CN110623066A - 一种复合益生菌制品及制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了复合益生菌制品技术领域的一种复合益生菌制品及其制备方法，复合益生菌制品包括如下重量份的原料：鲜奶100‑120份、复合益生菌微胶囊2‑4份、白砂糖8‑10份、稀奶油1‑3份、乳清蛋白粉1‑3份和果胶2‑5份，通过在培养益生菌时，向培养皿中添加抗热保护剂，使得益生菌的表面附着有抗热保护剂，提高了益生菌的耐热性，另外通过阿拉伯木聚糖和大豆蛋白对益生菌进行两次包埋，将益生菌包覆起来，减少胃液对益生菌的影响，进而提高了益生菌在经过胃液时的存活率，该复合益生菌制品的制作工艺简单，制得复合益生菌制品的益生菌含有抗热保护剂，且表面有阿拉伯木聚糖和大豆蛋白两层包覆，提高了该复合益生菌制品的储藏效果和食用效果。

Description

一种复合益生菌制品及制备方法
技术领域
本发明涉及复合益生菌制品技术领域，具体为一种复合益生菌制品及制备方法。
背景技术
益生菌是通过定殖在人体内，改变宿主某一部位菌群组成的一类对宿主有益的活性微生物。通过调节宿主黏膜与系统免疫功能或通过调节肠道内菌群平衡，促进营养吸收保持肠道健康的作用，从而产生有利于宿主健康作用的单微生物或组成明确的混合微生物。
“活性益生菌”中微生物的分泌物如氨基酸、活性抗菌小肽、有机酸、寡聚多糖类、各种维生素、抗生物质和抗病毒物质，各种生化酶和氧（活性氧还原成分子氧）等，既可直接调正各器官功能，又可增加营养，从而改善体内微生态平衡。“活性益生菌”不仅是各种疾病生存的克星，也是各种污染的克星。
但是现有的益生菌制品中的益生菌的抗热性能较差，在食用时在经过胃液时容易失活，导致益生菌达到肠道时的数量较少，使得益生菌制品的食用效果较差。
基于此，本发明设计了具体为一种复合益生菌制品及制备方法，以解决上述问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种复合益生菌制品及制备方法，以解决上述背景技术中提出的现有的益生菌制品中的益生菌的抗热性能较差，在食用时在经过胃液时容易失活，导致益生菌达到肠道时的数量较少，使得益生菌制品的食用效果较差的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种复合益生菌制品，包括如下重量份的原料：鲜奶100-120份、复合益生菌微胶囊2-4份、白砂糖8-10份、稀奶油1-3份、乳清蛋白粉1-3份和果胶2-5份。
优选的，所述鲜奶为鲜羊奶或鲜牛奶。
本发明还提供一种复合益生菌制品的制备方法，包括如下步骤：
S1、向MRS液体培养基加入抗热保护剂；
S2、益生菌浓缩菌液的制备：将冷冻保藏的益生菌菌种接入至S1中的MRS液体培养基，在37℃厌氧培养2-3h，将培养基中的菌悬液离心，去除上清，菌泥经无菌的NaCl溶液洗涤后，重悬于生理盐水中，得到益生菌浓缩菌液；
S3、第一层包埋液制备：配制18g/L的海藻酸钠和20-60g/L的阿拉伯木聚糖的混合溶液，置于120℃下灭菌20min，冷却至室温后，得到第一层包埋液，置于4℃下备用；
S4、第一层包埋：将S2得到的益生菌浓缩菌液和S3中的第一层包埋液按比例1:10混合均匀，加入漆酶，在4℃的温度下搅拌10min后，用注射器向混合溶液加入0.1mol/L的氯化钙溶液，静置30min后过滤，用无菌水洗涤，冻干，制得单层益生菌微胶囊；
S5、第二层包埋液制备：配制质量含量为10%的大豆蛋白溶液，然后加热至80℃热变性30min，使蛋白球分子链展，再向10%大豆蛋白溶液加入转谷氨酰胺酶，接着将大豆蛋白混合溶液加入到植物油中乳化2h，制得第二层包埋液；
S6、第二层包埋：将S4得到的单层益生菌微胶囊加入至S5得到的第二层包埋液中，在40℃的温度下搅拌30min后，离心收集胶体颗粒，得到复合益生菌微胶囊；
S7、复合益生菌制品的制备：
a、奶液制备：鲜奶经板换升温至60-75℃，打入配料罐；
b、标准化配料：向配料罐中加入白砂糖、稀奶油、乳清蛋白粉和果胶，并用均质机对配料罐内的物质进行均质；
c、杀菌：配料罐中的混合原料经过85℃的类巴氏杀菌5分钟，经板冷后导入发酵罐；
d、接种发酵：将复合益生菌微胶囊加入至发酵罐中，搅拌10-15min，温度升至温度40℃，发酵5h后通过板式交换器降温至20℃，导入暂存缸暂存；
f、灌装：保持20℃对暂存缸内的液体进行灌装。
优选的，所述MRS液体培养基的配方如下：在1L蒸馏水中溶解下列组分：蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母提取物5g、磷酸氢二钾2g、柠檬酸2g、乙酸钠5g、葡萄糖20g、吐温801ml、硫酸镁0.5g、硫酸锰0.25g和琼脂粉15g，且培养液的pH为6.2-6.4。
优选的，所述益生菌菌种为嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、乳双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌和干酪乳杆菌中的一种。
优选的，所述抗热保护剂为明胶、蔗糖和甘油三种混合物。
优选的，所述抗热保护剂的配比是在MRS液体培养基中添加1-1.5g/dL明胶、4-6g/dL蔗糖和3-5ml/dL甘油。
优选的，所述S2离心过程中的转速为4000r/min，离心时间为10min。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明通过在培养益生菌时，向培养皿中添加抗热保护剂，使得益生菌的表面附着有抗热保护剂，提高了益生菌的耐热性，另外通过阿拉伯木聚糖和大豆蛋白对益生菌进行两次包埋，将益生菌包覆起来，减少胃液对益生菌的影响，进而提高了益生菌在经过胃液时的存活率，该复合益生菌制品的制作工艺简单，制得复合益生菌制品的益生菌含有抗热保护剂，且表面有阿拉伯木聚糖和大豆蛋白两层包覆，益生菌在经过胃液时的存活率较高，使肠道能够吸收更多的益生菌，进而提高了该复合益生菌制品的储藏效果和食用效果。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
具体实施方式
下面将结合本发明的几个实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
一种复合益生菌制品，包括如下重量份的原料：鲜牛奶100份、复合益生菌微胶囊3份、白砂糖8份、稀奶油2份、乳清蛋白粉2份和果胶3份。
复合益生菌制品的制备方法，包括如下步骤：
S1、在1L蒸馏水中溶解下列组分：蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母提取物5g、磷酸氢二钾2g、柠檬酸2g、乙酸钠5g、葡萄糖20g、吐温80 1ml、硫酸镁0.5g、硫酸锰0.25g和琼脂粉15g，且培养液的pH为6.2-6.4，制得MRS液体培养基，向MRS液体培养基中添加1.5g/dL明胶、6g/dL蔗糖、3ml/dL甘油；
S2、益生菌浓缩菌液的制备：将冷冻保藏的嗜热链球菌菌种接入至S1中的MRS液体培养基，在37℃厌氧培养2h，将培养基中的菌悬液离心，其中转速为4000r/min，离心时间为10min，去除上清，菌泥经无菌的NaCl溶液洗涤后，重悬于生理盐水中，得到嗜热链球菌浓缩菌液；
S3、第一层包埋液制备：配制18g/L的海藻酸钠和20g/L的阿拉伯木聚糖的混合溶液，置于120℃下灭菌20min，冷却至室温后，得到第一层包埋液，置于4℃下备用；
S4、第一层包埋：将S2得到的嗜热链球菌浓缩菌液和S3中的第一层包埋液按比例1:10混合均匀，加入漆酶，在4℃的温度下搅拌10min后，用注射器向混合溶液加入0.1mol/L的氯化钙溶液，静置30min后过滤，用无菌水洗涤，冻干，制得单层益生菌微胶囊；
S5、第二层包埋液制备：配制质量含量为10%的大豆蛋白溶液，然后加热至80℃热变性30min，使蛋白球分子链展，再向10%大豆蛋白溶液加入转谷氨酰胺酶，接着将大豆蛋白混合溶液加入到植物油中乳化2h，制得第二层包埋液；
S6、第二层包埋：将S4得到的单层益生菌微胶囊加入至S5得到的第二层包埋液中，在40℃的温度下搅拌30min后，离心收集胶体颗粒，得到复合益生菌微胶囊；
S7、复合益生菌制品的制备：
a、奶液制备：鲜奶经板换升温至60-75℃，打入配料罐；
b、标准化配料：向配料罐中加入白砂糖、稀奶油、乳清蛋白粉和果胶，并并用均质机对配料罐内的物质进行均质；
c、杀菌：配料罐中的混合原料经过85℃的类巴氏杀菌5分钟，经板冷后导入发酵罐；
d、接种发酵：将复合益生菌微胶囊加入至发酵罐中，搅拌10-15min，温度升至温度40℃，发酵5h后通过板式交换器降温至20℃，导入暂存缸暂存；
f、灌装：保持20℃对暂存缸内的液体进行灌装。
实施例2：
一种复合益生菌制品，包括如下重量份的原料：鲜羊奶110份、复合益生菌微胶囊4份、白砂糖10份、稀奶油1份、乳清蛋白粉3份和果胶4份。
复合益生菌制品的制备方法，包括如下步骤：
S1、在1L蒸馏水中溶解下列组分：蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母提取物5g、磷酸氢二钾2g、柠檬酸2g、乙酸钠5g、葡萄糖20g、吐温80 1ml、硫酸镁0.5g、硫酸锰0.25g和琼脂粉15g，且培养液的pH为6.2-6.4，制得MRS液体培养基，向MRS液体培养基中添加1g/dL明胶、5g/dL蔗糖、4ml/dL甘油；
S2、益生菌浓缩菌液的制备：将冷冻保藏的嗜酸乳杆菌菌种接入至S1中的MRS液体培养基，在37℃厌氧培养3h，将培养基中的菌悬液离心，其中转速为4000r/min，离心时间为10min，去除上清，菌泥经无菌的NaCl溶液洗涤后，重悬于生理盐水中，得到嗜酸乳杆浓缩菌液；
S3、第一层包埋液制备：配制18g/L的海藻酸钠和30g/L的阿拉伯木聚糖的混合溶液，置于120℃下灭菌20min，冷却至室温后，得到第一层包埋液，置于4℃下备用；
S4、第一层包埋：将S2得到的嗜酸乳杆菌浓缩菌液和S3中的第一层包埋液按比例1:10混合均匀，加入漆酶，在4℃的温度下搅拌10min后，用注射器向混合溶液加入0.1mol/L的氯化钙溶液，静置30min后过滤，用无菌水洗涤，冻干，制得单层益生菌微胶囊；
S5、第二层包埋液制备：配制质量含量为10%的大豆蛋白溶液，然后加热至80℃热变性30min，使蛋白球分子链展，再向10%大豆蛋白溶液加入转谷氨酰胺酶，接着将大豆蛋白混合溶液加入到植物油中乳化2h，制得第二层包埋液；
S6、第二层包埋：将S4得到的单层益生菌微胶囊加入至S5得到的第二层包埋液中，在40℃的温度下搅拌30min后，离心收集胶体颗粒，得到复合益生菌微胶囊；
S7、复合益生菌制品的制备：
a、奶液制备：鲜奶经板换升温至60-75℃，打入配料罐；
b、标准化配料：向配料罐中加入白砂糖、稀奶油、乳清蛋白粉和果胶，并并用均质机对配料罐内的物质进行均质；
c、杀菌：配料罐中的混合原料经过85℃的类巴氏杀菌5分钟，经板冷后导入发酵罐；
d、接种发酵：将复合益生菌微胶囊加入至发酵罐中，搅拌10-15min，温度升至温度40℃，发酵5h后通过板式交换器降温至20℃，导入暂存缸暂存；
f、灌装：保持20℃对暂存缸内的液体进行灌装。
实施例3：
一种复合益生菌制品，包括如下重量份的原料：鲜牛奶120份、复合益生菌微胶囊2份、白砂糖8份、稀奶油2份、乳清蛋白粉3份和果胶5份。
复合益生菌制品的制备方法，包括如下步骤：
S1、在1L蒸馏水中溶解下列组分：蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母提取物5g、磷酸氢二钾2g、柠檬酸2g、乙酸钠5g、葡萄糖20g、吐温80 1ml、硫酸镁0.5g、硫酸锰0.25g和琼脂粉15g，且培养液的pH为6.2-6.4，制得MRS液体培养基，向MRS液体培养基中添加1.2g/dL明胶、5g/dL蔗糖、3ml/dL甘油；
S2、益生菌浓缩菌液的制备：将冷冻保藏的乳双歧杆菌菌种接入至S1中的MRS液体培养基，在37℃厌氧培养2h，将培养基中的菌悬液离心，其中转速为4000r/min，离心时间为10min，去除上清，菌泥经无菌的NaCl溶液洗涤后，重悬于生理盐水中，得到乳双歧杆菌浓缩菌液；
S3、第一层包埋液制备：配制18g/L的海藻酸钠和40g/L的阿拉伯木聚糖的混合溶液，置于120℃下灭菌20min，冷却至室温后，得到第一层包埋液，置于4℃下备用；
S4、第一层包埋：将S2得到的乳双歧杆菌浓缩菌液和S3中的第一层包埋液按比例1:10混合均匀，加入漆酶，在4℃的温度下搅拌10min后，用注射器向混合溶液加入0.1mol/L的氯化钙溶液，静置30min后过滤，用无菌水洗涤，冻干，制得单层益生菌微胶囊；
S5、第二层包埋液制备：配制质量含量为10%的大豆蛋白溶液，然后加热至80℃热变性30min，使蛋白球分子链展，再向10%大豆蛋白溶液加入转谷氨酰胺酶，接着将大豆蛋白混合溶液加入到植物油中乳化2h，制得第二层包埋液；
S6、第二层包埋：将S4得到的单层益生菌微胶囊加入至S5得到的第二层包埋液中，在40℃的温度下搅拌30min后，离心收集胶体颗粒，得到复合益生菌微胶囊；
S7、复合益生菌制品的制备：
a、奶液制备：鲜奶经板换升温至60-75℃，打入配料罐；
b、标准化配料：向配料罐中加入白砂糖、稀奶油、乳清蛋白粉和果胶，并并用均质机对配料罐内的物质进行均质；
c、杀菌：配料罐中的混合原料经过85℃的类巴氏杀菌5分钟，经板冷后导入发酵罐；
d、接种发酵：将复合益生菌微胶囊加入至发酵罐中，搅拌10-15min，温度升至温度40℃，发酵5h后通过板式交换器降温至20℃，导入暂存缸暂存；
f、灌装：保持20℃对暂存缸内的液体进行灌装。
实施例4：
一种复合益生菌制品，包括如下重量份的原料：鲜羊奶100份、复合益生菌微胶囊4份、白砂糖9份、稀奶油2份、乳清蛋白粉1份和果胶4份。
复合益生菌制品的制备方法，包括如下步骤：
S1、在1L蒸馏水中溶解下列组分：蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母提取物5g、磷酸氢二钾2g、柠檬酸2g、乙酸钠5g、葡萄糖20g、吐温80 1ml、硫酸镁0.5g、硫酸锰0.25g和琼脂粉15g，且培养液的pH为6.2-6.4，制得MRS液体培养基，向MRS液体培养基中添加1.4g/dL明胶、6g/dL蔗糖、5ml/dL甘油；
S2、益生菌浓缩菌液的制备：将冷冻保藏的鼠李糖乳杆菌菌种接入至S1中的MRS液体培养基，在37℃厌氧培养3h，将培养基中的菌悬液离心，其中转速为4000r/min，离心时间为10min，去除上清，菌泥经无菌的NaCl溶液洗涤后，重悬于生理盐水中，得到鼠李糖乳杆菌浓缩菌液；
S3、第一层包埋液制备：配制18g/L的海藻酸钠和50g/L的阿拉伯木聚糖的混合溶液，置于120℃下灭菌20min，冷却至室温后，得到第一层包埋液，置于4℃下备用；
S4、第一层包埋：将S2得到的鼠李糖乳杆菌浓缩菌液和S3中的第一层包埋液按比例1:10混合均匀，加入漆酶，在4℃的温度下搅拌10min后，用注射器向混合溶液加入0.1mol/L的氯化钙溶液，静置30min后过滤，用无菌水洗涤，冻干，制得单层益生菌微胶囊；
S5、第二层包埋液制备：配制质量含量为10%的大豆蛋白溶液，然后加热至80℃热变性30min，使蛋白球分子链展，再向10%大豆蛋白溶液加入转谷氨酰胺酶，接着将大豆蛋白混合溶液加入到植物油中乳化2h，制得第二层包埋液；
S6、第二层包埋：将S4得到的单层益生菌微胶囊加入至S5得到的第二层包埋液中，在40℃的温度下搅拌30min后，离心收集胶体颗粒，得到复合益生菌微胶囊；
S7、复合益生菌制品的制备：
a、奶液制备：鲜奶经板换升温至60-75℃，打入配料罐；
b、标准化配料：向配料罐中加入白砂糖、稀奶油、乳清蛋白粉和果胶，并并用均质机对配料罐内的物质进行均质；
c、杀菌：配料罐中的混合原料经过85℃的类巴氏杀菌5分钟，经板冷后导入发酵罐；
d、接种发酵：将复合益生菌微胶囊加入至发酵罐中，搅拌10-15min，温度升至温度40℃，发酵5h后通过板式交换器降温至20℃，导入暂存缸暂存；
f、灌装：保持20℃对暂存缸内的液体进行灌装。
实施例5：
一种复合益生菌制品，包括如下重量份的原料：鲜牛奶115份、复合益生菌微胶囊2份、白砂糖10份、稀奶油2份、乳清蛋白粉1份和果胶3份。
复合益生菌制品的制备方法，包括如下步骤：
S1、在1L蒸馏水中溶解下列组分：蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母提取物5g、磷酸氢二钾2g、柠檬酸2g、乙酸钠5g、葡萄糖20g、吐温80 1ml、硫酸镁0.5g、硫酸锰0.25g和琼脂粉15g，且培养液的pH为6.2-6.4，制得MRS液体培养基，向MRS液体培养基中添加1.3g/dL明胶、4.5g/dL蔗糖、2.5ml/dL甘油；
S2、益生菌浓缩菌液的制备：将冷冻保藏的植物乳杆菌菌种接入至S1中的MRS液体培养基，在37℃厌氧培养2h，将培养基中的菌悬液离心，其中转速为4000r/min，离心时间为10min，去除上清，菌泥经无菌的NaCl溶液洗涤后，重悬于生理盐水中，得到植物乳杆菌浓缩菌液；
S3、第一层包埋液制备：配制18g/L的海藻酸钠和60g/L的阿拉伯木聚糖的混合溶液，置于120℃下灭菌20min，冷却至室温后，得到第一层包埋液，置于4℃下备用；
S4、第一层包埋：将S2得到的植物乳杆菌浓缩菌液和S3中的第一层包埋液按比例1:10混合均匀，加入漆酶，在4℃的温度下搅拌10min后，用注射器向混合溶液加入0.1mol/L的氯化钙溶液，静置30min后过滤，用无菌水洗涤，冻干，制得单层益生菌微胶囊；
S5、第二层包埋液制备：配制质量含量为10%的大豆蛋白溶液，然后加热至80℃热变性30min，使蛋白球分子链展，再向10%大豆蛋白溶液加入转谷氨酰胺酶，接着将大豆蛋白混合溶液加入到植物油中乳化2h，制得第二层包埋液；
S6、第二层包埋：将S4得到的单层益生菌微胶囊加入至S5得到的第二层包埋液中，在40℃的温度下搅拌30min后，离心收集胶体颗粒，得到复合益生菌微胶囊；
S7、复合益生菌制品的制备：
a、奶液制备：鲜奶经板换升温至60-75℃，打入配料罐；
b、标准化配料：向配料罐中加入白砂糖、稀奶油、乳清蛋白粉和果胶，并并用均质机对配料罐内的物质进行均质；
c、杀菌：配料罐中的混合原料经过85℃的类巴氏杀菌5分钟，经板冷后导入发酵罐；
d、接种发酵：将复合益生菌微胶囊加入至发酵罐中，搅拌10-15min，温度升至温度40℃，发酵5h后通过板式交换器降温至20℃，导入暂存缸暂存；
f、灌装：保持20℃对暂存缸内的液体进行灌装。
实施例6：
一种复合益生菌制品，包括如下重量份的原料：鲜羊奶115份、复合益生菌微胶囊4份、白砂糖8份、稀奶油3份、乳清蛋白粉3份和果胶5份。
复合益生菌制品的制备方法，包括如下步骤：
S1、在1L蒸馏水中溶解下列组分：蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母提取物5g、磷酸氢二钾2g、柠檬酸2g、乙酸钠5g、葡萄糖20g、吐温80 1ml、硫酸镁0.5g、硫酸锰0.25g和琼脂粉15g，且培养液的pH为6.2-6.4，制得MRS液体培养基，向MRS液体培养基中添加1.5g/dL明胶、4g/dL蔗糖、4ml/dL甘油；
S2、益生菌浓缩菌液的制备：将冷冻保藏的干酪乳杆菌菌种接入至S1中的MRS液体培养基，在37℃厌氧培养3h，将培养基中的菌悬液离心，其中转速为4000r/min，离心时间为10min，去除上清，菌泥经无菌的NaCl溶液洗涤后，重悬于生理盐水中，得到干酪乳杆菌浓缩菌液；
S3、第一层包埋液制备：配制18g/L的海藻酸钠和40g/L的阿拉伯木聚糖的混合溶液，置于120℃下灭菌20min，冷却至室温后，得到第一层包埋液，置于4℃下备用；
S4、第一层包埋：将S2得到的干酪乳杆菌浓缩菌液和S3中的第一层包埋液按比例1:10混合均匀，加入漆酶，在4℃的温度下搅拌10min后，用注射器向混合溶液加入0.1mol/L的氯化钙溶液，静置30min后过滤，用无菌水洗涤，冻干，制得单层益生菌微胶囊；
S5、第二层包埋液制备：配制质量含量为10%的大豆蛋白溶液，然后加热至80℃热变性30min，使蛋白球分子链展，再向10%大豆蛋白溶液加入转谷氨酰胺酶，接着将大豆蛋白混合溶液加入到植物油中乳化2h，制得第二层包埋液；
S6、第二层包埋：将S4得到的单层益生菌微胶囊加入至S5得到的第二层包埋液中，在40℃的温度下搅拌30min后，离心收集胶体颗粒，得到复合益生菌微胶囊；
S7、复合益生菌制品的制备：
a、奶液制备：鲜奶经板换升温至60-75℃，打入配料罐；
b、标准化配料：向配料罐中加入白砂糖、稀奶油、乳清蛋白粉和果胶，并并用均质机对配料罐内的物质进行均质；
c、杀菌：配料罐中的混合原料经过85℃的类巴氏杀菌5分钟，经板冷后导入发酵罐；
d、接种发酵：将复合益生菌微胶囊加入至发酵罐中，搅拌10-15min，温度升至温度40℃，发酵5h后通过板式交换器降温至20℃，导入暂存缸暂存；
f、灌装：保持20℃对暂存缸内的液体进行灌装。
菌种密度测试：
测试过程：取各个实施例中的复合益生菌制品50ml，并分别置于6个无菌离心管中，然后分别向6个无菌离心管中加入pH=2的人工胃液，并立即将之置于37℃水浴摇床中，100r/min，于120min时将上述离心管取出，于4℃，4000r/min的条件下离心收集复合益生菌微胶囊。
菌落数的获取：将收集到的复合益生菌微胶囊加到10ml磷酸盐缓冲溶液中（pH=6.8），用ULTRA-TURRAXT18均质机分散30-60s，缓慢摇晃此均质液15min后，取适量浆液，稀释一定倍数，涂布于MRS琼脂培养基上，35℃培养48±2h后计数平板上的所有菌落数；
相同的，在取样时，用上述方法对复合益生菌制品样品中的复合益生菌微胶囊的菌落数进行计数。
以下为各个实施例复合益生菌制品在经过胃液2h后复合益生菌微胶囊菌数。
制品 0min菌落数（cfu/g） 120min菌落数（cfu/g）
实施例1 （5.18±2.0）×109 （3.21±2.0）×108
实施例2 （8.96±2.4）×108 （7.63±1.3）×107
实施例3 （4.36±1.9）×109 （1.58±1.5）×108
实施例4 （7.18±1.5）×108 （6.51±2.0）×107
实施例5 （2.04±3.1）×109 （4.16±2.5）×108
实施例6 （5.76±1.6）×109 （4.27±1.8）×108
经过上述实验可得，本发明制得的复合益生菌制品在模拟胃液中处理120min后，菌落减少的数量较少，益生菌的存活量能够保持在107cfu/g以内，益生菌存活率大幅提升。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。

Claims (8)

1.一种复合益生菌制品，其特征在于：包括如下重量份的原料：鲜奶100-120份、复合益生菌微胶囊2-4份、白砂糖8-10份、稀奶油1-3份、乳清蛋白粉1-3份和果胶2-5份。
2.根据权利要求1所述的一种复合益生菌制品，其特征在于：所述鲜奶为鲜羊奶或鲜牛奶。
3.一种根据权利要求1所述的一种复合益生菌制品的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、向MRS液体培养基加入抗热保护剂；
S2、益生菌浓缩菌液的制备：将冷冻保藏的益生菌菌种接入至S1中的MRS液体培养基，在37℃厌氧培养2-3h，将培养基中的菌悬液离心，去除上清，菌泥经无菌的NaCl溶液洗涤后，重悬于生理盐水中，得到益生菌浓缩菌液；
S3、第一层包埋液制备：配制18g/L的海藻酸钠和20-60g/L的阿拉伯木聚糖的混合溶液，置于120℃下灭菌20min，冷却至室温后，得到第一层包埋液，置于4℃下备用；
S4、第一层包埋：将S2得到的益生菌浓缩菌液和S3中的第一层包埋液按比例1:10混合均匀，加入漆酶，在4℃的温度下搅拌10min后，用注射器向混合溶液加入0.1mol/L的氯化钙溶液，静置30min后过滤，用无菌水洗涤，冻干，制得单层益生菌微胶囊；
S5、第二层包埋液制备：配制质量含量为10%的大豆蛋白溶液，然后加热至80℃热变性30min，使蛋白球分子链展，再向10%大豆蛋白溶液加入转谷氨酰胺酶，接着将大豆蛋白混合溶液加入到植物油中乳化2h，制得第二层包埋液；
S6、第二层包埋：将S4得到的单层益生菌微胶囊加入至S5得到的第二层包埋液中，在40℃的温度下搅拌30min后，离心收集胶体颗粒，得到复合益生菌微胶囊；
S7、复合益生菌制品的制备：
a、奶液制备：鲜奶经板换升温至60-75℃，打入配料罐；
b、标准化配料：向配料罐中加入白砂糖、稀奶油、乳清蛋白粉和果胶，并用均质机对配料罐内的物质进行均质；
c、杀菌：配料罐中的混合原料经过85℃的类巴氏杀菌5分钟，经板冷后导入发酵罐；
d、接种发酵：将复合益生菌微胶囊加入至发酵罐中，搅拌10-15min，温度升至温度40℃，发酵5h后通过板式交换器降温至20℃，导入暂存缸暂存；
f、灌装：保持20℃对暂存缸内的液体进行灌装。
4.根据权利要求3所述的一种复合益生菌制品的制备方法，其特征在于：所述MRS液体培养基的配方如下：在1L蒸馏水中溶解下列组分：蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母提取物5g、磷酸氢二钾2g、柠檬酸2g、乙酸钠5g、葡萄糖20g、吐温80 1ml、硫酸镁0.5g、硫酸锰0.25g和琼脂粉15g，且培养液的pH为6.2-6.4。
5.根据权利要求3所述的一种复合益生菌制品的制备方法，其特征在于：所述益生菌菌种为嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、乳双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌和干酪乳杆菌中的一种。
6.根据权利要求3所述的一种复合益生菌制品的制备方法，其特征在于：所述抗热保护剂为明胶、蔗糖和甘油三种混合物。
7.根据权利要求6所述的一种复合益生菌制品的制备方法，其特征在于：所述抗热保护剂的配比是在MRS液体培养基中添加1-1.5g/dL明胶、4-6g/dL蔗糖和3-5ml/dL甘油。
8.根据权利要求3所述的一种复合益生菌制品的制备方法，其特征在于：所述S2离心过程中离心机的转速为4000r/min，离心时间为10min。
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