CN110664741B - 提高荷叶碱生物利用度的荷叶碱溶液的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种提高荷叶碱生物利用度的荷叶碱溶液的制备方法，包括以下步骤：配制磷酸盐溶液；在荷叶碱中加入磷酸盐溶液，磁力搅拌、水浴超声处理；再加入表面活性剂，磁力搅拌，得荷叶碱溶液；所述荷叶碱溶液中表面活性剂的体积浓度为(20±2)％，荷叶碱浓度为(0.1±0.01)mg/mL。采用本发明制备而得的荷叶碱溶液，能提高荷叶碱生物利用度和稳定性，从而发挥荷叶碱在食品和医药领域的应用。

Description

提高荷叶碱生物利用度的荷叶碱溶液的制备方法

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种可提高荷叶中荷叶碱生物利用度的溶液制备方法。

背景技术

中药材荷叶为睡莲科植物莲(Nelumbo nucifera Gaertn)的干燥叶片，传统医学认为荷叶味苦、性平，具有消暑利湿、升发清阳和清心去热、凉血止血的功效。在我国根据《按照传统既是食品又是中药材物质目录管理办法》，2002年起荷叶就已经被列入药食同源类产品目录，目前荷叶作为新食品资源和中药材一直被广泛应用。近年来研究发现荷叶中主要天然活性成分为生物碱和黄酮类，黄阿根等开展了荷叶黄酮和生物碱调节血脂作用的比较研究，结果表明荷叶生物碱降血脂效果显著优于荷叶黄酮类成分。近年来关于荷叶中天然活性成分方面的研究，除了荷叶中活性成分的提取、分离纯化和定量检测外，主要集中于荷叶碱的药物动力学过程以及高血脂、高血压和高血糖等代谢性疾病药理活性方面的研究。

荷叶碱为荷叶中一种阿朴啡类生物碱，脂溶性较强。通过查阅近十年来荷叶碱药物代谢动力学方面研究文献，研究表明荷叶碱在体内吸收相对较迅速，但吸收率较低，体内组织分布较为广泛，消除过程较迅速，生物利用度也较低。王玉霞等于国内较早采用RP-HPLC方法测定了Beagle犬血浆中荷叶碱的浓度，并同时对Beagle犬体内荷叶碱的药物动力学过程进行研究，结果表明给予Beagle犬口灌总生物碱后，单体生物碱在Beagle犬体内符合有吸收二房室动力学模型，不同剂量下吸收半衰期为0.38-0.44h，分布半衰期为0.22-0.26h，消除半衰期为0.56-0.85h，达峰时间为1.25-1.33h。这说明荷叶碱在Beagle犬体内吸收代谢快，导致荷叶碱在体内存留时间较短，很有可能影响其生物利用度。谢水林等采用LC-MS/MS方法开展了荷叶碱在大鼠体内药物动力学和绝对生物利用度研究，结果表明静脉注射荷叶碱大鼠血浆中平均峰浓度为1213.17ng/mL，平均消除半衰期为1.30h，而口服后大鼠血浆中荷叶碱平均峰浓度为1257.50ng/mL，平均吸收半衰期为0.33h，平均消除半衰期为4.89h，绝对生物利用度为69.56％。通过上述研究结果比较发现，荷叶碱在大鼠和Beagle犬体内药物动力学过程差异显著，说明荷叶碱的药物动力学体内过程具有显著的种属差异性，大鼠和Beagle犬口服荷叶碱后，荷叶碱在两者体内均能较快吸收，但荷叶碱在Beagle犬体内清除速率是大鼠体内清除速率的5倍以上。

近年来，国外文献资料也发表了关于荷叶碱药物动力学相关研究的论文，Gu etal采用HPLC-MS/MS方法研究荷叶碱在大鼠体内的药物动力学和组织分布特征，结果表明荷叶碱在大鼠体内分布较快且广泛，其中0.2mg/kg静脉注射后平均分布半衰期为0.6h，平均表观分布容积为1.5L/kg，单剂量口灌组平均表观分布容积为57.3-112.4L/kg，同时证实了不同给药剂量下荷叶碱在大鼠体内绝对生物利用度为3.8％-4.2％，说明荷叶碱在大鼠小肠跨膜转运率较低或体内代谢(包括肠道代谢和肝脏代谢)较强，从而导致荷叶碱较难通过小肠上皮细胞进入血液循环或者在机体内保留时间较短，这点从实验中达峰浓度较低即可验证。Xu et al探讨了荷叶碱在机体内组织分布模式和药物动力学特征，结果显示荷叶碱能够通过小肠上皮吸收，并快速分布到不同组织，其中肝脏和肾脏中浓度最高，然后依次为脾脏、肺脏、心脏和大脑等组织，荷叶碱在机体组织和血浆中消除均较快，其半衰期均低于5h，而且研究表明荷叶碱能够通过血脑屏障迅速进入大脑。由此可见，荷叶碱在体内分布广泛，主要集中在肝脏和肾脏，说明荷叶碱主要分布部位为肝脏和肾脏。

虽然近年来关于荷叶碱体内药物代谢动力学过程进行了大量报道，但关于荷叶碱对各种代谢性疾病药理活性的研究也有较多研究。有研究开展了荷叶碱对血脂代谢调控的研究报道，有研究指出荷叶碱能够显著降低血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)浓度，提高了高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)浓度。此外，现代药理学研究表明，荷叶碱不但能够显著调控体内脂质代谢过程，进而对血脂水平具有显著调控作用，同时由于荷叶碱抗氧化性和脂质代谢调控活性，对心血管硬化相关病理改变亦具有显著调节功能。然而各种药理活性的发挥，大多与荷叶碱体内生物利用度有显著关系。但现代药物代谢动力学研究表明，荷叶碱在体内生物利用度较低，至于荷叶碱低生物利用度的主要因素，目前尚未被完全阐释清楚，但荷叶碱难以通过小肠上皮或者小肠上皮的阻碍作用或许是一个重要因素。因此，如何提高或增强荷叶碱在小肠上皮的转运效率，是提高荷叶碱生物利用度的一个重要措施和手段。

然而到目前为止，关于荷叶碱生物利用度方面的研究鲜见报道，尤其是关于提高或改善荷叶碱的生物利用度的研究更是未见相关研究。研究表明荷叶碱的药代动力学及生物利用度报道的结果存在较大差异，有研究利用多种生物药剂学评价模型，对荷叶碱进行生物药剂分类学研究(biopharmaceutical classification system，BCS)。研究结果表明荷叶碱溶解度受环境pH影响在酸性条件下属于BCSⅠ类，近中性及碱性环境下，BCS分类结果出现差异。以外翻肠囊法所得肠组织表观渗透系数表明荷叶碱渗透性较差，为BCSⅣ类。进一步证明动物种源及环境酸碱度对荷叶碱口服生物利用度具有显著影响。

综上所述，荷叶碱为荷叶中的主要活性成分，因其具有显著的降血脂和抑制细菌作用而备受关注。近年来研究表明，荷叶碱水溶性极差，实验动物口服研究表明荷叶碱的口服生物利用度较低。因此急需提供一种可提高荷叶中荷叶碱生物利用度的溶液制备方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种提高荷叶碱生物利用度的溶液制备方法，采用该方法能制备出生物利用度显著增高的荷叶碱溶液。

为了解决上述问题，本发明提供一种提高荷叶碱生物利用度的荷叶碱溶液的制备方法，包括以下步骤：

1)、配制pH为(5.0±0.1)的磷酸盐溶液；；

2)、在荷叶碱中加入步骤1)所得的磷酸盐溶液，磁力搅拌、水浴超声处理；

3)、向步骤2)所得物中加入表面活性剂，磁力搅拌，得荷叶碱溶液；

所述荷叶碱溶液中表面活性剂的体积浓度为(20±2)％，荷叶碱浓度为(0.1±0.01)mg/mL。

作为本发明的荷叶碱溶液的制备方法的改进：表面活性剂为PEG-400。

作为本发明的荷叶碱溶液的制备方法的进一步改进，所述步骤1)为：配制浓度为0.2mol/L的磷酸二氢钠水溶液，配制0.2mol/L的氢氧化钠水溶液；然后向磷酸二氢钠溶液中滴加氢氧化钠溶液，直至pH为(5.0±0.1)，得磷酸盐溶液。

作为本发明的荷叶碱溶液的制备方法的进一步改进，所述步骤2)中磁力搅拌、水浴超声处理为：先于(25±3)℃的温度、(500±50)r/min的转速下磁力搅拌(30±5)分钟，然后置于(25±3)℃水浴中25KHz超声(10±3)分钟。

作为本发明的荷叶碱溶液的制备方法的进一步改进：所述步骤3)中，向步骤2)所得物中以滴加的形式加入表面活性剂，滴加时间为10～15分钟；于(25±3)℃的温度、(500±50)r/min的转速下磁力搅拌(30±5)分钟，得得荷叶碱溶液。

本发明采用pH(5.0±0.1)的磷酸盐溶液溶解荷叶碱、(20±2)％的PEG-400助溶，制备获得荷叶碱口服溶液，并考察荷叶碱的Caco-2细胞摄取、在体小肠吸收以及口服生物利用度。

本发明在发明过程中，使用了如下的检测方法：

方法一、大鼠血浆(细胞裂解液或小肠循环液)中荷叶碱的定量分析方法

采用向0.1mL空白血浆(空白细胞裂解液或小肠循环液)中加入荷叶碱标准品的方法，配制浓度范围为1-500ng/mL的荷叶碱标准样品，混匀后向其中加入2mL乙酸乙酯，振荡1min后5000r/min离心5min，然后取出全部有机相于尖底玻璃管中，萃取后的细胞裂解液残渣重复萃取一下，合并有机相，玻璃管于45℃水域中氮气流吹干，向其中加入0.2mL色谱甲醇，超声、振荡1min，15000r/min高速离心5min，取20μL上清液进样分析。然后以荷叶碱峰面积为纵坐标，以荷叶碱质量浓度为横坐标，绘制标准曲线并计算标准曲线方程和相关系数(r)。

具体为：AB SCIEX三重四级杆高效液相色谱-质谱联用系统(TRIPLE QUAD 5500系列)，液相色谱仪为Exion-LC系列；流动相A为水-甲醇(体积比95：5)，流动相B为甲醇-水(体积比95：5)，流动相A和B均含0.5％甲酸，进行梯度洗脱，梯度条件见下表1；流速0.2mL/min；进样量20μL。正离子模式，选择离子扫描(MRM)，气帘气流速35L/min，碰撞气8L/min，电喷雾电压5.5KV，离子源温度550℃，雾化器和辅助气均为60psi，解簇电压69V，入口电压6V，碰撞电压24V，出口电压5V。分子离子峰质荷比为296.20。

表1、液相色谱洗脱条件

备注说明：空白血浆即为没有加入荷叶碱的纯血浆。

根据HPLC-MS/MS检测结果，以荷叶碱峰面积(Y)为纵坐标，以荷叶碱的质量浓度(X)为横坐标，绘制标准曲线，求出曲线方程和相关系数(r)。同时制备含荷叶碱曲线范围内高、中、低浓度血浆样品1.0，10.0，100.0ng/mL作为质控样品(QC)，分别按照上述样品处理方法处理后进样分析，每个浓度样品重复5次，以样品中荷叶碱峰面积与直接溶于流动相下所测峰面积之比，计算高、中、低3种浓度下方法回收率(即，样品中荷叶碱峰面积与直接溶于流动相下所测峰面积之比＝荷叶碱回收率)。比较以上样品于日内5次和日间5次测定的峰面积的变化，计算日内精密度和日间精密度。

备注说明：“日内精密度和日间精密度”主要用于评价上述方法的精密度和准确性，以此来判断最终检测结果的可靠性。

结果为：

按照上述方法所得处理血浆中荷叶碱在1-500.0ng/mL浓度范围内标准曲线为Y＝0.121x+0.2396(r＞0.999)，在标准曲线范围内高、中、低浓度荷叶碱回收率均大于90％以上，日内精密度和日间精密度均小于10％，见表2。

表2.血浆中荷叶碱回收率、准确度和精密度(n＝5)

制备1.0，10.0，100.0ng/mL线性范围内低、中、高浓度的质量控制样品，分别置于常温下、4℃和-20℃环境下，分别计算荷叶碱稳定性变化，结果表明不同贮存条件下，荷叶碱在血浆中稳定性在97.71％～99.83％，说明稳定性较好，结果见表3。

表3.大鼠血浆中荷叶碱稳定性(n＝5)

根据上述结果，能得知：本发明所设置的上述检测方法能满足本发明的荷叶碱Caco-2细胞摄取、小肠在体吸收和生物利用度检测的要求。

方法二、评估荷叶碱Caco-2细胞摄取

Caco-2细胞摄取实验前吸去全部培养液，用37℃PBS缓冲液清洗3次，然后向其中加入本发明配制的荷叶碱溶液(即，能提高荷叶碱生物利用度的溶液)0.2mL，用细菌过滤器过滤后用于细胞培养。将接种Caco-2细胞的24孔细胞培养板于细胞培养箱中培养，于孵育后0.5h从培养箱中取出培养板，吸取全部培养液(含药磷酸盐缓冲液)，迅速向其中加入4℃预冷的PBS溶液终止摄取，然后用预冷PBS清洗3次。然后向每孔中加入2mL超纯水，反复冻融，使得细胞裂解，收集全部细胞裂解液，按照上述所建立的分析方法测定细胞裂解液中荷叶碱浓度(C)，并根据加入体积计算细胞内摄取的荷叶碱质量(C×0.2mL)。

细胞内荷叶碱的摄取率/％＝(C×0.2mL)/(加入的荷叶碱浓度×0.2mL)×100％

即，本发明利用Caco-2细胞摄取率指标，分别考察不同处理条件下在Caco-2内的荷叶碱摄取率。

方法三、评估小肠中荷叶碱在体吸收

将实验前禁食12h的大鼠称重后,按照1.0mL/100g腹腔注射5％水合氯醛溶液麻醉,麻醉后的大鼠固定在手术板上,沿腹中线切开腹部，对十二指肠上部及回肠下部剪切后插管,结扎,先用温热至37℃的生理盐水冲净肠内容物,经乳胶管接通蠕动泵，待肠道内容物冲洗干净后，取80mL配制好的本发明制备的溶液作为肠循环供试液,以4.5mL/min循环10min后取样2mL,补加2.0mL含有一定浓度PEG-400的磷酸缓冲液(不含荷叶碱),记为0点,将流速调整为1.5mL/min,分别于15、30、45、60、75、90、105、120、150、180min取样2mL,同时补加等量空白PEG-400的磷酸缓冲液，同时精确记录每次取样时循环液中药液的容积，整个灌流过程需保持大鼠体温37±2℃。然后根据测定的不同取样时间点荷叶碱浓度和循环液体积，得出不同取样时间点循环液中荷叶碱质量，然后根据循环液中荷叶碱质量与取样时间方程：M＝Mo×e^-kt，其中M为不同取样时间点循环液中剩余荷叶碱质量，Mo为循环液中荷叶碱最大质量，k为小肠吸收速率常数。经过线性回归得出k值(即吸收速率常数)，根据k值大小判断吸收快慢。

即，本发明利用荷叶碱在大鼠小肠内吸收速率常数指标，分别考察不同处理条件下荷叶碱在小肠内的吸收速率。

方法四、评估血浆中荷叶碱的生物利用度

6只SPF级SD雄性大鼠购于杭州师范大学实验动物中心，合格证：SYXK(浙)2016-0014，体重280±20g，于实验前适应性养殖一周，口灌前12h禁食、不禁水。将本发明制备的不同荷叶碱溶液，按照0.5mg/kg体重大鼠口灌。分别于口灌后5min、10min、15min、30min、60min、120min、180min和240min尾静脉取血0.2mL，然后将所取血液于肝素化离心管中，6000r/min离心后，每个时间点分别取0.1mL血浆于10mL离心管中，采用HPLC-MS/MS方法定量分析大鼠血浆中荷叶碱浓度。将所测血浆中荷叶碱峰面积代入上述标准曲线方程(方法一所得)中，计算血浆中荷叶碱浓度，绘制荷叶碱血药浓度——时间曲线，比较不同荷叶碱口服溶液(本发明)的血药浓度，以此来评价荷叶碱新型制剂对溶液中荷叶碱在机体内生物利用度的影响。

设置的对照组为羧甲基纤维素钠溶液组荷叶碱，其制备方法为准确配制0.5％的羧甲基纤维素钠溶液，于90℃水浴中搅拌溶解，然后准确称取10mg荷叶碱原料药于烧杯中，向其中准确加入100mL配制的0.5％羧甲基纤维素钠溶液，超声、搅拌后制得0.1mg/mL的荷叶碱混悬液，灌胃前摇匀使用。实验方法为将制备的荷叶碱羧甲基纤维素钠混悬液，按照0.5mg/kg体重大鼠口灌。分别于口灌后5min、10min、15min、30min、60min、120min、180min和240min尾静脉取血0.2mL，然后将所取血液于肝素化离心管中，6000r/min离心后，每个时间点分别取0.1mL血浆于10mL离心管中，采用HPLC-MS/MS方法定量分析大鼠血浆中荷叶碱浓度。将所测血浆中荷叶碱峰面积代入上述标准曲线方程(方法一所得)中，计算血浆中荷叶碱浓度，绘制荷叶碱血药浓度——时间曲线。

本发明利用实验动物整体小肠吸收模型，通过定量检测本发明所得的荷叶碱溶液在体内生物利用度。

根据所得结果可得知：本发明制备的荷叶碱溶液能提高荷叶碱生物利用度和稳定性，从而发挥荷叶碱在食品和医药领域的应用。

附图说明

下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。

图1是荷叶碱的标准图谱；峰1为荷叶碱。

图2是空白血浆的图谱。

图3是服用实施例1所述的荷叶碱溶液后大鼠血浆图谱；峰1为荷叶碱。

图4是实施例1所述的荷叶碱溶液与普通羧甲基纤维素钠溶液组荷叶碱浓度——时间曲线对比图；

图5是不同实施例所得的溶液组的荷叶碱浓度——时间曲线对比图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

实施例1、一种提高荷叶碱生物利用度的溶液制备方法，包括以下步骤：

1)、准确配制浓度为0.2mol/L的磷酸二氢钠水溶液，同时准确配制0.2mol/L的氢氧化钠水溶液(约100mL)。然后向磷酸二氢钠溶液中缓慢滴入氢氧化钠溶液，直至调节pH值达到5.0；得磷酸盐溶液。

2)、在500mL圆底烧瓶中加入30mg的荷叶碱原料药(纯度98％以上)，并加入步骤1)制备所得的磷酸盐溶液定容至240.0mL，于25℃进行磁力搅拌30分钟，转速500r/min，然后置于25℃水浴中25KHz超声10分钟。

3)、准确量取60mL的表面活性剂PEG-400(分析纯)，以5mL/分钟的滴加速度加入2)中的烧瓶中，然后于25℃温度下继续磁力搅拌30分钟，转速500r/min；得荷叶碱溶液。

该得荷叶碱溶液中，PEG-400浓度为20％，荷叶碱浓度为0.1mg/mL。

实施例2、一种提高荷叶碱生物利用度的溶液制备方法：

1)、准确配制浓度为0.2mol/L的磷酸二氢钠水溶液。同时准确配制0.2mol/L的氢氧化钠水溶液100mL。然后向磷酸二氢钠溶液中缓慢滴入氢氧化钠溶液，直至调节pH值达到6.0；得磷酸盐溶液。

2)、在500mL圆底烧瓶中加入30mg的荷叶碱原料药(纯度98％以上)，并加入步骤1)制备所得的磷酸盐溶液定容至210.0mL，于25℃温度下进行磁力搅拌30分钟，转速500r/min，然后置于25℃水浴中25KHz超声10分钟。

3)、准确量取90mL表面活性剂PEG-400(分析纯)，以5mL/分钟的滴加速度加入2)中的烧瓶中，然后于25℃温度下继续磁力搅拌30分钟，转速500r/min；得荷叶碱溶液。

该得荷叶碱溶液中，PEG-400浓度为30％，荷叶碱浓度为0.1mg/mL。

实施例3、一种提高荷叶碱生物利用度的溶液制备方法，包括以下步骤：

1)、准确配制浓度为0.2mol/L的磷酸二氢钠水溶液。同时准确配制0.2mol/L的氢氧化钠水溶液。然后向磷酸二氢钠溶液中缓慢滴入氢氧化钠溶液，直至调节pH值达到3.0；得磷酸盐溶液。

2)在500mL圆底烧瓶中加入30mg的荷叶碱原料药(纯度98％以上)，并加入步骤1)制备所得的磷酸盐溶液定容至270mL，于25℃温度下进行磁力搅拌30分钟，转速500r/min，然后置于25℃水浴中25KHz超声10分钟。

3)、准确量取30mL表面活性剂PEG-400(分析纯)，以5mL/分钟的滴加速度加入2)中的烧瓶中，然后于25℃温度下继续磁力搅拌30分钟，转速500r/min；得荷叶碱溶液。

该得荷叶碱溶液中，PEG-400浓度为10％，荷叶碱浓度为0.1mg/mL。

实验1、检测Caco-2细胞摄取率

将上述实施例所得物的荷叶碱溶液按照上述方法二进行检测，结果如下：

实施例1所得的溶液细胞摄取率(％)＝61.65±8.61％；

实施例2所得的溶液细胞摄取率(％)＝38.66±2.24％；

实施例3所得的溶液细胞摄取率(％)＝22.08±2.15％。

实验2、检测小肠中荷叶碱在体吸收速率

将上述实施例所得的荷叶碱溶液按照上述方法三进行检测，结果如下：

实施例1所得的小肠在体吸收速率常数k＝0.034±0.0072；

实施例2所得的小肠在体吸收速率常数k＝0.022±0.0031；

实施例3所得的小肠在体吸收速率常数k＝0.013±0.0026；

实验3、检测荷叶碱在大鼠口服生物利用度

将上述所有实施例所得的荷叶碱溶液按照上述方法四进行检测，且设置相应的对照组；具体为：

按照2.0mg荷叶碱/kg体重给大鼠口灌，然后分别于给药后不同时间点从尾静脉采血，分离血浆，按照上述方法一进行处理后定量分析。

最终结果如图4和图5所述。

对比例1-1、将实施例1步骤3)中的表面活性剂由PEG-400改成PEG-200，用量保持不变。

对比例1-2、将实施例1步骤3)中的表面活性剂由PEG-400改成PEG-600，用量保持不变。

上述所有的对比例按照上述实验所述方法进行检测，所得结果如下：

对比实验1、检测Caco-2细胞摄取率

将对比例所得物的荷叶碱溶液按照上述方法二进行检测，结果如下：

对比例1-1所得溶液细胞摄取率(％)＝41.62±8.83％；

对比例1-2所得溶液细胞摄取率(％)＝35.26±5.31％。

对比实验2、检测小肠中荷叶碱在体吸收速率

将对比例所得的荷叶碱溶液按照上述方法三进行检测，结果如下：

对比例1-1所得的小肠在体吸收速率常数k＝0.016±0.0042；

对比例1-2所得的小肠在体吸收速率常数k＝0.023±0.0056。

对比实验3、检测荷叶碱在大鼠口服生物利用度

将上述对比例所得的荷叶碱溶液按照上述方法进行检测，最终结果如下表4。

表4 对比例中荷叶碱血药浓度——时间数据(ng/mL)

时间(min)	实施例1	对比例1-1	对比例1-2
				10	9.31±1.81	5.02±1.61	2.06±0.53
30	23.16±4.52	15.32±5.27	11.37±4.06
				60	11.93±2.36	7.06±1.84	5.34±0.92
120	5.96±0.95	2.28±0.87	2.13±0.34
				240	1.54±0.18	1.05±0.18	1.07±0.11

最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明中荷叶碱口服溶液的具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

Claims (4)

1.提高荷叶碱生物利用度的荷叶碱溶液的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)、配制pH为(5.0±0.1)的磷酸盐溶液；

2)、在荷叶碱中加入步骤1)所得的磷酸盐溶液，磁力搅拌、水浴超声处理；

3)、向步骤2)所得物中加入表面活性剂，磁力搅拌，得荷叶碱溶液，表面活性剂为PEG-400；

所述荷叶碱溶液中表面活性剂的体积浓度为(20±2)％，荷叶碱浓度为(0.1±0.01)mg/mL。

2.根据权利要求1所述的提高荷叶碱生物利用度的荷叶碱溶液的制备方法，其特征在于，所述步骤1)为：配制浓度为0.2mol/L的磷酸二氢钠水溶液，配制0.2mol/L的氢氧化钠水溶液；然后向磷酸二氢钠溶液中滴加氢氧化钠溶液，直至pH为(5.0±0.1)，得磷酸盐溶液。

3.根据权利要求2所述的提高荷叶碱生物利用度的荷叶碱溶液的制备方法，其特征在于：

所述步骤2)中磁力搅拌、水浴超声处理为：先于(25±3)℃的温度、(500±50)r/min的转速下磁力搅拌(30±5)分钟，然后置于(25±3)℃水浴中超声(10±3)分钟。

4.根据权利要求3所述的提高荷叶碱生物利用度的荷叶碱溶液的制备方法，其特征在于：

所述步骤3)中，向步骤2)所得物中以滴加的形式加入表面活性剂，滴加时间为10～15分钟；于(25±3)℃的温度、(500±50)r/min的转速下磁力搅拌(30±5)分钟，得荷叶碱溶液。

Images