CN110622998A - 一种蛋白在防治草地贪夜蛾和/或斜纹夜蛾中的应用 - Google Patents
一种蛋白在防治草地贪夜蛾和/或斜纹夜蛾中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种蛋白在防治草地贪夜蛾和/或斜纹夜蛾中的应用，其中，所示蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。
Description
技术领域
本发明提供了一种蛋白在防治草地贪夜蛾和/或斜纹夜蛾中的应用。
背景技术
近年来，鳞翅目害虫的啃食导致农作物大量减产。且随着苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis(简称Bt)δ-内毒素(杀虫晶体蛋白，半包晶体蛋白)在微生物工程菌和转基因抗虫植物中的广泛应用，导致一些昆虫对该类Bt杀虫蛋白产生耐药以及抗性。
发明内容
本发明之一提供了一种蛋白在防治草地贪夜蛾和/或斜纹夜蛾中的应用，其中，所示蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。
本发明之二提供了含有如本发明之一所述的应用中的所述蛋白的组合物在防治草地贪夜蛾和/或斜纹夜蛾中的应用。
本发明之二提供了含有如本发明之一所述的应用中的所述蛋白的微生物在防治草地贪夜蛾和/或斜纹夜蛾中的应用，其中所述微生物为大肠杆菌和/或苏云金芽胞杆菌。
在一个具体实施方式中，所述微生物中含有编码所述蛋白的基因。
在一个具体实施方式中，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
本发明的有益效果：本发明中的如SEQ ID No.4所示的蛋白不同于来自苏云金芽胞杆菌的能够形成晶体的半包晶体蛋白，然而，基于本发明的研究，如SEQ ID No.4所示的蛋白对草地贪夜蛾和斜纹夜蛾均有非常好的杀虫活性。本发明的蛋白可以解决现有生物源药剂因可能的耐药性以及抗性所导致的问题。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明实施例仅为示例性的说明，该实施方式无论在任何情况下均不构成对本发明的限定。
实施例1
Vip蛋白的表达
基于如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列设计引物F1/R1(SEQ ID No.2/SEQ IDNo.3；ATGAACAAGAATAATACTAAATTAAGC；CTACTTAATAGAGACATCGTAAAAATG TAC)，如SEQ IDNo.1的核苷酸序列和引物均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。其中，如SEQ IDNo.1所示的核苷酸编码如SEQ ID No.4所示的蛋白(即Vip蛋白)。
以F1/R1为模板，以合成的如SEQ ID No.1所示的核苷酸为模板，进行PCR扩增，之后将扩增后的产物连接到pET28a载体上，得到pET-VIP重组质粒，然后将阳性的重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中，筛选出阳性转化子BL21(DE3)/pET-VIP。
挑取BL21(DE3)/pET-VIP新鲜的菌落接种于5ml的LB液体培养基中活化8小时，然后以1％的接种量接种于装有20L已灭菌LB培养基的发酵罐中(加入1/1000的氨苄青霉素)，37℃，220rpm培养3.5h左右至OD600nm为0.6时，加IPTG至终浓度为0.5mmol/L，设定诱导温度20℃，诱导培养12h，然后于4℃下以10000g 15min的方式离心收集被诱导的菌体，菌体再用20mmol/L Tris-HCl(pH 8.0)悬浮均匀，接下来以70％的功率对菌体进行超声破碎6min(超3s停5s)，然后4℃，10000g离心25min，分别收集上清和沉淀，其中，沉淀用20mmol/L Tris-HCl(pH 8.0)悬浮。对上清和悬浮的沉淀进行SDS-PAGE检测，结果显示Vip蛋白在上清(可溶性组分)中的表达量比在沉淀(不可溶性组分)中的表达可多达一倍以上，因此，以可溶性组分进行杀虫活性分析。
在活性测定前，通过BSA定量Vip蛋白的浓度。
实施例2
突变蛋白S543N的表达
设计引物F2/R2(SEQ ID No.5/SEQ ID No.6；ATTGTAGAGAACGGGAACATAGAAGAGG；TTCCCGTTCTCTACAATATTGCTAATAAA)，从而对SEQ ID No.4进行S543N突变，突变蛋白S543N的氨基酸序列如SEQ ID No.7所示。将目标核苷酸同样连接到pET28a载体上，得到pET-S543N重组质粒，然后将阳性的重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中，筛选出阳性转化子BL21(DE3)/pET-S543N。
以实施例同样的方式诱导表达S543N蛋白，结果显示S543N蛋白在上清(可溶性组分)中的表达量比在沉淀(不可溶性组分)中的表达要多，因此，以可溶性组分进行杀虫活性分析。
同样，在活性测定前，通过BSA定量S543N蛋白的浓度。
实施例3
对草地贪夜蛾杀虫活性测定
以20mmol/L Tris-HCl(pH 8.0)作为空白对照；将Vip蛋白的浓度依次设置为2.50μg/mL、5.00μg/mL、10.00μg/mL、20.00μg/mL、40.00μg/mL、80.00μg/mL、160.00μg/mL、320.00μg/mL；将S543N的浓度同样依次设置为2.50μg/mL、5.00μg/mL、10.00μg/mL、20.00μg/mL、40.00μg/mL、80.00μg/mL、160.00μg/mL、320.00μg/mL。
称取5g人工饲料(配方见表1)于灭菌培养皿中，加入1mL各个浓度下的待测蛋白样品或空白对照，充分混合均匀，均匀的分装于已消毒的24孔细胞培养板中，室温放置至饲料中多余水分全部蒸发；用毛笔将健康的、未经取食的草地贪夜蛾初孵幼虫(孵化后12h内)拉线接入装有上述饲料的孔内，每孔1头虫铺上湿润卫生纸后盖上塑料盖，用橡皮筋捆紧，竖立放入生化培养箱中，于28℃，光周期16L:8D，相对湿度65％培养，每天观察，检查光照、湿度、温度以及饲料是否霉变，是否有水蒸气的凝结；7d后调查死虫数，结果见表2。然后计算死亡率。每个处理24头虫，重复3次。利用SPSS24软件分析蛋白的致死中浓度(LC50)，结果见表3。
表1
| 饲料组分 | 1份用量 | 2份用量 |
| 琼脂 | 55g | 110g |
| 黄豆粉 | 110g | 220g |
| 麦麸/麦胚粉 | 210g | 420g |
| 酵母粉 | 40g | 80g |
| 山梨酸 | 4g | 8g |
| 干酪素 | 55g | 110g |
| 抗坏血酸 | 4g | 8g |
| 复合维生素 | 3mL | 6mL |
| 甲醛 | 3mL | 6mL |
| 乙酸 | 6mL | 12mL |
| 特克多 | 1mL | 2mL |
| 蒸馏水 | 1800(1600+200)mL | 3600(3400+200)mL |
表2
表3
| 蛋白 | LC<sub>50</sub>(μg/g) | 95％置信限(μg/g) |
| Vip | 3.568 | 1.866-16.106 |
| S543N | - | - |
实施例4
对斜纹夜蛾杀虫活性测定
以20mmol/L Tris-HCl(pH 8.0)作为空白对照；将Vip蛋白的浓度依次设置为5.00μg/mL、10.00μg/mL、20.00μg/mL、40.00μg/mL、80.00μg/mL、160.00μg/mL、320.00μg/mL、640.00μg/mL。
称取6g人工饲料(配方见实施例3中的表1)于灭菌培养皿中，加入600μL各个浓度下的待测蛋白样品或空白对照，充分混合均匀，均匀的分装于已消毒的24孔细胞培养板中，室温放置至饲料中多余水分全部蒸发；用毛笔将健康的、未经取食的斜纹夜蛾初孵幼虫(孵化后12h内)拉线接入装有上述饲料的孔内，每孔1头虫铺上湿润卫生纸后盖上塑料盖，用橡皮筋捆紧，竖立放入生化培养箱中，于25℃，光周期16L:8D，相对湿度30％培养，每天观察，检查光照、湿度、温度以及饲料是否霉变，是否有水蒸气的凝结。7d后调查死虫数。然后计算死亡率。每个处理24头虫，重复3次。利用SPSS 24软件分析蛋白的致死中浓度(LC50)，结果见表4。
表4
| 蛋白 | LC<sub>50</sub>(μg/g) | 95％置信限(μg/g) |
| Vip | 1.044 | 0.842-1.319 |
实施例5
对甜菜夜蛾杀虫活性测定
以20mmol/L Tris-HCl(pH 8.0)作为空白对照；将Vip蛋白的浓度依次设置为5.00μg/mL、10.00μg/mL、20.00μg/mL、40.00μg/mL、80.00μg/mL、160.00μg/mL、320.00μg/mL、640.00μg/mL；将S543N的浓度依次设置为5.00μg/mL、10.00μg/mL、20.00μg/mL、40.00μg/mL、80.00μg/mL、160.00μg/mL、320.00μg/mL、640.00μg/mL。
称取30g人工饲料(配方见实施例3中的表1)于灭菌培养皿中，加入3mL各个浓度下的待测蛋白样品或空白对照，充分混合均匀，均匀的分装于已消毒的24孔细胞培养板中，室温放置至饲料中多余水分全部蒸发；用毛笔将健康的、未经取食的斜纹夜蛾初孵幼虫(孵化后12h内)拉线接入装有上述饲料的孔内，每孔1头虫铺上湿润卫生纸后盖上塑料盖，用橡皮筋捆紧，竖立放入生化培养箱中，于25℃，光周期16L:8D，相对湿度65％培养，每天观察，检查光照、湿度、温度以及饲料是否霉变，是否有水蒸气的凝结。7d后调查死虫数。然后计算死亡率。每个处理24头虫，重复3次。利用SPSS 24软件分析蛋白的致死中浓度(LC50)，结果见表5。
表5
| 蛋白 | LC<sub>50</sub>(μg/g) | 95％置信限(μg/g) |
| Vip | 18.399 | 14.7-22.1 |
| S543N | 3.614 | 2.123-4.974 |
虽然本发明已经参照具体实施方式进行了描述，但是本领域的技术人员应该理解在没有脱离本发明的真正的精神和范围的情况下，可以进行的各种改变。此外，可以对本发明的主体、精神和范围进行多种改变以适应特定的情形、材料、材料组合物和方法。所有的这些改变均包括在本发明的权利要求的范围内。
序列表
<110> 中国农业科学院植物保护研究所
<120> 一种蛋白在防治草地贪夜蛾和/或斜纹夜蛾中的应用
<130> LHA1960589
<160> 7
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 2370
<212> DNA
<213> 苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)
<400> 1
atgaacaaga ataatactaa attaagcaca agagccttac caagttttat tgattatttt 60
aatggcattt atggatttgc cactggtatc aaagacatta tgaacatgat ttttaaaacg 120
gatacaggtg gtgatctaac cctagacgaa attttaaaga atcagcagtt actaaatgat 180
atttctggta aattggatgg ggtgaatgga agcttaaatg atcttatcgc acagggaaac 240
ttaaatacag aattatctaa ggaaatatta aaaattgcaa atgaacaaaa tcaagtttta 300
aatgatgtta ataacaaact cgatgcgata aatacgatgc ttcgggtata tctacctaaa 360
attacctcta tgttgagtga tgtaatgaaa caaaattatg cgctaagtct gcaaatagaa 420
tacttaagta aacaattgca agagatttct gataagttgg atattattaa tgtaaatgta 480
cttattaact ctacacttac tgaaattaca cctgcgtatc aaaggattaa atatgtgaac 540
gaaaaatttg aggaattaac ttttgctaca gaaactagtt caaaagtaaa aaaggatggc 600
tctcctgcag atattcttga tgagttaact gagttaactg aactagcgaa aagtgtaaca 660
aaaaatgatg tggatggttt tgaattttac cttaatacat tccacgatgt aatggtagga 720
aataatttat tcgggcgttc agctttaaaa actgcatcgg aattaattac taaagaaaat 780
gtgaaaacaa gtggcagtga ggtcggaaat gtttataact tcttaattgt attaacagct 840
ctgcaagcaa aagcttttct tactttaaca acatgccgaa aattattagg cttagcagat 900
attgattata cttctattat gaatgaacat ttaaataagg aaaaagagga atttagagta 960
aacatcctcc ctacactttc taatactttt tctaatccta attatgcaaa agttaaagga 1020
agtgatgaag atgcaaagat gattgtggaa gctaaaccag gacatgcatt gattgggttt 1080
gaaattagta atgattcaat tacagtatta aaagtatatg aggctaagct aaaacaaaat 1140
tatcaagtcg ataaggattc cttatcggaa gttatttatg gtgatatgga taaattattg 1200
tgcccagatc aatctgaaca aatctattat acaaataaca tagtatttcc aaatgaatat 1260
gtaattacta aaattgattt cactaaaaaa atgaaaactt taagatatga ggtaacagcg 1320
aatttttatg attcttctac aggagaaatt gacttaaata agaaaaaagt agaatcaagt 1380
gaagcggagt atagaacgtt aagtgctaat gatgatgggg tgtatatgcc gttaggtgtc 1440
atcagtgaaa catttttgac tccgattaat gggtttggcc tccaagctga tgaaaattca 1500
agattaatta ctttaacatg taaatcatat ttaagagaac tactgctagc aacagactta 1560
agcaataaag aaactaaatt gatcgtcccg ccaagtggtt ttattagcaa tattgtagag 1620
aacgggtcca tagaagagga caatttagag ccgtggaaag caaataataa gaatgcgtat 1680
gtagatcata caggcggagt gaatggaact aaagctttat atgttcataa ggacggagga 1740
atttcacaat ttattggaga taagttaaaa ccgaaaactg agtatgtaat ccaatatact 1800
gttaaaggaa aaccttctat tcatttaaaa gatgaaaata ctggatatat tcattatgaa 1860
gatacaaata ataatttaga agattatcaa actattaata aacgttttac tacaggaact 1920
gatttaaagg gagtgtattt aattttaaaa agtcaaaatg gagatgaagc ttggggagat 1980
aactttatta ttttggaaat tagtccttct gaaaagttat taagtccaga attaattaat 2040
acaaataatt ggacgagtac gggatcaact aatattagcg gtaatacact cactctttat 2100
cagggaggac gagggattct aaaacaaaac cttcaattag atagtttttc aacttataga 2160
gtgtattttt ctgtgtccgg agatgctaat gtaaggatta gaaattctag ggaagtgtta 2220
tttgaaaaaa gatatatgag cggtgctaaa gatgtttctg aaatgttcac tacaaaattt 2280
gagaaagata acttttatat agagctttct caagggaata atttatatgg tggtcctatt 2340
gtacattttt acgatgtctc tattaagtag 2370
<210> 2
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 2
atgaacaaga ataatactaa attaagc 27
<210> 3
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 3
ctacttaata gagacatcgt aaaaatgtac 30
<210> 4
<211> 789
<212> PRT
<213> 苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)
<400> 4
Met Asn Lys Asn Asn Thr Lys Leu Ser Thr Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asp Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Asp Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu Arg Val Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Lys
130 135 140
Gln Leu Gln Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Thr
180 185 190
Ser Ser Lys Val Lys Lys Asp Gly Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Thr Glu Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val
210 215 220
Asp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly
225 230 235 240
Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile
245 250 255
Thr Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr
260 265 270
Asn Phe Leu Ile Val Leu Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr
275 280 285
Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr
290 295 300
Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val
305 310 315 320
Asn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala
325 330 335
Lys Val Lys Gly Ser Asp Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys
340 345 350
Pro Gly His Ala Leu Ile Gly Phe Glu Ile Ser Asn Asp Ser Ile Thr
355 360 365
Val Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp
370 375 380
Lys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Gly Asp Met Asp Lys Leu Leu
385 390 395 400
Cys Pro Asp Gln Ser Glu Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe
405 410 415
Pro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys
420 425 430
Thr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ala Asn Phe Tyr Asp Ser Ser Thr Gly
435 440 445
Glu Ile Asp Leu Asn Lys Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr
450 455 460
Arg Thr Leu Ser Ala Asn Asp Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val
465 470 475 480
Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala
485 490 495
Asp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg
500 505 510
Glu Leu Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile
515 520 525
Val Pro Pro Ser Gly Phe Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Gly Ser Ile
530 535 540
Glu Glu Asp Asn Leu Glu Pro Trp Lys Ala Asn Asn Lys Asn Ala Tyr
545 550 555 560
Val Asp His Thr Gly Gly Val Asn Gly Thr Lys Ala Leu Tyr Val His
565 570 575
Lys Asp Gly Gly Ile Ser Gln Phe Ile Gly Asp Lys Leu Lys Pro Lys
580 585 590
Thr Glu Tyr Val Ile Gln Tyr Thr Val Lys Gly Lys Pro Ser Ile His
595 600 605
Leu Lys Asp Glu Asn Thr Gly Tyr Ile His Tyr Glu Asp Thr Asn Asn
610 615 620
Asn Leu Glu Asp Tyr Gln Thr Ile Asn Lys Arg Phe Thr Thr Gly Thr
625 630 635 640
Asp Leu Lys Gly Val Tyr Leu Ile Leu Lys Ser Gln Asn Gly Asp Glu
645 650 655
Ala Trp Gly Asp Asn Phe Ile Ile Leu Glu Ile Ser Pro Ser Glu Lys
660 665 670
Leu Leu Ser Pro Glu Leu Ile Asn Thr Asn Asn Trp Thr Ser Thr Gly
675 680 685
Ser Thr Asn Ile Ser Gly Asn Thr Leu Thr Leu Tyr Gln Gly Gly Arg
690 695 700
Gly Ile Leu Lys Gln Asn Leu Gln Leu Asp Ser Phe Ser Thr Tyr Arg
705 710 715 720
Val Tyr Phe Ser Val Ser Gly Asp Ala Asn Val Arg Ile Arg Asn Ser
725 730 735
Arg Glu Val Leu Phe Glu Lys Arg Tyr Met Ser Gly Ala Lys Asp Val
740 745 750
Ser Glu Met Phe Thr Thr Lys Phe Glu Lys Asp Asn Phe Tyr Ile Glu
755 760 765
Leu Ser Gln Gly Asn Asn Leu Tyr Gly Gly Pro Ile Val His Phe Tyr
770 775 780
Asp Val Ser Ile Lys
785
<210> 5
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 5
attgtagaga acgggaacat agaagagg 28
<210> 6
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 6
ttcccgttct ctacaatatt gctaataaa 29
<210> 7
<211> 789
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 7
Met Asn Lys Asn Asn Thr Lys Leu Ser Thr Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asp Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Asp Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu Arg Val Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Lys
130 135 140
Gln Leu Gln Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Thr
180 185 190
Ser Ser Lys Val Lys Lys Asp Gly Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Thr Glu Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val
210 215 220
Asp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly
225 230 235 240
Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile
245 250 255
Thr Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr
260 265 270
Asn Phe Leu Ile Val Leu Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr
275 280 285
Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr
290 295 300
Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val
305 310 315 320
Asn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala
325 330 335
Lys Val Lys Gly Ser Asp Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys
340 345 350
Pro Gly His Ala Leu Ile Gly Phe Glu Ile Ser Asn Asp Ser Ile Thr
355 360 365
Val Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp
370 375 380
Lys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Gly Asp Met Asp Lys Leu Leu
385 390 395 400
Cys Pro Asp Gln Ser Glu Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe
405 410 415
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420 425 430
Thr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ala Asn Phe Tyr Asp Ser Ser Thr Gly
435 440 445
Glu Ile Asp Leu Asn Lys Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr
450 455 460
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465 470 475 480
Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala
485 490 495
Asp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg
500 505 510
Glu Leu Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile
515 520 525
Val Pro Pro Ser Gly Phe Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Gly Asn Ile
530 535 540
Glu Glu Asp Asn Leu Glu Pro Trp Lys Ala Asn Asn Lys Asn Ala Tyr
545 550 555 560
Val Asp His Thr Gly Gly Val Asn Gly Thr Lys Ala Leu Tyr Val His
565 570 575
Lys Asp Gly Gly Ile Ser Gln Phe Ile Gly Asp Lys Leu Lys Pro Lys
580 585 590
Thr Glu Tyr Val Ile Gln Tyr Thr Val Lys Gly Lys Pro Ser Ile His
595 600 605
Leu Lys Asp Glu Asn Thr Gly Tyr Ile His Tyr Glu Asp Thr Asn Asn
610 615 620
Asn Leu Glu Asp Tyr Gln Thr Ile Asn Lys Arg Phe Thr Thr Gly Thr
625 630 635 640
Asp Leu Lys Gly Val Tyr Leu Ile Leu Lys Ser Gln Asn Gly Asp Glu
645 650 655
Ala Trp Gly Asp Asn Phe Ile Ile Leu Glu Ile Ser Pro Ser Glu Lys
660 665 670
Leu Leu Ser Pro Glu Leu Ile Asn Thr Asn Asn Trp Thr Ser Thr Gly
675 680 685
Ser Thr Asn Ile Ser Gly Asn Thr Leu Thr Leu Tyr Gln Gly Gly Arg
690 695 700
Gly Ile Leu Lys Gln Asn Leu Gln Leu Asp Ser Phe Ser Thr Tyr Arg
705 710 715 720
Val Tyr Phe Ser Val Ser Gly Asp Ala Asn Val Arg Ile Arg Asn Ser
725 730 735
Arg Glu Val Leu Phe Glu Lys Arg Tyr Met Ser Gly Ala Lys Asp Val
740 745 750
Ser Glu Met Phe Thr Thr Lys Phe Glu Lys Asp Asn Phe Tyr Ile Glu
755 760 765
Leu Ser Gln Gly Asn Asn Leu Tyr Gly Gly Pro Ile Val His Phe Tyr
770 775 780
Asp Val Ser Ile Lys
785
Claims (5)
1.一种蛋白在防治草地贪夜蛾和/或斜纹夜蛾中的应用，其中，所示蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。
2.含有如权利要求1所述的应用中的所述蛋白的组合物在防治草地贪夜蛾和/或斜纹夜蛾中的应用。
3.含有如权利要求1所述的应用中的所述蛋白的微生物在防治草地贪夜蛾和/或斜纹夜蛾中的应用，其中所述微生物为大肠杆菌和/或苏云金芽胞杆菌。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述微生物中含有编码所述蛋白的基因。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
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