CN110638829A - 一种高原儿茶酸负载香菇菌多糖复合物的制备方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物化学技术领域，具体涉及一种高原儿茶酸负载香菇菌多糖复合物的制备方法及应用。高原儿茶酸负载香菇菌多糖复合物包括按重量百分含量组分的原料：香菇菌多糖，含量80‑99％；高原儿茶酸，含量1％‑20％。本发明的高原儿茶酸负载香菇菌多糖复合物制备过程，可以使得高原儿茶酸的稳定性得到很大提高，而且在化妆品中实现缓慢释放。
Description
技术领域
本发明属于生物化学技术领域，具体涉及一种高原儿茶酸负载香菇菌多糖复合物的制备方法及应用。
背景技术
香菇菌多糖，它既是水溶性的，又是电中性的，因此更加适合于化妆品的应用，其拥有优异的抗衰老功效，能够抚平细小皱纹，改善皮肤纹理度。赋予了产品良好的透皮吸收性能，可作为活性成份的释放载体，给予皮肤如丝绸般滋润光滑的触感。
高原儿茶酸，又称3,4-二羟基苯乙酸,在植物中以游离或聚合的形式存在,是酚酸类主要成分之一。它还是重要的生化检测试剂,在生物化学方面的研究和应用一直非常活跃[1]。具有此结构的化合物显示出较多的生理活性,如抗氧化、抗菌、抗病毒、保肝、治疗中枢神经性疾病、抑制环氧酶及酯氧酶的活性等。
痤疮等皮肤问题可由炎症引起，通过抑制炎症并改善皮肤状态可有效改善痤疮、皮肤衰老等问题。在护肤产品中，往往需要搭配多种来产生协同作用起到抑制炎症同时改善皮肤。
发明内容
本公开的一方面解决的一个技术问题是提供一种新型高原儿茶酸负载香菇菌多糖复合物的制备方法及应用，目的在于融合香菇菌多糖和高原儿茶酸，使二者协同作用用于护肤产品及药物的研发。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案，本发明高原儿茶酸负载香菇菌多糖复合物，包括按重量百分含量组分的原料：香菇菌多糖，含量80-99％；高原儿茶酸，含量1％-20％。
进一步的，所述香菇菌多糖，又称香菇多糖，Lentinan，CAS:37339-90-5，分子量：1152.9995，灰白色粉末。
进一步的，所述高原儿茶酸，又称3，4-二羟基苯乙酸，CAS:102-32-9，淡灰色粉末。
一种上述的高原儿茶酸负载香菇菌多糖复合物的制备方法(生物发酵后提取)，包括以下步骤：
以新鲜绿茶茶叶为主，蔗糖、蛋白胨、磷酸氢钾等为辅，按照茶叶与水重量比为1:1的比例使茶叶和水充分混匀；在121℃高温条件下充分灭菌20-30 分钟后得到茶叶培养基；将所述茶叶培养基与香菇菌丝体共培养；对香菇菌丝体的发酵产物水提醇沉分离提取，最终精制得到香菇菌多糖复合物。
进一步的，所述香菇菌的品种不限于某单一品种的香菇菌。
一种上述的高原儿茶酸负载香菇菌多糖复合物的制备方法(化学合成路线)，包括以下步骤：
高原儿茶酸与香菇菌多糖以相应的比例混合在去离子水中；加入与高原儿茶酸等当量的DCC(二环己基碳二亚胺)作为缩合剂；在室温下搅拌反应24h；透析24小时，除去多余DCC以及未反应的高原儿茶酸；冷冻干燥，最终得到相应的香菇菌多糖复合物。
上述两种制备方法得到香菇菌多糖复合物为相同产物。
进一步的，主要以水性糊剂或凝胶或液体的形式，例如水性液体的形式。
一种高原儿茶酸负载香菇菌多糖复合物的应用，将高原儿茶酸负载香菇菌多糖复合物配制为含水洗液、油包水或水包油乳液、油或油.醇洗液、阴离子或非离子两亲脂质的囊状分散体、含水凝胶、水.醇凝胶、醇凝胶或油.醇凝胶、固体棒或气溶胶。
一种高原儿茶酸负载香菇菌多糖复合物的应用，将高原儿茶酸负载香菇菌多糖复合物用于抗炎、促成纤维细胞增殖、护肤的制剂。
进一步的，所述剂型为临床上可接受的任一剂型。
进一步的，所述高原儿茶酸负载香菇菌多糖复合物为所述抗炎、促成纤维细胞增殖或护肤的唯一活性成分，或该复合物与其他物质一起制备所述抗炎、促成纤维细胞增殖或护肤的制剂。
本发明与现有技术相比，本发明的高原儿茶酸负载香菇菌多糖复合物制备过程，可以使得高原儿茶酸的稳定性得到很大提高，而且在化妆品中实现缓慢释放。
附图说明
图1是根据本公开的一个方面的DT001对炎症因子TNF-α和IL-1β的影响,DT001：高原儿茶酸负载香菇菌多糖复合物；LPS：脂多糖；GK2：甘草酸二钾；Drag：红没药醇；Hydr：氢化可的松(n＝3，**P<0.01)；
图2是根据本公开的一个方面的DT001对小鼠足趾肿胀的影响,DT001：高原儿茶酸负载香菇菌多糖复合物；LPS：脂多糖；GK2：甘草酸二钾；Drag：红没药醇；Hydr：氢化可的松(n＝3，**P<0.01)；
图3是根据本公开的一个方面的DT001对小鼠足趾肿胀的影响，DT001：高原儿茶酸负载香菇菌多糖复合物；LPS：脂多糖；GK2：甘草酸二钾；Drag：红没药醇；Hydr：氢化可的松(n＝3，**P<0.01)。
具体实施方式
下面将结合具体的实施方案对本发明进行进一步的解释，但并不局限本发明。
下述实施例中，如无特殊说明，所用方法为常规方法，所用试剂都来源于市售商品。
实施例1.高原儿茶酸负载香菇菌多糖复合物对炎症因子TNF-α和IL-1 β的影响检测
检测方法：
小鼠巨噬细胞RAW264.7接种于12孔板内，37℃，5％CO2培养箱培养 24h后，加入40mg/L脂多糖(LPS)作用4h诱导炎症反应，适当浓度的DT001、 GK2、Drag和Hydr于LPS加入前2h加入。LPS作用4h后，收集细胞上清，按照ELISA试剂盒说明书测定TNF-α和IL-1β的含量。
结果如图1所示。
结论：
DT001显著抑制LPS诱导引起的炎症因子TNF-α和IL-1β含量的上升，且效果显著优于阳性药甘草酸二钾和红没药醇，其抑炎效果与糖皮质激素氢化可的松效果相当。
实施例2.对小鼠足趾肿胀的影响检测
检测方法：
1％羧甲基纤维素钠配药，使成凝胶状，并在每鼠右下足趾正反两面均匀涂抹药物。半小时后，每鼠左右两足趾均皮下注射1％角叉菜胶约0.025mL，空白对照组小鼠不做处理。5h后脱颈处死，沿踝关节减下左右两足，称重，计算肿胀度及肿胀率，并做统计分析。
肿胀度＝炎症组足趾重量-空白组足趾重量
结果如图2所示。
结论：
DT001显著抑制角叉菜胶对小鼠足趾造成的肿胀，且效果显著优于阳性药甘草酸二钾和红没药醇，其抑炎效果略优于糖皮质激素氢化可的松。
实施例3.DT001对成纤维细胞增殖影响的检测
护肤品对抗炎的治疗过程中还涉及皮肤损伤处的修复，而成纤维细胞的增殖是主要的表现形式。本部分实验检测DT001及三种阳性药物甘草酸二钾 (GK2)、红没药醇(Drag)和氢化可的松(Hydr)对成纤维细胞NIH-3T3 的增殖影响。实验方法及结果如下：
检测方法：
小鼠成纤维细胞NIH-3T3以5000cells/孔密度接种于96孔板内，37℃， 5％CO2培养箱培养12h左右待细胞贴壁，适当浓度的DT001、GK2、Drag 和Hydr加入到对应孔内，同时设一组空白对照，每组5个重复。继续培养48 h后，每空加25μL MTT并继续孵育4h。随后DMSO溶解甲瓒并用酶标仪检测OD490吸光值，对数据做统计分析。
结果如图3所示。
结论：
DT001显著促进成纤维细胞增殖，且效果优于阳性药甘草酸二钾和红没药醇，其抑炎效果与糖皮质激素氢化可的松效果相当。
实施例4.DT001对皮肤改善情况的检测
检测方法：
招募30名志愿者(其中15男，15女)，随机分为5组(对照、DT001、 GK2、Drag、Hydr)，其中每组男女各3人。每次使用时先用湿巾或水洗将右手手腕内侧清理干净，随后护肤品均匀擦拭于右手手腕内侧部位，每天早晚各一次，连续使用4周共28天。分别于第0、7、14、28天使用DermaLab 仪器检测TEWL(经表皮水流失)、Ultrasound(超声)、Elasticity(弹性) 和Skin Color(肤色)共四项指标，每次检测时志愿者右手手腕内侧湿巾擦拭干净并晾晒20分钟左右至晾干后开始检测。仪器所在房间不通风，无阳光直射，室温保持在24-25℃，湿度保持在40％。最后对得到的数据做统计分析。
结果：
表1.对照组皮肤改善情况：
表2.DT001对皮肤的改善情况(DT001：高原儿茶酸负载香菇菌多糖复合物)：
表3.甘草酸二钾对皮肤的改善情况(GK2：甘草酸二钾)：
表4.红没药醇对皮肤的改善情况(Drag：红没药醇)：
表5.氢化可的松对皮肤的改善情况(Hydr：氢化可的松)：
结论：
DT001可有效改善皮肤的保水性能，提高皮层胶原蛋白含量，改善皮肤弹性。对保水性能的最高改善率优于红没药醇，与甘草酸二钾和氢化可的松效果相当；对胶原蛋白含量的改善优于三种阳性药；对皮肤弹性的最高改善率优于氢化可的松，与甘草酸二钾和红没药醇效果相当。与对照组比较，DT001 对皮肤的改善效果优于甘草酸二钾、红没药醇和氢化可的松。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (12)
1.高原儿茶酸负载香菇菌多糖复合物，其特征在于：包括按重量百分含量组分的原料：
香菇菌多糖，含量80-99％；
高原儿茶酸，含量1％-20％。
2.根据权利要求1所述的高原儿茶酸负载香菇菌多糖复合物，其特征在于：所述香菇菌多糖，又称香菇多糖，Lentinan，CAS:37339-90-5，分子量：1152.9995，灰白色粉末。
3.根据权利要求1所述的高原儿茶酸负载香菇菌多糖复合物，其特征在于：所述高原儿茶酸，又称3，4-二羟基苯乙酸，CAS:102-32-9，淡灰色粉末。
4.一种根据权利要求1～3任意一项所述的高原儿茶酸负载香菇菌多糖复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
以新鲜绿茶茶叶为主，蔗糖、蛋白胨、磷酸氢钾等为辅，按照茶叶与水重量比为1:1的比例使茶叶和水充分混匀；在121℃高温条件下充分灭菌20-30分钟后得到茶叶培养基；将所述茶叶培养基与香菇菌丝体共培养；对香菇菌丝体的发酵产物水提醇沉分离提取，最终精制得到香菇菌多糖复合物。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述香菇菌的品种不限于某单一品种的香菇菌。
6.一种根据权利要求1～3任意一项所述的高原儿茶酸负载香菇菌多糖复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
高原儿茶酸与香菇菌多糖以相应的比例混合在去离子水中；加入与高原儿茶酸等当量的DCC(二环己基碳二亚胺)作为缩合剂；在室温下搅拌反应24h；透析24小时，除去多余DCC以及未反应的高原儿茶酸；冷冻干燥，最终得到相应的香菇菌多糖复合物。
7.根据权利要求4制备的复合物与权利要求6得到的复合物为相同产物。
8.根据权利要求1所述的高原儿茶酸负载香菇菌多糖复合物，其特征在于：主要以水性糊剂或凝胶或液体的形式，例如水性液体的形式。
9.一种高原儿茶酸负载香菇菌多糖复合物的应用，其特征在于：将高原儿茶酸负载香菇菌多糖复合物配制为含水洗液、油包水或水包油乳液、油或油.醇洗液、阴离子或非离子两亲脂质的囊状分散体、含水凝胶、水.醇凝胶、醇凝胶或油.醇凝胶、固体棒或气溶胶。
10.一种高原儿茶酸负载香菇菌多糖复合物的应用，其特征在于：将高原儿茶酸负载香菇菌多糖复合物用于抗炎、促成纤维细胞增殖、护肤的制剂。
11.根据权利要求10所述的应用，其特征在于：所述剂型为临床上可接受的任一剂型。
12.根据权利要求10所述的应用，其特征在于：所述高原儿茶酸负载香菇菌多糖复合物为所述抗炎、促成纤维细胞增殖或护肤的唯一活性成分，或该复合物与其他物质一起制备所述抗炎、促成纤维细胞增殖或护肤的制剂。
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