TW202034929A

TW202034929A - 抑制皮膚細胞增生的組合物及其應用

Info

Publication number: TW202034929A
Application number: TW108120797A
Authority: TW
Inventors: 羅胥恩
Original assignee: 瑞恩生化科技有限公司
Priority date: 2018-06-15
Filing date: 2019-06-14
Publication date: 2020-10-01

Abstract

本發明涉及用於抑制皮膚細胞增生的組合物，包含硫化硒（Selenium sulfide）和吡羅克酮乙醇胺（piroctone olamine）之組合，及其可用於製備抑制皮膚細胞增生但不會產生明顯毒性的洗髮精、護髮組合物、外用製劑或外用醫療製劑之應用。

Description

抑制皮膚細胞增生的組合物及其應用

本申請案主張2018年6月15日提出之中華民國發明專利申請案第107120882號的優先權。

本發明涉及用於一種抑制皮膚細胞增生的組合物及其應用。

市售標榜抗頭皮屑的洗髮產品中，用以抗頭皮屑的成分不外乎下列四種功能（1）減少皮屑芽孢菌、（2）細胞穩定劑、（3）角質溶解劑及（4）抗發炎抗癢成份。

如果就醫學角度來區分，主要有下列成分：（1）吡硫鎓鋅（Zinc Pyrithione），是它能殺死皮屑芽孢菌並去除老化角質細胞，抑制頭皮屑產生；（2）硫化硒（Selenium Sulfide），是一種抗黴菌劑，用來對付皮屑芽孢菌的孳生。它的作用機轉來自抑制細胞分裂的優勢，以控制皮屑芽孢菌的生長，達到去除頭皮屑的效果。但洗後常有頭髮油膩的感覺、甚至染劑褪色等現象；（3）克多可那挫（ketoconazole），也是一種抗黴菌劑，它的作用機轉是藉由破壞黴菌細胞壁的形成，達到抑制皮屑芽孢菌的生長，解決頭皮屑的問題。但因毒性較強，孕婦及幼童不建議使用；（4）焦油類（Tar），為用於幹癬、脂漏性皮膚炎或濕疹病患的藥用洗髮液，可去角質、殺菌、止癢、抗過度有絲分裂等作用。缺點是味道不佳；及（5）吡羅克酮乙醇胺（piroctone olamine），也是一種抗黴菌劑，但價格高且不溶于油或水,需用醇類溶解。用於洗劑時候有添加量之限制。

以上成分往往有毒性，或對皮膚造成敏感，或有氣味不佳的問題。仍然期望找到較佳之抗頭皮屑配方，克服以上問題。對於並非因黴菌引起的頭皮屑問題，使用上述成分做成之洗髮精往往無法解決頭皮屑問題。

本發明為解決習知抗頭皮屑洗髮精之問題，意外發現兩種抗黴菌劑之特殊組合，可提供抑制皮膚細胞增生之相乘功效但不會產生明顯毒性，可用於製成治療或預防皮膚增生性疾病之製劑或外用醫療製劑。

一方面，本發明提供一種抑制皮膚細胞增生的組合物，包含0.35 mM~350 mM硫化硒（Selenium sulfide）和0.035 mM~175 mM吡羅克酮乙醇胺（piroctone olamine）的組合，提供抑制皮膚細胞增生的相乘功效但不會產生明顯毒性。

根據本發明的實施例，本發明抑制皮膚細胞增生的組合物包含0.35 mM~210 mM硫化硒和0.035 mM~105 mM吡羅克酮乙醇胺；較佳為0.35 mM~70 mM硫化硒和0.035 mM~10 mM吡羅克酮乙醇胺。

根據本發明的一特定實施例，本發明抑制皮膚細胞增生的組合物包含0.35 mM~50 mM硫化硒和0.035 mM~5 mM吡羅克酮乙醇胺。

根據本發明，本發明組合物可為洗髮精、護髮組合物、外用製劑或外用醫療製劑型式。

另一方面，本發明提供本發明組合物用於製備治療或預防皮膚增生性疾病之外用製劑或一外用醫療製劑之應用。其中，本發明組合物提供抑制皮膚細胞增生的相乘功效但不具顯著毒性。

根據本發明的實施例，該製劑為一洗髮精組合物、護髮組合物或一外用製劑。

根據本發明的實施例，該皮膚增生性疾病可選自由牛皮癬（psoriasis）、濕疹（eczema）或異位性皮膚炎（atopic dermatitis）、魚鱗癬（ichthyosis）、及癌症（cancer）組成之群組。

根據本發明，本發明製劑可為洗髮精、護髮組合物型式。特別適用於解決並非因黴菌感染引起之頭皮屑問題。

本發明說明中之用詞通常具有在本技術領域中、在本發明內容中、及各用語所在之特定內容中的原始意義。

本文所使用的「一」乙詞，如未特別指明，係指至少一個（一個或一個以上）之數量。

硫化硒（Selenium sulfide）和吡羅克酮乙醇胺（piroctone olamine）均為一抗黴菌劑，有細胞毒性。單獨使用時，會有引起不適、氣味不佳及無法解決並非因黴菌引起的頭皮屑問題。

根據本發明，意外地發現硫化硒（Selenium sulfide）和吡羅克酮乙醇胺（piroctone olamine）的特定組合可提供抑制皮膚細胞增生的相乘功效但不會產生明顯毒性，尤其在解決並非因黴菌引起的頭皮屑問題。

本發明以硫化硒和吡羅克酮乙醇胺在單獨或混合使用時對人類皮膚細胞生長作用進行評估，以臨床使用藥物克多可那挫（ketoconazole）作正對照組。本發明意外發現0.35 mM~350 mM硫化硒（Selenium sulfide）和0.035 mM~175 mM吡羅克酮乙醇胺（piroctone olamine）的組合，可提供抑制皮膚細胞增生的相乘功效但不會產生明顯毒性。

本發明以下列說明及實施例說明本發明功效。

實施例

材料與方法

1. 細胞株及細胞培養

本研究將以人類皮膚角質細胞（human keratinocytes, HaCaT cells）為主要研究對象，購自ATCC（American Type Culture Collection, USA）。

將人類皮膚角質細胞株HaCaT細胞培養於37℃的潮濕培養箱中，在空氣為5%二氧化碳及95%氧氣的環境下，放置在Dulbecco氏修飾Eagle培養基（DMEM）中，並添加10%胎牛血清、100 IU/mL盤尼西林、100 μg/mL鏈黴素、2mM丙酮酸鈉和1%非必須胺基酸（NEAA）。該培養基每兩天更換一次。進行繼代培養時，在以0.1%胰蛋白酶（Trypsin）-EDTA混合液作用後，收集細胞並以1:10的比例稀釋重新培養。使用於研究中的細胞，代數介於12至40代之間。在以藥物處理前24小時，開始種植細胞並放置24小時。對照組維持於培養基並添加藥物溶劑（99%的乙醇）。在此培養條件下，以純不影響細胞生長與分化。

2. 細胞生長及存活分析

將HaCaT細胞植入96孔培養皿（1x10⁴ 個細胞/孔）。待約12小時細胞貼附完成後，以不同濃度藥物處理2、5、10、30分鐘、及24 或48小時，之後將含藥物的培養液吸除，再以1x PBS緩衝液清洗後換上新的細胞培養液放置24小時。細胞生長及存活狀態以CCK-8試劑套組（Dojindo Molecular Technologies, Kumamoto, Japan）進行分析，在每格中加入5 μL CCK-8溶液並于37°C 培養器中培養一小時，再用Microplate reader （SpectraMax, Molecular Device, USA）測定450 nm吸收，樣本與對照組數值相比進行實驗結果分析。

3. 細胞生長紀錄

將HaCaT細胞植入12 孔培養皿（1x10⁵ 個細胞/孔）。待約12小時細胞貼附完成後，以不同濃度藥物處理10或15分鐘，之後將含藥物的培養液吸除，以1x PBS緩衝液清洗後換上新的細胞培養液放置2、3、4天。細胞生長及存活狀態以CCK-8試劑套組同上述方式進行分析。

結果

1. 單獨以35 mM硫化硒（SeS₂ ）處理皮膚角質細胞HaCaT細胞，發現在濃度甚低（≥300倍稀釋）無明顯毒性，在小於3倍稀釋出現明顯毒性,如圖1所示。

2. 單獨以3 mM吡羅克酮乙醇胺（PO）處理處理皮膚角質細胞HaCaT細胞，發現在30倍稀釋時短時間（2分鐘）處理無明顯毒性，但長時間處理（≥24小時）即出現顯著毒性。處理2分鐘時，在2倍稀釋（1.5 mM）、一倍稀釋（3 mM）、五倍濃度（15 mM）、十倍濃度（30 mM）處理均具顯著毒性，如圖2所示。

3. 本發明組合物，即硫化硒（SeS₂ ）和吡羅克酮乙醇胺（PO）組合（簡稱RTS成分配方）處理皮膚角質細胞HaCaT細胞，以35 mM硫化硒（SeS₂ ）和3mM吡羅克酮乙醇胺（PO）組合為1倍稀釋，短時間（0、 2、 5 分鐘）處理後，10倍稀釋（3.5 mM SeS₂ + 0.3 mM PO）、100倍稀釋（0.35 mM SeS₂ + 30 μM PO）、1000倍稀釋（35 μM SeS₂ + 3 μM PO）、5000倍稀釋（ 7 μM SeS₂ + 0.6 μM PO）、以及10000倍稀釋（3.5 μM SeS₂ + 0.3 μM PO）均無明顯毒性，如圖3所示。

4. 本發明RTS成分配方，即硫化硒（SeS₂ ）和吡羅克酮乙醇胺（PO）組合，處理皮膚角質細胞HaCaT細胞10 分鐘和 30分鐘後在10倍稀釋（3.5 mM SeS₂ 和0.3 mM PO組合）、100倍稀釋（0.35 mM SeS₂ 和30 μM PO組合）出現顯著抑制細胞生長之功效，如圖4所示。

5. 以本發明RTS成分配方、硫化硒（SeS₂ ）單獨、吡羅克酮乙醇胺（PO）單獨、並與以酒精（Ethanol）處理為對照組，以克多可那挫（ketoconazole）處理作為正對照組比較，觀察抑制抑制細胞生長功效之結果。先將HaCaT細胞培養一天后，第二天以上述處理15 分鐘後，在第三天原濃度1倍（35 mM SeS₂ 和3 mM PO組合）及稀釋 3倍、10倍、27倍、及100倍處理，均顯示具有顯著抑制細胞生長。而在第四天對照組細胞已長滿，而其餘組包括1倍、3倍、10倍、27倍、及100倍處理與對照組比較，均有顯著差異（* p ＜0.05），如圖5所示。

雖然本發明以較佳實施例揭露如上，然其並非用以限定本發明，任何熟習本發明技術者，當可在不脫離本發明之精神和範圍內，作些許之更動與潤飾，則應屬本發明權利要求所界定之保護範圍。

無

前文所述以及實施方式可藉由附加之圖式達到更好的說明效果。為了加強本發明之說明，將適當的實施例之圖式列舉於此。

圖1係單獨以35 mM硫化硒（SeS₂ ）處理皮膚角質細胞之結果。

圖2係單獨以3 mM吡羅克酮乙醇胺（PO）處理皮膚角質細胞之結果。

圖3係以本發明RTS成分配方，即硫化硒（SeS₂ ）和吡羅克酮乙醇胺 (PO）合併處理皮膚角質細胞,觀察是否有細胞毒性之結果。

圖4係以本發明RTS成分配方，即硫化硒（SeS₂ ）和吡羅克酮乙醇胺 (PO）合併處理皮膚角質細胞,觀察抑制抑制細胞生長功效之結果。

圖5係以本發明RTS成分配方與硫化硒（SeS₂ ）、吡羅克酮乙醇胺 (PO）單獨處理,並與以酒精（Ethanol）處理為對照組，以克多可那挫（ketoconazole）處理作為正對照組比較，觀察抑制抑制細胞生長功效之結果，顯示所有含藥處理組相對於酒精處理之對照組均具顯著差異（* p ＜0.05）。

無

Claims

一種抑制皮膚細胞增生的組合物，包含0.35 mM~350 mM硫化硒（Selenium sulfide）和0.035 mM~175 mM吡羅克酮乙醇胺（piroctone olamine)的組合，提供抑制皮膚細胞增生的相乘功效但不會產生明顯毒性。
如請求項1的組合物，其包含0.35 mM~210 mM硫化硒和0.035 mM~105 mM吡羅克酮乙醇胺。
如請求項1的組合物，其包含0.35 mM~70 mM硫化硒和0.035 mM~10 mM吡羅克酮乙醇胺。
如請求項1的組合物，其包含0.35 mM~50 mM硫化硒和0.035 mM~5 mM吡羅克酮乙醇胺。
如請求項1至4中任一項的組合物，其為洗髮精、護髮組合物、外用製劑或外用醫療製劑型式。
如請求項1至4中任一項的組合物，其用於製成一外用醫療製劑。
一種硫化硒（Selenium sulfide）與吡羅克酮乙醇胺（piroctone olamine）之組合物用於製備一治療或預防皮膚增生性疾病之外用製劑或一外用醫療製劑之應用，其中該硫化硒與吡羅克酮乙醇胺的組合物為如請求項1至4中任一項的組合物，其提供抑制皮膚細胞增生的相乘功效但不具顯著毒性。
如請求項7的應用，其中該皮膚增生性疾病可選自由牛皮癬（psoriasis）、濕疹（eczema）或異位性皮膚炎（atopic dermatitis）、魚鱗癬（ichthyosis）、及癌症（cancer）組成之群組。
如請求項7的應用，其中該製劑為一洗髮精組合物、護髮組合物或一外用製劑。
如請求項9的應用，其中該製劑特別適用於解決並非因黴菌感染引起之頭皮屑問題。