CN110627796B - 含氮杂环类衍生物及其在医药上的应用 - Google Patents

含氮杂环类衍生物及其在医药上的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN110627796B
CN110627796B CN201910526044.0A CN201910526044A CN110627796B CN 110627796 B CN110627796 B CN 110627796B CN 201910526044 A CN201910526044 A CN 201910526044A CN 110627796 B CN110627796 B CN 110627796B
Authority
CN
China
Prior art keywords
oxo
dihydropyridine
fluorophenyl
amino
reaction
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201910526044.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110627796A (zh
Inventor
段茂圣
田世鸿
刘佳乐
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Beijing Yuezhikangtai Biomedicines Co ltd
Original Assignee
Beijing Yuezhikangtai Biomedicines Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beijing Yuezhikangtai Biomedicines Co ltd filed Critical Beijing Yuezhikangtai Biomedicines Co ltd
Publication of CN110627796A publication Critical patent/CN110627796A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110627796B publication Critical patent/CN110627796B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/53—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with three nitrogens as the only ring hetero atoms, e.g. chlorazanil, melamine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Abstract

本发明涉及含氮杂环类衍生物及其在医药上的应用。特别地，本发明涉及通式(I)所示的化合物、其制备方法及含有该化合物的药物组合物，及其用作TAM激酶抑制剂的用途，特别是用于治疗与TAM激酶活性相关的疾病的用途。其中通式(I)中的各取代基的定义与说明书中的定义相同。

Description

含氮杂环类衍生物及其在医药上的应用
技术领域
本发明涉及一种含氮杂环类衍生物、其制备方法及含有其的药物组合物，以及其用作TAM激酶抑制剂的用途，特别是用于制备治疗与TAM激酶活性相关的疾病的药物的用途。
背景技术
受体酪氨酸激酶(RTKs)为多域的跨膜蛋白，其功能为细胞膜外受体配体的传感器。当配体与受体结合时，诱导受体在细胞膜表面二聚并激活膜内的激酶域，从而导致酪氨酸磷酸化以及激活下游一连串的信号传导通路。到目前为止，在人体基因库找到了近60个受体酪氨酸激酶，它们广泛地调节细胞的新陈代谢过程，包括存活、生长、分化、增殖、粘连和死亡。
受体酪氨酸激酶TAM家族有三个成员Axl、Mer和Tyro3。TAM在体内有两个配体Gas6和Protein S。TAM三成员均可与Gas 6结合，结合亲和力分别为Axl>Mer>Tyro3。Protein S仅能与Mer和Tyro3结合。TAM自身磷酸化后，产生信号传递，调控着包括细胞生存、诱导分化、移动和黏粘等在内的各种细胞学反应，也控制着血管平滑肌稳态，血小板功能，微血栓稳定性及红血球形成等。不仅如此，TAM还在免疫和炎症方面发挥着关键作用。它促进凋亡细胞的吞噬，刺激NK细胞的诱导分化。
受体酪氨酸激酶TAM家族三个成员之间，Axl和Tyro3具有最为相似的基因结构，而Axl和Mer具有最为相似的酪氨酸激酶域氨基酸序列。Axl是细胞存活、增殖、聚集、迁移和黏附的重要调节器。Axl在单核细胞、巨噬细胞、血小板、内皮细胞、小脑、心脏、骨骼肌、肝脏和肾脏等细胞及器官中都有广泛表达。特别是在许多癌细胞中，Axl基因都存在着超表达或异位表达现象。各类白血病和多数的实体瘤中，Axl的过度表达现象尤为突出。不仅如此，相对于正常的组织或者初期肿瘤细胞，Axl在转移的或恶性肿瘤细胞中的表达更高，其高表达与临床治疗疗效不佳密切相关。
Axl还在多种肿瘤细胞中参与由不同机制造成的耐药性。Axl激酶的超表达已经成为癌症患者呈现治疗耐药性的一个重要标志。通过对Axl受体酪氨酸激酶的抑制可以降低肿瘤细胞促存活信号的活化、阻滞肿瘤的侵袭，增加靶向药物治疗和放、化疗的敏感度。
Mer最初是从类淋巴母细胞表达库里发现并确认为一类磷蛋白。它能调节巨噬细胞活化，促进凋亡细胞的吞噬，帮助血小板聚集，并维持体内血块的稳定。Mer在多种类型的癌症中会发生过度或异位表达，如白血病、非小细胞肺癌、黑色素瘤和前列腺癌等，导致若干典型的致癌信号传导途径的活化。
Tyro3在基于PCR克隆的研究中发现。虽然对其下游的信号传导途径有待于进一步考证，但PI3K-AKT以及RAF-MAPK信号通路的参与已被证实。
除了通过在癌细胞上过度或异位表达调控着其生长、增殖和凋亡外，TAM家簇成员在先天免疫细胞中则调控着人体免疫系统。TAM在NK细胞上均有表达，且直接抑制NK细胞的抗肿瘤活性。Mer则通过增加分泌免疫抑制细胞因子(IL10,IL4)和减少产生免疫激活细胞因子(IL12)来直接促进肿瘤相关巨噬细胞(tumor associated macrophage)的活性，促进肿瘤的生长。因此，TAM具有先天免疫检查点(innate checkpoint)功能。使用TAM激酶抑制剂能够有效地激活免疫细胞，增强免疫系统杀死肿瘤细胞或病毒的能力。
不难理解，对TAM家族激酶的抑制不仅能够抑制癌细胞的生长和增殖，还能同时激活并增强免疫系统，给治疗带来多重效果。因此，TAM抑制剂作为先天免疫检查点抑制剂(innate checkpoint inhibitor)代表着治疗癌症或其它相关疾病的新型途径。例如，TAM抑制剂既可作为单药治疗相关癌症，同时，还可与其它药物，诸如其它的靶向药物、化疗药物、放疗或免疫治疗药物，进行联用以达到协同治疗的疗效。
第一个Axl抑制剂BGB-324(bemcentinib)(WO2016193680)已经进入临床I/II期研究。与化疗药物联用治疗急性髓系白血病(AML)(NCT02488408)，与厄若替尼联用治疗非小细胞肺癌(NCT02424617)以及与免疫检测点抑制剂Keytruda联用的临床试验均已经启动(NCT03184558，NCT03184571)。
Figure BDA0002098237770000021
首个TAM抑制剂RXDX-106在临床前期的动物模型药效研究中，无论是单用还是与免疫检测点抑制剂联用，都表现出高度的抗肿瘤疗效(WO2015017067)。作为调控免疫的单药，进入了临床一期研究(NCT03454243)。
Figure BDA0002098237770000031
因此，持续需要针对受体酪氨酸激酶TAM家族成员具有高度活性的化合物或药物分子，以通过调控TAM信号通路治疗多种疾病包括癌症。
发明内容
本发明人经过潜心研究，设计合成了一系列含氮杂环类化合物，其显示出TAM激酶的抑制活性，可以被开发为治疗与TAM激酶活性相关的疾病的药物。
因此，本发明的目的是提供一种通式(I)所示的化合物，
Figure BDA0002098237770000032
或其内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式，或其氘代化合物，或其可药用盐，
其中：
Figure BDA0002098237770000033
为单键或者双键；
R和Q各自独立地选自C或N；
U和V各自独立地选自C或N；
A、E和J各自独立地选自C或N；
R1选自氢、卤素、羟基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、NRaRb，其中所述烷基、烷氧基、环烷基、和杂环基任选进一步被选自卤素、羟基、氨基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环烷基的一个或多个基团取代；
R2选自氢、卤素、羟基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、NRaRb，其中所述烷基、烷氧基、环烷基、和杂环基任选进一步被选自卤素、羟基、氨基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环烷基的一个或多个基团取代；
R3选自氢、烷基、环烷基或杂环基，所述烷基、环烷基或杂环基任选进一步被选自Ra、ORa、NRaRb、C(O)Ra、C(O)ORa、NHC(O)Ra、C(O)NRaRb、S(O)mRa、S(O)mNRaRb、NHS(O)mRa的一个或多个基团取代；
R4选自氢、卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基或卤代烷氧基；
R5选自氢、卤素、烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基任选进一步被选自卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、巯基、羧基、酯基、氧代基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基的一个或多个基团取代；
R6选自氢、氧代、卤素、氰基、烷基、ORa、SRa、NRaRb、C(O)Ra、C(O)ORa、NHC(O)Ra、C(O)NRaRb、S(O)mRa、S(O)mNRaRb或NHS(O)mRa；所述烷基任选进一步被选自卤素、氰基、ORa、SRa、NRaRb、或C(O)NRaRb的一个或多个基团取代；
R7选自烯基、炔基、芳基或杂芳基，所述烯基、炔基、芳基或杂芳基任选进一步被Ra取代；
Ra和Rb各自独立地选自氢、卤素、羟基、氧代、烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基，其中所述烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基任选进一步被选自卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、巯基、羧基、酯基、氧代基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基的一个或多个基团取代；
或者Ra和Rb与他们连接的氮原子一起形成含氮杂环基，优选4至7元含氮杂环基，所述含氮杂环基任选进一步被选自卤素、氨基、硝基、氰基、氧代基、羟基、巯基、羧基、酯基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基的一个或多个基团取代；
m为0、1或2。
在本发明的一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(II)所示的化合物，
Figure BDA0002098237770000041
或其内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式，或其氘代化合物，或其可药用盐，
其中，
Figure BDA0002098237770000042
U、V、A、E、J、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7如通式(I)中所定义。
在本发明的另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(III)或通式(IV)所示的化合物，
Figure BDA0002098237770000051
或其内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式，或其氘代化合物，或其可药用盐，
其中，A、E、J、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7如通式(I)所定义。
在本发明的另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(V)或通式(VI)所示的化合物，
Figure BDA0002098237770000052
或其内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式，或其氘代化合物，或其可药用盐，
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7如通式(I)所定义。
在本发明的另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(VII)或通式(VIII)所示的化合物，
Figure BDA0002098237770000053
或其内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式，或其氘代化合物，或其可药用盐，
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7如通式(I)所定义。
在本发明的另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(IX)或通式(X)所示的化合物，
Figure BDA0002098237770000061
或其内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式，或其氘代化合物，或其可药用盐，
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7如通式(I)所定义。
在本发明的另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(XI)或通式(XII)所示的化合物，
Figure BDA0002098237770000062
或其内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式，或其氘代化合物，或其可药用盐，
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7如通式(I)所定义。
在本发明的另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物，
其中，
R1选自氢、卤素、或NRaRb；
Ra和Rb各自独立地选自氢、烷基、环烷基，其中所述烷基和环烷基任选进一步被选自卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、巯基、羧基、酯基、氧代基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基的一个或多个基团取代；
或者Ra和Rb与他们连接的氮原子一起形成含氮杂环基，所述含氮杂环基任选进一步被选自卤素、氨基、硝基、氰基、氧代基、羟基、巯基、羧基、酯基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基的一个或多个基团取代。
在本发明的另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物，
其中，
R2选自氢或NRaRb；
Ra和Rb各自独立地选自氢或烷基。
在本发明的另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物，
其中，
R3选自环烷基或杂环基，优选C3-C7环烷基或4-7元含氮杂环基，所述环烷基或杂环基任选进一步被选自Ra、ORa、NRaRb、C(O)Ra、C(O)ORa、NHC(O)Ra、C(O)NRaRb、S(O)mRa、S(O)mNRaRb、NHS(O)mRa的一个或多个基团取代；
Ra和Rb各自独立地选自氢、卤素、羟基、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基，其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基任选进一步被选自卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、巯基、羧基、酯基、氧代基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基的一个或多个基团取代；
或者Ra和Rb与他们连接的氮原子一起形成含氮杂环基，所述含氮杂环基任选进一步被选自卤素、氨基、硝基、氰基、氧代基、羟基、巯基、羧基、酯基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基的一个或多个基团取代；
在本发明的另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物，
其中，
R4选自氢、卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基或卤代烷氧基，优选氢和卤素。
在本发明的另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物，
其中，
R5选自氢、卤素、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基，所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基任选进一步被选自卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、巯基、羧基、酯基、氧代基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基的一个或多个基团取代。
在本发明的另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物，
其中，
R6选自氢、卤素、氰基、氧代、烷基、ORa、SRa、NRaRb、或C(O)NRaRb；优选氰基、烷基、或C(O)NRaRb；所述烷基任选进一步被选自卤素、氰基、ORa、SRa、NRaRb、或C(O)NRaRb的一个或多个基团取代；
Ra和Rb各自独立地选自氢、卤素、羟基、烷基或环烷基，其中所述烷基或环烷基任选进一步被选自卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、巯基、羧基、酯基、氧代基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基的一个或多个基团取代；
或者Ra和Rb与他们连接的氮原子一起形成含氮杂环基，所述含氮杂环基任选进一步被选自卤素、氨基、硝基、氰基、氧代基、羟基、巯基、羧基、酯基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基的一个或多个基团取代。
在本发明的另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物，
其中，
R7选自烯基、炔基、芳基或杂芳基，所述烯基、炔基、芳基或杂芳基任选进一步被Ra取代；
所述芳基或杂芳基优选C6-C10芳基或者5-10元杂芳基，进一步优选苯基、萘基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、吲哚基、吡咯基、噻吩基、呋喃基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基；
Ra选自氢、卤素、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基，其中所述烷基、烷氧基、环烷基、杂环基任选进一步被选自卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、巯基、羧基、酯基、氧代基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基的一个或多个基团取代。
在本发明的另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物，其为氘代化合物，其中，氘代发生在R6基团上；
R6优选为C(O)NRaRb；
Ra和Rb各自独立地选自氢或烷基；且所述烷基优选为氘代烷基。
本发明典型的化合物包括但不限于以下化合物：
Figure BDA0002098237770000081
Figure BDA0002098237770000091
Figure BDA0002098237770000101
Figure BDA0002098237770000111
Figure BDA0002098237770000121
Figure BDA0002098237770000131
Figure BDA0002098237770000141
Figure BDA0002098237770000151
Figure BDA0002098237770000161
Figure BDA0002098237770000171
Figure BDA0002098237770000181
Figure BDA0002098237770000191
Figure BDA0002098237770000201
或其内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式，或其可药用盐。
本发明进一步提供一种制备根据本发明所述的通式(I)所示的化合物的方法，其包括以下步骤：
Figure BDA0002098237770000211
步骤1)：将式Ia的溴代化合物在碱和催化剂的存在下与式Ib对氨基芳香硼酸化合物进行Suzuki偶联反应，得到式Ic的中间体芳香胺化合物；所述催化剂优选Pd(dppf)Cl2，所述碱优选K2CO3；
步骤2)：将式Ic的化合物与式Id的羧酸化合物在碱和催化剂的存在下进行缩合反应，得到通式(I)化合物；其中所述催化剂优选HATU，所述碱优选TEA；
其中，
Figure BDA0002098237770000212
U、V、A、E、J、Q、R、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7如通式(I)所定义。
本发明进一步提供一种药物组合物，其包含根据本发明所述的通式(I)所示的化合物，以及药学上可接受的载体或赋形剂。
本发明另一方面提供根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或含有其的药物组合物，在制备TAM激酶抑制剂中的用途，其中所述TAM激酶为Axl、Mer和Tyro3。
本发明进一步提供根据本发明所述的通式(I)所示的化合物，或根据权利要求16所述的药物组合物，在制备治疗与TAM激酶活性相关的疾病的药物中的用途。所述疾病可以为乙型肝炎、丙型肝炎、艾滋病、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、直结肠癌、肠癌、胃癌、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、食道癌、胆囊癌、胰腺癌、甲状腺癌、皮肤癌、脑癌、骨癌、软组织癌、白血病和淋巴癌，优选白血病、肝癌、肺癌、肾癌和肺癌。
按照本发明所属领域的常规方法，本发明通式(I)所示的化合物可以与酸生成药学上可接受的酸式加成盐。所述酸包括无机酸和有机酸，特别优选盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、三氟乙酸、马来酸、柠檬酸、富马酸、草酸、酒石酸、苯甲酸等。
按照本发明所属领域的常规方法，本发明通式(I)所示的化合物可以与碱生成药学上可接受的碱式加成盐。所述碱包括无机碱和有机碱，可接受的有机碱包括二乙醇胺、乙醇胺、N-甲基葡糖胺、三乙醇胺、氨丁三醇等，可接受的无机碱包括氢氧化铝、氢氧化钙、氢氧化钾、碳酸钠和氢氧化钠等。
含活性成分的药物组合物可以是适用于口服的形式，例如片剂、糖锭剂、锭剂、水或油混悬液、可分散粉末或颗粒、乳液、硬或软胶囊，或糖浆剂或酏剂。可按照本领域任何已知制备药用组合物的方法制备口服组合物，此类组合物可含有一种或多种选自以下的成分：甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂，以提供悦目和可口的药用制剂。片剂含有活性成分和用于混合的适宜制备片剂的无毒的可药用的赋形剂。这些赋形剂可以是惰性赋形剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂和崩解剂，例如微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、玉米淀粉或藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶、聚乙烯吡咯烷酮或阿拉伯胶；和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。这些片剂可以不包衣或可通过掩盖药物的味道或在胃肠道中延迟崩解和吸收，因而在较长时间内提供缓释作用的已知技术将其包衣。例如，可使用水溶性味道掩蔽物质，例如羟丙基甲基纤维素或羟丙基纤维素，或延长时间物质例如乙基纤维素、醋酸丁酸纤维素。
也可用其中活性成分与惰性固体稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合的硬明胶胶囊，或其中活性成分与水溶性载体例如聚乙二醇或油溶媒例如花生油、液体石蜡或橄榄油混合的软明胶胶囊提供口服制剂。
水混悬液含有活性物质和用于混合的适宜制备水混悬液的赋形剂。此类赋形剂是悬浮剂，例如羧基甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮和阿拉伯胶；分散剂或湿润剂，可以是天然产生的磷脂例如卵磷脂，或烯化氧与脂肪酸的缩合产物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物，例如十七碳亚乙基氧基鲸蜡醇(heptadecaethyleneoxy cetanol)，或环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇衍生的部分酯的缩合产物，例如聚环氧乙烷山梨醇单油酸酯，或环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇酐衍生的偏酯的缩合产物，例如聚环氧乙烷脱水山梨醇单油酸酯。水混悬液也可以含有一种或多种防腐剂例如尼泊金乙酯或尼泊金正丙酯、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂和一种或多种甜味剂，例如蔗糖、糖精或阿司帕坦。
油混悬液可通过使活性成分悬浮于植物油如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油，或矿物油例如液体石蜡中配制而成。油混悬液可含有增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可加入上述的甜味剂和矫味剂，以提供可口的制剂。可通过加入抗氧化剂例如丁羟茴醚或α-生育酚保存这些组合物。
通过加入水，适用于制备水混悬液的可分散粉末和颗粒可以提供活性成分和用于混合的分散剂或湿润剂、悬浮剂或一种或多种防腐剂。适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂如上所述。也可加入其他赋形剂例如甜味剂、矫味剂和着色剂。通过加入抗氧化剂例如抗坏血酸保存这些组合物。
本发明的药物组合物也可以是水包油乳剂的形式。油相可以是植物油例如橄榄油或花生油，或矿物油例如液体石蜡或其混合物。适宜的乳化剂可以是天然产生的磷脂，例如大豆卵磷脂，和由脂肪酸和己糖醇酐衍生的酯或偏酯，例如山梨坦单油酸酯，和所述偏酯和环氧乙烷的缩合产物，例如聚环氧乙烷山梨醇单油酸酯。乳剂也可以含有甜味剂、矫味剂、防腐剂和抗氧剂。可用甜味剂例如甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖配制的糖浆和酏剂。此类制剂也可含有缓和剂、防腐剂、着色剂和抗氧剂。
本发明的药物组合物可以是无菌注射水溶液形式。可以使用的可接受的溶媒和溶剂有水、林格氏液和等渗氯化钠溶液。无菌注射制剂可以是其中活性成分溶于油相的无菌注射水包油微乳。例如将活性成分溶于大豆油和卵磷脂的混合物中。然后将油溶液加入水和甘油的混合物中处理形成微乳。可通过局部大量注射，将注射液或微乳注入患者的血流中。或者，最好按可保持本发明化合物恒定循环浓度的方式给予溶液和微乳。为保持这种恒定浓度，可使用连续静脉内递药装置。
本发明的药物组合物可以是用于肌内和皮下给药的无菌注射水或油混悬液的形式。可按已知技术，用上述那些适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制该混悬液。无菌注射制剂也可以是在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中制备的无菌注射溶液或混悬液，例如在1,3-丁二醇中制备的溶液。此外，可方便地用无菌固定油作为溶剂或悬浮介质。为此目的，可使用包括合成甘油单或二酯在内的任何调和固定油。此外，脂肪酸例如油酸也可以制备注射剂。
可按用于直肠给药的栓剂形式给予本发明化合物。可通过将药物与在普通温度下为固体但在直肠中为液体，因而在直肠中会溶化而释放药物的适宜的无刺激性赋形剂混合来制备这些药物组合物。此类物质包括可可脂、甘油明胶、氢化植物油、各种分子量的聚乙二醇和聚乙二醇的脂肪酸酯的混合物。
本领域技术人员熟知，药物的给药剂量依赖于多种因素，包括但并非限定于以下因素：所用特定化合物的活性、病人的年龄、病人的体重、病人的健康状况、病人的行被、病人的饮食、给药时间、给药方式、排泄的速率、药物的组合等。另外，最佳的治疗方式如治疗的模式、通式化合物的日用量或可药用的盐的种类可以根据传统的治疗方案来验证。
本发明可以含有通式(I)所示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物作为活性成分，与药学上可接受的载体或赋型剂混合制备成组合物，并制备成临床上可接受的剂型。本发明的衍生物可以与其他活性成分组合使用，只要它们不产生其他不利的作用，例如过敏反应等。本发明化合物可作为唯一的活性成分，也可以与其它治疗与酪氨酸激酶活性相关的疾病的药物联合使用。联合治疗通过将各个治疗组分同时、分开或相继给药来实现。
发明的详细说明
除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至12个碳原子的烷基，更优选含有1至6个碳原子的烷基。非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各种支链异构体等。更优选的是含有1至6个碳原子的低级烷基，非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。
术语“烯基”指由至少由两个碳原子和至少一个碳-碳双键组成的如上定义的烷基，例如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-、2-或3-丁烯基等。烯基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。
术语“炔基”指由至少由两个碳原子和至少一个碳-碳三键组成的如上定义的烷基，例如乙炔基、丙炔基、丁炔基等。炔基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。
术语“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，环烷基环包含3至20个碳原子，优选包含3至12个碳原子，更优选包含3至6个碳原子。单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等；多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。
术语“螺环烷基”指5至20元的单环之间共用一个碳原子(称螺原子)的多环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺环烷基、双螺环烷基或多螺环烷基，优选为单螺环烷基和双螺环烷基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺环烷基。螺环烷基的非限制性实例包括：
Figure BDA0002098237770000251
术语“稠环烷基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对碳原子的全碳多环基团，其中一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠环烷基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环烷基。稠环烷基的非限制性实例包括：
Figure BDA0002098237770000252
术语“桥环烷基”指5至20元，任意两个环共用两个不直接连接的碳原子的全碳多环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，优选为双环、三环或四环，更有选为双环或三环。桥环烷基的非限制性实例包括：
Figure BDA0002098237770000253
所述环烷基环可以稠合于芳基、杂芳基或杂环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基，非限制性实例包括茚满基、四氢萘基、苯并环庚烷基等。环烷基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。
术语“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包含3至20个环原子，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。优选包含3至12个环原子，其中1～4个是杂原子；最优选包含3至8个环原子，其中1～3个是杂原子；最优选包含5至7个环原子，其中1～2或1～3个是杂原子。单环杂环基的非限制性实例包括吡咯烷基、咪唑烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、二氢咪唑基、二氢呋喃基、二氢吡唑基、二氢吡咯基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基、吡喃基等，优选1、2、5-噁二唑基、吡喃基或吗啉基。多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基。
术语“螺杂环基”指5至20元的单环之间共用一个原子(称螺原子)的多环杂环基团，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺杂环基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基，优选为单螺杂环基和双螺杂环基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺杂环基。螺杂环基的非限制性实例包括：
Figure BDA0002098237770000261
术语“稠杂环基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多环杂环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂环基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环稠杂环基。稠杂环基的非限制性实例包括：
Figure BDA0002098237770000262
术语“桥杂环基”指5至14元，任意两个环共用两个不直接连接的原子的多环杂环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥杂环基，优选为双环、三环或四环，更有选为双环或三环。桥杂环基的非限制性实例包括：
Figure BDA0002098237770000271
所述杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基，其非限制性实例包括：
Figure BDA0002098237770000272
等。
杂环基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。
术语“芳基”指具有共轭的π电子体系的6至14元全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，优选为6至10元，例如苯基和萘基。更优选苯基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，其非限制性实例包括：
Figure BDA0002098237770000273
芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
术语“杂芳基”指包含1至4个杂原子、5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子选自氧、硫和氮。杂芳基优选为5至10元，含1至3个杂原子；更优选为5元或6元，含1至2个杂原子；优选例如咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡唑基、噁唑基、吡咯基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、噻二唑、吡嗪基等，优选为咪唑基、噻唑基、吡唑基或嘧啶基、噻唑基；更有选吡唑基或噻唑基。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，其非限制性实例包括：
Figure BDA0002098237770000274
杂芳基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
术语“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(非取代的环烷基)，其中烷基的定义如上所述。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基。烷氧基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
术语“卤代烷基”指被一个或多个卤素取代的烷基，其中烷基如上所定义。
术语“卤代烷氧基”指被一个或多个卤素取代的烷氧基，其中烷氧基如上所定义。
术语“羟基”指-OH基团。
术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。
术语“氨基”指-NH2。
术语“氰基”指-CN。
术语“硝基”指-NO2。
术语“氧代”指＝O。
术语“羧基”指-C(O)OH。
术语“巯基”指-SH。
术语“酯基”指-C(O)O(烷基)或-C(O)O(环烷基)，其中烷基和环烷基如上所定义。
术语“酰基”指含有-C(O)R基团的化合物，其中R为烷基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基。
“任选”或“任选地”意味着随后所描述的事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
“氘代化合物”指本发明化合物中非活泼C-H键中的氢原子被氘原子所取代。
“可药用盐”是指本发明化合物的盐，这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性。
本发明化合物的合成方法
为了完成本发明的目的，本发明采用如下技术方案。
本发明通式(III)化合物的制备如下方案1所示：
Figure BDA0002098237770000291
Figure BDA0002098237770000301
方案1
当R6＝C(O)NRaRb时，
步骤1：乙酰乙酸乙酯与N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛在室温条件下直接缩合，得到(Z)-2-((二甲基氨基)亚甲基)-3-氧代丁酸乙酯(IIIa)；
步骤2：(Z)-2-((二甲基氨基)亚甲基)-3-氧代丁酸乙酯(IIIa)在无水四氢呋喃中与强碱氢化钠作用形成烯醇钠盐中间体，然后与草酸二乙酯发生环化反应，得到4-氧代-4H-吡喃-2,5-二羧酸二乙酯(IIIb)；
步骤3：4-氧代-4H-吡喃-2,5-二羧酸二乙酯(IIIb)与胺(R5NH2)通过加成缩合反应，得到N-R5-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二羧酸二乙酯(IIIc)；
步骤4：N-R5-1-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二羧酸二乙酯(IIIc)被N-溴代丁二酰亚胺(NBS)溴代，得到N-R5-3-溴-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二羧酸二乙酯(IIId)。
步骤5：N-R5-3-溴-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二羧酸二乙酯(IIId)与相应硼酸通过Suzuki偶联反应得到N-R5-3-R7-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二羧酸二乙酯(IIIe)；反应使用的碱优选为碳酸钾，催化剂优选为Pd(dppf)Cl2，溶剂优选为二氧六环/水；
步骤6：N-R5-3-R7-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二羧酸二乙酯(IIIe)在氢氧化钠作用下进行选择性水解，得到N-R5-6-(乙氧基羰基)-5-R7-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(IIIf)；
步骤7：溴代杂环中间体Ia(见制备例)与对氨基芳香硼酸(IIIg)进行Suzuki偶联反应，得到中间体芳香胺化合物(IIIh)，反应所用催化剂优选Pd(dppf)Cl2，碱优选K2CO3，溶剂优选为二氧六环/水；
步骤8：芳香胺(IIIh)和N-R5-6-(乙氧基羰基)-5-R7-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(IIIf)在偶联剂作用下发生缩合反应，得到N-R5-6-(乙氧基羰基)-5-R7-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-芳酰胺(IIIi)，反应所使用的偶联剂优选HATU，碱优选为TEA，溶剂优选为DMF，反应温度为室温；
步骤9：N-R5-6-(乙氧基羰基)-5-R7-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-芳酰胺(IIIi)直接与RaRbNH进行胺酯交换，获得本发明通式(III)化合物；或者经先酯基水解，再与RaRbNH进行酰胺化反应的两步过程得到本发明通式(III)化合物；
当R6＝CN时，
步骤10：将Ra＝Rb＝H时的酰胺化合物(IIIk)用三氟乙酸酐和三乙胺进行脱水处理，将酰基转变成氰基，从而得到本发明通式(III)化合物。
本发明通式(IV)化合物制备如下方案2和方案3所示：
Figure BDA0002098237770000311
方案2
当R6为C(O)NRaRb以外的基团时，
步骤1：起始原料丙二酸酰胺乙酯在碱性介质中与2-羰基丁醛甲基缩醛进行缩合环化反应，得到1-R7-6-甲基-2-羰基-1,2-二氢吡啶-3-甲酸(IVa)，所述碱性介质优选EtONa/EtOH；
步骤2：碘乙烷在NMP和Na2CO3的共同作用下，将1-R7-6-甲基-2-羰基-1,2-二氢吡啶-3-甲酸(IVa)中的羧基保护，得到1-R7-6-甲基-2-羰基-1,2-二氢吡啶-3-甲酸乙酯(IVb)；
步骤3：N-溴代丁二酰亚胺(NBS)同时通过亲电取代和过氧苯甲酸(BPO)引发下的自由基取代，得到双溴代的1-R7-6-溴甲基-5-溴-2-羰基-1,2-二氢吡啶-3-甲酸乙酯(IVc)；
步骤4：通过衍生1-R7-6-溴甲基-5-溴-2-羰基-1,2-二氢吡啶-3-甲酸乙酯(IVc)中的溴代甲基得到中间体(IVd)；
步骤5：在溶剂中，通过碱水解N-R7-6-R6-2-羰基-1,2-二氢吡啶-3-甲酸乙酯(IVd)，得到相应的N-R7-6-R6-2-羰基-1,2-二氢吡啶-3-甲酸(IVe)，所述溶剂优选MeOH和水的混合溶剂，所述碱优选LiOH；
步骤6：N-R7-6-R6-2-羰基-1,2-二氢吡啶-3-甲酸(IVe)与芳香胺(IIIh)在偶联剂和碱的作用下进行缩合反应，得到N-R7-6-R6-2-羰基-1,2-二氢吡啶-3-甲酰芳胺(IVf)；所述偶联剂优选HATU，所述碱优选三乙胺；
步骤7：酰胺中间体(IVf)与相应的硼酸化合物R5B(OH)2在催化剂和碱的作用下直接进行Suzuki偶联反应，得到本发明通式(IV)化合物，所述催化剂优选Pd(dppf)Cl2，所述碱优选K2CO3。
Figure BDA0002098237770000321
方案3
当R6＝C(O)NRaRb时，
步骤1：1-R7-6-溴甲基-5-溴-2-羰基-1,2-二氢吡啶-3-甲酸乙酯(IVc)在弱碱作用下进行选择性水解，得到1-R7-6-羟基甲基-5-溴-2-羰基-1,2-二氢吡啶-3-甲酸乙酯(IVg)，所述弱碱优选NaHCO3；
步骤2：所得羟基甲基中间体(IVg)首先在swern条件下被氧化为相应的醛，随即醛再被NaClO2进一步被氧化到羧酸，得到1-R7-6-羧基-5-溴-2-羰基-1,2-二氢吡啶-3-甲酸乙酯(IVh)；
步骤3：使用方案1中步骤2同样的条件，将式(IVh)中的羧基转化为乙酯，得到1-R7-5-溴-2-羰基-1,2-二氢吡啶-3,6-二甲酸乙酯(IVi)；
步骤4：将得到的二甲酸乙酯(IVi)在碱的作用下进行选择性水解得到1-R7-3-羧基-5-溴-2-羰基-1,2-二氢吡啶-3-甲酸乙酯(IVj)，所述碱优选LiOH；
步骤5：1-R7-3-羧基-5-溴-2-羰基-1,2-二氢吡啶-3-甲酸乙酯(IVj)与芳香胺(IIIh)在偶联剂和碱的作用下进行缩合反应，得到相应的1-R7-6-(乙氧基)-羰基-5-溴-2-羰基-1,2-二氢吡啶-3-甲酰芳胺(IVk)，所述偶联剂优选HATU，所述碱优选TEA为碱，使用的溶剂优选DMF；
步骤6：1-R7-6-(乙氧基)-羰基-5-溴-2-羰基-1,2-二氢吡啶-3-甲酰芳胺(IVk)与硼酸化合物进行Suzuki偶联反应，得到1-R7-6-(乙氧基)-羰基-5-R5-2-羰基-1,2-二氢吡啶-3-甲酰芳胺(IVl)，其中使用的催化剂优选Pd(dppf)Cl2，使用的碱优选K2CO3，溶剂优选二氧六环/水为混合溶剂；
步骤7：1-R7-6-(乙氧基)-羰基-5-R5-2-羰基-1,2-二氢吡啶-3-甲酰芳胺(IVl)在碱的作用下水解其乙酯官能团，得到1-R7-6-羧基-5-R5-2-羰基-1,2-二氢吡啶-3-甲酰芳胺(IVm)，所述碱优选LiOH；
步骤8：将所得的羧基进一步酰胺化，获得本发明的通式(IV)化合物。
本发明通式(V)化合物的制备如下方案4所示：
Figure BDA0002098237770000331
方案4
步骤1：在二异丙基乙基胺作用下，2-(氨基亚甲基)丙二酸二乙酯与R7异氰酸酯进行缩合反应，得到中间体脲(Va)；
步骤2：中间体脲(Va)随即在强碱乙醇钠中发生自身环化反应，得到3-R7-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢-嘧啶-5-羧酸乙酯(Vb)；
步骤3：在溶剂中，在碱的存在下，将3-R7-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢-嘧啶-5-羧酸乙酯(Vb)与R5I进行N-烷基化反应，得到1-R5-3-R7-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢-嘧啶-5-羧酸乙酯中间体(Vc)，使用的溶剂优选为DMF，使用的碱优选为碳酸钾；
步骤4：1-R5-3-R7-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢-嘧啶-5-羧酸乙酯中间体(Vc)在盐酸溶液中进行乙酯的水解，得到1-R5-3-R7-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢-嘧啶-5-羧酸(Vd)；
步骤5：1-R5-3-R7-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢-嘧啶-5-羧酸(Vd)与芳香胺(IIIh)在偶联剂和碱的作用下进行缩合反应，得到本发明的通式(V)化合物；所述偶联剂优选HATU，所述碱优选TEA，使用的溶剂优选DMF。
其中，A、E、J、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7如通式(I)所定义。
具体实施方式
进一步通过实施例来理解本发明的化合物及其制备，这些实施例说明了一些制备或使用所述化合物的方法。然而，要理解的是，这些实施例不限制本发明。现在已知的或进一步开发的本发明的变化被认为落入本文中描述的和要求保护的本发明范围之内。
本发明化合物是利用便利的起始原料和通用的制备步骤来完成制备的。本发明给出了典型的或倾向性的反应条件，诸如反应温度、时间、溶剂、压力、反应物的摩尔比。但是除非特殊说明，其他反应条件也能采纳。优化条件可能随着具体的反应物或溶剂的使用而改变，但在通常情况下，反应优化步骤和条件都能得到确定。
另外，本发明中可能用到了一些保护基团来保护某些官能团避免不必要的反应。适宜于各种官能团的保护基以及它们的保护或脱保护条件已经为本领域技术人员广泛熟知。例如T.W.Greene和G.M.Wuts的《有机制备中的保护基团》(第3版，Wiley，New York，1999和书中的引用文献)详细描述了大量的保护基团的保护或脱保护。
化合物和中间体的分离和纯化依据具体的需求采取适当的方法和步骤，例如过滤、萃取、蒸馏、结晶、柱层析、制备薄层板色谱、制备高效液相色谱或上述方法的混合使用。其具体使用方法可参阅本发明描述的实例。当然，其他类似的分离和纯化手段也是可以采用的。可以使用常规方法(包括物理常数和波谱数据)对其进行表征。
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)来确定的。NMR位移以10-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Brukerdps300型核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl3)，氘代甲醇(CD3OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)。
MS的测定用ACQUITY H-Class UPLC质谱仪(QDa Detector)(生产商：Waters)。
制备液相使用Waters 2545高效液相色谱仪(Waters 2489UV/visible Detector,2767Sample MGR,Unitary C18,5μm 20mm x250mm)(生产商：Waters)。
微波反应使用Initiator+EU型微波反应器(生产商：Biotage)。
薄层层析硅胶板使用青岛海洋化工GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。
柱层析一般使用青岛海洋硅胶100～200目、200～300目硅胶为载体。
本发明的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自网化商城、北京偶合、Sigma、百灵威、易世明、上海书亚、上海伊诺凯、安耐吉化学，上海毕得等公司。
实施例中无特殊说明，反应能够均在氩气氛或氮气氛下进行。
氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。
反应溶剂，有机溶剂或惰性溶剂各自表述为使用的该溶剂在所描述的反应条件下不参与反应，包括，如苯、甲苯、乙腈、四氢呋喃(THF)、二甲基甲酰胺(DMF)、氯仿、二氯甲烷、乙醚、甲醇、氮-甲基吡咯碄酮(NMP)、吡啶等。实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。
本发明中所描述的化学反应一般在常压下进行。反应温度在-78℃至200℃之间。反应时间和条件为，例如，一个大气压下，-78℃至200℃之间，大约1至24小时内完成。如果反应过夜，则反应时间一般为16小时。实施例中无特殊说明，反应的温度为室温，为20℃～30℃。
实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC)，反应所使用的展开剂的体系有：A：二氯甲烷和甲醇体系，B：正己烷和乙酸乙酯体系，C：石油醚和乙酸乙酯体系，D：丙酮，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节。
纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂体系包括：A：二氯甲烷和甲醇体系，B：正己烷和乙酸乙酯体系，C：石油醚和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺和醋酸等碱性或酸性试剂进行调节。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。
缩略语
μL＝微升；
μM＝微摩尔；
NMR＝核磁共振；
Boc＝叔丁氧基羰基
br＝宽峰
d＝双峰
δ＝化学位移
℃＝摄氏度
dd＝双双峰
DIPEA＝二异丙基乙基胺
DMF＝N,N-二甲基甲酰胺
DMSO＝二甲亚砜
DCM＝二氯甲烷
EA＝乙酸乙酯
HPLC＝高效液相
Hz＝赫兹
IC50＝抑制50％活性的浓度
J＝偶合常数(Hz)
m＝多重峰
M+H+＝母体化合物质量+一质子
mg＝毫克
mL＝毫升
mmol＝毫摩尔
MS＝质谱
nM＝纳摩尔
NBS＝N-溴代琥珀酰亚胺
PE＝石油醚
ppm＝每百万分
s＝单峰
t＝三重峰
TEA＝三乙胺
TBDPS＝叔丁基二苯基硅
TFA＝三氟乙酸
THF＝四氢呋喃
制备实施例1：6-(乙氧基羰基)-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(中间体a)的制备
Figure BDA0002098237770000361
Figure BDA0002098237770000371
步骤1：(Z)-2-((二甲基氨基)亚甲基)-3-氧代丁酸乙酯(a1)的制备
于0℃，将N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(1.72kg，14.4mol)滴加到含有乙酰乙酸乙酯(1.79kg，13.75mol)的反应瓶中(内温小于10℃)。反应混合物升至室温搅拌过夜，待反应完成后，将反应液减压浓缩，得到(Z)-2-((二甲基氨基)亚甲基)-3-氧代丁酸乙酯(2.54kg，红色油状物)。直接用于下一步反应。
LC-MS(ESI)：m/z 186.2[M+H+]。
1HNMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.66(s,1H),4.22(q,J＝7.1Hz,2H),3.24–2.84(m,6H),2.31(s,3H),1.31(t,J＝7.1Hz,3H)。
步骤2：4-氧代-4H-吡喃-2,5-二羧酸二乙酯(a2)的制备
在含有无水四氢呋喃(700mL)的反应瓶中加入(Z)-2-((二甲基氨基)亚甲基)-3-氧代丁酸乙酯(150g，0.81mol)和草酸二乙酯(130g，0.89mol)。于80℃，向反应混合物中缓慢加入氢化钠(38.8g，0.97mol，60％)，加毕，继续搅拌30分钟。待反应完全后冷却至室温，于0℃，用1N的稀盐酸(1800ml)淬灭，反应液用乙酸乙酯萃取(600mLx3)，合并有机相。用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗产品通过乙醇:石油醚/1:10打浆得到4-氧代-4H-吡喃-2,5-二羧酸二乙酯(140g，黄色固体，收率:72％)。
LC-MS(ESI)：m/z 241.1[M+H+]。
1HNMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.53(s,1H),7.18(s,1H),4.45–4.34(m,4H),1.39(dd,J＝12.8,7.1Hz,6H)。
步骤3：1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二羧酸二乙酯(a3)的制备
在含有乙醇(1875mL)的反应瓶中加入4-氧代-4H-吡喃-2,5-二羧酸二乙酯(300g，1.25mol)，将混合物冷却至0℃，搅拌下滴加异丙胺(73.8g，1.25mol)，加毕，升至室温并继续搅拌30分钟后，回流过夜。待反应完成后，反应液减压浓缩，残余物用乙酸乙酯溶解(200ml)，并冷至0℃，滴加浓盐酸(104ml)，搅拌约30分钟，过滤，滤饼用乙酸乙酯(600ml)冲洗，收集固体得到1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二羧酸二乙酯盐酸盐(307.99g，白色固体，收率：70％)。
LC-MS(ESI)：m/z 282.12[M+H+]。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.46(s,1H),6.77(s,1H),4.73–4.62(m,1H),4.37(d,J＝7.1Hz,2H),4.24(q,J＝7.1Hz,2H),1.44(d,J＝6.6Hz,7H),1.35–1.21(m,6H)。
步骤4：3-溴-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二羧酸二乙酯(a4)的制备
在含有DMF(1500mL)的反应瓶中加入1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二羧酸二乙酯(307g，1.09mol)。将反应物冷至0℃，缓慢滴加液溴(167.5ml，3.27mol)。加毕，继续搅拌30分钟。待反应完成后，将反应液滴加到含有亚硫酸氢钠的水中(7500mL)，搅拌1小时，过滤，滤饼用水(2L)洗涤，收集滤饼，干燥，得到3-溴-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二羧酸二乙酯(236.69g，白色固体，收率：67.8％)。
LC-MS(ESI)：m/z 360.07/362.07[M+H+]。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.25(s,1H),4.50(q,J＝7.2Hz,2H),4.37(q,J＝7.1Hz,2H),4.13(p,J＝6.6Hz,1H),1.52(d,J＝6.6Hz,6H),1.41(dt,J＝22.2,7.1Hz,6H)。
步骤5：5-溴-6-(乙氧基羰基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(a5)的制备
在含有(1600mL)乙醇的反应瓶中加入3-溴-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二羧酸二乙酯(323.11g，0.9mol)。将反应物冷却至0℃，滴加氢氧化钠水溶液(160mL水，1.06mol氢氧化钠)，加毕并继续搅拌1小时。待反应完成后，用1.5N的稀盐酸(700mL)调节pH～7，有白色固体析出，继续搅拌30分钟。过滤，收集固体，干燥，得到5-溴-6-(乙氧基羰基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(271.2g，白色固体，收率：90.8％)。
LC-MS(ESI)：m/z 331.95/333.91[M+H+]。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ14.71(s,1H),8.59(s,1H),4.56(q,J＝7.1Hz,2H),4.28(hept,J＝6.7Hz,1H),1.58(d,J＝6.6Hz,6H),1.47(t,J＝7.2Hz,3H)。
步骤6：6-(乙氧基羰基)-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(a)的制备
于室温，在含有1,4-二氧六环(400mL)和水(100mL)的反应瓶中加入5-溴-6-(乙氧基羰基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(43.5g，0.13mol)、对氟苯硼酸(25.18g，0.18mol)、碳酸钾(71.8g，0.52mol)和Pd(dppf)Cl2(475mg，0.065mmol)。密封，氮气置换三次，于85℃搅拌过夜。待反应液冷却至室温后，加水(600mL)和乙酸乙酯(200mL)稀释，过滤，静止分层。水相用浓盐酸调节PH约为6，白色沉淀产生，过滤，滤饼用水洗涤，干燥得到6-(乙氧基羰基)-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(31g，白色固体，收率68％)。
LC-MS(ESI)：m/z 348.10[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ15.73(s,1H),8.81(s,1H),7.37–7.22(m,4H),4.39(p,J＝6.5Hz,1H),4.15(q,J＝7.1Hz,2H),1.54(d,J＝6.5Hz,6H),0.93(t,J＝7.1Hz,3H)。
制备实施例2：6-(乙氧基羰基)-5-(4-氟苯基)-1-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(中间体b)的制备
Figure BDA0002098237770000391
采用与制备实施例1相同的方法，除了用甲胺水溶液代替异丙胺，制得6-(乙氧基羰基)-5-(4-氟苯基)-1-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(灰色固体，四步收率：38.5％)。
LC-MS(ESI)：m/z 320.1[M+H+]。
制备实施例3：1-环丁基-6-(乙氧基羰基)-5-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(中间体c)的制备
Figure BDA0002098237770000392
采用与制备实施例1相同的方法，除了用环丁胺代替异丙胺，制得1-环丁基-6-(乙氧基羰基)-5-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(白色固体，四步收率：80.9％)
LC-MS(ESI)：m/z360.1[M+H+]。
制备实施例4：1-环丙基-6-(乙氧基羰基)-5-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(中间体d)的制备
Figure BDA0002098237770000401
采用与制备实施例1相同的方法，除了用环丙基胺代替异丙胺，制得1-环丙基-6-(乙氧基羰基)-5-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(灰色固体，四步收率：70.8％)。
LC-MS(ESI)：m/z 346.3[M+H+]。
制备实施例5：1-(4-(4-氨基-3-(4-氨基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(中间体e)的制备
Figure BDA0002098237770000402
步骤1：3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(e1)的制备
在含有DMF(450mL)的反应瓶中加入4-氨基吡唑并[3,4-d]嘧啶(15.0g，111mmol)和NIS(32.4g，144.3mmol)。将反应混合物于80℃搅拌过夜，待反应完成后，将其冷至室温，加水(800mL)稀释并搅拌30分钟，过滤，滤饼用水洗涤，收集滤饼，干燥，得到3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(20g，黄色固体，收率：69.2％)。
LC-MS(ESI)：m/z 261.9[M+H+]。
步骤2：4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(e2)的制备
在含有无水四氢呋喃溶液(100mL)的反应瓶中加入3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(e1)(5g，19.15mmol)、N-Boc-4-羟基哌啶(1.95g，34.4mmol)和三苯基膦(15.34g，58.5mmol)，密封，氮气置换三次。于0℃，滴加偶氮二甲酸二异丙酯(11.8g，58.5mmol)，加毕，将反应物升至室温搅拌过夜。待反应完成后，减压浓缩反应液，得到粗产品4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(红色油状物)。
LC-MS(ESI)：m/z445.1[M+H+]。
步骤3：3-碘-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(e3)的制备
在含有二氯甲烷(100mL)的反应瓶中加入4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(e2)和盐酸二氧六环(25mL，4M)。室温搅拌6小时。待反应完成后，过滤，滤饼用二氯甲烷洗涤，收集固体，干燥得到3-碘-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(5.9g，黄色固体，两步收率：74.4％)。
步骤4：1-(4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(e4)的制备
在含有DMF(30mL)的反应瓶中加入3-碘-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(e3)(2g，5.25mmol)、异丁酸(462mg，5.25mmol)、HATU(3g，7.88mmol)和DIPEA(2.03g，15.75mmol)。将混合物于室温搅拌30分钟，待反应完全后，加入饱和的碳酸氢钠溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取(80mLx3)。合并有机相，并用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱剂为MeOH:DCM＝1:10)，得到1-(4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(1.7g，黄色固体，收率：78.3％)。
LC-MS(ESI)：m/z 415.23[M+H+]。
步骤5：1-(4-(4-氨基-3-(4-氨基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(中间体e)的制备
于室温，在含有DMF(90mL)和水(60mL)的反应瓶中加入1-(4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(e4)(9g，21.7mmol)、4-氨基苯硼酸频哪醇酯(5.7g，26mmol)、磷酸钾(13.8g，65.1mmol)和Pd(dppf)Cl2(1.5g，2.17mmol)。密封，氮气置换三次，加热至95℃搅拌3小时。待反应液冷却至室温后，加水(300mL)稀释，用乙酸乙酯萃取(100mL x3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，粗品通过打浆(石油醚：乙酸乙酯/1:1)，得到1-(4-(4-氨基-3-(4-氨基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(6g，黄色固体，收率73.1％)。
LC-MS(ESI)：m/z 380.3[M+H+]。
制备实施例6：1-(4-(4-氨基-5-(4-氨基苯基)吡咯并[2,1-F][1,2,4]三嗪-7-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(中间体f)的制备
Figure BDA0002098237770000421
步骤1：(1H-吡咯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(f1)的制备
于室温，在含有1,4-二氧六环(60mL)的反应瓶中加入肼基甲酸叔丁酯(10g，75.6mmol)、2,5-二甲氧基四氢呋喃(11g，83.2mmol)和盐酸(1mL，2M)。反应瓶被装置一个分水器并加热至90℃搅拌过夜。反应液冷却至室温后，用饱和的碳酸氢钠溶液中和，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过打浆(乙醚)得到(1H-吡咯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(9.3g，黄色固体，67.8％)。
LC-MS(ESI)：m/z183.1[M+H+]。
步骤2：(2-氰基-1H-吡咯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(f2)的制备
在含有乙腈(80mL)的反应瓶中加入(1H-吡咯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(f1)(9.3g，51mmol)。将混合物冷却至0℃，滴加氯磺酰异氰酸酯(7.5g，53.4mmol)，加毕，反应液搅拌1小时后，滴加无水DMF(9.3mL)并继续搅拌1小时。待反应完成后，加水(100mL)淬灭并用乙酸乙酯萃取(50mLx3)，合并的有机相用饱和的食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱液为PE:EA＝5:1)得到(2-氰基-1H-吡咯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(5.7g，白色固体，收率：54.2％)。
LC-MS(ESI)，m/z 208.1[M+H+]。
步骤3：1-氨基-1H-吡咯-2-腈盐酸盐(f3)的制备
在含有二氯甲烷(50mL)的反应瓶中加入(2-氰基-1H-吡咯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(f2)(5.2g，25mmol)和盐酸二氧六环(12.5mL，4M)。室温搅拌6小时。待反应完成后，过滤，滤饼用二氯甲烷洗涤，收集固体，干燥得到1-氨基-1H-吡咯-2-腈盐酸盐(3.2g，黄色固体，收率：88.8％)。
1HNMR(400MHz,Methanol-d4)δ6.89(dd,J＝2.8,1.8Hz,1H),6.60(dd,J＝4.3,1.8Hz,1H),5.98(dd,J＝4.3,2.8Hz,1H)。
步骤4：吡咯并[2,1-F][1,2,4]三嗪-4-胺(f4)的制备
于室温，在含有乙醇(60mL)的反应瓶中加入1-氨基-1H-吡咯-2-腈盐酸盐(f3)(3g，20.8mmol)、醋酸甲脒(10.8g，104mmol)和磷酸钾(22g，104mmol)。反应液加热至回流搅拌24小时。反应液冷却至室温后，减压浓缩，残余物用乙酸乙酯(200mL)稀释，有机相依次用水，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱液为PE:EA＝1:1)得到吡咯并[2,1-F][1,2,4]三嗪-4-胺(2.2g，黄色固体，收率78.5％)。
LC-MS(ESI)，m/z 135.2[M+H+]。
1HNMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.64(s,1H),7.43(dd,J＝2.6,1.5Hz,1H),6.76(dd,J＝4.4,1.5Hz,1H),6.55(dd,J＝4.4,2.6Hz,1H)。
步骤5：7-溴吡咯并[2,1-f]的[1,2,4]三嗪-4-胺(f5)的制备
在含有无水DMF(25mL)的反应瓶中加入吡咯并[2,1-F][1,2,4]三嗪-4-胺(f4)(2.2g，16.4mmol)。将混合物冷却至-20℃，加入二溴海因(2.3g，8.2mmol)，加毕，继续搅拌45分钟。待反应完成后，用亚硫酸钠溶液(100mL)淬灭，并用乙酸乙酯萃取(50mLx3)，合并的有机相用饱和的食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到7-溴吡咯并[2,1-f]的[1,2,4]三嗪-4-胺(3.1g，黄色固体，收率：88.8％)，直接用于下一步反应。
LC-MS(ESI)，m/z212.9/214.9[M+H+]。
步骤6：(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(f6)的制备
于室温，在含有(120mL)乙二醇二甲醚和水(30mL)的反应瓶中加入7-溴吡咯并[2,1-f]的[1,2,4]三嗪-4-胺(f5)(3.04g，14.3mol)、N-Boc-1,2,5,6-四氢吡啶-4-硼酸频哪醇酯(5.3g，17.2mol)、碳酸钠(4.5g，42.9mol)和Pd(dppf)Cl2(526mg，0.72mmol)。密封，氮气置换三次，于80℃搅拌过夜。待反应液冷却至室温后，加水(100mL)稀释，用乙酸乙酯萃取(80mL x3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱液为DCM:MeOH＝10:1)，得到(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(3.9g，黄色固体，收率：86.8％)。
LC-MS(ESI)，m/z316.2[M+H+]。
步骤7：(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(f7)的制备
在含有乙酸(100mL)的反应瓶中加入(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(f6)(3.5g，11mmol)和二氧化铂(252mg，1.1mmo)。在氢气氛下，将反应液于室温搅拌2天。待反应完成后，减压浓缩，残余物用乙酸乙酯(100mL)稀释，有机相依次用饱和的碳酸氢钠溶液，饱和的食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱液为DCM:MeOH＝4:1)，得到(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.2g，黄色固体，收率62.5％)。
LC-MS(ESI)，m/z 318.2[M+H+]。
步骤8：(4-氨基-5-溴吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(f8)的制备
在含有无水四氢呋喃(60mL)的反应瓶中加(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(f7)(2.2g，6.9mmol)。将混合物冷至-20℃，分批加入二溴海因(990mg，3.5mmol)，加毕，继续搅拌1小时。待反应完成后，用亚硫酸钠溶液(100mL)淬灭并用乙酸乙酯萃取(50mLx3)，合并的有机相用饱和的食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱液为DCM:MeOH＝10:1)得到(4-氨基-5-溴吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.3g，黄色固体，收率83.9％)。
LC-MS(ESI)：m/z 396.2/398.2[M+H+]。
步骤9：5-溴-7-(哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺盐酸盐(f9)的制备
在含有二氯甲烷(20mL)的反应瓶中加入(4-氨基-5-溴吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(f8)(2.3g，5.8mmol)和盐酸二氧六环(5mL，4M)。反应液在室温搅拌4小时。待反应完成后，减压浓缩得到5-溴-7-(哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺盐酸盐，直接用于下一步反应。
LC-MS(ESI)：m/z 296.1/298.1[M+H+]。
步骤10：1-(4-(4-氨基-5-溴吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(f10)的制备
在含有DMF(10mL)的反应瓶中加入5-溴-7-(哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺盐酸盐(f9)(800m g，2.2mmol)、异丁酸(193mg，2.2mmol)、HATU(2.5g，6.6mmol)和DIPEA(1.1g，8.8mmol)。将混合物于室温搅拌30分钟，待反应完全后，加入饱和的碳酸氢钠溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取(80mLx3)。合并有机相，并用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱剂为MeOH:DCM＝1:10)，得到1-(4-(4-氨基-5-溴吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(650mg，黄色固体，收率：80.9％)。
LC-MS(ESI)：m/z 366.1/368.1[M+H+]。
步骤11：1-(4-(4-氨基-5-(4-氨基苯基)吡咯并[2,1-F][1,2,4]三嗪-7-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(f)的制备
于室温，在含有甲苯(10mL)、1,4-二氧六环(10mL)和水(50mL)的反应瓶中加入1-(4-(4-氨基-5-溴吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(f10)(740mg，2.02mmol)、4-氨基苯硼酸频哪醇酯(532g，2.43mmol)、碳酸钠(642mg，6.06mmol)和Pd(dppf)Cl2(147mg，0.2mmol)。密封，氮气置换三次，加热至100℃搅拌6小时。待反应液冷却至室温后，加水(100mL)稀释，用乙酸乙酯萃取(50mL x3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱液为DCM:MeOH＝10:1)，得到1-(4-(4-氨基-5-(4-氨基苯基)吡咯并[2,1-F][1,2,4]三嗪-7-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(500m g，黄色固体，收率65.3％)。
LC-MS(ESI)：m/z 379.2[M+H+]。
制备实施例7：1-(4-(5-(4-氨基苯基)-2-(丁基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(中间体g)的制备
Figure BDA0002098237770000451
步骤1：5-溴-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(g1)的制备
在含有乙腈(80mL)的反应瓶中加2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(5g，32.5mol)。反应液冷却至0℃，加入NBS(6.9g，39mol)。加毕，继续搅拌1小时。待反应完成后，用亚硫酸氢钠溶液(100mL)淬灭，乙酸乙酯萃取(80mLx3)。合并有机相，并用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱剂为MeOH:DCM＝1:10)，得到5-溴-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(6.3g，黄色固体，收率：84％)。
LC-MS(ESI)：m/z231.9/233.9[M+H+]。
步骤2-4：1-(4-(5-溴-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(g4)的制备
采用与制备实施例5相同的方法，除了5-溴-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(g1)代替3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(e1)，制得1-(4-(5-溴-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(g4)(黄色固体，三步收率：44.7％)。
LC-MS(ESI)：m/z 385/387[M+H+]。
步骤5：1-(4-(5-溴-2-(丁基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(g5)的制备
于室温，在含有异丙醇(12mL)的反应瓶中加入1-(4-(5-溴-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(1.0g，2.59mmol)和正丁胺(948mg，12.96mmol)。将混合物加热至回流过夜，待反应完全后，反应液减压浓缩，得到1-(4-(5-溴-2-(丁基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮。直接用于下一步反应。
LC-MS(ESI)：m/z422.2/424.2[M+H+]。
步骤6：1-(4-(5-(4-氨基苯基)2-(丁基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(g)的制备
采用与制备实施例5相同的方法，除了1-(4-(5-溴-2-(丁基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮代替1-(4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(1.2g，黄色固体，收率88.3％)。
LC-MS(ESI)：m/z 435.3[M+H+]。
制备实施例8：1-(4-(4-氨基-5-(4-氨基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(中间体h)的制备
Figure BDA0002098237770000471
步骤1：4-(5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(h1)的制备
在含有无水四氢呋喃溶液(20mL)的反应瓶中加入5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(上海韶远，930mg，4.0mmol)、N-Boc-4-羟基哌啶(966mg，4.8mmol)和三苯基膦(1.57g，6.0mmol)。密封，氮气置换三次。将反应液冷却至0℃，缓慢滴加偶氮二甲酸二乙酯(1.05g，6.0mmol)，加毕，将反应液升至室温搅拌4小时。待反应完成后，减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱液为PE:EA＝2:1)，得到4-(5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(h1)(1.24g，白色固体，收率：75％)。
LC-MS(ESI)：m/z415.07/417.05[M+H+]。
步骤2：4-(4-氨基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(h2)的制备
在含有1,4-二氧六环溶液(3mL)的反应瓶中加入4-(5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(h1)(1g，2.42mmol)和氨水(30％，6mL)。密封，将反应液加热至100℃搅拌4小时。待反应完成后，减压浓缩，得到粗品4-(4-氨基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(h2)(940mg，黄色固体，收率：100％)。
LC-MS(ESI)：m/z396.18/398.16[M+H+]。
步骤3：5-溴-7-(哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(h3)的制备
在含有二氯甲烷(10mL)的反应瓶中加入4-(4-氨基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(h2)(940mg，2.38mmol)和盐酸二氧六环(6mL，4M)。反应液室温搅拌4小时，待反应完成后，减压浓缩，得到粗品5-溴-7-(哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(h3)(700mg，黄色固体，收率：100％)。
LC-MS(ESI)：m/z 296.01/297.98[M+H+]。
步骤4：1-(4-(4-氨基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(h4)的制备
在含有DMF(7mL)的反应瓶中加入5-溴-7-(哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(h3)(700mg，2.38mmol)、异丁酸(210mg，2.38mmol)、HATU(1.36g，3.57mmol)和DIPEA(1.83g，14.16mmol)。反应液于室温搅拌30分钟，待反应完全后，加入饱和的碳酸氢钠溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取(20mLx3)。合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱剂为MeOH:DCM＝1:10)，得到1-(4-(4-氨基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(h4)(590mg，白色固体，收率：67.9％)。
LC-MS(ESI)：m/z 366.09/368.08[M+H+]。
步骤5：1-(4-(4-氨基-5-(4-氨基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(中间体h)的制备
于室温，在含有甲苯(10mL)、1,4-二氧六环(10mL)和水(5mL)的反应瓶中加入1-(4-(4-氨基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(h4)(590mg，1.61mmol)、4-氨基苯硼酸频哪醇酯(425mg，1.93mmol)、碳酸钠(514mg，4.83mmol)和Pd(dppf)Cl2(118mg，0.16mmol)。密封，氮气置换三次，加热至100℃搅拌6小时。待反应液冷却至室温后，加水(30mL)稀释，用乙酸乙酯萃取(30mL x3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱剂为MeOH:DCM＝1:10)，得到1-(4-(4-氨基-5-(4-氨基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(中间体h)(380mg，黄色固体，收率：62.0％)。
LC-MS(ESI)：m/z379.21[M+H+]。
制备实施例9：5-溴-6-(乙氧基羰基)-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(中间体i)的制备
Figure BDA0002098237770000491
步骤1：3-(4-氟苯基)氨基)-3-氧代丙酸乙酯(i1)的制备
在含有丙酮(300mL)的反应瓶中加入4-氟苯胺(30g，0.27mol)和三乙胺(28.7g，0.28mol)。将反应液冷却至0℃，搅拌下滴加3-氯-3-氧代丙酸乙酯(42.9g，0.28mol)，加毕自然升至室温并继续搅拌过夜。待反应完全后，将反应液减压浓缩。残余物中加入500mL的水并搅拌2h，减压过滤，收集固体得到3-(4-氟苯基)氨基)-3-氧代丙酸乙酯(i1)(60g，黄色固体，收率：98.8％)。
LC-MS(ESI)：m/z 226.07[M+H+]。
步骤2：1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(i2)的制备
在含有乙醇(200mL)的反应瓶中加入3-(4-氟苯基)氨基)-3-氧代丙酸乙酯(i1)(30g，0.13mol)、4,4-二甲氧基丁-2-酮(21.1g，0.16mol)和20％的乙醇钠的乙醇溶液(166mL，0.43mol)。将反应混合物加热至80℃回流过夜，待反应完全后，将反应液减压浓缩。残余物中加入5M的盐酸至pH4～5，用二氯甲烷萃取(100mLx3)，合并有机相。将有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残余物用石油醚和乙酸乙酯的混合液(5:1，100mL)打浆，过滤，滤饼用石油醚洗涤，收集固体，得到1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(i2)(24g，黄色固体，收率：74.7％)。
LC-MS(ESI)：m/z 248.12[M+H+]。
步骤3：1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸乙酯(i3)的制备
在含有NMP(150mL)的反应瓶中加入1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(i2)(16g，64.8mmol)、碳酸钠(7.6g，71.3mmol)和碘乙烷(11.1g，71.3mmol)，于室温搅拌4小时。待反应完全后，加入水(300mL)，用乙酸乙酯萃取(150mLx3)。合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过乙醚(150mL)打浆纯化，得到1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸乙酯(i3)(15g，黄色固体，收率：84.2％)。
LC-MS(ESI)：m/z 276.10[M+H+]。
步骤4：5-溴-6-(溴甲基)-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酸乙酯(i4)的制备
在含有四氯化碳(150mL)的反应瓶中加入1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸乙酯(i3)(15g，54.5mmol)、NBS(21.4g，120mmol)和BPO(660mg，2.72mmol)。反应液加热至70℃并搅拌24小时。待反应完全后，加入饱和硫代硫酸钠水溶液(200mL)猝灭反应，用二氯甲烷萃取(100mLx3)。合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱液为PE:EA＝2:1)，得到5-溴-6-(溴甲基)-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酸乙酯(i4)(16.8g，黄色固体，收率：71.2％)。
LC-MS(ESI)：m/z 431.94/433.93[M+H+]。
步骤5：5-溴-1-(4-氟苯基)-6-(羟基甲基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酸乙酯(i5)的制备
在含有四氢呋喃(150mL)的反应瓶中加入5-溴-6-(溴甲基)-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酸乙酯(i4)(16.8g，38.8mmol)和饱和的碳酸氢钠水溶液(150mL)。反应液加热至60℃并搅拌过夜。待反应完全后，用乙酸乙酯萃取(100mLx3)。合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱液为PE:EA＝1:3)，得到5-溴-1-(4-氟苯基)-6-(羟基甲基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酸乙酯(i5)(7.2g，黄色固体，收率：50.2％)。
LC-MS(ESI)：m/z 369.95/371.95[M+H+]。
步骤6：5-溴-1-(4-氟苯基)-6-甲酰基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸乙酯(i6)的制备
在含有无水二氯甲烷(5mL)的反应瓶中加入草酰氯(208mg，1.64mmol)，密封，氮气置换三次。反应液降温至-78℃后，缓慢滴加二甲基亚砜(176mg，2.26mmol)，加毕并在此温度搅拌20分钟，再缓慢滴加5-溴-1-(4-氟苯基)-6-(羟基甲基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酸乙酯(i5)(380mg，1.03mmol)的二氯甲烷溶液(5mL)，加毕并在此温度再搅拌30分钟。然后缓慢滴加三乙胺(520mg，5.15mmol)的二氯甲烷溶液，加毕并在此温度搅拌继续30分钟。待反应完成后，缓满滴加水猝灭反应，用二氯甲烷萃取(10mLx3)。合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得粗品5-溴-1-(4-氟苯基)-6-甲酰基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸乙酯(i6)(380mg，黄色固体，收率：100％)。
LC-MS(ESI)：m/z 367.94/369.95[M+H+]。
步骤7：3-溴-5-(乙氧羰基)-1-(4-氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-羧酸(i7)的制备
在含有乙腈(50mL)的反应瓶中加入粗品5-溴-1-(4-氟苯基)-6-甲酰基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸乙酯(i6)(7.2g，19.6mmol)、磷酸二氢钠(1.17g，9.8mmol)、双氧水(20mL)和亚氯酸钠(3.5g，39.2mmol)。反应液于室温搅拌过夜，待反应完成后，加水(100mL)稀释，用乙酸乙酯萃取(50mLx3)。合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物用石油醚和乙酸乙酯的混合液(PE:EA＝10:1，50mL)打浆，得到3-溴-5-(乙氧羰基)-1-(4-氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-羧酸(i7)(5.6g，黄色固体，收率：74.4％)。
LC-MS(ESI)：m/z 383.99/385.97[M+H+]。
步骤8：3-溴-1-(4-氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2,5-二甲酸二乙酯(i8)的制备
在含有DMF(10mL)的反应瓶中加入3-溴-5-(乙氧羰基)-1-(4-氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-羧酸(i7)(500mg，1.3mmol)、碳酸钾(359mg，2.6mmol)和碘乙烷(406mg，2.6mmol)。反应液于室温搅拌过夜。待反应完全后，加入水(100mL)，用乙酸乙酯萃取(20mLx3)。合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得粗品3-溴-1-(4-氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2,5-二甲酸二乙酯(i8)(560mg，黄色固体，收率：100％)。
LC-MS(ESI)：m/z 412.04/414.06[M+H+]。
步骤9：5-溴-6-(乙氧基羰基)-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(中间体i)的制备
在含有乙醇(3mL)的反应瓶中加入3-溴-1-(4-氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2,5-二甲酸二乙酯(i8)(100mg，0.24mmol)。待反应液降温至0℃，缓慢滴加氢氧化钠的水溶液(1mL，12.6mg，0.32mmol)，加毕，反应液升温至室温搅拌1小时。待反应完全后，减压浓缩，得粗品5-溴-6-(乙氧基羰基)-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(中间体i)(100mg，黄色固体，收率：100％)。
LC-MS(ESI)：m/z 383.99/385.97[M+H+]。
制备实施例10：6-氰基-1-(4-氟苯基)-5-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(中间体j)的制备
Figure BDA0002098237770000521
步骤1：5-溴-6-氨基甲酰基-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸乙酯(j1)的制备
在含有DMF(8mL)的反应瓶中加入3-溴-5-(乙氧羰基)-1-(4-氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-羧酸(i7)(500mg，1.3mol)、氯化铵(348mg，6.5mol)、PyBrOP(760mg，1.6mol)和DIPEA(503mg，3.9mol)。反应液于室温搅拌1小时，待反应完成后，加饱和的碳酸氢钠水溶液(20mL)猝灭反应，用乙酸乙酯萃取(10mLx3)，合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱液为PE:EA＝1:3)，得到5-溴-6-氨基甲酰基-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸乙酯(j1)(400mg，白色固体，收率：80.3％)。
LC-MS(ESI)：m/z 383.01/385.03[M+H+]。
步骤2：5-溴-6-氰基-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸乙酯(j2)的制备
在含有乙腈(5mL)的反应瓶中加入5-溴-6-氨基甲酰基-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸乙酯(j1)(100mg，0.26mol)。待反应液降温至0℃，依次缓慢滴加三氟乙酸酐(103mg，0.52mol)和三乙胺(80mg，0.78mol)。反应液于0℃搅拌1小时，待反应完成后，加水(10mL)稀释，用乙酸乙酯萃取(10mLx3)，合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗品5-溴-6-氰基-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸乙酯(j2)(96mg，黄色固体，收率：100％)。
LC-MS(ESI)：m/z 364.95/366.98[M+H+]。
步骤3：6-氰基-1-(4-氟苯基)-5-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(中间体j)的制备
于室温，在含有1,4-二氧六环(9mL)和水(3mL)的反应瓶中加入5-溴-6-氰基-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸乙酯(j2)(100mg，0.27mmol)、甲基硼酸(164mg，2.7mmol)、碳酸钾(113mg，0.82mmol)和Pd(dppf)Cl.DCM(44mg，0.055mmol)。密封，氮气置换三次，在微波反应器中加热至100℃搅拌30分钟。待反应液冷却至室温后，加水(10mL)稀释，用乙酸乙酯萃取(10mLx3)，弃去有机相。水相用1N的盐酸水溶液酸化至pH3～4，再用异丙醇和二氯甲烷的混合溶剂(15％的异丙醇)萃取(10mLx3)，合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗品6-氰基-1-(4-氟苯基)-5-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(中间体j)(30mg，黄色油状物，收率：40.3％)。
LC-MS(ESI)：m/z 273.08[M+H+]。
制备实施例11：6-氰基-5-环丙基-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(中间体k)的制备
Figure BDA0002098237770000531
采用与制备实施例10步骤3的相同方法，除了用环丙基硼酸代替甲基硼酸，制得6-氰基-5-环丙基-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(中间体k)(黄色油状物，一步收率：65.3％)。
LC-MS(ESI)：m/z 299.10[M+H+]。
制备实施例12：6-((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-5-氯-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(中间体l)的制备
Figure BDA0002098237770000541
步骤1：5-氯-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸乙酯(l1)的制备
在含有DMF(10mL)的反应瓶中加入1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸乙酯(i3)(1g，3.6mmol)和NCS(580mg，4.4mmol)。反应液加热至80℃并搅拌2小时。待反应完全后，加入饱和硫代硫酸钠水溶液(200mL)猝灭反应，用乙酸乙酯(20mLx3)萃取。合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗品5-氯-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸乙酯(l1)(960mg，黄色固体，收率：86.2％)。
LC-MS(ESI)：m/z 310.08/312.10[M+H+]。
步骤2：6-(溴甲基)-5-氯-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸乙酯(l2)的制备
在含有四氯化碳(40mL)的反应瓶中加入5-氯-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸乙酯(l1)(2.72g，8.8mmol)、NBS(1.72g，9.6mmol)和BPO(43mg，0.18mmol)。反应液加热至70℃并搅拌24小时。待反应完全后，加入饱和硫代硫酸钠水溶液(50mL)猝灭反应，用二氯甲烷萃取(30mLx3)。合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱液为PE:EA＝2:1)，得到6-(溴甲基)-5-氯-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸乙酯(l2)(2.2g，黄色固体，收率：64.3％)。
LC-MS(ESI)：m/z 387.98/389.96[M+H+]。
步骤3：6-(氨基甲基)-5-氯-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸乙酯(l3)的制备
在含有四氢呋喃(4mL)的反应瓶中加入6-(溴甲基)-5-氯-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸乙酯(l2)(300mg，0.77mmol)。待反应液降温至0℃，缓慢滴加氨水(1.5mL)，加毕，升温至室温并搅拌1小时。待反应完全后，加入水稀释，用乙酸乙酯萃取(10mLx3)。合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱液为PE:EA＝2:1)，得到6-(氨基甲基)-5-氯-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸乙酯(l3)(100mg，黄色固体，收率：40.0％)。
LC-MS(ESI)：m/z 325.10/327.13[M+H+]。
步骤4：6-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-5-氯-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酸乙酯(l4)的制备
在含有二氯甲烷(4mL)的反应瓶中加入6-(氨基甲基)-5-氯-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸乙酯(l3)(100mg，0.31mmol)、Boc2O(101mg，0.47mmol)和三乙胺(47mg，0.47mmol)。反应液于室温搅拌3小时。待反应完全后，减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱液为PE:EA＝5:1)，得到6-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-5-氯-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酸乙酯(l4)(40mg，黄色固体，收率：30.4％)。
LC-MS(ESI)：m/z 425.07/427.09[M+H+]。
步骤5：6-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-5-氯-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(中间体l)的制备
在含有乙醇(3mL)的反应瓶中加入6-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-5-氯-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酸乙酯(l4)(40mg，0.09mmol)。待反应液降温至0℃，缓慢滴加氢氧化钠的水溶液(1mL，5.6mg，0.14mmol)，加毕，升温至室温并搅拌30分钟。待反应完全后，减压浓缩，得到粗品6-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-5-氯-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(中间体l)(40mg，黄色固体，收率：100％)。
LC-MS(ESI)：m/z 397.12/399.08[M+H+]。
制备实施例13：6-氨基甲酰基-5-氯-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(中间体m)的制备
Figure BDA0002098237770000551
Figure BDA0002098237770000561
步骤1：5-氯-1-(4-氟苯基)-6-(羟基甲基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酸乙酯(m1)的制备
在含有四氢呋喃(15mL)的反应瓶中加入5-氯-6-(溴甲基)-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酸乙酯(l2)(1g，2.6mmol)和饱和碳酸氢钠水溶液(15mL)。反应液加热至60℃并搅拌过夜。待反应完全后，用乙酸乙酯萃取(20mLx3)。合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱液为PE:EA＝1:3)，得到5-氯-1-(4-氟苯基)-6-(羟基甲基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酸乙酯(m1)(300mg，黄色固体，收率：38.4％)。
LC-MS(ESI)：m/z 326.07/328.10[M+H+]。
步骤2：5-氯-1-(4-氟苯基)-6-甲酰基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸乙酯(m2)的制备
在含有无水二氯甲烷(5mL)的反应瓶中加入草酰氯(208mg，1.64mmol)，密封，氮气置换三次。反应液降温至-78℃后，缓慢滴加二甲基亚砜(176mg，2.26mmol)，加毕并在此温度搅拌20分钟，再缓慢滴加5-氯-1-(4-氟苯基)-6-(羟基甲基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酸乙酯(m1)(300mg，0.92mmol)的二氯甲烷溶液(5mL)，加毕并在此温度再搅拌30分钟。然后缓慢滴加三乙胺(520mg，5.15mmol)的二氯甲烷溶液，加毕并在此温度搅拌继续30分钟。待反应完成后，缓慢滴加水猝灭反应，用二氯甲烷萃取(10mLx3)。合并的有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得粗品5-氯-1-(4-氟苯基)-6-甲酰基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸乙酯(m2)(300mg，黄色固体，收率：100％)。
LC-MS(ESI)：m/z 324.06/326.09[M+H+]。
步骤3：3-氯-5-(乙氧羰基)-1-(4-氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-羧酸(m3)的制备
在含有乙腈(4mL)的反应瓶中加入粗品5-溴-1-(4-氟苯基)-6-甲酰基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸乙酯(m2)(300mg，0.93mmol)、磷酸二氢钠(55mg，0.46mmol)、双氧水(1mL)和亚氯酸钠(168mg，1.86mmol)。反应液于室温搅拌过夜，待反应完成后，加水(3mL)稀释，用乙酸乙酯萃取(10mLx3)。合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得粗品3-氯-5-(乙氧羰基)-1-(4-氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-羧酸(m3)(100mg，黄色固体，收率：29.4％)。
LC-MS(ESI)：m/z 340.0.5/342.10[M+H+]。
步骤4：5-氯-6-氨基甲酰基-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸乙酯(m4)的制备
在含有DMF(4mL)的反应瓶中加入3-氯-5-(乙氧羰基)-1-(4-氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-羧酸(m4)(100mg，0.29mol)、碳酸氢铵(229mg，2.9mol)、PyBrOP(175mg，0.38mol)和DIPEA(112mg，0.87mol)。反应液于室温搅拌1小时，待反应完成后，加入饱和的碳酸氢钠(10mL)猝灭反应，用乙酸乙酯萃取(10mLx3)，合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱液为PE:EA＝1:3)，得到5-氯-6-氨基甲酰基-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸乙酯(m4)(50mg，黄色固体，收率：50.0％)。
LC-MS(ESI)：m/z 339.07/341.09[M+H+]。
步骤5：6-氨基甲酰基-5-氯-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(中间体m)的制备
在含有乙醇(3mL)的反应瓶中加入5-氯-6-氨基甲酰基-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸乙酯(m4)(50mg，0.15mmol)。待反应液降温至0℃，缓慢滴加氢氧化钠的水溶液(1mL，7.7mg，0.19mmol)，加毕，升温至室温并搅拌30分钟。待反应完全后，减压浓缩，得到粗品6-氨基甲酰基-5-氯-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(中间体m)(50mg，黄色固体，收率：100％)。
LC-MS(ESI)：m/z 321.09/323.14[M+H+]。
制备实施例14：6-(氮杂环丁烷-1-基甲基)-5-氯-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(中间体n)的制备
Figure BDA0002098237770000571
Figure BDA0002098237770000581
步骤1：6-(氮杂环丁烷-1-基甲基)-5-氯-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酸乙酯(n1)的制备
在含有四氢呋喃(4mL)的反应瓶中加入5-氯-6-(溴甲基)-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酸乙酯(l2)(200mg，0.52mmol)、氮杂环丁烷盐酸盐(95mg，1.04mmol)、三乙胺(154mg，1.56mmol)和水(1mL)。反应于室温搅拌30分钟。待反应完全后，加水(10mL)稀释，用乙酸乙酯萃取(10mLx3)。合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得粗品6-(氮杂环丁烷-1-基甲基)-5-氯-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酸乙酯(n1)(200mg，黄色固体，收率：100％)。LC-MS(ESI)：m/z 365.12/367.09[M+H+]。
步骤2：6-(氮杂环丁烷-1-基甲基)-5-氯-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(中间体n)的制备
在含有乙醇(4mL)的反应瓶中加入6-(氮杂环丁烷-1-基甲基)-5-氯-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酸乙酯(n1)(200mg，0.54mmol)。待反应液降温至0℃，缓慢滴加氢氧化钠的水溶液(1mL，28mg，0.71mmol)，加毕，升温至室温并搅拌30分钟。待反应完全后，减压浓缩，得到粗品6-(氮杂环丁烷-1-基甲基)-5-氯-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(中间体n)(200mg，黄色固体，收率：100％)。
LC-MS(ESI)：m/z 337.03/339.03[M+H+]。
制备实施例15：5-溴-1-(4-氟苯基)-6-(甲氧基甲基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(中间体o)的制备
Figure BDA0002098237770000582
Figure BDA0002098237770000591
步骤1：5-溴-1-(4-氟苯基)-6-(甲氧基甲基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(中间体o)的制备
在含有甲醇(8mL)的反应瓶中加入5-溴-6-(溴甲基)-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酸乙酯(i4)(500mg，1.15mmol)。待反应液降温至0℃，缓慢滴加氢氧化锂的水溶液(1.4mL，241mg，5.75mmol)，加毕，升温至室温并搅拌30分钟。待反应完全后，减压浓缩，得到粗品5-溴-1-(4-氟苯基)-6-(甲氧基甲基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(中间体o)(500mg，黄色固体，收率：100％)。
LC-MS(ESI)：m/z 355.95/357.95[M+H+]。
制备实施例16：3-(4-氟苯基)-1-异丙基-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-甲酸(中间体p)的制备
Figure BDA0002098237770000592
3-(4-氟苯基)-1-异丙基-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-甲酸(中间体p)按照专利WO2013074633提供的制备方法进行制备。
制备实施例17：1-(4-(8-氨基-1-(4-氨基苯基)咪唑并[1,5-a]吡嗪-3-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(中间体q)的制备
Figure BDA0002098237770000601
使用专利WO2013010380提供的类似制备方法合成1-(4-(8-氨基-1-(4-氨基苯基)咪唑并[1,5-a]吡嗪-3-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(中间体q)。
制备实施例18：5-(4-氨基苯基)-7-异丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(中间体r)的制备
Figure BDA0002098237770000602
步骤1：5-溴-4-氯-7-异丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(r1)的制备
在含有无水N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(25mL)的反应瓶中加入5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(上海韶远，1.5g，6.45mmol)。将反应液冷却至0℃，缓慢加入氢化钠(516mg，12.9mmol,60％)，加毕，反应液在0℃搅拌0.5小时。然后缓慢滴加碘代异丙烷(1.32g，7.74mmol)，加毕，将反应液升温至室温继续搅拌2小时。待反应完成后，加入饱和氯化铵水溶液(25mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取(20mLx3)。合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱液为PE:EA＝5:1)，得到5-溴-4-氯-7-异丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(r1)(943mg，黄色固体，收率：53％)。
LC-MS(ESI)：m/z273.99/275.97[M+H+]。
步骤2：5-溴-7-异丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(r2)的制备
在含有1,4-二氧六环溶液(4mL)的反应瓶中加入5-溴-4-氯-7-异丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(r1)(943mg，3.44mmol)和氨水(30％，4mL)。在微波管中，将反应液加热至100℃搅拌4小时。待反应完成后，将反应液减压浓缩，得到粗品5-溴-7-异丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(r2)(880mg，黄色固体，收率：100％)。其未经纯化直接用于下一步。
LC-MS(ESI)：m/z255.08/257.07[M+H+]。
步骤3：5-(4-氨基苯基)-7-异丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(中间体r)的制备
于室温，在含有甲苯(6mL)、1,4-二氧六环(6mL)和水(3mL)的反应瓶中加入5-溴-7-异丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(r2)(1g，3.92mmol)、4-氨基苯硼酸频哪醇酯(1.16g，5.28mmol)、碳酸钠(1.4g，13.21mmol)和Pd(dppf)Cl2(322mg，0.44mmol)。在氮气氛下，加热至100℃搅拌12小时。待反应液冷却至室温后，加水(20mL)稀释，用乙酸乙酯萃取(20mL x3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱剂为MeOH:DCM＝1:10)，得到5-(4-氨基苯基)-7-异丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(中间体r)(773mg，黄色固体，收率：73.9％)。
LC-MS(ESI)：m/z268.21[M+H+]。
制备实施例19：5-(4-氨基苯基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(中间体s)的制备
Figure BDA0002098237770000611
Figure BDA0002098237770000621
采用与制备实施例18的相同方法，除了用碘甲烷代替碘代异丙烷，制得5-(4-氨基苯基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(中间体s)(黄色固体，三步收率：39.2％)。
LC-MS(ESI)：m/z 240.25[M+H+]。
制备实施例20：5-(4-氨基苯基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(中间体t)的制备
Figure BDA0002098237770000622
采用与制备实施例18的相同方法，除了用(2-(氯甲氧基)乙基)三甲基硅烷代替碘代异丙烷，制得5-(4-氨基苯基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(中间体t)(黄色固体，三步收率：45.3％)。
LC-MS(ESI)：m/z 356.20[M+H+]。
制备实施例21：3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(中间体u)的制备
Figure BDA0002098237770000631
采用与制备实施例20的步骤1的相同方法，除了用3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(e1)代替5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶，制得3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(中间体u)(黄色固体，一步收率：82.1％)。
LC-MS(ESI)：m/z 392.05[M+H+]。
制备实施例22：1-溴-3-甲基咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-胺(中间体v)的制备
Figure BDA0002098237770000632
步骤1：2-((二苯基亚甲基)氨基)乙酸甲酯(v1)的制备
于室温，在装有分水器的反应瓶中加入甘氨酸甲酯盐酸盐(30g,238mmol)、二苯甲酮(86.7g,476mmol)、N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)(61g,476mmol)和甲苯(150mL)。反应液加热回流3小时。待反应完成后，冷却至室温，减压浓缩得到粗产品2-((二苯基亚甲基)氨基)乙酸甲酯(v1)，直接用于下一步反应。
LC-MS(ESI)：m/z 254.18[M+H+]。
步骤2：2-(3-氯吡嗪-2-基)-2-((二苯基亚甲基)氨基)乙酸甲酯(v2)的制备
于室温，在含有DMF(40mL)的反应瓶中加入粗产品2-((二苯基亚甲基)氨基)乙酸甲酯(v1)(5g,19.7mmol)和碳酸铯(6.4g,19.7mmol)。反应液加热至80℃搅拌过夜。待反应完成后，冷却至室温，加入乙酸乙酯(60mL)稀释，有机相依次用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱剂为PE:EA＝1:1)，得到2-(3-氯吡嗪-2-基)-2-((二苯基亚甲基)氨基)乙酸甲酯(v2)(2.3g,黄色油状物，收率31.8％)。
LC-MS(ESI)：m/z 366.14/368.12[M+H+]。
步骤3：(3-氯吡嗪-2-基)甲胺(v3)的制备
于室温，在含有乙腈(20mL)和水(20mL)的反应瓶中加入2-(3-氯吡嗪-2-基)-2-((二苯基亚甲基)氨基)乙酸甲酯(v2)(2.3g,6.3mmol)和浓盐酸(12N,10mL)。反应液加热回流6小时。待反应完成后，冷却至室温，反应液减压浓缩得到(3-氯吡嗪-2-基)甲胺(v3)，直接用于下一步反应。
LC-MS(ESI)：m/z 143.99/145.99[M+H+]。
步骤4：N-((3-氯吡嗪-2-基)甲基)乙酰胺(v4)的制备
在含有DCM(50mL)的反应瓶中加入(3-氯吡嗪-2-基)甲胺(v3)(3.5g,24.3mmol)和N,N-二异丙基乙胺(9.4g,72.9mmol)，反应液冷却至0℃并滴加乙酰氯)(1.9g,24.3mmol)。滴加完毕，反应液继续搅拌30分钟。待反应完成后，反应液依次用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱剂为DCM:MeOH＝10:1)，得到N-((3-氯吡嗪-2-基)甲基)乙酰胺(v4)(2.2g,黄色固体，收率48.8％)。
LC-MS(ESI)：m/z 186.08/188.08[M+H+]。
步骤5：8-氯-3-甲基咪唑并[1,5-a]吡嗪(v5)的制备
于室温，在含有乙腈(30mL)的反应瓶中加入8-氯-3-甲基咪唑并[1,5-a]吡嗪(v5)(2.2g,11.8mmol)、三氯氧磷(5.4g,35.4mmol)和DMF(0.9mmol)。反应液加热至回流搅拌6小时。待反应完成后，冷却至室温，减压浓缩，剩余残余物用乙酸乙酯(100mL)稀释，有机相依次用饱和的碳酸氢钠水溶液和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱剂为PE:EA＝1:1)，得到8-氯-3-甲基咪唑并[1,5-a]吡嗪(v5)(1.2g,黄色固体，收率78.45％)。
LC-MS(ESI)：m/z168.03/170.03[M+H+]。
步骤6：1-溴-8-氯-3-甲基咪唑并[1,5-a]吡嗪(v6)的制备
于0℃，在含有DMF(20mL)的反应瓶中加入8-氯-3-甲基咪唑并[1,5-a]吡嗪(v5)(2.2g,13.1mmol)和N-溴丁二酰胺(NBS)(2.3g,13.1mmol)。反应液继续搅拌2小时。待反应完成后，加入乙酸乙酯(60mL)稀释，有机相依次用亚硫酸氢钠水溶液和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱剂为PE:EA＝1:1)，得到1-溴-8-氯-3-甲基咪唑并[1,5-a]吡嗪(v6)(2.6g,黄色固体，收率80.4％)。
步骤7：1-溴-3-甲基咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-胺(v)的制备
于室温，在含有水(10mL)的反应瓶中加入1-溴-8-氯-3-甲基咪唑并[1,5-a]吡嗪(v6)(2.2g,8.9mmol)和氨水(25-28％,4mL)，反应液加热至80℃搅拌过夜，待反应完成后，减压浓缩，得到1-溴-3-甲基咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-胺(v)(1.4g,黄色固体,收率69.3％)。
LC-MS(ESI)：m/z 227.08/229.08[M+H+]。
实施例1：N5-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(1)的制备
Figure BDA0002098237770000651
步骤1：5-((4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸乙酯(1a)的制备
在含有DMF(6mL)的反应瓶中加入1-(4-(4-氨基-3-(4-氨基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(e)(200mg，0.53mmol)、6-(乙氧基羰基)-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(a)(183mg，0.53mmol)、HATU(302mg，0.8mmol)和DIPEA(205mg，1.59mmol)。将混合物于室温搅拌30分钟，待反应完全后，加入饱和的碳酸氢钠溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取(30mLx3)，合并有机相。将有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱剂为MeOH:DCM＝1:20)，得到5-((4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸乙酯(1a)(280mg，黄色固体，收率：74.8％)。
LC-MS(ESI)：m/z708.5[M+H+]。
步骤2：5-((4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸(1b)的制备
于室温，在含有乙醇(8mL)的反应瓶中加入5-((4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸乙酯(1a)(280mg，0.39mmol)、氢氧化锂一水合物(32.7mg，0.78mmol)和水(2mL)。将混合物升温至70℃并搅拌过夜，待反应完全后，减压浓缩得到粗产品5-((4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸(1b)(黄色固体)。其未经纯化直接用于下一步反应。
LC-MS(ESI)：m/z 681.3[M+H+]。
步骤3：N5-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(1)的制备
于室温，在含有四氢呋喃(4mL)和氧氯化磷(4mL)的反应瓶中加入5-((4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸(1b)(50mg，0.09mmol)。将混合物加热至回流搅拌30分钟，待反应完全后，减压浓缩得到5-((4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)氨基甲酰基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-碳酰氯。其未经纯化直接用于下一步反应。于0℃，在含有四氢呋喃(6mL)和氨水(6mL)的反应瓶中加入酰氯中间体。加毕，反应液继续搅拌20分钟，待反应完成后，加入乙酸乙酯(30mL)稀释，有机相依次用水，饱和的食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过制备HPLC纯化(C18，乙腈/水(0.1％甲酸)：10％～100％)，得到N5-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(1)(25mg，白色固体，收率：52.6％)。
LC-MS(ESI)：m/z 680.4[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.89(s,1H),8.77(s,1H),8.30(s,1H),8.25(s,1H),8.04(s,1H),7.89–7.84(m,2H),7.67–7.63(m,2H),7.40–7.32(m,2H),7.29–7.20(m,2H),5.06–4.91(m,1H),4.51(td,J＝15.4,13.2,8.9Hz,2H),4.10(d,J＝13.4Hz,1H),2.95(h,J＝6.8Hz,1H),2.80(s,1H),2.14–1.88(m,5H),1.56(d,J＝6.6Hz,6H),1.02(d,J＝7.8Hz,6H)。
实施例2：N5-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-N2-羟基-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(2)的制备
Figure BDA0002098237770000671
采用与实施例1相同的方法，除了用羟胺溶液代替氨水，制得N5-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-N2-羟基-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(2)(10mg，白色固体，三步收率：12.5％)。
LC-MS(ESI)：m/z696.4[M+H+]。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.88(s,1H),8.77(s,1H),8.24(s,1H),7.86(d,J＝8.5Hz,2H),7.64(d,J＝8.5Hz,2H),7.39–7.32(m,2H),7.22(dd,J＝10.1,7.8Hz,2H),4.98(s,1H),4.59–4.46(m,2H),4.10(d,J＝13.5Hz,1H),2.94(p,J＝6.6Hz,1H),2.80(s,1H),2.13–1.85(m,5H),1.54(d,J＝6.6Hz,6H),1.02(t,J＝4.8Hz,6H)。
实施例3：N5-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-N2-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(3)的制备
Figure BDA0002098237770000672
采用与实施例1相同的方法，除了用甲胺溶液代替氨水，制得N5-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-N2-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(3)(13.8mg，白色固体，三步收率：27.8％)。
LC-MS(ESI)：m/z694.5[M+H+]。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.88(s,1H),8.79(d,J＝14.7Hz,2H),8.25(s,1H),7.90–7.81(m,2H),7.68–7.62(m,2H),7.38–7.14(m,4H),5.02–4.90(m,1H),4.55(d,J＝12.9Hz,1H),4.39(p,J＝6.6Hz,1H),4.10(d,J＝13.5Hz,1H),2.94(p,J＝6.7Hz,1H),2.80(s,1H),2.48(s,4H),2.21–1.79(m,4H),1.53(d,J＝6.6Hz,6H),1.05–0.99(m,6H)。
实施例4：N-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-6-(氮杂环丁烷-1-羰基)-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酰胺(4)的制备
Figure BDA0002098237770000681
采用与实施例1相同的方法，除了用杂氮环丁烷代替氨水，制得N-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-6-(氮杂环丁烷-1-羰基)-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酰胺(4)(15.8mg，白色固体，三步收率：19.2％)。
LC-MS(ESI)：m/z720.4[M+H+]。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.81(s,1H),8.78(s,1H),8.25(s,1H),7.86(d,J＝8.5Hz,2H),7.65(d,J＝8.5Hz,2H),7.43(dd,J＝8.4,5.5Hz,2H),7.31(t,J＝8.7Hz,2H),5.02–4.95(m,1H),4.55(d,J＝12.9Hz,1H),4.45(q,J＝6.6Hz,1H),4.10(d,J＝13.5Hz,1H),4.00–3.90(m,2H),3.52(tt,J＝10.5,5.0Hz,2H),2.95(q,J＝6.7Hz,1H),2.80(s,1H),2.19–1.88(m,6H),1.84–1.75(m,1H),1.59–1.49(m,6H),1.09–0.98(m,6H)。
实施例5：N5-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-1-环丙基-3-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(5)的制备
Figure BDA0002098237770000691
采用与实施例1相同的方法，除了用1-环丙基-6-(乙氧基羰基)-5-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(中间体d)代替6-(乙氧基羰基)-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(中间体a)。制得N5-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-1-环丙基-3-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(5)(25mg，白色固体，三步收率：25％)。
LC-MS(ESI)：m/z678.4[M+H+]。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.76(s,1H),8.62(s,1H),8.24(s,1H),8.11(d,J＝2.0Hz,1H),7.96(s,1H),7.89–7.81(m,2H),7.69–7.58(m,2H),7.43–7.16(m,4H),4.54(d,J＝12.9Hz,1H),4.10(d,J＝13.6Hz,1H),3.75(tt,J＝7.5,3.9Hz,1H),2.94(p,J＝6.7Hz,1H),2.80(s,1H),2.05–1.93(m,4H),1.27–1.24(m,4H),1.13–1.06(m,2H),1.04(d,J＝7.7Hz,6H)。
实施例6：N5-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(6)的制备
Figure BDA0002098237770000692
采用与实施例1相同的方法，除了用6-(乙氧基羰基)-5-(4-氟苯基)-1-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(中间体b)代替6-(乙氧基羰基)-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(中间体a)。制得N5-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(6)(24mg，白色固体，三步收率：50％)。
LC-MS(ESI)：m/z652.3[M+H+]。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.90(s,1H),8.82(s,1H),8.23(d,J＝8.9Hz,2H),8.02(s,1H),7.89–7.83(m,2H),7.68–7.61(m,2H),7.41–7.31(m,2H),7.29–7.19(m,2H),5.04–4.94(m,1H),4.54(d,J＝12.9Hz,1H),4.10(d,J＝13.4Hz,1H),3.87(s,3H),2.94(p,J＝6.7Hz,1H),2.80(s,1H),2.14–1.88(m,5H),1.03(t,J＝7.6Hz,6H)。
实施例7：N-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-6-氰基-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酰胺(7)的制备
Figure BDA0002098237770000701
在含有无水四氢呋喃(4mL)的反应瓶中加入N5-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(1)(100mg，0.15mol)。反应物冷却至0℃，依次加入三乙胺(242mg，2.4mol)和三氟甲磺酸酐(252mg，1.2mol)。加毕，反应液继续搅拌30分钟，待反应完成后，加入乙酸乙酯(30mL)稀释，有机相依次用水，饱和的食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，静置过夜，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过制备HPLC纯化(C18，乙腈/水(0.1％甲酸)：10％～100％)，得到N-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-6-氰基-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酰胺(7)(50mg，黄色固体，收率：51.4％)。
LC-MS(ESI)：m/z 662.4[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.50(s,1H),8.84(s,1H),8.25(s,1H),7.89–7.84(m,2H),7.68–7.58(m,4H),7.42–7.35(m,2H),5.03–4.93(m,1H),4.86(p,J＝6.6Hz,1H),4.54(d,J＝13.0Hz,1H),4.10(d,J＝13.5Hz,1H),2.93(q,J＝6.7Hz,1H),2.82(d,J＝13.2Hz,1H),2.13–1.88(m,5H),1.63(d,J＝6.6Hz,6H),1.03(d,J＝7.5Hz,6H)。
实施例8：N-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-6-氰基-5-(4-氟苯基)-1-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酰胺(8)的制备
Figure BDA0002098237770000711
采用与实施例7相同的方法，除了用N5-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(6)代替N5-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(1)。制得N-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-6-氰基-5-(4-氟苯基)-1-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酰胺(8)(25mg，黄色固体，收率：54.7％)。
LC-MS(ESI)：m/z634.4[M+H+]。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.53(s,1H),8.98(s,1H),8.25(s,1H),7.93–7.80(m,2H),7.71–7.53(m,4H),7.44–7.27(m,2H),4.54(d,J＝13.0Hz,1H),4.08(s,3H),2.94(p,J＝6.7Hz,1H),2.80(s,1H),2.09–1.87(m,4H),1.24(d,J＝3.2Hz,3H),1.02(d,J＝7.6Hz,6H)。
实施例9：N-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-6-氰基-1-环丙基-5-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酰胺(9)的制备
Figure BDA0002098237770000712
采用与实施例7相同的方法，除了用N5-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-环丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(5)代替N5-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(1)。制得N-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-6-氰基-1-环丙基-5-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酰胺(9)(17mg，黄色固体，收率：14.5％)。
LC-MS(ESI)：m/z660.4[M+H+]。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.39(s,1H),8.68(s,1H),8.25(s,1H),7.88–7.83(m,2H),7.73–7.54(m,4H),7.43–7.34(m,2H),5.04–4.87(m,1H),4.54(d,J＝12.9Hz,1H),4.10(d,J＝13.5Hz,1H),3.94(tt,J＝7.3,3.8Hz,1H),2.94(p,J＝6.7Hz,1H),2.80(s,1H),2.10–1.88(m,5H),1.41(q,J＝4.5,3.9Hz,2H),1.27–1.24(m,2H),1.02(d,J＝7.4Hz,6H)。
实施例10：N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(10)的制备
Figure BDA0002098237770000721
步骤1：5-((4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)氨基甲酰基)-3-(4-氟苯基)-1-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸乙酯(10a)的制备
在含有DMF(8mL)的反应瓶中加入1-(4-(4-氨基-5-(4-氨基苯基)吡咯并[2,1-F][1,2,4]三嗪-7-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(f)(250mg，0.66mmol)、6-(乙氧基羰基)-5-(4-氟苯基)-1-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(b)(211mg，0.66mmol)、HATU(376mg，0.99mmol)和DIPEA(255mg，129mmol)。将混合物于室温搅拌30分钟，待反应完全后，加入饱和的碳酸氢钠溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取(30mLx3)，合并有机相。将有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱剂为MeOH:DCM＝1:10)，得到5-((4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)氨基甲酰基)-3-(4-氟苯基)-1-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸乙酯(10a)(260mg，黄色固体，收率：58％)。
LC-MS(ESI)：m/z680.3[M+H+]。
步骤2：5-((4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)氨基甲酰基)-3-(4-氟苯基)-1-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸(10b)的制备
于室温，在含有乙醇(8mL)的反应瓶中加入5-((4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)氨基甲酰基)-3-(4-氟苯基)-1-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸乙酯(10a)(260mg，0.38mmol)、氢氧化锂一水合物(22.4mg，0.54mmol)和水(2mL)。将混合物升温至70℃并搅拌过夜，待反应完全后，减压浓缩，得到粗产品5-((4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)氨基甲酰基)-3-(4-氟苯基)-1-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸(10b)(黄色固体)。其未经纯化直接用于下一步反应。
LC-MS(ESI)：m/z 652.3[M+H+]。
步骤3：N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(10)的制备
于室温，在含有四氢呋喃(4mL)和氧氯化磷(4mL)的反应瓶中加入5-((4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)氨基甲酰基)-3-(4-氟苯基)-1-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸(10b)(80mg，0.12mmol)。将混合物加热至回流搅拌30分钟，待反应完全后，减压浓缩得酰氯中间体。其未经纯化直接用于下一步反应。于0℃，在含有四氢呋喃(6mL)和氨水(6mL)的反应瓶中加入酰氯中间体。加毕，反应液继续搅拌20分钟，待反应完成后，加入乙酸乙酯(30mL)稀释，有机相依次用水，饱和的食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过制备HPLC纯化(C18，乙腈/水(0.1％甲酸)：10％～100％)，得到N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(10)(22mg，白色固体，收率：27.5％)。
LC-MS(ESI)：m/z 651.4M+H+]。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.82(s,1H),8.80(s,1H),8.29–8.16(m,1H),8.01(s,1H),7.90(s,1H),7.84–7.75(m,2H),7.46–7.39(m,2H),7.38–7.33(m,2H),7.29–7.20(m,2H),6.57(s,1H),4.54(d,J＝12.7Hz,1H),4.06(d,J＝13.4Hz,1H),3.87(s,3H),3.20(t,J＝12.8Hz,1H),2.90(p,J＝6.7Hz,1H),2.75–2.65(m,1H),2.14–1.94(m,3H),1.68–1.41(m,2H),1.00(d,J＝6.3Hz,6H)。
实施例11：N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(11)的制备
Figure BDA0002098237770000741
采用与实施例10相同的方法，除了用6-(乙氧基羰基)-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(a)代替6-(乙氧基羰基)-5-(4-氟苯基)-1-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(b)。制得N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(11)(21mg，白色固体，三步收率：26.3％)。
LC-MS(ESI)：m/z679.4[M+H+]。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.81(s,1H),8.75(s,1H),8.29(s,1H),8.03(s,1H),7.90(s,1H),7.83–7.76(m,2H),7.46–7.42(m,2H),7.38–7.34(m,2H),7.27–7.20(m,2H),6.58(s,1H),4.50(dt,J＝13.3,6.2Hz,2H),4.06(d,J＝13.4Hz,1H),3.45–3.36(m,2H),3.20(t,J＝13.0Hz,2H),2.94–2.87(m,1H),2.71–2.64(m,1H),2.01(s,4H),1.55(d,J＝6.6Hz,6H),1.01(t,J＝6.4Hz,6H)。
实施例12：N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-环丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(12)的制备
Figure BDA0002098237770000751
采用与实施例10相同的方法，除了用1-环丙基-6-(乙氧基羰基)-5-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(d)代替6-(乙氧基羰基)-5-(4-氟苯基)-1-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(b)。制得N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-环丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(12)(20mg，白色固体，三步收率：45％)。
LC-MS(ESI)：m/z677.4[M+H+]。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.68(s,1H),8.61(s,1H),8.12(s,1H),7.96(s,1H),7.90(s,1H),7.82–7.74(m,2H),7.46–7.36(m,2H),7.38–7.30(m,2H),7.30–7.17(m,2H),6.57(s,1H),4.54(d,J＝12.7Hz,1H),4.06(d,J＝13.3Hz,1H),3.75(tt,J＝7.4,3.9Hz,1H),3.20(t,J＝12.8Hz,1H),2.90(p,J＝6.7Hz,1H),2.69(t,J＝12.0Hz,1H),2.10–1.96(m,3H),1.68–1.37(m,2H),1.24(s,2H),1.10(dd,J＝7.7,6.0Hz,2H),1.02(d,J＝6.3Hz,6H)。
实施例13：N-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)-6-氰基-5-(4-氟苯基)-1-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酰胺(13)的制备
Figure BDA0002098237770000752
在含有无水四氢呋喃(4mL)的反应瓶中加入N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f]的[1,2,4]三嗪-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(10)(20mg，0.03mol)。反应液冷至0℃，依次加入三乙胺(49mg，0.49mol)和三氟甲磺酸酐(50mg，0.24mol)。加毕，反应液继续搅拌30分钟，待反应完成后，加入乙酸乙酯(30mL)稀释，有机相依次用水，饱和的食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，静置过夜，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过制备HPLC纯化(C18，乙腈/水(0.1％甲酸)：10％～100％)，得到N-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)-6-氰基-5-(4-氟苯基)-1-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酰胺(13)(9.5mg，黄色固体，收率：48.9％)。
LC-MS(ESI)：m/z 633.3[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.46(s,1H),8.97(s,1H),7.91(s,1H),7.83–7.77(m,2H),7.61–7.55(m,2H),7.48–7.35(m,4H),6.58(s,1H),4.54(d,J＝12.7Hz,1H),4.08(s,3H),3.20(t,J＝12.8Hz,1H),2.90(p,J＝6.7Hz,1H),2.69(t,J＝11.9Hz,1H),2.03(td,J＝19.4,14.9,9.8Hz,3H),1.55(dd,J＝46.5,12.9Hz,3H),1.01(t,J＝6.5Hz,6H)。
实施例14：N-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)-6-氰基-1-环丙基-5-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酰胺(14)的制备
Figure BDA0002098237770000761
采用与实施例13相同的方法，除了用N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)-1-环丙基-3-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(12)代替N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(10)，制得N-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)-6-氰基-1-环丙基-5-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酰胺(14)(9mg，黄色固体，收率：10.4％)。
LC-MS(ESI)：m/z 659.4[M+H+]。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.32(s,1H),8.66(s,1H),7.90(s,1H),7.82–7.76(m,2H),7.65–7.50(m,2H),7.47–7.33(m,4H),6.58(s,1H),4.54(d,J＝12.9Hz,1H),4.06(d,J＝13.4Hz,1H),3.94(tt,J＝7.2,3.9Hz,1H),3.20(t,J＝13.0Hz,1H),2.90(p,J＝6.7Hz,1H),2.69(t,J＝11.8Hz,1H),2.14–1.95(m,3H),1.40(d,J＝3.7Hz,2H),1.24(d,J＝4.8Hz,4H),1.02(d,J＝6.3Hz,6H)。
实施例15：N5-(4-(2-(丁基氨基)-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-环丙基-1-(4-氟苯基)-6-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(15)的制备
Figure BDA0002098237770000771
步骤1：((4-(2-(丁基氨基)-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)氨基甲酰基)-1-环丙基-3-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸乙酯(15a)的制备
在含有DMF(6mL)的反应瓶中加入1-(4-(5-(4-氨基苯基)2-(丁基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(g)(300mg，0.69mmol)、1-环丙基-6-(乙氧基羰基)-5-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(d)(238mg，0.69mmol)、HATU(393mg，1.04mmol)和DIPEA(267mg，2.07mmol)。将混合物于室温搅拌30分钟，待反应完全后，加入饱和的碳酸氢钠溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取(30mLx3)，合并有机相。将有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱剂为MeOH:DCM＝1:10)，得到((4-(2-(丁基氨基)-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)氨基甲酰基)-1-环丙基-3-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸乙酯(15a)(300mg，黄色固体，收率：57.1％)。
LC-MS(ESI)：m/z762.5[M+H+]。
步骤2：((4-(2-(丁基氨基)-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)氨基甲酰基)-1-环丙基-3-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸(15b)的制备
于室温，在含有乙醇(6mL)的反应瓶中加入((4-(2-(丁基氨基)-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)氨基甲酰基)-1-环丙基-3-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸乙酯(15a)(300mg，0.39mmol)、氢氧化锂一水合物(33mg，0.78mmol)和水(1.5mL)。将混合物升温至70℃并搅拌过夜，待反应完全后，减压浓缩，得到粗产品((4-(2-(丁基氨基)-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)氨基甲酰基)-1-环丙基-3-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸(15b)(黄色固体)。其未经纯化直接用于下一步反应。
LC-MS(ESI)：m/z 734.5[M+H+]。
步骤3：N5-(4-(2-(丁基氨基)-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-环丙基-1-(4-氟苯基)-6-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(15)的制备
于室温，在含有四氢呋喃(5mL)和氧氯化磷(5mL)的反应瓶中加入((4-(2-(丁基氨基)-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)氨基甲酰基)-1-环丙基-3-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸(15b)(40mg，0.05mmol)。将混合物加热至回流搅拌30分钟，待反应完全后，减压浓缩得酰氯中间体。其未经纯化直接用于下一步反应。于0℃，在含有四氢呋喃(8mL)和氨水(8mL)的反应瓶中加入酰氯中间体。加毕，反应液继续搅拌20分钟，待反应完成后，加入乙酸乙酯(30mL)稀释，有机相依次用水，饱和的食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过制备HPLC纯化(C18，乙腈/水(0.1％甲酸)：10％～100％)，得到N5-(4-(2-(丁基氨基)-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-环丙基-1-(4-氟苯基)-6-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(15)(15mg，白色固体，收率：37.6％)。
LC-MS(ESI)：m/z 733.4M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),8.87(s,1H),8.60(s,1H),8.12(s,1H),7.96(s,1H),7.74–7.65(m,5H),7.38–7.31(m,2H),7.24(t,J＝8.9Hz,2H),6.86(t,J＝5.8Hz,1H),4.64(t,J＝13.9Hz,2H),4.13(d,J＝13.0Hz,1H),3.75(tt,J＝7.4,3.9Hz,1H),3.34–3.25(m,2H),3.20(t,J＝12.8Hz,1H),2.99–2.89(m,1H),2.72–2.57(m,1H),2.12–1.88(m,5H),1.59–1.50(m,2H),1.36(p,J＝7.4Hz,2H),1.25(m,2H),1.12–1.09(m,1H),1.08–1.01(m,6H),0.92(d,J＝7.3Hz,3H)。
实施例16：N-(4-(2-(丁基氨基)-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-6-氰基-5-环丙基-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酰胺(16)的制备
Figure BDA0002098237770000791
在含有无水四氢呋喃(4mL)的反应瓶中加入N5-(4-(2-(丁基氨基)-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-环丙基-1-(4-氟苯基)-6-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(15)(60mg，0.08mol)。反应液冷至0℃，依次加入三乙胺(96.9mg，0.96mol)和三氟甲磺酸酐(103mg，0.49mol)。加毕，反应液继续搅拌30分钟，待反应完成后，加入乙酸乙酯(30mL)稀释，有机相依次用水，饱和的食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，静置过夜，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过制备HPLC纯化(C18，乙腈/水(0.1％甲酸)：10％～100％)，得到：N-(4-(2-(丁基氨基)-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-6-氰基-5-环丙基-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酰胺(16)(23mg，黄色固体，收率：39.3％)。
LC-MS(ESI)：m/z 715.5[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.25(s,1H),8.87(s,1H),8.66(s,1H),7.74–7.66(m,5H),7.61–7.56(m,2H),7.39(t,J＝8.9Hz,2H),6.86(t,J＝5.8Hz,1H),4.64(t,J＝13.9Hz,2H),4.13(d,J＝13.6Hz,1H),3.94(tt,J＝7.3,3.8Hz,1H),3.30(d,J＝6.3Hz,2H),3.20(t,J＝12.8Hz,1H),2.94(p,J＝6.8Hz,1H),2.70–2.64(m,1H),2.00(dd,J＝34.7,18.2Hz,5H),1.57–1.49(m,2H),1.44–1.32(m,4H),1.24(m,1H),1.04(dd,J＝19.1,6.6Hz,6H),0.91(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例17：N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(17)的制备
Figure BDA0002098237770000801
步骤1：(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸乙酯(17a)的制备
在含有DMF(6mL)的反应瓶中加入1-(4-(4-氨基-5-(4-氨基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(h)(200mg，0.53mmol)、6-(乙氧基羰基)-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(a)(184mg，0.53mmol)、HATU(302mg，0.8mmol)和DIPEA(205mg，1.59mmol)。将混合物于室温搅拌30分钟，待反应完全后，加入饱和的碳酸氢钠溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取(30mLx3)，合并有机相。将有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱剂为MeOH:DCM＝1:10)，得到(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸乙酯(17a)(280mg，黄色固体，收率：74.8％)。
LC-MS(ESI)：m/z708.5[M+H+]。
步骤2：(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸(17b)的制备
于室温，在含有乙醇(6mL)的反应瓶中加入(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸乙酯(17a)(280mg，0.39mmol)、氢氧化锂一水合物(33mg，0.78mmol)和水(1.5mL)。将混合物升温至70℃并搅拌过夜，待反应完全后，减压浓缩得到粗产品(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸(17b)(黄色固体)。其未经纯化直接用于下一步反应。
LC-MS(ESI)：m/z 680.4[M+H+]。
步骤3：N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(17)的制备
于室温，在含有四氢呋喃(4mL)和氧氯化磷(4mL)的反应瓶中加入(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸(17b)(100mg，0.15mmol)。将混合物加热至回流搅拌30分钟，待反应完全后，减压浓缩得酰氯中间体。其未经纯化直接用于下一步反应。于0℃，在含有四氢呋喃(8mL)和氨水(8mL)的反应瓶中加入酰氯中间体。加毕，反应液继续搅拌20分钟，待反应完成后，加入乙酸乙酯(30mL)稀释，有机相依次用水，饱和的食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过制备HPLC纯化(C18，乙腈/水(0.1％甲酸)：10％～100％)，得到N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(17)(67mg，白色固体，收率：67.1％)。
LC-MS(ESI)：m/z 679.5[M+H+]。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.79(s,1H),8.76(s,1H),8.30(s,1H),8.14(s,1H),8.04(s,1H),7.79(d,J＝8.6Hz,2H),7.51(s,1H),7.45(d,J＝8.5Hz,2H),7.36(dd,J＝8.5,5.7Hz,2H),7.24(t,J＝9.0Hz,2H),6.12(s,2H),4.61(d,J＝12.8Hz,1H),4.50(p,J＝6.6Hz,1H),4.11(d,J＝13.5Hz,1H),2.95–2.88(m,1H),2.71(t,J＝11.6Hz,1H),1.95(d,J＝26.5Hz,5H),1.55(d,J＝6.6Hz,6H),1.03(dd,J＝15.8,6.6Hz,6H)。
实施例18：N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-环丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(18)的制备
Figure BDA0002098237770000821
采用与实施例17相同的方法，除了用1-环丙基-6-(乙氧基羰基)-5-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(d)代替6-(乙氧基羰基)-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(a)，制得N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-环丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(18)(28.8mg，白色固体，三步收率：61.6％)。
LC-MS(ESI)：m/z677.3[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.66(s,1H),8.61(s,1H),8.13(d,J＝7.5Hz,2H),7.97(s,1H),7.80–7.75(m,2H),7.50(s,1H),7.48–7.41(m,2H),7.33(ddd,J＝8.6,5.6,2.6Hz,2H),7.27–7.21(m,2H),6.11(s,2H),4.84(m,1H),4.61(d,J＝12.9Hz,1H),4.11(d,J＝13.5Hz,1H),3.75(dq,J＝7.2,3.6Hz,1H),3.24(s,2H),2.93(p,J＝6.7Hz,1H),2.72(d,J＝12.6Hz,1H),1.95(d,J＝26.8Hz,5H),1.14–0.96(m,8H)。
实施例19：N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(19)的制备
Figure BDA0002098237770000822
采用与实施例17相同的方法，除了用6-(乙氧基羰基)-5-(4-氟苯基)-1-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(b)代替6-(乙氧基羰基)-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(a)，制得N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(19)(27.8mg，白色固体，三步收率：27.8％)。
LC-MS(ESI)：m/z651.4[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.80(s,1H),8.80(s,1H),8.23(s,1H),8.14(s,1H),8.02(s,1H),7.82–7.76(m,2H),7.50(s,1H),7.46–7.41(m,2H),7.38–7.31(m,2H),7.28–7.20(m,2H),6.11(s,2H),4.97–4.79(m,1H),4.61(d,J＝12.9Hz,1H),4.11(d,J＝13.5Hz,1H),3.87(s,3H),2.93(p,J＝6.8Hz,1H),2.77–2.67(m,1H),2.07–1.75(m,5H),1.03(dd,J＝15.6,6.6Hz,6H)。
实施例20：N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-1-环丁基-3-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(20)的制备
Figure BDA0002098237770000831
采用与实施例17相同的方法，除了用1-环丁基-6-(乙氧基羰基)-5-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(c)代替6-(乙氧基羰基)-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(a)，制得N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-1-环丁基-3-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(20)(27.3mg，白色固体，三步收率：45％)。
LC-MS(ESI)：m/z691.9[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.74(s,1H),8.78(s,1H),8.21(s,1H),8.14(s,1H),7.96(s,1H),7.82–7.76(m,2H),7.51(s,1H),7.49–7.42(m,2H),7.37–7.30(m,2H),7.23(t,J＝9.0Hz,2H),6.11(s,2H),4.92–4.74(m,3H),4.61(d,J＝12.9Hz,1H),4.11(d,J＝13.6Hz,1H),2.96–2.90(m,1H),2.71(t,J＝12.9Hz,1H),2.42(ddd,J＝11.4,6.0,3.8Hz,2H),2.04–1.72(m,8H),1.03(dd,J＝15.5,6.6Hz,6H)。
实施例21：N-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-6-氰基-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酰胺(21)的制备
Figure BDA0002098237770000832
Figure BDA0002098237770000841
在含有无水四氢呋喃(4mL)的反应瓶中加入N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(17)(120mg，0.18mol)。反应液冷却至0℃，依次加入三乙胺(290mg，2.9mol)和三氟甲磺酸酐(297mg，1.4mol)。加毕，反应液继续搅拌30分钟，待反应完成后，加入乙酸乙酯(30mL)稀释，有机相依次用水，饱和的食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，静置过夜，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过制备HPLC纯化(C18，乙腈/水(0.1％甲酸)：10％～100％)，得到N-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-6-氰基-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酰胺(21)(23mg，黄色固体，收率：26.1％)。
LC-MS(ESI)：m/z 661.4[M+H+]。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.41(s,1H),8.83(s,1H),8.14(s,1H),7.79(d,J＝8.6Hz,2H),7.64–7.58(m,2H),7.52(s,1H),7.48–7.44(m,2H),7.41–7.35(m,2H),6.13(s,2H),4.94–4.82(m,2H),4.61(d,J＝12.7Hz,1H),4.11(d,J＝13.4Hz,1H),2.93(p,J＝6.9Hz,1H),2.78–2.67(m,1H),1.95(d,J＝27.6Hz,5H),1.62(d,J＝6.6Hz,6H),1.06–0.98(m,6H)。
实施例22：N-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-6-氰基-5-(4-氟苯基)-1-环丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酰胺(22)的制备
Figure BDA0002098237770000842
采用与实施例21相同的方法，除了用N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-环丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(18)代替N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(17)，制得N-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-6-氰基-5-(4-氟苯基)-1-环丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酰胺(22)(28mg，黄色固体，收率：28.7％)。
LC-MS(ESI)：m/z659.4[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.30(s,1H),8.66(s,1H),8.14(s,1H),7.81–7.75(m,2H),7.61–7.55(m,2H),7.51(s,1H),7.48–7.43(m,2H),7.42–7.36(m,2H),6.12(s,2H),4.90–4.81(m,1H),4.61(d,J＝13.0Hz,1H),4.11(d,J＝13.6Hz,1H),3.93(dt,J＝7.3,3.8Hz,1H),3.25(d,J＝7.9Hz,1H),2.93(q,J＝6.7Hz,1H),2.76–2.66(m,1H),2.03–1.80(m,5H),1.40(q,J＝4.4,3.9Hz,2H),1.25(d,J＝1.8Hz,1H),1.07–1.00(m,6H)。
实施例23：N-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-6-氰基-5-(4-氟苯基)-1-环丁基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酰胺(23)的制备
Figure BDA0002098237770000851
采用与实施例21相同的方法，除了用N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-1-环丁基-3-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(20)代替N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(17)，制得N-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-6-氰基-5-(4-氟苯基)-1-环丁基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酰胺(23)(11.5mg，黄色固体，收率：14.7％)。
LC-MS(ESI)：m/z673[M+H+]。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.38(s,1H),8.74(s,1H),8.14(s,1H),7.79(d,J＝8.6Hz,2H),7.62–7.54(m,2H),7.52(s,1H),7.48–7.43(m,2H),7.42–7.34(m,2H),6.13(s,2H),5.04(p,J＝8.3Hz,1H),4.61(d,J＝12.9Hz,1H),4.11(d,J＝13.6Hz,1H),2.97–2.90(m,1H),2.75–2.55(m,6H),2.06–1.79(m,7H),1.03(dd,J＝15.6,6.6Hz,6H)。
实施例24：N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基吡啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)-1-(4氟苯基)-3-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(24)的制备
Figure BDA0002098237770000861
步骤1：5-((4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)氨基甲酰基)-3-溴-1-(4-氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-羧酸甲酯(24a)的制备
在含有DMF(6mL)的反应瓶中加入1-(4-(4-氨基-5-(4-氨基苯基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(中间体f)(197mg，0.52mmol)、5-溴-6-(乙氧基羰基)-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(中间体i)(200mg，0.52mmol)、HATU(257mg，0.68mmol)和DIPEA(201mg，1.56mmol)。反应液于室温搅拌30分钟，待反应完全后，加入饱和的碳酸氢钠溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取(15mLx3)，合并有机相。将有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱剂为MeOH:DCM＝1:10)，得到5-((4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)氨基甲酰基)-3-溴-1-(4-氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-羧酸甲酯(24a)(200mg，黄色固体，收率：51.9％)。
LC-MS(ESI)：m/z744.20/746.18[M+H+]。
步骤2：5-((4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)氨基甲酰基)-1-(4-氟苯基)-3-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-羧酸甲酯(24b)的制备
于室温，在含有1,4-二氧六环(10mL)和水(2.5mL)的反应瓶中加入5-((4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)氨基甲酰基)-3-溴-1-(4-氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-羧酸甲酯(24a)(200mg，0.27mmol)、甲基硼酸(161mg，2.7mmol)、碳酸钾(112mg，0.84mmol)和Pd(dppf)Cl2.DCM(22mg，0.027mmol)。密封，氮气置换三次，于微波反应器中加热至100℃搅拌40分钟。待反应液冷却至室温后，加水(15mL)稀释，用乙酸乙酯萃取(15mL x3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱剂为MeOH:DCM＝1:10)，得到5-((4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)氨基甲酰基)-1-(4-氟苯基)-3-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-羧酸甲酯(24b)(100mg，黄色固体，收率：55.6％)。
LC-MS(ESI)：m/z680.30[M+H+]。
步骤3：5-((4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)氨基甲酰基)-1-(4-氟苯基)-3-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-羧酸(24c)的制备
于室温，在含有乙醇(3mL)的反应瓶中加入得到5-((4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)氨基甲酰基)-1-(4-氟苯基)-3-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-羧酸甲酯(24b)(100mg，0.15mmol)、氢氧化锂一水合物(8mg，0.19mmol)和水(1mL)。反应液升温至70℃并搅拌过夜，待反应完全后，减压浓缩，得到粗产品5-((4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)氨基甲酰基)-1-(4-氟苯基)-3-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-羧酸(24c)(100mg，黄色固体，收率：100％)。其未经纯化直接用于下一步反应。
LC-MS(ESI)：m/z 652.31[M+H+]。
步骤4：N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基吡啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)-1-(4氟苯基)-3-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(24)的制备
在含有DMF(4mL)的反应瓶中加入5-((4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)氨基甲酰基)-1-(4-氟苯基)-3-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-羧酸(24c)(70mg，0.11mmol)、碳酸氢铵(87mg，1.1mmol)、PyBrOP(67mg，0.14mmol)和DIPEA(43mg，0.33mmol)。反应液于室温搅拌30分钟，待反应完全后，加入饱和的碳酸氢钠溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取(10mLx3)，合并有机相。将有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过制备HPLC纯化(C18，乙腈/水(0.1％甲酸)：20％～100％)，得到N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基吡啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)-1-(4氟苯基)-3-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(24)(10mg，白色固体，收率：14.3％)。
LC-MS(ESI)：m/z651.26[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.99(s,1H),8.54(s,1H),8.20(d,J＝2.0Hz,1H),7.91(d,J＝5.7Hz,2H),7.83–7.77(m,2H),7.48–7.35(m,6H),6.58(s,1H),4.54(d,J＝12.7Hz,1H),4.06(d,J＝13.3Hz,1H),3.20(t,J＝13.0Hz,1H),2.90(p,J＝6.7Hz,1H),2.69(t,J＝11.8Hz,1H),2.21(s,3H),2.05(s,3H),1.60(d,J＝12.7Hz,1H),1.49(d,J＝13.2Hz,1H),1.01(t,J＝6.3Hz,6H)。
实施例25：N5-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-3-环丙基-1-(4氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(25)的制备
Figure BDA0002098237770000881
采用与实施例24相同的方法，除了用1-(4-(4-氨基-3-(4-氨基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(中间体e)和环丙基硼酸分别代替1-(4-(4-氨基-5-(4-氨基苯基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(中间体f)和甲基硼酸，制得N5-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-3-环丙基-1-(4氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(25)(8mg，白色固体，四步收率：10.3％)。
LC-MS(ESI)：m/z678.24[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.03(s,1H),8.25(d,J＝7.3Hz,2H),8.18(s,1H),7.97(s,1H),7.86(d,J＝8.7Hz,2H),7.64(d,J＝8.6Hz,2H),7.47(dd,J＝8.6,5.0Hz,2H),7.38(t,J＝8.8Hz,2H),4.98(s,1H),4.54(d,J＝13.1Hz,1H),4.10(d,J＝13.5Hz,1H),2.94(q,J＝6.7Hz,1H),2.80(s,1H),1.99(dt,J＝13.3,6.9Hz,5H),1.83(dd,J＝8.5,5.1Hz,1H),1.02(q,J＝6.3,5.2Hz,6H),0.99–0.92(m,2H),0.77–0.72(m,2H)。
实施例26：N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-环丙基-1-(4氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(26)的制备
Figure BDA0002098237770000891
采用与实施例24相同的方法，除了用1-(4-(4-氨基-5-(4-氨基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(中间体h)和环丙基硼酸分别代替1-(4-(4-氨基-5-(4-氨基苯基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(中间体f)和甲基硼酸，制得N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-环丙基-1-(4氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(26)(7mg，白色固体，四步收率：9.5％)。
LC-MS(ESI)：m/z677.30[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.94(s,1H),8.26(d,J＝2.2Hz,1H),8.17(s,1H),8.14(s,1H),7.96(s,1H),7.78(d,J＝8.6Hz,2H),7.51(s,1H),7.50–7.41(m,4H),7.38(t,J＝8.9Hz,2H),6.10(s,2H),4.82-4.90(m,1H),4.60(d,J＝13.0Hz,1H),4.11(d,J＝13.7Hz,1H),2.92(q,J＝6.7Hz,1H),2.72(d,J＝12.9Hz,1H),2.07–1.81(m,6H),1.10–0.93(m,8H),0.77–0.71(m,2H)。
实施例27：N-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-6-(氮杂环丁烷-1-羰基)-5-环丙基-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺(27)的制备
Figure BDA0002098237770000892
采用与实施例25相同的方法，除了用氮杂环丁烷盐酸盐代替碳酸氢胺，制得N-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-6-(氮杂环丁烷-1-羰基)-5-环丙基-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺(27)(8mg，白色固体，四步收率：12.6％)。
LC-MS(ESI)：m/z718.31[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.01(s,1H),8.24(s,1H),8.12(s,1H),7.87–7.82(m,2H),7.63(dd,J＝8.3,6.4Hz,3H),7.45–7.36(m,3H),5.01–4.95(m,1H),4.54(d,J＝13.1Hz,1H),4.10(d,J＝11.9Hz,2H),3.94(d,J＝7.2Hz,1H),3.50(d,J＝6.2Hz,1H),3.01(dt,J＝6.5,3.3Hz,1H),2.92(q,J＝6.7Hz,1H),2.80(s,1H),2.20–1.93(m,7H),1.80–1.72(m,2H),1.02(t,J＝6.8Hz,6H),0.89–0.82(m,2H),0.74(ddd,J＝14.1,8.6,4.6Hz,2H)。
实施例28：N-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)-6-氰基-1-(4-氟苯基)-5-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺(28)的制备
Figure BDA0002098237770000901
在含有DMF(3mL)的反应瓶中加入1-(4-(4-氨基-5-(4-氨基苯基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(中间体f)(25mg，0.06mmol)、6-氰基-1-(4-氟苯基)-5-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(中间体j)(18mg，0.06mmol)、HATU(32mg，0.08mmol)和DIPEA(25mg，0.18mmol)。反应液于室温搅拌30分钟，待反应完全后，加入饱和的碳酸氢钠溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取(15mLx3)，合并有机相。将有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过制备HPLC纯化(C18，乙腈/水(0.1％甲酸)：20％～100％)，得到N-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)-6-氰基-1-(4-氟苯基)-5-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺(28)(10mg，黄色固体，收率：26.3％)。
LC-MS(ESI)：m/z633.28[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.80(s,1H),8.59(s,1H),7.91(s,1H),7.84–7.78(m,2H),7.74–7.66(m,2H),7.55–7.42(m,4H),6.58(s,1H),4.54(d,J＝12.7Hz,1H),4.06(d,J＝13.3Hz,1H),3.20(t,J＝12.8Hz,1H),2.90(p,J＝6.7Hz,1H),2.69(t,J＝11.9Hz,1H),2.45(s,3H),2.08(d,J＝15.4Hz,3H),1.55(dd,J＝45.5,12.8Hz,2H),1.01(t,J＝6.1Hz,6H)。
实施例29：N-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)-6-氰基-1-(4-氟苯基)-5-环丙基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺(29)的制备
Figure BDA0002098237770000911
采用与实施例28相同的方法，除了用6-氰基-5-环丙基-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(中间体k)代替6-氰基-1-(4-氟苯基)-5-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(中间体j)。制得：N-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)-6-氰基-1-(4-氟苯基)-5-环丙基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺(29)(6mg，黄色固体，一步收率：13.2％)。
LC-MS(ESI)：m/z659.23[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.76(s,1H),8.11(s,1H),7.91(s,1H),7.80(d,J＝8.4Hz,2H),7.74–7.69(m,2H),7.53–7.41(m,5H),6.58(s,2H),4.53(d,J＝13.0Hz,1H),4.06(d,J＝13.1Hz,1H),2.93–2.88(m,1H),2.69(s,1H),2.14–1.93(m,5H),1.60(d,J＝12.5Hz,1H),1.47(s,1H),1.19–1.13(m,2H),1.01(t,J＝6.1Hz,6H),0.92(dd,J＝6.5,4.6Hz,2H)。
实施例30：N-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-6-氰基-1-(4氟苯基)-5-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺(30)的制备
Figure BDA0002098237770000912
采用与实施例28相同的方法，除了用1-(4-(4-氨基-3-(4-氨基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(中间体e)代替1-(4-(4-氨基-5-(4-氨基苯基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(中间体f)，制得N-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-6-氰基-1-(4氟苯基)-5-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺(30)(7mg，黄色固体，一步收率：16.8％)。
LC-MS(ESI)：m/z634.28[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.87(s,1H),8.60(s,1H),8.25(s,1H),7.87(d,J＝8.4Hz,2H),7.81–7.62(m,4H),7.50(t,J＝8.7Hz,2H),4.98(s,1H),4.54(d,J＝13.0Hz,1H),4.10(d,J＝13.4Hz,1H),2.93(p,J＝6.7Hz,1H),2.80(s,1H),2.45(s,3H),1.98(d,J＝23.4Hz,5H),1.14–0.91(m,6H)。
实施例31：N-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-6-氰基-1-(4氟苯基)-5-环丙基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺(31)的制备
Figure BDA0002098237770000921
采用与实施例29相同的方法，除了用1-(4-(4-氨基-3-(4-氨基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(中间体e)代替1-(4-(4-氨基-5-(4-氨基苯基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(中间体f)，制得N-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-6-氰基-1-(4氟苯基)-5-环丙基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺(31)(9mg，黄色固体，一步收率：16.4％)。
LC-MS(ESI)：m/z660.27[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.83(s,1H),8.24(s,1H),8.12(s,1H),7.86(d,J＝8.5Hz,2H),7.76–7.69(m,2H),7.65(d,J＝8.5Hz,2H),7.50(t,J＝8.8Hz,2H),6.86(s,2H),4.98(s,1H),4.54(d,J＝12.9Hz,1H),4.10(d,J＝13.4Hz,1H),2.93(p,J＝6.7Hz,1H),2.80(s,1H),2.17–1.80(m,6H),1.16(dt,J＝8.3,3.3Hz,2H),1.11–0.96(m,6H),0.94(q,J＝3.6,2.1Hz,2H)。
实施例32：N-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-6-氰基-5-环丙基-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺(32)的制备
Figure BDA0002098237770000931
采用与实施例29相同的方法，除了用1-(4-(4-氨基-5-(4-氨基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(中间体h)代替1-(4-(4-氨基-5-(4-氨基苯基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(中间体f)，制得N-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-6-氰基-5-环丙基-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺(32)(8mg，黄色固体，一步收率：15.7％)。
LC-MS(ESI)：m/z659.28[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.75(s,1H),8.14(s,1H),8.11(s,1H),7.83–7.77(m,2H),7.76–7.68(m,2H),7.54–7.43(m,5H),6.11(s,2H),4.91(s,1H),4.60(d,J＝13.1Hz,1H),4.11(d,J＝13.6Hz,1H),2.92(p,J＝6.7Hz,1H),2.72(d,J＝13.0Hz,1H),2.12–2.06(m,1H),2.04–1.83(m,5H),1.20–1.14(m,2H),1.03(dd,J＝15.0,6.6Hz,6H),0.93(dt,J＝6.8,4.7Hz,2H)。
实施例33：N-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-6-(氨基甲基)-5-氯-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺(33)的制备
Figure BDA0002098237770000932
Figure BDA0002098237770000941
步骤1：((5-((4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)氨基甲酰基)-3-氯-1-(4-氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸(33a)的制备
在含有DMF(3mL)的反应瓶中加入1-(4-(4-氨基-3-(4-氨基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(中间体e)(28mg，0.076mmol)、6-((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-5-氯-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(中间体l)(30mg，0.076mmol)、HATU(37mg，0.1mmol)和DIPEA(30mg，0.23mmol)。反应液于室温搅拌30分钟，待反应完全后，加入饱和的碳酸氢钠溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取(10mLx3)，合并有机相。将有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱剂为MeOH:DCM＝1:10)，得到((5-((4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)氨基甲酰基)-3-氯-1-(4-氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸(33a)(25mg，黄色固体，收率：43.4％)。
LC-MS(ESI)：m/z758.24/760.20[M+H+]。
步骤2：N-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-6-(氨基甲基)-5-氯-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺(33)的制备
在含有DCM(3mL)的反应瓶中加入((5-((4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)氨基甲酰基)-3-氯-1-(4-氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸(33a)(25mg，0.033mmol)和盐酸的二氧六环溶液(4N，1.5mL)。反应液于室温搅拌30分钟，待反应完全后，减压浓缩，残余物通过制备HPLC纯化(C18，乙腈/水(0.1％甲酸)：10％～100％)，得到N-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-6-(氨基甲基)-5-氯-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺(33)(11mg，白色固体，收率：50.6％)。
LC-MS(ESI)：m/z658.24/660.21[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.88(s,1H),8.51(s,1H),8.24(s,1H),7.86(d,J＝8.7Hz,2H),7.68–7.62(m,2H),7.61–7.56(m,2H),7.46(t,J＝8.8Hz,2H),6.84(s,2H),4.98(s,1H),4.54(d,J＝12.9Hz,1H),4.10(d,J＝13.2Hz,1H),3.47(s,2H),2.96–2.91(m,1H),2.80(s,1H),2.08–1.90(m,5H),1.06–0.98(m,6H)。
实施例34：N-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-6-(氮杂环丁烷-1-基甲基)-5-氯-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺(34)的制备
Figure BDA0002098237770000951
采用与实施例30相同的方法，除了用6-(氮杂环丁烷-1-基甲基)-5-氯-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(中间体n)代替6-氰基-1-(4-氟苯基)-5-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(中间体j)，制得N-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-6-(氮杂环丁烷-1-基甲基)-5-氯-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺(34)(12mg，白色固体，一步收率：30.2％)。
LC-MS(ESI)：m/z698.26/700.22[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.87(s,1H),8.48(s,1H),8.24(s,1H),7.89–7.83(m,2H),7.64(d,J＝8.6Hz,2H),7.55–7.48(m,2H),7.42(t,J＝8.8Hz,2H),4.94–5.01(m,1H),4.54(d,J＝12.8Hz,1H),4.10(d,J＝13.9Hz,1H),3.36(s,2H),3.08(t,J＝6.9Hz,4H),2.94(q,J＝6.7Hz,1H),2.80(s,1H),2.14–1.81(m,7H),1.02(t,J＝7.2Hz,6H)。
实施例35：N-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-环丙基-1-(4-氟苯基)-6-(甲氧基甲基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺(35)的制备
Figure BDA0002098237770000961
步骤1：N-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-溴-1-(4氟苯基)-6-(甲氧基甲基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺(35a)的制备
在含有DMF(8mL)的反应瓶中加入1-(4-(4-氨基-3-(4-氨基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(中间体e)(100mg，0.26mmol)、5-溴-1-(4-氟苯基)-6-(甲氧基甲基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(中间体o)(96mg，0.26mmol)、HATU(128mg，0.34mmol)和DIPEA(100mg，0.78mmol)。反应液于室温搅拌30分钟，待反应完全后，加入饱和的碳酸氢钠溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取(10mLx3)，合并有机相。将有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱剂为MeOH:DCM＝1:10)，得到N-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-溴-1-(4氟苯基)-6-(甲氧基甲基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺(35a)(140mg，黄色固体，收率：74.9％)。
LC-MS(ESI)：m/z717.21/719.18[M+H+]。
步骤2：N-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-环丙基-1-(4氟苯基)-6-(甲氧基甲基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺(35)的制备
于室温，在含有1,4-二氧六环(6mL)和水(1.5mL)的反应瓶中加入N-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-溴-1-(4氟苯基)-6-(甲氧基甲基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺(35a)(50mg，0.069mmol)、环丙基硼酸(60mg，0.69mmol)、碳酸钾(29mg，0.21mmol)和Pd(dppf)Cl2.DCM(11mg，0.014mmol)。密封，氮气置换三次，于微波反应器中加热至100℃搅拌40分钟。待反应液冷却至室温后，加水(15mL)稀释，用乙酸乙酯萃取(15mL x3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过制备HPLC纯化(C18，乙腈/水(0.1％甲酸)：10％～100％)，得到N-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-环丙基-1-(4氟苯基)-6-(甲氧基甲基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺(35)(15mg，白色固体，收率：32.0％)。
LC-MS(ESI)：m/z679.32[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.10(s,1H),8.27(s,1H),8.24(d,J＝1.2Hz,1H),7.88–7.83(m,2H),7.64(dd,J＝8.1,5.7Hz,2H),7.48–7.40(m,4H),4.92-5.04(m,1H),4.54(d,J＝13.0Hz,1H),4.23(s,2H),4.10(d,J＝13.7Hz,1H),3.00(s,3H),2.96–2.91(m,1H),2.81(d,J＝12.6Hz,1H),2.07–1.89(m,6H),1.06–0.97(m,8H),0.75–0.69(m,2H)。
实施例36：N5-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-3-氯-1-(4氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(36)的制备
Figure BDA0002098237770000971
采用与实施例30相同的方法，除了用6-氨基甲酰基-5-氯-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(中间体m)代替6-氰基-1-(4-氟苯基)-5-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸(中间体j)，制得N5-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-3-氯-1-(4氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(36)(10mg，白色固体，一步收率：26.4％)。
LC-MS(ESI)：m/z672.25/674.21[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.77(s,1H),8.55(s,1H),8.33(d,J＝1.9Hz,1H),8.25(s,1H),8.10(s,1H),7.90–7.85(m,2H),7.68–7.63(m,2H),7.54–7.48(m,2H),7.40(t,J＝8.8Hz,2H),4.94–5.02(m,2H),4.54(d,J＝13.0Hz,1H),4.10(d,J＝13.6Hz,1H),2.98–2.91(m,1H),2.80(s,1H),1.99(d,J＝28.3Hz,5H),1.02(t,J＝7.3Hz,6H)。
实施例37：N5-(4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(37)的制备
Figure BDA0002098237770000981
采用与实施例1相同的方法，除了用5-(4-氨基苯基)-7-异丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(中间体r)代替1-(4-(4-氨基-3-(4-氨基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(中间体e)，制得N5-(4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(37)(20mg，白色固体，三步收率：15.8％)。
LC-MS(ESI)：m/z568.24[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.80(s,1H),8.76(s,1H),8.30(s,1H),8.18(s,1H),8.03(s,1H),7.83–7.77(m,2H),7.51(s,1H),7.49–7.43(m,2H),7.40–7.33(m,2H),7.27–7.21(m,2H),6.31(s,2H),4.99(q,J＝6.8Hz,1H),4.51(q,J＝6.6Hz,1H),1.56(d,J＝6.6Hz,6H),1.46(d,J＝6.7Hz,6H)。
实施例38：N5-(4-(4-氨基-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1-4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(38)的制备
Figure BDA0002098237770000982
采用与实施例1相同的方法，除了用5-(4-氨基苯基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(中间体s)代替1-(4-(4-氨基-3-(4-氨基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(中间体e)，制得N5-(4-(4-氨基-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1-4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(38)(38mg，白色固体，三步收率：15.8％)。
LC-MS(ESI)：m/z540.21[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.79(s,1H),8.76(s,1H),8.29(s,1H),8.15(s,1H),8.03(s,1H),7.80(d,J＝8.6Hz,2H),7.47–7.40(m,2H),7.36(ddd,J＝8.8,5.6,2.6Hz,2H),7.32–7.19(m,3H),6.08(s,2H),4.50(p,J＝6.5Hz,1H),3.73(s,3H),1.55(d,J＝6.6Hz,6H)。
实施例39：N-(4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-6-氰基-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酰胺(39)的制备
Figure BDA0002098237770000991
采用与实施例7相同的方法，除了用N5-(4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(37)代替N5-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(1)，制得N-(4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-6-氰基-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酰胺(39)(17mg，黄色固体，一步收率：58％)。
LC-MS(ESI)：m/z550.24[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.41(s,1H),8.83(s,1H),8.14(s,1H),7.84–7.78(m,2H),7.64–7.58(m,2H),7.47(d,J＝8.4Hz,3H),7.43–7.34(m,2H),6.14(s,2H),4.98(q,J＝6.7Hz,1H),4.89–4.83(m,1H),1.63(d,J＝6.6Hz,6H),1.46(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例40：N-(4-(4-氨基-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-6-氰基-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酰胺(40)的制备
Figure BDA0002098237770000992
采用与实施例7相同的方法，除了用N5-(4-(4-氨基-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1-4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(38)代替N5-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(1)，制得N-(4-(4-氨基-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-6-氰基-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酰胺(40)(6mg，黄色固体，一步收率：35％)。
LC-MS(ESI)：m/z522.20[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.40(s,1H),8.83(s,1H),8.15(s,1H),7.84–7.78(m,2H),7.66–7.58(m,2H),7.48–7.42(m,2H),7.42–7.35(m,2H),7.30(s,1H),6.08(s,2H),4.85(q,J＝6.6Hz,1H),3.73(s,3H),1.63(d,J＝6.6Hz,6H)。
实施例41：N5-(4-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(41)的制备
Figure BDA0002098237770001001
步骤1：N5-(4-(4-氨基-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(41c)的制备
采用与实施例1相同的方法，除了用5-(4-氨基苯基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(中间体t)代替1-(4-(4-氨基-3-(4-氨基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙-1-酮(中间体e)，制得N5-(4-(4-氨基-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(41c)(60mg，白色固体，三步收率：23.5％)。
LC-MS(ESI)：m/z656.30[M+H+]。
步骤2：N5-(4-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(41)的制备
于室温，在含有三氟乙酸(TFA)(3mL)的反应瓶中加入N5-(4-(4-氨基-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(41c)(60mg，0.09mmoL)，搅拌40分钟后，将反应液减压浓缩。将残余物溶解于乙腈(MeCN)(3mL)，再加入氨水(3mL)，继续搅拌过夜，待反应完成后，减压浓缩，残余物通过制备HPLC纯化(C18，乙腈/水(0.1％甲酸)：10％～100％)，得到N5-(4-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(41)(40mg，白色固体，收率：84.5％)。
LC-MS(ESI)：m/z526.21[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.78(s,1H),11.82–11.74(m,1H),8.76(s,1H),8.34–8.27(m,1H),8.10(s,1H),8.03(s,1H),7.83–7.75(m,2H),7.50–7.41(m,2H),7.40–7.33(m,2H),7.24(ddd,J＝9.0,5.8,2.2Hz,3H),6.01(s,2H),4.51(q,J＝6.6Hz,1H),1.56(d,J＝6.6Hz,6H)。
实施例42：N-(4-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-6-氰基-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酰胺(40)的制备
Figure BDA0002098237770001011
采用与实施例7相同的方法，除了用N5-(4-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(41)代替N5-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(1)，制得N-(4-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-6-氰基-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酰胺(42)(6mg，黄色固体，一步收率：33.3％)。
LC-MS(ESI)：m/z507.19[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.41(s,1H),11.95(s,1H),8.83(s,1H),8.14(d,J＝4.6Hz,1H),7.84–7.76(m,2H),7.64–7.56(m,2H),7.51–7.43(m,2H),7.42–7.34(m,2H),7.28(d,J＝2.4Hz,1H),6.26(s,2H),4.86(p,J＝6.6Hz,1H),1.63(d,J＝6.6Hz,6H)。
实施例43：N5-(4-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-环丙基-4-氧代-1-4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(43)的制备
Figure BDA0002098237770001021
采用与实施例41相同的方法，除了用1-环丙基-6-(乙氧基羰基)-5-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(中间体d)代替6-(乙氧基羰基)-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(中间体a)，制得N5-(4-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-环丙基-4-氧代-1-4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(43)(60mg，白色固体，四步收率：23.5％)。
LC-MS(ESI)：m/z523.19[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.65(s,1H),11.83(s,1H),8.61(s,1H),8.11(t,J＝7.3Hz,2H),7.95(s,1H),7.81–7.75(m,2H),7.49–7.42(m,2H),7.37–7.31(m,2H),7.29–7.20(m,3H),6.10(s,2H),3.75(tt,J＝7.4,3.9Hz,1H),1.24(d,J＝3.8Hz,2H),1.10(t,J＝7.0Hz,2H)。
实施例44：N-(4-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-6-氰基-5-(4-氟苯基)-1-环丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酰胺(44)的制备
Figure BDA0002098237770001022
采用与实施例7相同的方法，除了用N5-(4-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-环丙基-4-氧代-1-4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(43)代替N5-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(1)，制得N-(4-(4-氨基-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-6-氰基-5-(4-氟苯基)-1-环丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酰胺(44)(50mg，黄色固体，一步收率：33.3％)。
LC-MS(ESI)：m/z506.18[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.39(s,1H),12.33(s,1H),8.67(d,J＝1.4Hz,1H),8.26(d,J＝1.4Hz,1H),7.85–7.77(m,2H),7.59(ddt,J＝6.9,5.4,1.6Hz,2H),7.49–7.36(m,5H),6.88(s,2H),3.94(s,1H),1.41(s,2H),1.25(s,2H)。
实施例45：N5-(4-(4-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-1-环丙基-3-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(45)的制备
Figure BDA0002098237770001031
步骤1：1-环丙基-3-(4-氟苯基)-4-氧代-5-((4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)氨基甲酰基)-1,4-二氢吡啶-2-羧酸甲酯(45a)的制备
在含有DMF(50mL)的反应瓶中加入1-环丙基-6-(乙氧基羰基)-5-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸(d)(5g，14.5mmol)、4-氨基苯硼酸频那醇酯(3.18g，14.5mmol)、HATU(6.6g，17.4mmol)和DIPEA(3.75g，29.0mmol)。将混合物于室温搅拌2小时。待反应完全后，加入饱和的碳酸氢钠溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取(30mLx3)，合并有机相。将有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱剂为PE:EA＝2:1)，得到1-环丙基-3-(4-氟苯基)-4-氧代-5-((4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)氨基甲酰基)-1,4-二氢吡啶-2-羧酸甲酯(45a)(7.2g，白色固体，收率：91％)。
LC-MS(ESI)：m/z547.18[M+H+]。
步骤2：5-((4-(4-氨基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)氨基甲酰基)-1-环丙基-3-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸乙酯(45b)的制备
于室温，在含有二氧六环(10mL)和水(2.5mL)的反应瓶中加入1-环丙基-3-(4-氟苯基)-4-氧代-5-((4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)氨基甲酰基)-1,4-二氢吡啶-2-羧酸甲酯(45a)(500mg，0.92mmol)、3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(中间体u)(428mg，1.1mmol)、碳酸钠(292mg，2.76mmol)和Pd(PPh3)4(106mg，0.09mmol)。在氮气氛下，加热至90℃搅拌12小时。待反应液冷却至室温后，加水(30mL)稀释，用乙酸乙酯萃取(20mL x3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱剂为MeOH:DCM＝1:15)，得到5-((4-(4-氨基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)氨基甲酰基)-1-环丙基-3-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸乙酯(45b)(540mg，黄色固体，收率86.8％)。
LC-MS(ESI)：m/z684.47[M+H+]。
步骤3：5-((4-(4-氨基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)氨基甲酰基)-1-环丙基-3-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸(45c)的制备
于室温，在含有乙醇(12mL)的反应瓶中加入5-((4-(4-氨基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)氨基甲酰基)-1-环丙基-3-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸乙酯(45b)(530mg，0.78mmol)、氢氧化锂一水合物(48mg，1.2mmol)和水(3mL)。将混合物升温至70℃并搅拌过夜，待反应完全后，减压浓缩得到粗产品5-((4-(4-氨基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)氨基甲酰基)-1-环丙基-3-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸(45c)(黄色固体)。其未经纯化直接用于下一步反应。
LC-MS(ESI)：m/z 656.34[M+H+]。
步骤4：N5-(4-(4-氨基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-1-环丙基-3-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(45d)的制备
于室温，在含有四氢呋喃(6mL)和氧氯化磷(4mL)的反应瓶中加入5-((4-(4-氨基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)氨基甲酰基)-1-环丙基-3-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸(45c)(500mg，0.76mmol)。将混合物加热至回流搅拌30分钟，待反应完全后，减压浓缩。残余物用无水四氢呋喃(6mL)溶解，然后于0℃，缓慢滴加到含有四氢呋喃(6mL)和氨水(6mL)的反应瓶中。加毕，反应液继续搅拌20分钟，待反应完成后，加入乙酸乙酯(30mL)稀释，有机相依次用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱剂为MeOH:DCM＝1:10)，得到N5-(4-(4-氨基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-1-环丙基-3-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(45d)(200mg，黄色固体，收率：40.0％)。
LC-MS(ESI)：m/z 655.29[M+H+]。
步骤5：N5-(4-(4-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-1-环丙基-3-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(45)的制备
在含有三氟乙酸(2.5mL)的反应瓶中加入N5-(4-(4-氨基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-1-环丙基-3-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(45d)(100mg，0.15mmol)。将混合物于室温搅拌1小时，减压浓缩，残余物用乙腈(3mL)溶解，再加入氨水(2.5mL，33％)，继续搅拌1小时。待反应完全后，用乙酸乙酯萃取(10mLx3)，合并有机相。将有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过制备HPLC纯化(C18，乙腈/水(0.1％甲酸)：10％～100％)，得到N5-(4-(4-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-1-环丙基-3-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(45)(30mg，白色固体，收率：37.4％)。
LC-MS(ESI)：m/z525.23[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.55(s,1H),12.75(s,1H),8.62(s,1H),8.21(s,1H),8.11(s,1H),7.96(s,1H),7.85(d,J＝8.6Hz,2H),7.64(d,J＝8.5Hz,2H),7.34(dd,J＝8.6,5.7Hz,2H),7.25(t,J＝9.0Hz,2H),6.66(s,2H),3.75(tt,J＝7.3,4.0Hz,1H),1.28–1.23(m,2H),1.09(d,J＝7.3Hz,2H)。
实施例46：N-(4-(4-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-6-氰基-1-环丙基-5-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酰胺(46)的制备
Figure BDA0002098237770001051
采用与实施例7相同的方法，除了用N5-(4-(4-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-1-环丙基-3-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(45)代替N5-(4-(4-氨基-1-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(1)，制得N-(4-(4-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-6-氰基-1-环丙基-5-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酰胺(46)(6mg，黄色固体，一步收率：10.0％)。
LC-MS(ESI)：m/z507.18[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.56(s,1H),12.38(s,1H),8.68(s,1H),8.21(s,1H),7.92–7.82(m,2H),7.75–7.54(m,4H),7.46–7.34(m,2H),3.94(tt,J＝7.3,3.8Hz,1H),1.41(q,J＝4.4,3.9Hz,2H),1.25–1.22(m,2H)。
实施例47：N5-(4-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)-3-氟苯基)-1-环丙基-3-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(47)的制备
Figure BDA0002098237770001061
采用与实施例45相同的方法，除了用2-氟-4-氨基苯硼酸频那醇酯和5-溴-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(中间体t2)分别代替4-氨基苯硼酸频那醇酯和3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(中间体u)，制得N5-(4-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)-3-氟苯基)-1-环丙基-3-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(47)(35mg，白色固体，五步收率：11.2％)。
LC-MS(ESI)：m/z542.17[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.79(s,1H),11.84(s,1H),8.61(s,1H),8.10(d,J＝5.5Hz,2H),7.96(s,1H),7.89(dd,J＝12.2,2.0Hz,1H),7.45–7.30(m,4H),7.29–7.18(m,3H),5.95(s,2H),3.76(dt,J＝7.5,3.8Hz,1H),1.25(d,J＝4.7Hz,2H),1.10(t,J＝7.0Hz,2H)。
实施例48：N5-(4-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-1-环丙基-3-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(448)的制备
Figure BDA0002098237770001062
采用与实施例47相同的方法，除了用5-氟-4-氨基苯硼酸频那醇酯代替2-氟-4-氨基苯硼酸频那醇酯，制得N5-(4-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-1-环丙基-3-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(48)(20mg，白色固体，五步收率：6.3％)。
LC-MS(ESI)：m/z542.17[M+H+]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.88(s,1H),11.83(s,1H),8.62(s,1H),8.56(t,J＝8.4Hz,1H),8.10(s,2H),7.96(s,1H),7.40–7.21(m,7H),6.12(s,2H),3.77–3.75(m,1H),1.25(d,J＝4.1Hz,2H),1.09(d,J＝7.2Hz,2H)。
实施例49：N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-1-环丙基-3-(4-氟苯基)-N2-甲基-d3-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(49)的制备
Figure BDA0002098237770001071
采用与实施例18相同的方法，除了用氘代甲氨盐酸盐代替氨水，制得N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-1-环丙基-3-(4-氟苯基)-N2-甲基-d3-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(49)(30mg，白色固体，一步收率：45.6％)。
LC-MS(ESI)：m/z694.34[M+H+]。
实施例50：N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)-1-环丙基-3-(4-氟苯基)-N2-甲基-d3-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(50)的制备
Figure BDA0002098237770001072
采用与实施例12相同的方法，除了用氘代甲氨盐酸盐代替氨水，制得N5-(4-(4-氨基-7-(1-异丁酰基哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基)-1-环丙基-3-(4-氟苯基)-N2-甲基-d3-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2,5-二甲酰胺(50)(25mg，白色固体，一步收率：38.2％)。
LC-MS(ESI)：m/z694.34[M+H+]。
本发明化合物的生物学评价
测试例1：本发明化合物对酪氨酸激酶TAM(Axl、Mer、Tyro3)活性抑制(IC50)的评价实验
本实验使用酶学HTRF方法测试化合物在ATP浓度分别为相应激酶Km下的抑制活性。参照物为RXDX-106。测试化合物的浓度从10μM开始，3倍稀释，设置两个复孔。
试验材料：
激酶Axl(Carna，Cat.No.08-107，Lot.No.16CBS-0641F)，Mer(Carna，Cat.No.08-108，Lot.No.14CBS-0421H)，Tyro3(Carna，Cat.No.08-109，Lot.No.08CBS-1186H)。HTRF激酶-TK试剂盒(Cisbio，Cat.No.62TK0PEC)，该试剂盒包括：生物素-TK底物冻干粉(Cisbio，Cat.No.61TK0BLC，Lot.No.07A)，链霉亲和素-XL665(Cisbio，Cat.No.610SAXLG，Lot.No.126A)，TK抗体-穴状化合物(Cisbio，Cat.No.610SAXLG，Lot.No.04A)，检测缓冲液(包括EDTA)(Cisbio，Cat.No.62TK0PEC，Lot.No.12A)。ATP(Sigma，Cat.No.A7699-5G，CASNo.34369-07-8，Lot.No.SLBQ6014V)，DMSO(Sigma，Cat.No.D5879-1L，Lot.No.SHBH9944)，HEPES(Sigma，Cat.No.V900477-500G，CAS No.7365-45-9，Lot.No.WXBC4716V)，MgCl2(Sigma，Cat.No.208337-1KG，Lot.No.MKBX9508V)，EGTA(Sigma，Cat.No.E3889-100g，CAS67-42-5，CAS No.7786-30-3，Lot.No.SLBG8546V)，NP-40(北京鼎国，Cat.No.DH218，Lot.No.36R00160)，DTT(Sigma，Cat.No.D0632-25g，CAS No.3483-12-3，Lot.No.SLBF3964V)，化合物板(Labcyte，Cat.No.LP0200，Lot.No.0006386836)，实验板(Greiner，Cat.No.784075，Lot.No.E16123HM)，RXDX-106(北京越之康泰按照专利WO2013074633提供的制备方法进行制备)。
实验步骤：
1.缓冲液成分：50mM HEPES,10mM MgCl2,1mM EGTA,0.01％NP-40,2mM DTT。
2.将本发明化合物用DMSO溶解成10mM并使用DMSO稀释到1mM或适当浓度，使用BRAVO(Agilent)进行倍比系列稀释。使用ECHO 555(Labcyte)从化合物板(Labcyte-LP0200)转移100nl到实验板(Greiner-784075)。DMSO最终浓度为1％。
3.Axl、Mer和Tyro3分别用检测缓冲液(Cisbio，Cat.No.62TK0PEC，Lot.No.12A)稀释成10nM、0.5nM和1.2nM。转移5ul到384孔板中，与本发明化合物在22-25℃孵育30分钟。Axl、Mer和Tyro3最终浓度分别为5nM,0.25nM和0.6nM。
4.生物素-TK底物和ATP用上述缓冲液分别稀释成最终浓度的两倍浓度。底物和ATP的混合物加入5ul到384孔板起始反应，并于22-25℃反应1小时。
测试实验中各试剂的反应浓度如下表1所示。
表1实验中各试剂的最终反应浓度
Figure BDA0002098237770001081
Figure BDA0002098237770001091
5.链霉亲和素-XL665和TK抗体-穴状化合物用检测缓冲液稀释成250nM和0.5nM。加入10ul到384孔板起始反应，并于22-25℃反应1小时。链霉亲和素-XL665和TK抗体-穴状化合物最终浓度为125nM和0.25nM。
6.用Envision Reader(PerkinElmer)读取665nM和615nm的比值。
7.用XLfit软件拟合化合物IC50。
本发明化合物对酪氨酸激酶Axl/Mer/Tyro3的抑制活性如下表2所示。
表2本发明化合物对酪氨酸激酶Axl/Mer/Tyro3的IC50值
Figure BDA0002098237770001092
Figure BDA0002098237770001101
结论：与RXDX-106相比，本发明化合物同样展现出了强的抑制TAM激酶活性的能力。而且部分化合物还具备针对Tyro3的高度选择性，这将可能给化合物在安全性方面带来一定的优势。
测试例2：本发明化合物对Ba/F3Axl细胞增殖的抑制活性
试验方法：使用Promega公司的
Figure BDA0002098237770001102
Luminescent Cell ViabilityAssay试剂盒评估化合物对Ba/F3Axl细胞增殖的抑制活性。
仪器：Molecular Devices公司的Spectramax M3多功能酶标仪，ThermoScientific公司的Model 311Series CO2培养箱，Thermo Scientific公司的Model1300Series A2生物安全柜，Olympus公司的CKX41SF倒置显微镜，Countstar公司的IC1000细胞计数仪，SIEMENS公司的KK25E76TI冰箱，其林贝尔公司的QB-9001微孔板快速振荡器。
试验材料：胎牛血清FBS(Thermo Fisher公司，货号#10099-141，批号#1966174C)，
Figure BDA0002098237770001103
荧光细胞存活测试试剂(Promega公司，货号#G7572，批号#0000310975)，96孔透明平底黑壁细胞培养板(Thermo Fisher公司，货号#，批号#1207365)，RPMI1640培养基(GE公司，货号#SH30809.01，批号#AD17321266)，Murine IL-3(PeproTech公司，货号#213-13，批号#120948)，rhGas6(R&D Systems公司，货号#885-GSB，批号#DFGX0417081)，对照品bemcentinib(别名BGB324，上海毕得医药科技有限公司，货号#BD559084，批号#AQU341)，Ba/F3Axl细胞(由康源博创生物科技(北京)有限公司构建，完全培养基为RPMI1640+10％FBS+100ng/mL rhGas6，培养条件为37℃、5％CO2、95％湿度，生长倍增时间约为20小时，传代比例为1:10；参考Oncogene.2009；28:3442–3455,Oncotarget.FASEB J.2017；31(4):1382–1397)。
试验步骤：复苏Ba/F3Axl细胞时，细胞冻存管于37℃水浴中快速摇动使其在1分钟内融解。取融解后的细胞悬液与含10％FBS的RPMI1640培养基混匀，1000转/分钟离心5分钟，弃上清。取5mL完全培养基重悬细胞沉淀，置于底面积25cm2的细胞培养瓶中，放入37℃、95％湿度和5％CO2的细胞培养箱中培养。细胞密度为2×106个活细胞/mL时进行细胞传代。细胞传代时，直接将旧细胞悬液吹打均匀后，保留1/10(即0.5mL)细胞悬液，加入4.5mL新的完全培养基，吹打均匀后，置于细胞培养瓶中继续培养。细胞汇合率再次达到2×106个活细胞/mL时进行细胞铺板。细胞铺板时，参照细胞传代方法，保留1/10(即0.5mL)细胞悬液继续培养，将剩余细胞悬液置于15mL离心管中，离心后弃上清，使用5mL完全培养基重悬细胞。用台盼蓝排斥法，使用Countstar公司的IC1000细胞计数仪检测细胞活力，确保细胞活力在90％以上。使用完全培养基配制密度为5.56×104个活细胞/mL的细胞悬液，加90μL细胞悬液至96孔细胞培养板中，使细胞培养板(第0天板和待测药板)中细胞密度为5000个活细胞/孔。设置不含细胞、不含化合物、只含完全培养基的对照组，设置不含化合物、含细胞的对照组。细胞板置于细胞培养箱中培养过夜。加化合物时，将本发明化合物和对照品bemcentinib用DMSO溶解，进行梯度稀释，得到10倍溶液。加10μL上述溶液至对应的细胞培养板中，使化合物起始浓度为100nM，相邻浓度稀释倍数为3.16倍，细胞培养板中DMSO含量为0.1％。细胞板置于细胞培养箱中继续培养72小时。检测时，融化CellTiter-Glo试剂(即
Figure BDA0002098237770001112
荧光细胞存活测试试剂，Promega公司，货号#G7572，批号#0000310975)，并将细胞板移至室温平衡30分钟，加100μL的CellTiter-Glo至细胞板每个孔中，在其林贝尔公司的QB-9001微孔板快速振荡器上振动5分钟使细胞充分裂解，将细胞板放置于室温20分钟以稳定冷光信号，用Molecular Devices公司的Spectramax M3多功能酶标仪全波长扫描各孔的冷光值。
受试样品：本发明实施例化合物和bemcentinib(阳性对照化合物)
数据分析：使用下列公式计算各浓度化合物作用下细胞存活率：
细胞存活率(％)＝(Lum待测药-Lum培养液对照)/(Lum细胞对照-Lum培养液对照)×100％，其中Lum指多功能酶标仪读出的待测药板各孔的冷光数值。
使用GraphPad Prism 7.0软件分析数据，利用非线性S曲线回归来拟合数据得出剂量-效应曲线，并由此计算IC50值。
本发明化合物对Ba/F3Axl细胞增殖的抑制活性的IC50值如下表3所示。
表3本发明化合物对Ba/F3Axl细胞增殖的抑制活性(IC50，nM)
Figure BDA0002098237770001111
Figure BDA0002098237770001121
结论：如上表3所示，本发明化合物能够显著抑制Ba/F3AXL细胞的增殖，其抑制活性优于对照品bemcentinib。

Claims (4)

1.一种化合物或其可药用盐，其选自：
Figure FDA0003652176980000011
2.一种药物组合物，其包含根据权利要求1所述的化合物或其可药用盐，以及药学上可接受的载体或赋形剂。
3.根据权利要求1所述的化合物或其可药用盐或者根据权利要求2所述的药物组合物在制备TAM激酶抑制剂中的用途，所述TAM激酶为Axl、Mer和Tyro3。
4.根据权利要求1所述的化合物或其可药用盐或者根据权利要求2所述的药物组合物在制备治疗与TAM激酶活性相关的疾病的药物中的用途，所述疾病选自乙型肝炎、丙型肝炎、艾滋病、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、肠癌、胃癌、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、食道癌、胆囊癌、胰腺癌、皮肤癌、脑癌、骨癌、软组织癌、白血病和淋巴癌。
CN201910526044.0A 2018-06-21 2019-06-18 含氮杂环类衍生物及其在医药上的应用 Active CN110627796B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810642939 2018-06-21
CN2018106429396 2018-06-21

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110627796A CN110627796A (zh) 2019-12-31
CN110627796B true CN110627796B (zh) 2022-07-12

Family

ID=68968486

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910526044.0A Active CN110627796B (zh) 2018-06-21 2019-06-18 含氮杂环类衍生物及其在医药上的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110627796B (zh)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110845502A (zh) * 2019-11-25 2020-02-28 成都傲飞生物化学品有限责任公司 一种7-溴吡咯并[2,1-f][1,2,4]噻嗪-4-胺的制备方法
CN111233870A (zh) * 2020-03-11 2020-06-05 中国科学技术大学 用于快速制备瑞德西韦药物中间体的方法
WO2021233236A1 (zh) * 2020-05-18 2021-11-25 北京范恩柯尔生物科技有限公司 取代的杂芳基化合物及其组合物和用途
TW202216715A (zh) 2020-07-07 2022-05-01 大陸商四川海思科製藥有限公司 降解btk激酶的化合物、製造方法及其應用
CN113912628B (zh) * 2020-07-10 2023-05-02 北京范恩柯尔生物科技有限公司 三嗪类化合物及其组合物和用途
CN112125864B (zh) * 2020-09-18 2022-03-15 西安近代化学研究所 一种1,1’-二氨基-5,5’-联四唑的合成方法
WO2022166610A1 (zh) * 2021-02-05 2022-08-11 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 一类哒嗪酮杂环化合物及其制备方法和用途
CN113215157B (zh) * 2021-05-20 2022-06-21 徐州医科大学 特异性靶向人AXL基因的sgRNA及其应用
WO2023016296A1 (zh) * 2021-08-12 2023-02-16 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 一类杂环化合物及其制备方法和用途
TW202330519A (zh) * 2021-09-29 2023-08-01 香港商德琪研發有限公司 作為ｔａｍ抑制劑的吡唑并吡啶化合物
WO2023155886A1 (en) * 2022-02-17 2023-08-24 Shanghai Antengene Corporation Limited Pyrazolopyridine compounds as tam inhibitors

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2011514881A (ja) * 2007-11-09 2011-05-12 ザ ソルク インスティテュート フォー バイオロジカル スタディーズ 免疫増強剤としてのｔａｍ受容体阻害剤の使用および免疫抑制剤としてのｔａｍ活性化剤の使用
US9586967B2 (en) * 2013-11-08 2017-03-07 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Pyrrolo pyrimidine derivative
CN104974162B (zh) * 2014-04-09 2018-09-14 广东东阳光药业有限公司 双环吡唑酮化合物及其使用方法和用途
KR20230111268A (ko) * 2016-03-28 2023-07-25 인사이트 코포레이션 Tam 억제제로서 피롤로트리아진 화합물
CN108250200A (zh) * 2016-12-28 2018-07-06 中国科学院上海药物研究所 一种具有Axl抑制活性的化合物及其制备和应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN110627796A (zh) 2019-12-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110627796B (zh) 含氮杂环类衍生物及其在医药上的应用
CN109983007B (zh) 酰胺类衍生物抑制剂及其制备方法和应用
CN112368283B (zh) 含二并环类衍生物抑制剂、其制备方法和应用
CN107011348B (zh) 作为btk活性的抑制剂的杂芳基吡啶酮和氮杂-吡啶酮化合物
CN111295384A (zh) 双环类衍生物抑制剂、其制备方法和应用
CN113195471B (zh) 多取代吡啶酮类衍生物及其在医药上的应用
JP6789941B2 (ja) Ｔｇｆ−ベータ阻害剤としての縮合イミダゾール誘導体
CN110072865B (zh) 吡咯并芳杂环类化合物及其制备方法和医药用途
CN110520416B (zh) 多取代吡啶酮类衍生物、其制备方法及其医药用途
US11230545B2 (en) Heterocyclic compound
CN112292374A (zh) 一种新型磷酸肌醇3-激酶抑制剂及其制备方法和用途
TW202400601A (zh) 作為ｐａｒｐ抑製劑的取代的三環類化合物及其用途
WO2020125513A1 (zh) 作为cdk抑制剂的大环化合物、其制备方法及其在医药上的应用
CN111320624A (zh) 三唑并吡啶类和咪唑并吡啶类化合物及其制备方法和医药用途
TW202016102A (zh) Erk抑制劑及其應用
CN114437116A (zh) 杂环化合物及其制备方法、药物组合物和应用
EP3694860A1 (en) Pyrrolotriazine compounds and methods of inhibiting tam kinases
WO2021249417A1 (zh) 杂环化合物及其衍生物
CN115916771A (zh) 多靶点的抗肿瘤化合物及其制备方法和应用
TW202112783A (zh) 三環類化合物及其用途
CN113072551A (zh) 含氮联苯类衍生物抑制剂、其制备方法和应用
TWI707853B (zh) 1,2-二氫-1,6-萘啶類衍生物、其製備方法、其藥物組合物及其在醫藥上的用途
WO2023109540A1 (zh) 具有akt激酶抑制活性的杂环化合物及其制备方法和医药用途
KR20230107542A (ko) 헤테로방향족 화합물 및 이의 용도
WO2024067714A1 (zh) 具有抗kras突变肿瘤活性的化合物

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant