CN111285921A - Bdk辅助基团及基于bdk辅助基团的普卡那肽及类似物的液相全合成方法 - Google Patents
Bdk辅助基团及基于bdk辅助基团的普卡那肽及类似物的液相全合成方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111285921A CN111285921A CN202010089297.9A CN202010089297A CN111285921A CN 111285921 A CN111285921 A CN 111285921A CN 202010089297 A CN202010089297 A CN 202010089297A CN 111285921 A CN111285921 A CN 111285921A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bdk
- fmoc
- cys
- tbu
- trt
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 47
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 title claims abstract description 15
- 238000006257 total synthesis reaction Methods 0.000 title abstract description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 66
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 42
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims abstract description 28
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 20
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 20
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 17
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims abstract description 15
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims abstract description 15
- 230000009471 action Effects 0.000 claims abstract description 5
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims abstract description 4
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 66
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 59
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 56
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 40
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 38
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 34
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 29
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 23
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 22
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 21
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 21
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 20
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 20
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- -1 diphenylphosphinyl Chemical group 0.000 claims description 18
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 17
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- KLBPUVPNPAJWHZ-UMSFTDKQSA-N (2r)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-tritylsulfanylpropanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)SC(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 KLBPUVPNPAJWHZ-UMSFTDKQSA-N 0.000 claims description 15
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 15
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 15
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 15
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 13
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 12
- OTKXCALUHMPIGM-FQEVSTJZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-5-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-5-oxopentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 OTKXCALUHMPIGM-FQEVSTJZSA-N 0.000 claims description 11
- CSMYOORPUGPKAP-IBGZPJMESA-N (2r)-3-(acetamidomethylsulfanyl)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CSCNC(=O)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 CSMYOORPUGPKAP-IBGZPJMESA-N 0.000 claims description 10
- UGNIYGNGCNXHTR-SFHVURJKSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-methylbutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 UGNIYGNGCNXHTR-SFHVURJKSA-N 0.000 claims description 10
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 10
- FODJWPHPWBKDON-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-4-oxobutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 FODJWPHPWBKDON-IBGZPJMESA-N 0.000 claims description 9
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 claims description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 claims description 8
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 8
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 claims description 8
- CBPJQFCAFFNICX-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-methylpentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 CBPJQFCAFFNICX-IBGZPJMESA-N 0.000 claims description 7
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 claims description 7
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 claims description 7
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims description 7
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims description 7
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000012264 purified product Substances 0.000 claims description 7
- YUGBZNJSGOBFOV-INIZCTEOSA-N (2s)-4-amino-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-oxobutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 YUGBZNJSGOBFOV-INIZCTEOSA-N 0.000 claims description 6
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical class 0.000 claims description 6
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 6
- 229940125898 compound 5 Drugs 0.000 claims description 6
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 claims description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 6
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 claims description 6
- QWXZOFZKSQXPDC-NSHDSACASA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 QWXZOFZKSQXPDC-NSHDSACASA-N 0.000 claims description 5
- LZOLWEQBVPVDPR-VLIAUNLRSA-N (2s,3r)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]butanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H]([C@H](OC(C)(C)C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 LZOLWEQBVPVDPR-VLIAUNLRSA-N 0.000 claims description 5
- RWCCWEUUXYIKHB-UHFFFAOYSA-N benzophenone Chemical class C=1C=CC=CC=1C(=O)C1=CC=CC=C1 RWCCWEUUXYIKHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims description 5
- NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)NCC(=O)O)C3=CC=CC=C3C2=C1 NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 claims description 4
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims description 4
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N hydroxymethyl benzene Natural products OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims description 4
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims description 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 3
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011630 iodine Substances 0.000 claims description 3
- 238000007243 oxidative cyclization reaction Methods 0.000 claims description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 3
- 238000004064 recycling Methods 0.000 claims description 3
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 claims description 3
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 claims description 3
- 238000010008 shearing Methods 0.000 claims description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 3
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- AQLJVWUFPCUVLO-UHFFFAOYSA-N urea hydrogen peroxide Chemical compound OO.NC(N)=O AQLJVWUFPCUVLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 2
- URLZCHNOLZSCCA-VABKMULXSA-N Leu-enkephalin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=CC=C1 URLZCHNOLZSCCA-VABKMULXSA-N 0.000 claims description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 claims description 2
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000004210 ether based solvent Substances 0.000 claims description 2
- 238000003810 ethyl acetate extraction Methods 0.000 claims description 2
- 125000005519 fluorenylmethyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 claims description 2
- 125000000913 palmityl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 abstract description 19
- 239000002699 waste material Substances 0.000 abstract description 12
- 239000011347 resin Substances 0.000 abstract description 9
- 229920005989 resin Polymers 0.000 abstract description 9
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 abstract description 9
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 7
- 108091007643 Phosphate carriers Proteins 0.000 abstract description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 6
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 abstract description 5
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 abstract description 4
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 abstract description 4
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 3
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 abstract description 2
- 239000012024 dehydrating agents Substances 0.000 abstract description 2
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 abstract description 2
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 47
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 42
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 42
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 26
- 206010010774 Constipation Diseases 0.000 description 20
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 18
- 238000004679 31P NMR spectroscopy Methods 0.000 description 15
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 14
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 12
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 108010018859 plecanatide Proteins 0.000 description 10
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 9
- NSPHQWLKCGGCQR-DLJDZFDSSA-N (2s)-2-[[(1r,4s,7s,10s,13s,16r,21r,27s,34r,37s,40s)-10-(2-amino-2-oxoethyl)-34-[[(2s)-4-carboxy-2-[[(2s)-3-carboxy-2-[[(2s)-2,4-diamino-4-oxobutanoyl]amino]propanoyl]amino]butanoyl]amino]-37-(2-carboxyethyl)-27-[(1r)-1-hydroxyethyl]-4-methyl-40-(2-methylp Chemical compound N1C(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)CSSC[C@@H]2NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]1CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC2=O NSPHQWLKCGGCQR-DLJDZFDSSA-N 0.000 description 8
- 229950008515 plecanatide Drugs 0.000 description 8
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 8
- 102100034605 Atrial natriuretic peptide receptor 3 Human genes 0.000 description 7
- 101000924488 Homo sapiens Atrial natriuretic peptide receptor 3 Proteins 0.000 description 7
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 7
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 208000002551 irritable bowel syndrome Diseases 0.000 description 6
- KXGCNMMJRFDFNR-WDRJZQOASA-N linaclotide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H]3CSSC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N2)=O)CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@H](CC(N)=O)NC3=O)C(=O)N[C@H](C(NCC(=O)N1)=O)[C@H](O)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 KXGCNMMJRFDFNR-WDRJZQOASA-N 0.000 description 6
- 108010024409 linaclotide Proteins 0.000 description 6
- 229960000812 linaclotide Drugs 0.000 description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910001868 water Inorganic materials 0.000 description 6
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 5
- KJYAFJQCGPUXJY-UMSFTDKQSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-oxo-4-(tritylamino)butanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C(=O)NC(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 KJYAFJQCGPUXJY-UMSFTDKQSA-N 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 4
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 4
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 3
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 3
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 3
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Natural products OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 2
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001208007 Procas Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- TYQCGQRIZGCHNB-JLAZNSOCSA-N l-ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(O)=C(O)C1=O TYQCGQRIZGCHNB-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 239000008141 laxative Substances 0.000 description 2
- 229940125722 laxative agent Drugs 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 230000000580 secretagogue effect Effects 0.000 description 2
- 238000003746 solid phase reaction Methods 0.000 description 2
- 108010004034 stable plasma protein solution Proteins 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- SJMPVWVIVWEWJK-AXEIBBKLSA-N uroguanylin Chemical compound SC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O SJMPVWVIVWEWJK-AXEIBBKLSA-N 0.000 description 2
- VXGGBPQPMISJCA-STQMWFEESA-N (2s)-2-[[(2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)propanoyl]amino]propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 VXGGBPQPMISJCA-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical class C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxybenzothiazole Chemical compound C1=CC=C2SC(O)=NC2=C1 YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IIVWHGMLFGNMOW-UHFFFAOYSA-N 2-methylpropane Chemical compound C[C](C)C IIVWHGMLFGNMOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NPFYZDNDJHZQKY-UHFFFAOYSA-N 4-Hydroxybenzophenone Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C(=O)C1=CC=CC=C1 NPFYZDNDJHZQKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical class [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WGEWYYPHYMGJNT-HLHYUOOASA-N CC(C)C[C@@H](NC(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(=O)N)C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N1)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](N)CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)C(=O)O Chemical compound CC(C)C[C@@H](NC(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(=O)N)C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N1)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](N)CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)C(=O)O WGEWYYPHYMGJNT-HLHYUOOASA-N 0.000 description 1
- 241001518005 Callisto Species 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N Crotonoside Natural products C1=NC2=C(N)NC(=O)N=C2N1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N 0.000 description 1
- 206010011732 Cyst Diseases 0.000 description 1
- NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N D-guanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(CO)C(O)C1O NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000792859 Enema Species 0.000 description 1
- 239000007821 HATU Substances 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VWBYXJRDIQCSLW-UHFFFAOYSA-N O=[P](c1ccccc1)c1ccccc1 Chemical group O=[P](c1ccccc1)c1ccccc1 VWBYXJRDIQCSLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016462 Phosphate Transport Proteins Human genes 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102400000230 Uroguanylin Human genes 0.000 description 1
- 101800000255 Uroguanylin Proteins 0.000 description 1
- QPQGTZMAQRXCJW-UHFFFAOYSA-N [chloro(phenyl)phosphoryl]benzene Chemical compound C=1C=CC=CC=1P(=O)(Cl)C1=CC=CC=C1 QPQGTZMAQRXCJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000012964 benzotriazole Substances 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 description 1
- 230000013872 defecation Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000005595 deprotonation Effects 0.000 description 1
- 238000010537 deprotonation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 108010022410 dolcanatide Proteins 0.000 description 1
- 229950008818 dolcanatide Drugs 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000007920 enema Substances 0.000 description 1
- 229940079360 enema for constipation Drugs 0.000 description 1
- 238000011841 epidemiological investigation Methods 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- WGFOBBZOWHGYQH-MXHNKVEKSA-N lubiprostone Chemical compound O1[C@](C(F)(F)CCCC)(O)CC[C@@H]2[C@@H](CCCCCCC(O)=O)C(=O)C[C@H]21 WGFOBBZOWHGYQH-MXHNKVEKSA-N 0.000 description 1
- 229960000345 lubiprostone Drugs 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 1
- 239000012454 non-polar solvent Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 238000009522 phase III clinical trial Methods 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000012495 positive regulation of renal sodium excretion Effects 0.000 description 1
- 239000000955 prescription drug Substances 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 230000006340 racemization Effects 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 230000036632 reaction speed Effects 0.000 description 1
- 239000000018 receptor agonist Substances 0.000 description 1
- 229940044601 receptor agonist Drugs 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000009877 rendering Methods 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L sodium carbonate Substances [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008143 stimulant laxative Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WHRNULOCNSKMGB-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran thf Chemical compound C1CCOC1.C1CCOC1 WHRNULOCNSKMGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N thioanisole Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/28—Phosphorus compounds with one or more P—C bonds
- C07F9/30—Phosphinic acids [R2P(=O)(OH)]; Thiophosphinic acids ; [R2P(=X1)(X2H) (X1, X2 are each independently O, S or Se)]
- C07F9/32—Esters thereof
- C07F9/3205—Esters thereof the acid moiety containing a substituent or a structure which is considered as characteristic
- C07F9/3229—Esters of aromatic acids (P-C aromatic linkage)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/28—Phosphorus compounds with one or more P—C bonds
- C07F9/30—Phosphinic acids [R2P(=O)(OH)]; Thiophosphinic acids ; [R2P(=X1)(X2H) (X1, X2 are each independently O, S or Se)]
- C07F9/32—Esters thereof
- C07F9/3258—Esters thereof the ester moiety containing a substituent or a structure which is considered as characteristic
- C07F9/3282—Esters with hydroxyaryl compounds
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明涉及一种BDK辅助基团及基于BDK辅助基团的普卡那肽及其类似物的液相全合成方法，合成步骤：BDK辅助基团替代固相树脂，在偶联脱水剂的作用下与N‑端Fmoc保护的氨基酸的C‑端连接；然后分离纯化、脱除N‑端Fmoc、多肽偶联；重复以上依次偶联上相应的氨基酸，构建普卡那肽及其类似物前体的氨基酸序列；再侧链脱保护、分离纯化得到普卡那肽及其类似物。与目前已有的合成方法相比，本发明兼备了液相和固相合成法的优点，可以更加简便、快捷、节约、高效地合成制备谷胱甘肽，而且磷酸酯类载体可以回收再生并循环利用，降低原材料浪费，减少废弃物污染，节约成本，利于环保。
Description
技术领域
本发明属于有机化学与多肽合成领域，涉及一种BDK辅助基团及基于BDK辅助基团的普卡那肽及其类似物的液相全合成方法。尤其涉及合成普卡那肽及其类似物的一种基于小分子载体，4,4’-双(二苯基次磷酰氧基)二苯甲酮衍生物(4,4’-Bisdiphenylphosphinyloxyl Diphenyl Ketone，BDK结构式如图2中的A)的普卡那肽及其类似物(结构见图2)的液相全合成方法的普卡那肽及其类似物全合成方法(合成路线如图2所示)。本发明以磷酸酯类小分子BDK 衍生物为载体替代固相树脂载体，辅助分离纯化，兼备了液相和固相合成法的优点，可以更加简便、快捷、节约、高效地合成制备普卡那肽及其类似物，而且磷酸酯类载体可以回收并再生利用，降低原材料浪费，减少废弃物污染，节约成本，利于环保。
背景技术
普卡那肽(Plecanatide，结构见图2)，其他译名为皮卡那肽，研究代号SP-304和GCRA 等。最初由美国Callisto制药公司研制，然后转让给Synergy Pharmaceuticals开发的口服鸟苷酸环化酶-C(GC-C)激动剂，于2017年1月19日首先获得美国食品药品管理局(FDA)批准上市，商品名为Trulance。普卡那肽是促尿钠排泄的鸟苷酸环化酶C(Guanylatecyclase-C， GC-C)受体激动药，能调节胃肠道中的酸碱离子，诱导液体转运进入胃肠道，增加胃肠道的蠕动，用于治疗成人胃肠道疾病，如慢性特发性便秘(Chronicidiopathicconstipation，CIC) 和便秘型肠易激综合征(IBS-C)。它是一种合成的人类尿鸟苷蛋白(Uroguanylin，UG)的类似物，含有双二硫键连接的16个氨基酸的环状多肽，英文化学名为： L-asparaginyl-L-α-aspartyl-L-α-glutamyl-L-cysteinyl-L-α-glutamyl-L-leucyl-L-cysteinyl-L-valyl-L -asparaginyl-L-valyl-L-alanyl-L-cysteinyl-L-threonyl-L-glycyl-L-cysteinyl-L-leucine cyclic(4→12), (7→15)-bis(disulfide)，中文化学名为(第4与12位L-半胱氨酸)，(第7与15位L-半胱氨酸) 环状双二硫键结合的L-天冬酰胺酰基-L-α-天冬氨酰基-L-α-谷氨酰基-L-半胱氨酰基-L-α-谷氨酰基-L-亮氨酰基-L-半胱氨酰基-L-缬氨酰基-L-天冬酰胺酰基-L-缬氨酰基-L-丙氨酰基-L-半胱氨酰基-L-苏氨酰甘氨酰-L-甘氨酰基-L-半胱氨酰基-L-亮氨酸。普卡那肽的氨基酸序列与尿鸟苷的相似，只是在尿鸟苷N-端的3位用谷氨酸(Glu)取代天冬氨酸(Asp)。普卡那肽的结构与多卡那肽(Dolcanatide)相似，只是两端的氨基酸被它们各自的D-立体异构体所取代。普卡那肽及其类似物具有四个半胱氨酸(Cys)，能够形成两个分子内二硫键，见文献1： Shailubhai K.,Comiskey S.,Foss J.A.,Feng R.,Barrow L.,Comer G.M,JacoG.S.b.Plecanatide, an Oral Guanylate Cyclase C Agonist Acting Locally in theGastrointestinal Tract,Is Safe and Well-Tolerated in SingleDoses.Dig.Dis.Sci.,2013,58:2580–2586.DOI 10.1007/s10620-013-2684-z.和文献2：Shailubhai K.,Palejwala V.,Arjunan K.P.,Saykhedka S.r, Nefsky B.,J.AFoss,Comiskey S.,Jacob G.S.,S.E.Plevy.Plecanatide and dolcanatide,novel guanylatecyclase-C agonists,ameliorate gastrointestinal inflammation in experimentalmodels of murine colitis.World J.Gastrointest Pharmacol Ther.,2015,6(4):213-222.。Plecanatide的分子量为1.682kDa，与天然尿鸟苷蛋白(Uroguanylin)有1个氨基酸区别，使得其稳定性更好、与 GC-C受体的结合活性增强了8倍，Dolcanatide为Synergy公司开发的第二个Uroguanylin类似物，目前处于溃疡性结肠炎(UC)的Phase 1临床研究阶段，结构如图2。
普卡那肽(Plecanatide)的氨基酸序列为：
普卡那肽类似物尿鸟苷蛋白(Uroguanylin)的氨基酸序列为：
普卡那肽类似物多卡那肽(Dolcanatide)的氨基酸序列为：
获批上市的另一种有效治疗CIC的药物利那洛肽(Linaclotide)的氨基酸序列为：
慢性特发性便秘(CIC)属于下消化道动力学障碍性疾病，其发病与结肠、肛门直肠动力学及精神心理异常有关，也是困扰中、老年人群的常见多发病，不同程度影响现代人的工作和生活质量。流行病学调查结果显示，世界各国和地区因饮食结构和生活习惯各异，CIC的发病率有较大差异。据不完全统计，欧美等发达国家为2.0％～28.0％；中国南北方地区为9.0％～ 20.3％。CIC是排除器质性疾病后的慢性便秘。估计全球有>1亿的人群遭受CIC和IBS-C的痛苦，其中美国人群的患病率约为15％即4500万(其中的CIC约为3300万)。CIC的常见症状为便秘(每周排便少于3次，持续3个月以上)，硬或块状的粪便，排便不完全，排便费力。IBS-C的常见症状为腹痛，便秘，排便不完全。慢性便秘的治疗药物有溶剂性泻药、渗透性泻药、刺激性泻药、促动力药、促分泌药、灌肠药和栓剂(国内常用药物可参见本文后述引用的“便秘治疗药物循证医学证据表”)，见文献3：Chang W-C L,Masih S.,ThadiA.,Patwa V.,Joshi A.,Cooper H S.,Palejwala V A.,Clapper M L.,Shailubhai K.,Plecanatide-mediated activation of guanylate cyclase-C suppressesinflammation-induced colorectal carcinogenesis in Apc+/Min-FCCC mice.WorldJ.Gastrointest Pharmacol Ther.,2017,8(1):47-59.和文献4：Miner Jr P.B.,Koltun WD,Wiener G.J.,Portilla M.De.La.,Prieto B.,Shailubhai K.,Layton M.B.,et al.ARandomized Phase III Clinical Trial of Plecanatide,a Uroguanylin Analog,inPatients With Chronic Idiopathic Constipation.Am.J.Gastroenterol.,2017；112:613–621；doi: 10.1038/ajg.2016.611.。其中，除了TrulanceTM外，国外批准上市的促分泌类处方药还有2个：①
(linaclotide，利那洛肽)：Forest Laboratories公司(现属Allergan,Plc公司)注册产品，同为GC-C激动剂，为14个氨基酸肽(CCEYCCNPACTGCY，Cysbridge：1-6、2-10、 5-13)，2012年8月30日获FDA批准，适应症为成人CIC和IBS-C的治疗，见文献5：Busby R.W.,Ortiz S..Clarification of Linaclotide Pharmacology Presentedin a Recent Clinical Study of Plecanatide.Dig.Dis.Sci.,2014,59:1066–1067.DOI10.1007/s10620-013-2953-x.和文献6： Roque M V,Camilleri M.Linaclotide,asynthetic guanylate cyclase C agonist,for the treatment of functional
gastrointestinal disorders associated with constipation.ExpertRev.Gastroenterol.Hepatol., 2011,5(3):301-310.；②
(lubiprostone，鲁比前列酮)：Sucampo Pharma，LLC公司注册产品，为氯离子C2通道活化剂，分子式为C20H32F2O5，2006年1月31日获FDA批准，适应症为成人CIC和IBS-C等。2016年
的销售额为9.59亿美元，
为4.67亿美元。Synergy公司预计其TrulanceTM产品的市场机会为20亿美元，其市场需求不可小觑。
目前普卡那肽及其类似物是通过生物提取技术得到，生物提取受到现有有限生物资源的影响，提取过程较繁琐，效率低，且比较难得到高纯度的产物，并且在自然环化时无法精准定位。此外，普卡那肽及其类似物也可以采用固相多肽合成法进行制备，相比于生物提取的方法，多肽的化学合成方法具有制备简单、合成效率高、易于自动化等优势，见文献6：Roque M V,Camilleri M.Linaclotide,a synthetic guanylate cyclase C agonist,for the treatment of functional
gastrointestinal disorders associated with constipation.ExpertRev.Gastroenterol.Hepatol., 2011,5(3):301-310.；文献7：陈丰，刘成宝，钱君超，陈志刚.一种普卡那肽的简易合成方法.中国发明专利，CN 107383170A，2017.11.24.；文献8：陈丰，钱君超，刘成宝，陈志刚.一种通过二次环化固相合成普卡那肽的方法.中国发明专利，CN 107383171A，2017.11.24. 和文献9：沈永刚，谢振亮，程益明，沈永良，付坤.一种普卡那肽的固相合成方法.中国发明专利，CN 108440652A，2018.08.24.。自1963年Merrifield教授等发展了多肽固相合成(Solid phase peptide synthesis，SPPS)这一独创性的方法，见文献10：Merrifield R.B.Solid phase peptide synthesis.I.the synthesis oftetrapeptide,J.Am.Chem.Soc.,1963,85(14):2149-2154.和文献11：Lerner R.A.,Retrospective.R.Bruce Merrifield(1921-2006),Science.,2006，313(5783): 57.。由此引起了多肽合成领域的革命性转变，Merrifield教授也因此获得了1984年诺贝尔化学奖。目前多肽的固相化学合成已成为最重要的多肽制备方法之一，SPPS除了可以合成含有天然氨基酸的多肽之外，还能够合成含有非天然氨基酸的多肽，大大增加了合成多肽的多样性和信息量。然而由于多肽的基本结构单元除20种天然氨基酸外还有众多的衍生物，其侧链基团结构差异大，且性质各异，极易造成制备过程中偶联效率低，以及氨基酸残基的消旋、敏感位点的修饰等副反应，因此多肽的高效合成与纯化鉴定仍然是亟需解决的关键问题。
另一方面，普卡那肽及其类似物的现有生产技术都面临的挑战是在合成和纯化过程中必需使用大量溶剂，严重威胁生产安全和环境保护。为了使反应物能够合适地溶解和提高反应速度，通常使用溶剂如DMF、DMAc、NMP或DCM。不幸的是，这些溶剂具有高沸点或高毒性。此外，多肽合成通常需要使用可溶的有机碱，如三乙胺、N、N-二异丙基乙胺或哌啶，用于脱质子铵盐或去除Fmoc保护基。在化学性质上，这些碱是易燃的、腐蚀性的和有毒的。因此，寻找一种方便、高效和环境友好的方法具有很高的兴趣，见文献12：Bonnamour J,Métro. T-X，Martinez.J，Lamaty.F.Green Chem.,2013,15:1116-1120.。在目前已报道的普卡那肽及其类似物的固相合成方法中，见文献7～文献9，偶联反应和脱保护过程都是以非均相的形式进行的，为了让反应进行得彻底完全，通常需要使用3-5倍过量的保护氨基酸原料、偶联试剂、脱保护试剂和巨量溶剂，而且用作载体的固相树脂和用于氨基酸羧基官能团保护的基团，文献13：Kocienski,P.J.Protecting Groups；Georg Thieme Verlag:Stuttgart New York,2004.和文献14：Green,T.W.；Wuts,P.G.M.Protective Groups inOrganic Synthesis；John Wiley and Sons: New York,1999.以及文献15：Isidro-Llobet,A.；Alvarez,M.；Albericio,F.Chem.Rev.2009,109, 2455–2504.，固相树脂和基团在脱除过程中都已遭到破坏或分解掉，完全不能回收再利用，这就不仅造成原料和试剂的极大浪费，大大消耗了生产成本，而且废料的排放必然会造成严重的环境污染问题，无论从经济成本还是从社会效益来看，都还谈不上是最佳方案。
综上所述，在日益提倡经济社会绿色可持续发展理念的今天，探索和发现新的可回收并循环利用的氨基酸羧基保护基团或载体仍然是值得期待的重要研究课题。我们经过系统地筛选研究发现，磷酸酯这类小分子在碱性条件和常温常压下经过偶联剂的介导可与氨基酸的羧基发生反应，可高产率地生成稳定的氨基酸衍生物，用于氨基酸的羧基保护，而且发现磷酸酯类载体及其氨基酸或多肽衍生物在非极性溶剂中很容易结晶而沉淀出来，经简单地分离纯化和碱性水解就可以从其氨基酸或多肽衍生物上将其脱除，回收纯化后可以直接循环利用，实现规模化可持续的绿色生成过程。另一方面，从现有的文献调研和分析来看，这种利用本发明中所涉及的磷酸酯类载体进行氨基酸羧基保护与辅助纯化的策略尚属首创。与已有的氨基酸羧基保护基团或树脂载体相比，具有原料丰富易得并可回收再利用、操作简便、条件温和、设备成本低、三废少的绿色环保优势和特色。
发明内容
要解决的技术问题
为了避免现有技术的不足之处，本发明提出一种BDK辅助基团及基于BDK辅助基团的普卡那肽及类似物的液相全合成方法，主要解决目前普卡那肽及其类似物化学合成方法的液相反应比较复杂，分离步骤多、耗时周期长、纯化规模小、生产成本高，而固相反应的生产规模小，原料价格贵、浪费大，树脂类废弃物多和环境污染严重的问题。
技术方案
一种涉及4,4’-双(二苯基次磷酰基)二苯基酮衍生物的BDK辅助基团，其特征在于： BDK分子结构通式为
一种采用所述BDK辅助基团进行基团辅助的普卡那肽及其类似物物液相的合成方法，其特征在于步骤如下：
步骤1、辅助基团与氨基酸的偶联：以辅助基团在脱水偶联剂的作用下与氨基酸在0～50℃下搅拌反应1～3小时，氨酸Fmoc-Xaa1-OH的C-端与BDK辅助基团连接，生成中间体化合物1，Fmoc-Xaa1-BDK；
所述氨基酸与BDK辅助基团的摩尔比为1～3:1；所述脱水偶联剂为1︰1摩尔比的脱水偶联活化剂和碱性物质；
所述辅助基团为磷酰氧基苯甲醇BDK；
所述氨基酸采用芴甲氧羰基Fmoc保护的某氨酸Fmoc-Xaa1-OH的C-端与BDK辅助基团连接，生成中间体化合物1，Fmoc-Xaa1-BDK；
步骤2、分离纯化：向生成物1加入极性小的烷烃或醚类溶剂，借助BDK辅助基团在溶剂系统中易结晶沉淀的特性，将生成物1与其他杂质分离；
对分离后的生成物1进行过滤和洗涤或重结晶操作得到纯化的生成物1；
步骤3、脱除N-端Fmoc：将纯化的生成物1采用脱Fmoc试剂处理，在10～50℃下搅拌反应0.5～2小时得到生成物2；
向生成物2加入极性小的烷烃或醚类溶剂，借助BDK辅助基团在溶剂系统中易结晶沉淀的特性，将生成物2与其他杂质分离；
对分离后的生成物2进行过滤和洗涤或重结晶操作得到纯化的生成物2，H2N-Xaa1-BDK.
步骤4：以纯化的含有辅助基团BDK的生成物2和H2N-Xaa1-BDK作为原料，以再与保护的半胱氨酸Fmoc-Cys(Trt)-OH进行偶联反应；重复步骤1～步骤3，得到化合物 H2N-Cys(Trt)-Xaa1-BDK；
以第一次循环重复后纯化的生成物H2N-Cys(Trt)-Xaa1-BDK作为原料，替代步骤1的辅助基团，以芴甲氧羰基(Fmoc)保护的甘氨酸Fmoc-Gly-OH替代步骤1的氨基酸进行偶联反应；重复步骤1～步骤3，得到化合物，H2N-Gly-Cys(Trt)-Xaa1-BDK；
以第二次循环重复后纯化的生成物H2N-Gly-Cys(Trt)-Xaa1-BDK作为原料，替代步骤1 的辅助基团，以保护的苏氨酸Fmoc-Thr(tBu)-OH替代步骤1的氨基酸进行偶联反应；重复步骤1～步骤3，得到化合物H2N-Thr(tBu)-Gly-Phe-Xaa1-BDK；
以上次循环重复后纯化的生成物H2N-Gly-Cys(Trt)-Xaa1-BDK作为原料，替代步骤1的辅助基团，依次以Fmoc-Cys(Acm)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asn-OH、 Fmoc-Val-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Glu(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Acm)-OH、 Fmoc-Glu(tBu)-OH、Fmoc-Xaa2-OH[Fmoc-Glu(tBu)-OH替代步骤1的氨基酸进行偶联反应；重复步骤1～步骤3，得到普卡那肽及其类似物的前体化合物 H2N-X3-Asp(tBu)-X2-Glu(tBu)-Cys(Acm)-Glu(tBu)-Leu-Cys(Trt)-Val-Asn-Val-Ala-Cys(Acm)-Thr (tBu)-Cys(Trt)-Xaa1-BDK；
或依次以Fmoc-Asp(tBu)-OH]、Fmoc-Asp(tBu)-OH和Fmoc-Xaa3-OH[Fmoc-Asn-OH替代步骤1的氨基酸进行偶联反应；
或依次以Fmoc-DAsn-OH]替代步骤1的氨基酸进行偶联反应；
步骤5、侧链脱Trt保护基团：采用25％TFA/DCM处理化合物4，脱除侧链上的保护基团Trt，经辅助沉淀分离，纯化得到化合物5，其氨基酸序列如下：H2N-Xaa3-Asp(tBu)-Xaa2-Glu(tBu)-Cys(Acm)-Glu(tBu)-Leu-Cys-Val-Asn-Val-Ala-Cys(Acm)-Thr(tBu)-Cys-Xaa1-BD K；
步骤6、第一次氧化环合：将氧化试剂加入上述化合物5的乙腈溶液中，搅拌反应2小时后回收乙腈，用乙酸乙酯溶解，经辅助沉淀分离，纯化得到化合物6，其氨基酸序列如下：
步骤7、第二次氧化环合：将适量氧化试剂碘加入上述化合物6的乙腈溶液中，搅拌反应2 小时后回收乙腈，用乙酸乙酯溶解，经辅助沉淀分离，纯化得到化合物7，其氨基酸序列如下：
步骤8、脱除全部侧链保护并剪除载体：向上述所得产物7中加入足量的脱保护试剂(TFA: Tis:H2O＝95:2.5:2.5)，室温下搅拌3-5小时。反应完毕后，旋蒸回收三氟乙酸TFA，残留溶液用适量的乙醇溶解，加入乙酸乙酯，普卡那肽及其类似物因溶解度小而以沉淀形式析出，过滤并用适量乙酸乙酯洗涤沉淀，收集沉淀并干燥后即得普卡那肽及其类似物8，其氨基酸序列如下(Z＝O,S,NH等)：
所述氧化试剂：3.6g的过氧化尿素加入100mL的DMSO溶解溶液。
一种所述方法制备过程中得到的Fmoc保护某氨酰-BDK化合物，其特征在于：所述Fmoc-Xaa1-BDK的分子结构通式为
一种所述方法制备过程中得到的脱Fmoc保护酪氨酰-BDK化合物，其特征在于：所述 H2N-Xaa1-BDK的分子结构通式为
一种所述方法制备过程中得到的Fmoc保护半胱氨酰-某氨酰-BDK化合物，其特征在于：所述Fmoc-Cys(Trt)-Xaa)3-BDK分子结构通式为
一种所述方法制备过程中得到的脱Fmoc保护半胱氨酰-某氨酰-BDK化合物的结构通式，其特征在于：所述H2N-Cys(Trt)-Xaa)3-BDK分子结构通式为
一种所述方法制备过程中得到的Fmoc保护苏氨酰-半胱氨酰-某氨酰-BDK化合物，其特征在于：所述Fmoc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Xaa1-BDK分子结构通式为
一种所述方法制备过程中得到的脱Fmoc保护苏氨酰-半胱氨酰-某氨酰-BDK化合物，其特征在于：所述H2N-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Xaa1-BDK分子结构通式为
一种所述方法制备过程中得到Fmoc保护的十六肽-BDK中间体化合物，其特征在于：所述Fmoc-Xaa3-Asp(tBu)-Xaa2-Glu(tBu)-Cys(Acm)-Glu(tBu)-Leu-Cys(Trt)-Val-Asn-Val-Ala-Cys(Acm)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Xaa1-BDK分子结构通式为
一种所述方法制备过程中得到脱Fmoc保护的十六肽-BDK中间体化合物，其特征在于：所述Fmoc-Xaa3-Asp(tBu)-Xaa2-Glu(tBu)-Cys(Acm)-Glu(tBu)-Leu-Cys(Trt)-Val-Asn-Val-Ala-Cys(Acm)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Xaa1-BDK分子结构通式为
一种所述方法制备过程中得到脱Trt保护的十六肽-BDK化合物，其特征在于：所述脱 Trt保护的十六肽-BDK中间体分子结构通式为
其第一次氧化环合产物中间体的分子结构通式为
其第二次氧化环合产物的分子结构通式为
一种所述方法制备过程中最后脱侧链保护并剪除载体BDK，经分离纯化得到的普卡那肽及其类似物，其特征在于：所述普卡那肽及其类似物分子结构通式为
其中，Xaa1＝Leu或DLeu，Xaa2＝Glu或Asp，Xaa1＝Asn或DAsn，Z＝O,S,NH。
一种所述基团辅助的脑啡肽及其衍生物液相的合成中BDK辅助基团的回收再利用的方法，其特征在于：将步骤6中所得的乙酸乙酯萃取溶液旋蒸浓缩至原体积的1/3～1/4，加入极性小的烷烃或醚类溶剂，借助BDK在不同溶剂系统中易结晶沉淀的特性，将BDK载体残留与其他杂质分离；对分离后的BDK载体残留进行过滤和洗涤或重结晶操作得到纯化的BDK 载体残留，回收再生转化后直接作为辅助基团再利用；所述BDK载体残留的分子结构通式为
有益效果
本发明提出的一种BDK辅助基团及基于BDK辅助基团的普卡那肽及其类似物的液相全合成方法，主要解决目前普卡那肽及其类似物化学合成方法的分离步骤多、耗时周期长、纯化规模小、生产成本高，而固相反应的生产规模小，原料价格贵、浪费大，树脂类废弃物多和环境污染严重的问题。主要合成步骤是：(1)载体偶联：采用我们发展的新型磷酸酯类载体，4,4’-双(二苯基次磷酰基)二苯基酮衍生物(4,4’-Bis-diphenylphosphatylDiphenyl Ketone， BDK结构式A)，替代固相树脂，在偶联脱水剂的作用下与N-端Fmoc保护的氨基酸 (Fmoc-X1-OH，其中X1为Leu或其对映异构体DLeu)的C-端连接；(2)分离纯化：反应完成后，借助磷酸酯类载体BDK在不同溶剂系统中易结晶沉淀的特性，可将生成物与其他杂质分离，经简单地过滤和洗涤或重结晶操作就可以得到纯化的中间体1(Fmoc-X1-BDK)；(3)脱除 N-端Fmoc：将中间体1采用脱Fmoc试剂处理后，再借助磷酸酯类载体在不同溶剂系统中易结晶沉淀的特性，可将生成物与其他杂质分离，经简单地过滤和洗涤或重结晶操作就可以得到纯化的中间体2(H2N-X1-BDK)；(4)多肽偶联：采用保护的氨基酸如Fmoc-Cys(Trt)-OH、 Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Acm)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asn-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Glu(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Acm)-OH、Fmoc-Glu(tBu)-OH、Fmoc-X2-OH[Fmoc-Glu(tBu)-OH或Fmoc-Asp(tBu)-OH]、 Fmoc-Asp(tBu)-OH和Fmoc-X3-OH[Fmoc-Asn-OH或Fmoc-DAsn-OH]等为原料，重复以上步骤(1)、(2)、(3)，依次偶联上相应的氨基酸，构建普卡那肽及其类似物前体的氨基酸序列；(5) 侧链脱保护，并同时剪除载体：采用鸡尾酒式混合试剂(TFA:Tis:H2O＝95:2.5:2.5)处理，脱除侧链上的保护基团如tBu、Pbf、Boc或Trt等，并同时剪除载BDK。(6)普卡那肽及其类似物的分离纯化：将(5)所得的溶液进行旋转蒸发,脱除TFA后,加入有机溶剂，沉淀析出，经过滤、洗涤、干燥等操作，即得到普卡那肽及其类似物。与目前已有的合成方法相比，本发明兼备了液相和固相合成法的优点，可以更加简便、快捷、节约、高效地合成制备谷胱甘肽，而且磷酸酯类载体可以回收再生并循环利用，降低原材料浪费，减少废弃物污染，节约成本，利于环保。
附图说明
图1：合成路线示意图
图2：普卡那肽及其类似物的氨基酸序列与结构
图3：本发明的合成路线
图4：BDK载体的合成方案(Qin et al.China Patent CN109503655A).
图5：普卡那肽Plecanatide(TrulanceTM)的合成路线
i:Fmoc-Leu-OH,EDC·HCl/DMAP,DCM,r.t.,2h；ii:DEA/MeCN(3:1),r.t.,0.5h；iii: Fmoc-AA-OH[Fmoc-Cys(Trt)-OH,Fmoc-Gly-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Cys(Acm)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Asn(Trt)-OH,Fmoc-Val-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Glu(tBu)-OH,Fmoc-Cys(Acm)-OH, Fmoc-Glu(tBu)-OH,Fmoc-Asp(tBu)-OH,Fmoc-Asn(Trt)-OH],EDC·HCl/HOBt/DIEA, DCM,r.t.,2h；iv:TFA:Tis:H2O(95:2.5:2.5),r.t.,3h；v:5％DMSO/H2O,THF,NH4OH, r.t,24h；vi:I2/CH3OH,50％AcOH/H2O,Ascorbic acid quenching,r.t.,1h；
图6：HRMS(ESI)of BDK attached linear Plecanatide
图7：TLC analysis of BDK attached peptide chain(CHCl3:CH3OH＝10:1)
图8：Optical photos of(A)BDK-attached Plecanatide precipitation and(B)linear Plecanatide precipitation by diethyl ether after shearing from the BDKsupport.
具体实施方式
现结合实施例、附图对本发明作进一步描述：
本发明包括以下步骤：
a)载体偶联：采用我们发展的新型磷酸酯类载体BDK衍生物替代固相树脂，在脱水偶联剂的作用下与第一个Fmoc保护任意氨基酸(Fmoc-Xaa1-OH，其中Xaa1＝Leu或其对映异构体DLeu)的C-端连接；
b)分离纯化：反应完成后，借助磷酸酯类载体BDK在不同溶剂系统中易结晶沉淀的特性，可将生成物1与其他杂质分离，经简单地过滤和洗涤或重结晶操作就可以得到纯化的1，即为Fmoc-Xaa1-BDK；
c)脱除N-端Fmoc：将生成物1用脱Fmoc试剂处理后，再借助磷酸酯类载体BDK在不同溶剂系统中易结晶沉淀的特性，可将生成物2与其他杂质分离，经简单地过滤和洗涤或重结晶操作就可以得到纯化的2，即为H2N-Xaa1-BDK；
d)多肽延长：重复以上步骤a、b、c，依次偶联上侧链保护的半胱氨酸Fmoc-Cys(Trt)-OH、 Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Acm)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Val-OH、 Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Glu(tBu)-OH、 Fmoc-Cys(Acm)-OH、Fmoc-Xaa2-OH[Fmoc-Glu(tBu)-OH或Fmoc-Asp(tBu)-OH]、 Fmoc-Asp(tBu)-OH和Fmoc-Xaa3-OH[Fmoc-Asn(Trt)-OH或Fmoc-DAsn(Trt)-OH]，经辅助沉淀分离，得到纯化的化合物3，其氨基酸序列如下：
Fmoc-Xaa3-Asp(tBu)-Xaa2-Cys(Acm)-Glu(tBu)-Leu-Cys(Trt)-Val-Asn(Trt)-Val-Ala-Cys(Ac m)-Thr(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Xaa1-BDK，脱Fmoc后，经辅助沉淀分离，纯化得到化合物4，其氨基酸序列如下：
H2N-Xaa3-Asp(tBu)-Xaa2-Cys(Acm)-Glu(tBu)-Leu-Cys(Trt)-Val-Asn(Trt)-Val-Ala-Cys(Acm )-Thr(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Xaa1-BDK；
e)侧链脱Trt保护基团：采用25％TFA/DCM处理化合物4，脱除侧链上的保护基团Trt，经过辅助沉淀分离，纯化得到化合物5，其氨基酸序列如下：
H2N-Xaa3-Asp(tBu)-Xaa2-Cys(Acm)-Glu(tBu)-Leu-Cys-Val-Asn-Val-Ala-Cys(Acm)-Thr(tBu)-Gl y-Cys-Xaa1-BDK；
f)第一次氧化环合：将适量氧化试剂(3.6g的过氧化尿素加入100mL的DMSO溶解溶液)加入上述化合物5的乙腈溶液中，搅拌反应2小时后回收乙腈，用乙酸乙酯溶解，经辅助沉淀分离，纯化得到化合物6，其氨基酸序列如下：
g)第二次氧化环合：将适量氧化试剂碘加入上述化合物6的乙腈溶液中，搅拌反应2小时后回收乙腈，用乙酸乙酯溶解，经辅助沉淀分离，纯化得到化合物7，其氨基酸序列如下：
h)脱除全部侧链保护并剪除载体：向上述所得产物7中加入足量的脱保护试剂(TFA:Tis: H2O＝95：2.5：2.5)，室温下搅拌3-5小时。反应完毕后，旋蒸回收三氟乙酸TFA，残留溶液用适量的乙醇溶解，加入乙酸乙酯，普卡那肽及其类似物因溶解度小而以沉淀形式析出，过滤并用适量乙酸乙酯洗涤沉淀，收集沉淀并干燥后即得普卡那肽及其类似物8，其氨基酸序列如下(Z＝O，S，NH等)：
i)载体的回收与再生：将h所得乙酸乙酯的有机相溶液浓缩至适当体积后，向溶液中加入适量的石油醚等烃类溶剂，BDK衍生物载体的残余部分会沉淀析出，经过滤、重结晶、洗涤、干燥等操作，即回收得到BDK衍生物载体的残余部分，经适当的再生反应后，可以循环再用。
本发明的合成路线见图3
本发明中一些常用的缩写具有以下含义：
BDK：4,4’-双(二苯基次磷酰基)二苯基酮及其衍生物
DCM：二氯甲烷CH2Cl2
DMAP：4-二甲氨基吡啶
DMF：N,N-二甲基甲酰胺
EDC-HCl：1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐
Fmoc：芴甲氧羰基
BDK：绿色多肽合成载体
HATU：2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐
HOBT：1-羟基苯并三唑
HBTU：O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐
NMM：N-甲基吗啉
NMP：N-甲基吡咯烷酮
PyBop：六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷
Pbf：2,2,4,6,7-五甲基苯并呋喃-5-磺酰基
tBu：叔丁基
TFA：三氟乙酸
THF：四氢呋喃
具体实施方式：
以下将参照实例对本发明作进一步的详细描述，本发明适用于普卡那肽及其类似物的合成制备与水解脱除。
化合物(2)的合成:准确称取4,4’-羟基二苯甲酮(2.14g，10mmol，1equiv)于150mL的反应瓶中，加入60mL的四氢呋喃THF并置于冰浴中搅拌30min，反应体系中滴加加入缚酸剂三乙胺Et3N(3.4mL，24mmol，2×1.2＝2.4equiv)，准确量取取二苯基次磷酰氯Ph2POCl(4.6mL，24mmol，2×1.2＝2.4equiv)滴加加入上述反应体系，冰浴条件下反应30min后移去冰浴TLC检测反应体系室温反应2.0h，加入稀硫酸(0.1mol/L，10mL)淬灭反应，旋转蒸发仪浓缩除去THF溶剂并加入20mL去离子水，加入乙酸乙酯萃取得到有机相，无水硫酸镁干燥，旋干后加入3mL的乙酸乙酯是样品充分溶解，滴加加入正己烷15mL(VEA/VPE＝1：5)，体系中出现大量白色沉淀，过滤白色沉淀并干燥得到化合物(2)，产率约99％。
化合物(3)的合成:准确称取(2)(1.23g，2mmol，1equiv)于100mL的反应瓶中，加入甲醇溶液40mL置于冰浴下搅拌30min，反应体系分三批次加入硼氢化钠NaBH4(92mg，2.4mmol，1.2equiv)，加上气球转入室温密封反应2h，TLC检测反应至原料消耗完毕后加入饱和氯化铵淬灭反应，浓缩除去甲醇溶液后加入去离子水10mL，乙酸乙酯萃取得到有机相，无水硫酸镁干燥，旋干后加入1mL的乙酸乙酯使样品充分溶解，滴加加入正己烷9mL (VEA/VPE＝1：9)，体系中出现大量白色沉淀，过滤白色沉淀并干燥得到化合物(3)，产率约97％。
Fmoc-Leu-BDK的合成：准确称取(3)(616mg，1.0mmol，1equiv)于100mL的反应瓶中，加入30mL DCM溶解，反应体系依次加入Fmoc-Leu-OH(423mg，1.2mmol，1.2equiv)， 4-二甲氨基吡啶DMAP(14.64mg，0.12mmol，0.12equiv)，EDC·HCl(230mg，1.2mmol， 1.2equiv)，室温下反应2h，TLC检测反应结束后浓缩加入乙酸乙酯30mL溶解，加入饱和 NaHCO3溶液洗涤，无水硫酸镁干燥，浓缩后用0.5mL的乙酸乙酯溶解样品，逐滴加入正己烷 7mL(VEA/VN-Hexane＝1：14)，体系中出现大量白色沉淀，过滤白色沉淀并干燥得到化合物Fmoc-Leu-BDK，产率约98％，经过一次沉淀可作为原料进行下一步投料。
Fmoc-Cys(Trt)-Leu-BDK的合成：准确称取Fmoc-Leu-BDK(950mg，1.0mmol)于50mL的反应瓶中，加入6mL MeCN溶解，室温条件下搅拌条件下滴加入DEA2mL(DEA/MeCN＝1： 3，25％DEA脱Fmoc保护基)，室温条件搅拌50min后TLC检测原料消失，浓缩除去MeCN 及DEA，加入DCM，继续浓缩，连续操作4次除净DEA，加入乙酸乙酯1.5mL，滴加石油醚15mL，震荡(VEA/VN-Hexane＝1：10)，出现大量白色固体，静置5min后除去上清液，得到脱保护后的产物H2N-Leu-BDK(产率约99％)备用；取100mL圆底烧瓶，加入30mL DCM 置于冰浴条件，体系依次加入上述脱保护产物BDK-Leu-NH2，Fmoc-Cyst(Trt)-OH(702mg， 1.2mmol，1.2equiv)，HOBt(162mg，1.2mmol，1.2equiv)，冰浴条件下搅拌30min，然后加入EDC·HCl(230mg，1.2mol，1.2equiv)，DIEA(330μL，2.0mmol，2.0equiv)，继续冰浴搅拌10min后转至室温下反应2.0h，TLC检测反应结束浓缩后加入乙酸乙酯40mL溶解，用饱和Na2CO3溶液洗涤，无水硫酸镁干燥，浓缩后用3mL的乙酸乙酯溶解样品，逐滴加入石油醚18mL(VEA/VPE＝1：6)，体系中出现大量白色沉淀，过滤白色沉淀并干燥得到化合物Fmoc-Cys(Trt)-Leu-BDK，产率约98％，经过一次沉淀可作为原料进行下一步投料。
Plecanatide肽链的延伸：使用上述偶联试剂系统EDC·HCl/HOBt/DIEA和脱Fmoc试剂 25％DEA/MeCN试剂系统，延伸Plecanatide肽链并获得各个中间体肽产物，如下所示：
(2) Fmoc-Cys(Trt)-Leu-BDK:White solid,Rf＝0.42(CH2Cl2:MeOH＝60:1),(97％yield).
(3)Fmoc-Gly-Cys(Trt)-Leu-BDK:White solid,Rf＝0.40(CH2Cl2:MeOH＝60:1),(98％
1H),4.62-4.57(m,1H),4.26-3.94(m,4H),3.65-3.64(m,J＝ 4.0Hz,2H),2.97-2.92(m,1H),2.44-2.40(m,1H),1.59-1.52(m,3H),0.82-0.80(m,6H)ppm；31P NMR(162MHz,CDCl3),δ29.85ppm；13C NMR(100MHz,CDCl3),δ170.9,169.4,168.9,157.1, 150.5,144.3,143.8,141.2,135.7,132.5,131.6,130.1,129.5,128.6,128.1,127.6,126.9,125.2, 120.7,119.9,76.3,67.2,52.1,50.8,46.9,45.0,40.4,33.3,24.6,22.9,21.7ppm；HRMS(ESI)m/zcalcd for C82H74N3O10P2S+(M+H)+1354.45647,found 1354.45630.
(4)Fmoc-Thr(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Leu-BDK:White solid,Rf＝0.40(CH2Cl2:MeOH＝50:1),
4.22-4.13(m,3H),3.90-3.73(m,2H),3.65(s,1H),2.85-2.80(m,1H),2.50-2.45(m,1H),1.54-1.41 (m,3H),1.24(s,9H),1.02-1.01(d,J＝4.0Hz,3H),0.80-0.79(m,6H)ppm；31PNMR(162MHz, CDCl3),δ29.99ppm；13C NMR(100MHz,CDCl3),δ171.1,170.3,169.4,168.3,156.1,150.5, 144.4,143.7,141.3,135.7.132.6,131.7,130.2,129.6,128.7,128.5,128.1,127.7,126.9,125.2, 120.7,120.0,77.3,76.4,75.6,67.3,64.5,59.0,52.4,51.1,47.2,43.4,40.9,33.2,28.2,24.7,22.8, 21.9,17.5ppm；HRMS(ESI)m/z calcd forC90H88N4O12P2SNa+(M+Na)+1533.54869,found 1533.54834.
(5)Fmoc-Cys(Acm)-Thr(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Leu-BDK:White solid,Rf＝0.38(CH2Cl2:
(m,1H),6.66(s,1H),6.47-6.42(m,2H),4.61-4.59(m,1H),4.47-4.12(m,8H),3.95-3.75(m,2H), 3.66(s,1H),3.02-2.80(m,3H),2.55-2.51(m,1H),1.92(s,3H),1.49-1.47(m,3H),1.17(s,9H), 1.09-1.07(d,J＝8.0Hz,3H),0.80-0.77(m,6H)ppm；31P NMR(162MHz,CDCl3),δ29.49ppm；13C NMR(100MHz,CDCl3),δ171.5,171.1,170.6,169.6,168.6,156.7,150.5,144.4,143.8,141.3, 135.7.132.6,131.8,130.1,129.6,128.8,128.1,127.8,127.1,126.9,125.3,120.7,120.0,77.3,76.3, 75.1,67.2,66.2,64.6,63.8,59.1,54.7,52.8,51.3,47.1,43.2,40.6,33.4,28.2,24.6,23.1,22.8,21.8, 19.2ppm；HRMS(ESI)m/zcalcd for C96H99N6O14P2S2 +(M+H)+1685.61304,found 1685.61365.
(7)Fmoc-Val-Ala-Cys(Acm)-Thr(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Leu-BDK:White solid,Rf＝0.40 
1H),7.90-7.86(m,10H),7.77-7.73(m,2H),7.61-7.40(m,15H),7.34-7.10(m,25H),6.64(s,1H), 4.68-4.62(m,1H),4.51-4.49(m,2H),4.43-4.20(m,8H),3.98-3.80(m,3H),2.99-2.69(m,2H), 2.42-2.30(m,2H),2.04-1.99(m,1H),1.86(s,3H),1.52-1.42(m,3H),1.26-1.25(m,3H),1.10(s, 9H),1.01-0.99(d,J＝4.0Hz,3H),0.89-0.85(m,6H),0.78-0.71(m,6H)ppm；31P NMR(162MHz, CDCl3),δ29.47ppm；13C NMR(100MHz,DMSO-d6),δ172.8,171.2,171.1,170.6,170.3,170.1, 169.7,168.6,156.6,150.5,144.7,141.2,139.9,137.9,136.7,133.2,131.9,130.6,129.5,128.5, 128.1,127.7,127.5,127.2,125.8,121.8,120.9,120.5,75.9,74.3,67.3,66.3,65.5,63.3,60.5,58.0, 51.7,51.1,48.4,47.2,32.5,30.9,28.4,24.5,23.0,21.8,19.8,19.4,19.1,18.6ppm；HRMS(ESI) m/z calcd forC104H113N8O16P2S2 +(M+H)+1855.71857,found 1855.71753.
(8)Fmoc-Asn(Trt)-Val-Ala-Cys(Acm)-Thr(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Leu-BDK:Whitesolid,Rf＝
11H),7.74-7.72(m,3H),7.61-7.53(m,13H),7.42-7.41(m,2H),7.26-7.16(m,38H),6.64(s,1H), 4.65-4.64(m,1H),4.48-4.24(m,11H),3.97-3.81(m,3H),2.96-2.60(m,4H),2.39-2.32(m,2H), 2.00-1.98(m,1H),1.85(s,3H),1.48-1.44(m,3H),1.26-1.21(m,3H),1.10(s,9H),1.00-0.99(d, J＝4.0Hz,3H),0.86-0.71(m,12H)ppm；31PNMR(162MHz,CDCl3),δ29.77ppm；13C NMR (100MHz,DMSO-d6),δ172.8,171.6,171.1,170.8,170.6,170.3,170.1,169.7,169.3,168.6,156.3, 150.5,145.2,144.7,144.2,141.2,136.8,133.2,131.9,131.8,130.6,129.5,129.3,129.0,128.5, 128.1,127.9,127.6,127.2,126.8,125.8,120.9,120.6,75.9,74.3,69.9,67.2,66.3,65.5,63.3,57.9, 57.7,52.8,51.7,51.1,48.5,47.1,31.3,28.4,24.5,23.1,21.8,19.7,19.4,18.8,18.3ppm；HRMS (ESI)m/z calcdfor C127H133N10O18P2S2 +(M+H)+2211.87105,found 2211.87280.
(9)Fmoc-Val-Asn(Trt)-Val-Ala-Cys(Acm)-Thr(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Leu-BDK:
White solid,
Rf＝0.40(CH2Cl2:MeOH＝30:1),(91％yield).1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δ8.63-8.51 (m,2H),8.39-8.13(m,8H),7.90-7.86(m,11H),7.76-7.74(m,2H),7.61-7.54(m,13H),7.42-7.40 (m,3H),7.26-7.16(m,38H),6.64(s,1H),4.65-4.63(m,1H),4.49-4.20(m,12H),4.02-3.81(m, 4H),2.96-2.66(m,4H),2.39-2.32(m,2H),2.01-1.95(m,2H),1.85(s,3H),1.48-1.44(m,3H), 1.23-1.19(m,3H),1.11(s,9H),1.00-0.99(d,J＝4.0Hz,3H),0.90-0.71(m,18H)ppm；31P NMR (162MHz,CDCl3),δ29.97ppm；13C NMR(100MHz,DMSO-d6),δ172.8,171.6,171.1,170.8, 170.6,170.4,170.3,170.1,169.7,169.3,168.6,156.3,150.5,145.2,144.7,144.2,141.2,136.7, 133.2,131.9,131.8,130.6,129.5,129.3,129.0,128.5,128.1,127.9,127.5,127.2,126.7,125.9, 120.9,120.5,75.9,74.3,69.9,67.3,66.3,65.5,63.3,58.0,57.6,52.8,51.7,51.1,48.5,47.1,31.3, 28.4,24.5,23.0,21.8,19.6,19.4,18.7,18.5,18.3ppm；HRMS(ESI)m/z calcd for C132H142N11O19P2S2 +(M+H)+2310.93946,found 2310.93872.
(10)Fmoc-Cys(Trt)-Val-Asn(Trt)-Val-Ala-Cys(Acm)-Thr(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Leu-BDK:
White solid,Rf＝0.38(CH2Cl2:MeOH＝20:1),(97％yield).1H NMR(400MHz,DMSO-d6), δ8.64-8.53(m,2H),8.43-8.12(m,8H),7.90-7.86(m,11H),7.73-7.71(m,2H),7.61-7.52(m,13H), 7.41-7.10(m,57H),6.64(s,1H),4.67-4.47(m,3H),4.34-4.16(m,10H),3.98-3.80(m,4H), 2.98-2.93(m,1H),2.74-2.54(m,3H),2.46-2.30(m,3H),2.00-1.85(m,5H),1.55-1.42(m,3H), 1.23-1.17(m,4H),1.11(s,9H),1.01-0.99(d,J＝8.0Hz,3H),0.83-0.69(m,18H)ppm；31P NMR (162MHz,CDCl3),δ29.91ppm；13C NMR(100MHz,DMSO-d6),δ172.8,171.1,170.8,170.7, 170.6,170.3,170.1,169.9,169.7,169.2,168.6,156.2,150.5,145.1,144.7,144.3,141.2,136.8, 133.2,131.9,130.6,129.5,129.3,129.0,128.5,128.1,127.9,127.5,127.2,126.7,125.7,120.9, 120.5,75.9,74.3,69.8,67.3,66.5,66.3,58.0,51.8,47.1,32.2,31.3,28.4,24.5,23.1,21.8,19.8, 19.6,19.4,18.8,18.3,17.6ppm；HRMS(ESI)m/z calcd for C154H160N12O20P2S3Na+(M+Na)+ 2678.04014,found 2678.03564.
(11)Fmoc-Leu-Cys(Trt)-Val-Asn(Trt)-Val-Ala-Cys(Acm)-Thr(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Leu-BD K:
White solid,Rf＝0.40(CH2Cl2:MeOH＝20:1),(96％yield).1H NMR(400MHz,DMSO-d6), δ8.66-8.19(m,8H),7.96-7.85(m,9H),7.63-7.53(m,12H),7.30-7.16(m,60H),6.62(s,1H), 4.63-3.79(m,18H),2.96-2.93(m,1H),2.68(m,3H),2.41-2.34(m,3H),1.99-1.84(m,8H), 1.49-1.44(m,4H),1.23-1.16(m,8H),1.09(s,9H),0.99-0.98(m,3H),0.82-0.76(m,24H)ppm；31P NMR(162MHz,CDCl3),δ29.61ppm；HRMS(ESI)m/z calcd forC160H171N13O21P2S3Na+ (M+Na)+2791.12421,found 2791.11450.
(12)Fmoc-Glu(tBu)-Leu-Cys(Trt)-Val-Asn(Trt)-Val-Ala-Cys(Acm)-Thr(tBu)-Gly-Cys(Trt )-Leu-BDK:
White solid,Rf＝0.50(CH2Cl2:MeOH＝10:1),(95％yield).1H NMR(400MHz,DMSO-d6), δ8.63-8.60(m,2H),8.44-8.16(m,8H),7.96-7.85(m,13H),7.73-7.71(m,2H),7.63-7.52(m,14H), 7.42-7.09(m,56H),6.62(s,1H),4.63(m,2H),4.47-3.79(m,17H),2.96-2.89(m,2H),2.73-2.64 (m,3H),2.41-2.24(m,5H),2.00-1.84(m,7H),1.67(m,2H),1.52-1.35(m,8H),1.23-1.16(m,8H), 1.09(s,9H),0.99-0.98(d,J＝4.0Hz,3H),0.86-0.68(m,24H)ppm；31P NMR(162MHz,CDCl3),δ 29.91ppm；HRMS(ESI)m/z calcd forC169H186N14O24P2S3Na+(M+Na)+2976.22941,found 2976.22035.
(13)Fmoc-Cys(Acm)-Glu(tBu)-Leu-Cys(Trt)-Val-Asn(Trt)-Val-Ala-Cys(Acm)-Thr(tBu)-G ly-Cys(Trt)-Leu-BDK:
White solid,Rf＝0.52(CH2Cl2:MeOH＝10:1),(94％yield).1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δ 8.63-8.15(m,7H),7.90-7.83(m,11H),7.74-7.72(m,2H),7.61-7.53(m,14H),7.43-7.39(m,2H), 7.29-7.15(m,56H),6.62(s,1H),4.63-3.79(m,22H),2.96-2.64(m,5H),2.39-2.33(m,6H), 1.99-1.84(m,10H),1.44-1.34(m,8H),1.23-1.15(m,8H),1.09(s,12H),0.98(d,J＝8.0Hz,3H), 0.82-0.70(m,24H)ppm；31P NMR(162MHz,CDCl3),δ29.76ppm；HRMS(ESI)m/z calcd for C175H196N16O26P2S4Na+(M+Na)+3150.27570,found 3150.27197.
(14)Fmoc-Glu(tBu)-Cys(Acm)-Glu(tBu)-Leu-Cys(Trt)-Val-Asn(Trt)-Val-Ala-Cys(Acm)-T hr(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Leu-BDK:
White solid,Rf＝0.50(CH2Cl2:MeOH＝10:1),(93％yield).1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δ 8.66-8.17(m,4H),7.90-7.85(m,6H),7.63-7.53(m,9H),7.30-7.09(m,66H),6.62(s,1H), 4.65-3.79(m,22H),2.96-2.63(m,4H),2.37-2.31(m,6H),2.02-1.84(m,12H),1.38-1.36(m,12H), 1.24-1.16(m,10H),1.09(s,12H),1.00-0.98(m,3H),0.87-0.70(m,24H)ppm；31P NMR(162 MHz,CDCl3),δ29.36ppm；HRMS(ESI)m/z calcd forC184H211N17O29P2S4Na+(M+Na)+ 3335.38090,found 3335.38548.
(16)Fmoc-Asn(Trt)-Asp(tBu)-Glu(tBu)-Cys(Acm)-Glu(tBu)-Leu-Cys(Trt)-Val-Asn(Trt)-V al-Ala-Cys(Acm)-Thr(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Leu-BDK:
White solid,Rf＝0.60(CH2Cl2:MeOH＝10:1),(95％yield).1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δ8.64-8.15(m,6H),7.96-7.84(m,11H),7.75-7.72(m,2H),7.61-7.52(m,14H),7.44-7.35(m,5H), 7.30-7.09(m,71H),6.63(s,1H),4.62(m,2H),4.48-4.20(m,16H),3.95-3.79(m,5H),2.97-2.93 (m,2H),2.74-2.68(m,3H),2.39-2.19(m,8H),2.04-1.83(m,12H),1.65(m,2H),1.48-1.34(m, 15H),1.24-1.09(m,27H),1.00-0.98(m,6H),0.85-0.70(m,32H)ppm；31P NMR(162MHz, CDCl3),δ29.36ppm；
(16de-Fmoc)H-Asn(Trt)-Asp(tBu)-Glu(tBu)-Cys(Acm)-Glu(tBu)-Leu-Cys(Trt)-Val-Asn(T rt)-Val-Ala-Cys(Acm)-Thr(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Leu-BDK:
White solid,Rf＝0.30(CH2Cl2:MeOH＝10:1),(99％yield).HRMS(ESI)m/z calcdfor C200H234N20O32P2S4Na+(M+Na)+3640.55483,found 3640.55884.
BDK/-Trt/-tBu保护基团的剪切：将H-NDECELCVNVACTGCL-BDK加入剪切试剂TFA：硫苯甲醚：EDT：苯酚：H2O＝87.5：5：2.5：2.5：2.5试剂。在室温下搅拌反应3小时。将反应混合物减压浓缩以除去TFA，H2O。将残余物添加至冷的乙醚中三次以得到沉淀物，然后将沉淀物离心以获得BDK残基及直链多肽肽链，H-NDEC(Acm)ELCVNVAC(Acm)TGCL-OH。
H-Asn-Asp-Glu-Cys(Acm)-Glu-Leu-Cys-Val-Asn-Val-Ala-Cys(Acm)-Thr-Gly-Cys-Leu-OH: 1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δ12.46(s,4H),8.54-7.73(m,19H),7.43-7.33(m,5H),6.97(s, 1H),5.02-3.80(m,22H),3.38(m,5H),2.93-2.71(m,10H),2.28(m,5H),1.98-1.87(m,8H), 1.65-1.46(m,6H),1.24(m,6H),1.05(m,3H),0.89-0.84(m,24H)ppm；HRMS(ESI)m/z calcd for C71H119N20O28S4 +(M+H)+1827.73800,found 1827.73759.
二硫键的正交氧化形成：将线型肽H-NDEC(Acm)ELCVNVAC(Acm)TGCL-OH(180mg，0.1 mmol)溶解在5mL DMSO/H2O(VDMSO：VH2O＝0.05：0.95)中用稀NH4·OH调节至8.0。将反应混合物在室温搅拌24小时，然后冻干以备下次使用。随后，将上述冻干的粉末溶解于20ml的50％AcOH/H2O中，然后将1.5mL的I2/MeOH(0.1mol/L)滴加到反应混合物中。将反应混合物搅拌1小时，通过加入抗坏血酸(1mol/L，1.5mL)淬灭。将反应混合物浓缩并直接进行RP-HPLC，得到目标化合物Plecanatide(96mg，53％)。
H-Asn-Asp-Glu-Cys[4,12]-Glu-Leu-Cys[7,15]-Val-Asn-Val-Ala-Cys[4,12]-Thr-Gly-Cys[7,15]-Leu -OH(Plecanatide):1H NMR(400MHz,D2O),δ4.66-4.59(dd,J＝28.0Hz,6H),4.55-4.47(m, 2H),4.27-4.15(s,6H),4.10-4.01(m,3H),3.95-3.88(m,2H),3.81-3.77(d,J＝16.0Hz,1H), 3.27-2.64(m,16H),2.36-2.31(m,4H),2.08-1.90(m,7H),1.54-1.41(m,6H),1.25-1.23(d,J＝8.0 Hz,3H),1.08-1.06(d,J＝8.0Hz,3H),0.83-0.70(m,24H),ppm；13C NMR(100MHz,D2O),177.6, 177.4,177.2,175.1,174.4,174.3,173.9,173.8,173.1,172.8,172.6,172.5,172.2,171.8,171.7, 171.2,168.8,66.6,60.2,59.8,54.3,53.8,53.4,53.1,52.7,52.0,50.8,49.7,42.6,41.0,39.9,39.4, 38.9,37.7,36.4,36.2,34.8,30.4,30.1,29.7,25.8,25.6,24.4,24.2,22.3,22.1,20.7,20.6,18.7,18.3, 17.6,17.3,15.8ppm；HRMS(ESI)m/z calcd for HRMS(ESI)m/z calcd for C65H105N18O26S4 + (M+H)+1681.63247,found 1681.63257.
Claims (13)
1.一种涉及4,4’-双(二苯基次磷酰基)二苯基酮衍生物的BDK辅助基团，其特征在于：BDK分子结构通式为
2.一种采用权利要求所述BDK辅助基团进行基团辅助的普卡那肽及其类似物物液相的合成方法，其特征在于步骤如下：
步骤1、辅助基团与氨基酸的偶联：以辅助基团在脱水偶联剂的作用下与氨基酸在0～50℃下搅拌反应1～3小时，氨酸Fmoc-Xaa1-OH的C-端与BDK辅助基团连接，生成中间体化合物1，Fmoc-Xaa1-BDK；
所述氨基酸与BDK辅助基团的摩尔比为1～3:1；所述脱水偶联剂为1︰1摩尔比的脱水偶联活化剂和碱性物质；
所述辅助基团为磷酰氧基苯甲醇BDK；
所述氨基酸采用芴甲氧羰基Fmoc保护的某氨酸Fmoc-Xaa1-OH的C-端与BDK辅助基团连接，生成中间体化合物1，Fmoc-Xaa1-BDK；
步骤2、分离纯化：向生成物1加入极性小的烷烃或醚类溶剂，借助BDK辅助基团在溶剂系统中易结晶沉淀的特性，将生成物1与其他杂质分离；
对分离后的生成物1进行过滤和洗涤或重结晶操作得到纯化的生成物1；
步骤3、脱除N-端Fmoc：将纯化的生成物1采用脱Fmoc试剂处理，在10～50℃下搅拌反应0.5～2小时得到生成物2；
向生成物2加入极性小的烷烃或醚类溶剂，借助BDK辅助基团在溶剂系统中易结晶沉淀的特性，将生成物2与其他杂质分离；
对分离后的生成物2进行过滤和洗涤或重结晶操作得到纯化的生成物2，H2N-Xaa1-BDK.
步骤4：以纯化的含有辅助基团BDK的生成物2和H2N-Xaa1-BDK作为原料，以再与保护的半胱氨酸Fmoc-Cys(Trt)-OH进行偶联反应；重复步骤1～步骤3，得到化合物H2N-Cys(Trt)-Xaa1-BDK；
以第一次循环重复后纯化的生成物H2N-Cys(Trt)-Xaa1-BDK作为原料，替代步骤1的辅助基团，以芴甲氧羰基(Fmoc)保护的甘氨酸Fmoc-Gly-OH替代步骤1的氨基酸进行偶联反应；重复步骤1～步骤3，得到化合物，H2N-Gly-Cys(Trt)-Xaa1-BDK；
以第二次循环重复后纯化的生成物H2N-Gly-Cys(Trt)-Xaa1-BDK作为原料，替代步骤1的辅助基团，以保护的苏氨酸Fmoc-Thr(tBu)-OH替代步骤1的氨基酸进行偶联反应；重复步骤1～步骤3，得到化合物H2N-Thr(tBu)-Gly-Phe-Xaa1-BDK；
以上次循环重复后纯化的生成物H2N-Gly-Cys(Trt)-Xaa1-BDK作为原料，替代步骤1的辅助基团，依次以Fmoc-Cys(Acm)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asn-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Glu(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Acm)-OH、Fmoc-Glu(tBu)-OH、Fmoc-Xaa2-OH[Fmoc-Glu(tBu)-OH替代步骤1的氨基酸进行偶联反应；重复步骤1～步骤3，得到普卡那肽及其类似物的前体化合物H2N-X3-Asp(tBu)-X2-Glu(tBu)-Cys(Acm)-Glu(tBu)-Leu-Cys(Trt)-Val-Asn-Val-Ala-Cys(Ac m)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Xaa1-BDK；
或依次以Fmoc-Asp(tBu)-OH]、Fmoc-Asp(tBu)-OH和Fmoc-Xaa3-OH[Fmoc-Asn-OH替代步骤1的氨基酸进行偶联反应；
或依次以Fmoc-DAsn-OH]替代步骤1的氨基酸进行偶联反应；
步骤5、侧链脱Trt保护基团：采用25％TFA/DCM处理化合物4，脱除侧链上的保护基团Trt，经辅助沉淀分离，纯化得到化合物5，其氨基酸序列如下：H2N-Xaa3-Asp(tBu)-Xaa2-Glu(tBu)-Cys(Acm)-Glu(tBu)-Leu-Cys-Val-Asn-Val-Ala-Cys(Acm)-Thr(tBu)-Cys-Xaa1-BDK；
步骤6、第一次氧化环合：将氧化试剂加入上述化合物5的乙腈溶液中，搅拌反应2小时后回收乙腈，用乙酸乙酯溶解，经辅助沉淀分离，纯化得到化合物6，其氨基酸序列如下：
步骤7、第二次氧化环合：将适量氧化试剂碘加入上述化合物6的乙腈溶液中，搅拌反应2小时后回收乙腈，用乙酸乙酯溶解，经辅助沉淀分离，纯化得到化合物7，其氨基酸序列如下：
步骤8、脱除全部侧链保护并剪除载体：向上述所得产物7中加入足量的脱保护试剂(TFA:Tis:H2O＝95:2.5:2.5)，室温下搅拌3-5小时。反应完毕后，旋蒸回收三氟乙酸TFA，残留溶液用适量的乙醇溶解，加入乙酸乙酯，普卡那肽及其类似物因溶解度小而以沉淀形式析出，过滤并用适量乙酸乙酯洗涤沉淀，收集沉淀并干燥后即得普卡那肽及其类似物8，其氨基酸序列如下(Z＝O,S,NH等)：
所述氧化试剂：3.6g的过氧化尿素加入100mL的DMSO溶解溶液。
3.一种权利要求2所述方法制备过程中得到的Fmoc保护某氨酰-BDK化合物，其特征在于：所述Fmoc-Xaa1-BDK的分子结构通式为
4.一种权利要求2所述方法制备过程中得到的脱Fmoc保护酪氨酰-BDK化合物，其特征在于：所述H2N-Xaa1-BDK的分子结构通式为
5.一种权利要求2所述方法制备过程中得到的Fmoc保护半胱氨酰-某氨酰-BDK化合物，其特征在于：所述Fmoc-Cys(Trt)-Xaa)3-BDK分子结构通式为
6.一种权利要求2所述方法制备过程中得到的脱Fmoc保护半胱氨酰-某氨酰-BDK化合物的结构通式，其特征在于：所述H2N-Cys(Trt)-Xaa)3-BDK分子结构通式为
7.一种权利要求2所述方法制备过程中得到的Fmoc保护苏氨酰-半胱氨酰-某氨酰-BDK化合物，其特征在于：所述Fmoc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Xaa1-BDK分子结构通式为
8.一种权利要求2所述方法制备过程中得到的脱Fmoc保护苏氨酰-半胱氨酰-某氨酰-BDK化合物，其特征在于：所述H2N-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Xaa1-BDK分子结构通式为
9.一种权利要求2所述方法制备过程中得到Fmoc保护的十六肽-BDK中间体化合物，其特征在于：所述Fmoc-Xaa3-Asp(tBu)-Xaa2-Glu(tBu)-Cys(Acm)-Glu(tBu)-Leu-Cys(Trt)-Val-Asn-Val-Ala-Cys(Acm)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Xaa1-BDK分子结构通式为
10.一种权利要求2所述方法制备过程中得到脱Fmoc保护的十六肽-BDK中间体化合物，其特征在于：所述Fmoc-Xaa3-Asp(tBu)-Xaa2-Glu(tBu)-Cys(Acm)-Glu(tBu)-Leu-Cys(Trt)-Val-Asn-Val-Ala-Cys(Acm)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Xaa1-BDK分子结构通式为
11.一种权利要求2所述方法制备过程中得到脱Trt保护的十六肽-BDK化合物，其特征在于：所述脱Trt保护的十六肽-BDK中间体分子结构通式为
其第一次氧化环合产物中间体的分子结构通式为
其第二次氧化环合产物的分子结构通式为
12.一种权利要求2所述方法制备过程中最后脱侧链保护并剪除载体BDK，经分离纯化得到的普卡那肽及其类似物，其特征在于：所述普卡那肽及其类似物分子结构通式为
其中，Xaa1＝Leu或DLeu，Xaa2＝Glu或Asp，Xaa1＝Asn或D Asn，Z＝O,S,NH。
13.一种权利要求2所述基团辅助的脑啡肽及其衍生物液相的合成中BDK辅助基团的回收再利用的方法，其特征在于：将步骤6中所得的乙酸乙酯萃取溶液旋蒸浓缩至原体积的1/3～1/4，加入极性小的烷烃或醚类溶剂，借助BDK在不同溶剂系统中易结晶沉淀的特性，将BDK载体残留与其他杂质分离；对分离后的BDK载体残留进行过滤和洗涤或重结晶操作得到纯化的BDK载体残留，回收再生转化后直接作为辅助基团再利用；所述BDK载体残留的分子结构通式为
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010089297.9A CN111285921B (zh) | 2020-02-12 | 2020-02-12 | Bdk辅助基团及基于bdk辅助基团的普卡那肽及类似物的液相全合成方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010089297.9A CN111285921B (zh) | 2020-02-12 | 2020-02-12 | Bdk辅助基团及基于bdk辅助基团的普卡那肽及类似物的液相全合成方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111285921A true CN111285921A (zh) | 2020-06-16 |
| CN111285921B CN111285921B (zh) | 2024-03-01 |
Family
ID=71018979
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010089297.9A Active CN111285921B (zh) | 2020-02-12 | 2020-02-12 | Bdk辅助基团及基于bdk辅助基团的普卡那肽及类似物的液相全合成方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111285921B (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114276222A (zh) * | 2021-12-31 | 2022-04-05 | 杭州澳赛诺生物科技有限公司 | 一种作为多肽液相合成载体的二芳基苯甲醇类化合物及其制备方法与应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107383171A (zh) * | 2017-08-15 | 2017-11-24 | 苏州科技大学 | 一种通过二次环化固相合成普卡那肽的方法 |
| WO2018205401A1 (zh) * | 2017-05-10 | 2018-11-15 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种普利卡那肽的制备方法 |
| CN109836455A (zh) * | 2019-01-30 | 2019-06-04 | 西北工业大学 | 基于磷或亚磷酰氧基二苯甲醇及其衍生物及辅助的胸腺五肽液相合成方法 |
-
2020
- 2020-02-12 CN CN202010089297.9A patent/CN111285921B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2018205401A1 (zh) * | 2017-05-10 | 2018-11-15 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种普利卡那肽的制备方法 |
| CN107383171A (zh) * | 2017-08-15 | 2017-11-24 | 苏州科技大学 | 一种通过二次环化固相合成普卡那肽的方法 |
| CN109836455A (zh) * | 2019-01-30 | 2019-06-04 | 西北工业大学 | 基于磷或亚磷酰氧基二苯甲醇及其衍生物及辅助的胸腺五肽液相合成方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| HAIDI LI ET AL.: ""Liquid-Phase Total Synthesis of Plecanatide Aided by Diphenylphosphinyloxyl Diphenyl Ketone (DDK) Derivatives"", 《ORGANIC LETTERS》 * |
| KUNWAR SHAILUBHAI ET AL.: ""Plecanatide and dolcanatide, novel guanylate cyclase-C agonists, ameliorate gastrointestinal inflammation in experimental models of murine colitis"" * |
| 杨君义: ""普卡那肽：治疗慢性特发性便秘的新型鸟苷酸环化酶C激动剂"", 《中国新药与临床杂志》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114276222A (zh) * | 2021-12-31 | 2022-04-05 | 杭州澳赛诺生物科技有限公司 | 一种作为多肽液相合成载体的二芳基苯甲醇类化合物及其制备方法与应用 |
| CN114276222B (zh) * | 2021-12-31 | 2024-04-09 | 杭州澳赛诺生物科技有限公司 | 一种作为多肽液相合成载体的二芳基苯甲醇类化合物及其制备方法与应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN111285921B (zh) | 2024-03-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP3778621B1 (en) | Peptide synthesis method | |
| CN105732798B (zh) | 一种利拉鲁肽的合成方法 | |
| EP3156413B1 (en) | Ganirelix precursor and method for preparing ganirelix acetate by using anirelix precursor | |
| CN109836455B (zh) | 基于磷或亚磷酰氧基二苯甲醇及其衍生物及辅助的胸腺五肽液相合成方法 | |
| CN109678927B (zh) | 一种基于磷酸酯类载体的谷胱甘肽全合成方法 | |
| EP3438121A1 (en) | Liquid phase synthesis method for oxytocin using polypeptides | |
| CN109503655B (zh) | 一种Fmoc-氨基酸酯类衍生化产物的制备方法 | |
| EP2181983A1 (en) | Method for selective removal of dibenzofulvene derivative | |
| CN111978369B (zh) | 一种制备多肽的方法 | |
| CN106188231B (zh) | 帕西瑞肽五肽中间体的合成与应用 | |
| CN111285921B (zh) | Bdk辅助基团及基于bdk辅助基团的普卡那肽及类似物的液相全合成方法 | |
| JP5445456B2 (ja) | ジベンゾフルベンの除去方法 | |
| CN101846649B (zh) | 磷酸化和/或糖基化蛋白质或多肽的一步富集修饰测定方法 | |
| CN105418737B (zh) | 一种短瓣花环肽a的固相合成方法和应用 | |
| CN109879936B (zh) | 一种利用微通道模块化反应装置合成棕榈酰六肽的方法 | |
| CN113667007A (zh) | 一种索马鲁肽侧链的液相制备方法 | |
| DK170820B1 (da) | Fremgangsmåde og tripeptid til fremstilling af racematfattige peptider | |
| CN109438560B (zh) | 一种布舍瑞林的液相合成方法 | |
| CN111269261A (zh) | Tsbp辅助基团及基团辅助的脑啡肽及其衍生物的液相全合成方法 | |
| WO2020125045A1 (zh) | 一种罗米地辛的合成方法 | |
| CN117209540A (zh) | 六（x-苯氧基）环三磷腈类化合物、制备方法及制备四肽胃泌素中的应用 | |
| CN116854780A (zh) | 一种lr12肽的液相合成方法 | |
| CN107698663B (zh) | 一种维洛丝肽的液相合成方法 | |
| CN117903242A (zh) | 甘氨酸-l-赖氨酸(叔丁氧羰基)-l-赖氨酸(叔丁氧羰基)-叔丁酯的合成方法 | |
| CN117069797A (zh) | 一种依替巴肽的液相合成方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20240619 Address after: Building B5, Northwest Headquarters Base, Yuhua Industrial Park, No. 58 Keji West Road, Yanta District, Xi'an City, Shaanxi Province, 710077 Patentee after: SHAANXI YUANGUANG HI-TECH Co.,Ltd. Country or region after: China Address before: 710072 No. 127 Youyi West Road, Shaanxi, Xi'an Patentee before: Northwestern Polytechnical University Country or region before: China |