CN110559468B - 含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴及制备方法和应用 - Google Patents

含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴及制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴，其料液部分按照质量百分比由以下组分组成，包裹人成纤维细胞调节培养液脂质体冻干粉A 1～8％，混合溶液B 92～99％，以上各组分的质量百分比为100％，且A、B部分独立包装。本发明医用敷料贴将包裹人成纤维细胞调节培养液脂质体冻干粉与混合溶液结合，应用于创伤修复，利于培养液中活性成分的吸收，增强细胞因子、胶原蛋白的透皮吸收能力，提高了人成纤维细胞调节培养液中细胞因子的生物利用度。此外，透明质酸钠能够促进细胞迁移、分化及创伤愈合，具有高粘度弹性、可塑性及良好的生物相容性，二者结合，利于皮肤损伤部位的修复。

Description

含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴及制备方法和应用
技术领域
本发明属于医疗器械技术领域，具体涉及一种含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴，本发明还涉及该医用敷料贴的制备方法，本发明还涉及上述医用敷料贴的应用。
背景技术
随着我国社会和经济的发展，医疗器械市场日益增长，面部创伤的修复成为人们越来越关心的话题，各种透明质酸类、胶原蛋白类医用敷料不断应用于面部美容与创伤治疗的修复。创伤修复的过程，不仅是细胞增殖、分化、迁移、凋亡和消失的过程，同时也是一系列不同类型细胞、结构蛋白、生长因子等形成网络式交互作用的结果。已有研究证实，生长因子具有多功能性，能够参与调控创伤修复的各个阶段。
成纤维细胞(Fibroblast cell，Fbs)是构成皮肤真皮层的主要细胞，能够合成和分泌胶原纤维、弹性纤维、网状纤维、透明质酸等细胞外基质，对于保持皮肤强度和弹性、修复损伤、伤口愈合和美容美体等具有重要的作用，是维持皮肤年轻的决定性因素，也是维持皮肤结构稳定的重要组成成分。对皮肤组织中的成纤维细胞进行培养获得的人成纤维细胞调节培养液，由于其富含生物活性成分(如：各类细胞生长因子、胶原蛋白、氨基酸等)使其在生物技术领域中迅速发展。由于人成纤维细胞调节培养液中的活性成分能对面部创面修复起到很好的修护效果，且细胞培养液的生产方法脱离了化工生产工艺，安全性好，因此具有广泛的应用前景。但人成纤维细胞调节培养液属于生物活性制品，其包含的各类细胞生长因子及胶原蛋白等活性成分易失活，且存储条件苛刻，通常需-80℃冷冻或冷藏保存，将其直接添加到敷料中，极易失活，达不到创面修复的效果，极大的限制了其在医疗器械技术领域的应用。
目前，已上市的敷料产品大多为壳聚糖类、纤维素类、透明质酸类等，但这些敷料产品均不包含生物活性成分，未能从细胞层面解决皮肤损伤的问题。基于此，本发明制备了含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴，包含具有高生物活性的各类细胞生长因子、胶原蛋白、氨基酸等生物活性成分，能够从根源上解决面部皮肤损伤问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴，将人成纤维细胞调节培养液中的有效成分传递到皮肤肌底层，从而达到修复皮肤细胞，促进创面愈合的目的。
本发明的另一目的在于提供上述医用敷料贴的制备方法。
本发明的第三个目的在于提供上述医用敷料贴在激素依赖性皮炎方面的应用，解决现有敷料产品效果不明显的问题。
本发明所采用的第一个技术方案为：含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴，其料液部分按照质量百分比由以下组分组成，包裹人成纤维细胞调节培养液脂质体冻干粉A1～8％，混合溶液B 92～99％，以上各组分的质量百分比为100％，且A、B部分独立包装。
本发明所采用第一个技术方案的特点还在于，
包裹人成纤维细胞调节培养液脂质体冻干粉A，按照质量百分比由以下组分组成：人成纤维细胞调节培养浓缩液活性蛋白0.5～3％，大豆卵磷脂14～50％，胆固醇4～16％，维生素E1～15％，海藻糖15～35％，甘露醇15～35％，以上各组分的质量百分比总和为100％；
包裹人成纤维细胞调节培养液脂质体冻干粉A中大豆卵磷脂、胆固醇、维生素E、海藻糖和甘露醇均为医药级；
混合溶液B，按照质量百分比由以下组分组成：大分子透明质酸钠0.08～0.5％，低分子量透明质酸钠0.06～0.8％，小分子量透明质酸钠0.02～0.3％，甘油2～9％，卡波姆0.1～0.6％，三乙醇胺(TEA)0.1～0.6％，蒸馏水89.3～97％，以上组分的质量百分比之和为100％；
混合溶液B中大分子量透明质酸钠的分子量为1300kDa～1500kDa，低分子量透明质酸钠的分子量为200kDa～400kDa，小分子量透明质酸钠的分子量为3kDa～10kDa，大分子透明质酸钠、低分子量透明质酸钠、小分子量透明质酸钠、甘油和卡波姆均为医药级；
混合溶液B中卡波姆为卡波姆940、卡波姆980中的一种或两种。
本发明所采用的第二个技术方案为：含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴的制备方法，具体按照以下步骤进行实施：
步骤1，包裹人成纤维细胞调节培养液脂质体冻干粉A的制备：
步骤1.1，包裹人成纤维细胞调节培养液脂质体悬液的制备：
用无水乙醇溶解3～18％的大豆卵磷脂、1～6％胆固醇及0.1～3％维生素E，在0.04～0.06Mpa，35～40℃条件下减压旋转蒸发去除无水乙醇，得均匀薄膜；将20～50％人成纤维细胞调节培养浓缩液、5～10％海藻糖、5～10％甘露醇加入质量百分比为3～65.9％的磷酸盐缓冲液中，混匀后使用该混合液旋转清洗薄膜并振摇水化30～60min，将水化后的混合物经脂质体挤出仪挤出10～20次，即得到人成纤维细胞调节培养液脂质体；
步骤1.2，包裹人成纤维细胞调节培养液脂质体冻干粉的制备：
将步骤1.1制得的脂质体悬液于-40～-20℃预冻3～6h，冷冻干燥24～48h，得包裹人成纤维细胞调节培养液活性成分的脂质体冻干粉；
步骤2，混合溶液B的制备：
按照质量百分比分别称取大分子透明质酸钠0.08～0.5％，低分子量透明质酸钠0.06～0.8％，小分子量透明质酸钠0.02～0.3％，卡波姆0.1～0.6％，甘油2～9％，搅拌使透明质酸钠在甘油中均匀分散，混匀，加至60～80℃质量百分比为89.3～97％的蒸馏水中，300～700r/min速率下搅拌后加入0.1～0.6％TEA，继续搅拌混匀后30～60min后冷却至室温，得混合溶液；
步骤3，含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴的制备：
取步骤1制得的脂质体冻干粉A 1～8％，取步骤2制得的混合溶液B92～99％，将A、B两部分及经辐照灭菌处理的蚕丝膜布独立包装即得含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴。
本发明采用第二种技术方案的特点还在于，
步骤1.1中，人成纤维细胞调节培养浓缩液的制备方法如下：将人成纤维细胞调节培养液超滤浓缩，滤液用0.22μm的无菌过滤器过滤除菌，得人成纤维细胞调节培养浓缩液，浓缩液蛋白浓度为10～20mg/mL。
步骤1.1中大豆卵磷脂、胆固醇、维生素E的总质量与无水乙醇的质量比＝1:3～1:5；
步骤1.1中磷酸盐缓冲液的pH＝6.8，浓度为5mmol/L，所述海藻糖、甘露醇的总质量与磷酸盐缓冲液的体积比＝1:1～1:5；
步骤1.1中脂质体挤出仪中PC膜的孔径依次为0.4μm、0.2μm，得到的人成纤维细胞调节培养液脂质体的粒径为160～190nm；
步骤3中蚕丝膜布使用前经Co60 25kGy辐照灭菌处理。
本发明所采用的第三种技术方案为：含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴在激素依赖性皮炎方面的应用。
本发明的有益效果是：
1.本发明将人成纤维细胞调节培养液制备为脂质体冻干粉，可常温保存3年，解决了人成纤维细胞调节培养液保存期限短，存储条件苛刻的问题。
2.本发明医用敷料贴将包裹人成纤维细胞调节培养液脂质体冻干粉与制得的混合溶液结合，应用于创伤修复，利于培养液中活性成分的吸收，增强细胞因子、胶原蛋白的透皮吸收能力，降低刺激，减少不良反应，提高了人成纤维细胞调节培养液中细胞因子的生物利用度。此外，混合溶液中透明质酸钠能够促进细胞迁移、分化及创伤愈合，具有高粘度弹性、可塑性及良好的生物相容性，二者结合，有利于皮肤损伤部位的修复。
3.本发明医用敷料贴采用脂质体冻干粉、混合溶液及膜布分离的包装，延长了该敷料贴的保存期限，提高了人成纤维细胞调节培养液中活性成分的有效期。
4.本发明医用敷料贴中活性成分生物利用度高，无毒副作用，产品符合医疗器械产品标准，具有促进损伤修复、恢复组织生长的功效。
附图说明
图1是本发明制备含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴的工艺流程图；
图2是本发明实施例2所得的包裹人成纤维细胞调节培养液脂质体粒径检测图；
图3是本发明实施例2所得的包裹人成纤维细胞调节培养液脂质体的包封率随时间的变化图；
图4是激素依赖性皮炎患者使用本发明医用敷料贴及普通敷料贴0～4周后所述症状效果改善百分比图；
图5是激素依赖性皮炎患者使用本发明医用敷料贴及普通敷料贴0～4周后的皮肤角质层含水量图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步的详细说明。
本发明含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴，包括料液及蚕丝膜布，其料液按照质量百分比由以下组分组成，包裹人成纤维细胞调节培养液脂质体冻干粉A 1～8％，混合溶液B 92～99％，以上各组分的质量百分比总和为100％，且A、B及蚕丝膜布独立包装。
含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴，其中包裹人成纤维细胞调节培养液脂质体冻干粉A，按照质量百分比由以下组分组成：人成纤维细胞调节培养浓缩液活性蛋白0.5～3％，大豆卵磷脂14～50％，胆固醇4～16％，维生素E 1～15％，海藻糖15～35％，甘露醇15～35％，以上各组分的质量百分比总和为100％。
上述人成纤维细胞调节培养浓缩液的获取过程如下：
将人成纤维细胞调节培养液超滤浓缩，滤液用0.22μm的无菌过滤器过滤除菌，得人成纤维细胞调节培养浓缩液，培养浓缩液的蛋白浓度为10～20mg/mL。
上述人成纤维细胞调节培养液的获取过程如下：
步骤A：人成纤维细胞的提取：
取手术后青少年(5～10岁)包皮组织，清理剪碎，PBS洗涤，胶原酶消化后离心，弃上清，沉淀加培养基吹打成细胞悬液，接种于培养瓶中，加入含10％FBS的完全培养液，放置于培养箱中培养。待细胞达80％融合时进行传代，将P1代到P5代细胞作为种子细胞进行冻存；
步骤B：人成纤维细胞的扩增培养：
取种子细胞进行复苏，当细胞融合度为80％～90％时，将胰蛋白酶消化细胞，采用人成纤维细胞无血清培养基进行传代培养，传代培养条件为：37℃，5％CO2；
步骤C：收集无血清人成纤维细胞调节培养液：
收集传代(P6到P15代)培养过程中的人成纤维细胞调节培养上清液，即得无血清人成纤维细胞调节培养液。
人成纤维细胞调节培养液，含有各类细胞生长因子、胶原蛋白、氨基酸及维生素等多种利于修复面部皮肤损伤的生物活性成分，通过促进受损皮肤细胞的新陈代谢，使新生的表皮细胞代替老化的细胞，提高细胞活力，继而修复皮肤损伤。
含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴，其中混合溶液B，按照质量百分比由以下组分组成：大分子透明质酸钠0.08～0.5％，低分子量透明质酸钠0.06～0.8％，小分子量透明质酸钠0.02～0.3％，甘油2～9％，卡波姆0.1～0.6％，TEA 0.1～0.6％，蒸馏水89.3～97％，以上组分的质量百分比之和为100％。
上述混合溶液B中大分子量透明质酸钠的分子量为1300kDa～1500kDa，低分子量透明质酸钠的分子量为200kDa～400kDa，小分子量透明质酸钠的分子量为3kDa～10kDa，大分子透明质酸钠、低分子量透明质酸钠、小分子量透明质酸钠、甘油和卡波姆均为医药级。
上述混合溶液B中卡波姆为卡波姆940、卡波姆980中的一种或两种。
透明质酸钠属于酸性黏多糖，是生物体内存在的天然高分子多糖物质，广泛分布于动物及人体组织和细胞基质内，具有良好的生物相容性、高粘弹性、渗透性及成膜性。透明质酸可加快创面上皮细胞的迁移速度，促进细胞分化及创伤愈合，抑制血小板的聚集，传运蛋白质和生长因子等至创伤部位，进一步促进创伤的愈合。透明质酸因其优异的生物学特性已在医药、化妆品等领域被广泛使用。
如图1所示，为本发明含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴的制备工艺流程图，具体按照以下步骤进行实施：
步骤1，包裹人成纤维细胞调节培养液脂质体冻干粉A的制备：
步骤1.1，人成纤维细胞调节培养液超滤浓缩：
将人成纤维细胞调节培养液超滤浓缩，滤液用0.22μm的无菌过滤器过滤除菌，得人成纤维细胞调节培养浓缩液，浓缩液的蛋白浓度为10～20mg/mL。
步骤1.2，包裹人成纤维细胞调节培养液的脂质体悬液的制备：
用无水乙醇溶解3～18％大豆卵磷脂、1～6％胆固醇及0.1～3％维生素E，在0.04～0.06Mpa，35～40℃条件下减压旋转蒸发去除无水乙醇，得均匀薄膜；将20～50％人成纤维细胞调节培养浓缩液、5～10％海藻糖、5～10％甘露醇加入质量百分比为3～65.9％的磷酸盐缓冲液(pH＝6.8，5mmol/L)中，混匀后使用该液旋转清洗薄膜并振摇水化30～60min，将混合物先后通过装有孔径0.4μm、0.2μm的PC膜的脂质体挤出仪挤出10～20次，即得粒径范围为160～190nm的包裹人成纤维细胞调节培养液的脂质体悬液。
大豆卵磷脂、胆固醇、维生素E的总质量与无水乙醇的质量比为1:3～1:5。
海藻糖、甘露醇的总质量与磷酸盐缓冲液的体积比＝1:1～1:5。
步骤1.3，包裹人成纤维细胞调节培养液的脂质体冻干粉的制备：
将步骤1.2制得的脂质体悬液分装于西林瓶，置于冻干机中，于-40～-20℃预冻3～6h使其成固体状态，升华干燥24～48h，得包裹人成纤维细胞调节培养液活性成分的脂质体冻干粉。
步骤2，混合溶液B的制备：
按照质量百分比分别称取大分子透明质酸钠0.08～0.5％，低分子量透明质酸钠0.06～0.8％，小分子量透明质酸钠0.02～0.3％，卡波姆0.1～0.6％，甘油2～9％，搅拌使透明质酸钠在甘油中均匀分散，混匀，加入至60～80℃质量百分比为89.3～97％的蒸馏水中，300～700r/min速率下搅拌后加入0.1～0.6％TEA，继续搅拌混匀30～60min后冷却至室温，得混合溶液。
上述卡波姆为卡波姆940、卡波姆980中的一种或两种。
步骤3，含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴的制备：
取步骤1制得的冻干粉A 1～8％，取步骤2制得的混合溶液B 92～99％，将A、B两部分及经辐照灭菌处理的蚕丝膜布独立包装即得含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴。
上述蚕丝膜布使用前经Co60 25kGy辐照灭菌处理。
实施例1
含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴，其制备方法如下：
步骤1，包裹人成纤维细胞调节培养液脂质体冻干粉A的制备：
步骤1.1，人成纤维细胞调节培养液超滤浓缩：
将人成纤维细胞调节培养液超滤浓缩，取滤液用0.22μm的无菌过滤器过滤除菌，得人成纤维细胞调节培养浓缩液，浓缩液的浓度为10mg/mL。
步骤1.2，包裹人成纤维细胞调节培养液的脂质体悬液的制备：
用63mL无水乙醇溶解15.0g的大豆卵磷脂、5.0g的胆固醇、1.0g的维生素E，在0.04Mpa，35℃条件下减压旋转蒸发去除无水乙醇，得均匀薄膜；取步骤1.1制得的10mg/mL人成纤维细胞调节培养浓缩液20mL，海藻糖5.0g，甘露醇5.0g加入至49mL的磷酸盐缓冲液(pH＝6.8，5mmol/L)中，使用该混合液旋转清洗薄膜，振摇水化30min，将混合物先后通过装有孔径0.4μm、0.2μm的PC膜的脂质体挤出仪挤出，得粒径均一的包裹人成纤维细胞调节培养液的脂质体悬液。
步骤1.3，包裹人成纤维细胞调节培养液的脂质体冻干粉的制备：
将步骤1.2制得的脂质体悬液混匀分装于西林瓶，置于-40℃预冻3h使其成固体状态，升华干燥24h，得包裹人成纤维细胞调节培养液活性成分的脂质体冻干粉。
步骤2，混合溶液B的制备：
称取大分子透明质酸钠0.08g，低分子量透明质酸钠0.06g，小分子量透明质酸钠0.02g，卡波姆940 0.3g，甘油8.08g于混料器中，混匀搅拌，使透明质酸钠在甘油中均匀分散，加至60℃91.15g的水中，300r/min下搅拌混匀，混匀后加入0.3g的TEA，继续搅拌混匀后，冷却至室温，即得混合溶液。
步骤3，含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴的制备：
取1％步骤1制得的脂质体冻干粉A，取99％步骤2制得的混合溶液B，将A、B及经辐照灭菌处理的蚕丝膜布独立包装即得含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴。
实施例2
含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴，其制备方法如下：
步骤1，人成纤维细胞调节培养液脂质体冻干粉A的制备：
步骤1.1，人成纤维细胞调节培养液超滤浓缩：
将人成纤维细胞调节培养液超滤浓缩，取滤液用0.22μm的无菌过滤器过滤除菌，得人成纤维细胞调节培养浓缩液，浓缩液的浓度为15mg/mL。
步骤1.2，包裹人成纤维细胞调节培养液的脂质体悬液的制备：
用64mL无水乙醇溶解12g的大豆卵磷脂、4g的胆固醇、0.5g的维生素E，在0.05Mpa，37℃条件下减压旋转蒸发去除无水乙醇，得均匀薄膜；取步骤1.1制得的15mg/mL人成纤维细胞调节培养浓缩液50mL，海藻糖8.0g，甘露醇8.0g加入17.5mL的磷酸盐缓冲液(pH＝6.8，5mmol/L)中，使用该混合液旋转清洗薄膜，振摇水化50min，将混合物先后通过装有孔径0.4μm、0.2μm的PC膜的脂质体挤出仪挤出，通过多次的膜过滤，得粒径均一的包裹人成纤维细胞调节培养液的脂质体悬液。
步骤1.3，包裹人成纤维细胞调节培养液的脂质体冻干粉的制备：
将步骤1.2制得的脂质体悬液混匀分装于西林瓶，置于-30℃预冻4h使其成固体状态，升华干燥36h，得人成纤维细胞调节培养液活性成分的脂质体冻干粉。
步骤2，混合溶液B的制备：
称取大分子透明质酸钠0.25g，低分子量透明质酸钠0.37g，小分子量透明质酸钠0.12g，卡波姆980 0.31g，甘油5.15g于混料器中，混匀搅拌，使透明质酸钠在甘油中均匀分散，加至70℃93.48g的水中，500r/min下搅拌混匀后加入0.31g的TEA，继续搅拌混匀后，冷却至室温，即得混合溶液。
步骤3，含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴的制备：
取3％步骤1制得的脂质体冻干粉A，取97％步骤2制得的混合溶液B，将A、B及经辐照灭菌的蚕丝膜布独立包装即得含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴。
实施例3
含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴，其制备方法如下：
步骤1，人成纤维细胞调节培养液脂质体冻干粉A的制备：
步骤1.1，人成纤维细胞调节培养液超滤浓缩：
将人成纤维细胞调节培养液超滤浓缩，取滤液用0.22μm的无菌过滤器过滤除菌，得人成纤维细胞调节培养浓缩液，浓缩液的浓度为20mg/mL。
步骤1.2，包裹人成纤维细胞调节培养液的脂质体悬液的制备：
用35ml无水乙醇溶解3.0g的大豆卵磷脂、1.0g的胆固醇、3.0g的维生素E，在0.06Mpa，40℃条件下减压旋转蒸发去除无水乙醇，得均匀薄膜；取步骤1.1制得的20mg/mL人成纤维细胞调节培养浓缩液25mL，海藻糖7.0g，甘露醇7.0g加入54mL的磷酸盐缓冲液(pH＝6.8，5mmol/L)中，使用该混合液旋转清洗薄膜，振摇水化60min，将混合物先后通过装有孔径0.4μm、0.2μm的PC膜的脂质体挤出仪挤出，通过多次的膜过滤，得粒径均一的包裹人成纤维细胞调节培养液的脂质体悬液。
步骤1.3，包裹人成纤维细胞调节培养液的脂质体冻干粉的制备：
将步骤1.2制得的脂质体悬液混匀分装于西林瓶，置于-20℃预冻6h使其成固体状态，升华干燥48h，得人成纤维细胞调节培养液活性成分的脂质体冻干粉。
步骤2，混合溶液B的制备：
称取大分子透明质酸钠0.43g，低分子量透明质酸钠0.65g，小分子量透明质酸钠0.22g，卡波姆940 0.27g，卡波姆980 0.27g，甘油5.43g于混料器中，混匀搅拌，使透明质酸钠在甘油中均匀分散，加至80℃92.17g的水中，700r/min下搅拌混匀后加入0.54g的TEA，继续搅拌混匀后，冷却至室温，即得混合溶液。
步骤3，含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴的制备：
取8％步骤1制得的脂质体冻干粉A，取92％步骤2制得的混合溶液B，将A、B及经辐照灭菌处理的蚕丝膜布独立包装即得含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴。
对比例1
一种医用敷料贴，其制备方法如下：
称取大分子透明质酸钠0.25g，低分子量透明质酸钠0.37g，小分子量透明质酸钠0.12g，卡波姆980 0.31g，甘油5.15g于混料器中，混匀搅拌，使透明质酸钠在甘油中均匀分散，加至70℃93.48g的水中，500r/min下搅拌混匀后加入0.31g的TEA，继续搅拌混匀后，冷却至室温，即得一种医用敷料贴。
利用本发明方法制备的含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴，其中，包裹人成纤维细胞调节培养液脂质体的粒径、包封率、稳定性及该医用敷料贴的应用如下：
1.包裹人成纤维细胞调节培养液脂质体的粒径测定：
取制得的包裹人成纤维细胞调节培养液脂质体悬液1.0mL，采用粒度仪测定其粒径大小及分布。图2为实施例2所得包裹人成纤维细胞调节培养液脂质体的粒径分布图，由图2可知，本发明制得的脂质体粒径范围为160～190nm，平均粒径为180nm。
2.包裹人成纤维细胞调节培养液脂质体包封率的测定：
将本发明制得的包裹人成纤维细胞调节培养液脂质体冻干粉置于室温条件下0、3、6、……33、36个月，取不同时间段的冻干粉用纯化水充分水合，吸取混悬液1.0mL，加入甲醇溶液破乳，得总药物量W总；同法吸取混悬液1.0mL，采用冷冻离心机于4℃，15000r/min条件下离心50min，得游离药物W游，取上清液采用HPLC法测定包裹人成纤维细胞调节培养液脂质体的包封率，按下式计算：
包封率＝(W总-W游)/W总×100％ (1)
图3为本发明实施例2不同时间段脂质体的包封率随时间的变化图。由图3可知，将人成纤维细胞调节培养液通过脂质体包裹并制成冻干粉，能够稳定保存3年。
3.实施例2与对比例1针对激素依赖性皮炎患者受损皮肤的功效性评价：
采用本发明实施例2与对比例1制备的两款医用敷料贴对60例激素依赖性皮炎受试者进行测试。将受试者采用随机法分为对照组和试验组，对照组和试验组各30例，受试者年龄在16～50岁，平均29.6岁，其中，男8例，女52例。试验组采用实施例2制备的医用敷料贴，1次/天，15～20min/次，连续使用4周，从第3周开始，隔一天使用一次，对照组采用对比例1制备的医用敷料贴，使用方法同试验组，每周观察结果。
图4为激素依赖性皮炎患者使用本发明实施例2医用敷料贴(试验组)及对比例1医用敷料贴(对照组)0～4周后所述症状(皮肤紧绷感、皮肤发红、皮肤瘙痒、皮肤疼痛)效果改善百分比。由图4可知，激素依赖性皮炎患者在使用实施例2医用敷料贴4周后其皮肤紧绷感、皮肤发红、皮肤瘙痒、皮肤疼痛分别改善90％、86％、95％、94％，在使用对比例1医用敷料贴4周后四种症状则分别改善60％、58％、66％、74％。
图5为激素依赖性皮炎患者使用本发明实施例2医用敷料贴(试验组)及对比例1医用敷料贴(对照组)0～4周后的皮肤角质层含水量。由图5可知，激素依赖性皮炎患者在使用实施例2医用敷料贴4周后其皮肤角质层含水量增加38％，在使用对比例1医用敷料贴4周后皮肤角质层含水量增加22％。此外，在4周的使用过程中，受试者无水肿现象及其他不良反应。因此，使用本发明医用敷料贴能对激素依赖性皮炎患者的受损皮肤起到保护与护理的作用，提高受损皮肤的湿润度、光滑度，安全有效。

Claims (8)

1.含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴，其特征在于，包括料液部分和蚕丝膜布，所述料液部分按照质量百分比由以下组分组成，包裹人成纤维细胞调节培养液脂质体冻干粉A 1～8％，混合溶液B 92～99％，以上各组分的质量百分比为100％；
所述混合溶液B，按照质量百分比由以下组分组成：大分子透明质酸钠0.08～0.5％，低分子量透明质酸钠0.06～0.8％，小分子量透明质酸钠0.02～0.3％，甘油2～9％，卡波姆0.1～0.6％，TEA 0.1～0.6％，蒸馏水89.3～97％，以上组分的质量百分比之和为100％；
所述大分子量透明质酸钠的分子量为1300kDa～1500kDa，低分子量透明质酸钠的分子量为200kDa～400kDa，小分子量透明质酸钠的分子量为3kDa～10kDa，所述大分子透明质酸钠、低分子量透明质酸钠、小分子量透明质酸钠、甘油和卡波姆均为医药级。
2.如权利要求1所述的含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴，其特征在于，所述包裹人成纤维细胞调节培养液脂质体冻干粉A、混合溶液B和蚕丝膜布三部分独立包装。
3.如权利要求1所述的含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴，其特征在于，所述包裹人成纤维细胞调节培养液脂质体冻干粉A，按照质量百分比由以下组分组成：人成纤维细胞调节培养浓缩液活性蛋白0.5～3％，大豆卵磷脂14～50％，胆固醇4～16％，维生素E 1～15％，海藻糖15～35％，甘露醇15～35％，以上各组分质量百分比总和为100％；
所述大豆卵磷脂、胆固醇、维生素E、海藻糖和甘露醇均为医药级。
4.如权利要求1所述的含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴，其特征在于，所述卡波姆为卡波姆940、卡波姆980中的一种或两种。
5.一种权利要求1所述的含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴的制备方法，其特征在于，具体按照以下步骤进行实施：
步骤1，包裹人成纤维细胞调节培养液脂质体冻干粉A的制备：
步骤1.1，包裹人成纤维细胞调节培养液的脂质体悬液的制备：
用无水乙醇溶解3～18％的大豆卵磷脂、1～6％胆固醇及0.1～3％维生素E，在0.04～0.06Mpa，35～40℃条件下减压旋转蒸发去除无水乙醇，得均匀薄膜；将20～50％人成纤维细胞调节培养浓缩液、5～10％海藻糖、5～10％甘露醇加入质量百分比为3～65.9％的磷酸盐缓冲液中，混匀后使用该混合液旋转清洗薄膜并振摇水化30～60min，将水化后的混合物经脂质体挤出仪挤出10～20次，即得到人成纤维细胞调节培养液脂质体；
所述步骤1.1中大豆卵磷脂、胆固醇、维生素E的总质量与无水乙醇的质量比＝1:3～1:5；
所述步骤1.1中磷酸盐缓冲液的pH＝6.8，浓度为5mmol/L，海藻糖、甘露醇的总质量与磷酸盐缓冲液的体积比＝1:1～1:5；
步骤1.2，包裹人成纤维细胞调节培养液的脂质体冻干粉的制备：
将步骤1.1制得的脂质体悬液于-40～-20℃预冻3～6h，升华干燥24～48h，得包裹人成纤维细胞调节培养液活性成分的脂质体冻干粉；
步骤2，混合溶液B的制备：
按照质量百分比分别称取大分子透明质酸钠0.08～0.5％，低分子量透明质酸钠0.06～0.8％，小分子量透明质酸钠0.02～0.3％，卡波姆0.1～0.6％，甘油2～9％，搅拌使透明质酸钠在甘油中均匀分散，混匀，加至60～80℃质量百分比为89.3～97％的蒸馏水中，300～700r/min速率下搅拌后加入0.1～0.6％TEA，继续搅拌混匀后30～60min后冷却至室温，得混合溶液；
步骤3，含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴的制备：
取步骤1制得的脂质体冻干粉A 1～8％，取步骤2制得的混合溶液B 92～99％，将A、B两部分及经辐照灭菌处理的蚕丝膜布独立包装即得含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴；
上述蚕丝膜布经Co60 25kGy辐照灭菌处理。
6.如权利要求5所述的含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴的制备方法，其特征在于，所述步骤1.1中，人成纤维细胞调节培养浓缩液的制备方法如下：将人成纤维细胞调节培养液超滤浓缩，滤液用0.22μm的无菌过滤器过滤除菌，得人成纤维细胞调节培养浓缩液，浓缩液蛋白浓度为10～20mg/mL。
7.如权利要求5所述的含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴的制备方法，其特征在于，所述步骤1.1中脂质体挤出仪中PC膜的孔径依次为0.4μm、0.2μm，得到的人成纤维细胞调节培养液脂质体的粒径为160～190nm。
8.权利要求1～4任一项所述的含人成纤维细胞调节培养液医用敷料贴在激素依赖性皮炎方面的应用。
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