CN104688823B - 一种抗菌消炎止痒的中药组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种抗菌消炎止痒的中药组合物及其制备方法。该中药是由以下原料制备而成的：千里光、大叶桉叶、松叶。本发明还提供了这种中药组合物的制备方法。本发明提供的中药组合物在治疗妇科炎症及皮肤无名肿痒方面，疗效确切、安全性好、没有副作用，且使用方便、成本低。

Description

一种抗菌消炎止痒的中药组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及中药领域，具体涉及一种用于抗菌消炎止痒的中药组合物及其制备方法。

背景技术

女性生殖系统炎症是妇科常见病，我国70％的成年妇女有不同程度的妇科炎症，包括各种复杂原因引起的女性外阴炎、阴道炎、宫颈炎、盆腔炎。女性生殖系统经常会感染各种特殊炎症出现外阴瘙痒、灼热肿痛、阴道充血、白带异常、性交疼痛、尿频、尿急、尿痛、下腹坠胀等症状，严重的可出现寒战、高热、头痛、食欲缺乏等全身症状，妇科炎症如果不及时治疗，不但会引发腰膝酸软、烦躁易怒等症状和情绪，并可因此影响性生活质量而导致夫妻感情不和，由于往往反复发作，经久不愈，甚至会反复感染刺激引起宫颈癌变，严重损害妇女们的健康。

中医认为，妇科疾病的主要致病因素可以归纳为：外邪侵犯、七情内伤和素体虚弱所致的脏腑功能失调，三者之间又是相互联系和影响的。女性以血为用，气偏有余，血常不足，且生性偏于情感，情绪易于波动，再加上紧张的工作，生活的压力和快节奏的生活，才会极易患上气血失调，发生经、带、胎、产等诸多疾病。同时，平时个人生理卫生的不注意也会成为妇科疾病的相关诱因。

妇科炎症治疗主要包括物理疗法，药物疗法，手术疗法等。采用药物治疗时，西医多使用抗生素清除病原体，虽然短期内可以起到消炎的作用，但复发率高，复发后再用同种药物效果较差；而单纯服用中药，不但疗程长，疗效也欠佳。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗菌消炎止痒的中药组合物；

本发明的另一目的是提供一种抗菌消炎止痒的中药组合物的制备方法。

本发明的目的是通过下列的技术方案实现的：

本发明所述的抗菌消炎止痒的中药组合物，是由包括如下重量份的原料制备而成的： 千里光250-350份、大叶桉叶250-350份、松叶350-450份；

优选地，是由包括如下重量份的原料制备而成的： 千里光280-320份、大叶桉叶280-320份、松叶380-420份；

更优选地，是由包括如下重量份的原料制备而成的：千里光300份、大叶桉叶300份、松叶400份。

以下是本发明中药制剂的药材来源：

千里光，为菊科千里光属植物千里光Senecio scandens Buch.-Ham.，以全草入药。苦，辛，凉。有小毒。清热解毒，凉血消肿，清肝明目。用于风火赤眼，疮疖肿毒，皮肤湿疹及痢疾腹痛等病症。现代研究表明，千里光具有广谱的抗菌作用和抗滴虫作用。

大叶桉，为桃金娘科桉属植物大叶桉Eucalyptus robusta Smith，以叶入药。微辛、微苦，平。疏风解热，抑菌消炎，防腐止痒。用于预防流行性感冒、流行性脑脊髓膜炎，治上呼吸道感染，咽喉炎，支气管炎，肺炎，急、慢性肾盂肾炎，肠炎，痢疾，丝虫病；外用治烧烫伤，蜂窝织炎，乳腺炎，疖肿，丹毒，水田皮炎，皮肤湿疹，脚癣，皮肤消毒。现代研究表明，大叶桉抗菌力较强，抗菌谱亦广；用20%桉叶蒸馏液、供注射时皮肤消毒用，经临床试用有一定消毒效果；其挥发油在体外，有强大杀灭阴道滴虫的作用。

松叶，为松科植物华山松、黄山松、马尾松、黑松、油松、云南松、红松等的针叶。苦；性温。归心；脾经。具有祛风燥湿、杀虫止痒、活血安神的功效。

本发明的另一方面是提供了本发明中药组合物的活性成分的制备方法，该方法是采用水提或40-80%体积百分浓度的乙醇提取制备而成。其中，大叶桉叶和松叶加水蒸馏，收集蒸馏液；大叶桉叶和松叶蒸馏后的药渣与千里光混合后加水或40—80%体积百分浓度的乙醇提取，提取液合并蒸馏液，混匀，即得活性成分。具体的制备方法如下：

方案一：取大叶桉叶和松叶，加8-10倍水常压或减压蒸馏1-5小时，收集蒸馏液备用；大叶桉叶和松叶蒸馏后的药渣与千里光混合后加水提取2-3次，每次加水量相当于药材总重量的6-12倍，每次提取时间为1-3小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至70－80℃时相对密度为1.15-1.20的清膏，加入蒸馏液，混匀，即得活性成分。

方案二：取大叶桉叶和松叶，加8-10倍水常压或减压蒸馏1-5小时，收集蒸馏液备用；大叶桉叶和松叶蒸馏后的药渣与千里光混合后用40-80%乙醇回流提取2-3次，每次乙醇用量为药材总量的4-10倍，提取时间为2-4小时，合并提取液，过滤，滤液浓缩至70－80℃时相对密度为1.15-1.20的清膏，加入蒸馏液，混匀，即得活性成分。

方案三：取大叶桉叶和松叶加水蒸馏，收集蒸馏液；大叶桉叶和松叶蒸馏后的药渣与千里光混合后加水提取，水提液醇沉，回收乙醇，提取液合并蒸馏液，混匀，即得活性成分。

方案三的更优选方案包括以下步骤：取大叶桉叶和松叶，加8-10倍水常压或减压蒸馏1-5小时，收集蒸馏液备用；大叶桉叶和松叶蒸馏后的药渣与千里光混合后加水提取2-3次，每次加水量相当于药材总重量的6-12倍，每次提取时间为1-3小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至70－80℃时相对密度为1.15-1.20的清膏，加入清膏重量2-3倍的体积百分比为95%的乙醇，搅匀，静置24-48小时，滤过，滤液回收乙醇后加入蒸馏液，混匀，即得活性成分。

本发明所述的抗菌消炎止痒的中药组合物，可以与医药学上可接受的载体配合，制成各种常用制剂，如搽剂、洗剂、酊剂、凝胶剂、（软）膏剂等。

本发明的药学上可接受的载体包括但不限于以下：

稀释剂：蒸馏水、乙醇等。

助溶剂：甘油、丙二醇、山梨醇等多元醇。

防腐剂：苯甲酸、苯甲酸钠、丙酸、尼泊金类、对羟基苯甲酸乙酯等。

油脂性基质：凡士林、液状石蜡、羊毛脂、蜂蜡、动物油、植物油、单硬脂酸甘油酯、十八醇等及其混合物、

水溶性基质：甘油、海藻酸钠、卡巴浦尔树脂、淀粉明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙二醇、聚乙烯醇。

促透剂：角质保湿利尿素、吡咯酮类衍生物、亚油酸、月桂醇、吐温、十二烷基三甲基溴化铵、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、薄荷醇、月桂氮卓酮（氮酮）等。

例如，其可以通过下列方法之一制备为各种常见剂型：

方法1：搽剂

取方案一至方案三所得活性成分之一，加入搽剂常用辅料，按常规生产方法制备得本发明搽剂。

上述搽剂常用辅料包括稀释剂、防腐剂、助溶剂、促透剂之一或全部。

方法2：膏剂

取方案一至方案三所得活性成分之一，加入膏剂常用辅料，按常规生产方法制备得本发明膏剂。

上述膏剂常用辅料包括油脂性基质、水溶性基质、防腐剂、促透剂之一或全部。

方法3：洗剂

取方案一至方案三所得活性成分之一，稀释后，加水搅匀，静置过滤后，即得。

方法4：凝胶剂

取方案一至方案三所得活性成分之一，浓缩后与常用凝胶基质混合，按常规生产方法制备得本发明凝胶剂。

上述凝胶常用基质包括卡波姆、明胶、黄蓍胶、纤维素类和泊洛沙母等，还可加促透剂、助溶剂、稀释剂之一或全部。

方法4：栓剂

取上述方案一至方案三所得的活性成分之一，加入栓剂常用辅料，按栓剂的常规制备工艺制成本发明中药组合物的栓剂。

上述栓剂常用辅料包括油脂性基质、水溶性基质、促透剂之一或全部。

方法5：粉剂

取千里光、大叶桉叶、松叶粉碎成粗粉，过80-100目筛，即得本发明粉剂。

本申请人在研究传统中医辨证治疗的基础上参考现代药理研究成果，经过多年的试验，将多种配方进行筛选，找到了相互配合能很好抗菌消炎止痒的中药组合物。本发明配方合理创新，大叶桉叶和松叶能祛风解热、抑菌消炎、杀虫止痒，二者的蒸馏液更是显著提高了广谱的抗菌作用和杀虫作用；千里光清热解毒、消肿凉血、抗菌杀虫。以上三药合用，具有清热解毒、抗菌消炎、止痒之功，对女性常见阴道炎及皮肤无名肿痒、发炎疗效极佳。本发明技术方案符合中医辨证施治的机理，立足疾病之本源，组方合理科学。

本发明提供的一种抗菌消炎止痒的中药组合物具有以下优点：

1、本发明提供的组合物对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、枯草杆菌、不动杆菌、变形杆菌、甲型链球菌、乙型链球菌、白色念珠菌等9种菌株株均有不同程度的杀菌作用。

2、本发明中药组合物对大鼠棉球肉芽肿模型具有抗炎作用，其低浓度能够显著抑制大鼠棉球肉芽肿。

3、本发明提供的中药组合物具有一定的止痒作用，能显著提高磷酸组织胺所致豚鼠致痒阈。

4、本发明提供的中药组合物具有一定的抗阴道滴虫的作用。

具体实施方式

下面通过实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。除非另有说明，本发明中的乙醇量的百分数是体积百分数，v/v表示溶液的体积比。

实施例1 搽剂

称取千里光250g、大叶桉叶250g、松叶350g。取大叶桉叶和松叶，加8倍水减压蒸馏1小时，收集蒸馏液备用；大叶桉叶和松叶蒸馏后的药渣与千里光用乙醇回流提取2次，每次乙醇浓度分别为80%、60%，每次乙醇用量分别为药材总量的10倍、8倍，提取时间分别为4小时、3小时，合并提取液，过滤，滤液浓缩至70℃时相对密度为1.20清膏，加入蒸馏液，加入0.1%的苯甲酸钠、0.05%的尼泊金甲酯，混匀，分装，即得本发明搽剂。

实施例2 洗剂

称取千里光300g、大叶桉叶300g、松叶400g。取大叶桉叶和松叶，加10倍水减压蒸馏4小时，收集蒸馏液备用；大叶桉叶和松叶蒸馏后的药渣与千里光混合后加水提取2次，每次加水量分别相当于药材总重量的10倍、8倍，每次提取时间为2小时、1小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至80℃时相对密度为1.15的清膏，加入清膏重量2倍的体积百分比为95%的乙醇，搅匀，静置48小时，滤过，滤液回收乙醇至700mL，加入蒸馏液后，加水调至1000mL，搅匀，静置12h，精滤，分装，即得本发明洗剂。

实施例3 洗剂

称取千里光320g、大叶桉叶320g、松叶420g。取大叶桉叶和松叶，加10倍水减压蒸馏3小时，收集蒸馏液备用；大叶桉叶和松叶蒸馏后的药渣与千里光混合加水提取3次，三次加水量分别相当于药材总重量的12倍、8倍、6倍，每次提取时间为3小时、2小时、1小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至70℃时相对密度为1.20的清膏，加入清膏重量3倍的体积百分比为95%的乙醇，搅匀，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇至600mL，加入蒸馏液后，加水调至1000mL，搅匀，静置12h，精滤，分装，即得本发明洗剂。

实施例4 凝胶剂

称取千里光350g、大叶桉叶350g、松叶450g。取大叶桉叶和松叶，加10倍水常压蒸馏5小时，收集蒸馏液备用；大叶桉叶和松叶蒸馏后的药渣与千里光混合后加水提取3次，三次加水量分别为药材总重量的12倍、8倍、6倍，三次提取时间分别为3小时、2小时、1小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至80℃时相对密度为1.20的清膏，加入蒸馏液，混匀，备用。

将卡波姆10g撒于适量的蒸馏水中,充分溶胀,加入丙二醇100g,月桂氮卓酮10g研磨使润湿,加10g三乙醇胺研磨成透明凝胶基质,水浴至70℃。取100g丙二醇、10g吐温-80混合加热溶解后,将上述加入蒸馏液的清膏加入到基质中,慢加快搅,加蒸馏水至1000g,继续搅拌均匀,得黄棕色透明凝胶剂。

实施例5 凝胶剂

称取千里光320g、大叶桉叶300g、松叶380g。取大叶桉叶和松叶，加8倍水常压蒸馏4小时，收集蒸馏液备用；大叶桉叶和松叶蒸馏后的药渣与千里光加水提取2次，二次加水量分别为药材总重量的10倍、8倍，二次提取时间分别为2小时、1小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至70℃时相对密度为1.15的清膏，加入蒸馏液，混匀，备用。

将卡波姆10g撒于适量的蒸馏水中,充分溶胀,加入甘油和丙二醇各50g,月桂氮卓酮12g研磨使润湿,加8g三乙醇胺研磨成透明凝胶基质,水浴至70℃。取100g丙二醇、10g吐温-80混合加热溶解后,将上述加入蒸馏液的清膏加入到基质中,慢加快搅,加蒸馏水至1000g,继续搅拌均匀,得黄棕色透明凝胶剂。

实施例6 膏剂

称取千里光280g、大叶桉叶280g、松叶380g。取大叶桉叶和松叶，加8倍水减压蒸馏2小时，收集蒸馏液，备用；大叶桉叶和松叶蒸馏后的药渣与千里光用乙醇回流提取3次，每次乙醇浓度分别为80%、60%、40%，每次乙醇用量分别为药材总量的10倍、8倍、4倍，提取时间分别为4小时、3小时、2小时，合并提取液，过滤，滤液浓缩至70℃时相对密度为1.15的浸膏，加入蒸馏液，混匀，备用。

称取硬脂酸10g,凡士林95g,羊毛脂85g,硬脂酸甘油脂40g,十六醇80g,加热至85℃,搅匀,作为油相,备用;另取甘油120g,对羟基苯甲酸乙酯3g,十二烷基硫酸钠25g,月桂氮卓酮30g,加入上述加入蒸馏液的清膏,用水调节使油、水两相共1000g,作为水相,加热至90℃,待全部溶解后,恒温至85℃,搅匀；将油相缓缓加入水相,置匀浆机中搅拌,冷却,凝固,分装,即得本发明膏剂。

实施例7 粉剂

称取千里光300g、大叶桉叶300g、松叶100g，药材净选、粉碎，过80-100目筛，即得本发明粉剂。

实施例8 洗剂

称取千里光350g、大叶桉叶200g、松叶400g。取大叶桉叶、松叶与千里光混合后加水提取3次，每次加水量分别相当于药材总重量的12倍、10倍、6倍，每次提取时间为2小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至70℃时相对密度为1.20的清膏，加入清膏重量3倍的体积百分比为95%的乙醇，搅匀，静置48小时，滤过，滤液回收乙醇至500mL，加水调至1000mL，搅匀，静置24h，精滤，分装，即得本发明洗剂。

本发明药效学试验

止痒、抗炎、体外抗菌。

受试药物与试剂：

试验药物：本发明实施例2洗剂，每1ml相当于1g生药，为5倍临床浓度。

对照药：洁尔阴洗液（为治疗外阴、阴道炎的10倍临床浓度），批号1207152，四川恩威制药有限公司产品；以上样品试验时用蒸馏水配制成所需浓度药液后使用，用于抗菌试验样品试验前经加热至100℃，煮沸灭菌15min。

0.5 %甲硝唑氯化钠注射液，批号20120708，B12111913，贵州天地药业有限责任公司。

试剂：磷酸组织胺，SIGMA公司产品；二甲苯，广州化学试剂厂产品；新鲜鸡蛋，市售；脱脂棉，桂林天和药业有限公司产品。

培养基：营养肉汤培养基，营养琼脂培养基，改良马丁氏培养基，北京陆桥技术有限公司出品。沙氏液体培养基，广东环凯微生物科技有限公司产品。以上培养基按厂方说明用蒸馏水配制，加热煮沸至完全溶解，121-125℃高压灭菌30min备用。小牛血清，北京陆桥技术有限公司出品。

动物：Hartley豚鼠，CV级，雌雄兼用，体重300-400g，广西食品药品检验所实验动物中心提供；许可证号：SCXK桂2003-0003。雄性昆明种小白鼠，体重18-22g,SPF级；雄性Wistar大白鼠，体重250-300g,SPF级，均由广西医科大学实验动物中心提供，动物合格证证号:SCXK桂2009-0002。

试验菌种：金黄色葡萄球菌标准株(CMCC(B)26003)，绿脓杆菌标准株(CMCC(B)10104)，大肠杆菌标准株(CMCC(B)44102)，枯草杆菌标准株(CMCC(B)63501)，甲型链球菌标准株(CMCC(B)321581)，乙型链球菌标准株 (CMCC(B)32172)，白色念珠菌标准株 (CMCC(B)98001)，为广西食品药品检验所保存的源自中国医学科学院菌种。绿脓杆菌临床株，大肠杆菌临床株，不动杆菌临床株，变形杆菌临床株，由广西中医药大学第二附属医院微生物学实验室分离鉴定后提供。

试验方法选择：采用磷酸组胺致痒反应模型，观察本发明实施例2的止痒作用；采用二甲苯、鸡蛋清急性炎症模型和棉球肉芽肿慢性炎症模型，观察本发明实施例2的抗炎作用。给药途径与临床一致为外涂给药。采用液体培养基稀释法观察本发明实施例2体外抗菌作用。试验对照：设蒸馏水为空白对照组，洁尔阴洗液为止痒实验对比药品，消肿止痛酊为抗炎实验阳性对照药。

仪器： Thermo微量加样器，砂纸，0.25ml注射器及针头；口径8mm皮带冲子；FA1004上皿电子天平，上海精科天平产品；520MR爪肿体积计，美国IITC公司；生物安全柜，恒温培养箱（30-38℃），霉菌培养箱（23-25℃），冰箱，高压灭菌锅，高温干燥箱（300℃），恒温水浴箱（30-38℃），显微镜等。

统计方法：数据以 ±s表示，用t检验或校正t′检验比较组间差异显著性。

一、止痒试验：对豚鼠磷酸组织胺致痒反应的影响

1、造模：取豚鼠，用细砂纸擦去豚鼠的右后足背毛，并将其足背皮肤擦伤至渗血。皮肤擦伤后1小时，在创面处滴加0.01%磷酸组织胺溶液0.05ml/只，此后每隔3min依0.01%,0.02%,0.03%,0.04%,0.05%递增浓度，每次均为0.05ml/只。观察记录豚鼠自滴加磷酸组胺溶液起直至出现回头舔右后足的磷酸组胺浓度，以出现回头舔右后足时磷酸组胺浓度≦0.05%的豚鼠为合格豚鼠，其所给予的磷酸组织胺总量为该豚鼠给药前致痒阈。

2、分组及给药：将合格豚鼠随机分为7组，分别使用以下受试药物：

空白对照组：蒸馏水。

实验组高：本发明实施例2洗剂高浓度组，相当于5倍临床浓度；

实验组中：本发明实施例2洗剂中浓度组，相当于2.5倍临床浓度；

实验组低：本发明实施例2洗剂低浓度组，相当于临床浓度；

对照组高：洁尔阴洗液高浓度组，相当于5倍临床浓度；

对照组中：洁尔阴洗液组中浓度组，相当于2.5倍临床浓度；

对照组低：洁尔阴洗液低浓度组，相当于临床浓度；

以上7组连续给药（涂药）30分钟，对照组同法给予等体积蒸馏水。停止涂药10min后，在创面处滴加磷酸组胺0.05ml/只进行攻击，磷酸组胺攻击的起始浓度为各个豚鼠给药前出现舔右后足的磷酸组胺浓度。此后每隔3min递增浓度0.01%(0.01%,0.02%,0.03%,0.04%，0.05%，.....，1%递增浓度)，每次均为0.05ml/只；直至出现豚鼠回头舔右后足（如果用1%组胺浓度豚鼠仍不舔脚，终浓度以1%计），以最后出现豚鼠回头舔右后足时所给予的磷酸组织胺总量为给药后豚鼠致痒阈。

3、结果：计算给药后豚鼠致痒阈升高值。致痒阈升高值=给药后致痒阈-给药前致痒阈。组间比较各组豚鼠致痒阈升高值。结果见表1。

表1 实施例2洗剂对豚鼠磷酸组织胺致痒反应的影响(±s)

t检验，与空白对照组比较：*P<0.05, **P<0.01；与洁尔阴洗液组比较（大、中、小剂量分别比较），※P<0.05, ※※P<0.01。

表1 结果显示，与空白对照组比较，实施例2洗剂高、中、低浓度，洁尔阴洗液中浓度药液外涂给药能够显著提高磷酸组织胺所致豚鼠致痒阈；实施例2洗剂高、中、低浓度药液对豚鼠的致痒阈的效果比洁尔阴洗液对照组（高、中、低浓度药液组分别比较）效果要好的多，具有明显的显著性差异。

二、抗炎试验：对大鼠棉球肉芽肿的影响

1、分组：取大鼠，随机分为8组，每组8～9只。分别给予以下受试药：

空白对照组：蒸馏水。

实验组1：本发明实施例2洗剂高浓度组，相当于5倍临床浓度；

实验组2：本发明实施例2洗剂中浓度组，相当于2.5倍临床浓度；

实验组3：本发明实施例2洗剂低浓度组，相当于临床浓度；

对照组1：洁尔阴洗液高浓度组，相当于5倍临床浓度；

对照组2：洁尔阴洗液中浓度组，相当于2.5倍临床浓度；

对照组3：洁尔阴洗液低浓度组，相当于临床浓度；

2、造模及给药：大鼠以戊巴比妥钠40mg/kg ip麻醉，剪去腹部被毛，无菌条件下剪开下腹部正中皮肤，切口长约1cm ，止血钳扩充皮下组织，向双侧腹股沟皮下分别植入1个20mg无菌干燥棉球（试验前精密称量，常规高压灭菌、干燥后备用），缝合切口。术后当日起，在棉球所在部位皮肤外涂受试药物，每只4ml，每天1次，连续给药15d。术后15d,戊巴比妥钠麻醉大鼠，手术取出棉球，剔除脂肪组织，90℃烘干(1h)，称量术后棉球。

3、结果：术后棉球重量减去原棉球重量之差值为肉芽肿重，计算炎症抑制率（%）。组间比较差异显著性。结果见表2。

表2 实施例2洗剂对大鼠棉球肉芽肿的影响(±s)

t检验，与空白对照组比较：*P<0.05, **P<0.01

表2 结果显示，与空白对照组比较，实验组、对照组均能有效抑制大鼠棉球肉芽肿，其中实施例2洗剂各浓度和洁尔阴洗液低浓度药液外涂给药15d能够显著抑制大鼠棉球肉芽肿，实施例2洗剂对大鼠棉球肉芽肿效果优于洁尔阴洗液。

三、抗菌试验

1、灭菌方法：培养基、蒸馏水、废弃物置高压锅经121～125℃高压灭菌30min。玻璃试管、培养平皿、金属器械置高温干燥箱经160～180℃干烤灭菌180 min。实验室环境每天用40W医用紫外灯照射2次，每次2小时。

2、菌悬液制备：

(1)接种金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、枯草杆菌、不动杆菌、变形杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，35～37℃培养18～24小时，取培养物1ml，加入9ml 0.9%无菌氯化钠溶液，10倍递增稀释成系列稀释菌悬液，置8℃冰箱保存。取各稀释菌悬液0.1ml注皿，倒入营养琼脂培养基12～15ml，35～37℃培养18～24小时。取平皿菌落数约为5～10个菌落的稀释菌悬液，在72小时内使用，本稀释菌悬液细菌密度约为50～100cfu/ml。

（2）接种甲型链球菌，乙型链球菌的新鲜培养物至10%血清营养肉汤培养基中，35～37℃培养18～24小时，取培养物1ml，加入9ml 0.9%无菌氯化钠溶液，10倍递增稀释成系列稀释菌悬液，置8℃冰箱保存。取各稀释菌悬液0.1ml注皿，倒入10%血清营养琼脂培养基12～15ml，35-37℃培养18～24小时。取平皿菌落数约为5～10个菌落的稀释菌悬液，在72小时内使用，本稀释菌悬液细菌密度约为50～100cfu/ml。

（3）接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏液体培养基中，23～28℃培养48～72小时，取培养物1ml，加入9ml 0.9%无菌氯化钠溶液，10倍递增稀释成系列稀释菌悬液，置8℃冰箱保存。取各稀释菌悬液0.1ml注皿，倒入改良马丁氏培养基12～15ml，23～28℃培养48～72小时。取平皿菌落数约为5～10个菌落的稀释菌悬液，在96小时内使用，本稀释菌悬液细菌密度约为50～100cfu/ml。

3、培养基选择：金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、枯草杆菌、不动杆菌、变形杆菌用营养肉汤培养基或营养琼脂培养基。甲型链球菌，乙型链球菌用10%血清营养肉汤培养基或10%血清营养琼脂培养基。白色念珠菌用沙氏液体培养基或改良马丁氏培养基。

4、最小抑菌浓度(MIC)试验：取灭菌玻璃试管9支，每管加液体培养基3ml。取实施例2药液3ml（原液）加至第l管，混匀后取3ml加至第2管，依次对半稀释至第9管，各管药液稀释度分别为1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128、1/256、1/512倍。第9管混匀后弃去3ml。实施例2药液在液体培养基中浓度分别为1/2*C、1/4*C、1/8*C、1/16*C、1/32*C、1/64*C、1/128*C、1/256*C、512*C（注：“C” 表示原药液浓度）。然后每管加入细菌密度约为50～100cfu/ml的稀释菌悬液0.1mL。菌试管置35～37℃恒温培养箱培养18～24小时，白色念珠菌菌试管23～28℃霉菌培养箱培养48～72小时。在对照管无异常（第10管混浊有菌生长。第11管澄明无菌生长）的前题下观察细菌生长状况，培养液混浊者为有细菌生长。培养液澄明者为无细菌生长或细菌生长受抑制。将各管培养物0.1ml注皿，分别用相应的培养基琼脂平板培养上，细菌置35～37℃恒温培养箱培养18～24小时，白色念珠菌置23～28℃霉菌培养箱培养48～72小时，观察有无菌生长，取培养基琼脂平板生长菌落不超过5个者，与其相对应的培养管药物浓度，即为实施例2药液的最低抑菌浓度(MIC)。结果见表3。

5、最小杀菌浓度(MBC)试验：检测MIC后的显示抑菌作用的各号试管分别摇匀，取0.1mL接种于3ml液体培养基中，细菌试管置35～37℃恒温培养箱培养18～24小时，白色念珠菌试管置23～28℃霉菌培养箱培养24～48小时，然后，将各管培养物0.1ml注皿，分别用相应的培养基琼脂平板培养，细菌置30～35℃恒温培养箱培养18～24小时，白色念珠菌置23～25℃霉菌培养箱培养24～48小时，观察有无菌生长，无生长菌落者，与其相对应的药液最大稀释度的培养管药物浓度，即为该药液的MBC。

6、取洁尔阴洗液为对照组，操作同上述步骤。

7、实施例2药液及洁尔阴洗液体外抗菌作用结果见表3。

表3 试验药液体外抗菌作用(注：“C”表示原药液浓度)

表3结果显示，对所试验的金葡萄球菌标准株、绿脓杆菌标准株、大肠杆菌标准株、枯草杆菌标准株、不动杆菌临床株、变形杆菌临床株、甲型链球菌标准株、乙型链球菌标准株和白色念珠菌标准株9种菌株，实施例2洗剂除对甲型链球菌标准株没有抑菌作用外，对其余菌株均具有不同程度的抑菌作用；洁尔阴洗液对所试菌株均具有不同程度的抑菌作用。同时实施例2洗剂对金葡萄球菌标准株、绿脓杆菌标准株、枯草杆菌标准株和变形杆菌临床株，洁尔阴洗液对绿脓杆菌临床株、枯草杆菌标准株和变形杆菌临床株均具有不同程度的杀菌作用。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种抗菌消炎止痒的中药组合物，其特征在于它是由如下重量份的原料制备而成的：千里光250-350份、大叶桉叶250-350份、松叶350-450份。

2.如权利要求1 所述的抗菌消炎止痒的中药组合物，其特征在于它是由如下重量份的原料制备而成的：千里光280-320份、大叶桉叶280-320份、松叶380-420份。

3.如权利要求1 所述的抗菌消炎止痒的中药组合物，其特征在于它是由如下重量份的原料制备而成的：千里光300份、大叶桉叶300份、松叶400份。

4.如权利要求1-3 任一项所述的抗菌消炎止痒的中药组合物，其特征在于它的活性成分是采用水提或40－80% 体积百分浓度的乙醇提取制备而成。

5.如权利要求4 所述的抗菌消炎止痒的中药组合物，其特征在于它的活性成分是通过以下方法制备而成的：大叶桉叶和松叶加水蒸馏，收集蒸馏液；大叶桉叶和松叶蒸馏后的药渣与千里光混合后加水或40－80% 体积百分浓度的乙醇提取，提取液合并蒸馏液，混匀，即得活性成分。

6.如权利要求5 所述的抗菌消炎止痒的中药组合物，其特征在于它的活性成分是通过以下方法制备而成的：取大叶桉叶和松叶，加8－10倍水常压或减压蒸馏1－5小时，收集蒸馏液备用；大叶桉叶和松叶蒸馏后的药渣与千里光混合后加水提取2-3 次，每次加水量相当于药材总重量的6－12倍，每次提取时间为1－3小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至70－80℃时相对密度为1.15－1.20 的清膏，加入蒸馏液，混匀，即得活性成分。

7.如权利要求5 所述的抗菌消炎止痒的的中药组合物，其特征在于它的活性成分是通过以下方法制备而成的：取大叶桉叶和松叶，加8－10 倍水常压或减压蒸馏1－5 小时，收集蒸馏液备用；大叶桉叶和松叶蒸馏后的药渣与千里光混合后用40－80% 乙醇回流提取2－3次，每次乙醇用量为药材总量的4－10倍，提取时间为2－4小时，合并提取液，过滤，滤液浓缩至70－80℃时相对密度为1.15－1.20 的清膏，加入蒸馏液，混匀，即得活性成分。

8.如权利要求4所述的抗菌消炎止痒的中药组合物，其特征在于它的活性成分是通过以下方法制备而成的：大叶桉叶和松叶加水蒸馏，收集蒸馏液；大叶桉叶和松叶蒸馏后的药渣与千里光混合后加水提取，水提液醇沉，回收乙醇，提取液合并蒸馏液，混匀，即得活性成分。

9.如权利要求8所述的抗菌消炎止痒的的中药组合物，其特征在于它的活性成分是通过以下方法制备而成的：

取大叶桉叶和松叶，加8－10倍水常压或减压蒸馏1－5小时，收集蒸馏液备用；大叶桉叶和松叶蒸馏后的药渣与千里光混合后加水提取2-3次，每次加水量相当于药材总重量的6-12 倍，每次提取时间为1-3 小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩70－80℃时相对密度为1.15-1.20 的清膏，加入清膏重量2-3倍的体积百分比为95%的乙醇，搅匀，静置24-48小时，滤过，滤液回收乙醇后加入蒸馏液，混匀，即得活性成分。

10.一种抗菌消炎止痒的中药组合物，由权利要求1-3中任一项的中药组合物与医药学上可接受的载体制备而成。