CN110672754A - 一种测定饲料中尼卡巴嗪含量的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种测定饲料中尼卡巴嗪含量的方法，包括：(1)称取待测饲料样品，加二甲基甲酰胺振摇提取，过滤得供试样品溶液；(2)将所述供试样品溶液上液相色谱仪进行分析，测定尼卡巴嗪的峰面积；(3)利用多组已知质量浓度的尼卡巴嗪溶液测定尼卡巴嗪峰面积，以尼卡巴嗪质量浓度为横坐标，相应峰面积为纵坐标进行线性回归，建立尼卡巴嗪线性回归方程；根据前述待测饲料样品的尼卡巴嗪峰面积，利用尼卡巴嗪线性回归方程计算待测饲料中尼卡巴嗪的质量浓度，再计算待测饲料中尼卡巴嗪的含量。本发明参照原检测标准，优化了检验步骤，提高了检验效率，回收率与重复性均能达到要求。

Description

一种测定饲料中尼卡巴嗪含量的方法
技术领域
一种测定饲料中尼卡巴嗪含量的方法，属于尼卡巴嗪检测技术领域。
背景技术
尼卡巴嗪为二硝基均二苯脲和羟基二甲基嘧啶复合物。为黄色或黄绿色粉末；无臭，稍具异味。微溶于二甲基甲酰胺中，在水、乙醇、乙酸乙酯、氯仿、乙醚中不溶。尼卡巴嗪的两种成分能分别由家禽消化道吸收，并广泛分布于组织及体液中，用于预防鸡球虫病。《饲料药物添加剂使用规范》对不同种类尼卡巴嗪预混剂的使用有不同的规定，其中规定每1kg饲料中，尼卡巴嗪含量范围为20-125mg。由于尼卡巴嗪能使产蛋率、受精率以及蛋品质量下降和棕色蛋壳色泽变浅，故产蛋鸡禁用。此外高温季节禁用。
目前我国对饲料中尼卡巴嗪含量的检测有国家标准：《GB/T 19423-2003饲料中尼卡巴嗪的测定-高效液相色谱法》，但该标准中：过柱步骤繁琐，操作复杂，回收率、重复性低。
发明内容
本发明要解决的技术问题是：提供一种灵敏度高、准确性好、分析速度快的测定饲料中尼卡巴嗪含量的方法，通过合理的优化条件，以解决现有技术存在的过柱步骤繁琐，操作复杂，回收率、重复性低等问题。
本发明的技术方案是：一种测定饲料中尼卡巴嗪含量的方法，包括：
(1)预处理
称取待测饲料样品，加二甲基甲酰胺振摇提取；
过滤得供试样品溶液；
(2)液相色谱仪分析
将所述供试样品溶液上液相色谱仪进行分析，测定尼卡巴嗪的峰面积；
(3)计算饲料中尼卡巴嗪的含量
利用多组已知质量浓度的尼卡巴嗪溶液测定尼卡巴嗪峰面积，以尼卡巴嗪质量浓度为横坐标，相应峰面积为纵坐标进行线性回归，建立尼卡巴嗪线性回归方程；
根据前述待测样品上机液的尼卡巴嗪峰面积，利用尼卡巴嗪线性回归方程计算待测样品上机液中尼卡巴嗪的质量浓度，再计算待测饲料中尼卡巴嗪的含量。
优选的，所述尼卡巴嗪线性回归方程为：
y＝0.5783x-0.0432
式中：y为尼卡巴嗪峰面积，x为待测样品上机液中尼卡巴嗪的质量浓度。
优选的，饲料中尼卡巴嗪含量的计算公式为：
Figure BDA0002271072260000021
式中：C为试样中尼卡巴嗪含量，单位为mg/kg；
x为待测样品上机液中尼卡巴嗪的质量浓度，单位为μg/mL；
m为饲料样品称样质量，单位为g；
f为饲料样品稀释倍数。
优选的，饲料中尼卡巴嗪含量的检测范围为≥3mg/kg，定量范围为≥10mg/kg。
本发明的有益效果是：本发明方法以《饲料药物添加剂安全使用规范》中尼卡巴嗪为研究对象，待测饲料样品中的尼卡巴嗪经过二甲基甲酰胺(DMF)提取液振摇提取，上清液过滤，高效液相色谱法测定，结果表明方法具有简单、快速、准确、灵敏的特点，适用于饲料中尼卡巴嗪含量的检测分析。
本发明参照原标准，优化检验步骤，提高检验效率，回收率与重复性均能达到要求。本发明有利于优化饲料中尼卡巴嗪含量的检测标准，逐步完善对饲料质量风险监测依据。评估我省饲料药物添加剂使用情况，规范尼卡巴嗪在饲料生产中的应用，指导养殖场科学合理安全生产，确保不发生重大家禽养殖安全事件。
附图说明
图1为尼卡巴嗪标准样品液相色谱图。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。
实施例1：饲料中尼卡巴嗪含量的测定方法，
测定饲料中尼卡巴嗪含量的方法包括以下内容：
1、预处理
准确称取试样10g(精确至0.01g)于具塞三角烧瓶中，加二甲基甲酰胺(DMF)50mL，用电动振荡器振摇30min,用滤纸干过滤，弃取初滤液，收集滤液过0.45μm滤膜，备用。
2、液相色谱仪分析
将供试样品溶液上液相色谱仪进行分析，测定得到尼卡巴嗪峰面积。
3、计算饲料中尼卡巴嗪的含量
利用多组已知质量浓度的尼卡巴嗪溶液测定尼卡巴嗪峰面积，以尼卡巴嗪质量浓度为横坐标，相应峰面积为纵坐标进行线性回归，建立尼卡巴嗪线性回归方程。
尼卡巴嗪线性回归方程的具体建立方法为：
(1)制备标准溶液
准确称取尼卡巴嗪标准品置于棕色容量瓶中，用二甲基甲酰胺(DMF)超声溶解，定容，摇匀，配制成浓度为1mg/mL的储备液，置于4℃冰箱中保存，有效期3个月。
(2)制备各种质量浓度的测试溶液
取适量尼卡巴嗪储备液，用二甲基甲酰胺(DMF)稀释成浓度1.25ug/mL、2.5ug/mL、5ug/mL、10ug/mL、20ug/mL的尼卡巴嗪测试溶液。
(3)进样分析
用超高效液相色谱仪对前述已知质量浓度的尼卡巴嗪测试溶液进行测试，检测结果如图1所示，计算相应的尼卡巴嗪峰面积(见表1)。
表1不同质量浓度的尼卡巴嗪对应的峰面积
Figure BDA0002271072260000031
Figure BDA0002271072260000041
线性考察以组分质量浓度(C)为横坐标,相应峰面积(A)为纵坐标，进行线性回归。尼卡巴嗪回归方程y＝0.5783x-0.0432，R2＝0.999，可知尼卡巴嗪质量浓度在1.25～20.0μg/mL范围内线性关系良好。
根据前述待测饲料样品的上机液尼卡巴嗪峰面积以及尼卡巴嗪线性回归方程，计算待测饲料样品上机液中尼卡巴嗪的质量浓度，再计算待测饲料中尼卡巴嗪的含量(结果见表2)。
饲料中尼卡巴嗪含量的计算公式为：
Figure BDA0002271072260000042
式中：C为试样中尼卡巴嗪含量，单位为mg/kg；
x为待测样品上机液中尼卡巴嗪的质量浓度，单位为μg/mL；
m为饲料样品称样质量，单位为g；
f为饲料样品稀释倍数。
表2样品测定结果
Figure BDA0002271072260000043
注：“/”表示低于检出限，未检出。
实施例2：重复性、准确度、灵敏度验证
(1)重复性验证
取一供试样品溶液，重复进样6次，测定尼卡巴嗪峰面积，计算得出尼卡巴嗪峰面积的RSD(相对标准偏差)为0.12％。可知采用本发明方法的重复性较好。
(2)准确度验证
在饲料空白样品中添加尼卡巴嗪变准溶液，制成添加量为12.5mg/kg、25.0mg/kg、50.0mg/kg的测试溶液，每个添加量平行制备3份，按实施例1中预处理方法制备供试品溶液，上机测定，每个样品测定1次。测定结果见表3。
表3尼卡巴嗪回收率测定结果
由表3可知，各浓度尼卡巴嗪添加样品平均回收率为99.1％。相对标准偏差为0.12％。根据前述数据，可以得出采用本发明方法的回收率(准确度)较好，方法达到了严格的定量准确性和重复性。
(3)灵敏度验证
基于尼卡巴嗪标准曲线的截距标准偏差和标准曲线斜率法确定标准的检测限、定量限，依据按照LOD＝3.3δ/S(δ为标准曲线的截距的标准偏差，S为标准曲线的斜率)计算出该方法的检测限为3mg/kg；按照LOD＝10δ/S(δ为标准曲线的截距的标准偏差，S为标准曲线的斜率)计算出该方法的定量限为10mg/kg。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (4)

1.一种测定饲料中尼卡巴嗪含量的方法，其特征在于，包括：
(1)预处理
称取待测饲料样品，加二甲基甲酰胺振摇提取；
过滤得供试样品溶液；
(2)液相色谱仪分析
将所述供试样品溶液上液相色谱仪进行分析，测定尼卡巴嗪的峰面积；
(3)计算饲料中尼卡巴嗪的含量
利用多组已知质量浓度的尼卡巴嗪溶液测定尼卡巴嗪峰面积，以尼卡巴嗪质量浓度为横坐标，相应峰面积为纵坐标进行线性回归，建立尼卡巴嗪线性回归方程；
根据前述待测饲料样品上机液的尼卡巴嗪峰面积，利用尼卡巴嗪线性回归方程计算待测样品上机液中尼卡巴嗪的质量浓度，再计算待测饲料中尼卡巴嗪的含量。
2.根据权利要求1所述的测定饲料中尼卡巴嗪含量的方法，其特征在于，所述尼卡巴嗪线性回归方程为：
y＝0.5783x-0.0432
式中：y为尼卡巴嗪峰面积，x为待测样品上机液中尼卡巴嗪的质量浓度。
3.根据权利要求1所述的测定饲料中尼卡巴嗪含量的方法，其特征在于，饲料中尼卡巴嗪含量的计算公式为：
Figure FDA0002271072250000011
式中：C为试样中尼卡巴嗪含量，单位为mg/kg；
x为待测样品上机液中尼卡巴嗪的质量浓度，单位为μg/mL；
m为饲料样品称样质量，单位为g；
f为饲料样品稀释倍数。
4.根据权利要求1所述的测定饲料中尼卡巴嗪含量的方法，其特征在于，饲料中尼卡巴嗪含量的检测范围为≥3mg/kg，定量范围为≥10mg/kg。
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