CN102146065A - 一种高纯度二酮哌嗪环肽的制备方法 - Google Patents
一种高纯度二酮哌嗪环肽的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102146065A CN102146065A CN201110025008XA CN201110025008A CN102146065A CN 102146065 A CN102146065 A CN 102146065A CN 201110025008X A CN201110025008X A CN 201110025008XA CN 201110025008 A CN201110025008 A CN 201110025008A CN 102146065 A CN102146065 A CN 102146065A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ring
- reaction
- diketopiperazine
- purity
- amino acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- BXRNXXXXHLBUKK-UHFFFAOYSA-N piperazine-2,5-dione Chemical compound O=C1CNC(=O)CN1 BXRNXXXXHLBUKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 21
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 17
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 43
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 239000000047 product Substances 0.000 claims abstract description 12
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 9
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 claims abstract description 4
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims abstract description 4
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- 239000012043 crude product Substances 0.000 claims abstract 2
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims abstract 2
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 60
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 48
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-diisopropylethylamine Substances CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000004744 fabric Substances 0.000 claims description 16
- AVQQQNCBBIEMEU-UHFFFAOYSA-N 1,1,3,3-tetramethylurea Chemical compound CN(C)C(=O)N(C)C AVQQQNCBBIEMEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 9
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 9
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 8
- 238000003810 ethyl acetate extraction Methods 0.000 claims description 8
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 claims description 8
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 7
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 3
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 claims description 3
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 2
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 2
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 claims description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical class [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical class [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims 1
- 125000004744 butyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 abstract description 9
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 abstract 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 abstract 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 abstract 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract 1
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 17
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 12
- KUGLDBMQKZTXPW-JEDNCBNOSA-N methyl (2s)-2-amino-3-methylbutanoate;hydrochloride Chemical compound Cl.COC(=O)[C@@H](N)C(C)C KUGLDBMQKZTXPW-JEDNCBNOSA-N 0.000 description 8
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- -1 saturated sodium bicarbonate, saturated sodium-chloride Chemical class 0.000 description 7
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 5
- HQEIPVHJHZTMDP-JEDNCBNOSA-N methyl (2s)-pyrrolidine-2-carboxylate;hydrochloride Chemical compound Cl.COC(=O)[C@@H]1CCCN1 HQEIPVHJHZTMDP-JEDNCBNOSA-N 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 3
- ZYJPUMXJBDHSIF-NSHDSACASA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ZYJPUMXJBDHSIF-NSHDSACASA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N N(alpha)-t-butoxycarbonyl-L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- CNBUSIJNWNXLQQ-NSHDSACASA-N (2s)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 CNBUSIJNWNXLQQ-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002611 lead compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- JTHRRMFZHSDGNJ-UHFFFAOYSA-N piperazine-2,3-dione Chemical compound O=C1NCCNC1=O JTHRRMFZHSDGNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明涉及一种在液相体系中大量制备高纯度二酮哌嗪环肽分子的方法，核心技术方案包括以下步骤：1)N-叔丁氧羰基保护的氨基酸与C端用甲酯保护的氨基酸反应，生成线性二肽；2)线性二肽只需经过萃取，便直接在酸性条件下脱去N端保护基；3)脱保护的线性二肽直接在碱性条件下进行环化反应，粗产物经乙醚研磨，得到高纯度的二酮哌嗪环肽；4)反应进程及终产物的纯度用HPLC分析检测。本发明用便宜易得的保护氨基酸为原料，操作简单易行，后处理方便，产物纯度可达99％。该工艺适合工业化生产，具有可观的经济实用价值，在药物合成上有广泛的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及一种具有生物活性的高纯度二酮哌嗪环肽的制备方法，属于药物化学合成领域。
背景技术
二酮哌嗪环肽是通过内酰胺桥连方式形成的首尾成环的环二肽，其核心骨架具有稳定的哌嗪二酮(Diketopipcrazine)六元环结构(式I)，而且不再有游离的氨基与羧基，因此可以较好地耐受蛋白水解酶的降解作用。此外，二酮哌嗪结构具有较密集的氢键供体及氢键受体，而氢键正是药物分子与蛋白靶点相互作用的重要形式之一，因此二酮哌嗪结构是一种非常重要的药效基团。已经发现的天然产物中，不少具有二酮哌嗪环肽结构。在新药发现与研究中，二酮哌嗪环肽可作为先导化合物组合化学合成的模板。
已报道的二酮哌嗪环肽的合成以固相合成法为主。但固相合成成本较高，只适用于少量制备。
本发明提出了一种简单高效地制备二酮哌嗪环肽(式I)的方法，中间产物不需要柱层析纯化，操作简单；环合反应用HPLC检测，反应进程清晰可见；后处理方便易行，产品纯度达99％。，可用于大量制备二酮哌嗪环肽产物。
发明内容
本发明的目的是提供一种高纯度二酮哌嗪环肽的制备方法，使之能高效、低成本并且可以大量的制备。
本发明给出制备二酮哌嗪环肽的合成路线及步骤如下：
反应条件与试剂：a)1-羟基苯并三氮唑(HOBT)，N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)，O-苯并三氮唑-N，N，N，N-四甲脲六氟磷酸酯(HBTU)，二甲基甲酰胺(DMF)，0℃～室温；b)三氟乙酸/二氯甲烷＝33％，室温；c)三乙胺，甲醇，70℃或者室温.
1)一个N端用叔丁氧羰基保护的氨基酸与一个C端用甲酯保护的氨基酸溶于二甲基甲酰胺，在1-羟基苯并三氮唑、N，N-二异丙基乙胺、O-苯并三氮唑-N，N，N，N-四甲脲六氟磷酸酯的作用下反应，反应结束后，反应液用乙酸乙酯萃取，有机相用1mol/L盐酸、饱和碳酸氢钠、饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到线性二肽。
2)无需硅胶柱层析纯化，线性二肽粗产品在三氟乙酸/二氯甲烷中脱去N端保护基。
3)将脱保护的线性二肽溶于甲醇，在碱性条件下进行环合反应，用HPLC来监测反应进程。反应结束后，浓缩反应液得到的固体用甲醇或者乙醚研磨、过滤，即可得到高纯度的产物。
4)用本发明所述的方法可以大量制备多种氨基酸组合的二酮哌嗪环肽，包括以下结构：环(L-酪-L-缬)，环(L-亮-L-缬)，环(L-异亮-L-缬)，(L-苯丙-L-缬)，环(L-苯丙-L-脯)，环(L-亮-L-脯)。
5)环合反应及二酮哌嗪环肽产物纯度用反相HPLC来监测分析。所用色谱柱型号：SinoChrom，ODS-BP，4.6mm*200mm，5μ，
，流动相：甲醇-水体系，流速：1mL/min，检测波长：UV 214nm。
本发明给出的合成路线原料便宜易得，反应操作简单，后处理容易，生产成本降低，产品的总产率高，可用于大量制备二酮哌嗪环肽，具有可观的应用前景与经济价值。
具体实施方式
实施例1：合成环(L-酪-L-缬)
1.将叔丁氧羰基保护的酪氨酸(Boc-Tyr-OH)(7.03g，25mmol)、缬氨酸甲酯盐酸盐(H-Val-OMe·HCl)(4.19g，25mmol)、1-羟基苯并三氮唑(HOBT)(3.55g，26.3mmol)溶于二甲基甲酰胺(DMF)(200mL)中，冰浴下滴加N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)(13.9mL，80mmol)，搅拌15分钟后加入O-苯并三氮唑-N，N，N，N-四甲脲六氟磷酸酯(HBTU)(9.97g，26.3mmol)，反应30分钟后撤去冰浴，室温下反应6小时。反应液用乙酸乙酯萃取，有机相分别用1N盐酸、饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到白色固体9.47g。
2.将得到的白色固体溶于二氯甲烷(200mL)中，冰浴下搅拌5min，缓慢加入15mL三氟乙酸，2小时后TLC检测(石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1)反应完全，反应液用旋转蒸发仪减压浓缩，得到白色固体9.60g。
3.将得到的白色固体溶于100mL甲醇中，缓慢滴加11.2mL(80mmol)三乙胺，70℃回流反应15小时，反应液用HPLC监测，发现原料峰消失，反应完全。旋干甲醇，得到白色固体，加入100mL甲醇研磨，过滤，得到环(L-酪-L-缬)产物5.90g，产率为90％，纯度为97.6％。
1H NMR：(500MHz，DMSO)δ9.13(s，1H)，8.01(s，1H)，7.88(s，1H)，6.95(d，J＝13.0，2H)，6.62(d，J＝13.0，2H)，4.10(s，1H)，3.52(s，1H)，3.02(m，1H)，2.76(m，1H)，1.74(s，1H)，0.68(d，J＝11.0，3H)，0.33(d，J＝11.0，3H)；MS(ESI-)m/z：261.0[M-H]+.
实施例2：合成环(L-亮-L-缬)
1.将叔丁氧羰基保护的亮氨酸(Boc-Leu-OH)(5.78g，25mmol)、缬氨酸甲酯盐酸盐(H-Val-OMe·HCl)、1-羟基苯并三氮唑(HOBT)(3.55g，26.3mmol)溶于二甲基甲酰胺(DMF)(200mL)中，冰浴下滴加N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)(13.9mL，80mmol)，搅拌15分钟后加入O-苯并三氮唑-N，N，N，N-四甲脲六氟磷酸酯(HBTU)(9.97g，26.3mmol)，反应30分钟后撤去冰浴，室温下反应6小时。反应液用乙酸乙酯萃取，有机相分别用1N盐酸、饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到白色固体8.18g。
2.将得到的白色固体溶于二氯甲烷(200mL)中，冰浴下搅拌5min，缓慢加入15mL三氟乙酸，2小时后TLC检测(石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1)反应完全，反应液用旋转蒸发仪减压浓缩，得到油状物8.26g。
3.将得到的油状物溶于100mL甲醇中，缓慢滴加11.2mL(80mmol)三乙胺，70℃回流反应12小时，反应液用HPLC监测，发现原料峰消失，反应完全。旋干甲醇，得到白色固体，加入100mL乙醚研磨，过滤，得到环(L-苯丙-L-缬)产物4.40g，产率为83％，纯度为98.9％。
1H NMR：(500MHz，DMSO)δ8.13(s，1H)，8.00(s，1H)，3.75(t，J＝3.6，1H)，3.61(s，1H)，2.11(m，1H)，1.85(m，1H)，1.63(m，1H)，1.44(m，1H)，0.95(d，J＝7.1，3H)，0.88(m，9H)；MS(ESI+)m/z：213.1[M+H]+，235.1[M+Na]+.
实施例3：合成环(L-异亮-L-缬)
1.将叔丁氧羰基保护的异亮氨酸(Boc-Ile-OH·1/2)水(6.01g，25mmol)、缬氨酸甲酯盐酸盐(H-Val-OMe·HCl)、1-羟基苯并三氮唑(HOBT)(3.55g，26.3mmol)溶于二甲基甲酰胺(DMF)(200mL)中，冰浴下滴加N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)(13.9mL，80mmol)，搅拌15分钟后加入O-苯并三氮唑-N，N，N，N-四甲脲六氟磷酸酯(HBTU)(9.97g，26.3mmol)，反应30分钟后撤去冰浴，室温下反应过夜小时。反应液用乙酸乙酯萃取，有机相分别用1N盐酸、饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到油状物7.75g。
2.将得到的油状物溶于二氯甲烷(200mL)中，冰浴下搅拌5min，缓慢加入15mL三氟乙酸，2小时后TLC检测(石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1)反应完全，反应液用旋转蒸发仪减压浓缩，得到油状物7.90g。
3.将得到的油状物溶于100mL甲醇中，缓慢滴加11.2mL(80mmol)三乙胺，70℃回流反应13小时，反应液用HPLC监测，发现原料峰消失，反应完全。旋干甲醇，得到白色固体，加入15mL甲醇研磨，过滤，得到环(L-异亮-L-缬)产物4.03g，产率为76％，纯度为99.0％。
1H NMR：(500MHz，DMSO)δ7.90(s，1H)，7.88(s，1H)，3.75(s，1H)，3.68(s，1H)，2.19(m，1H)，1.87(m，1H)，1.42(m，1H)，1.21(m，1H)，0.96(d，J＝7.1，3H)，0.93(d，J＝7.1，3H)，0.88(m，6H)；MS(ESI+)m/z：213.1[M+H]+，235.1[M+Na]+.
实施例4：合成环(L-苯丙-L-缬)
1.将叔丁氧羰基保护的苯丙氨酸(Boc-Phe-OH)(6.63g，25mmol)、缬氨酸甲酯盐酸盐(H-Val-OMe·HCl)、1-羟基苯并三氮唑(HOBT)(3.55g，26.3mmol)溶于二甲基甲酰胺(DMF)(200mL)中，冰浴下滴加N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)(13.9mL，80mmol)，搅拌15分钟后加入O-苯并三氮唑-N，N，N，N-四甲脲六氟磷酸酯(HBTU)(9.97g，26.3mmol)，反应30分钟后撤去冰浴，室温下反应6小时。反应液用乙酸乙酯萃取，有机相分别用1N盐酸、饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到白色固体8.89g。
2.将得到的白色固体溶于二氯甲烷(200mL)中，冰浴下搅拌5min，缓慢加入15mL三氟乙酸，2小时后TLC检测(石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1)反应完全，反应液用旋转蒸发仪减压浓缩，得到白色固体8.94g。
3.将得到的白色固体溶于100mL甲醇中，缓慢滴加11.2mL(80mmol)三乙胺，70℃回流反应10小时，反应液用HPLC监测，发现原料峰消失，反应完全。旋干甲醇，得到白色固体，加入100mL乙醚研磨，过滤，得到环(L-苯丙-L-缬)产物5.5373g，产率为87％，纯度为99.7％。
1H NMR：(500MHz，DMSO)δ8.05(s，1H)，7.87(s，1H)，7.25-7.17(m，5H)，4.20(s，1H)，3.52(s，2H)，3.13(dd，J＝13.5，4.2Hz 1H)，2.88(dd，J＝13.5，4.91H)，0.65(d，J＝7.0Hz，3H)，0.29(d，J＝7.0Hz，3H)；MS(ESI+)m/z：247.1[M+H]+，269.0[M+Na]+.
实施例5：合成环(L-苯丙-L-脯)
1.将将叔丁氧羰基保护的苯丙氨酸(Boc-Phe-OH)(6.63g，25mmol)、脯氨酸甲酯盐酸盐(H-Pro-OMe·HCl)(4.14g，25mmol)、1-羟基苯并三氮唑(HOBT)(3.55g，26.3mmol)溶于二甲基甲酰胺(DMF)(200mL)中，冰浴下滴加N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)(13.9mL，80mmol)，搅拌15分钟后加入O-苯并三氮唑-N，N，N，N-四甲脲六氟磷酸酯(HBTU)(9.97g，26.3mmol)，反应30分钟后撤去冰浴，室温下反应6小时。反应液用乙酸乙酯萃取，有机相分别用1N 盐酸、饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到油状物10.81g。
2.将得到的油状物10.81g溶于二氯甲烷(200mL)中，冰浴下搅拌5min，缓慢加入15mL三氟乙酸，2小时后TLC检测(石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1)反应完全，反应液用旋转蒸发仪减压浓缩，得到油状残留物10.90g。
3.将得到的油状物溶于100mL甲醇中，缓慢滴加11.2mL(80mmol)三乙胺，室温下反应15小时，反应液用HPLC监测，发现原料峰消失，反应完全。旋干甲醇，得到白色固体，先加入5ml甲醇研磨，紧接着再加入100mL乙醚研磨，过滤，得到环(L-苯丙-L-脯)产物4.58g，产率为75％，纯度为99.8％。
1H NMR：(500MHz，DMSO)δ7.97(s，1H)，7.27-7.19(m，5H)，4.35(t，J＝8.0，1H)，4.07(t，J＝13.5，1H)，3.40(m，1H)，3.24(m，1H)，3.02(m，2H)，2.02(m，1H)，1.72(m，2H)，1.42(m，1H)；MS(ESI+)m/z：245.1[M+H]+，267.1[M+Na]+.
实施例6：合成环(L-亮-L-脯)
1.将叔丁氧羰基保护的亮氨酸(Boc-Leu-OH)(5.78g，25mmol)、脯氨酸甲酯盐酸盐(H-Pro-OMe·HCl)(4.14g，25mmol)、1-羟基苯并三氮唑(HOBT)(3.55g，26.3mmol)溶于二甲基甲酰胺(DMF)(200mL)中，冰浴下滴加N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)(13.9mL，80mmol)，搅拌15分钟后加入O-苯并三氮唑-N，N，N，N-四甲脲六氟磷酸酯(HBTU)(9.97g，26.3mmol)，反应30分钟后撤去冰浴，室温下反应6小时。反应液用乙酸乙酯萃取，有机相分别用1N盐酸、饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到油状物8.22g。
2.将得到的油状物溶于二氯甲烷(200mL)中，冰浴下搅拌5min，缓慢加入15mL三氟乙酸，2小时后TLC检测(石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1)反应完全，反应液用旋转蒸发仪减压浓缩，得到油状物8.29g。
3.将得到的油状物溶于100mL甲醇中，缓慢滴加11.2mL(80mmol)三乙胺，室温下反应18小时，反应液用HPLC监测，发现原料峰消失，反应完全。旋干甲醇，得到油状物，将此油状物用一个较短的硅胶柱层析进行粗纯化，洗脱剂为4％甲醇/二氯甲烷，然后浓缩，得到白色固体，再加入100mL乙醚研磨，过滤，得到环(L-亮-L-脯)产物4.52g，产率为86％，纯度为99.8％。
1H NMR：(500MHz，DMSO)δ8.01(s，1H)，4.19(t，J＝13.2，1H)，4.00(t，J＝10.0，1H)，3.34(m，2H)，2.11(m，1H)，1.84(m，5H)，1.35(m，1H)，0.86(dd，J＝10.8，4.4，1H)；MS(ESI+)m/z：211.2[M+H]+，233.2[M+Na]+.
Claims (7)
1.一种高纯度二酮哌嗪环肽的制备方法，步骤如下：
1)N端用叔丁氧羰基保护的氨基酸与C端用甲酯保护的氨基酸反应，生成线性二肽。
2)线性二肽只需经过萃取处理，便直接在酸性条件下脱去N端保护基。
3)脱保护的线性二肽粗产品直接在碱性条件下进行环化反应，通过研磨得到高纯度的二酮哌嗪环肽。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：保护氨基酸生成线性二肽的反应是在1-羟基苯并三氮唑、N，N-二异丙基乙胺、O-苯并三氮唑-N，N，N，N-四甲脲六氟磷酸酯的作用下完成的，所用溶剂是二甲基甲酰胺。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：生成线性二肽的反应完成后，反应液用乙酸乙酯萃取，有机相依次用1mol/L盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩，不需要柱层析纯化，直接在酸性条件下脱去N端叔丁氧羰保护基。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：脱保护线性二肽的环合反应是在三乙胺作用下完成的，反应温度为25℃-70℃，所用溶剂是甲醇。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：环合反应用反相HPLC来监测。使用色谱柱型号：SinoChrom，ODS-BP，4.6mm*200mm，5μ，流动相为甲醇-水体系。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：环合反应浓缩后得到的粗产物是用甲醇或者乙醚研磨的方法来得到高纯产品，无需硅胶柱层析。
7.根据权利要求1-7任一所述的方法，其特征在于：所述二酮哌嗪环肽包括：环(L-酪-L-缬)，环(L-亮-L-缬)，环(L-异亮-L-缬)，(L-苯丙-L-缬)，环(L-苯丙-L-脯)，环(L-亮-L-脯)。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201110025008XA CN102146065A (zh) | 2011-01-24 | 2011-01-24 | 一种高纯度二酮哌嗪环肽的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201110025008XA CN102146065A (zh) | 2011-01-24 | 2011-01-24 | 一种高纯度二酮哌嗪环肽的制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102146065A true CN102146065A (zh) | 2011-08-10 |
Family
ID=44420556
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201110025008XA Pending CN102146065A (zh) | 2011-01-24 | 2011-01-24 | 一种高纯度二酮哌嗪环肽的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102146065A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107236021A (zh) * | 2017-06-12 | 2017-10-10 | 湖北泓肽生物科技有限公司 | 一种多肽衍生物的合成方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4331595A (en) * | 1980-06-23 | 1982-05-25 | Ortho Pharmaceutical Corporation | Immunoregulatory diketopiperazine compounds |
| CN101143852A (zh) * | 2006-09-13 | 2008-03-19 | 深圳市翰宇生物工程有限公司 | 一种制备天冬氨脯环二肽的方法 |
-
2011
- 2011-01-24 CN CN201110025008XA patent/CN102146065A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4331595A (en) * | 1980-06-23 | 1982-05-25 | Ortho Pharmaceutical Corporation | Immunoregulatory diketopiperazine compounds |
| CN101143852A (zh) * | 2006-09-13 | 2008-03-19 | 深圳市翰宇生物工程有限公司 | 一种制备天冬氨脯环二肽的方法 |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| 《J.Med.Chem.》 19930831 Brian R.de Costa，等 Synthesis and Evaluation of Conformationally Restricted N-[2-(3 ,4- Dichlorophenyl)ethyl]-N-methyl-2-(1-pyrrolidiny1)ethylamines at sigma Receptors. 2. Piperazines, Bicyclic Amines, Bridged Bicyclic Amines, and Miscellaneous Compounds ACS 2313,2318 权利要求1-7 第36卷, 第16期 * |
| 《Macromolecules》 20090130 Kayo Terada,等 Synthesis and Secondary Structure of Polyacetylenes Carrying Diketopiperazine Moieties. The First Example of Helical Polymers Stabilized by s-cis-Amide-Based Hydrogen Bonding 914-915 权利要求1,3-6 第42卷, 第4期 * |
| BRIAN R.DE COSTA，等: "Synthesis and Evaluation of Conformationally Restricted N-[2-(3 ,4- Dichlorophenyl)ethyl]-N-methyl-2-(1-pyrrolidiny1)ethylamines at σ Receptors. 2. Piperazines, Bicyclic Amines, Bridged Bicyclic Amines, and Miscellaneous Compounds", 《J.MED.CHEM.》, vol. 36, no. 16, 31 August 1993 (1993-08-31), pages 2313 - 2318, XP002132464, DOI: doi:10.1021/jm00068a007 * |
| HABEEBULLAH THAJUDEEN,等: "An efficient green synthesis of proline-based cyclic dipeptides under", 《TETRAHEDRON LETTERS》, vol. 51, 7 January 2010 (2010-01-07), pages 1304 * |
| JAMES P. CAIN,等: "Design, synthesis, and biological evaluation of a new class of small", 《BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS》, vol. 16, 22 August 2006 (2006-08-22), pages 5463 * |
| KAYO TERADA,等: "Synthesis and Secondary Structure of Polyacetylenes Carrying Diketopiperazine Moieties. The First Example of Helical Polymers Stabilized by s-cis-Amide-Based Hydrogen Bonding", 《MACROMOLECULES》, vol. 42, no. 4, 30 January 2009 (2009-01-30), pages 914 - 915 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107236021A (zh) * | 2017-06-12 | 2017-10-10 | 湖北泓肽生物科技有限公司 | 一种多肽衍生物的合成方法 |
| CN107236021B (zh) * | 2017-06-12 | 2020-12-01 | 湖北泓肽生物科技有限公司 | 一种多肽衍生物的合成方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102428097B (zh) | 地加瑞克的制造方法 | |
| CN101279998B (zh) | 一种c-端乙胺化多肽及其衍生物的制备方法 | |
| CN106589071B (zh) | 一种地加瑞克的合成方法 | |
| CN106188231B (zh) | 帕西瑞肽五肽中间体的合成与应用 | |
| RU2664545C2 (ru) | Способ получения синтетического пентапептида | |
| JPH0357118B2 (zh) | ||
| CN114213503A (zh) | 一种类蛇毒三肽的合成方法 | |
| CN114369139B (zh) | 类蛇毒三肽的制备方法 | |
| CN103665109B (zh) | 成骨生长肽碳端五肽的合成方法 | |
| CN108440653A (zh) | 一种布舍瑞林化合物的合成方法 | |
| CN113045623A (zh) | 一种蛇毒肽syn-ake的液相合成方法 | |
| CN102146065A (zh) | 一种高纯度二酮哌嗪环肽的制备方法 | |
| ITMI20120359A1 (it) | Procedimento per la preparazione di intermedi utili nella preparazione di un inibitore delle proteasi virali | |
| WO2021026800A1 (zh) | 醋酸地加瑞克的合成方法 | |
| CN111269261A (zh) | Tsbp辅助基团及基团辅助的脑啡肽及其衍生物的液相全合成方法 | |
| CN113024637B (zh) | 一种以水溶性炔酰胺作为缩合剂制备卡非佐米的方法 | |
| CN111285921A (zh) | Bdk辅助基团及基于bdk辅助基团的普卡那肽及类似物的液相全合成方法 | |
| JP5807140B1 (ja) | 合成ペンタペプチドの製造法 | |
| CN117567566B (zh) | 一种环六肽-9的液相合成工艺 | |
| JPH08119916A (ja) | Ｎ−保護グルタミン酸γ−誘導体の選択的製造法 | |
| CN107698663B (zh) | 一种维洛丝肽的液相合成方法 | |
| CN112851536B (zh) | 一种利用嘧啶类缩合剂点击构建酰胺键的方法及其在酰胺和多肽合成中的应用 | |
| CN109438363B (zh) | 一种环(亮氨酰-精氨酰)二肽盐的液相高纯度规模化合成方法 | |
| CN112830957B (zh) | 一种制备卡非佐米的方法 | |
| CN108864252B (zh) | 制备nrx-1074的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20110810 |