CN110656192B

CN110656192B - 一种检测脑膜炎奈瑟氏菌的环介导等温扩增引物组及检测方法

Info

Publication number: CN110656192B
Application number: CN201911087180.0A
Authority: CN
Inventors: 张国军; 张岩; 郑光辉; 李方强; 徐婷; 陈燕旌; 边素莹; 李国歌; 史一君; 钱玲烨; 吕虹; 陈柯霖; 康熙雄
Original assignee: Beijing Tiantan Hospital
Current assignee: Beijing Tiantan Hospital
Priority date: 2019-11-08
Filing date: 2019-11-08
Publication date: 2022-10-28
Anticipated expiration: 2039-11-08
Also published as: CN110656192A

Abstract

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种检测脑膜炎奈瑟氏菌的环介导等温扩增引物组及检测方法。为了解决现有PCR扩增步骤需要频繁的进行升温和降温过程的缺陷，本发明提供一种检测脑膜炎奈瑟氏菌的环介导等温扩增引物组及检测方法。所述的引物组包括下述引物：外引物Nme2‑F3‑1：SEQ ID NO:1，外引物Nme2‑B3‑1：SEQ ID NO:2，内引物Nme2‑FIP‑1：SEQ ID NO:3，内引物Nme2‑BIP‑1：SEQ ID NO:4，环引物Nme2‑LF‑1 SEQ ID NO:5，环引物Nme2‑LB‑1：SEQ ID NO:6。该环介导等温扩增(LAMP)引物组和检测方法能够特异性、且准确、快速检测脑膜炎奈瑟氏菌。

Description

一种检测脑膜炎奈瑟氏菌的环介导等温扩增引物组及检测方法

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种检测脑膜炎奈瑟氏菌的环介导等温扩增引物组及检测方法。该环介导等温扩增(LAMP)引物组和检测方法能够特异性、且准确、快速检测脑膜炎奈瑟氏菌。

背景技术

脑膜炎奈瑟氏菌(Neisseria meningitides)简称脑膜炎球菌，可引起脑膜炎和其他形式的脑膜炎球菌疾病，如脑膜炎球菌败血症，一种威胁生命的败血症。作为一种专门的人类病原体，它以流行病和地方病的形式在世界范围内发生，主要在非洲和亚洲。它是儿童和年轻成人细菌性脑膜炎的主要原因，在约10％的病例中导致发育障碍和死亡,而且在感染后12小时内死亡风险接近15％。诊断的金标准是通过从无菌体液(可能是CSF或血液)生长而对脑膜炎奈瑟球菌进行微生物分离，但培养周期长，至少需要48-72小时，且经常出现培养失败等情况。

申请号201210137052.4(公布日：2012年8月22日)，发明名称“脑膜炎奈瑟氏菌的特异性检测和鉴别用引物探针组合和试剂盒”，和申请号201110004826.1(公布日：2011年8月17日)，发明名称“一种对脑膜炎奈瑟氏菌的ITS特异的核苷酸及其应用”以PCR原理进行快速筛查。该类方法采用荧光探针，利用一对扩增引物检测样品中的目标核酸序列。但该类方法所用核酸扩增步骤需要频繁的进行升温和降温过程，耗时至少需要1.5h以上，并需要使用到昂贵设备，如荧光定量PCR仪、电泳仪和测序仪等辅助进行结果判断，无法适应简单的实验条件或现场实时检测的需求。

环介导等温核酸扩增技术(loop-mediated isotherm amplification，LAMP)是Notomi T.于2000年开发等温核酸扩增方法，其原理是利用一种链置换DNA聚合酶(Bst DNApolymerase)和多对特异性引物，特异地识别靶序列上的6个独立区域，在等温条件下完成核酸扩增反应。近年来，该技术已逐步应用于病原微生物的检测，如《一种检测甲型副伤寒沙门氏菌的LAMP试剂盒》(中国专利公布号CN 102643901 A，公布日2012年8月22日)，但目前尚未见该方法用于脑膜炎奈瑟氏菌的检测，更无合适高效的引物用于该领域的LAMP检测。

发明内容

为了解决现有PCR扩增步骤需要频繁的进行升温和降温过程的缺陷，本发明提供一种检测脑膜炎奈瑟氏菌的环介导等温扩增引物组及检测方法。发明内容涉及检测脑膜炎奈瑟氏菌的特异性引物组，和利用该引物组建立的检测方法。本发明提供的检测脑膜炎奈瑟氏菌的环介导等温扩增引物组可在等温下扩增，解决了现有PCR扩增步骤需要频繁的进行升温和降温的问题，且灵敏度高、特异性好。进一步的，本发明解决了现有PCR扩增步骤耗时长的问题，本发明提供的引物组及利用该引用组建立的检测方法检测速度快。

本发明提供了一种检测脑膜炎奈瑟氏菌的环介导等温扩增引物组，所述环介导等温扩增引物组包括下列引物：

外引物Nme2-F3-1(简称F3)：5’-TACATCTTTATTCTTCACAGGA-3’(SEQ ID NO:1)，

外引物Nme2-B3-1(简称B3)：5’-AAGATCGCCGTTCTGAT-3’(SEQ ID NO:2)，

内引物Nme2-FIP-1(简称FIP)：

5’-TCAAGGTTATGGCAGTGAGGCACTGCATAGAAAATAGCGAATG-3’(SEQ ID NO:3)，

内引物Nme2-BIP-1(简称BIP)：

5’-TCCATTTATCCTGACGTTCTGCCGGCGTGGTGTGTTTGTGT-3’(SEQ ID NO:4)，

环引物Nme2-LF-1(简称LF)：5’-CGGTATATCGTGTGAATATGGCTG-3’(SEQ ID NO:5)，

环引物Nme2-LB-1(简称LB)：5’-CACCAATGGCGTATAGCGG-3’(SEQ ID NO:6)。

上述6条引物序列，组合成环介导等温扩增(LAMP)引物组，6条引物需要协调工作，且检测的目标为整个脑膜炎奈瑟菌种(不区分亚群，为通用鉴定的LAMP引物)。

本发明的另一方面是提供一种检测脑膜炎奈瑟氏菌的环介导等温扩增检测方法，使用本发明提供的环介导等温扩增引物组进行环介导等温扩增。

为了进一步优化上述的检测方法，本发明提供的技术方案还包括：

0.3mM的外引物F3和B3各0.12μL；2.4mM的内引物FIP和BIP各0.96μL；1mM的环引物LF和LB各0.4μL；2×反应缓冲液10μL；2μL的模板DNA，加灭菌纯化水至20μL体系。

上述环介导等温扩增检测反应条件为：60℃-65℃恒温50min。

优选地，上述环介导等温扩增检测反应条件为：65℃恒温50min。

上述的环介导等温扩增检测方法中，检测结果通过观察实时荧光PCR仪出峰时间。另一方面，上述的环介导等温扩增检测方法中，不需要荧光探针，采用染料法示出检测结果。

本发明另一方面还提供一种脑膜炎奈瑟氏菌环介导等温扩增检测试剂盒，脑膜炎奈瑟氏菌环介导等温扩增检测试剂盒中包含有本发明提供的环介导等温扩增引物组。

进一步的，所述脑膜炎奈瑟氏菌环介导等温扩增检测试剂盒中包含：0.3mM的外引物Nme2-F3-1和外引物Nme2-B3-1各0.12μL；2.4mM的内引物Nme2-FIP-1和内引物Nme2-BIP-1各0.96μL；1mM的环引物Nme2-LF-1和环引物Nme2-LB-1各0.4μL；2×反应缓冲液10μL；2μL的模板DNA，加灭菌水至20μL体系。进一步的，所述环介导等温扩增的检测反应条件为：60℃-65℃恒温50min。

本申请中所用的检测基因为CtrA基因，本基因全长在1367bp左右，引物设计区域在该基因的1-380bp之间。

以下序列为靶序列CtrA基因的部分序列，检测用的6条引物是在以下区域内进行设计的。

TTAATTAGTTAAATTATTAATACTGTTCGCGCCACTGGTAACCGGCGAGAACACAAACGACAAGAATTTCTGCACTTCAGCCAACGGCGCATTCGACACATACAATACATCTTTATTCTTCACAGGAAAGCGCTGCATAGAAAATAGCGAATGCGCATCAGCCATATTCACACGATATACCGTTGGAATCTCTGCCTCACTGCCATAACCTTGAGCAATCCATTTATCCTGACGTTCTGCCGGCAATTCCACCAATGGCGTATAGCGGAACACAAACACACCACGCGCATCAGAACGGCGATCTTGCAAACCGCCCATACGGCCAATGGCTTCAGAAAGCGATAAGCCTCT(SEQ ID NO:7)。

本发明提供了一种检测脑膜炎奈瑟氏菌的环介导等温扩增引物组和检测方法。使用环介导等温扩增(LAMP)技术在实时荧光PCR仪中实时检测样品中的脑膜炎奈瑟氏菌。本发明筛选到的引物灵敏度高、特异性强，建立的检测方法具有准确率高、检测时间短、结果可实时观测的优点，且操作简单，比其它PCR方法具有更高的特异性。1h内完成检测，能实现快速检测。同时，本发明首次设计、筛选到检测脑膜炎奈瑟氏菌环介导等温扩增引物组，并建立了脑膜炎奈瑟氏菌环介导等温扩增检测方法，填补了国内外在此检测领域的空白。

附图说明

图1a为对脑膜炎奈瑟氏菌质粒DNA采用本发明的引物组进行环介导等温扩增反应的实时荧光值与反应时间图(其中，模板DNA浓度为a：1000copies/μl)；

图1b为对脑膜炎奈瑟氏菌质粒DNA采用本发明的引物组进行环介导等温扩增反应的实时荧光值与反应时间图(其中，模板DNA浓度为b:500copies/μl)；

图1c为对脑膜炎奈瑟氏菌质粒DNA采用本发明的引物组进行环介导等温扩增反应的实时荧光值与反应时间图(其中，模板DNA浓度为c:100copies/μl)；

图2为采用本发明的引物组进行环介导等温扩增反应的实时荧光值与反应时间图，阴性对照。

图3为采用本发明的引物组进行环介导等温扩增反应的实时荧光值与反应时间图(其中，模板DNA浓度为b:500copies/μl，20次重复，平均Ct值：25.2min)；

图4为采用本发明提供的Nme2组环介导等温扩增引物组进行环介导等温扩增反应的实时荧光值与反应时间图(其中，模板DNA浓度为b:500copies/μl)；

图5为采用Nme190组环介导等温扩增引物组进行环介导等温扩增反应的实时荧光值与反应时间图(其中，模板DNA浓度为b:500copies/μl)；

图6为采用Nme31组环介导等温扩增引物组进行环介导等温扩增反应的实时荧光值与反应时间图(其中，模板DNA浓度为b:500copies/μl)；

图7为采用Nme517组环介导等温扩增引物组进行环介导等温扩增反应的实时荧光值与反应时间图(其中，模板DNA浓度为b:500copies/μl)；

图8为采用Nme1组环介导等温扩增引物组进行环介导等温扩增反应的实时荧光值与反应时间图(其中，模板DNA浓度为b:500copies/μl)。

具体实施方式

为了更易理解本发明的结构及所能达成的功能特征和优点，下文将本发明的较佳的实施例，并配合图式做详细说明。

图1a、图1b和图1c是不同浓度下的检测结果，每个浓度下有三次重复检测，是灵敏度实验。图1a和图1b中均有三条曲线，表示三次重复检测均显示为阳性，说明本发明提供的引物的灵敏度在该样品浓度下是稳定的。而图1c中50分钟内只有两条明显曲线，表示三次重复检测在50分钟内只出现两次阳性结果，说明本发明提供的引物的灵敏度在该样品浓度下，已经不稳定，且出峰时间不一致，间隔较大。

图2说明的是本发明提供的引物是否存在非特异扩增，图2中出峰的是阳性对照，指控本次反应是否存在问题，而未出峰的直线为阴性对照(所用模板为灭菌水)。图2检测结果说明本发明提供的引物不存在非特异扩增。

图4至图8中，图内的3条曲线表示每个浓度下分别做三次重复实验，来指控本次实验的可靠性。

本发明提供了一种检测脑膜炎奈瑟氏菌的环介导等温扩增引物组，所述环介导等温扩增引物组由下列引物组成：

外引物Nme2-F3-1：5’-TACATCTTTATTCTTCACAGGA-3’，

外引物Nme2-B3-1：5’-AAGATCGCCGTTCTGAT-3’，

内引物Nme2-FIP-1：

5’-TCAAGGTTATGGCAGTGAGGCACTGCATAGAAAATAGCGAATG-3’，

内引物Nme2-BIP-1：

5’-TCCATTTATCCTGACGTTCTGCCGGCGTGGTGTGTTTGTGT-3’，

环引物Nme2-LF-1：5’-CGGTATATCGTGTGAATATGGCTG-3’，

环引物Nme2-LB-1：5’-CACCAATGGCGTATAGCGG-3’。

同时本发明还提供了相应的环介导等温扩增检测方法和试剂盒，下面通过具体实施例对本发明进行详细和具体的介绍，以使更好的理解本发明，但是下述实施例并不限制本发明范围。

实施例1实验室检测方法的建立

1、引物的制备

所用引物序列由中国生工公司合成。针对靶序列SEQ ID NO:7设计6条引物，包括两条内引物(FIP和BIP)和两条外引物(F3和B3)和两条环引物(LF和LB)，所得引物组的核苷酸序列列于表1。

环介导等温扩增检测体系的具体配置为：0.3mM的外引物F3和B3各0.12μL；2.4mM的内引物FIP和BIP各0.96μL；1mM的环引物LF和LB各0.4μL；2×反应缓冲液10μL；2μL的模板DNA，加灭菌纯化水至20μL体系。

所述环介导等温扩增检测反应条件为：65℃恒温50min。

表1检测脑膜炎奈瑟氏菌的环介导等温扩增引物组中的引物信息

注：表1中的序列为DNA序列。

上述表1中，SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:4，SEQ ID NO:5，和SEQ ID NO:6组成一个引物组，简称为Nme2组环介导等温扩增引物组。上述表1中，SEQID NO:8，SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:10，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:12，和SEQ ID NO:13组成一个引物组，简称为Nme190组环介导等温扩增引物组。上述表1中，SEQ ID NO:14，SEQ IDNO:15，SEQ ID NO:16，SEQ ID NO:17，SEQ ID NO:18，和SEQ ID NO:19组成一个引物组，简称为Nme31组环介导等温扩增引物组。上述表1中，SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:21，SEQ IDNO:22，SEQ ID NO:23，SEQ ID NO:24，和SEQ ID NO:25组成一个引物组，简称为Nme517组环介导等温扩增引物组。上述表1中，SEQ ID NO:26，SEQ ID NO:27，SEQ ID NO:28，SEQ IDNO:29，SEQ ID NO:30，和SEQ ID NO:31组成一个引物组，简称为Nme1组环介导等温扩增引物组。

如图4、图5、图6、图7和图8所示，Nme2组环介导等温扩增引物组进行环介导等温扩增反应，出峰时间最快，即Nme2组环介导等温扩增引物组检测脑膜炎奈瑟氏菌的速度最快，性能最优异。

本发明选择Nme2组环介导等温扩增引物组用于检测脑膜炎奈瑟氏菌。

2、特异性试验

利用实施例1中得到的Nme2组环介导等温扩增引物组、反应体系和检测方法，通过对1株含脑膜炎奈瑟氏菌待检基因片段的质粒DNA和7种其他细菌菌种进行环介导等温扩增检测。检测结果见表2。

按下列原则判定环介导等温扩增反应结果。

结果判断为阳性反应的现象为：采用实时荧光PCR仪器进行扩增，观察实时荧光曲线，反应时间为50min，观察实时荧光曲线的出峰时间(Ct)。以灭菌纯化水做阴性对照试验，阴性对照试验结果应为阴性，如图2所示。

(1)若出现明显的S型曲线，并且Ct≤30，判定LAMP测试结果为阳性；

(2)若未出现明显的S型曲线，并且Ct＞45，判定LAMP测试结果为阴性；

(3)若30＜Ct≤45，出现或不出现明显的S型曲线，都判定LAMP测试结果为可疑，需要重新实验；

(4)对可疑结果重新实验后，若Ct≤45，出现明显的S型曲线，判定LAMP测试结果为阳性，否则判断为阴性。

对其他非脑膜炎奈瑟氏菌，在反应的50分钟(min)时间内未检测出(无实时荧光曲线)，显示为阴性反应。表2检测结果表明本发明提供的检测脑膜炎奈瑟氏菌的环介导等温扩增引物组的特异性强。

表2、试验用菌种及环介导等温扩增检测结果

注：CICC是中国工业微生物菌种保藏管理中心；CGMCC是中国普通微生物菌种保藏管理中心；ATCC是美国ATCC保藏管理中心。

3、灵敏度试验

将含脑膜炎奈瑟氏菌待检基因片段的质粒菌液接种于含氨苄青霉素的LB液体培养基中(浓度比为：1:1000)，正常培养16h后，取含氨苄青霉素的LB培养的菌液1mL，按常规方法提取质粒DNA(采用康为世纪质粒DNA小提试剂盒)，采用NanoDrop 2000C超微量分光光度计测定质粒DNA浓度及纯度。同时，使用Invitrogen Qubit2.0荧光定量仪及InvitrogenQubit定量检测试剂盒对提取后的核酸DNA进行定量，并计算拷贝数。DNA模板拷贝数分别为a：1000copies/μl，b:500copies/μl，c:100copies/μl。最后使用本发明的环介导等温扩增引物组及检测方法对上述DNA模板进行测定。

当含脑膜炎奈瑟氏菌待检基因片段的质粒DNA拷贝数为500copies/μl时，反应阳性结果判读时间小于30min(实测Ct值＝25.2min，如图3所示)。

因此，本发明所采用的环介导等温扩增引物组及检测方法定性试验的检测灵敏度可以达到500copies/μL(DNA浓度)，即检测下限为500个拷贝每反应体系。本发明提供的检测脑膜炎奈瑟氏菌的环介导等温扩增引物组的灵敏度高、特异性强，能快速、准确的检测脑膜炎奈瑟氏菌的存在。

以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。

序列表

<110> 首都医科大学附属北京天坛医院

<120> 一种检测脑膜炎奈瑟氏菌的环介导等温扩增引物组及检测方法

<130> 190067

<160> 31

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 22

<212> DNA

<213> human synthetic

<400> 1

tacatcttta ttcttcacag ga 22

<210> 2

<211> 17

<212> DNA

<213> human synthetic

<400> 2

aagatcgccg ttctgat 17

<210> 3

<211> 43

<212> DNA

<213> human synthetic

<400> 3

tcaaggttat ggcagtgagg cactgcatag aaaatagcga atg 43

<210> 4

<211> 41

<212> DNA

<213> human synthetic

<400> 4

tccatttatc ctgacgttct gccggcgtgg tgtgtttgtg t 41

<210> 5

<211> 24

<212> DNA

<213> human synthetic

<400> 5

cggtatatcg tgtgaatatg gctg 24

<210> 6

<211> 19

<212> DNA

<213> human synthetic

<400> 6

caccaatggc gtatagcgg 19

<210> 7

<211> 351

<212> DNA

<213> human synthetic

<400> 7

ttaattagtt aaattattaa tactgttcgc gccactggta accggcgaga acacaaacga 60

caagaatttc tgcacttcag ccaacggcgc attcgacaca tacaatacat ctttattctt 120

cacaggaaag cgctgcatag aaaatagcga atgcgcatca gccatattca cacgatatac 180

cgttggaatc tctgcctcac tgccataacc ttgagcaatc catttatcct gacgttctgc 240

cggcaattcc accaatggcg tatagcggaa cacaaacaca ccacgcgcat cagaacggcg 300

atcttgcaaa ccgcccatac ggccaatggc ttcagaaagc gataagcctc t 351

<210> 8

<211> 19

<212> DNA

<213> human synthetic

<400> 8

agaaagcgat aagcctctg 19

<210> 9

<211> 17

<212> DNA

<213> human synthetic

<400> 9

atgtgcagct gacacgt 17

<210> 10

<211> 46

<212> DNA

<213> human synthetic

<400> 10

tggttaccat gattaccaat ccctacgatt tcttgtgttc tcccca 46

<210> 11

<211> 41

<212> DNA

<213> human synthetic

<400> 11

catcaccgcg acgcagcaca atgtagtacg aactgttgcc t 41

<210> 12

<211> 21

<212> DNA

<213> human synthetic

<400> 12

acctttacgt ctatgggtgc g 21

<210> 13

<211> 24

<212> DNA

<213> human synthetic

<400> 13

cgcggatttg caactaaatc ttcc 24

<210> 14

<211> 18

<212> DNA

<213> human synthetic

<400> 14

cgttggaatc tctgcctc 18

<210> 15

<211> 19

<212> DNA

<213> human synthetic

<400> 15

ggagaacaca agaaatcgg 19

<210> 16

<211> 39

<212> DNA

<213> human synthetic

<400> 16

cgccattggt ggaattgccg actgccataa ccttgagca 39

<210> 17

<211> 41

<212> DNA

<213> human synthetic

<400> 17

cggaacacaa acacaccacg ccttatcgct ttctgaagcc a 41

<210> 18

<211> 23

<212> DNA

<213> human synthetic

<400> 18

gcagaacgtc aggataaatg gat 23

<210> 19

<211> 19

<212> DNA

<213> human synthetic

<400> 19

gcgatcttgc aaaccgccc 19

<210> 20

<211> 19

<212> DNA

<213> human synthetic

<400> 20

agaaagcgat aagcctctg 19

<210> 21

<211> 17

<212> DNA

<213> human synthetic

<400> 21

atgtgcagct gacacgt 17

<210> 22

<211> 46

<212> DNA

<213> human synthetic

<400> 22

tggttaccat gattaccaat ccctacgatt tcttgtgttc tcccca 46

<210> 23

<211> 41

<212> DNA

<213> human synthetic

<400> 23

catcaccgcg acgcagcaag gcaatgtagt acgaactgtt g 41

<210> 24

<211> 21

<212> DNA

<213> human synthetic

<400> 24

acctttacgt ctatgggtgc g 21

<210> 25

<211> 25

<212> DNA

<213> human synthetic

<400> 25

tcgcggattt gcaactaaat cttcc 25

<210> 26

<211> 15

<212> DNA

<213> human synthetic

<400> 26

cacttcagcc aacgg 15

<210> 27

<211> 23

<212> DNA

<213> human synthetic

<400> 27

gcattcgcta ttttctatgc agc 23

<210> 28

<211> 47

<212> DNA

<213> human synthetic

<400> 28

cggtatatcg tgtgaatatg gctggcattc gacacataca atacatc 47

<210> 29

<211> 18

<212> DNA

<213> human synthetic

<400> 29

cgtggtgtgt ttgtgttc 18

<210> 30

<211> 24

<212> DNA

<213> human synthetic

<400> 30

caatccattt atcctgacgt tctg 24

<210> 31

<211> 39

<212> DNA

<213> human synthetic

<400> 31

gcctcactgc cataaccttg acgctatacg ccattggtg 39

Claims

1.一种检测脑膜炎奈瑟氏菌的环介导等温扩增引物组，其特征在于，所述的引物组包括下述引物：

外引物Nme2-F3-1：5’-TACATCTTTATTCTTCACAGGA-3’，

外引物Nme2-B3-1：5’-AAGATCGCCGTTCTGAT-3’，

内引物Nme2-FIP-1：

5’-TCAAGGTTATGGCAGTGAGGCACTGCATAGAAAATAGCGAATG-3’，

内引物Nme2-BIP-1：

5’-TCCATTTATCCTGACGTTCTGCCGGCGTGGTGTGTTTGTGT-3’，

环引物Nme2-LF-1：5’-CGGTATATCGTGTGAATATGGCTG-3’，

环引物Nme2-LB-1：5’-CACCAATGGCGTATAGCGG-3’。

2.一种脑膜炎奈瑟氏菌环介导等温扩增检测试剂盒，其特征在于，所述脑膜炎奈瑟氏菌环介导等温扩增检测试剂盒中包含有权利要求1所述的环介导等温扩增引物组。

3.根据权利要求2所述的脑膜炎奈瑟氏菌环介导等温扩增检测试剂盒，其特征在于，所述脑膜炎奈瑟氏菌环介导等温扩增检测试剂盒中包含：0.3mM的外引物Nme2-F3-1和外引物Nme2-B3-1各0.12μL；2.4mM的内引物Nme2-FIP-1和内引物Nme2-BIP-1各0.96μL；1mM的环引物Nme2-LF-1和环引物Nme2-LB-1各0.4μL；2×反应缓冲液10μL；2μL的模板DNA，加灭菌水至20μL体系。

4.根据权利要求3所述的脑膜炎奈瑟氏菌环介导等温扩增检测试剂盒，其特征在于，所述环介导等温扩增的检测反应条件为：60℃-65℃恒温50min。