CN110615854A - 一种机械化学辅助提取木芙蓉花活性组分的方法 - Google Patents

一种机械化学辅助提取木芙蓉花活性组分的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种机械化学辅助提取木芙蓉花活性组分的方法，该方法包括如下步骤：木芙蓉花用行星式球磨机进行磨粉，将原料与球磨助剂混合球磨；加入水充分混合搅拌均匀，经过蛋白酶酶解得到木芙蓉多糖粗提物；将配制Sevage试剂与木芙蓉多糖粗提物混合振摇，所得提取液旋蒸除去溶剂中的醇，加水定容，通过大孔树脂分离，再通过DEAE‑52离子色谱及SephasexG‑100凝胶色谱进行纯化分离，得到木芙蓉花多糖。

Description

一种机械化学辅助提取木芙蓉花活性组分的方法
技术领域
本发明涉及木芙蓉花多糖制备领域，特别涉及一种机械化学辅助提取木芙蓉花活性组分的提取制备方法。
背景技术
木芙蓉(Hibiscus mutabilis L.)为锦葵科木槿属植物，其味微辛，性平，归肺、肝经，具清热解毒、消肿排脓与凉血止血之功效。木芙蓉的花、叶、根两者或三者并用有增强疗效的作用。木芙蓉的化学成分主要包括黄酮、多糖、有机酸、挥发性成分，以及豆甾、蒽醌、香豆素、三萜和木质素。机械化学辅助提取技术是将机械力和化学反应相结合后应用到天然药物活性成分提取的一门新技术，机械化学辅助提取技术是将机械力和化学反应相结合后应用到天然药物活性成分提取的一门新技术，机械化学辅助提取在异秦皮啶、硫酸软骨素、芦丁、黄酮等的提取中都得到了广泛的应用。罐内的球体由于其惯性作用对位于光滑的碾磨罐内额壁上的样品进行带有高能量的撞击，并以此粉碎样品。碾磨罐的转动加上碾磨球的运动对样品产生了高强度的混合作用。通过使用多个小球甚至可以进一步的提高混合的效果。球与球之间的摩擦撞击作用可以有效导致细胞的破碎。
发明内容
本发明公开了一种机械化学辅助提取木芙蓉花多糖成分制备方法。采用本工艺将机械化学用于辅助木芙蓉花有效组分提取，大大缩短了生产步骤；并且显著性提高产品提取率，工艺简单、操作方便、易于实现工业化生产。
本发明采用的技术方案是：
一种机械化学辅助提取木芙蓉花活性组分的方法，该方法包括如下步骤：木芙蓉花用行星式球磨机进行磨粉，将原料与球磨助剂混合球磨；加入水充分混合搅拌均匀，经过蛋白酶酶解得到木芙蓉多糖粗提物；所述的蛋白酶为纤维素酶/木瓜蛋白酶、纤维素酶/果胶酶、木瓜蛋白酶/果胶酶、纤维素酶/木瓜蛋白酶/果胶酶等复合酶体系，优选为纤维素酶/木瓜蛋白酶、纤维素酶/果胶酶等复合酶体系；
将配制Sevage试剂与木芙蓉多糖粗提物混合振摇，所得提取液旋蒸除去溶剂中的醇，加水定容，通过大孔树脂分离，再通过DEAE-52离子色谱及SephasexG-100凝胶色谱进行纯化分离，得到木芙蓉花多糖；
所述的大孔树脂为ADS-17、XAD16、XAD 4、XAD1600N、HP 21、SP207、SP700ADS-7、HP2MGL中的一种或两种以上的混合。
在本发明一些实施例中，所述的助磨剂为NaOH、Na2CO3、NaCl或NaHCO3；优选为NaOH。
在本发明一些实施例中，所述的球磨提取的转速为100-500rpm，优选为300-400rpm。
在本发明一些实施例中，所述的球磨时间为10-60min，优选为30-40min。
在本发明一些实施例中，所述的木芙蓉花用量与助磨剂用量的比例为20:1-1:1，优选为10:1-4:1。
在本发明一些实施例中，所述的料液比(g/mL)为1:5-1:50，优选为1:20-1:40。
在本发明一些实施例中，所述的酶解温度为20-50℃，优选为30-40℃；所述的酶解时间为10-60min，优选为20-40min。
在本发明一些实施例中，所述的上样量为5-60BV，优选为10-40BV。
在本发明一些实施例中，所述的大孔树脂为XAD 4、XAD 1600N、ADS-7、HP2MGL一种或两种以上的混合。
在本发明一些实施例中，将含水率不大于12％的木芙蓉花药材用行星式球磨机进行磨粉，以NaOH、Na2CO3、NaCl、NaHCO3等有助于细胞破壁及胞内物质流出的盐类或碱性化合物为助磨剂，以20:1-1:1的比例将原料与球磨助剂混合，在100-500rpm的转速下球磨10-60min，以1:5-1:50的料液比加水充分混合搅拌均匀，采用纤维素酶/木瓜蛋白酶、纤维素酶/果胶酶、木瓜蛋白酶/果胶酶、纤维素酶/木瓜蛋白酶/果胶酶等复合酶体系，加酶量1.0％，在20-50℃温度下进行酶解10-60min，得到木芙蓉多糖粗提物；配制Sevage试剂(氯仿：正丁醇1:4)与多糖溶液混合反复振摇，重复5次脱去其中的蛋白质，所得提取液旋蒸除去溶剂中的醇，加水定容至一定体积，以5-60BV为上样量加入木芙蓉粗提物水溶液，通过ADS-17、XAD16、XAD 4、XAD1600N、HP 21、SP207、SP700ADS-7、HP2MGL等一种或多种的混合大孔树脂分离，再通过DEAE-52离子色谱及SephasexG-100凝胶色谱进行纯化，平衡液和洗脱液均为蒸馏水，收集洗脱峰，合并组分，真空浓缩，冷冻干燥，得到较高纯度的木芙蓉花多糖。
在本发明一些实施例中，，推荐本发明所述方法更优选按照以下步骤进行：将含水率不大于12％的木芙蓉花药材用行星式球磨机进行磨粉，以NaOH等盐类或碱性化合物为助磨剂，以10:1-4:1的比例将原料与球磨助剂混合，在300-400rpm的转速下球磨30-40min，以1:20-1:40的料液比加水充分混合搅拌均匀，采用纤维素酶/木瓜蛋白酶、纤维素酶/果胶酶等复合酶体系，加酶量1.0％，在30-40℃温度下进行酶解20-40min，得到木芙蓉多糖粗提物；Sevage法脱去其中的蛋白质，配制Sevage试剂(氯仿：正丁醇1:4)与多糖溶液混合反复振摇，重复5次。所得提取液旋蒸除去溶剂中的醇，加水定容至一定体积，以10-40BV为上样量加入木芙蓉粗提物水溶液，通过XAD 4、XAD 1600N、ADS-7、HP2MGL等一种或多种的混合大孔树脂分离，再通过适当的DEAE-52离子色谱及SephasexG-100凝胶色谱进行纯化分离，平衡液和洗脱液均为蒸馏水，收集洗脱峰，合并组分，真空浓缩，冷冻干燥，得到较高纯度的木芙蓉花多糖。
在本发明一些具体实施例中，所述方法按照如下步骤进行：将木芙蓉花用行星式球磨机进行磨粉，将原料与适量球磨助剂NaOH混合，加入水充分混合搅拌均匀，采用纤维素酶/木瓜蛋白酶或纤维素酶/果胶酶或木瓜蛋白酶/果胶酶或纤维素酶/木瓜蛋白酶/果胶酶复合酶体系在30-40℃下进行酶解20-40min，得到木芙蓉多糖粗提物；
配制Sevage试剂(氯仿：正丁醇体积＝1:4(V/V))，将Sevage试剂与木芙蓉多糖粗提物(V/V＝1：3)混合振摇，振摇20min，静置15min直至完全分层，离心倾倒除去蛋白层，反复重复5次直至溶液完全澄清；所得提取液旋蒸除去溶剂中的醇，加水定容至一定体积，加入适当上样量的木芙蓉粗提物，大孔树脂分离，再通过DEAE-52离子色谱及SephasexG-100凝胶色谱进行纯化分离，得到木芙蓉花多糖，所述的大孔树脂为XAD 4、XAD 1600N、ADS-7、HP2MGL中的一种或多种的混合。
与现有技术相比，本发明的有益效果体现在：
(1)本发明将机械化学应用到木芙蓉花有效组分的细胞破壁和细胞多糖的提取，大大缩短了生产周期；(2)本发明生产周期短，减少了有效组分的降解，并且大孔树脂法回收样品量多，与其他柱子比起来，残留吸附的少，样品损失少，最大限度保留其中的活性多糖；(3)本发明对木芙蓉花有效组分进行了单一酶或复合酶的酶解纯化，提高了木芙蓉花有效组分的稳定性，延长了半衰期。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明方案进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此。
以下实施例中木芙蓉花有效组分稳定性测定方法为：
稳定性考察的实验环境：湿度50％、温度为35℃。
木芙蓉花提取物气相的色谱条件：采用Waters-GC/TOF型高分辨气质联用仪；气相色谱条件：色谱柱：PE-35MS(30m×0.32mm×0.25um)；进样口温度：250℃；载气：高纯氦气，流速1.5mL/min；分流比20:1；程序升温：初始温度50℃，维持10min，然后以10℃/min升至250℃，维持10min。
质谱条件：接口温度：220℃；离子源温度：220℃；电离方式：EI+；电子能量70eV；扫描范围：40-400amu。
顶空进样分析条件：样品加热温度：120℃；进样针温度：100℃；进样速度：50uL/s；进样量：2000uL。
食用木芙蓉花多糖测定：根据色谱条件分析对木芙蓉花进行分析测定。
木芙蓉花挥发性化学成分定量分析：用Nist2018标准质谱检索库检索鉴定木芙蓉花主要挥发性化学成分，峰面积归一化确定各成分的相对含量。
半衰期的计算方法：在第0、15、30、45、60、75、125、250、500天取样，参照木芙蓉花香气成分苯乙醇类、醛类的含量检测与计算方法，得到木芙蓉花香气成分苯乙醇类、醛类的含量，然后建立线性关系曲线，通过关系曲线计算，当木芙蓉花香气成分苯乙醇类、醛类的含量下降到原总量50％时所用的天数。
对照试验
取10g含水率9％的干燥木芙蓉花药材用行星式球磨机磨粉后，热水提取法所得木芙蓉花水提取液经过冷冻干燥制备得木芙蓉花活性组分4.71g，苯乙醇类、醛类得率分别为19.1％和17.9％，木芙蓉花香气成分苯乙醇类、醛类的半衰期分别为56天和180天。
实施例1
将10g含水率不大于12％的木芙蓉花药材用行星式球磨机进行磨粉，以NaOH为助磨剂，加入1g与原料混合，在300rpm的转速下球磨30min，以1:20(g/mL)的料液比加水充分混合搅拌均匀，采用纤维素酶/木瓜蛋白酶复合酶(质量比为1：1)体系，加酶量1.0％，在30℃温度下进行酶解20min，得到木芙蓉多糖粗提物；
Sevage法脱去其中的蛋白质，配制Sevage试剂(氯仿：正丁醇的体积比为1:4)与木芙蓉多糖粗提物混合反复振摇，Sevage试剂与木芙蓉多糖粗提物的体积比为1:3，重复5次，所得提取液旋蒸除去溶剂中的醇，加水定容至100mL，以10BV(BV为串联大孔树脂I的柱体积)为上样量加入木芙蓉粗提物水溶液，通过XAD 4大孔树脂纯化，多糖溶液再通过DEAE-52离子色谱及SephasexG-100凝胶色谱进行纯化分离，平衡液和洗脱液均为蒸馏水，收集洗脱峰，合并组分，真空浓缩，冷冻干燥，得到较高纯度的木芙蓉花多糖；木芙蓉花香气成分苯乙醇类、醛类得率分别为26.7％和23.3％，且其半衰期分别为566和522天；可以获知，实施例1的木芙蓉花香气成分苯乙醇类、醛类得率是对照试验的1.4和1.3倍；而半衰期分别是对照试验的10.1和2.9倍。
实施例2
将10g含水率不大于12％的木芙蓉花药材用行星式球磨机进行磨粉，以NaOH为助磨剂，加入1g与原料混合，在350rpm的转速下球磨35min，以1:20(g/mL)的料液比加水充分混合搅拌均匀，采用纤维素酶/木瓜蛋白酶复合酶(质量比为1：1)体系，加酶量1.0％，在30℃温度下进行酶解30min，得到木芙蓉多糖粗提物；
Sevage法脱去其中的蛋白质，配制Sevage试剂(氯仿：正丁醇的体积比为1:4)与木芙蓉多糖粗提物混合反复振摇，Sevage试剂与木芙蓉多糖粗提物的体积比为1:3，重复5次，所得提取液旋蒸除去溶剂中的醇，加水定容至100mL，以20BV为上样量加入木芙蓉粗提物水溶液，通过XAD 1600N大孔树脂纯化得到初步纯化的多糖，再通过DEAE-52离子色谱及SephasexG-100凝胶色谱进行纯化，平衡液和洗脱液均为蒸馏水，收集洗脱峰，合并组分，真空浓缩，冷冻干燥，得到较高纯度的木芙蓉花多糖；该实验与对照试验相比较，实施例2的木芙蓉花香气成分苯乙醇类、醛类的得率分别为24.8％和21.5％，半衰期分别为571和396天；可以获知，实施例2的木芙蓉花香气成分苯乙醇类、醛类得率是是对照试验的1.3和1.2倍，而半衰期是对照试验的10.6和2.2倍。
实施例3
将10g含水率不大于12％的木芙蓉花药材用行星式球磨机进行磨粉，以NaOH为助磨剂，加入1.5g与原料混合，在300rpm的转速下球磨40min，以1:40(g/mL)的料液比加水充分混合搅拌均匀，采用纤维素酶/木瓜蛋白酶复合酶(质量比为1：1)体系，加酶量1.0％，在30℃温度下进行酶解30min，得到木芙蓉多糖粗提物；
Sevage法脱去其中的蛋白质，配制Sevage试剂(氯仿：正丁醇的体积比为1:4)与木芙蓉多糖粗提物混合反复振摇，Sevage试剂与木芙蓉多糖粗提物的体积比为1:3，重复5次，所得提取液旋蒸除去溶剂中的醇，加水定容至100mL，以20BV为上样量加入木芙蓉粗提物水溶液，通过ADS-7大孔树脂分离，多糖溶液再通过DEAE-52离子色谱及SephasexG-100凝胶色谱进行纯化，平衡液和洗脱液均为蒸馏水，收集洗脱峰，合并组分，真空浓缩，冷冻干燥，得到较高纯度的木芙蓉花多糖。实施例3的木芙蓉花香气成分苯乙醇类、醛类的得率分别为24.8％和21.5％，半衰期分别为571和378天；可以获知，实施例2的木芙蓉花香气成分苯乙醇类、醛类得率是是对照试验的1.3和1.2倍，而半衰期是对照试验的10.6和2.1倍。
实施例4
将10g含水率不大于12％的木芙蓉花药材用行星式球磨机进行磨粉，以NaOH为助磨剂，加入1.5g与原料混合，在350rpm的转速下球磨35min，以1:20(g/mL)的料液比加水充分混合搅拌均匀，采用纤维素酶/木瓜蛋白酶复合酶(质量比为1：1)体系，加酶量1.0％，在40℃温度下进行酶解40min，得到木芙蓉多糖粗提物；
Sevage法脱去其中的蛋白质，配制Sevage试剂(氯仿：正丁醇的体积比为1:4)与木芙蓉多糖粗提物混合反复振摇，Sevage试剂与木芙蓉多糖粗提物的体积比为1:3，重复5次，所得提取液旋蒸除去溶剂中的醇，加水定容至100mL，以20BV为上样量加入木芙蓉粗提物水溶液，通过XAD 4大孔树脂纯化，多糖溶液再通过DEAE-52离子色谱及SephasexG-100凝胶色谱进行纯化，平衡液和洗脱液均为蒸馏水，收集洗脱峰，合并组分，真空浓缩，冷冻干燥，得到较高纯度的木芙蓉花多糖。该实验与对照试验相比较，实施例4的木芙蓉花香气成分苯乙醇类、醛类分别为21.0％和17.9％，且其半衰期分别为526和450天，可以获知，实施例4的木芙蓉花香气成分苯乙醇类、醛类得率是对照试验的1.1和1.0倍，而半衰期分别是对照试验的9.4和2.5倍。
实施例5
将10g含水率不大于12％的木芙蓉花药材用行星式球磨机进行磨粉，以NaOH为助磨剂，加入2g与原料混合，在400rpm的转速下球磨30min，以1:30(g/mL)的料液比加水充分混合搅拌均匀，采用纤维素酶/果胶酶复合酶体系(质量比为1：1)，加酶量1.0％，在35℃温度下进行酶解30min，得到木芙蓉多糖粗提物；
Sevage法脱去其中的蛋白质，配制Sevage试剂(氯仿：正丁醇的体积比为1:4)与木芙蓉多糖粗提物混合反复振摇，Sevage试剂与木芙蓉多糖粗提物的体积比为1:3，重复5次，所得提取液旋蒸除去溶剂中的醇，加水定容至100mL，以40BV为上样量加入木芙蓉粗提物水溶液，通过HP2MGL大孔树脂纯化，多糖溶液再通过DEAE-52离子色谱及SephasexG-100凝胶色谱进行纯化分离，平衡液和洗脱液均为蒸馏水，收集洗脱峰，合并组分，真空浓缩，冷冻干燥，得到较高纯度的木芙蓉花多糖。该实验与对照试验相比较，实施例5的玫木芙蓉花香气成分苯乙醇类、醛类得率分别为28.7％和19.7％，且其半衰期分别为554和486天，，实施例5的玫木芙蓉花香气成分苯乙醇类、醛类得率分别是对照试验的1.5和1.1倍，而其半衰期分别是对照试验的9.9和2.7倍。
实施例6
将10g含水率不大于12％的木芙蓉花药材用行星式球磨机进行磨粉，以NaOH为助磨剂，加入2g与原料混合，在400rpm的转速下球磨30min，以1:20(g/mL)的料液比加水充分混合搅拌均匀，采用纤维素酶/木瓜蛋白酶、纤维素酶/果胶酶复合酶(纤维素酶、木瓜蛋白酶、纤维素酶、果胶酶的质量比为1:1:1:1)体系，加酶量1.0％，在40℃温度下进行酶解20min，得到木芙蓉多糖粗提物；
Sevage法脱去其中的蛋白质，配制Sevage试剂(氯仿：正丁醇的体积比为1:4)与木芙蓉多糖粗提物混合反复振摇，Sevage试剂与木芙蓉多糖粗提物的体积比为1:3，重复5次，所得提取液旋蒸除去溶剂中的醇，加水定容至100mL，以40BV为上样量加入木芙蓉粗提物水溶液，通过XAD 4大孔树脂纯化，多糖溶液再通过DEAE-52离子色谱及SephasexG-100凝胶色谱进行纯化分离，平衡液和洗脱液均为蒸馏水，收集洗脱峰，合并组分，真空浓缩，冷冻干燥，得到较高纯度的木芙蓉花多糖；实施例6的木芙蓉花香气成分苯乙醇类、醛类得率分别为28.7％和19.7％，而其半衰期分别为566和486天，实施例6的木芙蓉花香气成分苯乙醇类、醛类得率分别为是对照试验的1.5和1.2倍，，而其半衰期分别是对照试验的10.1和2.7倍。
实施例7
将10g含水率不大于12％的木芙蓉花药材用行星式球磨机进行磨粉，以NaOH为助磨剂，加入2.5g与原料混合，在300rpm的转速下球磨40min，以1:30(g/mL)的料液比加水充分混合搅拌均匀，采用纤维素酶/果胶酶复合酶体系(纤维素酶/果胶酶质量比为1：1)，加酶量1.0％，在30℃温度下进行酶解40min，得到木芙蓉多糖粗提物；
Sevage法脱去其中的蛋白质，配制Sevage试剂(氯仿：正丁醇的体积比为1:4)与木芙蓉多糖粗提物混合反复振摇，Sevage试剂与木芙蓉多糖粗提物的体积比为1:3，重复5次，所得提取液旋蒸除去溶剂中的醇，加水定容至100mL，以30BV为上样量加入木芙蓉粗提物水溶液，通过HP2MGL大孔树脂纯化，多糖溶液再通过DEAE-52离子色谱及SephasexG-100凝胶色谱进行纯化分离，平衡液和洗脱液均为蒸馏水，收集洗脱峰，合并组分，真空浓缩，冷冻干燥，得到较高纯度的木芙蓉花多糖。该实验与对照试验相比较，实施例五的木芙蓉花香气成分苯乙醇类、醛类得率分别为28.7％和19.7％，是对照试验的1.5和1.2倍，半衰期分别为571和504天，是对照试验的10.2和2.8倍。
实施例8
将10g含水率不大于12％的木芙蓉花药材用行星式球磨机进行磨粉，以NaOH为助磨剂，加入2.5g与原料混合，在350rpm的转速下球磨40min，以1:20(g/mL)的料液比加水充分混合搅拌均匀，采用纤维素酶/果胶酶复合酶体系(纤维素酶/果胶酶质量比为1：1)，加酶量1.0％，在40℃温度下进行酶解30min，得到木芙蓉多糖粗提物；
Sevage法脱去其中的蛋白质，配制Sevage试剂(氯仿：正丁醇的体积比为1:4)与木芙蓉多糖粗提物混合反复振摇，Sevage试剂与木芙蓉多糖粗提物的体积比为1:3，重复5次，所得提取液旋蒸除去溶剂中的醇，加水定容至100mL，以30BV为上样量加入木芙蓉粗提物水溶液，通过XAD 1600N大孔树脂纯化，多糖溶液再通过适当的DEAE-52离子色谱及SephasexG-100凝胶色谱进行纯化分离平衡液和洗脱液均为蒸馏水，收集洗脱峰，合并组分，真空浓缩，冷冻干燥，得到较高纯度的木芙蓉花多糖。实施例8的木芙蓉花香气成分苯乙醇类、醛类得率分别为28.7％和23.3％，且其半衰期分别为560和468天，实施例8的木芙蓉花香气成分苯乙醇类、醛类得率分别是对照试验的1.5和1.3倍，而其半衰期分别是对照试验的10.0和2.6倍。

Claims (10)

1.一种机械化学辅助提取木芙蓉花活性组分的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：木芙蓉花用行星式球磨机进行磨粉，将原料与球磨助剂混合球磨；加入水充分混合搅拌均匀，经过蛋白酶酶解得到木芙蓉多糖粗提物；所述的蛋白酶为纤维素酶/木瓜蛋白酶、纤维素酶/果胶酶、木瓜蛋白酶/果胶酶、纤维素酶/木瓜蛋白酶/果胶酶等复合酶体系，优选为纤维素酶/木瓜蛋白酶、纤维素酶/果胶酶等复合酶体系；
将配制Sevage试剂与木芙蓉多糖粗提物混合振摇，所得提取液旋蒸除去溶剂中的醇，加水定容，通过大孔树脂分离，再通过DEAE-52离子色谱及SephasexG-100凝胶色谱进行纯化分离，得到木芙蓉花多糖；
所述的大孔树脂为ADS-17、XAD16、XAD4、XAD1600N、HP21、SP207、SP700ADS-7、HP2MGL中的一种或两种以上的混合。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的助磨剂为NaOH、Na2CO3、NaCl或NaHCO3；优选为NaOH。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的球磨提取的转速为100-500rpm，优选为300-400rpm。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的球磨时间为10-60min，优选为30-40min。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的木芙蓉花用量与助磨剂用量的比例为20:1-1:1，优选为10:1-4:1。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的料液比(g/mL)为1:5-1:50，优选为1:20-1:40。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的酶解温度为20-50℃，优选为30-40℃；所述的酶解时间为10-60min，优选为20-40min。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的上样量为5-60BV，优选为10-40BV。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的大孔树脂为XAD 4、XAD 1600N、ADS-7、HP2MGL一种或两种以上的混合。
10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法按照如下步骤进行：将木芙蓉花用行星式球磨机进行磨粉，将原料与适量球磨助剂NaOH混合，加入水充分混合搅拌均匀，采用纤维素酶/木瓜蛋白酶或纤维素酶/果胶酶或木瓜蛋白酶/果胶酶或纤维素酶/木瓜蛋白酶/果胶酶复合酶体系在30-40℃下进行酶解20-40min，得到木芙蓉多糖粗提物；
配制Sevage试剂(氯仿：正丁醇体积＝1:4(V/V))，将Sevage试剂与木芙蓉多糖粗提物(V/V＝1：3)混合振摇，振摇20min，静置15min直至完全分层，离心倾倒除去蛋白层，反复重复5次直至溶液完全澄清；所得提取液旋蒸除去溶剂中的醇，加水定容至一定体积，加入适当上样量的木芙蓉粗提物，大孔树脂分离，再通过DEAE-52离子色谱及SephasexG-100凝胶色谱进行纯化分离，得到木芙蓉花多糖，所述的大孔树脂为XAD 4、XAD 1600N、ADS-7、HP2MGL中的一种或多种的混合。
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