CN110628673B - 一种苯酚降解菌株的筛选方法及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种苯酚降解菌株的筛选方法及应用，涉及微生物技术领域，所述菌株以苯酚为唯一碳源，为抗辐射不动杆菌APH1(Acinetobacter radioresistens APH1)，所述菌株保藏于中国武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2019462，保藏时间为2019年6月18日。本发明提供的菌种对苯酚具有高效的降解率和降解速度，可以实现污染土壤的生物修复，并且可以耐受多种抗生素，为实际环境中污染修复提供了支持依据。该菌株在水体和土壤中对苯酚的去除速率极高，具有成本低、无二次污染、节省能源等优点，具有广阔的应用前景。

Description

一种苯酚降解菌株的筛选方法及应用
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一种苯酚降解菌株的筛选方法及应用。
背景技术
苯酚，又名石炭酸，是一种重要的化工原料，广泛用于造纸、炼油、染料、纺织、皮革制造、合成树脂、合成纤维、医药及杀菌剂等方面，是炼油厂、焦化厂、煤气厂、纤维厂等工业排放出来的污水中含量较多的物质。随着我国化工业的快速发展，工业排放的废水量大大增加，特别是当这些处理不当的污水渗入土壤，苯酚易被吸附在底泥上，造成其去除难度加大。
我国是生产和使用苯酚的大国，市场对苯酚的需求量不断上升。我国苯酚消费量由2001年的45万吨上涨至目前的170余万吨。酚醛树脂、水杨酸等是苯酚消耗的主要产品，每年我国用于合成水杨酸的苯酚数量就有十几万吨，且用量在不断增加。国内市场苯酚旺盛的需求拉动了生产，近十多年来，我国苯酚的产量呈现不断增长的态势，产量由2001年的25万吨上涨到目前的180万吨。目前我国污水处理工艺还不能完全去除苯酚，苯酚及其衍生物是焦化废水中含量最高的有机污染物，为总有机物质量分数的60％以上。作为环境监测的一项重要指标，苯酚属于水中I类污染物。
苯酚可通过吸入、食入及皮肤表面吸收而进入人体，造成皮肤、粘膜腐蚀、溃烂，可抑制中枢神经或损害肝、肾功能。酚可继续向深处渗入，使细胞失去活力，引起组织损伤、坏死，长期摄入可引起头痛、咳嗽、食欲减退、恶心、呕吐，严重者引起蛋白尿，可致皮炎。苯酚对人体中毒量为20-200mg/kg，致死量为0.5-1.0g/kg。2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单初步整理参考，苯酚在3类致癌物清单中。我国把苯酚列入中国环境优先污染物黑名单中。
目前修复苯酚污染的几种方法主要有物理法、化学法及生物法。物理法主要有吸附法，但是吸附法对吸附材料要求较高，带来成本上升的问题，且吸附材料的再生利用是一个亟待解决的问题。化学法主要有氧化法，但是此法能量消耗大，适用范围窄，且容易产生二次污染。通过常规物理和化学方法从污染环境中去除苯酚是昂贵且不环保的过程。而微生物降解苯酚成本低，效率高，危害性小，是对污染的土壤和水进行生物修复是去除这些化合物的有效选择，微生物代谢苯酚可以将这些有毒物质有效降解成无害的中间体和终产物，可进一步用于有效生物修复被各种酚类化合物污染的环境。
因此，本领域的技术人员致力于开发一种苯酚降解菌株及其筛选方法，使得能够通过简便高效的方法得到以苯酚为唯一碳源的菌株，对于土壤或水体中的苯酚污染均具有较高的降解效率和浓度耐受限度，且对于存在抗生素污染的环境仍具有有益的降解优势。
发明内容
有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明所要解决的技术问题是如何提供一种苯酚降解菌株及其筛选方法，使得能够通过简便高效的方法得到以苯酚为唯一碳源的菌株，对于土壤或水体中的苯酚污染均具有较高的降解效率和浓度耐受限度，且对于存在抗生素污染的环境仍具有有益的降解优势。
为实现上述目的，本发明提供了一种苯酚降解菌株，所述菌株以苯酚为唯一碳源，为抗辐射不动杆菌APH1(Acinetobacter radioresistens APH1)，所述菌株保藏于中国武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2019462，保藏时间为2019年6月18日。
进一步地，所述菌株的基因组信息包括：全基因组长度为3290330bp，N50值为274328，N90值为44865，GC含量为41.37％，所述基因组信息保存在美国国立生物技术信息中心(NCBI)的DNA序列数据库(GenBank)中，保存号为VFBM01000000。
进一步地，所述菌株的最适生长降解条件包括：温度为30℃，pH为6.0，降解底物浓度为500mg/L，其中所述降解底物浓度的耐受上限为950mg/L。
进一步地，所述菌株的中间代谢物包括邻苯二酚和顺，顺-黏糠酸，代谢路径为通过邻位加羟基并通过邻苯二酚1，2-双加氧酶进行。
进一步地，所述菌株含有的与苯酚代谢相关的酶包括：7个与苯酚羟化酶相关，3个与邻苯二酚1，2-双加氧酶相关，1个与粘糠酸盐环异构酶相关，2个与黏糠酸内酯异构酶相关，1个与β-酮己二酸烯醇内酯水解酶相关，2个与3-氧代酸-辅酶A转移酶亚基A相关，6个与β-酮酰辅酶A硫解酶相关，共22个。
进一步地，所述菌株具有耐药性的抗生素包括阿莫西林、呋喃妥因、红霉素、庆大霉素、林可霉素、四环素、克林霉素、氨苄西林、链霉素、青霉素、卡那霉素、氯霉素。
本发明还提供了一种如上所述的苯酚降解菌株的筛选方法，所述方法包括以下步骤：
步骤1、将样品加入无机盐培养基(以下简称MSM培养基)后，加入终浓度为500mg/L苯酚置于摇床进行培养，5天后转接至新的MSM培养基，重复转接三次；
步骤2、将所述步骤1中最后一次的培养液进行平板涂布，涂布于以苯酚为唯一碳源的MSM固体培养基；将平板上长出的菌落进行复筛，复筛长出的菌落进行划线分离，得到能以苯酚为唯一碳源生长的菌株；
步骤3、将所述步骤2中得到的所述菌株进行16S rRNA鉴定，并于NCBI中进行BLAST比对构建系统发育树。
进一步地，所述步骤3中进行所述16S rRNA鉴定时使用的通用引物包括27F5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCA-3’及1492R 5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCA-3’。
进一步地，所述步骤1中的所述样品包括土壤样品和水体样品。
本发明还提供了一种如上所述的苯酚降解菌株在苯酚污染土壤及水体环境修复方面的应用。
与现有技术相比，本发明至少具备以下有益的技术效果：
(1)本发明提供的菌株Acinetobacter radioresistens APH1，它能够利用苯酚作为唯一碳源和能源生长，可以迅速的有效的降解苯酚，在水体和土壤中去除苯酚的效率极高，从而解决环境各介质中苯酚的污染问题；
(2)本发明提供的菌株APH1对于苯酚底物浓度的耐受上限值较高，可以有效地解决较严重污染环境；
(3)本发明对提供的菌株APH1的生长及苯酚降解情况进行了优化，可以更有效、充分地降解苯酚、解决污染问题；
(4)本发明提供的菌株APH1可以耐受多种抗生素，为复合污染存在的情况下的苯酚去除提供了一个方案；
(5)本发明提供的菌株APH1在应用于苯酚污染土壤修复时环境中的微生物多样性的升高；
(6)本发明利用微生物对苯酚进行生物降解，具有高效、无二次污染、成本低的优点，具有良好的应用前景。
以下将结合附图对本发明的构思、具体结构及产生的技术效果作进一步说明，以充分地了解本发明的目的、特征和效果。
附图说明
图1是本发明的一个较佳实施例的菌株Acinetobacter radioresistens APH1菌体形态的扫描电镜图；
图2是本发明的一个较佳实施例的菌株Acinetobacter radioresistens APH1进行16S rRNA序列分析比对后构建的系统发育树示意图；
图3是本发明的一个较佳实施例的菌株在不同温度条件下的无机盐液体培养基中的细胞生长密度(a)及苯酚浓度(b)数据图；
图4是本发明的一个较佳实施例的菌株在不同pH条件下的无机盐液体培养基中的细胞生长密度(a)及苯酚浓度(b)数据图；
图5是本发明的一个较佳实施例的菌株在不同底物浓度条件下的无机盐液体培养基中的细胞生长密度(a)及苯酚浓度(b)数据图；
图6是本发明的一个较佳实施例的菌株测定底物浓度最大耐受限度时的细胞生长密度(a)及苯酚浓度(b)数据图；
图7是本发明的一个较佳实施例中菌株Acinetobacter radioresistens APH1降解苯酚的中间代谢物分析；
图8是本发明的一个较佳实施例中菌株Acinetobacter radioresistens APH1修复土壤环境时苯酚浓度数据图。
具体实施方式
以下参考说明书附图介绍本发明的多个优选实施例，使其技术内容更加清楚和便于理解。本发明可以通过许多不同形式的实施例来得以体现，本发明的保护范围并非仅限于文中提到的实施例。
本发明提供了一种能够高效分解代谢苯酚的新菌株——抗辐射不动杆菌APH1(Acinetobacter radioresistens APH1)，可通过MSM无机盐培养基，以苯酚作为唯一碳源进行液体培养并实现对苯酚的完全降解，可以在24小时内降解92.9％水体中700mg/L的苯酚。在培养过程中能够检测到苯酚产物邻苯二酚、顺，顺-黏糠酸中间代谢物，证明其是通过邻位加羟基并通过邻苯二酚1，2-双加氧酶进行开环降解的。将菌株应用到土壤的原位修复中，可以在三天内实现500mg/kg污染土壤的修复。
实施例1抗辐射不动杆菌APH1的分离、鉴定
(1)采取样品
土壤样品来源：山东省金能科技厂。
(2)菌株的筛选和分离
将采集到的土壤和泥样均匀混合，将5克混合物加入250mL装有50mL MSM培养基的锥形瓶中，加入苯酚使终浓度为500mg/L作为唯一碳源。将锥形瓶置于30℃，200转/分钟转速的摇床培养5天。按5％接种量转接至50mL新鲜MSM培养基，加入苯酚使终浓度为500mg/L，每隔5天进行转接，重复三次，将最后一次的培养液稀释并涂布在加入500mg/L苯酚的无机盐固体培养基上，30℃下培养直至长出单菌落。挑取单菌落到新鲜的无机盐液体培养基中，选取生长最快的菌株进行划线分离，重复多次直到获得纯化的单菌。
上述MSM液体培养基的配方(1L)是：K2HPO4·3H2O 6.8g，KH2PO4 3.7g，MgSO4 0.1g，Na2SO4 1.0g和0.5mL金属离子缓冲液；其中，所述金属离子缓冲液(1L)配方是：FeCl2·4H2O0.3g，MnCl2·4H2O 0.02g，H3BO3 0.0124g，CuCl2·2H2O 0.0034g，CoCl2·6H2O 0.038g，ZnCl2 0.014g和Na2MoO4·2H2O 0.04g，溶于0.1M的盐酸溶液中。固体培养基是在液体培养基中加入1.5％的琼脂粉制成的。
(3)菌株的鉴定
如图1所示，菌株的菌体呈短杆状，能运动，白色不透明，圆形，边缘无齿状，表面光滑，无芽孢，易被挑起。菌株为革兰氏阴性菌，喜好氧气，能够以苯酚作为唯一碳氮源生长。用16S rRNA通用引物(27F 5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCA-3’及1492R 5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCA-3’)进行扩增并测序，将扩增结果送至公司进行测序，16S rRNA测序结果上传至美国国立生物技术信息中心(NCBI数据库)，序号为MN027913.1。使用NCBI数据库中的核苷酸BLAST(BLASTn)(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)在BLAST中检索菌株的16S rRNA序列使用MEGA7的邻接(NJ)方法建立的系统发育树。如图2所示，菌株和抗辐射不动杆菌属亲缘关系最近。结合以上的生理生化的菌学特征和进化树分析，将其鉴定为抗辐射不动杆菌APH1(Acinetobacter radioresistens APH1)。
实施例2不同培养条件下抗辐射不动杆菌APH1的生长及其降解苯酚能力的优化
1、菌株生长及降解的最适温度：将菌株接种至50mL，pH＝7.0的含有苯酚浓度500mg/L的MSM培养基，分别置于20℃、25℃、30℃、37℃、42℃的摇床培养，转速200转/分钟，每隔一定时间用分光光度计测量OD600来检测细胞密度，用高效液相色谱(HPLC)检测苯酚浓度。如图3a和3b所示，最适合菌株生长和苯酚降解的培养温度为30℃。
2、菌株生长及降解的最适pH：将菌株接种至50mL含有苯酚浓度500mg/L的MSM培养基，用盐酸和NaOH调整pH分别为5.0、6.0、7.0、8.0，置于最适温度30℃摇床培养，转速200转/分钟，每隔一定时间用分光光度计测量OD600来检测细胞密度，用高效液相色谱(HPLC)检测苯酚浓度。如图4a和4b所示，最佳的菌株生长和苯酚降解的pH值为6.0。
3、菌株生长及降解的最适底物浓度：将菌株接种至50mL不同苯酚浓度230、330、500、700mg/L的最适pH为6.0的MSM培养基，置于最适温度30℃，转速200转/分钟的摇床培养，每隔一定时间用分光光度计测量OD600来检测细胞密度，用高效液相色谱(HPLC)检测苯酚浓度。如图5a和5b所示，菌株在苯酚浓度时都能较快地降解苯酚。其中，最佳的菌株生长和苯酚降解的苯酚浓度为500mg/L。
实施例3抗辐射不动杆菌APH1的对于苯酚的最大耐受能力验证
将菌株接种至50mL不同苯酚浓度500、700、800、950、1150、1300mg/L的最适pH为6.0的MSM培养基，置于最适温度30℃，转速200转/分钟的摇床培养，每隔一定时间用分光光度计测量OD600来检测细胞密度，用高效液相色谱(HPLC)检测苯酚浓度。如图6a和6b所示，随着浓度的升高菌株的生长和降解情况越差，苯酚浓度在1150mg/L以上细胞几乎没有生长和降解，可能因为苯酚浓度越高对细胞的毒性越大，菌株APH1可以耐受950mg/L的苯酚。
实施例4高效液相色谱HPLC检测苯酚的含量
将培养液用等体积乙酸乙酯萃取，将萃取液用高效液相色谱HPLC检测，检测条件是Agilent Technologies 1200仪器，配备Eclipse XDB-C18(5μm，4.6×150mm)分析柱，流动相A：超I水，流动相B：色谱级甲醇，比例为30：70；流速为0.6mL/分钟，柱温30℃；检测波长为271nm。配制不同浓度梯度的苯酚标准品，测定相应浓度下的峰面积，绘制标准曲线。将样品中的苯酚峰面积由标准曲线换算得出苯酚浓度。
实施例5菌株Acinetobacter radioresistens APH1降解苯酚的中间代谢物分析
1、样品制备：将菌液接种到50mL含有苯酚(500mg/L)的MSM液体培养基中，培养温度30℃，pH 6.0，转速200转/分钟，进行培养。在不同时间进行取样，加入等体积的乙酸乙酯，用分液漏斗震荡萃取，静置分层后取上层有机相，使用旋转蒸发仪至干燥后，用DMF复溶，进行硅烷化衍生。
2、GC-MS检测：检测条件为气相色谱(Agilent 6850/5975C)，检测器温度为280℃，氦气流量为1mL/分钟，升温过程为：初始温度60℃，保持2分钟；以10℃/分钟的速率从60℃升温至230℃，保持2分钟；再以30℃/分钟的速率从230℃升温至280℃，并保持5分钟。
3、检测结果：如图7，通过将产物的质谱和保留时间与推测的标准品的出峰时间和质谱图及GC-MS光谱库进行比较来鉴定，可检测到苯酚第一步产物邻苯二酚(图片显示衍生后的物质)，及第二步开环产物顺，顺-黏糠酸(图片显示衍生后的物质)，证明其是通过邻位加羟基并通过邻苯二酚1，2-双加氧酶进行开环降解的。
实施例6菌株Acinetobacter radioresistens APH1降解苯酚的代谢路径
APH1对苯酚的降解开始于邻位羟基的添加进而生成邻苯二酚，然后在两个羟基之间进行邻位开环生成顺，顺-黏糠酸，之后沿β-酮基己二酸途径降解生成琥珀酸和乙酰辅酶A，最终进入三羧酸循环实现苯酚的完全矿化。
实施例7菌株Acinetobacter radioresistens APH1的全基因组测序
Acinetobacter radioresistens APH1的全基因组用Promega试剂盒提取，采用全基因组鸟枪法策略，构建不同插入片段的文库，利用第二代测序技术，基于Illumina MiSeq测序平台，对这些文库进行双末端测序，序列总量为929,294,873个碱基，产生3,115,572个读数，本次共构建了1个文库。用AdapterRemoval(ver.2.1.7)去除接头污染并用SOAPec(v2.0)进行质量校正对数据进行进一步过滤，获得了3,115,572个高质量读数，测序深度为257x。采用A5-miseq v20150522对去除接头序列的测序数据进行从头拼装，获得了菌株APH1的基因组序列框架图。菌株APH1基因组长度为3,290,330bp，N50值为274,328，N90值为44,865，GC含量为41.37％，基因组信息已经上传并保存在美国国立生物技术信息中心(NCBI)的DNA序列数据库(GenBank)，保藏号为VFBM01000000。
实施例8通过基因组测序鉴定菌株Acinetobacter radioresistens APH1的苯酚代谢相关酶
通过对蛋白编码基因进行功能注释，鉴定参与苯酚代谢途径的酶。通过注释发现菌株APH1含有22个与苯酚代谢相关的酶，7个与苯酚羟化酶相关；3个与邻苯二酚1，2-双加氧酶相关；1个与粘糠酸盐环异构酶相关；2个与黏糠酸内酯异构酶相关；1个与β-酮己二酸烯醇内酯水解酶相关；2个与3-氧代酸-辅酶A转移酶亚基A相关；6个与β-酮酰辅酶A硫解酶相关。
实施例9对菌株Acinetobacter radioresistens APH1的耐药性相关基因进行注释
利用京都基因与基因组百科全书数据库将菌株APH1基因组进行KEGG注释，鉴定与菌株耐药性相关的51个基因及其机制。参与β-内酰胺酶水解失活的基因有4个；参与化学基团转移失活的有9个；减少渗透性的基因有1个；提高外排的有27个基因以及10个修饰靶位点的基因。
实施例10菌株Acinetobacter radioresistens APH1对多种抗生素的耐药性检测
将活化好的菌株用灭菌棉花蘸取后均匀地涂布到M-H固体培养基上，待液体晾干后，将含有不同抗生素的药敏试纸贴到平板中央，将平板倒置放在30℃培养箱过夜培养，长出抑菌圈后测量并记录抑菌圈的直径，与抗生素标准表比对，如表1所示，R代表有抗性，S代表敏感，菌株APH1对阿莫西林、呋喃妥因、红霉素、庆大霉素、林可霉素、四环素、克林霉素、氨苄西林、链霉素、青霉素、卡那霉素、氯霉素都有抗性。
上述M-H培养基的配方(1L)是：牛肉粉2.0g，可溶性淀粉1.5g，酸水解酪蛋白17.5g，调节pH为7.4，加入1.5％琼脂粉制成固体培养基。
表1菌株Acinetobacter radioresistens APH1对抗生素的耐药性检测
抗生素 浓度(μg) 抑菌圈直径(mm) 抗性
呋喃妥因 300 10 R
红霉素 15 7 R
庆大霉素 120 14 R
林可霉素 2 7 R
四环素 30 11 R
克林霉素 2 10 R
氨苄西林 10 11 R
链霉素 10 10 R
青霉素 10 9 R
卡那霉素 30 8 R
氯霉素 30 12 R
哌拉西林 100 31 S
诺氟沙星 10 27 S
万古霉素 30 19 S
头孢唑啉 30 28 S
环丙沙星 5 34 S
磷霉素 200 25 S
利福平 5 26 S
阿米卡星 30 24 S
实施例11菌株Acinetobacter radioresistens APH1在环境修复(土壤修复)中的模拟应用
由于实际环境中土壤对苯的吸附能力较强，土壤中存在的苯酚较水体中的苯酚相比，降解难度大，因此，为了测试菌株Acinetobacter radioresistens APH1在污染土壤中去除苯酚的应用，本发明模拟了菌株在实际环境中的土壤原位修复中的应用。
1、土壤修复体系
不含有苯酚的土壤来自山东省枣庄市，去除土壤里较大的石块和植物残渣后把土壤用40目筛过滤，检测土壤含水量为7.14％，pH为7.44。通过将苯酚母液加入到未受污染的土壤中充分混合使其均匀分布，制备成浓度为450mg/kg(干重)的污染土壤，并调整土壤含水量达到17.5％。为了验证菌株修复污染土壤的能力，收集长到对数期的菌体并制成3×1010CFU/mL悬浮液，均匀地混合到加标土壤中，同时以只加苯酚不加菌的土壤样品作为对比，所有处理均一式三份平行。将模拟体系置于实验室内常温条件下进行为期三天的实验，定期进行取样。每天取样，用二氯甲烷对土壤进行萃取，将萃取液浓缩后进行GCMS检测。
2、土壤中苯酚含量的测定
取每个处理的样品5g加入12.5mL含有内标(400mg/L水杨酸甲酯)的二氯甲烷，于超声中萃取15分钟，重复萃取两次，将两次萃取的上清合并使用旋转蒸发仪至干燥后，用DMF复溶后进行GC-MS检测。用含有定量内标(400mg/L水杨酸甲酯)的二氯甲烷萃取含有不同浓度梯度的苯酚土壤，测定相应浓度下的峰面积，绘制标准曲线。将样品中的苯酚峰面积由标准曲线换算得出苯酚浓度。
GC-MS检测：检测条件为气相色谱(Agilent 6850/5975C)，检测器温度为280℃，氦气流量为1mL/分钟，升温过程为：初始温度60℃，保持2分钟；以10℃/分钟的速率从60℃升温至230℃，保持2分钟；再以30℃/分钟的速率从230℃升温至280℃，并保持5分钟。
3、检测结果：如图8所示菌株在3天内对污染土壤初始浓度为500mg/kg的苯酚降解率为99.1％，对污染土壤具有很好的修复效果。
实施例12在菌株Acinetobacter radioresistens APH1的土壤修复过程中微生物多样性变化
为了探究在降解系统中的微生物群落结构的变化，收集每个处理中的土壤，使用omega M5635-02试剂盒提取样品中的总DNA，之后使用前引物338F：ACTCCTACGGGAGGCAGCA和后引物806R：GGACTACHVGGGTWTCTAAT，按照以下步骤扩增16S rRNA基因序列的V3-V4区序列：98℃下5分钟的变性，在98℃下30秒，在52℃下30秒和在72℃下分钟，整个过程进行25个循环，最后在72℃下保持5min。扩增16S rRNA基因序列的V3-V4区序列，制备测序文库，基于Illumina Miseq测序平台对序列进行测序。测序结果以BioProject序号PRJNA566313保藏在美国国立生物技术信息中心(NCBI)数据库中。
基于16S rRNA测序结果对土壤中不同样品的微生物多样性进行分析。从每个处理的样品中共获得了298492个有效序列量，对获得的序列按97％的序列相似度进行归并和OTU划分，并选取每个OTU中丰度最高的序列作为该OTU的代表序列。在NC组(空白土壤)中相对丰度大于1％的门是Actinobacteria，其次是Proteobacteria，Acidobacteria，Chloroflexi，Gemmatimonadetes和Bacteroidetes。在添加了苯酚的PC组中，Firmicutes上升比较明显成为相对丰度最高的门。其次，Acidobacteria有所上升，其余几个门略有下降。在添加了菌株APH1的EG组中，最为突出的为Proteobacteria占比为，具有明显优势。土壤中属水平细菌与门水平细菌群落结构变化一致。苯酚的添加可以促进Chungangia和Bacillus，Lysinibacillus和Nitrospira属的细菌明显增加，表明这四种属的细菌对苯酚有响应。微生物多样性分析表明，添加了苯酚降低了微生物菌群丰度和群落结构多样性，这种降低程度在添加了APH1后更加显著，两种不同的处理也在一定程度上使菌群结构产生了分化。APH1的在土壤中具有比较明显的竞争优势，在环境中的生态占位显著。继续放置20天后，添加了菌株的实验组中APH1的含量明显下降，整体群落结构多样性升高。
实施例13比较菌株对苯酚去除的效率
记录苯酚浓度和去除时间，比较菌株在液体培养基和土壤中对苯酚去除的效率，在培养基中的去除速率可以达到29.73mg L-1h-1，在苯酚污染土壤中的去除速率可以达到148.5mg kg-1d-1，去除速率是报道过的菌株中最快的之一。
以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术无需创造性劳动就可以根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。

Claims (2)

1.一种苯酚降解菌株，其特征在于，所述菌株以苯酚为唯一碳源，为抗辐射不动杆菌（Acinetobacter radioresistens ）APH1，所述菌株保藏于中国武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2019462，保藏时间为2019年6月18日；所述菌株的基因组信息包括：全基因组长度为3290330bp，N50值为274328，N90值为44865，GC含量为41.37%，所述基因组信息保存在美国国立生物技术信息中心的DNA序列数据库中，保存号为VFBM01000000；所述菌株的最适生长降解条件包括：温度为30℃，pH为6.0，降解底物浓度为500mg/L，其中所述降解底物浓度的耐受上限为950mg/L。
2.一种如权利要求1所述的苯酚降解菌株在苯酚污染土壤及水体环境修复方面的应用。
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