CN110604741A - 抑制皮肤细胞增生的组合物及其应用 - Google Patents

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Abstract

一种抑制皮肤细胞增生的组合物及其应用，本发明涉及用于抑制皮肤细胞增生的组合物，包含硫化硒(Selenium sulfide)和吡罗克酮乙醇胺(piroctone olamine)之组合，及其可用于制备抑制皮肤细胞增生但不会产生明显毒性的洗发精、护发组合物、外用制剂或外用医疗制剂之应用。

Description

抑制皮肤细胞增生的组合物及其应用
技术领域
本发明涉及用于一种抑制皮肤细胞增生的组合物及其应用。
背景技术
市售标榜抗头皮屑的洗发产品中，用以抗头皮屑的成分不外乎下列四种功能1)减少皮屑芽孢菌、2)细胞稳定剂、3)角质溶解剂及4)抗发炎抗痒成份。如果就医学角度来区分，主要有下列成分：
1.吡硫鎓锌(Zinc Pyrithione)，是它能杀死皮屑芽孢菌并去除老化角质细胞，抑制头皮屑产生。
2.硫化硒(Selenium Sulfide)，是一种抗霉菌剂，用来对付皮屑芽孢菌的孳生。它的作用机转来自抑制细胞分裂的优势，以控制皮屑芽孢菌的生长，达到去除头皮屑的效果。但洗后常有头发油腻的感觉、甚至染剂褪色等现象。
3.克多可那挫(ketoconazole)，也是一种抗霉菌剂，它的作用机转是藉由破坏霉菌细胞壁的形成，达到抑制皮屑芽孢菌的生长，解决头皮屑的问题。但因毒性较强，孕妇及幼童不建议使用。
4.焦油类(Tar)，为用于干癣、脂漏性皮肤炎或湿疹病患的药用洗发液，可去角质、杀菌、止痒、抗过度有丝分裂等作用。缺点是味道不佳。
5.吡罗克酮乙醇胺(piroctone olamine)，也是一种抗霉菌剂，但价格高且不溶于油或水,需用醇类溶解。用于洗剂时候有添加量之限制。
以上成分往往有毒性，或对皮肤造成敏感，或有气味不佳的问题。仍然期望找到较佳之抗头皮屑配方，克服以上问题。对于并非因霉菌引起的头皮屑问题，使用上述成分做成之洗发精往往无法解决头皮屑问题。
发明内容
本发明为解决习知抗头皮屑洗发精之问题，意外发现两种抗霉菌剂之特殊组合，可提供抑制皮肤细胞增生之相乘功效但不会产生明显毒性，可用于制成治疗或预防皮肤增生性疾病之制剂或外用医疗制剂。
一方面，本发明提供一种抑制皮肤细胞增生的组合物，包含0.35mM～350mM硫化硒(Selenium sulfide)和0.035mM～175mM吡罗克酮乙醇胺(piroctone olamine)的组合，提供抑制皮肤细胞增生的相乘功效但不会产生明显毒性。
根据本发明的实施例，本发明抑制皮肤细胞增生的组合物包含0.35mM～210mM硫化硒和0.035mM～105mM吡罗克酮乙醇胺；较佳为0.35mM～70mM硫化硒和0.035mM～10mM吡罗克酮乙醇胺。
根据本发明的一特定实施例，本发明抑制皮肤细胞增生的组合物包含0.35-50mM硫化硒和0.035～5mM吡罗克酮乙醇胺。
根据本发明，本发明组合物可为洗发精、护发组合物、外用制剂或外用医疗制剂型式。
另一方面，本发明提供本发明组合物用于制备治疗或预防皮肤增生性疾病之外用制剂或一外用医疗制剂之应用。其中，本發明组合物提供抑制皮肤细胞增生的相乘功效但不具显著毒性。
根据本发明的实施例，该制剂为一洗发精组合物、护发组合物或一外用制剂。
根据本发明的实施例，该皮肤增生性疾病可选自由牛皮癣(psoriasis)、湿疹(eczema)或异位性皮肤炎(atopic dermatitis)、鱼鳞癣(ichthyosis)、及癌症(cancer)组成之群组。
根据本发明，本发明制剂可为洗发精、护发组合物型式。特别适用于解决并非因霉菌感染引起之头皮屑问题。
附图说明
前文所述以及实施方式可通过附图达到更好的说明效果。为了加强本发明之说明，将适当的实施例之图式列举于此。
图1是单独以35mM硫化硒(SeS2)处理皮肤角质细胞之结果。
图2是单独以3mM吡罗克酮乙醇胺(PO)处理皮肤角质细胞之结果。
图3是以本发明RTS成分配方，即硫化硒(SeS2)和吡罗克酮乙醇胺(PO)合并处理皮肤角质细胞,观察是否有细胞毒性之结果。
图4是以本发明RTS成分配方，即硫化硒(SeS2)和吡罗克酮乙醇胺(PO)合并处理皮肤角质细胞,观察抑制抑制细胞生长功效之结果。
图5是以本发明RTS成分配方与硫化硒(SeS2)、吡罗克酮乙醇胺(PO)单独处理,并与以酒精(Ethanol)处理为对照组，以克多可那挫(ketoconazole)处理作为正对照组比较，观察抑制抑制细胞生长功效之结果，显示所有含药处理组相对于酒精处理之对照组均具显著差异(*p<0.05)。
具体实施方式
本发明说明中之用词通常具有在本技术领域中、在本发明内容中、及各用语所在之特定内容中的原始意义。
本文所使用的「一」乙词，如未特别指明，系指至少一个(一个或一个以上)之数量。
硫化硒(Selenium sulfide)和吡罗克酮乙醇胺(piroctone olamine)均为一抗霉菌剂，有细胞毒性。单独使用时，会有引起不适、气味不佳及无法解决并非因霉菌引起的头皮屑问题。
根据本发明，意外地发现硫化硒(Selenium sulfide)和吡罗克酮乙醇胺(piroctone olamine)的特定组合可提供抑制皮肤细胞增生的相乘功效但不会产生明显毒性，尤其在解决并非因霉菌引起的头皮屑问题。
本发明以硫化硒和吡罗克酮乙醇胺在单独或混合使用时对人类皮肤细胞生长作用进行评估，以临床使用药物克多可那挫(ketoconazole)作正对照组。本发明意外发现0.35mM～350mM硫化硒(Selenium sulfide)和0.035mM～175mM吡罗克酮乙醇胺(piroctoneolamine)的组合，可提供抑制皮肤细胞增生的相乘功效但不会产生明显毒性。
本发明以下列说明及实施例说明本发明功效。
实施例
材料与方法
(一)细胞株及细胞培养
本研究将以人类皮肤角质细胞(human keratinocytes,HaCaT cells)为主要研究对象，购自ATCC(American Type Culture Collection,USA)。
将人类皮肤角质细胞株HaCaT细胞培养于37℃的潮湿培养箱中，在空气为5％二氧化碳及95％氧气的环境下，放置在Dulbecco氏修饰Eagle培养基(DMEM)中，并添加10％胎牛血清、100IU/mL盘尼西林、100μg/mL链霉素、2mM丙酮酸钠和1％非必须胺基酸(NEAA)。该培养基每两天更换一次。进行继代培养时，在以0.1％胰蛋白酶(Trypsin)-EDTA混合液作用后，收集细胞并以1:10的比例稀释重新培养。使用于研究中的细胞，代数介于12至40代之间。在以药物处理前24小时，开始种植细胞并放置24小时。对照组维持于培养基并添加药物溶剂(99％的乙醇)。在此培养条件下，以纯不影响细胞生长与分化。
(二)细胞生长及存活分析
将HaCaT细胞植入96孔培养皿(1x104个细胞/孔)。待约12小时细胞贴附完成后，以不同浓度药物处理2、5、10、30分钟、及24或48小时，之后将含药物的培养液吸除，再以1xPBS缓冲液清洗后换上新的细胞培养液放置24小时。细胞生长及存活状态以CCK-8试剂套组(Dojindo Molecular Technologies,Kumamoto,Japan)进行分析，在每格中加入5μL CCK-8溶液并于37℃培养器中培养一小时，再用Microplate reader(SpectraMax,MolecularDevice,USA)测定450nm吸收，样本与对照组数值相比进行实验结果分析。
(三)细胞生长纪录
将HaCaT细胞植入12孔培养皿(1x105个细胞/孔)。待约12小时细胞贴附完成后，以不同浓度药物处理10或15分钟，之后将含药物的培养液吸除，以1x PBS缓冲液清洗后换上新的细胞培养液放置2、3、4天。细胞生长及存活状态以CCK-8试剂套组同上述方式进行分析。
结果
(一)单独以35mM硫化硒(SeS2)处理皮肤角质细胞HaCaT细胞，发现在浓度甚低(≥300倍稀释)无明显毒性，在小于3倍稀释出现明显毒性,如图1所示。
(二)单独以3mM吡罗克酮乙醇胺(PO)处理处理皮肤角质细胞HaCaT细胞，发现在30倍稀释时短时间(2分钟)处理无明显毒性，但长时间处理(≥24小时)即出现显著毒性。处理2分钟时，在2倍稀释(1.5mM)、一倍稀释(3mM)、五倍浓度(15mM)、十倍浓度(30mM)处理均具显著毒性,如图2所示。
(三)本发明组合物，即硫化硒(SeS2)和吡罗克酮乙醇胺(PO)组合(简称RTS成分配方)处理皮肤角质细胞HaCaT细胞，以35mM硫化硒(SeS2)和3mM吡罗克酮乙醇胺(PO)组合为1倍稀释，短时间(0,2,5min)处理后，10倍稀释(3.5mM SeS2+0.3mM PO),100倍稀释(0.35mMSeS2+30μM PO),1000倍稀释(35μMSeS2+3μM PO),5000倍稀释(7μM SeS2+0.6μM PO),以及10000倍稀释(3.5μM SeS2+0.3μM PO)]均无明显毒性,如图3所示。
(四)本发明RTS成分配方，即硫化硒(SeS2)和吡罗克酮乙醇胺(PO)组合，处理皮肤角质细胞HaCaT细胞10分钟和30分钟后在10倍稀释(3.5mM SeS2和0.3mM PO组合)、100倍稀释(0.35mM SeS2和30μM PO组合)出现显著抑制细胞生长之功效,如图4所示。
(五)以本发明RTS成分配方、硫化硒(SeS2)单独、吡罗克酮乙醇胺(PO)单独、并与以酒精(Ethanol)处理为对照组，以克多可那挫(ketoconazole)处理作为正对照组比较，观察抑制抑制细胞生长功效之结果。先将HaCaT细胞培养一天后，第二天以上述处理15分钟后，在第三天原浓度1倍(35mM SeS2和3mM PO组合)及稀释3倍,10倍,27倍,及100倍处理，均显示具有显著抑制细胞生长。而在第四天对照组细胞已长满，而其余组包括1倍,3倍,10倍,27倍,及100倍处理与对照组比较，均有显著差异(*p<0.05)，如图5所示。
虽然本发明以较佳实施例披露如上，然其并非用以限定本发明，任何熟习本发明技术者，当可在不脱离本发明之精神和范围内，作些许之更动与润饰，则应属本发明权利要求所界定之保护范围。

Claims (10)

1.一种抑制皮肤细胞增生的组合物，包含0.35mM～350mM硫化硒(Selenium sulfide)和0.035mM～175mM吡罗克酮乙醇胺(piroctone olamine)的组合，提供抑制皮肤细胞增生的相乘功效但不会产生明显毒性。
2.根据权利要求1所述的组合物，其包含0.35mM～210mM硫化硒和0.035mM～105mM吡罗克酮乙醇胺。
3.根据权利要求1所述的组合物，其包含0.35mM～70mM硫化硒和0.035mM～10mM吡罗克酮乙醇胺。
4.根据权利要求1所述的组合物，其包含0.35-50mM硫化硒和0.035～5mM吡罗克酮乙醇胺。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的组合物，其为洗发精、护发组合物、外用制剂或外用医疗制剂型式。
6.根据权利要求1-4中任一项所述的组合物，其用于制成一外用医疗制剂。
7.一种硫化硒(Selenium sulfide)与吡罗克酮乙醇胺(piroctone olamine)之组合物用于制备一治疗或预防皮肤增生性疾病之外用制剂或一外用医疗制剂之应用，其中该硫化硒与吡罗克酮乙醇胺的组合物为根据权利要求1-4中任一项所述的组合物，其提供抑制皮肤细胞增生的相乘功效但不具顯著毒性。
8.根据权利要求7所述的应用，其中该皮肤增生性疾病可选自由牛皮癣(psoriasis)、湿疹(eczema)或异位性皮肤炎(atopic dermatitis)、鱼鳞癣(ichthyosis)、及癌症(cancer)组成之群组。
9.根据权利要求7所述的应用，其中该制剂为一洗发精组合物、护发组合物或一外用制剂。
10.根据权利要求9所述的应用，其中该制剂特别适用于解决并非因霉菌感染引起之头皮屑问题。
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