CN110584118A - 一种婴幼儿用益生菌粉的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种婴幼儿用益生菌粉的制备方法,包括:S1,将乳双歧杆菌Bi‑07接种到培养基中,发酵培养,离心得菌泥,向菌泥中添加第一保护剂后,冻干成乳双歧杆菌Bi‑07菌粉;S2,将乳双歧杆菌HN019接种到培养基中,发酵培养,离心得菌泥,向菌泥中添加第一保护剂后,冻干成乳双歧杆菌HN019菌粉;S3,将鼠李糖乳杆菌HN001接种到培养基中,发酵培养,离心得菌泥,向菌泥中添加第二保护剂后,冻干成鼠李糖乳杆菌HN001菌粉;S4,将乳双歧杆菌Bi‑07菌粉、乳双歧杆菌HN019菌粉、鼠李糖乳杆菌HN001菌粉以及低聚果糖以等量递增的方式进行混合,制得益生菌粉。本发明菌种搭配合理,并且培养基全部为可食用物质,可以直接制备益生菌粉,更安全健康;制备方法科学合理,益生菌存活率高。
Description
技术领域
本发明涉及益生菌领域,尤其涉及一种婴幼儿用益生菌粉的制备方法。
背景技术
婴幼儿需要补充益生菌的理由大致分为两个方面:一是改善免疫力,预防多种疾病;二是促进消化,让宝宝健康快乐地长大。许多宝宝从健康母体刚出生时是洁净的,在出生后的几天后,宝宝的胃肠道中就会定植细菌。随着肠道内、皮肤上正常细菌的寄存,人体的免疫系统就开始启动、发育,直到基本成熟。婴儿的肠胃系统占到了免疫系统的三分之二,所以胃肠道中正常菌群的建立就显得至关重要,如果菌群建立过迟或不良,就会导致出现相应的疾病。
宝宝肚中常见的益生菌能够抵抗致病菌从宝宝肠道上入侵并定植,因为它们是夺取营养素的强者且紧紧地黏附于肠道壁。当肠道中“居住”足量的益生菌时,有害菌就没有地方“定居”。益生菌产生的醋酸和乳酸增加了肠道的酸度,进一步阻止了不良菌的生长。这些友善细菌还有助于氮素的保留,使宝宝保持正常的体重。
目前市场上的益生菌产品菌种较为单一,且在益生菌的培养过程当中会使用很多的化学原料,增加了益生菌的分离难度,且若分离不完全,残留的化学原料也不利于婴幼儿的身体健康。
发明内容
为解决现有技术存在的不足,本发明提供了一种婴幼儿用益生菌粉的制备方法,包括以下步骤:
S1将乳双歧杆菌Bi-07接种到培养基中,发酵培养,离心得菌泥,向菌泥中添加第一保护剂后,冻干成乳双歧杆菌Bi-07菌粉;
S2将乳双歧杆菌HN019接种到培养基中,发酵培养,离心得菌泥,向菌泥中添加第一保护剂后,冻干成乳双歧杆菌HN019菌粉;
S3将鼠李糖乳杆菌HN001接种到培养基中,发酵培养,离心得菌泥,向菌泥中添加第二保护剂后,冻干成鼠李糖乳杆菌HN001菌粉;以及
S4将乳双歧杆菌Bi-07菌粉、乳双歧杆菌HN019菌粉、鼠李糖乳杆菌HN001菌粉以及低聚果糖以等量递增的方式进行混合,制得益生菌粉。
进一步地,乳双歧杆菌Bi-07菌粉的质量份数为9-10份、乳双歧杆菌HN019菌粉的质量份数为9-10份、鼠李糖乳杆菌HN001菌粉的质量份数为9-10份以及低聚果糖的质量份数为1470-1473份。
进一步地,所述培养基包含有20~25质量份的乳糖、10~15质量份的鲜牛乳、32~38质量份的番茄汁、3~12质量份的鱼浆以及15~20质量份的乌梅汁。
进一步地,所述番茄汁的制备方法为取100~120g番茄加入50~70g水后,榨汁,然后煮沸2~5分钟,110~150℃灭菌20~30min。
进一步地,所述鱼浆的制备方法为取50~60g鱼肉,加水100~120g,打碎为鱼肉浆,煮沸5~10分钟,110~150℃灭菌20~30min。
进一步地,所述乌梅汁的制备方法为取50~60g乌梅粉,加水200~250g,煮沸30~60分钟,静置,取上层液体,110~150℃灭菌20~30min。
进一步地,所述第一保护剂的制备方法包括以下步骤:
1)向蒸馏水中添加7~10质量份的海藻糖、6~8质量份的木糖醇、8~12质量份的甘油、1~2质量份的甘露醇和0.5~1质量份的叔丁醇,搅拌溶解,灭菌;
2)向蒸馏水中添加1~3质量份的L-丝氨酸、0.5~1质量份的磷酸二氢钾和0.5~1质量份的硫酸亚铁,搅拌溶解,调节pH为6~6.5,灭菌;
3)向蒸馏水中添加15~25质量份的乳糖和20~30质量份的脱脂乳粉,搅拌溶解,灭菌;以及
4)将步骤1)、2)及3)所制备的溶液混合,并添加蒸馏水至总质量份分数为100份,得第一保护剂。
进一步地,所述第二保护剂的制备方法包括以下步骤:
1)向蒸馏水中添加7~10质量份的海藻糖、6~8质量份的木糖醇、8~12质量份的甘油和1~1.5质量份的叔丁醇,搅拌溶解,灭菌;
2)向蒸馏水中添加2~5质量份的丙氨酸、0.5~0.8质量份的三聚磷酸钠和0.5~1.3质量份的硫酸亚铁,搅拌溶解,调节pH为6.5~7,灭菌;
3)向蒸馏水中添加15~25质量份的乳糖和20~30质量份的脱脂乳粉,搅拌溶解,灭菌;以及
4)将步骤1)、2)及3)所制备的溶液混合,并添加蒸馏水至总质量份数为100份,灭菌,得第二保护剂。
进一步地,所述冻干包括有以下步骤:
1)将添加有保护剂的菌泥在5~15min内预冷冻至-45~-55℃,保持1.5~2h,然后继续降温至-65~-75℃,冷冻2~3h;以及
2)继续在真空度为10~15Pa,温度为-65~-75℃条件下,真空冷冻3~5h;真空度为5~10Pa,温度为-40~-55℃条件下,真空冷冻12~15h;真空度为5~10Pa,温度为-15~-25℃条件下,真空冷冻2~3h;真空度为2~5Pa,温度为-5~0℃条件下,真空冷冻1~2h;真空度为0.5~1.5Pa,温度为0~10℃条件下,真空冷冻2~5h。
本发明的有益效果是:
本发明制备的益生菌菌种搭配合理,能够在婴幼儿体内有效建立益生菌群,并且培养基全部为可食用物质,后期不需要分离培养基,可以直接制备益生菌粉,更安全健康;制备方法科学合理,益生菌存活率高。
附图说明
图1为本发明的婴幼儿用益生菌粉生产工艺流程图。
具体实施方式
为了对本发明的技术方案及有益效果有更进一步的了解,下面结合附图详细说明本发明的技术方案及其产生的有益效果。
一种婴幼儿用益生菌粉的制备方法,包括以下步骤:
S1,将乳双歧杆菌Bi-07接种到培养基中,发酵培养,离心得菌泥,向菌泥中添加第一保护剂后,冻干成乳双歧杆菌Bi-07菌粉;
S2,将乳双歧杆菌HN019接种到培养基中,发酵培养,离心得菌泥,向菌泥中添加第一保护剂后,冻干成乳双歧杆菌HN019菌粉;
S3,将鼠李糖乳杆菌HN001接种到培养基中,发酵培养,离心得菌泥,向菌泥中添加第二保护剂后,冻干成鼠李糖乳杆菌HN001菌粉;
S4,将乳双歧杆菌Bi-07菌粉、乳双歧杆菌HN019菌粉、鼠李糖乳杆菌HN001菌粉以及低聚果糖以等量递增的方式进行混合,制得益生菌粉。
本发明所述的益生菌粉含有三种益生菌,十分有利于在婴幼儿体内建立有益菌群。
所述乳双歧杆菌Bi-07菌粉的质量份数为9-10份、乳双歧杆菌HN019菌粉的质量份数为9-10份、鼠李糖乳杆菌HN001菌粉的质量份数为9-10份以及低聚果糖的质量份数为1470-1473份。
所述培养基包含有乳糖20~25质量份、鲜牛乳10~15质量份、番茄汁32~38质量份、鱼浆3~12质量份以及乌梅汁15~20质量份。
所述番茄汁的制备方法为取100~120g番茄加入50~70g水后,榨汁,然后煮沸2~5分钟,110~150℃灭菌20~30min。
所述鱼浆的制备方法为取50~60g鱼肉,加水100~120g,打碎为鱼肉浆,煮沸5~10分钟,110~150℃灭菌20~30min。
所述乌梅汁的制备方法为取50~60g乌梅粉,加水200~250g,煮沸30~60分钟,静置,取上层液体,110~150℃灭菌20~30min。
本发明所述的培养基,所用原料均为直接可食用物质,适合用于制备婴儿所用的益生菌产品。并且,该培养基培养的益生菌菌数浓度高、存活率高。
所述第一保护剂的制备方法包括以下步骤:
1)向蒸馏水中添加7~10质量份的海藻糖、6~8质量份的木糖醇、8~12质量份的甘油、1~2质量份的甘露醇和0.5~1质量份的叔丁醇,搅拌溶解,灭菌;
2)向蒸馏水中添加1~3质量份的L-丝氨酸、0.5~1质量份的磷酸二氢钾和0.5~1质量份的硫酸亚铁,搅拌溶解,调节pH为6~6.5,灭菌;
3)向蒸馏水中添加15~25质量份的乳糖和20~30质量份的脱脂乳粉,搅拌溶解,灭菌;以及
4)将步骤1)、2)及3)所制备的溶液混合,并添加蒸馏水至总质量分数为100份,得第一保护剂。
所述第二保护剂的制备方法包括以下步骤:
1)向蒸馏水中添加7~10质量份的海藻糖、6~8质量份的木糖醇、8~12质量份的甘油和1~1.5质量份的叔丁醇,搅拌溶解,灭菌;
2)向蒸馏水中添加2~5质量份的丙氨酸、0.5~0.8质量份的三聚磷酸钠和0.5~1.3质量份的硫酸亚铁,搅拌溶解,调节pH为6.5~7,灭菌;
3)向蒸馏水中添加15~25质量份的乳糖和20~30质量份的脱脂乳粉,搅拌溶解,灭菌;
4)将步骤1)、2)及3)所制备的溶液混合,并添加蒸馏水至总质量分数为100份,灭菌,得第二保护剂。
所述冻干包括以下步骤:
1),将添加有保护剂的菌泥在5~15min内预冷冻至-45~-55℃,保持1.5~2h,然后继续降温至-65~-75℃,冷冻2~3h;
2),继续在真空度为10~15Pa,温度为-65~-75℃条件下,真空冷冻3~5h;真空度为5~10Pa,温度为-40~-55℃条件下,真空冷冻12~15h;真空度为5~10Pa,温度为-15~-25℃条件下,真空冷冻2~3h;真空度为2~5Pa,温度为-5~0℃条件下,真空冷冻1~2h;真空度为0.5~1.5Pa,温度为0~10℃条件下,真空冷冻2~5h。
使用本发明所述保护剂,可以使菌种在冻干过程中有良好的成活率,并且添加有合适量的木糖醇,使制得的菌粉在存储过程中不容易吸潮,若木糖醇添加太多,则会导致菌种的成活率下降;若木糖醇添加过少,则抑制吸潮效果不佳;本发明所述的冻干方法还可以快速度过容易造成低温损伤的危险区,快速降温可以防止形成尺寸过大的冰晶,减少冰晶对细胞的穿刺风险。
乳双歧杆菌Bi-07发酵培养的过程为将乳双歧杆菌Bi-07按4~6%(v/v)的接种量介入到培养基中,发酵温度为40~43℃,厌氧发酵培养8~15h。
乳双歧杆菌HN019发酵培养的过程为将乳双歧杆菌HN019按3~8%(v/v)的接种量介入到培养基中,发酵温度为37~40℃,厌氧发酵培养8~15h。
鼠李糖乳杆菌HN001发酵培养的过程为将鼠李糖乳杆菌HN001按4~6%(v/v)的接种量介入到培养基中,发酵温度为37~40℃,厌氧发酵培养8~15h。
图1为本发明制备婴幼儿用益生菌粉的工艺流程图。如图1所示,本发明提供的婴幼儿用益生菌粉,成品主要包括乳双歧杆菌Bi-07菌粉、乳双歧杆菌HN019菌粉、鼠李糖乳杆菌HN001菌粉以及低聚果糖。
在实际生产中,原料混装及封装主要有以下几个步骤:
1、检验
所有原辅料、内包装材料均经过检验合格后方可领入车间使用。
2、预处理
物料经清洁消毒后传进洁净车间,备用。将不少于处方量的低聚果糖置于热风循环烘箱80±5℃干燥水分至2%以下后进行投料,若低聚果糖水分在2%以下可直接进行投料。期间每30分钟记录一次温度。烘干后的物料过30目筛,备用。
3、称量配料与混合
按处方量称取乳双歧杆菌Bi-07菌粉、乳双歧杆菌HN019菌粉、鼠李糖乳杆菌HN001菌粉及低聚果糖按等量递增方式进行混合均匀。混合结束,将混粉装入内衬2层聚乙烯塑料袋的物料桶中,扎紧袋口,称重,贴上标签,检验,备用。
4、内包装
按净重1.5g/袋分装,装量控制不低于理论装量的95%,每台机器每隔15分钟称一次小包装量,每次称取连续4包,确保装量准确。按设备的操作规程进行内包装,生产结束后按SOP要求清场。
5、外包装
小盒包装、装箱。
实施例1:制作培养基
取100g番茄加入50g水后,榨汁,然后煮沸2分钟,110℃灭菌20min,制得番茄汁。
取50g鱼肉,加水100g,打碎为鱼肉浆,煮沸5分钟,110℃灭菌20~30min,制得鱼浆。
取50g乌梅粉,加水200g,煮沸30分钟,静置,取上层液体,110℃灭菌20~30min,制得乌梅汁。
取乳糖20质量份、鲜牛乳10质量份、番茄汁32质量份、鱼浆3质量份以及乌梅汁15质量份,混合均为,制得培养基。
实施例2:第一保护剂的制备
1)向蒸馏水中添加7质量份的海藻糖、6质量份的木糖醇、8质量份的甘油、1质量份的甘露醇和0.5质量份的叔丁醇,搅拌溶解,灭菌;
2)向蒸馏水中添加1质量份的L-丝氨酸、0.5质量份的磷酸二氢钾和0.5质量份的硫酸亚铁,搅拌溶解,调节pH为6,灭菌;
3)向蒸馏水中添加15质量份的乳糖和20质量份的脱脂乳粉,搅拌溶解,灭菌;以及
4)将步骤1)、2)及3)所制备的溶液混合,并添加蒸馏水至总质量分数为100份,得第一保护剂。
实施例3:第二保护剂的制备
1)向蒸馏水中添加7质量份的海藻糖、6质量份的木糖醇、8质量份的甘油和1质量份的叔丁醇,搅拌溶解,灭菌;
2)向蒸馏水中添加2质量份的丙氨酸、0.5质量份的三聚磷酸钠和0.5质量份的硫酸亚铁,搅拌溶解,调节pH为6.5,灭菌;
3)向蒸馏水中添加15质量份的乳糖和20质量份的脱脂乳粉,搅拌溶解,灭菌;以及
4)将步骤1)、2)及3)所制备的溶液混合,并添加蒸馏水至总质量份数为100份,灭菌,得第二保护剂。
实施例4:益生菌粉制备一
乳双歧杆菌Bi-07菌粉的制备:将乳双歧杆菌Bi-07按4%(v/v)的接种量介入到实施例1制备的培养基中,发酵温度为40℃,厌氧发酵培养8h,离心得菌泥,向菌泥中添加实施例2制备的第一保护剂后,在5min内预冷冻至-45℃,保持1.5h,然后继续降温至-65℃,冷冻2h;继续在真空度为10Pa,温度为-65℃条件下,真空冷冻3h;真空度为5Pa,温度为-40℃条件下,真空冷冻12h;真空度为5Pa,温度为-15℃条件下,真空冷冻2h;真空度为2Pa,温度为-5℃条件下,真空冷冻1h;真空度为0.5Pa,温度为0℃条件下,真空冷冻2h。
乳双歧杆菌HN019菌粉的制备:与乳双歧杆菌Bi-07菌粉的制备相同,不同之处在于接种量为3%(v/v),发酵温度为37℃。
鼠李糖乳杆菌HN001菌粉的制备:与乳双歧杆菌Bi-07菌粉的制备相同,不同之处在于发酵温度为37℃。
将乳双歧杆菌Bi-07菌粉10份、乳双歧杆菌HN019菌粉10份、鼠李糖乳杆菌HN001菌粉10份及低聚果糖1470份的质量比例,以等量递增的方式进行混合,得到产品。
实施例5:益生菌粉制备二
乳双歧杆菌Bi-07菌粉的制备:将乳双歧杆菌Bi-07按6%(v/v)的接种量介入到实施例1制备的培养基中,发酵温度为43℃,厌氧发酵培养15h,离心得菌泥,向菌泥中添加实施例2制备的第一保护剂后,15min内预冷冻至-55℃,保持2h,然后继续降温至-75℃,冷冻3h;继续在真空度为15Pa,温度为-75℃条件下,真空冷冻5h;真空度为10Pa,温度为-55℃条件下,真空冷冻15h;真空度为10Pa,温度为-25℃条件下,真空冷冻3h;真空度为5Pa,温度为0℃条件下,真空冷冻2h;真空度为1.5Pa,温度为10℃条件下,真空冷冻5h。
乳双歧杆菌HN019菌粉的制备:与乳双歧杆菌Bi-07菌粉的制备相同,不同之处在于接种量为8%(v/v),发酵温度为40℃。
鼠李糖乳杆菌HN001菌粉的制备:与乳双歧杆菌Bi-07菌粉的制备相同,不同之处在于发酵温度为40℃。
将乳双歧杆菌Bi-07菌粉9份、乳双歧杆菌HN019菌粉9份、鼠李糖乳杆菌HN001菌粉9份及低聚果糖1473份的质量比例,以等量递增的方式进行混合,得到产品。
实施例6:益生菌粉制备三
乳双歧杆菌Bi-07菌粉的制备:将乳双歧杆菌Bi-07按6%(v/v)的接种量介入到实施例1制备的培养基中,发酵温度为43℃,厌氧发酵培养15h,离心得菌泥,向菌泥中添加实施例2制备的第一保护剂后,10min内预冷冻至-50℃,保持2h,然后继续降温至-70℃,冷冻2.5h;继续在真空度为12Pa,温度为-70℃条件下,真空冷冻4h;真空度为7Pa,温度为-50℃条件下,真空冷冻13h;真空度为7Pa,温度为-20℃条件下,真空冷冻2.5h;真空度为3Pa,温度为-3℃条件下,真空冷冻1.5h;真空度为1Pa,温度为5℃条件下,真空冷冻4h。
乳双歧杆菌HN019菌粉的制备:与乳双歧杆菌Bi-07菌粉的制备相同,不同之处在于接种量为8%(v/v),发酵温度为40℃。
鼠李糖乳杆菌HN001菌粉的制备:与乳双歧杆菌Bi-07菌粉的制备相同,不同之处在于发酵温度为40℃。
将乳双歧杆菌Bi-07菌粉9份、乳双歧杆菌HN019菌粉10份、鼠李糖乳杆菌HN001菌粉10份及低聚果糖1471份的质量比例,以等量递增的方式进行混合,得到产品。
将实施例4~6制得的产品分别测定在当天的活菌数,并分别在4℃和-20℃条件下保存,在1个月、6个月、12个月、24个月后测定总活菌数,结合初始活菌数计算存活率。
表1 4℃条件下保存的存活率(%)
表2 -20℃条件下保存的存活率(%)
保存时间(月) | 实施例4 | 实施例5 | 实施例6 |
0 | 96.33 | 96.86 | 97.60 |
1 | 84.64 | 84.79 | 84.29 |
6 | 71.58 | 71.15 | 71.72 |
12 | 58.41 | 58.19 | 58.52 |
24 | 46.78 | 47.15 | 46.21 |
虽然本发明已利用上述较佳实施例进行说明,然其并非用以限定本发明的保护范围,任何本领域技术人员在不脱离本发明的精神和范围之内,相对上述实施例进行各种变动与修改仍属本发明所保护的范围,因此本发明的保护范围以权利要求书所界定的为准。
Claims (9)
1.一种婴幼儿用益生菌粉的制备方法,其特征在于包括以下步骤:
S1 将乳双歧杆菌Bi-07接种到培养基中,发酵培养,离心得菌泥,向菌泥中添加第一保护剂后,冻干成乳双歧杆菌Bi-07菌粉;
S2 将乳双歧杆菌HN019接种到培养基中,发酵培养,离心得菌泥,向菌泥中添加第一保护剂后,冻干成乳双歧杆菌HN019菌粉;
S3 将鼠李糖乳杆菌HN001接种到培养基中,发酵培养,离心得菌泥,向菌泥中添加第二保护剂后,冻干成鼠李糖乳杆菌HN001菌粉;以及
S4 将乳双歧杆菌Bi-07菌粉、乳双歧杆菌HN019菌粉、鼠李糖乳杆菌HN001菌粉以及低聚果糖以等量递增的方式进行混合,制得益生菌粉。
2.根据权利要求1所述的一种婴幼儿用益生菌粉的制备方法,其特征在于,乳双歧杆菌Bi-07菌粉的质量份数为9-10份、乳双歧杆菌HN019菌粉的质量份数为9-10份、鼠李糖乳杆菌HN001菌粉的质量份数为9-10份以及低聚果糖的质量份数为1470-1473份。
3.根据权利要求1所述的一种婴幼儿用益生菌粉的制备方法,其特征在于,所述培养基包含有20~25质量份的乳糖、10~15质量份的鲜牛乳、32~38质量份的番茄汁、3~12质量份的鱼浆以及15~20质量份的乌梅汁。
4.根据权利要求3所述的一种婴幼儿用益生菌粉的制备方法,其特征在于,所述番茄汁的制备方法为取100~120g番茄加入50~70g水后,榨汁,然后煮沸2~5分钟,110~150℃灭菌20~30min。
5.根据权利要求3所述的一种婴幼儿用益生菌粉的制备方法,其特征在于,所述鱼浆的制备方法为取50~60g鱼肉,加水100~120g,打碎为鱼肉浆,煮沸5~10分钟,110~150℃灭菌20~30min。
6.根据权利要求3所述的一种婴幼儿用益生菌粉的制备方法,其特征在于,所述乌梅汁的制备方法为取50~60g乌梅粉,加水200~250g,煮沸30~60分钟,静置,取上层液体,110~150℃灭菌20~30min。
7.根据权利要求1所述的一种婴幼儿用益生菌粉的制备方法,其特征在于,所述第一保护剂的制备方法包括以下步骤:
1)向蒸馏水中添加7~10质量份的海藻糖、6~8质量份的木糖醇、8~12质量份的甘油、1~2质量份的甘露醇和0.5~1质量份的叔丁醇,搅拌溶解,灭菌;
2)向蒸馏水中添加1~3质量份的L-丝氨酸、0.5~1质量份的磷酸二氢钾和0.5~1质量份的硫酸亚铁,搅拌溶解,调节pH为6~6.5,灭菌;
3)向蒸馏水中添加15~25质量份的乳糖和20~30质量份的脱脂乳粉,搅拌溶解,灭菌;以及
4)将步骤1)、2)及3)所制备的溶液混合,并添加蒸馏水至总质量份分数为100份,得第一保护剂。
8.根据权利要求1所述的一种婴幼儿用益生菌粉的制备方法,其特征在于,所述第二保护剂的制备方法包括以下步骤:
1)向蒸馏水中添加7~10质量份的海藻糖、6~8质量份的木糖醇、8~12质量份的甘油和1~1.5质量份的叔丁醇,搅拌溶解,灭菌;
2)向蒸馏水中添加2~5质量份的丙氨酸、0.5~0.8质量份的三聚磷酸钠和0.5~1.3质量份的硫酸亚铁,搅拌溶解,调节pH为6.5~7,灭菌;
3)向蒸馏水中添加15~25质量份的乳糖和20~30质量份的脱脂乳粉,搅拌溶解,灭菌;以及
4)将步骤1)、2)及3)所制备的溶液混合,并添加蒸馏水至总质量份数为100份,灭菌,得第二保护剂。
9.根据权利要求1所述的一种婴幼儿用益生菌粉的制备方法,其特征在于,所述冻干包括有以下步骤:
1)将添加有保护剂的菌泥在5~15min内预冷冻至-45~-55℃,保持1.5~2h,然后继续降温至-65~-75℃,冷冻2~3h;以及
2)继续在真空度为10~15Pa,温度为-65~-75℃条件下,真空冷冻3~5h;真空度为5~10Pa,温度为-40~-55℃条件下,真空冷冻12~15h;真空度为5~10Pa,温度为-15~-25℃条件下,真空冷冻2~3h;真空度为2~5Pa,温度为-5~0℃条件下,真空冷冻1~2h;真空度为0.5~1.5Pa,温度为0~10℃条件下,真空冷冻2~5h。
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