CN110628707A - 一种提高哺乳动物胚胎体外存活率的培养方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种提高哺乳动物胚胎体外存活率的培养方法，包括以下步骤：（1）从母羊身上取得羊卵母细胞置入成熟培养液内，在培养箱内培养20‑24小时，获得成熟的羊卵母细胞；（2）将成熟的羊卵母细胞与精子一同放入受精培养液中，在培养箱内培养18‑24小时，进行受精，获得早期羊胚胎；（3）将受精后的羊胚胎用TCM199培养液进行反复冲洗，之后放入羊胚胎体外培养液中，并置入培养箱中进行胚胎体外培养，该培养箱内温度维持在38‑39℃，气体浓度维持在5%CO2；其中，上述培养箱包括培养室、室门、与该培养室相连通的气体浓度调节室；所述培养室内具有多个培养仓，多个培养仓内分别上设有培养基放置架和隔断装置。本发明的培养箱内环境的稳定性，保障胚胎的存活率。

Description

一种提高哺乳动物胚胎体外存活率的培养方法

技术领域

本发明属于羊胚胎体外培养技术领域，尤其是涉及一种提高哺乳动物胚胎体外存活率的培养方法。

背景技术

胎体外培养是指把胚胎放在培养箱中，培养箱中保持恒定的温度和恒定浓度的二氧化碳，模拟子宫的生理环境，培养基中的胚胎与之互相作用和交换物质，进而实现胚胎生长。现有的培养方法中，胚胎放入至培养箱内后，操作人员需要经常对胚胎进行观察或者进行操作，此时均需要打开培养箱的箱门，进而在操作过程中，箱体内的环境将与外界空气进行气体交换，使得箱体内的环境受到影响而发生变化，难以保证培养箱内始终维持在稳定的温度和气氛环境内，胚胎易出现损伤或死亡的情况，胚胎存活率低。

发明内容

本发明为了克服现有技术的不足，提供一种存活率高的提高哺乳动物胚胎体外存活率的培养方法。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：一种提高哺乳动物胚胎体外存活率的培养方法，包括以下步骤：

（1）从母羊身上取得羊卵母细胞置入成熟培养液内，在培养箱内培养 20-24 小时，获得成熟的羊卵母细胞；

（2）将成熟的羊卵母细胞与精子一同放入受精培养液中，在培养箱内培养18-24小时，进行受精，获得早期羊胚胎；

（3）将受精后的羊胚胎用TCM199培养液进行反复冲洗，之后放入羊胚胎体外培养液中，并置入培养箱中进行胚胎体外培养，该培养箱内温度维持在38-39℃，气体浓度维持在5%CO2；

其中，上述培养箱包括培养室、与该培养室相配合的室门、与该培养室相连通的气体浓度调节室；所述培养室内具有多个培养仓，多个培养仓内分别上设有培养基放置架和隔断装置，所述培养基放置架可插入至培养仓内，且插入后培养基放置架与培养仓的进口处密封配合；上述培养步骤过程中需要对培养箱内的不同位置上胚胎进行观察时，操作者可将培养基放置架由独立的培养仓中抽出，并且培养基放置架被抽出的过程中，所述隔断装置将隔断对应培养仓与外界的连通。

本发明中培养箱内的各个培养仓为单独设置，且当培养仓内的放置架被向外抽出时，隔断装置始终能够隔断培养仓与外界的连通，进而在对胚胎进行观察时，仅被抽出的放置架上的培养基会短暂的与外界空气接触，而其余位置的培养基均不会与外界空气接触，且通过隔断装置进行隔断后，外界空气也不会由打开的培养仓进入至整个气体浓度调节室内，同样避免其他位置的培养仓受到外界环境的影响，提升培养箱内环境的稳定性，保障胚胎的存活率；多个培养仓均与气体浓度调节室相连通，进而气体浓度调节室内调节完成后的气体能够直接输送至培养仓内，进而无需针对每个培养仓单独设置气体浓度检测器和进气管道，结构更为简单，气体调节更为快速。

步骤（1）中培养箱内的温度维持在38-39℃，气体浓度维持在5%CO2；该种温度和气体浓度下，胚胎处于最为适合生产的环境下，生长速度快，存活率高。

上述步骤（2）中的受精培养液为含 3% 羊血清的 TCM199 培养液。

所述隔断装置包括可前后动作的设于培养仓内的移动板、设于移动板外侧壁上与培养仓内壁密封配合的一圈密封件、设于移动板上的单向出气部件和单向进气部件、导通部件及用于实现培养基放置架和移动板之间的连接配合的连接结构；当培养基放置架插入至培养仓内时，培养基放置架抵触移动板向后移动，同时单向进气部件控制气体浓度调节室内的气体单向进入至培养仓内；当移动板移动至最后端位置时，连接结构实现培养基放置架和移动板之间的连接配合，同时导通部件实现培养仓与气体浓度调节室的直接连通；当需要对培养仓内的培养培养情况进行观察或需要取出时，将培养基放置架向外拔取，培养基放置架通过连接结构克服密封件与培养仓之间的摩擦力带动移动板向前移动，同时单向出气部件控制培养仓内的气体单向进入至气体浓度调节室内；当移动板移动至最前端位置时，培养基放置架伸出至培养仓外，且移动板始终隔断培养仓内部与外界的连通；上述结构下，当放置架被向外抽出时，为单向出气部件控制培养仓内的气体进入至箱体内，进而放置架抽出过程中即使培养仓与外界是连通状态的，但原先培养仓内的气体还是会优先被输送回箱体内，外界空气也仅会有部分混入，极大程度的减小了培养仓在打开时外界气体进入箱体内的可能，进一步降低箱体内环境稳定性受到的影响；而在观察完毕或操作完毕将放置架推回至培养仓内的过程中，由于箱体内的气体受到挤压而压强增大，进而会有箱体内向培养仓内喷出，将原本存在于培养仓内的外界空气向外挤出，从而当放置架完全插回至培养仓内时，培养仓内留存的外界空气也将很少，从而进一步降低箱体内环境稳定性受到的影响，降低气体浓度调节室对气体浓度调整的耗时，减小箱体内环境受到影响的时间，提升胚胎的成活率。

所述单向出气部件包括设于移动板上的两圆形开口、由圆形开口向移动板后端面延伸形成的第一接头及设于第一接头上的单向阀；所述单向进气部件包括设于移动板上的两通孔、由通孔向移动板前端面延伸形成的第二接头及设于第二接头上的单向阀；结构简单，便于实现，加工效率高。

所述培养基放置架包括横截面为U型结构的架体、固连于架体一端上的盖板及设于盖板上的拉手；所述连接结构包括设于培养仓进口端上的固定座、设于固定座上供所述架体穿过的方形开口、设于移动板上供架体尾端插入的U型槽、设于架体尾端上的多个间隔均匀分布的U型凸棱、设于U型槽内的供所述凸棱插入的开口槽、固设于架体上的L型插接件、设于插接件尾端上的三角形插接头、设于移动板上供所述插接头插入的插接槽、可左右移动的设于该插接槽内的限位块、设于限位块侧壁与插接槽内壁之间的弹簧及设于限位块上与所述插接头相配合的第一倾斜面和第二倾斜面；所述弹簧的一端与限位块固连，另一端与插接槽的内壁固连；所述第一倾斜面位于限位块的前端面上，第二倾斜面位于限位块的后端面上，且该第一倾斜面的倾斜角度大于第二倾斜面的倾斜角度；上述结构下，当架体插入培养仓内时，架体端部插入至U型槽内，并且推动移动板向后移动，带移动板移动至无法再后移的位置后，架体向后推动的力将驱动架体端部更加深入的插入至U型槽内，进而使得凸棱插入至开口槽内，插接头则顺着第一倾斜面向插接槽内滑动，克服弹簧的弹力将限位块向后顶动，使得插接头插入至插接槽内，之后限位块在弹簧的作用下回弹至原位；进而当架体向外抽出时，凸轮与开口槽、插接头与限位块之间同时避免架体与移动板之间的牢固连接，保证即使移动板上的密封件与培养仓内壁之间因为密封配合而存在较大摩擦力的情况下，架体与移动板也不会直接分离，保证架体始终带动移动板向外移动；且由于第二倾斜面的斜度小于第一倾斜面的斜度，进而在正常拉动下，插接头要沿第二倾斜面滑动并顶动限位块向后移动相较第一倾斜面要困难很多，保证插接头能够快速的插入插接槽内，但不会很容易的直接由插接槽内拔出，但第二倾斜面还是能够保证插接头顶动限位块移动，进而实现插接头同样能够自动向外拔出，无需另外设置结构驱动限位块动作以使得插接头能够向外拔出；设置了固定座，在架体进行插入时，固定座能够对架体起到支撑的作用，而由于插入是架体尾端也已经直接部分插入至U型槽内，进而移动板和固定座将构成对架体的两点支撑，进而架体能够稳定的插入至培养仓内，培养仓内壁上无需设置导轨或滑槽等结构对架体进行定位导向，形成保证培养仓内壁的平整度，保证移动板与培养仓之间的密封配合更为良好；再者，由于固定座的设置，使得架体在插入至培养仓内后能够维持在架空的状态上，使得架体各处的环境状态更为均匀稳定，对架体上的胚胎存货更为有益。

所述架体插入至培养仓内时，该架体下表面与培养仓底面之间具有间距，该架体上间隔均匀的分布有多个导气孔；导气孔能够保证被架体分隔的上下腔室能够相互导通，且气体流动快速，保证培养仓内的环境能够快速达到稳定状态，调节效率高。

所述导通部件包括沿长度方向间隔分布于移动板上的多个条形开口、设于移动板后侧且可相对移动板往复移动的活动件、设于活动件沿长度方向间隔分布于移动板上的多个条形导通口、设于移动板上供活动件移动的滑轨、与活动件相配合的复位组件及固设于培养仓内的驱动部；所述架体推动移动板移动至最后端位置时，驱动部驱动活动件向远离驱动部的位置移动，实现条形开口和条形导通口之间的连通；该种结构下，当架体被向后推动至驱动部所在的位置后，驱动部将限制架体的后移趋势，进而施加在架体手上的作用力将会使得活动件沿驱动件的倾斜面滑动，并且克服复位组件的作用而向后移动，使得条形开口和条形导通口相互重叠，进而实现培养仓与气体浓度调节室的连通，实现自动连通，效率高，培养仓内环境调节快速；且当架体向外移动时，活动件将在复位部件的作用下实现快速复位，保障移动板的隔断效果；且由于移动板上设置的为多个条形导通口，导通后的面积大，培养仓内与气体浓度调节室内的气体混合快速，进一步提升了培养仓内气体浓度回升至指定状态的速度，降低胚胎在不符合规格的环境中的时间，进一步提升胚胎的存活率。

所述气体浓度调节室内设有用于对气体均匀度进行调节的循环装置，该循环装置包括设于气体浓度调节室内的第一分隔板和第二分隔板、设于第一分隔板上的多个风机及设于第二分隔板上用于将气流引导至培养仓内的引流部件，所述第一分隔板和第二分隔板相互连接，该第一分隔板和第二分隔板将气体浓度调节室分隔为第一腔室和第二腔室，该第一腔室与所述培养仓相连通；该种结构下，保证箱体内的气体浓度能够快速实现稳定均匀的状态，调整快速；且通过引流部件的引流，使得培养仓内的气体也能够实现快速混合，避免了培养仓内因为空间较小而使得其内气体难以流通的情况，保证培养仓内的气体同样能够与气体浓度调节室内的气体进行混合，从而调节整体环境。

本发明培养过程中的培养箱内各个培养仓为单独设置，且当培养仓内的放置架被向外抽出时，可通过隔断装置进行隔断后，外界空气也不会由打开的培养仓进入至整个气体浓度调节室内，同样避免其他位置的培养仓受到外界环境的影响，提升培养箱内环境的稳定性，保障胚胎的存活率。

附图说明

图1为本发明的结构示意图。

图2为本发明的正视图。

图3为图2中沿A-A线的剖视图。

图4为本发明中放置架与隔断装置的配合示意图一。

图5为本发明中放置架与隔断装置的配合示意图二。

图6为图5的正视图。

图7为图6中沿B-B线的剖视图。

图8为图7中的局部放大图。

图9为图8中的放大图。

图10为本发明中气体浓度调节室的纵向剖面示意图。

图11为本发明中气体浓度调节室的横向剖面示意图。

图12为图10中B处的放大图。

具体实施方式

实施例1

一种提高哺乳动物胚胎体外存活率的培养方法，包括以下步骤：

（1）从母羊身上取得羊卵母细胞置入成熟培养液内，在培养箱内培养 20小时，获得成熟的羊卵母细胞；其中，成熟培养液为现有技术，可根据实际需要选择，不做赘述；

（2）将成熟的羊卵母细胞与精子一同放入受精培养液中，在培养箱内培养18小时，进行受精，获得早期羊胚胎；培养箱内的温度维持在38℃，气体浓度维持在5%CO2；其中，受精培养液为含 3% 羊血清的 TCM199 培养液；

（3）将受精后的羊胚胎用TCM199培养液进行反复冲洗，之后放入羊胚胎体外培养液中，并置入培养箱中进行胚胎体外培养，该培养箱内温度维持在38℃，气体浓度维持在5%CO2；其中，上述培养液为TCM199培养液；

如图1-12所示，上述各个步骤中提及的培养箱为同种培养箱，该培养箱包括培养室1、与该培养室相配合的室门2、与该培养室相连通的气体浓度调节室3；室门2可相对培养室进行翻动，优选的，所述室门2上分布有多个仓门21，多个仓门21的位置分别对应于多个培养仓11设置；进而在仅需要对单个培养仓内的胚胎进行观察或操作时，只需要打开对应位置上的仓门21即可，无需将整个室门2打开，避免箱体内部热量的过度丧失；所述培养室1内具有多个培养仓11，多个培养仓内分别上设有培养基放置架4和隔断装置，所述培养基放置架4可插入至培养仓11内，且插入后培养基放置架4与培养仓11的进口处密封配合；上述培养步骤过程中需要对培养箱内的不同位置上胚胎进行观察时，操作者可将培养基放置架4由独立的培养仓11中抽出，并且培养基放置架4被抽出的过程中，所述隔断装置将隔断对应培养仓11与外界的连通；所述培养室1内部为中空设置形成围设于所述培养仓外的水浴腔12，该水浴腔内填充热水，对培养仓进行保温；水浴腔12的热水可为注入，也可为水浴腔12内的加热管加热得到，其原理为现有技术，结构不再赘述；优选的，培养室1外还罩设有一个隔温罩13，隔温罩与培养室1之间的空间可进行抽真空或填充隔温棉。

具体的，所述隔断装置包括可前后动作的设于培养仓内的移动板51、设于移动板外侧壁上与培养仓内壁密封配合的一圈密封件52、设于移动板上的单向出气部件和单向进气部件、导通部件及用于实现培养基放置架和移动板之间的连接配合的连接结构；当培养基放置架4插入至培养仓11内时，培养基放置架4抵触移动板51向后移动，同时单向进气部件控制气体浓度调节室内的气体单向进入至培养仓内；当移动板51移动至最后端位置时，连接结构实现培养基放置架4和移动板51之间的连接配合，同时导通部件实现培养仓11与气体浓度调节室3的直接连通；当需要对培养仓11内的培养培养情况进行观察或需要取出时，将培养基放置架4向外拔取，培养基放置架4通过连接结构克服密封件52与培养仓11之间的摩擦力带动移动板51向前移动，同时单向出气部件控制培养仓11内的气体单向进入至气体浓度调节室3内；当移动板51移动至最前端位置时，培养基放置架4伸出至培养仓11外，且移动板51始终隔断培养仓11内部与外界的连通。

进一步的，所述单向出气部件包括设于移动板上的两圆形开口61、由圆形开口向移动板后端面延伸形成的第一接头及设于第一接头上的单向阀63；所述单向进气部件包括设于移动板上的两通孔64、由通孔向移动板前端面延伸形成的第二接头及设于第二接头上的单向阀63。

上述提及的密封件为橡胶制成，嵌设于移动板上；提及的单向阀为市面上直接采购得到的橡胶制成的鸭嘴阀，结构原理不再赘述。

所述培养基放置架4包括横截面为U型结构的架体41、固连于架体一端上的盖板42及设于盖板上的拉手43；上述提及的连接结构具体包括设于培养仓进口端上的固定座71、设于固定座上供所述架体穿过的方形开口72、设于移动板上供架体尾端插入的U型槽73、设于架体尾端上的多个间隔均匀分布的U型凸棱74、设于U型槽内的供所述凸棱插入的开口槽、固设于架体上的L型插接件75、设于插接件尾端上的三角形插接头76、设于移动板上供所述插接头插入的插接槽77、可左右移动的设于该插接槽内的限位块78、设于限位块侧壁与插接槽内壁之间的弹簧79及设于限位块上与所述插接头相配合的第一倾斜面761和第二倾斜面762；所述弹簧的一端与限位块固连，另一端与插接槽的内壁固连；所述第一倾斜面761位于限位块的前端面上，第二倾斜面762位于限位块的后端面上，且该第一倾斜面761的倾斜角度大于第二倾斜面762的倾斜角度；上述提及的前、后均是以整个培养箱的方向为依据进行限定的，培养箱中室门方向为前，气体浓度调节室方向为后。

所述固定座为板体结构，所述架体41插入至培养仓11内时，该架体41下表面与培养仓11底面之间具有间距；优选的，该架体41上间隔均匀的分布有多个导气孔411。

具体的，所述导通部件包括沿长度方向间隔分布于移动板上的多个条形开口81、设于移动板后侧且可相对移动板往复移动的活动件82、设于活动件沿长度方向间隔分布于移动板上的多个条形导通口83、设于移动板上供活动件移动的滑轨、与活动件相配合的复位组件及固设于培养仓内的驱动部85；所述架体41推动移动板51移动至最后端位置时，驱动部85驱动活动件82向远离驱动部的位置移动，实现条形开口81和条形导通口83之间的连通；其中，该活动件为板体结构，靠近驱动部的一端上设有向外延伸的凸部；所述驱动部为固设于在培养室内壁上的凸块，且凸块其中一侧面为弧面结构；所述活动件下端插入至滑轨内，通过滑轨对活动件的位置移动进行定位导向；所述复位组件为连接在活动件的左右两端上的弹簧，且弹簧均与移动板相连，在活动件发生移动后对其自动复位。

所述气体浓度调节室3内设有用于对气体均匀度进行调节的循环装置，该循环装置包括设于气体浓度调节室内的第一分隔板91和第二分隔板92、设于第一分隔板上的多个风机93及设于第二分隔板上用于将气流引导至培养仓内的引流部件，所述第一分隔板91和第二分隔板92相互连接，该第一分隔板91和第二分隔板92将气体浓度调节室3分隔为第一腔室31和第二腔室32，该第一腔室31与所述培养仓11相连通；具体的，所述引流部件设置为多组，分别对应设于上下两培养仓之间的位置设置；该引流部件包括多个引流开口94、可相对引流开口上下翻动的引流板95及穿设于引流板内的拉杆或拉绳96，所述培养仓11的尾端位置上设有隔断板111，该隔断板111位于培养仓11的中间高度上；其中风机连接有小型马达，第一腔室上部设有滑轮，拉绳卷绕在滑轮上，滑轮则连接有电机，电机带动滑轮向指定方向转动时，即可使得拉绳向上或向下移动，进而带动引流板发生角度翻动，原理类似于百叶窗，故不再过多赘述；由于引流板的位置对应位于两隔断板之间，进而经过引流板引流向培养仓的风将经过隔断板的阻挡，从而仅由培养仓的半边开口进入培养仓内，而培养仓原先存在的气体则可由另外半边开口向外排出，保证培养仓内气体流通顺畅，与整个气体浓度调节室内的气体混合均匀；引流板能够上下翻动，从而实现了一处引流板能够实现上下两处培养仓内的气体流通，结构更为简单，效果更高。

当然，气体浓度调节室内设有热导传感器，气体浓度调节室也连接有向其内充入二氧化碳气体的充气管，具体的感应原理及充气原理均为现有技术，与传统的培养箱相同，故不再过多赘述。

实施例2

一种提高哺乳动物胚胎体外存活率的培养方法，包括以下步骤：

（1）从母羊身上取得羊卵母细胞置入成熟培养液内，在培养箱内培养 24 小时，获得成熟的羊卵母细胞；其中，成熟培养液为现有技术，可根据实际需要选择，不做赘述；

（2）将成熟的羊卵母细胞与精子一同放入受精培养液中，在培养箱内培养24小时，进行受精，获得早期羊胚胎；培养箱内的温度维持在39℃，气体浓度维持在5%CO2；其中，受精培养液为含 3% 羊血清的 TCM199 培养液；

（3）将受精后的羊胚胎用TCM199培养液进行反复冲洗，之后放入羊胚胎体外培养液中，并置入培养箱中进行胚胎体外培养，该培养箱内温度维持在39℃，气体浓度维持在5%CO2；其中，上述培养液为TCM199培养液；

实施例3

一种提高哺乳动物胚胎体外存活率的培养方法，包括以下步骤：

（1）从母羊身上取得羊卵母细胞置入成熟培养液内，在培养箱内培养 22 小时，获得成熟的羊卵母细胞；其中，成熟培养液为现有技术，可根据实际需要选择，不做赘述；

（2）将成熟的羊卵母细胞与精子一同放入受精培养液中，在培养箱内培养20小时，进行受精，获得早期羊胚胎；培养箱内的温度维持在38℃，气体浓度维持在5%CO2；其中，受精培养液为含 3% 羊血清的 TCM199 培养液；

（3）将受精后的羊胚胎用TCM199培养液进行反复冲洗，之后放入羊胚胎体外培养液中，并置入培养箱中进行胚胎体外培养，该培养箱内温度维持在38.5℃，气体浓度维持在5%CO2；其中，上述培养液为TCM199培养液。

Claims (9)

1.一种提高哺乳动物胚胎体外存活率的培养方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）从母羊身上取得羊卵母细胞置入成熟培养液内，在培养箱内培养 20-24 小时，获得成熟的羊卵母细胞；

（2）将成熟的羊卵母细胞与精子一同放入受精培养液中，在培养箱内培养18-24小时，进行受精，获得早期羊胚胎；

（3）将受精后的羊胚胎用TCM199培养液进行反复冲洗，之后放入羊胚胎体外培养液中，并置入培养箱中进行胚胎体外培养，该培养箱内温度维持在38-39℃，气体浓度维持在5%CO2；

其中，上述培养箱包括培养室（1）、与该培养室相配合的室门（2）、与该培养室相连通的气体浓度调节室（3）；所述培养室（1）内具有多个培养仓（11），多个培养仓内分别上设有培养基放置架（4）和隔断装置，所述培养基放置架（4）可插入至培养仓（11）内，且插入后培养基放置架（4）与培养仓（11）的进口处密封配合；上述培养步骤过程中需要对培养箱内的不同位置上胚胎进行观察时，操作者可将培养基放置架（4）由独立的培养仓（11）中抽出，并且培养基放置架（4）被抽出的过程中，所述隔断装置将隔断对应培养仓（11）与外界的连通。

2.根据权利要求1所述的提高哺乳动物胚胎体外存活率的培养方法，其特征在于：步骤（1）中培养箱内的温度维持在38-39℃，气体浓度维持在5%CO2。

3.根据权利要求1所述的提高哺乳动物胚胎体外存活率的培养方法，其特征在于：上述步骤（2）中的受精培养液为含 3% 羊血清的 TCM199 培养液。

4.根据权利要求1所述的提高哺乳动物胚胎体外存活率的培养方法，其特征在于：所述隔断装置包括可前后动作的设于培养仓内的移动板（51）、设于移动板外侧壁上与培养仓内壁密封配合的一圈密封件（52）、设于移动板上的单向出气部件和单向进气部件、导通部件及用于实现培养基放置架和移动板之间的连接配合的连接结构；当培养基放置架（4）插入至培养仓（11）内时，培养基放置架（4）抵触移动板（51）向后移动，同时单向进气部件控制气体浓度调节室内的气体单向进入至培养仓内；当移动板（51）移动至最后端位置时，连接结构实现培养基放置架（4）和移动板（51）之间的连接配合，同时导通部件实现培养仓（11）与气体浓度调节室（3）的直接连通；当需要对培养仓（11）内的培养培养情况进行观察或需要取出时，将培养基放置架（4）向外拔取，培养基放置架（4）通过连接结构克服密封件（52）与培养仓（11）之间的摩擦力带动移动板（51）向前移动，同时单向出气部件控制培养仓（11）内的气体单向进入至气体浓度调节室（3）内；当移动板（51）移动至最前端位置时，培养基放置架（4）伸出至培养仓（11）外，且移动板（51）始终隔断培养仓（11）内部与外界的连通。

5.根据权利要求4所述的提高哺乳动物胚胎体外存活率的培养方法，其特征在于：所述单向出气部件包括设于移动板上的两圆形开口（61）、由圆形开口向移动板后端面延伸形成的第一接头及设于第一接头上的单向阀（63）；所述单向进气部件包括设于移动板上的两通孔（64）、由通孔向移动板前端面延伸形成的第二接头及设于第二接头上的单向阀（63）。

6.根据权利要求4所述的提高哺乳动物胚胎体外存活率的培养方法，其特征在于：所述培养基放置架（4）包括横截面为U型结构的架体（41）、固连于架体一端上的盖板（42）及设于盖板上的拉手（43）；所述连接结构包括设于培养仓进口端上的固定座（71）、设于固定座上供所述架体穿过的方形开口（72）、设于移动板上供架体尾端插入的U型槽（73）、设于架体尾端上的多个间隔均匀分布的U型凸棱（74）、设于U型槽内的供所述凸棱插入的开口槽、固设于架体上的L型插接件（75）、设于插接件尾端上的三角形插接头（76）、设于移动板上供所述插接头插入的插接槽（77）、可左右移动的设于该插接槽内的限位块（78）、设于限位块侧壁与插接槽内壁之间的弹簧（79）及设于限位块上与所述插接头相配合的第一倾斜面（761）和第二倾斜面（762）；所述弹簧的一端与限位块固连，另一端与插接槽的内壁固连；所述第一倾斜面（761）位于限位块的前端面上，第二倾斜面（762）位于限位块的后端面上，且该第一倾斜面（761）的倾斜角度大于第二倾斜面（762）的倾斜角度。

7.根据权利要求6所述的提高哺乳动物胚胎体外存活率的培养方法，其特征在于：所述架体（41）插入至培养仓（11）内时，该架体（41）下表面与培养仓（11）底面之间具有间距，该架体（41）上间隔均匀的分布有多个导气孔（411）。

8.根据权利要求4所述的提高哺乳动物胚胎体外存活率的培养方法，其特征在于：所述导通部件包括沿长度方向间隔分布于移动板上的多个条形开口（81）、设于移动板后侧且可相对移动板往复移动的活动件（82）、设于活动件沿长度方向间隔分布于移动板上的多个条形导通口（83）、设于移动板上供活动件移动的滑轨、与活动件相配合的复位组件及固设于培养仓内的驱动部（85）；所述架体（41）推动移动板（51）移动至最后端位置时，驱动部（85）驱动活动件（82）向远离驱动部的位置移动，实现条形开口（81）和条形导通口（83）之间的连通。

9.根据权利要求4所述的提高哺乳动物胚胎体外存活率的培养方法，其特征在于：所述气体浓度调节室（3）内设有用于对气体均匀度进行调节的循环装置，该循环装置包括设于气体浓度调节室内的第一分隔板（91）和第二分隔板（92）、设于第一分隔板上的多个风机（93）及设于第二分隔板上用于将气流引导至培养仓内的引流部件，所述第一分隔板（91）和第二分隔板（92）相互连接，该第一分隔板（91）和第二分隔板（92）将气体浓度调节室（3）分隔为第一腔室（31）和第二腔室（32），该第一腔室（31）与所述培养仓（11）相连通。