CN110687217B - 液相色谱测定利福霉素s的方法 - Google Patents
液相色谱测定利福霉素s的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110687217B CN110687217B CN201810891720.XA CN201810891720A CN110687217B CN 110687217 B CN110687217 B CN 110687217B CN 201810891720 A CN201810891720 A CN 201810891720A CN 110687217 B CN110687217 B CN 110687217B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- rifamycin
- solution
- standard
- liquid chromatography
- rifampicin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
Abstract
本发明涉及一种利用液相色谱对利福平的合成原料利福霉素S定量分析的方法，属于化学分析领域。所述方法包括：一、用缓冲液配制利福霉素S标准物质的标准溶液；二、对环合反应液进行处理：将粗产物加入到醋酸溶液中，抽滤，获得含利福霉素S的固体产物，再加入乙腈溶解，用缓冲液定容，然后用微孔滤膜过滤除杂，得到液相色谱检测样品；三、对标准溶液进行液相色谱分析，绘制标准曲线；四、将样品用液相色谱分析，对比标准曲线测定环合反应后利福平合成原料利福霉素S的含量。所述方法可准确测定利福平合成原料利福霉素S的含量及反应转化率，填补了现有技术的缺陷。
Description
技术领域
本发明涉及一种利用液相色谱对利福平的合成原料定量分析的方法，具体涉及一种采用液相色谱测定利福平合成过程中环合反应后的原料利福霉素S的方法，属于化学分析领域。
背景技术
利福平(Rifampin)是一种所属于利福霉素类的半合成广谱抗生素，对结核菌有强大抑制和杀灭作用，对革兰氏阴性细菌、麻风杆菌、沙眼衣原体及某些革兰氏阳性细菌亦有效。
在公开的专利中利福平的合成通常包括两步反应，即环合和缩合反应。中国发明专利申请公开说明书101486716A中公开优质利福平的制备方法，利用利福霉素S钠盐经醋酸酸化得到游离的利福霉素S，随后同二羟甲基叔丁胺反应生成苯并噁嗪利福霉素，然后再更换溶剂，同1-甲基-4-氨基哌嗪反应，生成利福平。以利福霉素S为原料，与二羟甲基叔丁胺反应生成苯并噁嗪利福霉素的反应方程式如下：
目前，第一步反应主要由薄层色谱进行监控，虽然可以快速检测反应物是否反应完全，但其在定量方面的精密度偏差，不能得到确切的反应数据，因此不能很好地服务于生产工艺的改进。针对利福平合成原料利福霉素S建立一种切实可行的分析方案，分析原料含量和转化率变化，可为更好地优化利福平合成工艺提供指导。
发明内容
针对现有技术存在的缺陷，本发明的目的在于提供一种液相色谱测定利福平合成原料的方法，所述利福平是以利福霉素S为原料，经环合和缩合反应生成的。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
提供一种利用液相色谱对利福平的合成原料利福霉素S定量分析的方法，其中，所述利福平是以利福霉素S为原料，经环合和缩合反应生成的，所述方法包括如下步骤：
步骤一、配制标准溶液
称取利福霉素S标准物质，用乙腈溶解，然后用体积比为1:1的乙腈和0.075mol/L磷酸二氢钾溶液混合溶液定容，用孔径为0.45μm的微孔滤膜进行过滤，收集滤液得到标准溶液；
步骤二、处理环合反应液，所述的环合反应液为环合反应后反应器出口的溶液；
将环合反应后含利福霉素S的反应器出口物料滴加到质量分数为0.045％～0.9％的醋酸溶液中，同时不断搅拌以分散固体粗产品，然后在-0.04MPa～-0.1MPa下减压抽滤，得到含利福霉素S的固体产物，经烘干后，取适量固体，用乙腈溶解，再用体积比为1:1的乙腈和0.075mol/L磷酸二氢钾溶液的混合溶液定容，用孔径为0.45μm的滤膜进行微孔滤膜过滤，收集滤液用作液相色谱检测样品；
步骤三、绘制标准曲线
采用外标法对步骤一制得的标准溶液进行液相色谱分析，色谱分析条件如下所示：
色谱柱：Kromasil 100C8,5μm,150mm×4.6mm
柱温：25℃
柱压：97.60bar
泵模式：等度
流动相：甲醇:乙腈:磷酸二氢钾溶液或醋酸钠溶液:柠檬酸溶液按体积比为30:30:6:4配制的混合溶液
流速：1.0mL/min
进样量：20μL
检测器：UV紫外检测器
检测波长：275nm
运行时间：35min
测得标准物质的物质峰的峰面积，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，得到标准曲线的线性方程和线性相关系数；
步骤四、测定出口物料中利福霉素S含量
按照步骤三中的液相色谱分析条件，将步骤二处理得到的样品用液相色谱进行测定，测得利福霉素S的峰面积，根据峰面积可直接从步骤三绘制得到的标准曲线上算得其浓度，计算出其含量。
本发明所述标准物质(reference material,RM)是一种已经确定了具有一个或多个足够均匀的特性值的物质或材料，作为分析测量行业的“量具”，在校准测量仪器和装置、评价测量分析方法、测量物质或材料特性值和考核分析人员的操作技术水平，以及在生产过程中产品的质量控制等领域起着不可或缺的作用。
本发明所述外标法是仪器分析常用的方法之一，是比较法的一种。与内标法相比，外标法不是把标准物质加入到被测样品中，而是在与被测样品相同的色谱条件下单独测定，把得到的色谱峰面积与被测组分的色谱峰面积进行比较求得被测组分的含量。
有益效果：本发明提供了一种液相色谱测定利福平合成原料的方法，可准确对利福平合成原料利福霉素S定量分析，填补了现有技术的缺陷。
附图说明
图1为利福霉素S的标准曲线图。
图2为利福霉素S标准物质的液相色谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明。
实施例1
以利福霉素S为原料，经环合反应得到苯并噁嗪利福霉素的反应方程式及相关物质结构式如下：
以DMF为溶剂制备0.40M利福霉素S溶液和1.36M二羟甲基叔丁胺溶液，两股流量均以0.3mL/min泵入反应器中进行环合反应，得到含利福霉素S的环合反应后的产物。
步骤一、配制标准溶液
准确称取利福霉素S标准物质125mg，精确至±0.0001g，先用乙腈溶解并用缓冲液定容至10mL，再从中分别取0.4mL、0.8mL、1.2mL、1.6mL和2mL溶液，置于25mL容量瓶中，再分别加入1.6mL、1.2mL、0.8mL、0.4mL和0mL乙腈，再用体积比为1:1的乙腈和0.075mol/L磷酸二氢钾溶液的混合溶液定容至25mL，得到不同浓度梯度的标准溶液，浓度分别为0.27mmol/L、0.55mmol/L、0.82mmol/L、1.10mmol/L和1.37mmol/L，用孔径为0.45μm的滤膜进行微孔滤膜过滤，收集滤液用作液相色谱检测样品；
步骤二、处理环合反应液
将含利福霉素S的环合反应的反应器出口物料滴加到质量分数为0.9％的醋酸溶液中，同时不断搅拌以分散固体粗产品，然后在-0.1MPa下减压抽滤，得到含利福霉素S的固体产品，经烘干后，取25mg样品，用2mL乙腈溶解，再用体积比为1:1的乙腈和0.075mol/L磷酸二氢钾溶液的混合溶液定容至25mL，用孔径为0.45μm的滤膜进行微孔滤膜过滤，收集滤液用作液相色谱检测样品；
步骤三、绘制标准曲线
采用外标法对步骤一得到的标准溶液进行液相色谱分析，分析条件如发明内容所述，测得标准物质峰的峰面积，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，得到标准曲线的线性方程和线性相关系数，测定结果见图1，图2的最大峰为标准物质的峰，标准曲线及相关系数如下所示：
y＝33207.37x R2＝1.00
步骤四、测定出口物料中利福霉素S含量
按照步骤三中的液相色谱分析条件，将步骤二处理得到的样品用液相色谱进行测定，测得利福霉素S的峰面积，测量两次，取平均值，根据峰面积可直接从步骤三绘制得到的标准曲线上算得其含量，进一步的算得利福霉素S反应转化率为96.9％。
Claims (2)
1.一种利用液相色谱对利福平的合成原料利福霉素S定量分析的方法，所述合成为以利福霉素S为原料通过环合和缩合反应合成利福平，其特征在于：所述方法包括以下步骤：
步骤一、标准溶液配制
将利福霉素S标准物质用乙腈溶解，用缓冲液定容，然后用微孔滤膜过滤除杂，收集滤液，得到利福霉素S的标准溶液；
步骤二、对环合反应液进行处理
将含利福霉素S的环合反应后的产物加入到醋酸溶液中搅拌分散，抽滤，获得含原料利福霉素S的固体产物，烘干后用乙腈溶解，用缓冲液定容，然后用微孔滤膜过滤除杂，收集滤液，得到液相色谱检测样品；
步骤三、标准曲线绘制
对步骤一所得标准溶液进行液相色谱分析，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线；
步骤四、利福霉素S含量测定
将步骤二所得的液相色谱检测样品用液相色谱分析，测得所述样品中利福霉素S的峰面积，对比标准曲线，计算出环合反应后利福霉素S的含量；
所述步骤中的缓冲液为乙腈和磷酸二氢钾混合溶液、甲醇和磷酸二氢钾混合溶液或乙腈和醋酸钠混合溶液；
所述步骤中色谱条件为：
色谱柱：Kromasil 100 C8,5μm,150mm×4.6mm
柱温：25℃
柱压：97.60bar
泵模式：等度
流动相：甲醇:乙腈:磷酸二氢钾溶液或醋酸钠溶液:柠檬酸溶液按体积比为30:30:6:4配制的混合溶液
流速：1.0mL/min
进样量：20μL
检测器：UV紫外检测器
检测波长：275nm
运行时间：35min。
2.根据权利要求1所述的一种利用液相色谱对利福平的合成原料利福霉素S定量分析的方法，其特征在于所述步骤二中醋酸的质量分数为0.045％～0.9％，微孔滤膜的孔径为0.45μm。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810891720.XA CN110687217B (zh) | 2018-08-07 | 2018-08-07 | 液相色谱测定利福霉素s的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810891720.XA CN110687217B (zh) | 2018-08-07 | 2018-08-07 | 液相色谱测定利福霉素s的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110687217A CN110687217A (zh) | 2020-01-14 |
| CN110687217B true CN110687217B (zh) | 2021-04-23 |
Family
ID=69107087
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810891720.XA Active CN110687217B (zh) | 2018-08-07 | 2018-08-07 | 液相色谱测定利福霉素s的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110687217B (zh) |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA3012046C (en) * | 2016-03-04 | 2020-11-10 | Genentech, Inc. | Process for the preparation of an antibody-rifamycin conjugate |
| CN106749327B (zh) * | 2017-01-24 | 2019-06-07 | 四川樵枫科技发展有限公司 | 利福霉素s晶体及其制备方法 |
-
2018
- 2018-08-07 CN CN201810891720.XA patent/CN110687217B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN110687217A (zh) | 2020-01-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110687217B (zh) | 液相色谱测定利福霉素s的方法 | |
| CN101122589B (zh) | 一种尿素及其缩二脲、亚甲基二脲杂质的高效液相色谱分析方法 | |
| CN110687218B (zh) | 液相色谱测定苯并噁嗪利福霉素的方法 | |
| CN111122740B (zh) | 一种基于c18键合相色谱柱分离测定奥沙利铂有关物质的方法 | |
| CN114778743B (zh) | L-脯氨酸中痕量手性异构体d-脯氨酸的检测方法 | |
| CN114216988B (zh) | 一种4-（甲基氨基）-1-（3-吡啶基）-1-丁酮盐酸有关物质的检验方法 | |
| CN106290683B (zh) | 一种检测金霉素发酵液中单质糖浓度的方法 | |
| CN110836930A (zh) | 气质联用法测定左乙拉西坦中二氯丁烷含量 | |
| CN101025407A (zh) | 气相色谱测定环丙胺中的微量水分的分析方法 | |
| CN111426760B (zh) | 一种多索茶碱原料药中基因毒性杂质的测定方法 | |
| CN114137120A (zh) | 一种雷帕霉素药物支架中有关物质的检测方法 | |
| CN110873767B (zh) | 一种右兰索拉唑合成中间体及其有关物质的快速检测方法 | |
| CN107422056B (zh) | 一种特戊酸碘甲酯的气相色谱检测方法及其制备方法 | |
| CN111505163A (zh) | 一种检测苯乙基甲磺酸酯类物质的方法 | |
| CN105467027B (zh) | 一种用气相色谱法分离测定米诺膦酸中间体有关物质的方法 | |
| CN114646711B (zh) | 一种羟甲基苯妥英相关杂质的检测方法 | |
| CN116879428B (zh) | 一种L-α-甘磷酸胆碱中磷酸胆碱残留含量的高效液相分析方法 | |
| CN116106455B (zh) | 取代的烟酰胺类药物中有关物质的检测方法 | |
| CN112730642B (zh) | 一种同时检测微管蛋白抑制剂原料药中三氟甲磺酸甲酯、三氟甲磺酸乙酯的方法 | |
| CN112834643B (zh) | 测定2,6-二羟基-4-甲基吡啶及2,6-二羟基-3-氰基-4-甲基吡啶的方法 | |
| CN113433249B (zh) | 一种高效液相色谱法检测米诺环素中间体有关物质的方法 | |
| CN116008443B (zh) | α5-GABAA受体调节剂类药物中有关物质的检测方法 | |
| CN112433016A (zh) | 检测重排酯含量的液相色谱分析方法 | |
| CN109521120B (zh) | Gc-aed的无关校正曲线法（cic法）定量测定dntf含量 | |
| CN114594174A (zh) | 吲达帕胺制剂中杂质a的检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |