CN110627874B - 一种帕瑞肽的制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种帕瑞肽的制备方法,涉及药物合成领域,其制备得到了化合物I~III三个理化性质稳定的多肽片段,并以上述三个多肽片段为原料,通过液相反应合成了帕瑞肽。该制备方法的路线设计合理,采用多肽片段汇聚式合成策略,节省时间,提高效率,消旋化程度低、总收率高,有利于产业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及药物合成领域,具体而言,涉及一种帕瑞肽的制备方法。
背景技术
帕瑞肽是由瑞士诺华制药公司(Novartis Pharma AG)研制的一种“孤儿药”,于2012年4月25日首次由欧盟药品监管当局按照罕见病的相关法规批准上市,商品名Signifor,2012年12月14日获得了美国FDA批准,用于治疗肾上腺皮质机能亢进和治疗不能通过手术治疗的库欣病(Cushing’s disease),之后陆续在48个国家获准上市。其结构式为
帕瑞肽是一种多受体靶向生长激素(Somatostatin,SST)类似物抑制剂类似物,能够高亲和力结合5种促生长素抑制素受体(SST Receptor,SSTR)亚型中的4种(SST1、SST2、SST3、SST5),通过与生长抑素受体结合发挥其药理作用。
现有技术中,帕瑞肽的合成主流方法是固相合成方法,例如按经典的Fmoc/tBu策略,以SASRIN Resin树脂或Wang树脂,固相缩合得环[(2R)-2-苯甘氨酰-D-色氨酰-L-(N-叔丁氧羰基)赖氨酰-O-苄基-L-酪氨酰-L-苯丙氨酰-(4R)-4-[(2-氨基乙基)氨基甲酰氧基]-L-脯氨酰]肽。然而,固相法存在这样几个普遍问题,如需特殊设备,粗肽纯度低,需特殊纯化设备,成本较高等。相比之下,液相合成最大的优势是目标产物的纯度很高,这主要依赖于中间体的纯化。但如何合理的设计合成路线以得到较高的产率,以及如何避免多肽环合时消旋化程度高的问题仍有待解决。
发明内容
本发明的目的在于提供一种帕瑞肽的制备方法,其合成路线设计合理,操作简便,通过液相合成的方式,能够得到产率高、纯度高的帕瑞肽,并解决了现有技术中消旋化程度高的问题。
本发明的实施例如下:
一种帕瑞肽的制备方法,其包括:
将化合物I和化合物II缩合后,氢化去保护,得到中间体I;
将中间体I与化合物III缩合后,在碱性条件下水解,得到中间体II;
将中间体II分子内缩合关环得到中间体III;
将中间体III在酸性条件下水解;
式中,R1为可通过酸性水解脱除的氨基保护基,优选地,R1选自Boc、Meoc、Etoc、DMB、PMB中的任一种;R2选自C1~C4烷基;R3为可通过氢化还原脱除的氨基保护基,优选地,R3选自Bn、Cbz中的任一种;R4为可通过碱性水解脱除的氨基保护基,优选地,R4选自Fmoc、Tfa、Pht中的任一种。
本发明实施例的有益效果是:
本发明实施例提供了一种帕瑞肽的制备方法,其制备得到了化合物I~III三个理化性质稳定的多肽片段,并以上述三个多肽片段为原料,通过液相反应合成了帕瑞肽。该制备方法的路线设计合理,采用多肽片段汇聚式合成策略,节省时间,提高效率,消旋化程度低、总收率高,有利于产业化生产。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者,按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本发明实施例的一种帕瑞肽的制备方法进行具体说明。
本发明实施例提供了一种帕瑞肽的制备方法,其包括:
S1.将化合物I和化合物II缩合后,氢化去保护,得到中间体I。
S2.将中间体I与化合物III缩合后,在碱性条件下水解,得到中间体II。
S3.将中间体II分子内缩合关环得到中间体III。
S4.将中间体III在酸性条件下水解。
式中,R1为可通过酸性水解脱除的氨基保护基,优选地,R1选自Boc、Meoc、Etoc、DMB、PMB中的任一种;R2选自C1~C4烷基;R3为可通过氢化还原脱除的氨基保护基,优选地,R3选自Bn、Cbz中的任一种;R4为可通过碱性水解脱除的氨基保护基,优选地,R4选自Fmoc、Tfa、Pht中的任一种。
在本发明实施例中,发明人采用了化合物I~III三个理化性质稳定的多肽片段对帕瑞肽进行合成。通过对不同氨基保护基的选择,以及引入、脱除时机上的把握,精心地安排了各个片段的缩合顺序,从而较高产率,较高纯度地合成了帕瑞肽。例如,在中间体I和化合物III缩合后,由于保护基团的合理安排,通过一步碱性水解,即可同时脱除氨基和羧基上的保护基,裸露出后续缩合闭环所需的氨基和羧基。又例如,在与化合物III进行缩合之前,发明人大量采用了可以通过氢化脱去的氨基保护基对氨基进行保护,氢化反应转化率高,后处理方便,有助于提高产率。而在引入化合物III之后,为了避免氢化反应将化合物III中的苄基脱去影响产率,发明人又转而采用了其它类型的氨基保护基。同时,由于先引入基团对后引入基团在电性、位阻上的影响不可预期,发明人在该合成路线的设计上付出了大量的创造性劳动。
进一步地,在化合物I和化合物II的缩合反应中,化合物I和化合物II的摩尔比为1:1.8~2.2。化合物II的合成相对简单,通过添加过量化合物II来保证化合物I的反应完全,有利于减少时间、金钱成本。优选地,化合物I和化合物II的缩合是在NMM、HOBt和DIC的活化下进行的,其中,化合物I、NMM、HOBt和DIC的摩尔比为1:1.2~3.2:1.2~2.5:2.5~7。发明人经过创造性劳动发现,按照上述用料比进行缩合反应,反应的效率较高,化合物I的转化率较高。
基于同样的目的,在中间体I和化合物III的缩合反应中,中间体I和化合物III的摩尔比为1:1.2~1.5,通过添加过量化合物III来保证化合物I的反应完全。进一步地,中间体I和化合物III的缩合是在NMM、HOBt和TBTU的活化下进行的,其中,中间体I、NMM、HOBt和TBTU的摩尔比为1:2.5~3.0:2.5~3.0:2.5~3.0。发明人经过创造性劳动发现,按照上述用料比进行缩合反应,反应的效率较高,中间体I的转化率较高。
中间体II的分子内缩合关环是在HATU、HOBt和EDIPA的活化下进行的,其中,中间体II、HATU、HOBt和EDIPA的摩尔比为1:2.5~3.0:2~2.5:2.3~2.8。发明人经过创造性劳动发现,按照上述用料比进行缩合反应,反应的效率较高,能够以较高产率完成关环。
进一步地,在本发明实施例中,化合物I的制备方法如下:
将原料I-a和原料I-b缩合,并通过氢化去保护,得到前体I;将前体I与原料I-c缩合,并通过氢化去保护后得到化合物I。
其中,原料I-a的结构式为原料I-b的结构式为原料I-c的结构式为前体I的结构式为原料I-a为氨基保护后的D-色氨酸,原料I-b为氨基、羧基保护后的L-赖氨酸,原料I-c为氨基保护后的L-苯甘氨酸,上述原料均为商业可得或通过商业可得原料经过简单衍生后得到的,原料来源广泛。值得注意的是,上述原料可采用其它对于本领域技术人员公知的等效物质进行替换,例如,原料I-b可采用氨基、羧基保护后的L-赖氨酸盐酸盐替代,原料I-c可采用氨基保护后的L-苯甘氨酸琥珀酰亚胺酯进行替代等。
进一步地,在本发明实施例中,化合物II的制备方法如下:
其中,原料II-a为氨基、羧基保护后的羟基脯氨酸,原料II-b为氨基保护后的乙二胺,均为商业可得或通过商业可得原料经过简单衍生后得到的,原料来源广泛,廉价易得。
进一步地,在本发明实施例中,化合物III的制备方法如下:
其中,原料III-a为氨基、羟基保护后的L-酪氨酸衍生物,L-苯丙氨酸可用L-苯丙氨酸盐酸盐替代,以上原料同样是具有广泛的来源,廉价易得,适合实现规模化生产。
进一步地,在上述反应中,通过氢化对R3基团的脱除是在5%~10%的Pd/C催化下,氢气氛围中进行的。通过酸性水解对R1基团的脱除是在HCl、TFA等酸试剂的存在下进行的。通过碱性水解对R2、R4基团的脱除是在NaOH、二乙胺、哌啶、环己胺等碱试剂的存在下进行的。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
本实施例提供了一种前体I的制备方法,其包括:
S1.制取N-苄氧羰基-D-色氨酸-N-叔丁氧基羰基-L-赖氨酸甲酯,其反应式为
具体制备方法如下:
将原料I-a(N-Cbz-D-色氨酸,13.53g,40.0mmol)和HOBt(5.97g,44.2mmol)溶于200ml THF中,溶液无色透明。室温下分别加入原料I-b(Ne-Boc-L-赖氨酸甲酯盐酸盐,11.90g,40.0mmol)以及NMM(8.11g,80.2mmol),搅拌30min后冷却至0℃,加入EDCI(7.94g,51.1mmol),搅拌1h后置于室温下反应,TLC监测反应完全,停止反应。向反应液中加入纯化水洗100ml×2次,有白色固体析出,加入乙酸乙酯萃取100ml×2次,合并乙酸乙酯层,经纯化水洗、饱和氯化钠溶液洗、无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂后,滤液减压蒸除溶剂得34.80g白色固体粗品。将粗品精制,40℃真空干燥4h得N-苄氧羰基-D-色氨酸-N-叔丁氧基羰基-L-赖氨酸甲酯(白色粉末,16.51g,产率71.0%,纯度99.44%)。
S2.制取前体I(D-色氨酸-N-叔丁氧基羰基-赖氨酸甲酯),其反应式为
具体制备方法如下:
在250ml的氢化釜里,加入N-苄氧羰基-D-色氨酸-N-叔丁氧基羰基-L-赖氨酸甲酯(13.0g,22.4mmol),溶于100ml的无水异丙醇中,加入2.0g催化剂10%Pd/C,室温下氢化反应至完全后停止反应。加适量硅藻土滤除催化剂,滤液减压蒸除溶剂得10.21g类白色固体,真空干燥后得前体I(白色固体,9.80g,产率97.8%,纯度90.76%)。
实施例2
本实施例提供了一种化合物I的制备方法,其包括:
S1.制取N-苄氧羰基-L-苯甘氨酸-D-色氨酸-N-叔丁氧基羰基-L-赖氨酸甲酯,其反应式为
具体制备方法如下:
在500ml的单口瓶中加入前体I(D-色氨酸-N-叔丁氧基羰基-赖氨酸甲酯,10.21g,22.8mmol),溶于100ml的无水四氢呋喃中,加入原料I-c(N-苄氧羰基-L-苯甘氨酸,9.62g,33.7mmol)、NMM(4.61g,45.6mmol)、HOBt(3.40g,25.1mmol),将反应液冷却至0℃,搅拌30min后,缓慢滴加DIC(3.17g,25.1mmol),滴毕保持0℃搅拌30min,置于室温下反应。TLC监测反应完全,停止反应。向反应液中加入纯化水100ml洗涤,乙酸乙酯萃取50ml×3次,合并乙酸乙酯层,依次用5%碳酸氢钠溶液洗、纯化水洗、饱和氯化钠水溶液洗涤,无水硫酸钠干燥。抽滤、滤液浓缩得11.42g淡黄色粉末粗品。将粗品精制、40℃真空干燥4h,得N-苄氧羰基-L-苯甘氨酸-D-色氨酸-N-叔丁氧基羰基-L-赖氨酸甲酯(白色粉末,8.55g,产率52.6%,纯度97.81%)。
S2.制取化合物I(L-苯甘氨酸-D-色氨酸-N-叔丁氧基羰基-L-赖氨酸甲酯),其反应式为
具体制备方法如下:
在500ml的氢化釜里,加入N-苄氧羰基-L-苯甘氨酸-D-色氨酸-N-叔丁氧基羰基-L-赖氨酸甲酯(23.4g,32.8mmol),溶于260ml的无水异丙醇中,加入2.6g催化剂10%Pd/C,室温下氢化反应至完全,停止反应。加适量硅藻土滤除催化剂,滤液减压蒸除溶剂,真空干燥后得化合物I(白色固体,17.9g,产率94.2%,纯度99.13%)。
化合物I的表征如下:
HPLC方法:A相:0.1%TFA溶液、B相:0.1%TFA ACN溶液;梯度:30min内从20%至80%B;波长:265nm;流速1.0ml/min;t:35℃;出峰时间t=26.04min。ESI-MS:[M+H](m/z):566.3、[M+Na](m/z):588.3、[M-Boc](m/z):466.6。
实施例3
本实施例提供了一种化合物II的制备方法,其包括:
S1.制备反式-4-(N-叔丁氧羰基-乙二氨基)甲酰氧基-N-苄氧羰基-脯氨酸甲酯,其反应式为
具体制备方法如下:
在氮气保护、冰浴下,将原料II-a(反式-4-羟基-N-苄氧羰基-脯氨酸甲酯,5.58g,20.0mmol)在50ml无水二氯甲烷中搅拌至溶解。用50ml无水二氯甲烷溶解CDI(3.89g,24.0mmol),再将其滴入原料II-a的溶液中。滴加后反应液在室温下搅拌反应,TLC监测原料II-a已完全反应。用40ml无水二氯甲烷溶解原料II-b(N-Boc-乙二胺,3.84g,24.0mmol),冰浴、缓慢滴入反应液中。滴完后加入DMAP(2.44g,20.0mmol)的20ml无水二氯甲烷溶液。室温搅拌。反应液用100ml水洗,分层。有机相以50ml×6的0.1M盐酸洗涤、饱和食盐水洗涤、无水硫酸钠干燥。抽滤、浓缩后得油状粗品9.97g。经冻干得白色固体,异辛烷打浆,抽滤,40℃真空干燥,得反式-4-(N-叔丁氧羰基-乙二氨基)甲酰氧基-N-苄氧羰基-脯氨酸甲酯(白色固体,8.24g,产率88.5%,纯度95%)。
S2.制备化合物II(反式-4-(N-叔丁氧羰基-乙二氨基)甲酰氧基-N-苄氧羰基-脯氨酸),其反应式为
具体制备方法如下:
将反式-4-(N-叔丁氧羰基-乙二氨基)甲酰氧基-N-苄氧羰基-脯氨酸甲酯(4.65g,10.0mmol)用40ml甲醇、40ml四氢呋喃的混合溶剂溶解后,0℃下缓慢滴加1N氢氧化钠水溶液。室温搅拌。TLC监测反应完全后停止搅拌,用10%柠檬酸调节反应液pH值至2~3,浓缩。浓缩物用醋酸异丙酯和水溶解、分层。对水相再用醋酸异丙酯萃取后合并有机相,依次用饱和氯化钠溶液洗涤、以无水硫酸钠干燥。抽滤、浓缩得白色絮状固体,常温真空干燥后得到化合物II(4.13g,产率91.5%,纯度93%)。
化合物II的表征如下:
HPLC方法:A相:0.1%TFA溶液、B相:0.1%AcN溶液;梯度:30min内从20%至80%B;波长:265nm;流速1.0ml/min;t:35℃;出峰时间t=15.15min。ESI-MS:[M+H](m/z):451.9、[M-C4H9](m/z):396.0、[M-Boc](m/z):352.1。
实施例4
本实施例提供一种化合物III(N-Fmoc-O-苄基酪氨酸-L-苯丙氨酸)的制备方法,其反应式为
具体制备方法如下:
室温下500ml的单口瓶中分别加入L-苯丙氨酸盐酸盐(5.1g,25.3mmol)、原料III-a(N-芴甲氧羰基-O-苄基-L-酪氨酸,9.87g,20.0mmol),溶于200ml THF中,加入HOBt(6.76g,50.0mmol),NMM(8.11g,80.2mmol),搅拌30min后冷却至0℃,加入EDCI(7.94g,51.1mmol),搅拌1h后置于室温下反应,TLC监测反应完全,停止反应。向反应液中加入纯净水洗200ml×2次,有白色固体析出,加入乙酸乙酯萃取100ml×3次,合并乙酸乙酯层,经纯化水洗、饱和氯化钠溶液洗、无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂后,滤液减压蒸除溶剂得白色固体粗品。将粗品精制,40℃真空干燥得化合物III(白色粉末,11.1g,产率86.5%,纯度95%)。
化合物III的表征如下:
HPLC方法:A相:0.1%TFA溶液、B相:0.1%TFAAcN溶液;梯度:30min内从20%至80%B;波长:265nm;流速1.0ml/min;t:35℃;出峰时间t=18.47min。ESI-MS:[M+H](m/z):640.72、[M+Na](m/z):663.72.0、[M-Fmoc](m/z):418.2。
实施例5
本实施例提供一种中间体I(反式-4-(N-叔丁氧羰基-乙二氨基)甲酰氧基-脯氨酸-L-苯甘氨酸-D-色氨酸-(N-叔丁氧羰基-乙二氨基)-L-赖氨酸甲酯)的制备方法,包括:
S1.制备反式-4-(N-叔丁氧羰基-乙二氨基)甲酰氧基-N-苄氧羰基-脯氨酸-L-苯甘氨酸-D-色氨酸-(N-叔丁氧羰基-乙二氨基)-L-赖氨酸甲酯,其反应式为
具体制备方法如下:
250ml单口瓶中加入化合物I(L-苯甘氨酸-D-色氨酸-N-叔丁氧基羰基-L-赖氨酸甲酯,1.65g,2.85mmol)和化合物II(反式-4-(N-叔丁氧羰基-乙二氨基)甲酰氧基-N-苄氧羰基-脯氨酸,2.5g,5.54mmol),溶于50ml无水THF中,0℃搅拌10min。-5℃下加入NMM(0.41g,4.06mmol)、HOBt(0.43g,3.18mmol)、DICI(1.21g,9.6mmol),保持-5℃反应,TLC监测至反应完全,停止反应。向反应液中滴加50ml纯净水,有浅黄色物体析出,滴毕,加入5%柠檬酸溶液搅拌,抽滤,滤饼经纯化水洗、正庚烷洗,收集滤饼,真空干燥得反式-4-(N-叔丁氧羰基-乙二氨基)甲酰氧基-N-苄氧羰基-脯氨酸-L-苯甘氨酸-D-色氨酸-(N-叔丁氧羰基-乙二氨基)-L-赖氨酸甲酯(白色固体,2.17g,产率75.1%,纯度93%)。
S2.制备中间体I,其反应式为
具体制备方法如下:
500ml的氢化釜里,加入反式-4-(N-叔丁氧羰基-乙二氨基)甲酰氧基-N-苄氧羰基-脯氨酸-L-苯甘氨酸-D-色氨酸-(N-叔丁氧羰基-乙二氨基)-L-赖氨酸甲酯(2.0g,1.97mmol),溶于100ml的无水甲醇中,加入0.4g催化剂10%Pd/C,室温下氢化反应4h,停止反应。滤除催化剂,向滤液中加入100g冰水,有沉淀析出,收集沉淀物并以纯化水洗涤,干燥得中间体I(灰色固体,1.59g,产率91.9%,纯度95%)。
中间体I的表征如下:
HPLC方法:Hypersil BDS C18,4.6×200mm,5μm;A相:0.1%TFA水溶液、B相:0.1%TFA AcN;梯度:40min内20%至80%B;波长:220nm;流速:1ml/min;温度:35℃;出峰时间t=30.10min。ESI-MS:[M+H](m/z):1347.3、[M+Na](m/z):1368.9、[M-Boc](m/z):1246.9。
实施例6
本实施例提供一种中间体II(O-苄基酪氨酸-L-苯丙氨酸-反式-4-(N-叔丁氧羰基-乙二氨基)甲酰氧基脯氨酸-L-苯甘氨酸-D-色氨酸-(N-叔丁氧羰基乙二氨基)-L-赖氨酸)的制备方法,包括:
S1.制备N-Fmoc-O-苄基酪氨酸-L-苯丙氨酸-反式-4-(N-叔丁氧羰基-乙二氨基)甲酰氧基脯氨酸-L-苯甘氨酸-D-色氨酸-(N-叔丁氧羰基乙二氨基)-L-赖氨酸甲酯,其反应式为
具体制备方法如下:
250ml单口瓶中加入中间体I(反式-4-(N-叔丁氧羰基-乙二氨基)甲酰氧基-脯氨酸-L-苯甘氨酸-D-色氨酸-(N-叔丁氧羰基-乙二氨基)-L-赖氨酸甲酯,3.5g,3.98mmol)和化合物III(N-Fmoc-O-苄基酪氨酸-L-苯丙氨酸,3.5g,5.46mmol),溶于50ml无水四氢呋喃中,控温5℃,缓慢加入HOBt(1.49g,11.0mmol)、TBTU(3.53g,11.0mmol)以及NMM(1.12g,11.0mmol),室温搅拌反应6h。TLC监测直至中间体I反应完全,停止反应。反应液减压浓缩至干,加入乙酸乙酯100ml溶解后,经5%碳酸氢钠水溶液洗涤100ml×3次、5%柠檬酸水溶液100ml×3次、饱和氯化钠溶液洗涤、无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂后,滤液减压浓缩至干,甲醇重结晶,得N-Fmoc-O-苄基酪氨酸-L-苯丙氨酸-反式-4-(N-叔丁氧羰基-乙二氨基)甲酰氧基脯氨酸-L-苯甘氨酸-D-色氨酸-(N-叔丁氧羰基乙二氨基)-L-赖氨酸甲酯(白色固体,3.0g,产率50.3%,纯度97%)。
S2.制备中间体II,其反应式为
具体制备方法如下:
250ml单口瓶中加入N-Fmoc-O-苄基酪氨酸-L-苯丙氨酸-反式-4-(N-叔丁氧羰基-乙二氨基)甲酰氧基脯氨酸-L-苯甘氨酸-D-色氨酸-(N-叔丁氧羰基乙二氨基)-L-赖氨酸甲酯(2.04g,1.36mmol),溶于30ml的无水四氢呋喃中,0℃下搅拌30min。-5℃下加入氢氧化钠,控温搅拌反应2h,HPLC监测反应完全后终止反应。向反应液中加入50ml纯净水稀释、乙酸乙酯萃取50ml×2次,合并乙酸乙酯层,经饱和氯化钠溶液洗涤、无水硫酸钠干燥,抽滤,滤液减压蒸除溶剂后得白色蜡状固体2.72g。将白色粗品精制,40℃真空干燥4h后得中间体II(灰白色粉末,1.71g,产率99.3%,纯度75.9%)。
中间体II的表征如下:
HPLC方法:Hypersil BDS C18,4.6×200mm,5μm;A相:0.1%TFA水溶液、B相:0.1%TFA ACN;梯度:30min内60%至100%B;波长λ:220nm;流速:1ml/min;温度:35℃;出峰时间t=12.64min。ESI-MS:[M+H](m/z):1365.6、[M+Na](m/z):1388.9、[M-Boc](m/z):1264.6。
实施例7
本实施例提供一种中间体III(环[(2R)-2-苯甘氨酰-D-色氨酰-L-(N-叔丁氧羰基)赖氨酰-O-苄基-L-酪氨酰-L-苯丙氨酰-(4R)-4-[(2-氨基乙基)氨基甲酰氧基]-L-脯氨酰]肽)的制备方法,其反应式为
具体制备方法如下:
250ml单口瓶中加入中间体II(O-苄基酪氨酸-L-苯丙氨酸-反式-4-(N-叔丁氧羰基-乙二氨基)甲酰氧基脯氨酸-L-苯甘氨酸-D-色氨酸-(N-叔丁氧羰基乙二氨基)-L-赖氨酸,0.83g,0.66mmol),溶于20ml DMF中,冰浴下搅拌10min。-5℃下加入EDIPA(0.21g,1.62mmol)、HOBt(0.2g,1.48mmol)以及HATU(0.7g,1.84mmol),保持-5℃反应,TLC监测直至中间体II反应完全,停止反应。向反应液中滴加20ml纯净水,有黄色固体析出,滴毕后抽滤,滤饼经纯净水洗、正庚烷洗,收集滤饼,真空干燥4h后得中间体III(黄色粉末,0.62g,0.50mmol,产率75.3%,纯度74.8%)。
中间体III的表征如下:
HPLC方法:Hypersil BDS C18,4.6×200mm,5μm;A相:0.1%TFA水溶液、B相:0.1%TFAACN;梯度:30min内60%至100%B;波长λ:220nm;流速:1ml/min;温度:35℃;出峰时间t=28min。ESI-MS:[M+H](m/z):1347.3、[M+Na](m/z):1368.9、[M-Boc](m/z):1246.9。
实施例8
一种帕瑞肽的制备方法,其反应式为
具体制备方法如下:
50ml单口瓶中加入中间体III(环[(2R)-2-苯甘氨酰-D-色氨酰-L-(N-叔丁氧羰基)赖氨酰-O-苄基-L-酪氨酰-L-苯丙氨酰-(4R)-4-[(2-氨基乙基)氨基甲酰氧基]-L-脯氨酰]肽,0.5g,0.40mmol),溶于10ml无水二氯甲烷中,冰浴下滴加5ml三氟乙酸,搅拌反应1h,停止反应。反应液减压蒸除溶剂,滴加5ml乙醚,有灰白色固体析出,抽滤,收集滤饼,真空干燥后得帕瑞肽(灰褐色固体,0.4g,0.38mmol,产率95.0%,纯度68.4%)。
帕瑞肽表征如下:
HPLC方法:Hypersil BDS C18,4.6×200mm,5μm;A相:0.1%TFA水溶液、B相:0.1%TFA ACN;梯度:30min内从31%至41%B;波长λ:220nm;流速1ml/min;温度:35℃;出峰时间t=22.9min。ESI-MS:[M+H](m/z):1046.9、[M+Na](m/z):1068.9、[M/2+H](m/z):524.1。
综上所述,本发明实施例提供了一种帕瑞肽的制备方法,其制备得到了化合物I~III三个理化性质稳定的多肽片段,并以上述三个多肽片段为原料,通过液相反应合成了帕瑞肽。该制备方法的路线设计合理,采用多肽片段汇聚式合成策略,节省时间,提高效率,消旋化程度低、总收率高,有利于产业化生产。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已,并不用于限制本发明,对于本领域的技术人员来说,本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种帕瑞肽的制备方法,其特征在于,包括:
将化合物I和化合物II缩合后,氢化去保护,得到中间体I;
将所述中间体I与化合物III缩合后,在碱性条件下水解,得到中间体II;
将所述中间体II分子内缩合关环得到中间体III;
将所述中间体III在酸性条件下水解;
式中,R1为可通过酸性水解脱除的氨基保护基;R2选自C1~C4烷基;R3为可通过氢化还原脱除的氨基保护基;R4为可通过碱性水解脱除的氨基保护基;
所述化合物I和所述化合物II的缩合反应中,所述化合物I和所述化合物II的摩尔比为1:1.8~2.2;
所述化合物I和所述化合物II的缩合是在NMM、HOBt和DICI的活化下进行的,其中,化合物I、NMM、HOBt和DICI的摩尔比为1:1.2~3.2:1.2~2.5:2.5~7;
所述中间体I和所述化合物III的缩合反应中,所述中间体I和所述化合物III的摩尔比为1:1.2~2.5;
所述中间体I和所述化合物III的缩合是在NMM、HOBt和TBTU的活化下进行的,其中,中间体I、NMM、HOBt和TBTU的摩尔比为1:2.5~3.0:2.5~3.0:2.5~3.0;
所述中间体II的分子内缩合关环是在HATU、HOBt和EDIPA的活化下进行的,其中,中间体II、HATU、HOBt和EDIPA的摩尔比为1:2.5~3.0:2~2.5:2.3~2.8。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,R1选自Boc、Meoc、Etoc、DMB、PMB中的任一种。
3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,R3选自Bn、Cbz中的任一种。
4.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,R4选自Fmoc、Tfa、Pht中的任一种。
8.根据权利要求1~7任一项所述的制备方法,氢化去保护是在5%~10%的Pd/C催化下,氢气氛围中进行的。
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Synthetic approaches to the 2012 new drugs;Hong X. Ding et al.;《Bioorganic & Medicinal Chemistry》;20140225;第22卷;2005–2032 * |
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