CN110596299A - 二冬汤组方中天冬饮片的薄层色谱鉴别方法 - Google Patents

Abstract

本发明二冬汤组方中天冬饮片的薄层色谱鉴别方法，是将二冬汤中天冬饮片成分与天冬对照药材及原薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷对照品依照薄层色谱试验法，以三氯甲烷‑甲醇‑水的下层溶液为展开剂，利用薄层色谱试验法而建立的一种鉴别方法，本发明的鉴别方法准确率高，专属性强，使用范围广。

Description

二冬汤组方中天冬饮片的薄层色谱鉴别方法

技术领域

本发明属中药材鉴别技术领域，具体涉及二冬汤组方中天冬饮片的薄层色谱鉴别方法。

背景技术

二冬汤，中医方剂名，出自《医学心悟》卷三。具有养阴清热，生津止渴之功效。主治上消，渴而多饮；肺热咳嗽，痰少等症。症见咳嗽痰少、口渴多饮、舌红、脉细数。临床上常用于治疗糖尿病、百日咳、肺结核、慢性支气管炎、阴虚咳嗽等。该药是由天冬(去心)，麦冬(去心)，花粉、黄芩、知母、荷叶、甘草、人参组成。方中麦冬、天冬、花粉为君药，具有养阴清肺，生津润燥之功效；黄芩、知母、荷叶为臣药，具有清除肺热之功效；人参为；佐药，甘草为使药，具有补益肺气之功效。全方扶正祛邪并用，共奏养阴清热、生津止渴之效。

方中的天冬属于百合科的植物，长圆纺锤形，中部肥满，两端渐细而钝，表面黄白色或浅黄棕色，呈油润半透明状，有时有细纵纹或纵沟，偶有未除净的黄棕色外皮，有粘性，断面蜡质样，黄白色，半透明，中间有不透明白心，药性寒。主产贵州、四川、广西等地。以贵州产量最大，品质亦佳。

利用现有技术对天冬的鉴别方法有植物形态鉴定方法、性状鉴定方法和显微鉴定方法，《中国药典》对于天冬的鉴别方法采用的是显微鉴别法，属于现有技术中对天冬最先进的鉴别方法，其方法为：本品粉未灰绿色，上表皮细胞表面观多角形。外壁乳头状或短绒毛状突起，呈双圆圈状；断面观长方形，外壁呈乳头状突起，气孔不定式，副卫细胞5-8个。下表皮细胞表面观垂周壁略波状弯曲，有时可见连珠状增厚。草酸钙簇品多见，直径约至40μm。该鉴别方法属于物理鉴别法，只能从微观上对天冬进行鉴别，用该方法鉴别天冬的真伪，易于与其他如伪品羊齿天门冬等药材相混淆，也就是说该鉴别方法的专属性不强。

发明内容

本发明二冬汤组方中天冬饮片的薄层色谱鉴别方法，是将待鉴别的天冬饮片与天冬对照药材及薯蓣皂苷和伪原薯蓣皂苷对照品，经科学方法制备成甲醇溶液，用薄层色谱进行的一种鉴别方法。该方法准确率高，专属性强，使用范围广，是鉴别二冬汤中天冬饮片成分的一种非常有效的鉴别方法。

本发明是在现有技术对天冬鉴别方法基础上，建立了一个薄层鉴别测定法。提供一种具有程式化、高度精准和检测专属性强的薄层鉴别方法。

实现本发明的技术方案如下：

本发明二冬汤组方中天冬饮片的薄层色谱鉴别方法，采用的技术方案是，包括供试品溶液的制备、对照药材溶液的制备、对照品溶液的制备，并依照薄层色谱检测方法，以三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，经显色剂显色后，在日光灯和紫外灯下观察，检查待测图谱、对照药材图谱和对照品图谱上的斑点或条带的一致性。

作为本发明的一种优选技术方案，该方法包含如下步骤：

1、供试品溶液制备：

精密称取天冬饮片粉末0.8g，置50ml离心管中，加入65％甲醇10ml，超声30min(8000r/min，离心5min)，取上清液转移至25ml量瓶中，重复两次，合并上清液，加65％甲醇至刻度，蒸干，加10ml水溶解，水层再加水饱和正丁醇振摇提取3次，每次10ml，离心5min(3000r/min)，合并正丁醇液，加氨试液洗3～5次，每次10ml，洗至下层溶液澄清为止，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，加甲醇定容至2mL容量瓶中，得供试品溶液；

2、对照药材溶液的制备：

取天冬对照药材0.8g，按上述方法制成对照药材溶液；

3、对照品溶液制备：

分别精密称取对照品适量，加甲醇制成每1mL含1mg的对照品溶液，得对照品溶液；

4薄层色谱检测方法：

照薄层色谱法，分别吸取经制备的供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液7μl，点于同一高效薄层板上，将薄层板置于槽层析缸中，加入新制备的展开剂于另一槽内，预先饱和30min，再将展开剂小心倾入至薄层板的槽层缸中，展开约8cm，取出，标记溶剂前沿，晾干，均匀浸润显色剂后，在105℃加热，直至斑点或条带清晰可见(约2-4分钟)，分别置可见光和紫外光灯(365nm)下检视，在薄层板下1/3部分，在Rf约为0.25和0.31的位置，天冬供试品溶液与原薯蓣皂苷和伪原薯蓣皂苷对照品以及对照药材色谱相应的位置上，显相同的棕色斑点，都具有Rf值相应的特征斑点或条带。

所述对照品为薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷。

所述展开剂为三氯甲烷∶甲醇∶水(65∶35∶10)的下层溶液。

所述显色剂为10％硫酸乙醇溶液。

附图说明：

图1：日光下观察天冬饮片色谱图；

图2：紫外光灯下观察天冬饮片色谱图；

图1、2中：1.伪原薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷标准品色谱图；2.对照药材色谱图；3贵州遵义产天冬饮片色谱图；4四川万源产天冬饮片色谱图；5贵州贵阳产天冬饮片色谱图。

有益效果

本发明二冬汤组方中天冬饮片的薄层色谱鉴别方法，是将被检测天冬饮片与对照药材和伪原薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷对照品采用薄层色谱法进行的一种鉴别方法。该鉴别方法具有灵敏度高、专属性强、高精度、适用范围广、检测结果全面的特点，可同时达到鉴别及质量控制的目的，是鉴别二冬汤组方中天冬饮片的一种非常有效的方法。

具体实施例

以下用本发明的一个优选的技术方案来详细说明本发明。

样品来源：

1、天冬饮片供试品：贵州遵义、贵州贵阳和四川万源；

2、天冬对照药材：中国药品食品检测研究院。

3、对照品，薯蓣皂苷和伪原薯蓣皂苷：中国药品食品检测研究院。

鉴别方法：

1、供试品溶液制备：

分别称取上述贵州遵义等3个产地产的天冬饮片粉末0.8g，分别置50ml离心管中，加入65％甲醇10ml，超声30min(8000r/min，离心5min)，取上清液转移至25ml量瓶中，重复两次，合并上清液，加65％甲醇至刻度，蒸干，加10ml水溶解，水层再加水饱和正丁醇振摇提取3次，每次10ml，离心5min(3000r/min)，合并正丁醇液，加氨试液洗3～5次，每次10ml，洗至下层溶液澄清为止，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，加甲醇定容至2mL容量瓶中，得3个供试品溶液；

2、对照药材溶液的制备：

取天冬对照药材0.8g，按上述方法制成对照药材溶液；

对照品溶液制备：

分别精密称取薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷适量，加甲醇制成每1mL含1mg的对照品溶液，得对照品溶液；

3、薄层色谱检测方法：

照薄层色谱法，分别吸取经制备的3个供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液7μl，点于同一高效薄层板上，将薄层板置于槽层析缸中，加入新制备的展开剂于另一槽内，预先饱和30min，再将展开剂小心倾入至薄层板的槽层缸中，展开约8cm，取出，标记溶剂前沿，晾干，均匀浸润显色剂后，在105℃加热，直至斑点或条带清晰可见(约2-4分钟)。置可见光和紫外光灯(365nm)下检视，并计算Rf值。

4、检测结果：

日光下观察：图1所示，在薄层板下1/3部分，在Rf约为0.25和0.31的位置，天冬供试品溶液与原薯蓣皂苷和伪原薯蓣皂苷对照品以及对照药材色谱相应的位置上，显相同的棕色斑点，都具有Rf值相应的特征斑点或条带。

紫外光灯下(365nm)观察：图2所示，在薄层板下1/3部分，在Rf约为0.25和0.31的位置，天冬供试品溶液与原薯蓣皂苷和伪原薯蓣皂苷对照品以及对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝色荧光斑点，都具有Rf值相应的特征斑点或条带。

Claims (4)

1.二冬汤组方中天冬饮片的薄层色谱鉴别方法，其特征在于该方法包括供试品溶液的制备、对照药材溶液的制备、对照品溶液的制备以及薄层色谱检测方法；

1.1所述供试品溶液制备包括以下步骤：

精密称取天冬饮片粉末0.8g，置50ml离心管中，加入65％甲醇10ml，超声30min(8000r/min，离心5min)，取上清液转移至25ml量瓶中，重复两次，合并上清液，加65％甲醇至刻度。蒸干，加10ml水溶解，水层再加水饱和正丁醇振摇提取3次，每次10ml，离心5min(3000r/min)，合并正丁醇液，加氨试液洗3～5次，每次10ml，洗至下层溶液澄清为止，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，加甲醇定容至2mL容量瓶中，得供试品溶液；

1.2所述对照药材溶液制备包括以下步骤：

取天冬对照药材0.8g，按上述方法制成对照药材溶液；

1.3所述对照品溶液制备包括以下步骤：

分别精密称取对照品适量，加甲醇制成每1mL含1mg的对照品溶液，得对照品溶液；

1.4所述薄层色谱检测方法包括以下步骤：

照薄层色谱法，分别吸取经制备的供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液7μl，点于同一高效薄层板上，将薄层板置于槽层析缸中，加入新制备的展开剂于另一槽内，预先饱和30min，再将展开剂小心倾入至薄层板的槽层缸中，展开约8cm，取出，标记溶剂前沿，晾干，均匀浸润显色剂后，在105℃加热，直至斑点或条带清晰可见(约2-4分钟)。置可见光和紫外光灯(365nm)下检视。

2.如权利要求1所述二冬汤组方中天冬饮片的薄层色谱鉴别方法，其特征在于所述对照品为薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷。

3.如权利要求1所述二冬汤组方中天冬饮片的薄层色谱鉴别方法，其特征在于所述展开剂为三氯甲烷∶甲醇∶水(65∶35∶10)的下层溶液。

4.如权利要求1所述二冬汤组方中天冬饮片的薄层色谱鉴别方法，其特征在于所述显色剂为10％硫酸乙醇溶液。