CN102565425B - 一种烟草中蛋白质氮含量的测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种烟草中蛋白质氮含量的测定方法，包括以下步骤：分离烟草中的蛋白质氮，得到含有非蛋白质氮的待测试样；在加热条件下，向所述待测试样中加入过硫酸钾，得到混合溶液；将所述混合溶液依次经过紫外催化和高温加热，得到消解产物；检测所述消解产物，得到烟草中非蛋白质氮含量；根据预定的烟草中总氮含量和所述烟草中非蛋白质氮含量，得到烟草中蛋白质氮含量；本发明提供的方法能够更加完全和彻底地消解烟草中的含氮物质，具有良好的消解效果，在消解烟草中含氮组分的同时也消解了其中的还原性组分，使其失去还原作用，减少对含氮组分消解的干扰，提高了消解结果的均一性，提高了对烟草中蛋白质含量测定的准确性。

Description

一种烟草中蛋白质氮含量的测定方法

技术领域

本发明涉及一种烟草成分的分析测定技术领域，尤其涉及一种烟草中蛋白质氮含量的测定方法。

背景技术

烟草中的蛋白质对烟草的质量具有较大的影响，一般来讲，蛋白质含量的多少与烟草品质的优劣成反比，优质烟的蛋白质含量在10％以下。蛋白质是烟气中众多含氮化合物的前体之一，烟草中蛋白质含量的减少有助于减少霍夫曼烟气分析物中的N杂环化合物(喹啉，N杂环胺)、芳香胺和HCN，因此较低含量的蛋白质对烟草的品质有着积极的影响；但是蛋白质含量过低，产生的烟气就会显得平淡，吃味和香味也会变差，蛋白质的含量直接影响烟草的质量。而且在烟草的处理过程中，蛋白质水平的变化极大：如烟草调制可明显改变其蛋白质的含量和特性，大约有50％的蛋白质在收获期及调制期被水解或降解，而且在烟草调制过程中蛋白质水解为氨基酸，氨基酸含量与烟气的香味和丰满度有明显的正相关关系；在烟草醇化过程中，烟草中的其他成分会随着醇化过程而变化，从而也引起烟草中蛋白质含量的变化。因此烟草中蛋白质氮的含量对于其质量有着很大的影响，蛋白质氮含量的测定对于烟草品质的了解，各阶段烟草中蛋白质含量的掌握，烟草工业的研究开发以及生产都十分重要。

对于氮含量的测定，通常是将含氮化合物消解为硝酸盐，然后将得到的硝酸盐定量还原为亚硝酸盐，利用亚硝酸盐与磺胺和N-萘基乙二胺盐酸盐显色的性质，采用分光光度法对其进行测定。如邹琳等利用流动注射分析仪测定了水中的总氮和总磷的含量(邹琳，周圣东，陈卫.高压消解\流动注射光度法同时测定水中总氮与总磷.中国给水排水，2009，25(22)：93～97.)，其过程为：在110℃下，将水样通过碱性过硫酸钾和硫酸两次消解，得到的消解产物分别进入流动注射分析仪中的总氮、总磷分析系统，得到水样中总氮、总磷的含量。在总氮分析系统中，消解产物通过一个镀铜的镉圈后，硝酸根被定量还原为亚硝酸根，在酸性条件下，亚硝酸根与磺胺和N-萘基乙二胺盐酸盐在45℃恒温条件下反应生成紫红色物质，其最佳吸收波长为550nm，采用分光光度法对得到的紫红色物质进行测定，得到水中的总氮含量。

上述高压消解对无机氮具有较好的消解效果，然而烟草中的含氮成分复杂，这种高压消解的方法对烟草中的某些含氮化合物如植物碱、氨基酸、水溶性蛋白质等消解不够完全和彻底，得到的消解效果不均一，带来较大的误差；而且烟草中含有还原性成分，如糖类，这些还原性成分会与氧化剂反应，从而影响对含氮组分的消解，严重影响其消解效果，使得对烟草中蛋白质氮含量测定的结果不准确。

发明内容

本发明的目的在于提供一种烟草中蛋白质氮含量的测定方法，本发明提供的方法对烟草中蛋白质氮含量的测定具有较高的准确性。

本发明提供一种烟草中蛋白质氮含量的测定方法，包括以下步骤：

a)分离烟草中的蛋白质氮，得到含有非蛋白质氮的待测试样；

b)在加热条件下，向所述待测试样中加入过硫酸钾，得到混合溶液；

c)将所述混合溶液依次经过紫外催化和高温加热，得到消解产物；

d)检测所述消解产物，得到烟草中非蛋白质氮含量；

e)根据预定的烟草中总氮含量和所述烟草中非蛋白质氮含量，得到烟草中蛋白质氮含量。

优选的，所述紫外催化为在非硫酸酸性环境中进行紫外催化。

优选的，所述紫外催化的温度为90℃～110℃。

优选的，所述高温加热的温度为95℃～150℃。

优选的，所述高温加热为加压高温加热。

优选的，所述加压高温加热的压力为5Psi～8Psi。

优选的，所述步骤b)中的加热温度为90℃～110℃。

优选的，所述步骤a)具体为：

向烟草中加入蛋白质变性试剂，加热得到的混合物，分离后得到含有非蛋白质氮的待测试样。

优选的，所述蛋白质变性试剂为有机酸。

优选的，所述步骤b)前还包括：

向所述待测试样中加入过氧化氢，氧化所述待测试样中的还原性组分；

和/或向所述待测试样中加入活性炭，除去所述待测试样中的无机色素；

和/或向所述待测试样中加入乙二胺四乙酸二钠，除去所述待测试样中的金属离子。

本发明提供一种烟草氮中蛋白质的测定方法，包括以下步骤：分离烟草中的蛋白质氮，得到含有非蛋白质氮的待测试样；在加热条件下，向所述待测试样中加入过硫酸钾，得到混合溶液；将所述混合溶液依次经过紫外催化和高温加热，得到消解产物；检测所述消解产物，得到烟草中非蛋白质氮含量；根据预定的烟草样品中总氮含量和所述烟草中非蛋白质氮含量，得到烟草中蛋白质氮含量。在本发明中，过硫酸钾在加热条件下释放出活性氧原子[O]，得到的活性氧原子[O]首先对烟草样品进行消解，然后在紫外催化条件下，部分出活性氧原子[O]在紫外催化的条件下与水反应生成自由基，该自由基使烟草中的含氮化合物得到消解；接着，在高温条件，活性氧原子[O]对烟草中的含氮化合物进行进一步消解，最终使各类含氮组分被充分消解。本发明提供的方法在对烟草中的含氮化合物消解的同时也消解了其中的还原性成分，使其失去了还原作用，消除了对含氮组分消解的干扰，提高了消解结果的均一性，提高了对烟草中蛋白质氮含量检测的准确度。另外，本发明提供的测定方法具有良好的稳定性和重复性。

实验结果表明，本发明提供的方法对烟草中蛋白质氮测定得到的数据变异系数较小，准确度较高。另外，本发明提供的方法采用连续消解的方式，消解条件温和，操作简单、省时，步骤简便；本发明提供的方法批量处理样品能力较强，处理周期较短，大大提高了检测效率。

附图说明

图1为本发明实施例1得到的紫外光谱图；

图2为本发明实施例1得到的非线性二级标准曲线；

图3为本发明实施例1得到的线性标准曲线。

具体实施方式

本发明提供了一种烟草中蛋白质氮含量测定方法，包括以下步骤：

a)分离烟草中的蛋白质氮，得到含有非蛋白质氮的待测试样；

b)在加热条件下，向所述待测试样中加入过硫酸钾，得到混合溶液；

c)将所述混合溶液依次经过紫外催化和高温加热，得到消解产物；

d)检测所述消解产物，得到烟草中非蛋白质氮含量；

e)根据预定的烟草中总氮含量和所述烟草中非蛋白质氮含量，得到烟草中蛋白质氮含量。

为了便于对烟草中蛋白质氮含量的测定，本发明优选对烟草进行前处理，具体包括以下步骤：

将烟草烘干、粉碎，得到烟草粉末。所述烘干温度优选为25℃～40℃，更优选为28℃～38℃，最优选为30℃～35℃，所述烟草粉末的粒度优选为60目～120目，更优选为65目～110目，最优选为80目～100目。

得到烟草粉末后，测量所述烟草粉末的干重。所述烟草粉末的干重优选按照以下方法获得：

测定所述烟草粉末中的水分含量，用称量得到的烟草粉末的质量扣除所述烟草粉末中的水分含量，得到所述烟草粉末的干重。本发明优选采用烘箱法测定所述烟草粉末中的水分含量，对所述烘箱法没有特殊限制。烟草粉末的质量根据测定结果的精确度而定，本发明中，测定结果的准确度优选为0.0001g～0.01g，更优选为0.001g～0.01g。

得到烟草粉末的干重后，本发明分离所述烟草粉末中的蛋白质氮，得到含有非蛋白质氮的待测试样。

本发明可以采用向烟草粉末中加入蛋白质变性试剂，加热得到的混合物，或紫外烘烤所述烟草粉末的方法，固化其中的蛋白质，分离固化后的蛋白质，得到含有非蛋白质氮的待测试样；本发明优选向烟草粉末中加入蛋白质变性试剂，加热得到的混合物，分离固化后的蛋白质，得到含有非蛋白质氮的待测试样。所述蛋白质变性试剂优选为有机酸，更优选为醋酸水溶液；所述醋酸水溶液的体积分数优选为0.1％～5％，更优选为0.3％～4％，最优选为0.5％～3％；所述蛋白质变性试剂的体积与烟草粉末的质量比优选为25mL∶(0.1～3)g，更优选为25mL∶(0.3～1)g；优选将得到的混合物加热至沸腾；所述加热时间优选为5分钟～50分钟，更优选为8分钟～40分钟，最优选为20分钟～30分钟。

停止加热后，优选将得到的溶液趁热过滤，用所述蛋白质变性试剂优选淋洗1次～10次，更优选为2次～8次，最优选为3～5次，合并每次得到的滤液，冷却后定容，得到含有非蛋白质氮的待测试样。

为了减小烟草中还原性组分对其中非蛋白质氮含量测定的干扰，本发明在对所述待测试样进行消解前优选氧化所述待测试样中的还原性组分。本发明中所述烟草中主要的还原物质为糖类化合物，优选当所述待测样品中总糖含量≥15％时，更优选≥20％时，优选向所述待测样品中加入过氧化氢，氧化所述待测试样中的还原性组分。所述过氧化氢与待测样品中的还原性组分进行氧化还原反应，使其失去还原作用，所述过氧化氢的质量浓度优选为3％～50％，更优选为10％～30％，本发明对所述氧化还原反应中原料的配比，反应条件等没有特殊限制，为本领域技术人员熟知的还原性物质与过氧化氢之间的氧化还原反应。

为了减小杂质对测定的干扰，本发明在对所述待测试样进行消解前优选除去所述待测试样中的杂质，得到含有非蛋白质氮的待测试样。如所述待测样品中含有无机色素时，可以采用以下方法处理：优选向所述滤液中加入活性炭，过滤得到的混合溶液，除去其中的无机色素；所述待测样品含有金属离子时，可以采用以下方法处理：优选向所述滤液中加入乙二胺四乙酸二钠溶液，过滤得到的混合溶液，除去其中的金属离子，所述乙二胺四乙酸二钠溶液的浓度优选为0.1g/L～5g/L，更优选为0.2g/L～3g/L，最优选为0.8g/L～2g/L；所述待测样品含有无机色素和金属离子时，可以先用上述方法除去无机色素再除去金属离子，也可以先用上述方法除去金属离子再除去无机色素。

得到含有非蛋白质氮的待测试样后，本发明在加热条件下，向所述待测试样中加入过硫酸钾，得到混合溶液。所述过硫酸钾在加热条件下释放出活性氧原子[O]，得到的活性氧原子[O]会对待测试样进行消解，得到消解产物。所述过硫酸钾与所述烟草粉末干重的质量比优选为1∶(1～20)，更优选为1∶(2～15)，最优选为1∶(3～10)；优选向所述待测试样中加入过硫酸钾溶液，所述过硫酸钾溶液的摩尔浓度优选为0.1mol/L～1mol/L，更优选为0.15mol/L～0.8mol/L，最优选为0.25mol/L～0.5mol/L；所述加热温度优选为90℃～110℃，更优选为95℃～105℃。

得到混合溶液后，本发明将所述混合溶液依次进行紫外催化和高温加热，得到消解产物。

首先将所述混合溶液进行紫外催化，得到紫外催化的消解产物。在紫外催化过程中，上述得到的部分活性氧原子[O]在紫外催化的条件下与水反应，优选在紫外灯照射条件下，生成自由基，所述自由基可对待测试样中的各类有机氮等还原性组分进行消解，得到紫外催化的消解产物。所述紫外催化优选在非硫酸酸性环境中进行紫外催化，更优选为在盐酸酸性环境中进行紫外催化；所述紫外催化的温度优选为90℃～110℃，更优选为95℃～105℃。

得到紫外催化的消解产物后，本发明将所述紫外催化的消解产物继续进行高温加热，得到所述待测试样的消解产物。在高温加热过程中，上述得到的活性氧原子[O]在高温条件下对所述紫外催化消解产物进行进一步消解，得到所述待测样品的消解产物。所述高温加热的温度优选为95℃～150℃，更优选为100℃～140℃，最优选为110℃～130℃；所述高温加热优选为加压高温加热，所述加压高温加热的压力优选为5Psi～8Psi，更优选为5.5Psi～7.5Psi。

得到所述待测试样的消解产物后，检测所述消解产物，本发明优选采用紫外分光光度法检测所述消解产物，得到所述消解产物的紫外光谱数据。首先将得到的消解产物还原，得到亚硝酸盐，然后将所述亚硝酸盐优选与磺胺和N-(1-萘基)乙二胺二盐酸盐反应，得到紫红色产物，采用紫外分光光度法测定得到的紫红色产物，得到所述消解产物的紫外光谱数据。优选用镉将得到的消解产物还原，得到亚硝酸盐；所述磺胺的浓度优选为1g/L～50g/L，更优选为10g/L～40g/L，最优选为20g/L～30g/L；所述N-萘基乙二胺盐酸盐的浓度优选为0.1g/L～10g/L，更优选为0.5g/L～8g/L，最优选为1g/L～5g/L；所述测定波长优选为520nm～560nm，更优选为530nm～550nm，最优选为535nm～545nm。

根据上述技术方案得到的紫外光谱数据和预定的标准曲线，即可得到烟草中的非蛋白质氮含量。

在本发明中，所述标准曲线优选按照以下方法获得：

配制系列浓度的标准溶液；

在加热条件下，向所述标准溶液中加入过硫酸钾，得到混合溶液；

将所述混合溶液依次经过紫外催化和高温加热，得到消解产物；

检测所述消解产物，得到系列浓度标准溶液的紫外光谱数据；

根据所述紫外光谱数据绘制标准曲线。

本发明中所述标准溶液优选为硝酸钠水溶液，采用国家标准物质研究中心的硝酸盐氮标准，配制系列浓度的标准溶液。首先，配制标准物质的储备液，将得到的储备液稀释至标准溶液的浓度。所述标准溶液的质量浓度优选为0.001％～10％，更优选为0.01％～5％，最优选为0.1％～1％；优选用醋酸溶液将标准物质储备液稀释到标准溶液的浓度，所述醋酸溶液的体积分数优选为0.1％～10％，更优选为0.25％～8％，最优选为0.5％～5％。

得到系列浓度的标准溶液后，本发明在加热条件下，向所述标准溶液中加入过硫酸钾消解，得到混合溶液。所述过硫酸钾在加热条件下释放出活性氧原子[O]，得到的活性氧原子[O]会对所述标准溶液进行消解，得到消解产物。所述过硫酸钾与所述标准溶液中标准物质的质量比优选为1∶(1～20)，更优选为1∶(2～15)，最优选为1∶(3～10)；优选向所述标准溶液中加入过硫酸钾溶液，所述过硫酸钾溶液的摩尔浓度优选为0.1mol/L～1mol/L，更优选为0.15mol/L～0.8mol/L，最优选为0.25mol/L～0.5mol/L；所述加热温度优选为90℃～110℃，更优选为95℃～105℃。

得到混合溶液后，将所述混合溶液依次经过紫外催化和高温加热，得到消解产物。所述紫外催化和高温加热过程与上述技术方案中的紫外催化和高温加热过程相同。

按照上述技术方案中的紫外催化和高温加热过程，得到消解产物后，检测所述消解产物，得到系列浓度标准溶液的紫外光谱数据。所述检测过程与上述技术方案中的检测过程相同。

根据上述技术方案中的检测过程，得到系列浓度标准溶液的紫外光谱数据后，根据所述紫外光谱数据及其对应的浓度绘制得到标准曲线。所述标准曲线优选为非线性二级标准曲线或线性标准曲线。

根据上述技术方案得到的烟草消解产物的紫外光谱图和标准曲线，经过计算得到烟草中非蛋白质氮的质量，再将所述非蛋白质氮的质量除以上述烟草样品的干重，得到烟草中非蛋白质氮含量。

得到烟草中非蛋白质氮含量后，根据预定的烟草中总氮含量和所述烟草中非蛋白质氮含量，得到烟草中蛋白质氮含量。本发明可以按照行业标准YC/T161-2002测定所述烟草中总氮含量，也可以按照上述烟草中非蛋白质氮含量的测定方法测定烟草中总氮含量。采用上述烟草中非蛋白质氮含量的测定方法测定烟草中的总氮含量时，所述烟草中总氮含量测定的技术方案与上述非蛋白质氮含量的技术方案的不同之处在于，烟草中总氮含量的测定不包括步a)分离烟草中的蛋白质氮，得到含有非蛋白质氮的待测试样。

根据上述技术方案得到的烟草中总氮含量和非蛋白质氮含量，经过计算得到烟草中蛋白质氮含量。

得到烟草中蛋白质氮含量后，还可以用所述烟草中蛋白质氮含量乘以蛋白质系数，即可得到烟草中蛋白质含量。

在本发明提供的烟草中蛋白质氮含量的测定方法中，过硫酸钾释放的活性氧原子[O]首先对烟草样品进行初步消解，然后依次在紫外催化和高温加热的条件下部分活性氧原子[O]对烟草进行进一步地消解，其中的含氮化合物得到相对完全和彻底地消解，而且消除了其中还原性组分对消解产物的影响，具有良好的消解效果，提高了消解产物的均一性，提高了对烟草中蛋白质氮含量测定的准确性。另外，本发明提供的方法具有良好的稳定性和重复性。

为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的烟草中蛋白质氮含量的测定方法进行详细描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

将11g硝酸钠溶解于100mL蒸馏水中，得到质量浓度为10.0％的硝酸钠储备液。准确移取1.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL、10.0mL所述标准储备液，用体积分数为0.5％的醋酸溶液分别将其定容到100mL，得到系列浓度的硝酸钠标准待测溶液。分别取所述标准待测溶液2mL，倾入连续流动分析仪样品管中分别平行测定三次，取其平均值。在连续流动分析仪中，样品进样量为0.1mL/min，进样时间为100s，冲洗时间为120s。首先在90℃下，向所述标准待测溶液中加入2mL摩尔浓度为0.3mol/L的过硫酸钾溶液，过硫酸钾溶液的进样量为0.8mL/min，然后得到的混合溶液在90℃，盐酸提供的酸性条件下进行紫外灯照射3min，接着在6Psi压力下高温加热得到的紫外催化的消解产物2.5min，加热温度为110℃，得到样品的消解产物。得到的消解产物经过镉柱时被还原为亚硝酸盐，进入检测器进行紫外分光光度法测定，检测波长为540nm，得到标准物质的紫外光谱图。

标准物质的紫外光谱图如图1所示，图1为本发明实施例1得到的紫外光谱图，图中曲线上的信号叉从第五个开始紧接着的6个信号叉依次为系列浓度的标准溶液的电信号强度。根据得到的系列浓度的标准物质的紫外光谱图及其对应的浓度绘制得到标准曲线，如图2和图3所示，图2为本发明实施例1得到的非线性二级标准曲线，图3为本发明实施例1得到的线性标准曲线，图3所示的线性标准曲线的硝酸根浓度线性范围为0.1％～1％，线性方程为：A(吸光度)＝-1076.98+47750.43C(％)，相关系数r为0.9981。由图中可以看出，本发明提供的方法对氮含量的测定得到的电信号强度明显提高，而且电信号强度与其浓度之间存在良好的线性关系，本发明提供的方法具有良好的效果。

比较例1

将11g硝酸钠溶解于100mL蒸馏水中，得到质量浓度为10.0％的硝酸钠储备液。准确移取1.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL、10.0mL所述标准储备液，用体积分数为0.5％的醋酸溶液分别将其定容到100mL，得到系列浓度的硝酸钠标准溶液。分别取得到的标准溶液2mL，倾入连续流动分析仪样品管中分别平行测定三次，取其平均值。在连续流动分析仪中，样品进样量为0.1mL/min，进样时间为100s，冲洗时间为120s。首先在90℃下，向所述标准溶液中加入2mL摩尔浓度为0.3mol/L的过硫酸钾溶液，过硫酸钾溶液的进样量为0.8mL/min，然后在6Psi压力下高温加热得到的混合溶液2.5min，加热温度为110℃，得到样品的消解产物。得到的消解产物经过镉柱时被还原为亚硝酸盐，进入检测器进行紫外分光光度法检测，检测波长为540nm，得到标准物质的紫外光谱图。

根据得到的系列浓度的标准物质的紫外光谱图绘制得到标准曲线。

实施例2～17

根据中华人民共和国标准GB/T19616-2004选择16种烟草样品，烟草样品为本公司技术中心原料检验室烟叶组提供的2006年、2007年和2008年国内外生产的烤烟烟叶样品，按照中华人民共和国烟草行业标准YC/T31-1996制备烟末试样，测定烟末中水分含量。将2g烟末试样溶解于100mL体积分数为0.5％的乙酸溶液中，加热沸腾15分钟，迅速用无氮定性滤纸过滤，用体积分数为0.5％的乙酸溶液冲洗沉淀物，合并得到的滤液，冷却后定容到200mL，准确移取2mL滤液倾入连续流动分析仪样品管中分别平行测定三次，取其平均值。在连续流动分析仪中，样品进样量为0.1mL/min，进样时间为100s，冲洗时间为120s。首先在90℃下，向所述滤液中加入2mL摩尔浓度为0.3mol/L的过硫酸钾溶液，过硫酸钾溶液的进样量为0.8mL/min，然后得到的混合溶液在90℃，盐酸提供的酸性条件下进行紫外灯照射3min，接着在6Psi压力下高温加热得到的紫外催化的消解产物2.5min，加热温度为110℃，得到烟碱样品的消解产物。得到的消解产物经过镉柱时被还原为亚硝酸盐，进入检测器进行紫外分光光度法检测，检测波长为540nm，得到烟草样品的紫外光谱图。

根据得到的烟草样品的紫外光谱图和实施例1得到的标准曲线，得到烟草中非蛋白质氮含量。

将2g烟末试样溶解于100mL水中，过滤除去其中的不溶性杂质，将得到的滤液合并后定容到200mL，准确移取2mL滤液倾入连续流动分析仪样品管中分别平行测定三次，测定过程同本实施例中上述测定烟草中非蛋白质氮的过程相同，得到烟草样品中总氮的紫外光谱图。

根据得到的烟草样品中总氮的紫外光谱图和实施例1得到的标准曲线，得到烟草中总氮含量。

根据得到的烟草中总氮含量和所述烟草中非蛋白质氮含量，得到烟草中蛋白质氮含量，再用所述烟草中蛋白质氮含量乘以蛋白质系数，得到烟草中蛋白质含量，结果如表1所示，表1为本发明实施例2～17得到的测定结果。

表1本发明实施例2～17得到的测定结果

注：蛋白质氮含量*为质量百分数；蛋白质含量*为质量百分数。

由表1可知，本发明提供的方法对烟草中蛋白质含量的测定结果准确，得到的数据的变异系数皆小于5％，符合分析检测的要求。

比较例2～17

根据中华人民共和国标准GB/T19616-2004选择16种烟草样品，烟草样品与实施例2～17中的烟草样品相同，按照中华人民共和国烟草行业标准YC/T31-1996制备烟末试样，测定烟末中水分含量。将2g烟末试样溶解于100mL体积分数为0.5％的乙酸溶液中，加热沸腾15分钟，迅速用无氮定性滤纸过滤，用体积分数为0.5％的乙酸溶液冲洗沉淀物，合并得到的滤液，冷却后定容到200mL，准确移取2mL滤液倾入连续流动分析仪样品管中分别平行测定三次，取其平均值。在连续流动分析仪中，样品进样量为0.1mL/min，进样时间为100s，冲洗时间为120s。首先在90℃下，向所述滤液中加入2mL摩尔浓度为0.3mol/L的过硫酸钾溶液，过硫酸钾溶液的进样量为0.8mL/min，然后在6Psi压力下高温加热得到的混合溶液2.5min，加热温度为110℃，得到样品的消解产物。得到的消解产物经过镉柱时被还原为亚硝酸盐，进入检测器进行紫外分光光度法测定，检测波长为540nm，得到烟草样品的紫外光谱图。

根据得到的烟草样品的紫外光谱图和实施例1得到的标准曲线，得到烟草中非蛋白质氮含量。

将2g烟末试样溶解于100mL水中，过滤除去其中的不溶性杂质，将得到的滤液合并后定容到200mL，准确移取2mL滤液倾入连续流动分析仪样品管中分别平行测定三次，测定过程同本比较例中上述测定烟草中非蛋白质氮的过程相同，得到烟草样品中总氮的紫外光谱图。

根据得到的烟草样品中总氮的紫外光谱图和实施例1得到的标准曲线，得到烟草中总氮含量。

根据得到的烟草中总氮含量和所述烟草中非蛋白质氮含量，得到烟草中蛋白质氮含量，再用所述烟草中蛋白质氮含量乘以蛋白质系数，得到烟草中蛋白质含量，结果如表2所示，表2为本发明比较例2～17得到的测定结果。

表2本发明比较例2～17得到的测定结果

注：蛋白质氮含量*为质量百分数；蛋白质含量*为质量百分数。

由表2可知，高压消解法测定烟草中蛋白质含量的结果较低，得到的数据的变异系数普遍偏大，而且有4组数据的变异系数大于5％，不符合分析检测的要求。

由以上实施例可知，本发明提供的方法对烟草中的含氮化合物有良好的消解效果，对烟草中蛋白质含量的测定得到的结果准确。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种烟草中蛋白质氮含量的测定方法，包括以下步骤：

a）分离烟草中的蛋白质氮，得到含有非蛋白质氮的待测试样；

b）在加热条件下，向所述待测试样中加入过硫酸钾，得到混合溶液；

c）将所述混合溶液依次经过紫外催化和高温加热，得到消解产物，所述高温加热的温度为95℃～150℃；

d）检测所述消解产物，得到烟草中非蛋白质氮含量；

e）根据预定的烟草中总氮含量和所述烟草中非蛋白质氮含量，得到烟草中蛋白质氮含量。

2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述紫外催化为在非硫酸酸性环境中进行紫外催化。

3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述紫外催化的温度为90℃～110℃。

4.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述高温加热为加压高温加热。

5.根据权利要求4所述的测定方法，其特征在于，所述加压高温加热的压力为5Psi～8Psi。

6.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤b）中的加热温度为90℃～110℃。

7.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤a）具体为：

向烟草中加入蛋白质变性试剂，加热得到的混合物，分离后得到含有非蛋白质氮的待测试样。

8.根据权利要求7所述的测定方法，其特征在于，所述蛋白质变性试剂为有机酸。

9.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤b）前还包括：

向所述待测试样中加入过氧化氢，氧化所述待测试样中的还原性组分；

和/或向所述待测试样中加入活性炭，除去所述待测试样中的无机色素；

和/或向所述待测试样中加入乙二胺四乙酸二钠，除去所述待测试样中的金属离子。

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