестве около 7,5 Lf; цК присутствует в количестве около 15 IOU; инактивированный полиовирус штамма Сэбина Типа 1 присутствует в количестве около 5 единиц антигена D, Типа 2 присутствует в количестве около 16 единиц антигена D, Типа 3 присутствует в количестве около 10 единиц антигена D; ИРВ присутствует в количестве около 10 мкг; конъюгат H. influenzae типа b ПРФ-СА присутствует в количестве около 5 мкг содержания ПРФ; поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg) присутствует в количестве около 12,5 мкг; общий алюминий (Al3+) присутствует в количестве не более 0,9 мг; 2феноксиэтанол присутствует в количестве около 3,25 мг; L-гистидин присутствует в количестве около 1,55 мг и ВДИ.
- 20. Композиция по п.18, в которой Д присутствует в количестве около 22,5 Lf; С присутствует в количестве около 7,5 Lf; цК присутствует в количестве около 15 IOU; инактивированный полиовирус штамма Сэбина Типа 1 присутствует в количестве около 5 единиц антигена D, Типа 2 присутствует в количестве около 16 единиц антигена D, Типа 3 присутствует в количестве около 10 единиц антигена D; ИРВ присутствует в количестве около 10 мкг; конъюгат H. Influenzae типа b ПРФ-CRM197 присутствует в количестве около 10 мкг содержания ПРФ; поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg) присутствует в количестве около 12,5 мкг; общий алюминий (Al3+) присутствует в количестве не более 0,9 мг; 2-феноксиэтанол присутствует в количестве около 3,25 мг; L-гистидин присутствует в количестве около 1,55 мг и ВДИ.
- 21. Композиция по любому из пп.1-8 и 9-20, в которой инактивированный полиовирусный (ИПВ) и инактивированный ротавирусный (ИРВ) антигены индивидуально адсорбированы на гидроксиде алюминия; а другие антиген(ы), выбранные из группы, включающей столбнячный анатоксин, дифтерийный анатоксин, цельноклеточный коклюшный компонент, поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg), ПРФ конъюгат Н. influenzae типа b (Хиб В), находятся либо в неадсорбированном состоянии,-
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IN201621029037 | 2016-08-26 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA043682B1 true EA043682B1 (ru) | 2023-06-13 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| TWI786153B (zh) | 具有改善之安定性、增強之免疫原性及降低之反應原性的免疫原性組成物和其製備方法 | |
| US8551451B2 (en) | Combination vaccine with acellular pertussis | |
| JP2024009899A (ja) | 多価ワクチン組成物 | |
| CA2685506A1 (en) | Vaccine | |
| EP2661277A2 (en) | A combination heptavalent vaccine | |
| US20110195087A1 (en) | Combination vaccine with whole cell pertussis | |
| EA043682B1 (ru) | Комбинированная вакцина и способ её производства (варианты) | |
| US11793869B2 (en) | Methods for enterovirus inactivation, adjuvant adsorption and dose reduced vaccine compositions obtained thereof | |
| TW202038995A (zh) | 多價疫苗組合物 | |
| OA20569A (en) | Improved methods for enterovirus inactivation, adjuvant adsorption and dose reduced vaccine compositions obtained thereof. |