CN110546160A - 靶向嵌合蛋白及其用途 - Google Patents

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Orinocis Bioscience Inc
Universiteit Gent
Vlaams Instituut voor Biotechnologie VIB
Orionis Biosciences NV
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Flemish Institute Of Biotechnology
Orinocis Bioscience Inc
Universiteit Gent
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Abstract

本发明部分涉及包含至少一个识别和结合SIRP1α的靶向部分的嵌合蛋白及其作为诊断和治疗剂的用途。本发明还涉及包含所述嵌合蛋白的药物组合物及其在治疗多种疾病中的用途。

Description

靶向嵌合蛋白及其用途
相关申请的交叉引用
本申请要求于2017年2月6日提交的美国临时专利申请号62/454,993的优先权，该申请的内容在此通过引用整体并入。
技术领域
本发明部分涉及包含至少一个识别和结合SIRP1α的靶向部分的嵌合蛋白及其作为诊断和治疗剂的用途。本发明还涉及包含所述嵌合蛋白的药物组合物及其在治疗包括癌症在内的多种疾病中的用途。
序列表
本申请包含序列表，其已经通过EFS-Web以ASCII格式提交，并且在此通过引用将其全部内容并入。在2018年1月31日创建的所述ASCII拷贝被命名为ORN-027PC-Sequence_Listing_ST25.txt，并且大小为282,624字节。
背景技术
癌症是全世界每年造成近7百万人死亡的全球性健康挑战，并且迄今为止，尽管医学有很大进展，但已证明其很大程度上是不可治疗的。令人沮丧的是，癌症似乎发展出策略来逃避免疫检测和破坏从而避开身体对抗疾病的主要保护作用。例如，癌细胞逃避巨噬细胞吞噬作用的一种机制是通过CD47的上调，CD47与巨噬细胞上的抑制性受体，即信号调节蛋白α-1(SIRP1α)结合。具体地，癌细胞上的CD47和SIRP1α之间的相互作用产生"别吃我"信号来抑制癌细胞的吞噬作用。Myc癌基因诱导癌细胞中CD47的表达-一种免疫抑制机制，其涉及Myc的有效的体内促肿瘤生长活性。
细胞癌基因的Myc家族的激活是人类癌症中最常见的致癌事件之一。Myc蛋白家族编码三种高度相关的核磷蛋白(c-Myc、N-Myc和L-Myc)，它们被认为起序列特异性转录因子的作用。Myc蛋白激活了多种对生物过程重要的基因，这些生物过程包括生长、增殖、凋亡、代谢、分化、自我更新和血管生成。尽管努力抑制癌细胞中的高活性Myc蛋白，该癌基因仍然对治疗性靶向作用保持显著的抗性。此外，有证据表明活性Myc蛋白促进了肿瘤对多种癌症药物的抗性。
因此，仍然需要能够有效靶向包括Myc驱动的癌症在内的癌症的新治疗剂。
发明内容
在多个方面，本发明涉及具有至少一个特异性结合SIRP1α的靶向部分的嵌合蛋白。在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白可用于例如直接或间接地将巨噬细胞募集到目标位点。在多个实施方案中，嵌合蛋白还包含信号传导剂，例如但不限于干扰素、白细胞介素和肿瘤坏死因子，其可以经修饰以减弱活性。在多个实施方案中，嵌合蛋白包含结合其他目标靶(例如抗原、受体)的额外靶向部分。在一个实施方案中，其它目标靶(例如抗原、受体)存在于肿瘤细胞上。在另一个实施方案中，其它目标靶(例如抗原、受体)存在于免疫细胞上。在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白可以直接或间接地将免疫细胞(例如巨噬细胞)募集到作用位点(例如，作为非限制性实例，肿瘤微环境)。在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白促进巨噬细胞对靶细胞(例如肿瘤细胞)的吞噬作用。
在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白可用于治疗多种疾病或病症，例如癌症、感染、免疫病症和其它疾病和病症，并且本发明包括多种治疗方法。
附图说明
图1A-B显示了用抗小鼠Sirp1αVHH进行的结合测定。在图1A中，在基于FACS的mSIRPA结合测定中在表达鼠SIRP1α的细胞上测试抗鼠SIRP1αVHH的系列稀释。绘制荧光强度的几何平均值。在图1B中，在鼠CD47-鼠SIRPα结合测定中测试了抗鼠SIRP1αVHH的系列稀释。绘制一式三份测量的平均值-/+标准偏差。
图2A-B显示了使用抗小鼠Sirp1αVHH/人IFN Q124R嵌合体进行的B16体内研究。在图2A中，将肿瘤生长与PBS对照进行比较。抗小鼠Sirp1αVHH/人IFN Q124R嵌合体是底部曲线而PBS是顶部曲线。在图2B中，评价了图2A的小鼠中肿瘤研究的多种安全参数：白细胞计数(“wbc")、淋巴细胞计数(“ly”)、嗜中性粒细胞计数(“ne”)、单核细胞计数(“mo”)、红细胞计数(“rbc”)、血红蛋白(“hb”)；血压积(“hct”)、血小板(“plt”)和平均血小板体积(“mpv”)。在每组中，左条是PBS，右条是抗小鼠Sirp1αVHH/人IFN Q124R。
图3显示了用100ng/ml嵌合体刺激(或未刺激)并对磷酸STAT1染色的B16细胞。数据绘制为平均荧光强度。分析了抗鼠Sirp1αVHH/抗鼠PD-L1VHH/人IFN Q124R和抗Bcll10VHH与修饰的人IFNαQ124R(未靶向的IFNQ124R对照)的单特异性融合体。
发明详述
本发明部分基于具有特异性识别并结合信号调节蛋白α-1(SIRP1α)的靶向部分的靶向嵌合蛋白的发现。在一些实施方案中，嵌合蛋白是多特异性的，并且包括一个或多个靶向部分。在一些实施方案中，嵌合蛋白还包括对一种或多种受体具有降低的亲和力的修饰的信号传导剂(例如干扰素)。在多个实施方案中，嵌合蛋白可以结合免疫细胞如巨噬细胞并直接或间接地将其募集到需要治疗作用的部位(例如，肿瘤或肿瘤微环境)。在一些实施方案中，嵌合蛋白诱导和/或增强巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用。本发明的嵌合蛋白表现出有益的治疗特性和减少的副作用。
靶向嵌合蛋白
在多个实施方案中，本发明涉及包含特异性识别并结合信号调节蛋白α-1(SIRP1α)的靶向部分的靶向嵌合蛋白。SIRP1α(也称为SIRPα)属于细胞免疫受体家族，该家族包括抑制性成员(SIRPα)、活化成员(SIRPβ)、非信号传导成员(SIRPγ)和可溶性成员(SIRPδ)。SIRP1α主要在骨髓细胞上表达，所述骨髓细胞包括巨噬细胞、粒细胞、骨髓树突细胞(DC)、肥大细胞及其前体，包括造血干细胞。SIRP1α作用为抑制性受体，其与广泛表达的跨膜糖蛋白CD47相互作用以调节吞噬作用。特别地，SIRP1α通过在靶细胞上表达的CD47在巨噬细胞上的结合产生负调控靶细胞吞噬作用的抑制信号。
在多个实施方案中，本发明涉及包含靶向部分的靶向嵌合蛋白，所述靶向部分特异性识别并结合巨噬细胞上的SIRP1α。
在多个实施方案中，本发明涉及包含靶向部分的靶向嵌合蛋白，所述靶向部分特异性识别并结合单核细胞上的SIRP1α。
在多个实施方案中，本发明涉及包含靶向部分的靶向嵌合蛋白，所述靶向部分特异性识别并结合TAM(肿瘤相关巨噬细胞)上的SIRP1α。
在多个实施方案中，本发明涉及包含靶向部分的靶向嵌合蛋白，所述靶向部分特异性识别和结合树突细胞上的SIRP1α，包括但不限于cD2和pDC。
在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白包含具有识别SIRP1α的识别结构域的靶向部分。在一个实施方案中，识别结构域识别SIRP1α上存在的一个或多个线性表位。如本文所用，线性表位指SIRP1α上存在的任何连续氨基酸序列。在另一个实施方案中，识别结构域识别SIRP1α上存在的一个或多个构象表位。如本文所用，构象表位是指形成具有能够被抗原识别结构域识别的特征和/或形状和/或三级结构的三维表面的一个或多个氨基酸部分(其可以是不连续的)。
在一些实施方案中，嵌合蛋白包含可以结合SIRP1α的全长和/或成熟形式和/或亚型和/或剪接变体和/或片段和/或任何其它天然存在或合成的类似物、变体或突变体的靶向部分。在一个实施方案中，SIRP1α是人SIRP1α。在多个实施方案中，嵌合蛋白包含可以结合任何形式的人SIRP1α的靶向部分，包括单体、二聚体、异二聚体、多聚体和相关形式。在一个实施方案中，靶向部分结合SIRP1α的单体形式。在另一个实施方案中，靶向部分结合SIRP1α的二聚体形式。
在一个实施方案中，本发明的嵌合蛋白包含具有识别结构域的靶向部分，所述识别结构域识别存在于人SIRP1α上的一个或多个表位。在一个实施方案中，靶向部分包含识别具有信号肽序列的人SIRP1α的识别结构域。下面提供了具有信号肽序列(下划线)的示例性人SIRP1α多肽：
MEPAGPAPGRLGPLLCLLLAASCAWSGVAGEEELQVIQPDKSVLVAAGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPSAPVVSGPAARATPQHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPVGESVSYSIHSTAKVVLTREDVHSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSETIRVPPTLEVTQQPVRAENQVNVTCQVRKFYPQRLQLTWLENGNVSRTETASTVTENKDGTYNWMSWLLVNVSAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVSKSHDLKVSAHPKEQGSNTAAENTGSNERNIYIVVGVVCTLLVALLMAALYLVRIRQKKAQGSTSSTRLHEPEKNAREITQDTNDITYADLNLPKGKKPAPQAAEPNNHTEYASIQTSPQPASEDTLTYADLDMVHLNRTPKQPAPKPEPSFSEYASVQVPRK(SEQ ID NO:1)
在一个实施方案中，靶向部分包含识别没有信号肽序列的人SIRP1α的识别结构域。下面提供了没有信号肽序列的示例性人SIRP1α多肽：EEELQVIQPDKSVLVAAGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPSAPVVSGPAARATPQHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPVGESVSYSIHSTAKVVLTREDVHSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSETIRVPPTLEVTQQPVRAENQVNVTCQVRKFYPQRLQLTWLENGNVSRTETASTVTENKDGTYNWMSWLLVNVSAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVSKSHDLKVSAHPKEQGSNTAAENTGSNERNIYIVVGVVCTLLVALLMAALYLVRIRQKKAQGSTSSTRLHEPEKNAREITQDTNDITYADLNLPKGKKPAPQAAEPNNHTEYASIQTSPQPASEDTLTYADLDMVHLNRTPKQPAPKPEPSFSEYASVQVPRK(SEQ ID NO:2)
在一个实施方案中，靶向部分包含识别编码人SIRP1α亚型2的多肽的识别结构域：
MEPAGPAPGRLGPLLCLLLAASCAWSGVAGEEELQVIQPDKSVLVAAGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPSAPVVSGPAARATPQHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPVGESVSYSIHSTAKVVLTREDVHSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSETIRVPPTLEVTQQPVRAENQVNVTCQVRKFYPQRLQLTWLENGNVSRTETASTVTENKDGTYNWMSWLLVNVSAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVSKSHDLKVSAHPKEQGSNTAAENTGSNERNIYIVVGVVCTLLVALLMAALYLVRIRQKKAQGSTSSTRLHEPEKNAREITQVQSLDTNDITYADLNLPKGKKPAPQAAEPNNHTEYASIQTSPQPASEDTLTYADLDMVHLNRTPKQPAPKPEPSFSEYASVQVPRK(SEQ ID NO:3)
在一个实施方案中，靶向部分包含识别编码人SIRP1α亚型4的多肽的识别结构域：
MEPAGPAPGRLGPLLCLLLAASCAWSGVAGEEELQVIQPDKSVLVAAGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSPDVEFKSGAGTELSVRAKPSAPVVSGPAARATPQHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPVGESVSYSIHSTAKVVLTREDVHSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSETIRVPPTLEVTQQPVRAENQVNVTCQVRKFYPQRLQLTWLENGNVSRTETASTVTENKDGTYNWMSWLLVNVSAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVSKSHDLKVSAHPKEQGSNTAAENTGSNERNIYIVVGVVCTLLVALLMAALYLVRIRQKKAQGSTSSTRLHEPEKNAREITQDTNDITYADLNLPKGKKPAPQAAEPNNHTEYASIQTSPQPASEDTLTYADLDMVHLNRTPKQPAPKPEPSFSEYASVQVPRK(SEQ ID NO:4)
在多个实施方案中，本发明的靶向部分可以是任何基于蛋白质的能够特异性结合的试剂，例如抗体或其衍生物。在一个实施方案中，靶向部分包括抗体。在多个实施方案中，抗体是包含两条重链和两条轻链的全长多聚体蛋白质。每条重链包括一个可变区(例如VH)和至少三个恒定区(例如CH1、CH2和CH3)，每条轻链包括一个可变区(VL)和一个恒定区(CL)。可变区决定抗体的特异性。每个可变区包含三个也称为互补决定区(CDR)的高变区，其侧翼为四个相对保守的构架区(FR)。三个CDR，称为CDR1、CDR2和CDR3，有助于抗体结合特异性。在一些实施方案中，抗体是嵌合抗体。在一些实施方案中，抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，靶向部分包含抗体衍生物或形式。在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白的靶向部分是单结构域抗体、重组的仅重链抗体(VHH)、单链抗体(scFv)、鲨鱼仅重链抗体(VNAR)、微蛋白(半胱氨酸结蛋白，打结素)、DARPin；四连蛋白(Tetranectin)；亲合体(Affibody)；跨体(Tansbody)；Anticalin；AdNectin；Affilin；微体(Microbody)；肽适体；alterase；塑性抗体；费洛体(phylomer)；斯塔都体(Stradobody)；巨型体(maxibody)；伊维体(evibody)；菲诺体(fynomer)，犰狳重复蛋白，Kunitz结构域，avimer，atrimer，普罗体(probody)、免疫体(immunobody)，triomab，troybody；佩普体(pepbody)；疫苗体(vaccibody)，单特异性体(UniBody)；亲和性多聚体(Affimer)，双特异性体(DuoBody)，Fv，Fab，Fab'，F(ab')2，肽模拟物分子，或合成分子，如美国专利号或专利公开号US 7,417,130、US 2004/132094、US 5,831,012、US 2004/023334、US 7,250,297、US 6,818,418、US 2004/209243、US 7,838,629、US 7,186,524、US 6,004,746、US 5,475,096、US2004/146938、US 2004/157209、US 6,994,982、US 6,794,144、US 2010/239633、US 7,803,907、US 2010/119446和/或US 7,166,697中所述，其内容通过引用整体并入本文。也参见Storz MAbs.2011年5-6月；3(3):310–317。
在一个实施方案中，靶向部分包含单结构域抗体，例如来自例如产生VHH抗体的生物体(例如骆驼、鲨鱼)的VHH或设计的VHH。VHH是抗体衍生的治疗性蛋白，其含有天然存在的重链抗体的独特结构和功能特性。VHH技术基于来自缺乏轻链的骆驼科动物的全功能抗体。这些重链抗体含有单个可变区(VHH)和两个恒定区(CH2和CH3)。VHH可以NANOBODY或NANOBODIES的商标商购。
在一个实施方案中，靶向部分包含VHH。在一些实施方案中，VHH是人源化VHH或骆驼化VHH。
在一些实施方案中，VHH包含完全人VH结构域，例如HUMABODY(CrescendoBiologics，Cambridge，UK)。在一些实施方案中，完全人VH结构域，例如HUMABODY是单价、二价或三价的。在一些实施方案中，完全人VH结构域，例如HUMABODY是单特异性或多特异性的，例如单特异性、双特异性或三特异性。示例性的完全人VH结构域，例如HUMABODIES，描述于例如WO 2016/113555和WO2016/113557中，其全部公开内容通过引用并入本文。
例如，在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白包含选择性结合SIRP1α的一种或多种抗体、抗体衍生物或形式、肽或多肽、VHH或融合蛋白。在一些实施方案中，嵌合蛋白包含靶向部分，其是特异性结合SIRP1α的抗体或其衍生物。在一些实施方案中，嵌合蛋白包含靶向部分，其是特异结合SIRP1α的骆驼科重链抗体(VHH)。
在一些实施方案中，嵌合蛋白包含靶向部分，其为VHH，包含具有四个"构架区"或FR和三个"互补决定区"或CDR的单个氨基酸链。如本文所用，"框架区"或"FR"指位于CDR之间的可变区中的区域。如本文所用，"互补决定区"或"CDR"是指VHH中含有能够特异性结合抗原性靶的氨基酸序列的可变区。在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白包含VHH，所述VHH具有包含至少一个CDR1、CDR2和/或CDR3序列的可变结构域。
在多个实施方案中，本发明的靶向部分可以包含已知识别并结合SIRP1α的重链、轻链、重链可变区、轻链可变区、互补决定区(CDR)和框架区序列的任何组合。
在多个实施方案中，本技术考虑使用本文所述的SIRP1α靶向部分的任何天然或合成的类似物、突变体、变体、等位基因、同源物和直向同源物(本文统称为"类似物")。在多个实施方案中，SIRP1α靶向部分的氨基酸序列进一步包括氨基酸类似物、氨基酸衍生物或其它非经典氨基酸。
在多个实施方案中，嵌合蛋白包含靶向部分，该靶向部分包含与本文公开的任何一种序列至少60％同一的序列。例如，嵌合蛋白可包含这样的靶向部分，其包含的序列与本文公开的任何序列至少约60％、至少约61％、至少约62％、至少约63％、至少约64％、至少约65％、至少约66％、至少约67％，至少约68％，至少约69％，至少约70％，至少约71％，至少约72％，至少约73％，至少约74％，至少约75％，至少约76％，至少约77％，至少约78％，至少约79％，至少约80％，至少约81％，至少约82％，至少约83％，至少约84％，至少约85％，至少约86％，至少约87％，至少约88％，至少约89％，至少约90％，至少约91％，至少约92％，至少约93％，至少约94％，至少约95％，至少约96％，至少约97％、至少约98％、至少约99％或100％同一(例如，与本文公开的任何一种序列具有约60％、或约61％、或约62％、或约63％、或约64％、或约65％，或约66％，或约67％，或约68％，或约69％，或约70％，或约71％，或约72％，或约73％，或约74％，或约75％，或约76％，或约77％，或约78％，或约79％，或约80％，或约81％，或约82％，或约83％，或约84％，或约85％，或约86％，或约87％，或约88％，或约89％，或约90％，或约91％，或约92％，或约93％，或约94％，或约95％，或约96％，或约97％，或约98％，约99％或约100％的序列同一性)。
在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白包含靶向部分，该靶向部分包含相对于已知识别并结合SIRP1α的任何靶向部分序列具有一个或多个氨基酸突变的氨基酸序列。在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白包含靶向部分，该靶向部分包含相对于已知识别并结合SIRP1α的任何靶向部分序列具有一个、或两个、或三个、或四个、或五个、或六个、或可见的、或八个、或九个、或十个、或十五、二十、三十、四十或五十个氨基酸突变的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述一个或多个氨基酸突变可以独立地选自取代、插入、缺失和截短。
在一些实施方案中，氨基酸突变是氨基酸取代，并且可以包括保守和/或非保守取代。
"保守取代"可以例如基于所涉及的氨基酸残基的极性、电荷、大小、溶解性、疏水性、亲水性和/或两亲性的相似性来进行。20种天然存在的氨基酸可以被分为以下6个标准氨基酸组：(1)疏水性：Met、Ala、Val、Leu、Ile；(2)中性亲水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；(3)酸性：Asp、Glu；(4)碱性：His、Lys、Arg；(5)影响链取向的残基：Gly、Pro；和(6)芳族：Trp、Tyr、Phe。
如本文所用，"保守取代"定义为一个氨基酸被上文所示的六个标准氨基酸组的相同组中列出的另一氨基酸置换。例如，Asp被Glu交换在这样修饰的多肽中保留一个负电荷。此外，甘氨酸和脯氨酸可以根据它们破坏α-螺旋的能力而彼此取代。
如本文所用，"非保守取代"定义为一个氨基酸被上文所示的六个标准氨基酸组(1)至(6)的不同组中列出的另一氨基酸置换。
在多个实施方案中，取代也可包括非经典氨基酸。示例性的非经典氨基酸包括但不限于硒代半胱氨酸、吡咯赖氨酸、N-甲酰甲硫氨酸β-丙氨酸、GABA和δ-氨基乙酰丙酸、4-氨基苯甲酸(PABA)、常见氨基酸的D-异构体、2,4-二氨基丁酸、α-氨基异丁酸、4-氨基丁酸、Abu、2-氨基丁酸、γ-Abu、ε-Ahx、6-氨基己酸、Aib、2-氨基异丁酸、3-氨基丙酸、鸟氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、羟基脯氨酸、肌氨酸、瓜氨酸、高瓜氨酸、磺基丙氨酸、叔丁基甘氨酸、叔丁基丙氨酸、苯基甘氨酸、环己基丙氨酸、β-丙氨酸、氟代氨基酸、设计氨基酸如β-甲基氨基酸、Cα-甲基氨基酸、Nα-甲基氨基酸和一般的氨基酸类似物。
在多个实施方案中，氨基酸突变可以在靶向部分的CDR(例如CDR1、CDR2或CDR3区)中。在另一个实施方案中，氨基酸改变可以在靶向部分的框架区(FR)(例如，FR1、FR2、FR3或FR4区)中。
氨基酸序列的修饰可以使用本领域任何已知的技术来实现，例如定点诱变或基于PCR的诱变。这些技术描述于例如Sambrook等,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Press,Plainview,N.Y.,1989和Ausubel等,Current Protocols inMolecular Biology,John Wiley&Sons,New York,N.Y.,1989。
在多个实施方案中，突变基本上不降低本发明的嵌合蛋白特异性识别和结合SIRP1α的能力。在多个实施方案中，突变基本上不降低本发明的嵌合蛋白特异性结合SIRP1α的能力，并且没有功能性调节(例如部分或完全中和)SIRP1α。
在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白对SIRP1α的全长和/或成熟形式和/或亚型和/或剪接变体和/或片段和/或单体和/或二聚体形式和/或任何其它天然存在或合成的类似物、变体或突变体的结合亲和力可以由平衡解离常数(KD)描述。在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白包含靶向部分，其结合SIRP1α的全长和/或成熟形式和/或亚型和/或剪接变体和/或片段和/或任何其它天然存在或合成的类似物、变体或突变体(包括单体和/或二聚体形式)，具有的KD小于约1μM、约900nM、约800nM、约700nM、约600nM、约500nM、约400nM、约300nM、约200nM、约100nM、约90nM、约80nM、约70nM、约60nM、约50nM、约40nM、约30nM、约20nM、约10nM或约5nM或约1nM。
在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白包含结合但不功能性调节目标抗原即SIRP1α的靶向部分。例如，在多个实施方案中，嵌合蛋白的靶向部分简单地靶向抗原，但基本上不能功能性地调节(例如显著抑制、降低或中和)抗原所具有的生物学效应。在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白的靶向部分结合从对其生物活性重要的抗原位点(例如抗原的活性位点)物理分离的表位。
在其它实施方案中，本发明的嵌合蛋白包含结合但功能性调节目标抗原即SIRP1α的靶向部分。例如，在多个实施方案中，嵌合蛋白的靶向部分靶向抗原，即SIRP1α，并功能性地调节(例如抑制、减少或中和)抗原具有的生物学效应。这种结合以及功能调节可以用在本发明的多个实施方案中，包括其中本发明的嵌合蛋白用于通过效应抗原直接或间接地将活性免疫细胞募集至需要的位点的方法。
例如，在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白可以用于在减少或消除肿瘤的方法中通过SIRP1α直接或间接地募集巨噬细胞到肿瘤细胞(例如本发明的嵌合蛋白可以包含具有抗SIRP1α抗原识别结构域的靶向部分和具有针对肿瘤抗原或受体的识别结构域(例如抗原识别结构域)的靶向部分)。有证据表明，肿瘤细胞频繁上调CD47，而CD47与SIRP1α结合以逃避吞噬作用。因此，在多个实施方案中，可能需要直接或间接地募集巨噬细胞到肿瘤细胞，并功能性地抑制、降低或中和SIRP1α的抑制活性，从而使巨噬细胞吞噬肿瘤细胞。在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白增强巨噬细胞对肿瘤细胞或任何其它不期望细胞的吞噬作用。
包含本发明的嵌合蛋白的治疗剂
具有信号传导剂的嵌合体和融合体
在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白是具有一个或多个信号传导剂的嵌合体或融合体的一部分。因此，本发明提供了嵌合蛋白或融合蛋白，其包括例如针对SIRP1α的靶向部分和一个或多个信号传导剂。
在多个实施方案中，信号传导剂经修饰而具有对其受体中的一种或多种的降低的亲和力或活性，这可以减弱嵌合或融合蛋白的活性(包括激动或拮抗)和/或防止非特异性信号传导或不希望的隔离(sequestration)。在多个实施方案中，信号传导剂在其野生型形式中是拮抗性的，并且具有减弱其拮抗活性的一个或多个突变。在多个实施方案中，信号传导剂由于一个或多个突变而具有拮抗作用，例如激动性信号传导剂被转化为拮抗性信号传导剂，并且这种转化的信号传导剂任选地还具有减弱其拮抗活性的一个或多个突变(例如WO 2015/007520中所述，其全部内容通过引用并入本文)。
因此，在多个实施方案中，信号传导剂是具有一个或多个突变的修饰(例如突变)形式的信号传导剂。在多个实施方案中，修饰(例如突变)使得修饰的信号传导剂相对于未修饰或未突变的信号传导剂即野生型信号传导剂(例如比较野生型形式与修饰或突变形式的同一信号传导剂)具有一种或多种减弱的活性，例如降低的结合亲和力、降低的内源性活性和降低的特异性生物活性中的一种或多种。在一些实施方案中，减弱或降低结合或亲和力的突变包括那些显著降低或消除结合或活性的突变。在一些实施方案中，减弱或降低结合或亲和力的突变不同于那些显著减弱或消除结合或活性的突变。因此，在多个实施方案中，突变使得信号传导剂相对于未突变的即野生型信号传导剂具有改善的安全性，例如降低的全身毒性、降低的副作用和降低的脱靶效应(例如比较野生型形式与修饰的(例如突变)形式的同一信号传导剂)。
如本文所述，所述试剂由于一个或多个修饰例如突变而可具有改善的安全性。在多个实施方案中，改善的安全性意味着本发明的嵌合蛋白产生较低的毒性(例如全身毒性和/或组织/器官相关毒性)；和/或减轻或基本消除的副作用；和/或增加的耐受性，减轻或基本消除的不良事件；和/或减少或基本消除的脱靶效应；和/或增加的治疗窗。
在多个实施方案中，信号传导剂经修饰而具有一个或多个突变，所述突变降低其对一种或多种其受体的结合亲和力或活性。在一些实施方案中，信号传导剂经修饰而具有一个或多个突变，所述突变显著降低或消除了对受体的结合亲和力或活性。在一些实施方案中，野生型信号传导剂产生的活性在受体处是激动作用的(例如在治疗部位激活细胞效应)。例如，野生型信号传导剂可以激活其受体。在这样的实施方案中，突变导致修饰的信号传导剂在受体处具有降低或消除的活化活性。例如，突变可以导致修饰的信号传导剂向靶细胞递送的激活信号减少，或者可以消除激活信号。在一些实施方案中，野生型信号传导剂提供的活性在受体处是拮抗作用的(例如阻断或抑制治疗部位的细胞效应)。例如，野生型信号传导剂可以拮抗或抑制受体。在这些实施方案中，突变导致修饰的信号传导剂在受体处具有降低或消除的拮抗活性。例如，突变可以导致修饰的信号传导剂向靶细胞递送的抑制性信号减少，或者可以消除抑制性信号。在多个实施方案中，信号传导剂由于一个或多个突变而具有拮抗作用，例如激动信号传导剂被转化为拮抗信号传导剂(例如WO 2015/007520中所述，其全部内容通过引用结合到本文中)，并且这种转化的信号传导剂任选地还具有一个或多个突变，所述突变降低其对一种或多种其受体的结合亲和力或活性，或者显著降低或消除其对一种或多种其受体的结合亲和力或活性。
在一些实施方案中，通过与本文所述的一个或多个靶向部分(例如，针对SIRP1α的靶向部分或本文所述的任何其它靶向部分)连接，受体处降低的亲和力或活性是可恢复的。在其它实施方案中，受体处降低的亲和力或活性基本上不能通过一个或多个靶向部分的活性而恢复。
在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白减少了脱靶效应，因为它们的信号传导剂具有减弱或消除在受体处的结合亲和力或活性的突变。在多个实施方案中，观察到相对于例如野生型信号传导剂，这种副作用减少。在多个实施方案中，信号传导剂在靶细胞上是有活性的，因为靶向部分补偿了基本活化所需的缺失/不足的结合(例如，没有限制和/或亲合力)。在多个实施方案中，修饰的信号传导剂在到达治疗活性部位的途径中基本上是无活性的，并且对特异性靶向的细胞类型具有显著的作用，这大大降低了不希望的副作用。
在一些实施方案中，信号传导剂可以包括减弱或降低对一种受体(即治疗性受体)的结合或亲和力的一个或多个突变，和显著降低或消除在第二受体处的结合或活性的一个或多个突变。在这样的实施方案中，这些突变可以在相同或不同的位置(即，相同的突变或多个突变)。在一些实施方案中，降低在一个受体处的结合和/或活性的突变不同于在另一个受体处显著降低或消除的突变。在一些实施方案中，在一个受体处降低结合和/或活性的突变与在另一个受体处显著降低或消除的突变相同。在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白具有修饰的信号传导剂，所述信号传导剂具有减弱治疗性受体处的结合和/或活性并因此允许更受控制的中靶治疗效果的突变(例如相对野生型信号传导剂)和显著降低或消除另一受体处的结合和/或活性并因此降低副作用的突变(例如相对于野生型信号传导剂)两者。
在一些实施方案中，结合或活性的显著降低或消除基本上不能用靶向部分(例如，针对SIRP1α的靶向部分或本文所述的任何其它靶向部分)恢复。在一些实施方案中，结合或活性的显著降低或消除可用靶向部分恢复。在多个实施方案中，显著减少或消除在第二受体处的结合或活性也可防止由另一个受体介导的有害作用。可选地或另外，显著减少或消除在另一个受体处的结合或活性导致治疗效果提高，因为治疗性嵌合蛋白远离治疗作用位点的隔离作用减少或消除。例如，在一些实施方案中，这避免了需要高剂量的本发明的嵌合蛋白来补偿在其它受体处的损失。这种减少剂量的能力进一步提供了更低的副作用可能性。
在多个实施方案中，修饰的信号传导剂包含一个或多个突变，所述突变导致信号传导剂对一种或多种其受体具有降低的、显著降低的或消除的亲和力，例如结合(例如KD)和/或激活(例如，当修饰的信号传导剂是其受体的激动剂时，可测量为例如KA和/或EC50)和/或抑制(例如，当修饰的信号传导剂是其受体的拮抗剂时，可测量为例如KI和/或IC50)。在多个实施方案中，在信号传导剂受体处的亲和力降低使得活性(包括激动或拮抗)减弱。在这样的实施方案中，修饰的信号传导剂对受体的亲和力是野生型信号传导剂的约1％，或约3％，约5％，约10％，约15％，约20％，约25％，约30％，约35％，约40％，约45％，约50％，约60％，约65％，约70％，约75％，约80％，约85％，约90％，约95％，或约10％-20％，约20％-40％，约50％，约40％-60％，约60％-80％，约80％-100％。在一些实施方案中，结合亲和力相对于野生型信号传导剂低至少约2倍、低约3倍、低约4倍、低约5倍、低约6倍、低约7倍、低约8倍、低约9倍、低至少约10倍、低至少约15倍、低至少约20倍、低至少约25倍、低至少约30倍、低至少约35倍、低至少约40倍、低至少约45倍、低至少约50倍、低至少约100倍、低至少约150倍或低约10-50倍、低约50-100倍、低约100-150倍、低约150-200倍或低200倍以上。
在嵌合蛋白包含具有突变的修饰的信号传导剂的实施方案中，所述突变降低在一个受体处的结合并且显著降低或消除在第二个受体处的结合，修饰的信号传导剂对一个受体的结合亲和力的减弱或降低小于对另一个受体的亲和力的显著降低或消除。在一些实施方案中，修饰的信号传导剂对一种受体的结合亲和力的减弱或降低比对另一种受体的亲和力的显著减弱或消除小约1％、或约3％、约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％或约95％。在多个实施方案中，显著的减少或消除是指结合亲和力和/或活性比减弱或减少更大幅的减少。
在多个实施方案中，修饰的信号传导剂包含一个或多个突变，所述突变将信号传导剂的内源活性降低至例如相对于野生型信号传导剂的约75％、或约70％、或约60％、或约50％、或约40％、或约30％、或约25％、或约20％、或约10％、或约5％、或约3％、或约1％。
在一些实施方案中，修饰的信号传导剂包含一个或多个突变，所述突变导致信号传导剂对其受体的亲和力降低，且低于(一种或多种)靶向部分对其受体的结合亲和力。在一些实施方案中，这种结合亲和力差异是在同一细胞上的信号传导剂/受体和靶向部分/受体之间的差异。在一些实施方案中，这种结合亲和力差异使得信号传导剂(例如突变的信号传导剂)具有局部的中靶效应，并使利用野生型信号传导剂所观察到的副作用显示的脱靶效应最小化。在一些实施方案中，该结合亲和力低至少约2倍，或至少约5倍，或至少约10倍，或至少约15倍，或至少约25倍，或至少约50倍，或至少约100倍，或至少约150倍。
受体结合活性可以使用本领域已知的方法测量。例如，亲和力和/或结合活性可以通过Scatchard图分析和结合数据的计算机拟合(例如Scatchard，1949)或通过在流通条件下的反射干涉光谱来评估，如Brecht等(1993)所述，其全部内容通过引用结合到本文中。
在多个实施方案中，信号传导剂是免疫调节剂，例如白细胞介素、干扰素和肿瘤坏死因子中的一种或多种。
在一些实施方案中，信号传导剂是白细胞介素或修饰的白细胞介素，包括例如IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-19、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-24、IL-25、IL-26、IL-27、IL-28、IL-29、IL-30、IL-31、IL-32、IL-33、IL-35、IL-36或其片段、变体、类似物或家族成员。白细胞介素是由淋巴细胞、单核细胞和巨噬细胞合成的一组多功能细胞因子。已知的功能包括刺激免疫细胞(例如T辅助细胞、B细胞、嗜酸性粒细胞和淋巴细胞)的增殖、嗜中性粒细胞和T淋巴细胞的趋化性，和/或干扰素的抑制。白细胞介素活性可以使用本领域已知的测定法来测定：Matthews等,in Lymphokines and Interferons:A Practical Approach,Clemens等,编,IRL Press,Washington,D.C.1987,pp.221-225；和Orencole&Dinarello(1989)Cytokine 1,14-20。
在一些实施方案中，信号传导剂是干扰素或干扰素的修饰形式，例如I、II和III型干扰素。示例性的干扰素包括，例如干扰素α-1、2、4、5、6、7、8、10、13、14、16、17和21，干扰素β和干扰素γ，干扰素κ，干扰素ε，干扰素τ和干扰素
在一些实施方案中，信号传导剂是肿瘤坏死因子(TNF)或肿瘤坏死因子(TNF)的修饰形式或TNF家族中的蛋白质，包括但不限于TNF-α、TNF-β、LT-β、CD40L、CD27L、CD30L、FASL、4-1BBL、OX40L和TRAIL。
本文所述的野生型信号传导剂的氨基酸序列是本领域公知的。因此，在多个实施方案中，修饰的信号传导剂包含的氨基酸序列与本文所述信号传导剂的已知野生型氨基酸序列具有至少约60％，或至少约61％，或至少约62％，或至少约63％，或至少约64％，或至少约65％，或至少约66％，或至少约67％，或至少约68％，或至少约69％，或至少约70％，或至少约71％，或至少约72％，或至少约73％，或至少约74％，或至少约75％，或至少约76％，或至少约77％，或至少约78％，或至少约79％，或至少约80％，或至少约81％，或至少约82％，或至少约83％，或至少约84％，或至少约85％，或至少约86％，或至少约87％，或至少约88％，或至少约89％，或至少约90％，或至少约91％，或至少约92％，或至少约93％，或至少约94％，或至少约95％，或至少约96％，或至少约97％，或至少约98％，或至少约99％的序列同一性(例如，约60％，或约61％，或约62％，或约63％，或约64％，或约65％，或约66％，或约67％，或约68％，或约69％，或约70％，或约71％，或约72％，或约73％，或约74％，或约75％，或约76％，或约77％，或约78％，或约79％，或约80％，或约81％，或约82％，或约83％，或约84％，或约85％，或约86％，或约87％，或约88％，或约89％、或约90％、或约91％、或约92％、或约93％、或约94％、或约95％、或约96％、或约97％、或约98％、或约99％的序列同一性)。
在多个实施方案中，修饰的信号传导剂包含的氨基酸序列与本文所述信号传导剂的任何氨基酸序列具有至少约60％，或至少约61％，或至少约62％，或至少约63％，或至少约64％，或至少约65％，或至少约66％，或至少约67％，或至少约68％，或至少约69％，或至少约70％，或至少约71％，或至少约72％，或至少约73％，或至少约74％，或至少约75％，或至少约76％，或至少约77％，或至少约78％，或至少约79％，或至少约80％，或至少约81％，或至少约82％，或至少约83％，或至少约84％，或至少约85％，或至少约86％，或至少约87％，或至少约88％，或至少约89％，或至少约90％，或至少约91％，或至少约92％，或至少约93％，或至少约94％，或至少约95％，或至少约96％，或至少约97％，或至少约98％、或至少约99％的序列同一性(例如，约60％、或约61％、或约62％、或约63％、或约64％、或约65％，或约66％，或约67％，或约68％，或约69％，或约70％，或约71％，或约72％，或约73％，或约74％，或约75％，或约76％，或约77％，或约78％，或约79％，或约80％，或约81％，或约82％，或约83％，或约84％，或约85％，或约86％，或约87％，或约88％，或约89％，或约90％、或约91％、或约92％、或约93％、或约94％、或约95％、或约96％、或约97％、或约98％、或约99％的序列同一性)。
在多个实施方案中，修饰的信号传导剂包含具有一个或多个氨基酸突变的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述一个或多个氨基酸突变可以独立地选自取代、插入、缺失和截短。在一些实施方案中，氨基酸突变是氨基酸取代，并且可以包括如本文别处所述的保守和/或非保守取代。
在多个实施方案中，取代也可包括本文其它地方所述的非经典氨基酸。
如本文所述，修饰的信号传导剂携带影响在一种或多种受体处的亲和力和/或活性的突变。在多个实施方案中，在治疗性受体处，例如在通过其介导所需治疗效果(例如激动或拮抗作用)的受体处具有降低的亲和力和/或活性。在多个实施方案中，修饰的信号传导剂带有突变，所述突变显著降低或消除在受体处的亲和力和/或活性，所述受体例如为不介导所需治疗效果(例如，由于结合的混杂)的受体。如本文所述，任何信号传导剂的受体是本领域已知的。
在受体处提供降低的亲和力和/或活性(例如激动)的示例性突变见于WO2013/107791和PCT/EP2017/061544(例如关于干扰素)、WO2015/007542(例如关于白细胞介素)和WO2015/007903(例如关于TNF)中，其每个的全部内容通过引用结合到本文中。在治疗性受体处提供降低的亲和力和/或活性(例如拮抗)的示例性突变见于WO2015/007520中，其全部内容通过引用并入本文。
在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂包含一个或多个突变，所述突变导致所述信号传导剂对I型细胞因子受体、II型细胞因子受体、趋化因子受体、肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族中的受体、TGF-β受体、免疫球蛋白(Ig)超家族中的受体和/或酪氨酸激酶超家族中的受体具有降低的亲和力和/或活性。
在多个实施方案中，信号传导剂的受体是I型细胞因子受体。I型细胞因子受体是本领域已知的，包括但不限于IL2(β-亚基)、IL3、IL4、IL5、IL6、IL7、IL9、IL11、IL12、GM-CSF、G-CSF、LIF、CNTF的受体，以及血小板生成素(TPO)、催乳素和生长激素的受体。示例性的I型细胞因子受体包括，但不限于，GM-CSF受体、G-CSF受体、LIF受体、CNTF受体、TPO受体和I型IL受体。
在多个实施方案中，信号传导剂的受体是II型细胞因子受体。II型细胞因子受体是由异源亚基组成的多聚体受体，并且主要是干扰素的受体。这个受体家族包括，但不限于，干扰素-α、干扰素-β和干扰素-γ、IL10、IL22和组织因子的受体。示例性的II型细胞因子受体包括，但不限于，IFN-α受体(例如IFNAR1和IFNAR2)、IFN-β受体、IFN-γ受体(例如IFNGR1和IFNGR2)和II型IL受体。
在多个实施方案中，信号传导剂的受体是G蛋白偶联受体。趋化因子受体是具有7个跨膜结构并与G蛋白偶联以用于信号转导的G蛋白偶联受体。趋化因子受体包括，但不限于，CC趋化因子受体、CXC趋化因子受体、CX3C趋化因子受体和XC趋化因子受体(XCR1)。示例性的趋化因子受体包括，但不限于，CCR1、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCR10、CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR3B、CXCR4、CXCR5、CSCR6、CXCR7、XCR1和CX3CR1。
在多个实施方案中，信号传导剂的受体是TNFR家族成员。肿瘤坏死因子受体(TNFR)家族成员共有一个半胱氨酸富集结构域(CRD)，该半胱氨酸富集区由三个二硫键形成，三个二硫键环绕CXXCXXC的核心基序，产生了一个延长的分子。示例性的肿瘤坏死因子受体家族成员包括：CDl20a(TNFRSFlA)、CD 120b(TNFRSFlB)、淋巴毒素β受体(LTBR、TNFRSF3)、CD 134(TNFRSF4)、CD40(CD40、TNFRSF5)、FAS(FAS、TNFRSF6)、TNFRSF6B(TNFRSF6B)、CD27(CD27、TNFRSF7)、CD30(TNFRSF8)、CD137(TNFRSF9)、TNFRSF10A(TNFRSF10A)、TNFRSF10B、(TNFRSF10B)、TNFRSF10C(TNFRSF10C)、TNFRSF10D(TNFRSF10D)、RANK(TNFRSF1lA)、促骨素(TNFRSF11B)、TNFRSF12A(TNFRSF12A)、TNFRSF13B(TNFRSF13B)、TNFRSF13C(TNFRSF13C)、TNFRSF14(TNFRSF14)、神经生长因子受体(NGFR，TNFRSF16)、TNFRSF17(TNFRSF17)、TNFRSF18(TNFRSF18)、TNFRSF19(TNFRSF19)、TNFRSF21(TNFRSF21)和TNFRSF25(TNFRSF25)。。在一个实施方案中，TNFR家族成员是CD120a(TNFRSF1A)或TNF-R1。在另一个实施方案中，TNFR家族成员是CD120 b(TNFRSF1B)或TNF-R2。
在多个实施方案中，信号传导剂的受体是TGF-β受体。TGF-β受体是单跨越丝氨酸/苏氨酸激酶受体。TGFβ受体包括但不限于TGFBR1、TGFBR2和TGFBR3。
在多个实施方案中，信号传导剂的受体是Ig超家族受体。免疫球蛋白(Ig)超家族中的受体与免疫球蛋白具有结构同源性。Ig超家族中的受体包括，但不限于，白介素-1受体、CSF-1R、PDGFR(例如PDGFRA和PDGFRB)和SCFR。
在多个实施方案中，信号传导剂的受体是酪氨酸激酶超家族受体。酪氨酸激酶超家族中的受体是本领域公知的。已知的受体酪氨酸激酶(RTK)有约58种，分为20个亚家族。酪氨酸激酶超家族中的受体包括但不限于FGF受体及其多种亚型，例如FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4和FGFR5。
在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂是干扰素α。在这样的实施方案中，修饰的IFN-α剂对IFN-α/β受体(IFNAR)，即IFNAR1和/或IFNAR2链具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，修饰的IFN-α剂对IFN-α/β受体(IFNAR)，即IFNAR1和/或IFNAR2链具有显著降低或消除的亲和力和/或活性。
干扰素α的突变形式是本领域技术人员已知的。在一个示例性实施方案中，修饰的信号传导剂是等位基因形式的IFN-α2a，其具有SEQ ID NO：46的氨基酸序列。
在一个示例性实施方案中，修饰的信号传导剂是等位基因形式的IFN-α2b，其具有SEQ ID NO：47的氨基酸序列(其在第23位氨基酸不同于IFN-α2a)。
在一些实施方案中，所述IFN-α2突变体(IFN-α2a或IFN-α2b)在144-154位的一个或多个氨基酸处突变，例如氨基酸148、149和/或153位。在一些实施方案中，IFN-α2突变体包含选自L153A、R149A和M148A的一个或多个突变。这些突变体描述于例如WO2013/107791和Piehler等,(2000)J.Biol.Chem,275:40425-33，其全部内容通过引用结合到本文中。
在一些实施方案中，IFN-α2突变体对IFNAR1具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，IFN-α2突变体包含选自F64A、N65A、T69A、L80A、Y85A和Y89A的一个或多个突变，如WO2010/030671中所述，其全部内容通过引用并入本文。
在一些实施方案中，IFN-α2突变体包含选自K133A、R144A、R149A和L153A的一个或多个突变，如WO2008/124086中所述，其全部内容通过引用并入本文。
在一些实施方案中，IFN-α2突变体包含选自R120E和R120E/K121E的一个或多个突变，如WO2015/007520和WO2010/030671中所述，其全部内容通过引用并入本文。在这样的实施方案中，所述IFN-α2突变体拮抗野生型IFN-α2活性。在这样的实施方案中，所述突变体IFN-α2对IFNAR1具有降低的亲和力和/或活性，而IFNR2的亲和力和/或活性被保留。
在一些实施方案中，人IFN-α2突变体包含(1)一个或多个选自R120E和R120E/K121E的突变，不希望被理论所束缚，其产生拮抗作用，和(2)一个或多个选自K133A、R144A、R149A和L153A的突变，不希望被理论所束缚，其允许在例如IFNAR2处的减弱的作用。在一个实施方案中，人IFN-α2突变体包含R120E和L153A。
在一些实施方案中，人IFN-α2突变体包含选自WO2013/059885中公开的L15A、A19W、R22A、R23A、L26A、F27A、L30A、L30V、K31A、D32A、R33K、R33A、R33Q、H34A、D35A、Q40A、D114R、L117A、R120A、R125A、K134A、R144A、A145G、A145M、M148A、R149A、S152A、L153A和N156A中的一个或多个突变，其全部公开内容通过引用并入本文。在一些实施方案中，人IFN-α2突变体包含如WO2013/059885中公开的突变H57Y、E58N、Q61S和/或L30A。在一些实施方案中，人IFN-α2突变体包含如WO2013/059885中公开的突变H57Y、E58N、Q61S和/或R33A。在一些实施方案中，人IFN-α2突变体包含如WO2013/059885中公开的突变H57Y、E58N、Q61S和/或M148A。在一些实施方案中，人IFN-α2突变体包含如WO2013/059885中公开的突变H57Y、E58N、Q61S和/或L153A。在一些实施方案中，人IFN-α2突变体包含WO2013/059885中公开的突变N65A、L80A、Y85A和/或Y89A。在一些实施方案中，人IFN-α2突变体包含WO2013/059885中公开的突变N65A、L80A、Y85A、Y89A和/或D114A。在一些实施方案中，人IFN-α2突变体包含选自R144X1、A145X2和R33A的一个或多个突变，其中X1选自A、S、T、Y、L和I，并且其中X2选自G、H、Y、K和D。
在一些实施方案中，修饰的信号传导剂是干扰素β。在这样的实施方案中，修饰的干扰素β剂对IFN-α/β受体(IFNAR)，即IFNAR1和/或IFNAR2链具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，所述修饰的干扰素β剂对IFN-α/β受体(IFNAR)，即IFNAR1和/或IFNAR2链具有显著降低或消除的亲和力和/或活性。
在一个实施方案中，修饰的信号传导剂是干扰素β。在这样的实施方案中，修饰的干扰素β剂对IFN-α/β受体(IFNAR)，即IFNAR1和/或IFNAR2链具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，所述修饰的干扰素β剂对IFN-α/β受体(IFNAR)，即IFNAR1和/或IFNAR2链具有显著降低或消除的亲和力和/或活性。
在一个示例性实施方案中，修饰的信号传导剂是IFN-β。在多个实施方案中，IFN-β包括IFN-β的功能性衍生物、类似物、前体、亚型、剪接变体或片段。在多个实施方案中，IFN-β包括源自任何物种的IFN-β。在一个实施方案中，嵌合蛋白包含小鼠IFN-β的修饰形式。在另一个实施方案中，嵌合蛋白包含人IFN-β的修饰形式。人IFN-β是分子量约22kDa的多肽，包含166个氨基酸残基。人IFN-β的氨基酸序列为SEQ ID NO：48。
在一些实施方案中，人IFN-β是IFN-β-1a，其是人IFN-β的糖基化形式。在一些实施方案中，人IFN-β是IFN-β-1b，其是人IFN-β的非糖基化形式，具有Met-1缺失和Cys-17至Ser的突变。
在多个实施方案中，修饰的IFN-β具有一个或多个突变，所述突变降低其与IFNAR的IFNAR1亚基的结合或其对IFNAR1亚基的亲和力。在一个实施方案中，修饰的IFN-β在IFNAR1处具有降低的亲和力和/或活性。在多个实施方案中，修饰的IFN-β是人IFN-β，并且在F67、R71、L88、Y92、I95、N96、K123和R124位具有一个或多个突变。在一些实施方案中，所述一个或多个突变是选自F67G、F67S、R71A、L88G、L88S、Y92G、Y92S、I95A、N96G、K123G和R124G的取代。在一个实施方案中，修饰的IFN-β包含F67G突变。在一个实施方案中，修饰的IFN-β包含K123G突变。在一个实施方案中，修饰的IFN-β包含F67G和R71A突变。在一个实施方案中，修饰的IFN-β包含L88G和Y92G突变。在一个实施方案中，修饰的IFN-β包含Y92G、I95A和N96G突变。在一个实施方案中，修饰的IFN-β包含K123G和R124G突变。在一个实施方案中，修饰的IFN-β包含F67G、L88G和Y92G突变。在一个实施方案中，修饰的IFN-β包含F67S、L88S和Y92S突变。
在一些实施方案中，修饰的IFN-β具有一个或多个突变，所述突变降低其与IFNAR的IFNAR2亚基的结合或其对IFNAR2亚基的亲和力。在一个实施方案中，修饰的IFN-β在IFNAR2处亲和力和/或活性降低。在多个实施方案中，修饰的IFN-β是人IFN-β，并且在W22、R27、L32、R35、V148、L151、R152和Y155位具有一个或多个突变。在一些实施方案中，所述一个或多个突变是选自W22G、R27G、L32A、L32G、R35A、R35G、V148G、L151G、R152A、R152G和Y155G的取代。在一个实施方案中，修饰的IFN-β包含W22G突变。在一个实施方案中，修饰的IFN-β包含L32A突变。在一个实施方案中，修饰的IFN-β包含L32G突变。在一个实施方案中，修饰的IFN-β包含R35A突变。在一个实施方案中，修饰的IFN-β包含R35G突变。在一个实施方案中，修饰的IFN-β包含V148G突变。在一个实施方案中，修饰的IFN-β包含R152A突变。在一个实施方案中，修饰的IFN-β包含R152G突变。在一个实施方案中，修饰的IFN-β包含Y155G突变。在一个实施方案中，修饰的IFN-β包含W22G和R27G突变。在一个实施方案中，修饰的IFN-β包含L32A和R35A突变。在一个实施方案中，修饰的IFN-β包含L151G和R152A突变。在一个实施方案中，修饰的IFN-β包含V148G和R152A突变。
在一些实施方案中，修饰的IFN-β具有一个或多个下列突变：R35A、R35T、E42K、M62I、G78S、A141Y、A142T、E149K和R152H。在一些实施方案中，修饰的IFN-β具有一个或多个下列突变：R35A、R35T、E42K、M62I、G78S、A141Y、A142T、E149K和R152H与C17S或C17A的组合。
在一些实施方案中，修饰的IFN-β具有一个或多个下列突变：R35A、R35T、E42K、M62I、G78S、A141Y、A142T、E149K和R152H与本文所述的任何其它IFN-β突变组合。
人IFN-β的晶体结构是已知的，并描述于Karpusas等，(1998)PNAS，94(22)：11813-11818。具体地，已经显示人IFN-β的结构包括五个α-螺旋(即A、B、C、D和E)和连接这些螺旋的四个环区(即AB、BC、CD和DE环)。在多个实施方案中，修饰的IFN-β在A、B、C、D、E螺旋和/或AB、BC、CD和DE环中具有一个或多个突变，所述突变降低其在治疗性受体如IFNAR处的结合亲和力或活性。示例性的突变描述于WO2000/023114和US20150011732中，其全部内容通过引用并入本文。在一个示例性实施方案中，修饰的IFN-β是在氨基酸位置15、16、18、19、22和/或23包含丙氨酸取代的人IFN-β。在一个示例性实施方案中，修饰的IFN-β是在氨基酸位置28-30、32和33包含丙氨酸取代的人IFN-β。在一个示例性实施方案中，修饰的IFN-β是在氨基酸位置36、37、39和42包含丙氨酸取代的人IFN-β。在一个示例性实施方案中，修饰的IFN-β是在氨基酸位置64和67包含丙氨酸取代并在位置68包含丝氨酸取代的人IFN-β。在一个示例性实施方案中，修饰的IFN-β是在氨基酸位置71-73包含丙氨酸取代的人IFN-β。在一个示例性实施方案中，修饰的IFN-β是在氨基酸位置92、96、99和100包含丙氨酸取代的人IFN-β。在一个示例性实施方案中，修饰的IFN-β是在氨基酸位置128、130、131和134包含丙氨酸取代的人IFN-β。在一个示例性实施方案中，修饰的IFN-β是在氨基酸位置149、153、156和159包含丙氨酸取代的人IFN-β。在一些实施方案中，突变的IFNβ包含SEQ ID NO：48和在W22的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水残基。
在一些实施方案中，所述突变的IFNβ包含SEQ ID NO：48和在R27的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水残基。
在一些实施方案中，所述突变的IFNβ包含SEQ ID NO：48和在W22的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水残基，以及在R27的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水残基。
在一些实施方案中，所述突变的IFNβ包含SEQ ID NO：48和在L32的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水残基。
在一些实施方案中，所述突变的IFNβ包含SEQ ID NO：48和在R35的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水残基。
在一些实施方案中，所述突变的IFNβ包含SEQ ID NO：48和在L32的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水残基，以及在R35的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水残基。
在一些实施方案中，所述突变的IFNβ包含SEQ ID NO：48和在F67的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水残基。
在一些实施方案中，所述突变的IFNβ包含SEQ ID NO：48和在R71的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水残基。
在一些实施方案中，所述突变的IFNβ包含SEQ ID NO：48和在F67的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水残基，以及在R71的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水残基。
在一些实施方案中，所述突变的IFNβ包含SEQ ID NO：48和在L88处的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水残基。
在一些实施方案中，所述突变的IFNβ包含SEQ ID NO：48和在Y92的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水残基。
在一些实施方案中，所述突变的IFNβ包含SEQ ID NO：48和在F67的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水性残基，和在L88的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水性残基，以及在Y92的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水性残基。
在一些实施方案中，所述突变的IFNβ包含SEQ ID NO：48和在L88的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水残基，以及在Y92的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水残基。
在一些实施方案中，所述突变的IFNβ包含SEQ ID NO：48和在I95的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水残基，以及在Y92的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水残基。
在一些实施方案中，所述突变的IFNβ包含SEQ ID NO：48和在N96的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水残基，以及在Y92的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水残基。
在一些实施方案中，所述突变的IFNβ包含SEQ ID NO：48和在Y92的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水性残基，和在I95的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水性残基，以及在N96的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水性残基。
在一些实施方案中，所述突变的IFNβ包含SEQ ID NO：48和在K123的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水残基。。
在一些实施方案中，所述突变的IFNβ包含SEQ ID NO：48和在R124的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水残基。
在一些实施方案中，所述突变的IFNβ包含SEQ ID NO：48和在K123的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水残基，以及在R124的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水残基。
在一些实施方案中，所述突变的IFNβ包含SEQ ID NO：48和在L151的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水残基。
在一些实施方案中，所述突变的IFNβ包含SEQ ID NO：48和在R152的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水残基。
在一些实施方案中，所述突变的IFNβ包含SEQ ID NO：48和在L151的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水残基，以及在R152的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水残基。
在一些实施方案中，所述突变的IFNβ包含SEQ ID NO：48和在V148的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)和甲硫氨酸(M)的脂肪族疏水残基。
在一些实施方案中，所述突变的IFNβ包含SEQ ID NO：48和在V148处的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水残基，以及在R152处的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水残基。
在一些实施方案中，所述突变的IFNβ包含SEQ ID NO：48和在Y155处的突变，所述突变是选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)的脂肪族疏水残基。
在一些实施方案中，本发明涉及嵌合蛋白，其包含：(a)修饰的IFN-β，其具有SEQID NO：48的氨基酸序列和在W22位的突变，其中所述突变是脂肪族疏水残基；和(b)一个或多个靶向部分，所述靶向部分包含特异性结合目标抗原或受体(例如Clec9A)的识别结构域，所述修饰的IFN-β和所述一个或多个靶向部分任选地用一个或多个连接子连接。在多个实施方案中，W22位的突变是选自G、A、L、I、M和V的脂肪族疏水残基。在多个实施方案中，W22位的突变是G。
另外的示例性IFNβ突变体提供于PCT/EP2017/061544中，其全部公开内容通过引用并入本文。
在一些实施方案中，修饰的信号传导剂是干扰素γ。在这样的实施方案中，修饰的干扰素γ剂具有降低的对干扰素-γ受体(IFNGR)，即IFNGR1和IFNGR2链的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，所述修饰的干扰素γ剂对干扰素γ受体(IFNGR)，即IFNGR1和/或IFNGR2链具有显著降低或消除的亲和力和/或活性。
在一些实施方案中，修饰的信号传导剂是复合干扰素。通过扫描几种人非等位基因IFN-α亚型的序列并在每个相应位置分配最常观察到的氨基酸来产生复合干扰素。复合干扰素与IFN-α2b在166个氨基酸中有20个氨基酸不同(88％同源性)，与IFN-β的比较显示在超过30％的氨基酸位置具有同一性。在各个实施方案中，所述复合干扰素包含下述SEQID NO：49的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述复合干扰素包含SEQ ID NO：50的氨基酸序列，其与SEQID NO：49的氨基酸序列有一个氨基酸的不同，即SEQ ID NO：50缺少SEQ ID NO：49的起始蛋甲硫氨酸残基。
在多个实施方案中，所述复合干扰素包含复合干扰素的修饰形式，即复合干扰素变体，作为信号传导剂。在多个实施方案中，复合干扰素变体包括复合干扰素的功能衍生物、类似物、前体、亚型、剪接变体或片段。
在一个实施方案中，复合干扰素变体选自美国专利No.4,695,623、4,897,471、5,541,293和8,496,921中公开的复合干扰素变体，所有这些专利的全部内容通过引用并入本文。例如，复合干扰素变体可以包含IFN-CON2或IFN-CON3的氨基酸序列，如美国专利No.4,695,623、4,897,471和5,541,293中所公开的。在一个实施方案中，所述复合干扰素变体包含IFN-CON2的氨基酸序列(SEQ ID NO：51)。
在一个实施方案中，所述复合干扰素变体包含IFN-CON3的氨基酸序列(SEQ IDNO：52)。
在一个实施方案中，复合干扰素变体包含美国专利号No.8,496,921中公开的任何一种变体的氨基酸序列。例如，复合变体可以包含SEQ ID NO：53的氨基酸序列。
在另一个实施方案中，所述复合干扰素变体可以包含SEQ ID NO：54的氨基酸序列。
在一些实施方案中，复合干扰素变体可以是PEG化的，即包含PEG部分。在一个实施方案中，复合干扰素变体可以包含结合在SEQ ID NO：54的S156C位的PEG部分。
在一些实施方案中，工程化的干扰素是人IFN-α2a的变体，在序列Glu-Glu-Phe-Gly-Asn-Gln(SEQ ID NO：275)中约41位插入Asp以产生Glu-Glu-Phe-Asp-Gly-Asn-Gln(SEQ ID NO：276)(其导致相对于IFN-α2a序列的序列重新编号)和下列突变：Arg23Lys、Leu26Pro、Glu53Gln、Thr54Ala、Pro56Ser、Asp86Glu、Ile104Thr、Gly106Glu、Thr110Glu、Lys117Asn、Arg125Lys和Lys136Thr的。本文描述的复合干扰素的所有实施方案同样适用于该工程化的干扰素。
在多个实施方案中，复合干扰素变体包含具有一个或多个氨基酸突变的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述一个或多个氨基酸突变可以独立地选自取代、插入、缺失和截短。
在一些实施方案中，氨基酸突变是氨基酸取代，并且可以包括保守和/或非保守取代。
在多个实施方案中，取代也可以包括非经典氨基酸(例如硒代半胱氨酸、吡咯赖氨酸、N-甲酰甲硫氨酸β-丙氨酸、GABA和δ-氨基乙酰丙酸、4-氨基苯甲酸(PABA)、常见氨基酸的D-异构体、2,4-二氨基丁酸、α-氨基异丁酸、4-氨基丁酸、Abu、2-氨基丁酸、γ-Abu、ε-Ahx、6-氨基己酸、Aib、2-氨基异丁酸、3-氨基丙酸、鸟氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、羟基脯氨酸、肌氨酸、瓜氨酸、高瓜氨酸、磺基丙氨酸、叔丁基甘氨酸、叔丁基丙氨酸、苯基甘氨酸、环己基丙氨酸、β-丙氨酸、氟代氨基酸、设计者氨基酸，例如β-甲基氨基酸、Cα-甲基氨基酸、Nα-甲基氨基酸和一般的氨基酸类似物)。
在多个实施方案中，复合干扰素经修饰以具有一个或多个突变。在一些实施方案中，所述突变使得所述复合干扰素变体相对于未突变的例如野生型形式的复合干扰素(例如具有SEQ ID NO：49或50的氨基酸序列的复合干扰素)具有一种或多种减弱的活性，例如降低的结合亲和力、降低的内源性活性和降低的特异生物活性中的一种或多种。例如，相对于未突变的例如野生型形式的复合干扰素的一种或多种减弱的活性，例如降低的结合亲和力、降低的内源活性和降低的特异性生物活性，可以在治疗性受体例如IFNAR处。因此，在多个实施方案中，所述突变使得所述复合干扰素变体相对于未突变的例如野生型形式的复合干扰素具有降低的全身毒性、降低的副作用和降低的脱靶效应。
在多个实施方案中，复合干扰素被修饰成具有降低其在治疗性受体如IFNAR处的结合亲和力或活性的突变。在一些实施方案中，复合干扰素提供的活性是在治疗性受体处的激动(例如在治疗部位激活细胞效应)。例如，复合干扰素可以激活治疗性受体。在这样的实施方案中，突变导致复合干扰素变体在治疗性受体处具有降低的活化活性。
在一些实施方案中，通过与靶向部分(例如SIRPα)连接，在治疗性受体处的降低的亲和力或活性是可恢复的。在其它实施方案中，在治疗性受体处的降低的亲和力或活性通过与靶向部分连接基本上是不可恢复的。在多个实施方案中，本发明的治疗性嵌合蛋白降低了脱靶效应，因为复合干扰素变体具有减弱在治疗性受体处的结合亲和力或活性的突变。在多个实施方案中，这降低了例如用野生型复合干扰素观察到的副作用。在多个实施方案中，复合干扰素变体在治疗活性位点的路径中基本上是无活性的，并且基本对特异性靶向的细胞类型发挥其作用，这大大降低了不希望的副作用。
在多个实施方案中，复合干扰素变体具有一个或多个突变，所述突变导致复合干扰素变体对一种或多种治疗性受体具有减弱的或降低的亲和力，例如结合(例如KD)和/或活化(例如，可作为KA和/或EC50测量)。在多个实施方案中，在治疗性受体处降低的亲和力使得来自治疗性受体的活性和/或信号传导减弱。
在多个实施方案中，复合干扰素变体具有一个或多个突变，所述突变降低其与IFNAR的IFNAR1亚基的结合或亲和力。在一个实施方案中，复合干扰素变体在IFNAR1处具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，复合干扰素变体具有一个或多个突变，所述突变降低其与IFNAR的IFNAR2亚基的结合或亲和力。在一些实施方案中，复合干扰素变体具有一个或多个突变，所述突变降低其与IFNAR1和IFNAR2亚基两者的结合或亲和力。
在一些实施方案中，复合干扰素变体具有降低其与IFNAR1的结合或亲和力的一个或多个突变，和显著降低或消除其与IFNAR2的结合或亲和力的一个或多个突变。在一些实施方案中，具有这种复合干扰素变体的嵌合蛋白可以提供靶选择性IFNAR1活性(例如，IFNAR1活性可以通过靶向部分(例如，SIRPα)的靶向而恢复)。
在一些实施方案中，复合干扰素变体具有降低其与IFNAR2的结合或亲和力的一个或多个突变，和显著降低或消除与IFNAR1的结合或亲和力的一个或多个突变。在一些实施方案中，具有这种复合干扰素变体的嵌合蛋白可以提供靶选择性IFNAR2活性(例如，IFNAR2活性可以通过靶向部分(例如，SIRPα)的靶向而恢复)。
在一些实施方案中，复合干扰素变体具有降低其与IFNAR1的结合或亲和力的一个或多个突变，以及降低其与IFNAR2的结合或亲和力的一个或多个突变。在一些实施方案中，具有这样的复合干扰素变体的嵌合蛋白可以提供靶选择性IFNAR1和/或IFNAR2活性(例如，IFNAR1和/或IFNAR2活性通过靶向部分(例如，SIRPα)的靶向而恢复)。
在一些实施方案中，所述复合干扰素被修饰为参照SEQ ID NO：50在145-155位的一个或多个氨基酸处具有突变，例如在氨基酸149、150和/或154位。在一些实施方案中，所述复合干扰素被修饰为参照SEQ ID NO：50在145-155位的一个或多个氨基酸处具有突变，例如在氨基酸149、150和/或154位，所述取代任选地是疏水性的，并且选自丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸。在一些实施方案中，复合干扰素突变体参照SEQ ID NO：50包含选自M149A、R150A和L154A的一个或多个突变。
在一个实施方案中，所述复合干扰素被修饰为参考SEQ ID NO：50在氨基酸位置121(即，K121)具有突变。在一个实施方案中，所述复合干扰素参考SEQ ID NO：50包含K121E突变。
在多个实施方案中，修饰的信号传导剂选自细胞因子、生长因子和激素的修饰形式。这些细胞因子、生长因子和激素的示例性实例包括但不限于淋巴因子、单核因子、传统多肽激素例如人生长激素、N-甲硫氨酰人生长激素和牛生长激素；甲状旁腺激素；甲状腺素；胰岛素；胰岛素原；松弛素；前松弛素；糖蛋白激素如促卵泡激素(FSH)、促甲状腺激素(TSH)和促黄体激素(LH)；肝生长因子；成纤维细胞生长因子；催乳素；胎盘催乳素；肿瘤坏死因子-α和肿瘤坏死因子-β；苗勒抑制物质；小鼠促性腺激素相关肽；抑制素；活化素；血管内皮生长因子；整联蛋白；血小板生成素(TPO)；神经生长因子例如NGF-α；血小板生长因子；转化生长因子(TGF)例如TGF-α和TGF-β；胰岛素样生长因子-I和胰岛素样生长因子-II；骨诱导因子；干扰素例如干扰素-α、干扰素-β和干扰素-γ(和I、II和III型干扰素)，集落刺激因子(CSF)例如巨噬细胞-CSF(M-CSF)；粒细胞-巨噬细胞-CSF(GM-CSF)；和粒细胞-CSF(G-CSF)；白细胞介素(IL)例如IL-1、IL-1α、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13和IL-18；肿瘤坏死因子例如TNF-α或TNF-β；和其它多肽因子，包括例如LIF和kit配体(KL)。如本文所用，细胞因子、生长因子和激素包括从天然来源获得的或从重组的细菌、真核或哺乳动物细胞培养系统产生的蛋白和天然序列细胞因子的生物活性等同物。
在一些实施方案中，修饰的信号传导剂是生长因子的修饰形式，所述生长因子选自但不限于转化生长因子(TGF)如TGF-α和TGF-β(及其亚型，包括TGF-β的多种亚型，包括TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3)、表皮生长因子(EGF)、胰岛素样生长因子如胰岛素样生长因子-I和-II、成纤维细胞生长因子(FGF)、heregulin、血小板衍生生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)。
在一个实施方案中，生长因子是成纤维细胞生长因子(FGF)的修饰形式。示例性的FGF包括但不限于FGF1、FGF2、FGF3、FGF4、FGF5、FGF6、FGF7、FGF8、FGF9、FGF10、FGF11、FGF12、FGF13、FGF14、鼠FGF15、FGF16、FGF17、FGF18、FGF19、FGF20、FGF21、FGF22和FGF23。
在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂是血管内皮生长因子(VEGF)。VEGF是一种有效的生长因子，其在生理和病理血管生成中起主要作用，调节血管通透性，并可作为生长因子作用于表达VEGF受体的细胞。另外的功能包括刺激巨噬细胞谱系和内皮细胞中的细胞迁移。存在VEGF家族生长因子的几个成员，以及至少三种受体(VEGFR-1、VEGFR-2和VEGFR-3)。VEGF家族的成员可以结合和激活多于一种VEGFR类型。例如，VEGF-A结合VEGFR-1和-2，而VEGF-C可以结合VEGFR-2和-3。VEGFR-1和-2的活化调节血管生成，而VEGFR-3的活化与淋巴管生成有关。主要的促血管生成信号是由VEGFR-2的活化产生的。已经报道VEGFR-1活化可能与血管生成中的负作用有关。还报道了VEGFR-1信号传导对于通过骨髓来源的VEGFR-1阳性细胞(有助于骨中转移前小生境的形成)的体内肿瘤的进展是重要的。已经开发了几种基于VEGF-A引导/中和性治疗抗体的疗法，主要用于依赖血管生成的多种人类肿瘤的治疗。但是这些并不是没有副作用。考虑到这些作为一般的、非细胞/组织特异性VEGF/VEGFR相互作用抑制剂起作用，这可能并不令人惊讶。因此，希望将VEGF(例如VEGF-A)/VEGFR-2抑制限制在特定的靶细胞(例如肿瘤血管内皮细胞)。
在一些实施方案中，所述VEGF是VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D或VEGF-E和其亚型，包括VEGF-A的多种亚型，例如VEGF121、VEGF121b、VEGF145、VEGF165、VEGF165b、VEGF189和VEGF206。在一些实施方案中，修饰的信号传导剂对VEGFR-1(Flt-1)和/或VEGFR-2(KDR/Flk-1)具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，修饰的信号传导剂对VEGFR-1(Flt-1)和/或VEGFR-2(KDR/Flk-1)具有显著降低或消除的亲和力和/或活性。在一个实施方案中，修饰的信号传导剂对VEGFR-2(KDR/Flk-1)具有降低的亲和力和/或活性和/或对VEGFR-1(Flt-1)具有显著降低或消除的亲和力和/或活性。这样的实施方案可用于例如伤口愈合或治疗缺血相关疾病的方法中(不希望受理论的束缚，由VEGFR-2对内皮细胞功能和血管生成的作用介导)。在多个实施方案中，避免了与VEGFR-1(Flt-1)的结合，其与癌症和促炎活性有关。在多个实施方案中，VEGFR-1(Flt-1)起诱饵受体的作用，因此显著降低或消除在该受体处的亲和力，避免了治疗剂的隔离。在一个实施方案中，修饰的信号传导剂对VEGFR-1(Flt-1)的亲和力和/或活性显著降低或消除，和/或对VEGFR-2(KDR/Flk-1)的亲和力和/或活性显著降低或消除。在一些实施方案中，所述VEGF是VEGF-C或VEGF-D。在这样的实施方案中，修饰的信号传导剂对VEGFR-3亲和力和/或活性降低。或者，修饰的信号传导剂对VEGFR-3的亲和力和/或活性显著降低或消除。
促血管再生疗法在多种疾病(例如缺血性心脏病、出血等)中也是重要的，并且包括基于VEGF的治疗。VEGFR-2的活化是促血管再生的(作用于内皮细胞)。VEFGR-1的活化可以引起炎性细胞(包括例如巨噬细胞)迁移的刺激，并导致与炎症相关的血管通透性过高。激活VEFGR-1也可以促进骨髓相关的肿瘤小生境形成。因此，在这种情况下，针对VEGFR-2活化选择的基于VEGF治疗是期望的。此外，细胞特异性靶向，例如靶向内皮细胞，是期望的。
在一些实施方案中，修饰的信号传导剂对VEGFR-2具有降低的亲和力和/或活性(例如拮抗性的)和/或对VEGFR-1具有显著降低或消除的亲和力和/或活性。当通过与肿瘤内皮细胞标记物(例如PSMA和其它)结合的靶向部分靶向肿瘤血管内皮细胞时，该构建体特异性抑制在该标记物阳性细胞上的VEGFR-2激活，而不在路径中和在靶细胞上激活VEGFR-1(如果活性被消除)，从而消除例如炎性应答的诱导。这将为许多肿瘤类型提供与VEGF-A中和疗法相比更有选择性和更安全的抗血管生成疗法。
在一些实施方案中，修饰的信号传导剂对VEGFR-2的亲和力和/或活性(例如激动剂)降低和/或对VEGFR-1的亲和力和/或活性显著降低或消除。在一些实施方案中，通过靶向血管内皮细胞，这样的构建体促进血管生成而不引起VEGFR-1相关的炎性应答诱导。因此，这种构建体将具有靶向的促血管生成作用，显著降低了由VEGFR-2以及VEGR-1的全身性活化引起的副作用的风险。
在一个示例性实施方案中，修饰的信号传导剂是VEGF165，其具有SEQ ID NO：55)的氨基酸序列。
在另一个示例性实施方案中，修饰的信号传导剂是VEGF165b，其具有SEQ ID NO：56的氨基酸序列。
在这些实施方案中，修饰的信号传导剂在氨基酸I83具有突变(例如，在I83具有取代突变，例如，I83K、I83R或I83H)。不希望受理论的束缚，据信这种突变可导致受体结合亲和力降低。例如，参见美国专利号9,078,860，其全部内容在此引入作为参考。
在一些实施方案中，修饰的信号传导剂是激素的修饰形式，其选自但不限于人绒毛膜促性腺激素、促性腺激素释放激素、雄激素、雌激素、促甲状腺激素、促卵泡激素、促黄体激素、催乳素、生长激素、促肾上腺皮质激素、抗利尿激素、催产素、促甲状腺激素释放激素、生长激素释放激素、促肾上腺皮质激素释放激素、促生长素抑制素、多巴胺、褪黑素、甲状腺素、降钙素、甲状旁腺素、糖皮质激素、盐皮质激素、肾上腺素、去甲肾上腺素、孕酮、胰岛素、胰高血糖素、淀粉状蛋白毒素、钙三醇、钙化醇、心房钠尿肽、胃泌素、分泌素、缩胆囊素、神经肽Y、饥饿素(ghrelin)、PYY3-36、胰岛素样生长因子(IGF)、瘦素、促凝血生成素、促红细胞生成素(EPO)和血管紧张素原。
在一些实施方案中，修饰的信号传导剂是TNF-α。TNF是一种多效性细胞因子，具有许多不同的功能，包括调节细胞生长、分化、凋亡、肿瘤发生、病毒复制、自身免疫、免疫细胞功能和运输、炎症和脓毒性休克。它结合靶细胞上两种不同的膜受体：TNFR1(p55)和TNFR2(p75)。TNFR1表现出非常广泛的表达模式，而TNFR2优选在淋巴细胞、Treg、内皮细胞、某些神经元、小胶质细胞、心肌细胞和间充质干细胞的某些群体上表达。非常不同的生物学途径响应受体活化而活化，尽管也存在一些重叠。作为一般规则，不希望受理论的束缚，TNFR1信号传导与凋亡(细胞死亡)的诱导有关，而TNFR2信号传导与细胞存活信号的激活(例如NFkB途径的激活)有关。TNF的施用是全身毒性的，这主要是由于TNFR1的参与。然而，应该注意到TNFR2的激活也与广泛的活性有关，并且与TNFR1一样，在开发基于TNF的治疗剂的情况下，对TNF靶向和活性的控制是重要的。
在一些实施方案中，修饰的信号传导剂对TNFR1和/或TNFR2的亲和力和/或活性降低。在一些实施方案中，修饰的信号传导剂对TNFR1和/或TNFR2的亲和力和/或活性显著降低或消除。TNFR1在大多数组织中表达，并且参与细胞死亡信号传导，而相比之下，TNFR2参与细胞存活信号传导。因此，在涉及治疗癌症的方法的实施方案中，修饰的信号传导剂对TNFR1的亲和力和/或活性降低和/或对TNFR2的亲和力和/或活性显著降低或消除。在这些实施方案中，嵌合蛋白可以靶向期望凋亡的细胞，例如肿瘤细胞或肿瘤血管系统内皮细胞。在涉及促进细胞存活的方法的实施方案中，例如，在用于治疗神经变性疾病的神经发生中，修饰的信号传导剂具有降低的对TNFR2的亲和力和/或活性和/或显著降低或消除的对TNFR1的亲和力和/或活性。换句话说，在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白包含修饰的TNF-α剂，其允许促进死亡或存活信号。
在一些实施方案中，嵌合蛋白具有修饰的TNF，其对TNFR1的亲和力和/或活性降低和/或对TNFR2的亲和力和/或活性显著降低或消除。在一些实施方案中，与野生型TNF和/或仅带有导致对TNFR1亲和力和/或活性降低的突变的嵌合体相比，这种嵌合体是更有效的凋亡诱导物。在一些实施方案中，发现这样的嵌合体用于诱导肿瘤细胞死亡或肿瘤脉管系统内皮细胞死亡(例如在癌症的治疗中)。而且，在一些实施方案中，这些嵌合体避免或减少Treg细胞通过TNFR2的活化，例如，因此进一步支持TNFR1介导的体内抗肿瘤活性。
在一些实施方案中，嵌合蛋白具有修饰的TNF，其对TNFR2的亲和力和/或活性降低和/或对TNFR1的亲和力和/或活性显著降低或消除。在一些实施方案中，这样的嵌合体是一些细胞类型的细胞存活的更有效的活化剂，其可以是多种疾病环境中的特定治疗目标，包括但不限于刺激神经发生。此外，这种TNFR2偏好性嵌合体也可用于治疗自身免疫疾病(例如，克罗恩病、糖尿病、MS、结肠炎等和本文所述的许多其它疾病)。在一些实施方案中，嵌合体靶向自身反应性T细胞。在一些实施方案中，嵌合体促进Treg细胞活化和细胞毒性T细胞的间接抑制。
在一些实施方案中，嵌合体引起自身反应性T细胞的死亡，例如通过激活TNFR2和/或避免TNFR1(例如对TNFR2具有降低的亲和力和/或活性和/或对TNFR1具有显著降低或消除的亲和力和/或活性的修饰的TNF)。不希望受理论的束缚，这些自身反应性T细胞的凋亡/存活信号例如通过NFkB途径活性/信号传导改变而改变。在一些实施方案中，嵌合体引起在NFκB途径中具有损伤或修饰的自身反应性T细胞的死亡，这显示了它们的细胞死亡(凋亡)/存活信号传导特性的不平衡和任选地改变的对某些死亡诱导信号(例如TNFR2活化)的敏感性。
在一些实施方案中，基于TNFR-2的嵌合体在疾病中具有额外的治疗应用，所述疾病包括自身免疫疾病、多种心脏病、脱髓鞘和神经变性病症以及感染性疾病等。
在一个实施方案中，野生型TNF-α具有SEQ ID NO：57的氨基酸序列。
在这样的实施方案中，修饰的TNF-α剂在一个或多个氨基酸位置29、31、32、84、85、86、87、88、89、145、146和147具有突变，其产生具有降低的受体结合亲和力的修饰的TNF-α。例如，参见美国专利号7,993,636，其全部内容在此引入作为参考。
在一些实施方案中，修饰的人TNF-α部分在一个或多个氨基酸位置R32、N34、Q67、H73、L75、T77、S86、Y87、V91、I97、T105、P106、A109、P113、Y115、E127、N137、D143、A145和E146具有突变，如WO/2015/007903中所述，其全部内容通过引用并入本文(根据人TNF序列编号，Genbank登录号BAG70306，版本BAG70306.1 GI:197692685)。在一些实施方案中，修饰的人TNF-α部分具有选自L29S、R32G、R32W、N34G、Q67G、H73G、L75G、L75A、L75S、T77A、S86G、S86T、Y87Q、Y87L、Y87A、Y87F、Y87H、V91G、V91A、I97A、I97Q、I97S、T105G、P106G、A109Y、P113G、Y115G、Y115A、E127G、N137G、D143N、A145G、A145R、A145T、E146D、E146K和S147D的取代突变。在一些实施方案中，人TNF-α部分具有选自Y87Q、Y87L、Y87A、Y87F和Y87H的突变。在另一个实施方案中，人TNF-α部分具有选自I97A、I97Q和I97S的突变。在另一个实施方案中，人TNF-α部分具有选自Y115A和Y115G的突变。在一些实施方案中，人TNF-α部分具有E146K突变。在一些实施方案中，人TNF-α部分具有Y87H和E146K突变。在一些实施方案中，人TNF-α部分具有Y87H和A145R突变。在一些实施方案中，人TNF-α部分具有R32W和S86T突变。在一些实施方案中，人TNF-α部分具有R32W和E146K突变。在一些实施方案中，人TNF-α部分具有L29S和R32W突变。在一些实施方案中，人TNF-α部分具有D143N和A145R突变。在一些实施方案中，人TNF-α部分具有D143N和A145R突变。在一些实施方案中，人TNF-α部分具有A145T、E146D和S147D突变。在一些实施方案中，人TNF-α部分具有A145T和S147D突变。
在一些实施方案中，修饰的TNF-α剂具有选自N39Y、S147Y和Y87H的一个或多个突变，如WO2008/124086中所述，其全部内容通过引用并入本文。
在一些实施方案中，修饰的人TNF-α部分具有提供如PCT/IB2016/001668中所述的受体选择性的突变，其全部内容在此引入作为参考。在一些实施方案中，TNF的突变是TNF-R1选择性的。在一些实施方案中，TNF-R1选择性的TNF突变在R32、S86和E146位中的一个或多个处。在一些实施方案中，TNF-R1选择性的TNF突变是R32W、S86T和E146K中的一个或多个。在一些实施方案中，TNF-R1选择性的TNF突变是R32W、R32W/S86T、R32W/E146K和E146K中的一个或多个。在一些实施方案中，TNF的突变是TNF-R2选择性的。在一些实施方案中，TNF-R2选择性的TNF突变在A145、E146和S147位中的一个或多个处。在一些实施方案中，TNF-R2选择性的TNF突变是A145T、A145R、E146D和S147D中的一个或多个。在一些实施方案中，TNF-R2选择性的TNF突变是A145R、A145T/S147D和A145T/E146D/S147D中的一个或多个。
在一个实施方案中，修饰的信号传导剂是TNF-β。TNF-β可以与LT-β(LT-α1β2)形成同三聚体或异三聚体。在一些实施方案中，修饰的信号传导剂对TNFR1和/或TNFR2和/或疱疹病毒进入介导物(HEWM)和/或LT-βR的亲和力和/或活性显著降低或消除。
在一个实施方案中，野生型TNF-β具有SEQ ID NO：58的氨基酸序列。
在这样的实施方案中，修饰的TNF-β剂可以包含在106-113位的一个或多个氨基酸上的突变，其产生对TNFR2的受体结合亲和力降低的修饰的TNF-β。在一个实施方案中，修饰的信号传导剂在氨基酸位置106-113具有一个或多个取代突变。在示例性实施方案中，取代突变选自Q107E、Q107D、S106E、S106D、Q107R、Q107N、Q107E/S106E、Q107E/S106D、Q107D/S106E和Q107D/S106D。在另一个实施方案中，修饰的信号传导剂在106-113位具有约1至约3个氨基酸的插入。
在一些实施方案中，修饰的试剂是TNF家族成员(例如TNF-α、TNF-β)，其可以是如WO2015/007903和PCT/IB2016/001668中所述的单链三聚体形式，其全部内容通过引用并入本文。
在一些实施方案中，修饰的试剂是TNF家族成员(例如TNF-α、TNF-β)，其在TNFR1处具有降低的亲和力和/或活性，即拮抗活性(例如天然拮抗活性或由于一个或多个突变而产生的拮抗活性，参见例如WO2015/007520，其全部内容通过引用并入本文)。在这些实施方案中，修饰的试剂是TNF家族成员(例如TNF-α、TNF-β)，其还任选地对TNFR2具有显著降低或消除的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，修饰的试剂是TNF家族成员(例如TNF-α、TNF-β)，其在TNFR2处具有降低的亲和力和/或活性，即拮抗活性(例如天然拮抗活性或由于一个或多个突变而产生的拮抗活性，参见例如WO2015/007520，其全部内容通过引用并入本文)。在这些实施方案中，修饰的试剂是TNF家族成员(例如TNF-α、TNF-β)，其还任选地对TNFR1具有显著降低或消除的亲和力和/或活性。这些实施方案的构建体可用于例如以细胞特异性方式抑制TNF应答的方法中。在一些实施方案中，拮抗性TNF家族成员(例如TNF-α、TNF-β)是如WO2015/007903中所述的单链三聚体形式。
在一个实施方案中，修饰的信号传导剂是TRAIL。在一些实施方案中，修饰的TRAIL剂对DR4(TRAIL-RI)和/或DR5(TRAIL-RII)和/或DcR1和/或DcR2的亲和力和/或活性降低。在一些实施方案中，修饰的TRAIL剂对DR4(TRAIL-RI)和/或DR5(TRAIL-RII)和/或DcR1和/或DcR2亲和力和/或活性显著降低或消除。
在一个实施方案中，野生型TRAIL具有SEQ ID NO：59的氨基酸序列。
在这些实施方案中，修饰的TRAIL剂可在氨基酸位置T127-R132、E144-R149、E155-H161、Y189-Y209、T214-1220、K224-A226、W231、E236-L239、E249-K251、T261-H264和H270-E271(根据人序列编号，Genbank登录号NP_003801，版本10NP_003801.1，GI:4507593；见上文)包含突变。
在一些实施方案中，修饰的TRAIL剂可包含一个或多个突变，所述突变显著降低其对TRAIL-R1的亲和力和/或活性。在这些实施方案中，修饰的TRAIL剂可特异性结合TRIL-R2。示例性的突变包括在一个或多个氨基酸位置Y189、R191、Q193、H264、I266和D267的突变。例如，突变可以是Y189Q、R191K、Q193R、H264R、I266L和D267Q中的一个或多个。在一个实施方案中，修饰的TRAIL剂包含突变Y189Q、R191K、Q193R、H264R、I266L和D267Q。
在一些实施方案中，修饰的TRAIL剂可包含一个或多个突变，这些突变显著降低其对TRAIL-R2的亲和力和/或活性。在这样的实施方案中，修饰的TRAIL剂可特异性结合TRIL-R1。示例性的突变包括在一个或多个氨基酸位置G131、R149、S159、N199、K201和S215的突变。例如，突变可以是G131R、R149I、S159R、N199R、K201H和S215D中的一个或多个。在一个实施方案中，修饰的TRAIL剂包含突变G131R、R149I、S159R、N199R、K201H和S215D。其它TRAIL突变描述于例如Trebing等，(2014)Cell Death and Disease，5:e1035中，其全部公开内容在此引入作为参考。
在一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂是TGFα。在这样的实施方案中，所述修饰的TGFα剂对表皮生长因子受体(EGFR)的亲和力和/或活性降低。在一些实施方案中，所述修饰的TGFα剂对表皮生长因子受体(EGFR)的亲和力和/或活性显著降低或消除。
在一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂是TGFβ。在这样的实施方案中，修饰的信号传导剂对TGFBR1和/或TGFBR2具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，修饰的信号传导剂对TGFBR1和/或TGFBR2具有显著降低或消除的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，修饰的信号传导剂任选地对TGFBR3具有降低的或显著降低的或消除的亲和力和/或活性，不希望受理论的束缚，TGFBR3可以作为TGFβ受体的配体的储库。在一些实施方案中，TGFβ可以相比TGFBR2更偏向TGFBR1，或者相比TGFBR1更偏向TGFBR2。类似地，不希望受理论的束缚，LAP可以作为TGFβ受体的配体的储库。在一些实施方案中，修饰的信号传导剂对TGFBR1和/或TGFBR2具有降低的亲和力和/或活性和/或对潜伏相关肽(LatencyAssociated peptide,LAP)具有显著降低或消除的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，这样的嵌合体可用于Camurati-Engelmann疾病或与不适当的TGFβ信号传导相关的其它疾病。
在一些实施方案中，修饰的试剂是TGF家族成员(例如TGFα、TGFβ)，其在TGFBR1、TGFBR2、TGFBR3中的一个或多个处具有降低的亲和力和/或活性，即拮抗活性(例如天然拮抗活性或作为一个或多个突变的结果的拮抗活性，参见例如WO2015/007520，其全部内容通过引用并入本文)。在这些实施方案中，修饰的试剂是TGF家族成员(例如TGFα、TGFβ)，其还任选地在TGFBR1、TGFBR2、TGFBR3中的一个或多个处具有显著降低或消除的亲和力和/或活性。
在一些实施方案中，修饰的试剂是TGF家族成员(例如TGFα、TGFβ)，其在TGFBR1和/或TGFBR2处具有降低的亲和力和/或活性，即拮抗活性(例如天然拮抗活性或作为一个或多个突变的结果的拮抗活性，参见例如WO2015/007520，其全部内容通过引用并入本文)。在这些实施方案中，修饰的试剂是TGF家族成员(例如TGFα、TGFβ)，其还任选地在TGFBR3处具有显著降低或消除的亲和力和/或活性。
在一个实施方案中，修饰的信号传导剂是白细胞介素。在一个实施方案中，修饰的信号传导剂是IL-1。在一个实施方案中，修饰的信号传导剂是IL-1α或IL-1β。在一些实施方案中，修饰的信号传导剂对IL-1R1和/或IL-1RAcP具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，修饰的信号传导剂对IL-1R1和/或IL-1RAcP具有显著降低或消除的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，修饰的信号传导剂对IL-1R2具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，修饰的信号传导剂对IL-1R2的亲和力和/或活性显著降低或消除。例如，在一些实施方案中，本发明的修饰的IL-1剂避免了在IL-1R2处的相互作用，并因此显著降低了其作为治疗剂的诱饵和/或储槽(sink)的功能。
在一个实施方案中，野生型IL-1β具有SEQ ID NO：60的氨基酸序列。
IL1是一种促炎细胞因子和重要的免疫系统调节剂。它是CD4 T细胞应答的有效激活剂，增加Th17细胞的比例以及IFNγ和IL-4产生细胞的扩增。IL-1也是CD8+T细胞的有效调节物，增强抗原特异性CD8+T细胞的扩增、分化、向外周的迁移和记忆。IL-1受体包括IL-1R1和IL-1R2。与IL-1R1结合并和通过IL-1R1的信号传导构成了IL-1介导其许多生物(和病理)活性的机制。IL1-R2可以作为诱饵受体发挥作用，从而降低通过IL-1R1的相互作用和信号传导对IL-1的可用性。
在一些实施方案中，修饰的IL-1对IL-1R1的亲和力和/或活性(例如激动活性)降低。在一些实施方案中，修饰的IL-1对IL-1R2具有显著降低或消除的亲和力和/或活性。在这样的实施方案中，存在可恢复的IL-1/IL-1R1信号传导和预防治疗性嵌合体在IL-R2处的丢失，并因此减少所需的IL-1的剂量(例如，相对于野生型或仅携带针对IL-R1的弱化突变的嵌合体)。发现此类构建体可用于例如治疗癌症的方法，包括例如刺激免疫系统产生抗癌应答。
在一些实施方案中，修饰的IL-1对IL-1R1具有降低的亲和力和/或活性(例如拮抗活性，例如天然拮抗活性或作为一个或多个突变的结果的拮抗活性，参见例如WO2015/007520，其全部内容通过引用并入本文)。在一些实施方案中，修饰的IL-1对IL-1R2具有显著降低或消除的亲和力和/或活性。在这样的实施方案中，存在不可恢复的IL-1/IL-1R1信号传导，并且防止治疗性嵌合体在IL-R2处的丢失，并因此减少所需IL-1的剂量(例如，相对于野生型或仅携带针对IL-R1的弱化突变的嵌合体)。发现此类构建体可用于例如治疗自身免疫疾病的方法，包括例如抑制免疫系统。
在这样的实施方案中，修饰的信号传导剂具有氨基酸52-54的缺失，其产生对I型IL-1R的结合亲和力降低且生物活性降低的修饰的人IL-1β。参见，例如，WO1994/000491，其全部内容在此引入作为参考。在一些实施方案中，修饰的人IL-1β具有一个或多个取代突变，所述取代突变选自A117G/P118G、R120X、L122A、T125G/L126G、R127G、Q130X、Q131G、K132A、S137G/Q138Y、L145G、H146X、L145A/L147A、Q148X、Q148G/Q150G、Q150G/D151A、M152G、F162A、F162A/Q164E、F166A、Q164E/E167K、N169G/D170G、I172A、V174A、K208E、K209X、K209A/K210A、K219X、E221X、E221 S/N224A、N224S/K225S、E244K、N245Q(其中X可以是氨基酸的任何变化，例如非保守变化)，其显示与IL-1R的结合降低，例如如WO2015/007542和WO/2015/007536中所述，其全部内容通过引用并入本文(基于人IL-1β序列编号，Genbank登录号NP_000567，版本NP_NP-000567.1，GI:10835145)。在一些实施方案中，修饰的人IL-1β可以具有选自R120A、R120G、Q130A、Q130W、H146A、H146G、H146E、H146N、H146R、Q148E、Q148G、Q148L、K209A、K209D、K219S、K219Q、E221S和E221K的一个或多个突变。在一个实施方案中，修饰的人IL-1β包含突变Q131G和Q148G。在一个实施方案中，修饰的人IL-1β包含突变Q148G和K208E。在一个实施方案中，修饰的人IL-1β包含突变R120G和Q131G。在一个实施方案中，修饰的人IL-1β包含突变R120G和H146A。在一个实施方案中，修饰的人IL-1β包含突变R120G和H146N。在一个实施方案中，修饰的人IL-1β包含突变R120G和H146R。在一个实施方案中，修饰的人IL-1β包含突变R120G和H146E。在一个实施方案中，修饰的人IL-1β包含突变R120G和H146G。在一个实施方案中，修饰的人IL-1β包含突变R120G和K208E。在一个实施方案中，修饰的人IL-1β包含突变R120G、F162A和Q164E。
在一个实施方案中，修饰的信号传导剂是IL-2。在这样的实施方案中，修饰的信号传导剂对IL-2Rα和/或IL-2Rβ和/或IL-2Rγ的亲和力和/或活性降低。在一些实施方案中，修饰的信号传导剂对IL-2Rβ和/或IL-2Rγ的亲和力和/或活性降低。在一些实施方案中，修饰的信号传导剂对IL-2Rα的亲和力和/或活性显著降低或消除。这样的实施方案可能与癌症的治疗有关，例如当修饰的IL-2在IL-2Rβ和/或IL-2Rγ处是激动性时。例如，本发明的构建体可能有利于具有IL2受体β和γ的CD8+T细胞的减弱的活化(其可以提供抗肿瘤作用)，并且不利于具有IL2受体α、β和γ的Treg(其可以提供免疫抑制性的促肿瘤作用)。此外，在一些实施方案中，IL-2Rβ和/或IL-2Rγ优于IL-2Rα的偏好性避免了IL-2副作用如肺水肿。此外，基于IL-2的嵌合体可用于治疗疾病(例如自身免疫疾病)，例如当修饰的IL-2在IL-2Rβ和/或IL-2Rγ处是拮抗性的(例如天然拮抗活性或由一个或多个突变引起的拮抗活性，参见例如WO2015/007520，其全部内容通过引用结合到本文中)时。例如，本发明的构建体可能有利于具有IL2受体β和γ的CD8+T细胞的减弱的抑制(并因此抑制免疫应答)，而不利于具有IL2受体α、β和γ的Treg。或者，在一些实施方案中，带有IL-2的嵌合体有利于Treg的活化，并因此有利于免疫抑制，以及不利于CD8+T细胞的活化。例如，这些构建体可用于治疗将受益于免疫抑制的疾病或病症，例如自身免疫性病症。
在一些实施方案中，嵌合蛋白具有本文所述的针对CD8+T细胞的靶向部分，以及修饰的IL-2试剂，其对IL-2Rβ和/或IL-2Rγ的亲和力和/或活性降低和/或对IL-2Rα的亲和力和/或活性显著降低或消除。在一些实施方案中，这些构建体提供靶向的CD8+T细胞活性，并且通常对Treg细胞是无活性的(或活性显著降低)。在一些实施方案中，与野生型IL-2相比，这种构建体具有增强的免疫刺激作用(例如，不希望受理论的束缚，通过不刺激Treg)，同时消除或降低与IL-2相关的全身毒性。
在一个实施方案中，野生型IL-2具有SEQ ID NO：61的氨基酸序列。
在这样的实施方案中，修饰的IL-2剂在氨基酸L72(L72G、L72A、L72S、L72T、L72Q、L72E、L72N、L72D、L72R或L72K)、F42(F42A、F42G、F42S、F42T、F42Q、F42E、F42N、F42D、F42R或F42K)和Y45(Y45A、Y45G、Y45S、Y45T、Y45Q、Y45E、Y45N、Y45D、Y45R或Y45K)处具有一个或多个突变。不希望受理论的束缚，据信与野生型IL-2相比，这些修饰的IL-2剂对高亲和力亲和力IL-2受体的亲和力降低，并对中间亲和力IL-2受体保持亲和力。例如，参见美国专利公开号2012/0244112，其全部内容在此引入作为参考。
在一些实施方案中，修饰的IL-2剂在氨基酸R38、F42、Y45和E62处具有一个或多个突变。例如，修饰的IL-2剂可以包含R38A、F42A、Y45A和E62A中的一个或多个。在一些实施方案中，修饰的IL-2剂可以包含C125处的突变。例如，突变可以是C125S。在这样的实施方案中，修饰的IL-2剂可以对IL-2Rα具有显著降低的亲和力和/或活性，如在例如Carmenate等(2013)The Journal of Immunology,190:6230-6238中所述，其全部公开内容通过引用并入本文。在一些实施方案中，在R38、F42、Y45和/或E62处具有突变的修饰的IL-2剂能够诱导效应细胞的扩增，所述效应细胞包括CD8+T细胞和NK细胞但不包括Treg细胞。在一些实施方案中，在R38、F42、Y45和/或E62处具有突变的经修饰的IL-2剂比野生型IL-2剂毒性低。包含对IL-2Rα的亲和力和/或活性显著降低的经修饰的IL-2剂的嵌合蛋白可以应用于例如肿瘤学中。
在其它实施方案中，修饰的IL-2剂对IL-2Rβ可以具有显著降低的亲和力和/或活性，如在例如WO2016/025385中所述，其全部公开内容通过引用并入本文。在这样的实施方案中，修饰的IL-2剂可以诱导Treg细胞的扩增，但不诱导效应细胞例如CD8+T细胞和NK细胞。包含对IL-2Rβ具有显著降低的亲和力和/或活性的修饰的IL-2剂的嵌合蛋白可以应用于例如自身免疫疾病的治疗中。在一些实施方案中，修饰的IL-2剂可以包含氨基酸N88、D20和/或A126处的一个或多个突变。例如，修饰的IL-2剂可以包含N88R、N88I、N88G、D20H、Q126L和Q126F中的一个或多个。
在多个实施方案中，修饰的IL-2剂可以包含在D109或C125的突变。例如，突变可以是D109C或C125S。在一些实施方案中，在D109或C125处具有突变的修饰的IL-2可以用于结合PEG部分。
在一个实施方案中，修饰的信号传导剂是IL-3。在一些实施方案中，修饰的信号传导剂对IL-3受体具有降低的亲和力和/或活性，IL-3受体是具有与共同的β(βc或CD131)亚基配对的独特α链的异二聚体。在一些实施方案中，修饰的信号传导剂对IL-3受体具有显著降低或消除的亲和力和/或活性，IL-3受体是具有与共有的β(βc或CD131)亚基配对的独特α链的异二聚体。
在一个实施方案中，修饰的信号传导剂是IL-4。在这样的实施方案中，修饰的信号传导剂对1型和/或2型IL-4受体具有降低的亲和力和/或活性。在这样的实施方案中，修饰的信号传导剂对1型和/或2型IL-4受体具有显著降低或消除的亲和力和/或活性。1型IL-4受体由具有共同γ链的IL-4Rα亚基组成，并特异性结合IL-4。2型IL-4受体包括与称为IL-13Rα1的不同亚基结合的IL-4Rα亚基。在一些实施方案中，修饰的信号传导剂具有显著降低或消除的2型IL-4受体的亲和力和/或活性。
在一个实施方案中，野生型IL-4具有SEQ ID NO：62的氨基酸序列。
在这样的实施方案中，修饰的IL-4剂在氨基酸R121(R121A、R121D、R121E、R121F、R121H、R121I、R121K、R121N、R121P、R121T、R121W)、E122(E122F)、Y124(Y124A、Y124Q、Y124R、Y124S、Y124T)和S125(S125A)处具有一个或多个突变。不希望受理论的束缚，据信这些修饰的IL-4剂保持由I型受体介导的活性，但显著降低由其它受体介导的生物活性。例如，参见美国专利号6,433,157，其全部内容在此引入作为参考。
在一个实施方案中，修饰的信号传导剂是IL-6。IL-6通过细胞表面I型细胞因子受体复合物传导信号，所述复合物包括结合配体的IL-6R链(CD126)和信号转导成分gp130。IL-6也可以结合可溶形式的IL-6R(sIL-6R)，其是IL-6R的细胞外部分。sIL-6R/IL-6复合物可能参与神经元的轴突生长和存活，因此，在通过髓鞘再形成在神经再生中可能是重要的。因此，在一些实施方案中，修饰的信号传导剂对IL-6R/gp130和/或sIL-6R具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，修饰的信号传导剂对IL-6R/gp130和/或sIL-6R具有显著降低的或消除的亲和力和/或活性。
在一个实施方案中，野生型IL-6具有SEQ ID NO：63的氨基酸序列。
在这样的实施方案中，修饰的信号传导剂在氨基酸58、160、163、171或177处具有一个或多个突变。不希望受理论的束缚，据信这些修饰的IL-6剂表现出对IL-6Rα的结合亲和力降低和生物活性降低。参见，例如，WO97/10338，其全部内容在此引入作为参考。
在一个实施方案中，修饰的信号传导剂是IL-10。在这样的实施方案中，修饰的信号传导剂对IL-10受体1和IL-10受体2具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，修饰的信号传导剂对IL-10受体1和IL-10受体2具有显著降低或消除的亲和力和/或活性。
在一个实施方案中，修饰的信号传导剂是IL-11。在这样的实施方案中，修饰的信号传导剂对IL-11Rα和/或IL-11Rβ和/或gp130具有降低的亲和力和/或活性。在这样的实施方案中，修饰的信号传导剂对IL-11Rα和/或IL-11Rβ和/或gp130具有显著降低的或消除的亲和力和/或活性。
在一个实施方案中，修饰的信号传导剂是IL-12。在这样的实施方案中，修饰的信号传导剂对IL-12Rβ1和/或IL-12Rβ2的亲和力和/或活性降低。在这样的实施方案中，修饰的信号传导剂对IL-12Rβ1和/或IL-12Rβ2具有显著降低或消除的亲和力和/或活性。
在一个实施方案中，修饰的信号传导剂是IL-13。在这样的实施方案中，修饰的信号传导剂对IL-4受体(IL-4Rα)和IL-13Rα1具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对IL-4受体(IL-4Rα)或IL-13Rα1具有显著降低的亲和力和/或活性。
在一个实施方案中，野生型IL-13具有SEQ ID NO：64的氨基酸序列。
在这样的实施方案中，修饰的IL-13剂在氨基酸13、16、17、66、69、99、102、104、105、106、107、108、109、112、113和114处具有一个或多个突变。不希望受理论的束缚，据信这些修饰的IL-13剂表现出降低的生物活性。参见，例如，WO2002/018422，其全部内容在此引入作为参考。
在一个实施方案中，修饰的信号传导剂是IL-18。在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对IL-18Rα和/或IL-18Rβ具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对IL-18Rα和/或IL-18Rβ具有显著降低或消除的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，修饰的信号传导剂对II型IL-18Rα具有显著降低或消除的亲和力和/或活性，II型IL-18Rα是IL-18Rα的亚型，其缺乏信号传导所需的TIR结构域。
在一个实施方案中，野生型IL-18具有SEQ ID NO：65的氨基酸序列。
在这样的实施方案中，修饰的IL-18剂可以包含选自Y37-K44、R49-Q54、D59-R63、E67-C74、R80、M87-A97、N127-K129、Q139-M149、K165-K171、R183和Q190-N191的氨基酸或氨基酸区域中的一个或多个突变，如WO/2015/007542中所述，其全部内容通过引用并入本文(基于人IL-18序列编号，Genbank登录号AAV38697，AAV38697.1版本，GI:54696650)。
在一个实施方案中，修饰的信号传导剂是IL-33。在这样的实施方案中，修饰的信号传导剂对ST-2受体和IL-1RAPcP的亲和力和/或活性降低。在一些实施方案中，修饰的信号传导剂对ST-2受体和IL-1RAPcP具有显著降低或消除的亲和力和/或活性。
在一个实施方案中，野生型IL-33具有SEQ ID NO：66的氨基酸序列。
在这样的实施方案中，修饰的IL-33剂可以包含选自I113-Y122、S127-E139、E144-D157、Y163-M183、E200、Q215、L220-C227和T260-E269的氨基酸或氨基酸区域中的一个或多个突变，如WO/2015/007542中所述，其全部内容通过引用并入本文(基于人序列编号，Genbank登录号NP_254274，版本NP_254274.1，GI:15559209)。
在一个实施方案中，修饰的信号传导剂是表皮生长因子(EGF)。EGF是有效生长因子家族的成员。成员包括EGF、HB-EGF，和其它如TGFα、双调蛋白、神经调节蛋白、表皮调节蛋白、β细胞素。EGF家族受体包括EGFR(ErbB1)、ErbB2、ErbB3和ErbB4。这些可以作为同二聚体和/或异二聚体受体亚型发挥功能。不同的EGF家族成员对多种受体亚型表现出不同的选择性。例如，EGF与ErbB1/ErbB1、ErbB1/ErbB2、ErbB4/ErbB2和一些其它异源二聚体亚型相关。HB-EGF具有相似的模式，尽管它也与ErbB4/4相关。对EGF(EGF样)生长因子信号传导的正向或负向调节具有相当大的治疗意义。例如，抑制EGFR信号传导在治疗EGFR信号传导构成主要生长促进信号的多种癌症中是令人感兴趣的。或者，刺激EGFR信号传导在例如促进伤口愈合(急性和慢性)、口腔粘膜炎(多种癌症治疗的主要副作用，包括但不限于放射治疗)中具有治疗意义。
在一些实施方案中，修饰的信号传导剂对ErbB1、ErbB2、ErbB3和/或ErbB4的亲和力和/或活性降低。这些实施方案可用于例如治疗伤口的方法。在一些实施方案中，修饰的信号传导剂结合ErbB1、ErbB2、ErbB3和ErbB4中的一个或多个并拮抗受体的活性。在这样的实施方案中，修饰的信号传导剂对ErbB1、ErbB2、ErbB3和/或ErbB4的亲和力和/或活性降低，这使得受体的活性以减弱的方式被拮抗。这些实施方案可用于例如癌症的治疗。在一个实施方案中，修饰的信号传导剂对ErbB1的亲和力和/或活性降低。ErbB1是激酶抑制剂的治疗靶标，所述激酶刺抑制大多数具有副作用，因为它们不是非常有选择性的(例如吉非替尼、厄洛替尼、阿法替尼、布里加替尼和埃可替尼)。在一些实施方案中，减弱的拮抗性ErbB1信号传导比靶向EGF受体的其它试剂更有中靶性，并且具有更少的副作用。
在一些实施方案中，修饰的信号传导剂对ErbB1的亲和力和/或活性(例如拮抗性，例如天然拮抗活性或作为一个或多个突变结果的拮抗活性，参见，例如WO2015/007520，其全部内容通过引用结合到本文中)降低和/或对ErbB4或其可能相互作用的其它亚型的亲和力和/或活性显著降低或消除。通过靶向部分的特异性靶向，可以实现ErbB1/ErbB1受体活化的细胞选择性抑制(拮抗作用，例如天然拮抗活性或由一个或多个突变导致的拮抗活性，参见例如WO2015/007520，其全部内容通过引用结合到本文中)，而不与可能与抑制相关副作用相关的其它受体亚型结合。因此，与抑制体内所有细胞类型中的EGFR活性的EGFR激酶抑制剂相反，这种构建体将提供细胞选择性(例如，由于受体的扩增、过表达等而具有激活的EGFR信号传导的肿瘤细胞)、副作用降低的抗EGFR(ErbB1)药物作用。
在一些实施方案中，修饰的信号传导剂对ErbB4和/或其可能与之相互作用的其它亚型的亲和力和/或活性(例如激动剂)降低。通过靶向部分靶向特定靶细胞，实现ErbB1信号传导的选择性激活(例如上皮细胞)。在一些实施方案中，这种构建体可用于治疗伤口(促进伤口愈合)且副作用降低，尤其是用于治疗慢性病症和除局部施用治疗剂以外的施用(例如全身性伤口愈合)。
在一个实施方案中，修饰的信号传导剂是胰岛素或胰岛素类似物。在一些实施方案中，修饰的胰岛素或胰岛素类似物对胰岛素受体和/或IGF1或IGF2受体具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，修饰的胰岛素或胰岛素类似物对胰岛素受体和/或IGF1或IGF2受体具有显著降低或消除的亲和力和/或活性。在胰岛素受体处的减弱的反应可以控制糖尿病、肥胖症、代谢紊乱等，同时远离IGF1或IGF2受体，避免了促癌(pro-cancer)作用。
在一个实施方案中，修饰的信号传导剂是胰岛素样生长因子-I或胰岛素样生长因子-II(IGF-1或IGF-2)。在一个实施方案中，修饰的信号传导剂是IGF-1。在这样的实施方案中，修饰的信号传导剂对胰岛素受体和/或IGF1受体的亲和力和/或活性降低。在一个实施方案中，修饰的信号传导剂可以与IGF1受体结合并拮抗该受体的活性。在这样的实施方案中，修饰的信号传导剂对IGF1受体具有降低的亲和力和/或活性，这使得受体的活性以减弱的方式被拮抗。在一些实施方案中，修饰的信号传导剂对胰岛素受体和/或IGF1受体具有显著降低或消除的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，修饰的信号传导剂对IGF2受体具有降低的亲和力和/或活性，这使得受体的活性以减弱的方式被拮抗。在一个实施方案中，修饰的信号传导剂对胰岛素受体具有显著降低或消除的亲和力和/或活性，因此不干扰胰岛素信号传导。在多个实施方案中，这适用于癌症治疗。在多个实施方案中，本发明的试剂可以防止IR亚型A引起对癌症治疗的抗性。
在一些实施方案中，修饰的信号传导剂是EPO。在多个实施方案中，相对于野生型EPO或本文所述的其它基于EPO的试剂，修饰的EPO剂对EPO受体(EPOR)和/或肝配蛋白受体(EphR)具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，所述修饰的EPO剂对EPO受体(EPOR)和/或Eph受体(EphR)的亲和力和/或活性显著降低或消失。示例性EPO受体包括，但不限于，EPOR同二聚体或EPOR/CD131异二聚体。作为EPO受体还包括β-共同受体(βcR)。示例性的Eph受体包括，但不限于，EPHA1、EPHA2、EPHA3、EPHA4、EPHA5、EPHA6、EPHA7、EPHA8、EPHA9、EPHA10、EPHB1、EPHB2、EPHB3、EPHB4、EPHB5和EPHB6。在一些实施方案中，所述修饰的EPO蛋白包含一个或多个突变，所述突变导致EPO蛋白对包含一个或多个不同EPO受体或Eph受体(例如异二聚体、异三聚体等，包括但不限于EPOR-EPHB4、EPOR-βcR-EPOR)的受体的亲和力降低。还提供了EP专利公开号2492355(其全部内容在此引入作为参考)的受体，包括但不限于NEPOR。
在一些实施方案中，人EPO具有SEQ ID NO：67的氨基酸序列(前27个氨基酸是信号肽)。
在一些实施方案中，人EPO蛋白是EPO的成熟形式(其中信号肽被切除)，其是具有SEQ ID NO：68的序列的166个氨基酸残基的糖蛋白。
预期人EPO蛋白的结构包括四个螺旋束，包括螺旋A、B、C和D。在多个实施方案中，修饰的EPO蛋白包含位于对生物活性重要的EPO蛋白四个区域内的一个或多个突变，所述四个区域即氨基酸残基10-20、44-51、96-108和142-156。在一些实施方案中，所述一个或多个突变位于残基11-15、44-51、100-108和147-151。这些残基位于螺旋A(Val11、Arg14和Tyr15)，螺旋C(Ser100、Arg103、Ser104和Leu108)，螺旋D(Asn147、Arg150、Gly151和Leu155)，和A/B连接环(残基42-51)上。在一些实施方案中，修饰的EPO蛋白包含氨基酸41-52之间的残基和氨基酸147、150、151和155中的突变。不希望受理论的束缚，据信这些残基的突变对受体结合和体外生物活性都有显著的影响。在一些实施方案中，所述修饰的EPO蛋白包含第11、14、15、100、103、104和108位残基的突变。不希望受理论的束缚，据信这些残基的突变对受体结合活性具有适当的影响，并且对体外生物活性具有大得多的影响。示例性的取代包括但不限于Val11Ser、Arg14Ala、Arg14Gln、Tyr15lle、Pro42Asn、Thr44lle、Lys45Asp、Val46Ala、Tyr51Phe、Ser100Glu、Ser100Thr、Arg103Ala、Ser104lle、Ser104Ala、Leu108Lys、Asn147Lys、Arg150Ala、Gly151Ala和Leu155Ala中的一个或多个。
在一些实施方案中，修饰的EPO蛋白包含影响生物活性而不影响结合的突变，例如Eliot等Mapping of the Active Site of Recombinant Human Erythropoietin 1997年1月15日；Blood:89(2)，其全部内容在此引入作为参考。
在一些实施方案中，修饰的EPO蛋白包含涉及参与受体接触的EPO蛋白表面残基的一个或多个突变。不希望受理论的束缚，据信这些表面残基的突变不太可能影响蛋白折叠，从而保留一些生物活性。可突变的示例性表面残基包括但不限于残基147和150。在示例性实施方案中，突变是包括N147A、N147K、R150A和R150E中的一个或多个的取代。
在一些实施方案中，所述修饰的EPO蛋白包含一个或多个在残基N59、E62、L67和L70处的突变，以及一个或多个影响二硫键形成的突变。不希望受理论的束缚，据信这些突变影响折叠和/或被预期处于隐蔽位置，并因此间接影响生物活性。
在一个实施方案中，修饰的EPO蛋白包含显著降低受体结合的K20E取代。参见Elliott等,(1997)Blood,89:493-502，其全部内容在此引入作为参考。
可以引入本发明的嵌合EPO蛋白的其他EPO突变公开于例如Elliott等,(1997)Blood,89:493-502，其全部内容通过引用并入本文，和Taylor等,(2010)PEDS,23(4):251-260，其全部内容在此引入作为参考。
在一个实施方案中，本发明的嵌合蛋白具有(i)抗SIRP1α的靶向部分和(ii)针对肿瘤细胞的靶向部分，以及本文所述的任何修饰的或突变的信号传导剂。在一个实施方案中，本发明的嵌合蛋白具有针对巨噬细胞上SIRP1α的靶向部分和针对肿瘤细胞上PD-L1或PD-L2的第二靶向部分。
在多个实施方案中，信号传导剂是毒素或毒性酶。在一些实施方案中，毒素或毒性酶来源于植物和细菌。示例性的毒素或毒性酶包括，但不限于，白喉毒素、假单胞菌毒素、炭疽毒素、核糖体失活蛋白(RIP)如蓖麻毒蛋白和皂草素、莫迪克菌素、相思豆毒蛋白、白树毒蛋白和美洲商陆抗病毒蛋白。其它毒素包括Mathew等,(2009)Cancer Sci 100(8):1359-65中，全部公开内容在此引入作为参考。在这些实施方案中，本发明的嵌合蛋白可以用于以细胞类型特异性方式诱导细胞死亡。在这样的实施方案中，可以修饰毒素，例如突变，以降低毒素的亲和力和/或活性，以获得减毒的效果，如本文中其它信号传导剂所述。
具有信号传导剂的多特异性嵌合体以及融合体
在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白包含一个或多本文所述的信号传导剂和/或一个或多个额外的靶向部分(即，除了针对SIRP1α的靶向部分之外)。因此，本发明提供了嵌合或融合蛋白，其包括一个或多个信号传导剂、针对SIRP1α的靶向部分和/或一个或多个额外的靶向部分。
在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白具有靶向两个不同细胞(例如产生突触)或同一细胞(例如获得更集中的信号传导剂效应)的靶向部分。
在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白是多特异性的，即嵌合蛋白包含两个或多个具有识别和结合两个或更多个靶(例如抗原、或受体、或表位)的识别结构域(例如抗原识别结构域)的靶向部分。在这样的实施方案中，本发明的嵌合蛋白可以包含两个或更多个具有识别结构域的靶向部分，所述识别结构域识别并结合相同抗原或不同抗原或不同受体上的两个或更多个表位。在多个实施方案中，这类多特异性嵌合蛋白表现出有利的性质，例如增加的亲合力和/或改进的选择性。在一个实施方案中，本发明的嵌合蛋白包含两个靶向部分并且是双特异性的，即结合和识别相同抗原或不同抗原或不同受体上的两个表位。
在多个实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白包含两个或更多个靶向部分，每个靶向部分是本文所述的抗体或抗体衍生物。在一个示例性实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白包含至少一个包含抗SIRP1α的抗原识别结构域的抗体或抗体衍生物(例如VHH)和一个包含抗肿瘤抗原的识别结构域的抗体或抗体衍生物。
在多个实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白具有靶向不同抗原或受体的两个或更多个靶向部分，并且一个靶向部分可以针对其抗原或受体而被减弱，例如，所述靶向部分以低亲和力或亲合力结合其抗原或受体(包括，例如，该亲和力或亲合力小于另一靶向部分针对其抗原或受体所具有的亲和力或亲合力，例如，结合亲和力之间的差异可以是约10倍、或25倍、或50倍、或100倍、或300倍、或500倍、或1000倍、或5000倍；例如，较低亲和力或亲合力靶向部分可以以中到高nM或低到中μM范围内的KD结合其抗原或受体，而较高亲和力或亲合力靶向部分可以以中到高pM或低到中nM范围内的KD结合其抗原或受体)。例如，在一些实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白包含针对混杂(promiscuous)抗原或受体的减弱靶向部分，其可以改善对目标细胞的靶向(例如，通过其它靶向部分)并阻止跨越多种类型细胞的效应，包括那些治疗不靶向的细胞(例如，通过以比这些实施方案中提供的亲和力更高的亲和力结合混杂抗原或受体)。
本发明的多特异性嵌合蛋白可以使用本领域已知的方法构建，参见例如美国专利号9,067,991、美国专利公开号20110262348和WO2004/041862，其全部内容通过引用并入本文。在一个示例性实施方案中，包含两个或更多个靶向部分的本发明的多特异性嵌合蛋白可以通过化学交联构建，例如，通过氨基酸残基与有机衍生剂反应，如Blattler等,Biochemistry 24,1517-1524和EP294703所述，其全部内容通过引用并入本文。在另一个示例性实施方案中，通过遗传融合，即构建包括单独靶向部分的多肽的单一多肽，构建包含两个或更多个靶向部分的多特异性嵌合蛋白。例如，可以形成编码具有抗SIRP1α的抗原识别结构域的第一抗体或抗体衍生物(例如VHH)和具有抗肿瘤抗原的识别结构域的第二抗体或抗体衍生物的单一多肽构建体。PCT专利申请WO96/34103中公开了一种用于产生二价或多价VHH多肽构建体的方法，其全部内容以引用的方式并入本文中。在另一个示例性实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白可以通过使用连接子构建。例如，具有抗SIRP1α的抗原识别结构域的第一抗体或抗体衍生物(例如VHH)的羧基末端可以连接到具有抗肿瘤抗原的识别结构域的第二抗体或抗体衍生物的氨基末端(或反之亦然)。本文描述了可以使用的示例性连接子。在一些实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白的成分彼此直接连接而不使用连接子。
在多个实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白识别并结合SIRP1α和在一种或多种免疫细胞上发现的一种或多种抗原，所述免疫细胞可以包括但不限于巨核细胞、血小板、红细胞、肥大细胞、嗜碱性细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞、T淋巴细胞(例如细胞毒性T淋巴细胞、T辅助细胞、自然杀伤T细胞)、B淋巴细胞、浆细胞、树突细胞或其亚群。在一些实施方案中，嵌合蛋白特异性结合目标抗原并有效地直接或间接募集一种或多种免疫细胞。
在多个实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白识别并结合SIRP1α和在肿瘤细胞上发现的一种或多种抗原。在这些实施方案中，本发明的嵌合蛋白可以直接或间接地将免疫细胞(例如巨噬细胞)募集到肿瘤细胞或肿瘤微环境。在这样的实施方案中，本发明的嵌合蛋白增强巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用。
在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白能够用于或发现可用于涉及改变免疫细胞的平衡以有利于肿瘤的免疫攻击的方法。例如，本发明的嵌合蛋白可以在临床重要的位点改变免疫细胞的比例，以有利于可以杀伤和/或抑制肿瘤的细胞(例如抗肿瘤巨噬细胞(例如M1巨噬细胞)、T细胞、细胞毒性T淋巴细胞、T辅助细胞、自然杀伤(NK)细胞、自然杀伤T(NKT)细胞、B细胞和树突细胞)并且对抗保护肿瘤的细胞(例如骨髓衍生的抑制细胞(MDSC)、调节性T细胞(Treg)、肿瘤相关的嗜中性粒细胞(TAN)、M2巨噬细胞、肿瘤相关的巨噬细胞(TAM)或其亚群)。在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白能够增加效应T细胞与调节T细胞的比例。
在一些实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白包含具有识别结构域的靶向部分，所述识别结构域特异性结合与肿瘤细胞相关的靶(例如抗原或受体)。在一些实施方案中，靶向部分直接或间接募集肿瘤细胞。例如，在一些实施方案中，肿瘤细胞的募集是至能够吞噬、杀伤和/或抑制肿瘤细胞的一种或多种效应细胞(例如巨噬细胞)募集。
肿瘤细胞或癌细胞是指干扰身体器官和系统的正常功能的细胞或组织的不受控生长和/或细胞存活的异常增加和/或细胞凋亡的抑制。例如，肿瘤细胞包括良性和恶性癌症、息肉、增生以及休眠肿瘤或微转移。示例性的肿瘤细胞包括，但不限于以下的细胞：基底细胞癌、胆道癌；膀胱癌；骨癌；脑和中枢神经系统癌症；乳腺癌；腹膜癌；宫颈癌；绒毛膜癌；结肠和直肠癌；结缔组织癌；消化系统癌症；子宫内膜癌；食道癌；眼癌；头颈癌；胃癌(包括胃肠癌)；成胶质细胞瘤；肝细胞癌(hepatic carcinoma)；肝癌(hepatoma)；上皮内赘生物；肾癌(kidney cancer)或肾脏癌(renal cancer)；喉癌；白血病；肝脏癌症(liver cancer)；肺癌(例如，小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞状细胞癌)；黑素瘤；骨髓瘤；成神经细胞瘤；口腔癌(唇、舌、口和咽)；卵巢癌；胰腺癌；前列腺癌；成视网膜细胞瘤；横纹肌肉瘤；直肠癌；呼吸系统癌症；唾液腺癌；肉瘤；皮肤癌；鳞状细胞癌；胃癌；睾丸癌；甲状腺癌；子宫癌或子宫内膜癌；泌尿系统癌症；外阴癌；淋巴瘤包括霍奇金氏淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤，以及B细胞淋巴瘤(包括低级/滤泡非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)；小淋巴细胞(SL)NHL；中级/滤泡NHL；中级弥漫性NHL；高级成免疫细胞NHL；高级成淋巴细胞NHL；高级小非核裂细胞NHL；巨大肿块(bulky disease)NHL；套细胞淋巴瘤；AIDS相关淋巴瘤；和瓦氏巨球蛋白血症；慢性淋巴细胞白血病(CLL)；急性成淋巴细胞白血病(ALL)；毛细胞白血病；慢性成髓细胞白血病；以及其它癌和肉瘤；和移植后淋巴细胞增生性疾病(PTLD)，以及与斑痣性错构瘤相关的异常血管增生、浮肿(例如，与脑肿瘤相关的浮肿)和梅格斯氏综合征。
肿瘤细胞或癌细胞还包括但不限于上皮细胞癌(carcinoma)，例如多种亚型，包括例如腺癌、基底细胞癌、鳞状细胞癌和移行细胞癌)、肉瘤(sarcoma)(包括例如骨和软组织)、白血病(包括例如急性骨髓、急性成淋巴细胞、慢性骨髓、慢性淋巴细胞和毛细胞)、淋巴瘤和骨髓瘤(包括例如霍奇金氏和非霍奇金氏淋巴瘤、轻链非分泌型MGUS和浆细胞瘤)和中枢神经系统癌(包括例如脑(例如胶质瘤(例如星形细胞瘤、少突胶质瘤和室管膜瘤)、脑膜瘤、垂体腺瘤和神经瘤，以及脊髓肿瘤(例如脑膜瘤和神经纤维瘤)。
示例性的肿瘤抗原包括，但不限于MART-1/Melan-A、gp100、二肽基肽酶IV(DPPIV)、腺苷脱氨酶结合蛋白(ADAbp)、亲环蛋白b、结肠直肠相关抗原(CRC)-0017-1A/GA733、癌胚抗原(CEA)及其免疫原性表位CAP-1和CAP-2、etv6、aml1、前列腺特异性抗原(PSA)及其免疫原性表位PSA-1、PSA-2和PSA-3，前列腺特异性膜抗原(PSMA)、T细胞受体/CD3-ζ链、肿瘤抗原MAGE家族(例如MAGE-A1、MAGE-A2、MAGE-A3、MAGE-A4、MAGE-A5、MAGE-A6、MAGE-A7、MAGE-A8、MAGE-A9、MAGE-A10、MAGE-A11、MAGE-A12、MAGE-Xp2(MAGE-B2)、MAGE-Xp3(MAGE-B3)、MAGE-Xp4(MAGE-B4)、MAGE-C1、MAGE-C2、MAGE-C3、MAGE-C4、MAGE-C5)、肿瘤抗原GAGE家族(例如GAGE-1、GAGE-2、GAGE-3、GAGE-4、GAGE-5、GAGE-6、GAGE-7、GAGE-8、GAGE-9)、BAGE、RAGE、LAGE-1、NAG、GnT-V、MUM-1、CDK4、酪氨酸酶、p53、MUC家族、HER2/neu、p21ras、RCAS1、α-胎蛋白、E-钙黏着蛋白、α-连环蛋白、β-连环蛋白和γ-连环蛋白、p120ctn、gp100Pmel117、PRAME、NY-ESO-1、cdc27、腺瘤性息肉病大肠杆菌蛋白(APC)、胞衬蛋白、连接蛋白37、Ig-独特型、p15、gp75、GM2和GD2神经节苷脂、病毒产物如人乳头状瘤病毒蛋白、肿瘤抗原Smad家族、lmp-1、NA、EBV编码的核抗原(EBNA)-1、脑糖原磷酸化酶、SSX-1、SSX-2(HOM-MEL-40)、SSX-1、SSX-4、SSX-5、SCP-1CT-7、c-erbB-2、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD37、CD56、CD70、CD74、CD138、AGS16、MUC1、GPNMB、Ep-CAM、PD-L1、PD-L2、PMSA和BCMA(TNFRSF17)。在多个实施方案中，嵌合蛋白包含结合这些肿瘤抗原中的一种或多种的靶向部分。
在一些实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白识别并结合SIRP1α以及肿瘤细胞上的抗原。在一些实施方案中，多特异性嵌合蛋白直接或间接地将巨噬细胞募集到肿瘤细胞或肿瘤微环境。
在一些实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白包含具有识别结构域的靶向部分，所述识别结构域特异性结合与T细胞相关的靶(例如抗原或受体)。在一些实施方案中，靶向部分直接或间接募集T细胞。在一个实施方案中，抗原识别结构域特异性结合效应T细胞。在一些实施方案中，抗原识别结构域直接或间接地募集效应T细胞，例如，在一些实施方案中，募集效应T细胞至治疗位点(例如，具有一种或多种疾病细胞或待调节的细胞的位置，以获得治疗效果)。示例性的效应T细胞包括细胞毒性T细胞(例如αβTCR，CD3+，CD8+，CD45RO+)；CD4+效应T细胞(例如αβTCR、CD3+、CD4+、CCR7+、CD62Lhi、IL-7R/CD127+)；CD8+效应T细胞(例如αβTCR、CD3+、CD8+、CCR7+、CD62Lhi、IL-7R/CD127+)；效应记忆T细胞(例如CD62L低，CD44+，TCR，CD3+，IL-7R/CD127+，IL-15R+，CCR7低)；中枢记忆T细胞(例如CCR7+、CD62L+、CD27+；或CCR7hi、CD44+、CD62Lhi、TCR、CD3+、IL-7R/CD127+、IL-15R+)；CD62L+效应T细胞；CD8+效应记忆T细胞(TEM)，包括早期效应记忆T细胞(CD27+CD62L-)和晚期效应记忆T细胞(CD27-CD62L-)(分别为TemE和TemL)；CD127(+)CD25(低/-)效应T细胞；CD127(-)CD25(-)效应T细胞；CD8+干细胞记忆效应细胞(TSCM)(例如CD44(低)CD62L(高)CD122(高)sca(+)；TH1效应T细胞(例如CXCR3+、CXCR6+和CCR5+；或αβTCR、CD3+、CD4+、IL-12R+、IFNγR+、CXCR3+)、TH2效应T细胞(例如CCR3+、CCR4+和CCR8+；或αβTCR、CD3+、CD4+、IL-4R+、IL-33R+、CCR4+、IL-17RB+、CRTH2+)；TH9效应T细胞(例如αβTCR，CD3+，CD4+)；TH17效应T细胞(例如αβTCR、CD3+、CD4+、IL-23R+、CCR6+、IL-1R+)；CD4+CD45RO+CCR7+效应T细胞，ICOS+效应T细胞；CD4+CD45RO+CCR7(-)效应T细胞；和分泌IL-2、IL-4和/或IFN-γ的效应T细胞。
示例性的感兴趣T细胞抗原包括，例如(并且包括胞外结构域，如果适用)：CD8、CD3、SLAMF4、IL-2Rα、4-1BB/TNFRSF9、IL-2Rβ、ALCAM、B7-1、IL-4R、B7-H3、BLAME/SLAMFS、CEACAM1、IL-6R、CCR3、IL-7Rα、CCR4、CXCRl/IL-S RA、CCR5、CCR6、IL-10Rα、CCR7、IL-l 0Rβ、CCRS、IL-12Rβ1、CCR9、IL-12Rβ2、CD2、IL-13Rα1、IL-13、CD3、CD4、ILT2/CDS5j、ILT3/CDS5k、ILT4/CDS5d、ILT5/CDS5a、藤黄菌素(lutegrin)α4/CD49d、CDS、整联蛋白αE/CD103、CD6、整联蛋白αM/CD 11b、CDS、整联蛋白αX/CD11c、整联蛋白β2/CDIS、KIR/CD15S、CD27/TNFRSF7、KIR2DL1、CD2S、KIR2DL3、CD30/TNFRSFS、KIR2DL4/CD15Sd、CD31/PECAM-1、KIR2DS4、CD40配体/TNFSF5、LAG-3、CD43、LAIR1、CD45、LAIR2、CDS3、白三烯B4-R1、CDS4/SLAMF5、NCAM-L1、CD94、NKG2A、CD97、NKG2C、CD229/SLAMF3、NKG2D、CD2F-10/SLAMF9、NT-4、CD69、NTB-A/SLAMF6、共同γ链/IL-2Rγ、骨桥蛋白、CRACC/SLAMF7、PD-1、CRTAM、PSGL-1、CTLA-4、RANK/TNFRSF11A、CX3CR1、CX3CL1、L-选择蛋白、CXCR3、SIRPβ1、CXCR4、SLAM、CXCR6、TCCR/WSX-1、DNAM-1、胸腺生成素、EMMPRIN/CD147、TIM-1、EphB6、TIM-2、Fas/TNFRSF6、TIM-3、Fas配体/TNFSF6、TIM-4、FcγRIII/CD16、TIM-6、TNFR1/TNFRSF1A、颗粒溶素、TNF RIII/TNFRSF1B、TRAIL Rl/TNFRSF10A、ICAM-1/CD54、TRAIL R2/TNFRSF10B、ICAM-2/CD102、TRAIL R3/TNFRSF10C、IFN-γR1、TRAIL R4/TNFRSF10D、IFN-γR2、TSLP、IL-1R1和TSLP R。在多个实施方案中，嵌合蛋白包含结合这些示例性T细胞抗原中的一种或多种的靶向部分。
作为非限制性实例，在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白具有针对T细胞上表达的检查点标记物的靶向部分，所述检查点标记物例如PD-1、CD28、CTLA4、ICOS、BTLA、KIR、LAG3、CD137、OX40、CD27、CD40L、TIM3和A2aR中的一个或多个。
在一些实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白包含具有识别结构域的靶向部分，所述识别结构域特异性结合与B细胞相关的靶(例如抗原或受体)。在一些实施方案中，靶向部分直接或间接募集B细胞，例如在一些实施方案中，募集至治疗部位(例如具有一种或多种疾病细胞或待调节的细胞的位置，以获得治疗效果)。示例性的感兴趣B细胞抗原包括，例如，CD10、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD24、CD37、CD38、CD39、CD40、CD72、CD73、CD74、CDw75、CDw76、CD77、CD78、CD79a/b、CD80、CD81、CD82、CD83、CD84、CD85、CD86、CD89、CD98、CD126、CD127、CDw130、CD138和CDw150。在多个实施方案中，嵌合蛋白包含结合这些示例性B细胞抗原中的一种或多种的靶向部分。
在一些实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白包含具有识别结构域的靶向部分，所述识别结构域特异性结合与自然杀伤细胞相关的靶(例如抗原或受体)。在一些实施方案中，靶向部分直接或间接募集自然杀伤细胞，例如在一些实施方案中，募集自然杀伤细胞至治疗部位(例如具有一种或多种疾病细胞或待调节的细胞的位置，以获得治疗效果)。示例性的目标自然杀伤细胞抗原包括，例如TIGIT、2B4/SLAMF4、KIR2DS4、CD155/PVR、KIR3DL1、CD94、LMIR1/CD300A、CD69、LMIR2/CD300c、CRACC/SLAMF7、LMIR3/CD300LF、Kir1α、DNAM-1、LMIR5/CD300LB、Fc-εRII、LMIR6/CD300LE、Fc-γRI/CD64、MICA、Fc-γRIIB/CD32b、MICB、Fc-γRIIC/CD32c、MULT-1、Fc-γRIIA/CD32a、连接素-2/CD112、Fc-γRIII/CD16、NKG2A、FcRH1/IRTA5、NKG2C、FcRH2/IRTA4、NKG2D、FcRH4/IRTA1、NKp30、FcRH5/IRTA2、NKp44、Fc-受体样3/CD16-2、NKp46/NCR1、NKp80/KLRF1、NTB-A/SLAMF6、Rae-1、Rae-1α、Rae-1β、Rae-1δ、H60、Rae-1ε、ILT2/CD85j、Rae-1γ、ILT3/CD85k、TREM-1、ILT4/CD85d、TREM-2、ILT5/CD85a、TREM-3、KIR/CD158、TREML1/TLT-1、KIR2DL1、ULBP-1、KIR2DL3、ULBP-2、KIR2DL4/CD158d和ULBP-3。在多个实施方案中，嵌合蛋白包含结合这些示例性NK细胞抗原的一种或多种的靶向部分。
在一些实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白包含具有识别结构域的靶向部分，所述识别结构域特异性结合与巨噬细胞/单核细胞相关的靶(例如抗原或受体)。在一些实施方案中，靶向部分直接或间接地募集巨噬细胞/单核细胞，例如，在一些实施方案中，募集到治疗部位(例如，具有一种或多种疾病细胞或待调节细胞的位置，以获得治疗效果)。示例性的目标巨噬细胞/单核细胞抗原包括，例如SIRP1a、B7-1/CD80、ILT4/CD85d、B7-H1、ILT5/CD85a、共有β链、整联蛋白α4/CD49d、BLAME/SLAMF8、整联蛋白αX/CDllc、CCL6/C10、整联蛋白β2/CD18、CD155/PVR、整联蛋白β3/CD61、CD31/PECAM-1、乳胶素、CD36/SR-B3、白三烯B4 R1、CD40/TNFRSF5、LIMPIIISR-B2、CD43、LMIR1/CD300A、CD45、LMIR2/CD300c、CD68、LMIR3/CD300LF、CD84/SLAMF5、LMIR5/CD300LB、CD97、LMIR6/CD300LE、CD163、LRP-1、CD2F-10/SLAMF9、MARCO、CRACC/SLAMF7、MD-1、ECF-L、MD-2、EMMPRIN/CD147、MGL2、内皮因子/CD105、骨激活素/GPNMB、Fc-γRI/CD64、骨桥蛋白、Fc-γRIIB/CD32b、PD-L2、Fc-γRIIC/CD32c、Siglec-3/CD33、Fc-γRIIA/CD32a、SIGNR1/CD209、Fc-γRIII/CD16、SLAM、GM-CSF Rα、TCCR/WSX-1、ICAM-2/CD102、TLR3、IFN-γRI、TLR4、IFN-γR2、TREM-l、IL-l RII、TREM-2、ILT2/CD85j、TREM-3、ILT3/CD85k、TREML1/TLT-1、2B4/SLAMF 4、IL-10Rα、ALCAM、IL-10Rβ、氨基肽酶N/ANPEP、ILT2/CD85j、共同β链、ILT3/CD85k、Clq R1/CD93、ILT4/CD85d、CCR1、ILT5/CD85a、CCR2、CD206、整联蛋白α4/CD49d、CCR5、整联蛋白αM/CDll b、CCR8、整联蛋白αX/CDllc、CD155/PVR、整联蛋白β2/CD18、CD14、整联蛋白β3/CD61、CD36/SR-B3、LAIR1、CD43、LAIR2、CD45、白三烯B4-R1、CD68、LIMPIIISR-B2、CD84/SLAMF5、LMIR1/CD300A、CD97、LMIR2/CD300c、CD163、LMIR3/CD300LF、凝血因子III/组织因子、LMIR5/CD300LB、CX3CR1、CX3CL1、LMIR6/CD300LE、CXCR4、LRP-1、CXCR6、M-CSF R、DEP-1/CD148、MD-1、DNAM-1、MD-2、EMMPRIN/CD147、MMR、内皮因子/CD105、NCAM-L1、Fc-γRI/CD64、PSGL-1、Fc-γRIIIICD16、RP105、G-CSF R、L-选择蛋白、GM-CSF Rα、Siglec-3/CD33、HVEM/TNFRSF14、SLAM、ICAM-1/CD54、TCCR/WSX-1、ICAM-2/CD102、TREM-l、IL-6R、TREM-2、CXCRl/IL-8RA、TREM-3和TREMLl/TLT-1。在多个实施方案中，嵌合蛋白包含结合这些示例性巨噬细胞/单核细胞抗原中的一种或多种的靶向部分。
在一些实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白包含具有识别结构域的靶向部分，所述识别结构域特异性结合与树突细胞相关的靶(例如抗原或受体)。在一些实施方案中，靶向部分直接或间接地募集树突细胞，例如在一些实施方案中，募集树突细胞至治疗部位(例如具有一种或多种疾病细胞或待调节细胞的位置，以获得治疗效果)。示例性的目的树突细胞抗原包括例如CLEC9A、XCR1、RANK、CD36/SRB3、LOX-1/SR-E1、CD68、MARCO、CD163、SR-A1/MSR、CD5L、SREC-1、CL-PI/COLEC12、SREC-II、LIMPIIISRB2、RP105、TLR4、TLR1、TLR5、TLR2、TLR6、TLR3、TLR9、4-IBB配体/TNFSF9、IL-12/IL-23p40、4-氨基-1,8-萘二甲酰亚胺、ILT2/CD85j、CCL21/6Ckine、ILT3/CD85k、8-氧代-dG、ILT4/CD85d、8D6A、ILT5/CD85a、A2B5、藤黄菌素(lutegrin)α4/CD49d、Aag、整联蛋白β2/CD18、AMICA、朗格素(Langerin)、B7-2/CD86、白三烯B4Rl、B7-H3、LMIR1/CD300A、BLAME/SLAMF8、LMIR2/CD300c、Clq R1/CD93、LMIR3/CD300LF、CCR6、LMIR5/CD300LB CCR7、LMIR6/CD300LE、CD40/TNFRSF5、MAG/Siglec-4-a、CD43、MCAM、CD45、MD-1、CD68、MD-2、CD83、MDL-1/CLEC5A、CD84/SLAMF5、MMR、CD97、NCAMLl、CD2F-10/SLAMF9、骨激活素GPNMB、Chern23、PD-L2、CLEC-1、RP105、CLEC-2、CLEC-8、Siglec-2/CD22、CRACC/SLAMF7、Siglec-3/CD33、DC-SIGN、DCE205、Siglec-5、DC-SIGNR/CD299、Siglec-6、DCAR、Siglec-7、DCIR/CLEC4A、Siglec-9、DEC-205、Siglec-10、Dectin-1/CLEC7A、Siglec-F、Dectin-2/CLEC6A、SIGNR1/CD209、DEP-1/CD148、SIGNR4、DLEC、SLAM、EMMPRIN/CD147、TCCR/WSX-1、Fc-γRI/CD64、TLR3、Fc-γRIIB/CD32b、TREM-1、Fc-γRIIC/CD32c、TREM-2、Fc-γRIIA/CD32a、TREM-3、Fc-γRIII/CD16、TREML1/TLT-1、ICAM-2/CD102和辣椒素R1。在多个实施方案中，嵌合蛋白包含结合一种或多种这些示例性DC抗原中的一种或多种的靶向部分。
在一些实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白包含具有识别结构域的靶向部分，所述识别结构域特异性结合与免疫细胞相关的靶(例如抗原或受体)，所述免疫细胞选自但不限于巨核细胞、血小板、红细胞、肥大细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞或其亚群。在一些实施方案中，抗原识别结构域直接或间接地募集巨核细胞、血小板、红细胞、肥大细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞或其亚群，例如在一些实施方案中，募集至治疗部位(例如具有一种或多种疾病细胞或待调节细胞的位置，以获得治疗效果)。
在一些实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白包含具有识别结构域的靶向部分，该识别结构域特异性结合与巨核细胞和/或血小板相关的靶(例如抗原或受体)。示例性的目标巨核细胞和/或血小板抗原包括，例如，GP IIb/IIIa、GPIb、vWF、PF4和TSP。在多个实施方案中，嵌合蛋白包含结合这些示例性的巨核细胞和/或血小板抗原中的一种或多种的靶向部分。
在一些实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白包含具有识别结构域的靶向部分，所述识别结构域特异性结合与红细胞相关的靶(例如抗原或受体)。示例性的目标红细胞抗原包括，例如，CD34、CD36、CD38、CD41a(血小板糖蛋白IIb/IIIa)、CD41b(GPIIb)、CD71(转铁蛋白受体)、CD105、血型糖蛋白A、血型糖蛋白C、C-kit、HLA-DR、H2(MHC-II)和恒河猴抗原。在多个实施方案中，嵌合蛋白包含结合这些示例性红细胞抗原中的一种或多种的靶向部分。
在一些实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白包含具有识别结构域的靶向部分，所述识别结构域特异性结合与肥大细胞相关的靶(例如抗原或受体)。示例性的目标肥大细胞抗原包括，例如，SCFR/CD117、FcεRI、CD2、CD25、CD35、CD88、CD203c、C5R1、CMAI、FCERIA、FCER2、TPSABI。在多个实施方案中，嵌合蛋白包含结合一种或多种这些肥大细胞抗原的靶向部分。
在一些实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白包含具有识别结构域的靶向部分，所述识别结构域特异性结合与嗜碱性粒细胞相关的靶(例如抗原或受体)。示例性的目标嗜碱性粒细胞抗原包括，例如FcεRI、CD203c、CD123、CD13、CD107a、CD107b和CD164。在多个实施方案中，嵌合蛋白包含结合这些嗜碱性粒细胞抗原中的一种或多种的靶向部分。
在一些实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白包含具有识别结构域的靶向部分，所述识别结构域特异性结合与嗜中性粒细胞相关的靶(例如抗原或受体)。示例性的目标嗜中性粒细胞抗原包括例如7D5、CD10/CALLA、CD13、CD16(FcRIII)、CD18蛋白(LFA-1、CR3和p150，95)、CD45、CD67和CD177。在多个实施方案中，嵌合蛋白包含结合这些嗜中性粒细胞抗原中的一种或多种的靶向部分。
在一些实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白包含具有识别结构域的靶向部分，所述识别结构域特异性结合与嗜酸性粒细胞相关的靶(例如抗原或受体)。示例性的目标嗜酸性粒细胞抗原包括例如CD35、CD44和CD69。在多个实施方案中，嵌合蛋白包含结合这些嗜酸性粒细胞抗原中的一种或多种的靶向部分。
在多个实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白包含具有识别结构域的靶向部分，所述识别结构域特异性结合本领域技术人员已知的合适抗原或细胞表面标记物。在一些实施方案中，抗原或细胞表面标记物是组织特异性标记物。示例性的组织特异性标记物包括但不限于内皮细胞表面标记物，例如ACE、CD14、CD34、CDH5、ENG、ICAM2、MCAM、NOS3、PECAMI、PROCR、SELE、SELP、TEK、THBD、VCAMI、VWF；平滑肌细胞表面标记物ACTA2、MYHIO、MYHI 1、MYH9、MYOCD；成纤维细胞(基质)细胞表面标记物，例如ALCAM、CD34、COL1Al、COL1A2、COL3A1、FAP、PH-4；上皮细胞表面标记物，例如CDID、K6IRS2、KRTIO、KRT13、KRT17、KRT18、KRT19、KRT4、KRT5、KRT8、MUCI、TACSTDI；新脉管系统标记物，例如CD13、TFNA、alpha-V beta-3(αVβ3)、E-选择蛋白；以及脂肪细胞表面标记物如ADIPOQ、FABP4和RETN。在多个实施方案中，嵌合蛋白包含结合这些抗原中的一种或多种的靶向部分。在多个实施方案中，嵌合蛋白的靶向部分结合具有这些抗原的一种或多种细胞。
在多个实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白具有一个或多个针对检查点标记物的靶向部分，例如PD-1/PD-L1或PD-L2、CD28/CD80或CD86、CTLA4/CD80或CD86、ICOS/ICOSL或B7RP1、BTLA/HVEM、KIR、LAG3、CD137/CD137L、OX40/OX40L、CD27、CD40L、TIM3/Gal9和A2aR的一种或多种。
通过非限制性实例，在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白具有针对以下的靶向部分：(i)在T细胞上表达的检查点标记物，例如PD-1、CD28、CTLA4、ICOS、BTLA、KIR、LAG3、CD137、OX40、Cd27、CD40L、TIM3和A2aR中的一种或多种，和(ii)针对肿瘤细胞的靶向部分，以及本文所述的任何修饰的(例如突变的)信号传导剂。
在多个实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白具有一个或多个针对PD-1的靶向部分。在一些实施方案中，嵌合蛋白具有选择性结合PD-1多肽的一个或多个靶向部分。在一些实施方案中，嵌合蛋白包含选择性结合PD-1多肽的一个或多个抗体、抗体衍生物或形式、肽或多肽或融合蛋白。
在一个实施方案中，靶向部分包含抗PD-1抗体帕博利珠单抗(pembrolizumab，akaMK-3475，KEYTRUDA)或其片段。帕博利珠单抗和其它人源化抗PD-1抗体公开于Hamid,等(2013)New England Journal of Medicine 369(2):134-44、US 8,354,509和WO 2009/114335，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的帕博利珠单抗或其抗原结合片段包含重链，所述重链包含SEQ ID NO：69的氨基酸序列；和/或包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO：70的氨基酸序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含抗PD-1抗体，纳武单抗(nivolumab，aka BMS-936558，MDX-1106，ONO-4538，OPDIVO)或其片段。纳武单抗(克隆5C4)和其它特异性结合PD-1的人单克隆抗体公开于US 8,008,449和WO 2006/121168中，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，纳武单抗或其抗原结合片段包含重链，所述重链包含SEQ IDNO：71的氨基酸序列；和/或轻链，所述轻链包含SEQ ID NO：72的氨基酸序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含抗PD-1抗体皮地利珠单抗(pidilizumab，akaCT-011、hBAT或hBAT-1)或其片段。皮地利珠单抗和其它人源化抗PD-1单克隆抗体公开于US2008/0025980和WO 2009/101611中，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的抗PD-1抗体或其抗原结合片段包括轻链可变区，所述轻链可变区包含选自US 2008/0025980的SEQ ID NO:15-18的氨基酸序列(US2008/002598的SEQID No:15(SEQ ID NO:73)；US 2008/0025980的SEQ ID No:16(SEQ ID NO:74)；US 2008/0025980的SEQ ID No:17(SEQ ID NO:75)；和US 2008/0025980的SEQ ID No:18(SEQ IDNO:76))；和/或重链，所述重链包含选自US 2008/0025980的SEQ ID NO:20-24的氨基酸序列(US2008/0025980的SEQ ID No:20(SEQ ID NO:77)；US 2008/0025980的SEQ ID No:21(SEQ ID NO:78)；US 2008/0025980的SEQ ID No:22(SEQ ID NO:79)；US 2008/0025980的SEQ ID No:23(SEQ ID NO:80)；和US 2008/0025980的SEQ ID No:24(SEQ ID NO:81))。
在一个实施方案中，靶向部分包含轻链，所述轻链包含US 2008/0025980的SEQ IDNO：18(SEQ ID NO:76)，和重链，所述重链包含US 2008/0025980的SEQ ID NO：22(SEQ IDNO：79)。
在一个实施方案中，靶向部分包括AMP-514(aka MEDI-0680)。
在一个实施方案中，靶向部分包含PD-12-Fc融合蛋白AMP-224，其公开于WO2010/027827和WO 2011/066342中，其全部公开内容通过引用并入本文。在这样的实施方案中，靶向部分可以包括包含WO2010/027827的SEQ ID NO：4(SEQ ID NO:82)的靶向结构域和/或包含WO2010/027827的SEQ ID NO：83(SEQ ID NO：83)的B7-DC融合蛋白。
在一个实施方案中，靶向部分包含肽AUNP12或US 2011/0318373或8,907,053中公开的任何其它肽。例如，靶向部分可以包含AUNP12(即化合物8或US2011/0318373的SEQ IDNO：49)，其具有(SEQ ID NO：84)的序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含如US 2014/0044738中公开的抗PD-1抗体1E3或其片段，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的1E3或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：86的氨基酸序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含如US2014/0044738中公开的抗PD-1抗体1E8或其片段，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的1E8或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：87的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区SEQ ID NO：88的氨基酸序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含如US 2014/0044738中公开的抗PD-1抗体1H3或其片段，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的1H3或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：89的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区SEQ ID NO：90的氨基酸序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含针对PD-1的VHH，如例如US8,907,065和WO2008/071447中所公开的，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，针对PD-1的VHH包含US 8,907,065的SEQ ID NO：347-351(US 8,907,065的SEQ ID NO：347(SEQID NO：91)；US8,907,065的SEQ ID NO：348(SEQ ID NO：92)；US 8,907,065的SEQ ID NO：349(SEQ ID NO：93)；US 8,907,065的SEQ ID NO：350(SEQ ID NO：94)；和US 8,907,065的SEQ ID NO：351(SEQ ID NO：95))。
在一个实施方案中，靶向部分包含如US2011/0271358和WO2010/036959中公开的抗PD-1抗体或其片段中的任何一个，其全部内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的抗体或其抗原结合片段包含重链，所述重链包含选自US2011/0271358的SEQ ID NO：25-29的氨基酸序列：(US2011/0271358的SEQ ID NO：25(SEQ ID NO：96)；US2011/0271358的SEQ ID NO：26(SEQ ID NO：97)；US2011/0271358的SEQ ID NO：27(SEQ ID NO：98)；US2011/0271358的SEQ ID NO：28(SEQ ID NO：99)；和US2011/0271358的SEQ ID NO：29(SEQ ID NO：100))；和/或包含轻链，所述轻链包含选自US2011/0271358的SEQ ID NO：30-33的氨基酸序列：(US2011/0271358的SEQ ID NO：30(SEQ ID NO：101)；US2011/0271358的SEQ ID NO：31(SEQ ID NO：102)；US2011/0271358的SEQ ID NO：32(SEQID NO：103)；和US2011/0271358的SEQ ID NO：33(SEQ ID NO：104))。
在多个实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白包含一个或多个针对PD-1的抗体或其抗体片段，所述抗体选自TSR-042(Tesaro,Inc.)、REGN2810(RegeneronPharmaceuticals,Inc.)、PDR001(Novartis Pharmaceuticals)和BGB-A317(BeiGeneLtd.)。
在多个实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白具有一个或多个针对PD-L1的靶向部分。在一些实施方案中，嵌合蛋白具有一个或多个选择性结合PD-L1多肽的靶向部分。在一些实施方案中，嵌合蛋白包含选择性结合PD-L1多肽的一个或多个抗体、抗体衍生物或形式、肽或多肽或融合蛋白。
在一个实施方案中，靶向部分包含抗PD-L1抗体MEDI4736(aka德鲁单抗(durvalumab))或其片段。MEDI4736对PD-L1具有选择性，并阻断PD-L1与PD-1和CD80受体的结合。用于本文提供的方法中的MEDI4736及其抗原结合片段包含重链和轻链或重链可变区和轻链可变区。MEDI4736的序列公开在WO/2016/06272中，其全部内容在此引入作为参考。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法中的MEDI4736或其抗原结合片段包含重链，所述重链包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列；和/或轻链，所述轻链包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列。
在示例性实施方案中，用于本文提供的方法中的MEDI4736或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含WO/2016/06272的SEQ ID NO：4(SEQ ID NO：107)的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含WO/2016/06272的SEQ ID NO：3(SEQ IDNO：108)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含抗PD-L1抗体阿特珠单抗(atezolizumab，akaMPDL32880A，RG7446)或其片段。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的阿特珠单抗或其抗原结合片段包含重链，所述重链包含SEQ ID NO：109的氨基酸序列；和/或轻链，所述轻链包含SEQ ID NO：110的氨基酸序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含抗PD-L1抗体阿维鲁单抗(avelumab,akaMSB0010718C)或其片段。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的阿维鲁单抗或其抗原结合片段包含重链，所述重链包含SEQ ID NO：111的氨基酸序列；和/或轻链，所述轻链包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含抗PD-L1抗体BMS-936559(aka12A4，MDX-1105)或其片段，如US 2013/0309250和WO2007/005874中所公开的，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法中的BMS-936559或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：113的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：114的氨基酸序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含抗PD-L1抗体3G10或其片段，如US2013/0309250和WO2007/005874中公开，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的3G10或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ IDNO：115的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区SEQ ID NO：116的氨基酸序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含抗PD-L1抗体10A5或其片段，如US2013/0309250和WO2007/005874中公开，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的10A5或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ IDNO：117的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区SEQ ID NO：118的氨基酸序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含抗PD-L1抗体5F8或其片段，如US2013/0309250和WO2007/005874中公开，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的5F8或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ IDNO：119的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区SEQ ID NO：120的氨基酸序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含抗PD-L1抗体10H10或其片段，如US2013/0309250和WO2007/005874中公开，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的10H10或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：121的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区SEQ ID NO：122的氨基酸序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含抗PD-L1抗体1B12或其片段，如US2013/0309250和WO2007/005874中公开，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的1B12或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ IDNO：123的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区SEQ ID NO：124的氨基酸序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含抗PD-L1抗体7H1或其片段，如US2013/0309250和WO2007/005874中所公开的，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的7H1或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQID NO：125的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区SEQ ID NO：126的氨基酸序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含抗PD-L1抗体11E6或其片段，如US2013/0309250和WO2007/005874中所公开的，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的11E6或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQID NO：127的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区SEQ ID NO：128的氨基酸序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含抗PD-L1抗体12B7或其片段，如US2013/0309250和WO2007/005874中公开，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的12B7或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ IDNO：129的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区SEQ ID NO：130的氨基酸序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含抗PD-L1抗体13G4或其片段，如US2013/0309250和WO2007/005874中所公开的，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的13G4或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQID NO：131的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区SEQ ID NO：132的氨基酸序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含如US2014/0044738中公开的抗PD-L1抗体1E12或其片段，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的1E12或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：133的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区SEQ ID NO：134的氨基酸序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含抗PD-L1抗体1F4或其片段，如US2014/0044738中公开，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的1F4或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：135的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区SEQ ID NO：136的氨基酸序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含抗PD-L1抗体2G11或其片段，如US2014/0044738中公开，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的2G11或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：137的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区SEQ ID NO：138的氨基酸序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含抗PD-L1抗体3B6或其片段，如US2014/0044738中公开，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的3B6或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：139的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：140的氨基酸序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含抗PD-L1抗体3D10或其片段，如US2014/0044738和WO2012/145493中公开，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法中的3D10或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ IDNO：141的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：142的氨基酸序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含US2011/0271358和WO2010/036959中公开的抗PD-L1抗体中的任何一种，其全部内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的抗体或其抗原结合片段包含重链，所述重链包含选自US2011/0271358的SEQID NO：34-38的氨基酸序列(US2011/0271358的SEQ ID NO：34(SEQ ID NO：143)；US2011/0271358的SEQ ID NO：35(SEQ ID NO：144)；US2011/0271358的SEQ ID NO：36(SEQ ID NO：145)；US2011/0271358的SEQ ID NO：37(SEQ ID NO：146)；和US2011/0271358的SEQ ID NO：38(SEQ ID NO：147))；和/或包含轻链，所述轻链包含选自US2011/0271358的SEQ ID NO：39-42的氨基酸序列(US2011/0271358的SEQ ID NO：39(SEQ ID NO：148)；US2011/0271358的SEQ ID NO：40(SEQ ID NO：149)；US2011/0271358的SEQ ID NO：41(SEQ ID NO：150)；和US2011/0271358的SEQ ID NO：42(SEQ ID NO：151))。
在一个实施方案中，靶向部分包含抗PD-L1抗体2.7A4或其片段，如WO 2011/066389、US8,779,108和US2014/0356353中所公开的，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的2.7A4或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含WO2011/066389的SEQ ID NO：2(SEQ ID NO：152)的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含WO2011/066389的SEQ ID NO：7(SEQ ID NO：153)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含抗PD-L1抗体2.9D10或其片段，如WO2011/066389、US8,779,108和US2014/0356353中所公开的，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的2.9D10或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含WO2011/066389的SEQ ID NO：12(SEQ ID NO：154)的氨基酸序列；和/或包含WO2011/066389的SEQ ID NO：17(SEQ ID NO：155)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含抗PD-L1抗体2.14H9或其片段，如WO 2011/066389、US8,779,108和US2014/0356353中所公开的，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的2.14H9或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含WO2011/066389的SEQ ID NO：22(SEQ ID NO：156)的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含WO 2011/066389的SEQ ID NO：27(SEQ ID NO：157)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含抗PD-L1抗体2.20A8或其片段，如WO 2011/066389、US8,779,108和US2014/0356353中所公开的，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的2.20A8或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含WO 2011/066389的SEQ ID NO：32(SEQ ID NO：158)的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含WO 2011/066389的SEQ ID NO：37(SEQ ID NO：159)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含抗PD-L1抗体3.15G8或其片段，如WO 2011/066389、US8,779,108和US2014/0356353中所公开的，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的3.15G8或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含WO 2011/066389的SEQ ID NO：42(SEQ ID NO：160)的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含WO 2011/066389的SEQ ID NO：47(SEQ ID NO：161)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含抗PD-L1抗体3.18G1或其片段，如WO 2011/066389、US8,779,108和US2014/0356353中所公开的，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的3.18G1或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含WO2011/066389的SEQ ID NO：52(SEQ ID NO：162)的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含WO2011/066389的SEQ ID NO：57(SEQ ID NO：163)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含抗PD-L1抗体2.7A4OPT或其片段，如WO 2011/066389、US8,779,108和US2014/0356353以及US2014/0356353中所公开的，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的2.7A4OPT或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含WO 2011/066389的SEQ ID NO：62(SEQ ID NO：164)的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含WO 2011/066389的SEQ ID NO：67(SEQ ID NO：165)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含抗PD-L1抗体2.14H9OPT或其片段，如WO 2011/066389、US8,779,108和US2014/0356353中所公开的，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的2.14H9OPT或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含WO 2011/066389的SEQ ID NO：72(SEQ ID NO：166)的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含WO 2011/066389的SEQ ID NO：77(SEQ ID NO：167)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含WO2016/061142中公开的任何一种抗PD-L1抗体，其全部内容通过引用结合到本文中。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的抗体或其抗原结合片段包含重链，所述重链包含选自WO2016/061142的SEQ ID NO：18、30、38、46、50、54、62、70和78的氨基酸序列(WO2016/061142的SEQ ID NO：18(SEQ ID NO：168)；WO2016/061142的SEQ ID NO：30(SEQ ID NO：169)；WO2016/061142的SEQ ID NO：38(SEQ IDNO：170)；WO2016/061142的SEQ ID NO：46(SEQ ID NO：171)；WO2016/061142的SEQ ID NO：50(SEQ ID NO：172)；WO2016/061142的SEQ ID NO：54(SEQ ID NO：173)；WO2016/061142的SEQ ID NO：62(SEQ ID NO：174)；WO2016/061142的SEQ ID NO：70(SEQ ID NO：175)；和WO2016/061142的SEQ ID NO：78(SEQ ID NO：176))；和/或轻链，所述轻链包含选自WO2016/061142的SEQ ID NO：22、26、34、42、58、66、74、82和86的氨基酸序列(WO2016/061142的SEQID NO：22(SEQ ID NO：177)；WO2016/061142的SEQ ID NO：26(SEQ ID NO：178)；WO2016/061142的SEQ ID NO：34(SEQ ID NO：179)；WO2016/061142的SEQ ID NO：42(SEQ ID NO：180)；WO2016/061142的SEQ ID NO：58(SEQ ID NO：181)；WO2016/061142的SEQ ID NO：66(SEQ ID NO：182)；WO2016/061142的SEQ ID NO：74(SEQ ID NO：183)；WO2016/061142的SEQID NO：82(SEQ ID NO：184)；和WO2016/061142的SEQ ID NO：86(SEQ ID NO：185))。
在一个实施方案中，靶向部分包括WO2016/02263中公开的任何一种抗PD-L1抗体，其全部内容通过引用结合到本文中。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的抗体或其抗原结合片段包含重链，所述重链包含选自WO2016/022630的SEQ ID NO：2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、42和46的氨基酸序列(WO2016/022630的SEQ ID NO：2(SEQ ID NO：186)；WO2016/022630的SEQ ID NO：6(SEQ ID NO：187)；WO2016/022630的SEQ ID NO：10(SEQ IDNO：188)；WO2016/022630的SEQ ID NO：14(SEQ ID NO：189)；WO2016/022630的SEQ ID NO：18(SEQ ID NO：190)；WO2016/022630的SEQ ID NO：22(SEQ ID NO：191)；WO2016/022630的SEQ ID NO：26(SEQ ID NO：192)；WO2016/022630的SEQ ID NO：30(SEQ ID NO：193)；WO2016/022630的SEQ ID NO：34(SEQ ID NO：194)；WO2016/022630的SEQ ID NO：38(SEQ IDNO：195)；WO2016/022630的SEQ ID NO：42(SEQ ID NO：196)；和WO2016/022630的SEQ IDNO：46(SEQ ID NO：197))；和/或轻链，所述轻链包含选自WO2016/022630的SEQ ID NO：4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44和48的氨基酸序列(WO2016/022630的SEQ ID NO：4(SEQ IDNO：198)；WO2016/022630的SEQ ID NO：8(SEQ ID NO：199)；WO2016/022630的SEQ ID NO：12(SEQ ID NO：200)；WO2016/022630的SEQ ID NO：16(SEQ ID NO：201)；WO2016/022630的SEQID NO：20(SEQ ID NO：202)；WO2016/022630的SEQ ID NO：24(SEQ ID NO：203)；WO2016/022630的SEQ ID NO：28(SEQ ID NO：204)；WO2016/022630的SEQ ID NO：32(SEQ ID NO：205)；WO2016/022630的SEQ ID NO：36(SEQ ID NO：206)；WO2016/022630的SEQ ID NO：40(SEQ ID NO：207)；WO2016/022630的SEQ ID NO：44(SEQ ID NO：208)；和WO2016/022630的SEQ ID NO：48(SEQ ID NO：209))。
在一个实施方案中，靶向部分包括WO2015/112900中公开的抗PD-L1抗体中的任何一种，其全部内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的抗体或其抗原结合片段包含重链，所述重链包含选自WO2015/112900的SEQ ID NO：38、50、82和86的氨基酸序列(WO2015/112900的SEQ ID NO：38(SEQ ID NO：210)；WO2015/112900的SEQ IDNO：50(SEQ ID NO：211)；WO2015/112900的SEQ ID NO：82(SEQ ID NO：212)；和WO2015/112900的SEQ ID NO：86(SEQ ID NO：213))；和/或轻链，所述轻链包含选自WO2015/112900的SEQ ID NO：42、46、54、58、62、66、70、74和78的氨基酸序列(WO2015/112900的SEQ ID NO：42(SEQ ID NO：214)；WO2015/112900的SEQ ID NO：46(SEQ ID NO：215)；WO2015/112900的SEQ ID NO：54(SEQ ID NO：216)；WO2015/112900的SEQ ID NO：58(SEQ ID NO：217)；WO2015/112900的SEQ ID NO：62(SEQ ID NO：218)；WO2015/112900的SEQ ID NO：66(SEQ IDNO：219)；WO2015/112900的SEQ ID NO：70(SEQ ID NO：220)；WO2015/112900的SEQ ID NO：74(SEQ ID NO：221)；和WO2015/112900的SEQ ID NO：78(SEQ ID NO：222))。
在一个实施方案中，靶向部分包含WO 2010/077634和US8,217,149中公开的抗PD-L1抗体中的任何一种，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包含重链区，所述重链区包含WO 2010/077634的SEQ ID NO：20(SEQ ID NO：223)的氨基酸序列；和/或包含轻链可变区，所述轻链可变区包含WO2010/077634的SEQ ID NO：21(SEQ ID NO：224)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，靶向部分包含可从杂交瘤获得的抗PD-L1抗体中的任何一种，所述杂交瘤可从US 20120039906中公开的CNCM保藏号CNCM I-4122、CNCM I-4080和CNCMI-4081获得，其全部公开内容通过引用并入本文。
在一个实施方案中，靶向部分包含针对PD-L1的VHH，如例如US8,907,065和WO2008/071447中所公开的，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，针对PD-L1的VHH包含US 8,907,065的SEQ ID NO：394-399(US 8,907,065的SEQ ID NO：394(SEQID NO：225)；US8,907,065的SEQ ID NO：395(SEQ ID NO：226)；US 8,907,065的SEQ ID NO：396(SEQ ID NO：227)；US 8,907,065的SEQ ID NO：397(SEQ ID NO：228)；US 8,907,065的SEQ ID NO：398(SEQ ID NO：229)；US 8,907,065的SEQ ID NO：399(SEQ ID NO：230))。
在多个实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白具有一个或多个针对PD-L2的靶向部分。在一些实施方案中，嵌合蛋白具有一个或多个选择性结合PD-L2多肽的靶向部分。在一些实施方案中，嵌合蛋白包含选择性结合PD-L2多肽的一种或多种抗体、抗体衍生物或形式、肽或多肽或融合蛋白。
在一个实施方案中，靶向部分包含针对PD-L2的VHH，如例如US 8,907,065和WO2008/071447中所公开的，其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，针对PD-1的VHH包含US 8,907,065的SEQ ID NO：449-455(US 8,907,065的SEQ ID NO：449(SEQID NO：231)；US8,907,065的SEQ ID NO：450(SEQ ID NO：232)；US 8,907,065的SEQ ID NO：451(SEQ ID NO：233)；US 8,907,065的SEQ ID NO：452(SEQ ID NO：234)；US 8,907,065的SEQ ID NO：453(SEQ ID NO：235)；US 8,907,065的SEQ ID NO：454(SEQ ID NO：236)；和US8,907,065的SEQ ID NO：455(SEQ ID NO：237))。
在一个实施方案中，靶向部分包含US2011/0271358和WO2010/036959中公开的抗PD-L2抗体中的任何一种，其全部内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的抗体或其抗原结合片段包含重链，所述重链包含选自US2011/0271358的SEQID NO：43-47的氨基酸序列(US2011/0271358的SEQ ID NO：43(SEQ ID NO：238)；US2011/0271358的SEQ ID NO：44(SEQ ID NO：239)；US2011/0271358的SEQ ID NO：45(SEQ ID NO：240)；US2011/0271358的SEQ ID NO：46(SEQ ID NO：241)；和US2011/0271358的SEQ ID NO：47(SEQ ID NO：242))；和/或轻链，所述轻链包含选自US2011/0271358的SEQ ID NO：48-51的氨基酸序列(US2011/0271358的SEQ ID NO：48(SEQ ID NO：243))；US2011/0271358的SEQID NO：49(SEQ ID NO：244)；US2011/0271358的SEQ ID NO：50(SEQ ID NO：245)；和US2011/0271358的SEQ ID NO：51(SEQ ID NO：246))。
在多个实施方案中，本发明的靶向部分可以包含靶向PD-1、PD-L1和/或PD-L2的序列，其与本文公开的任一序列至少约60％，至少约61％，至少约62％，至少约63％，至少约64％，至少约65％，至少约66％，至少约67％，至少约68％，至少约69％，至少约70％，至少约71％，至少约72％，至少约73％，至少约74％，至少约75％，至少约76％，至少约77％，至少约78％，至少约79％，至少约80％，至少约81％，至少约82％，至少约83％，至少约84％，至少约85％，至少约86％，至少约87％，至少约88％，至少约89％，至少约90％，至少约91％，至少约92％，至少约93％，至少约94％，至少约95％，至少约96％，至少约97％、至少约98％、至少约99％或100％同一(例如，与本文公开的任意序列具有约60％、或约61％、或约62％、或约63％、或约64％、或约65％、或约66％，或约67％，或约68％，或约69％，或约70％，或约71％，或约72％，或约73％，或约74％，或约75％，或约76％，或约77％，或约78％，或约79％，或约80％，或约81％，或约82％，或约83％，或约84％，或约85％，或约86％，或约87％，或约88％，或约89％，或约90％，或约91％、或约92％、或约93％、或约94％、或约95％、或约96％、或约97％、或约98％、约99％或约100％的序列同一性)。
在多个实施方案中，本发明的靶向部分可以包括如本文所公开靶向PD-1、PD-L1和/或PD-L2的重链、轻链、重链可变区、轻链可变区、互补决定区(CDR)和框架区序列的任何组合。
选择性结合或靶向PD-1、PD-L1和/或PD-L2的其它抗体、抗体衍生物或形式、肽或多肽或融合蛋白公开于WO 2011/066389、US 2008/0025980、US 2013/0034559、US 8,779,108、US 2014/0356353、US 8,609,089、US 2010/028330、US 2012/0114649、WO 2010/027827、WO 2011/066342、US 8,907,065、WO 2016/062722、WO 2009/101611、WO 2010/027827、WO 2011/066342、WO 2007/005874、WO 2001/014556、US 2011/0271358、WO 2010/036959、WO 2010/077634、US 8,217,149、US 2012/0039906、WO 2012/145493、US 2011/0318373、美国专利No.8,779,108、US 20140044738、WO 2009/089149、WO 2007/00587、WO2016061142、WO 2016,02263、WO 2010/077634和WO 2015/112900中，其公开内容通过引用并入本文。
在一些实施方案中，靶向部分是天然配体，例如趋化因子。可包括在本发明嵌合蛋白中的示例性趋化因子包括但不限于CCL1、CCL2、CCL4、CCL5、CCL6、CCL7、CCL8、CCL9、CCL10、CCL11、CCL12、CCL13、CCL14、CCL15、CCL16、CL17、CCL18、CCL19、CCL20、CCL21、CCL22、CCL23、CCL24、CLL25、CCL26、CCL27、CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL4、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8、CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL12、CXCL13、CXCL14、CXCL15、CXCL16、CXCL17、XCL1、XCL2、CX3CL1、HCC-4和LDGF-PBP。在一个示例性实施方案中，靶向部分可以是XCL1，其是识别并结合树突细胞受体XCR1的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CCL1，它是识别并结合CCR8的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CCL2，它是识别并结合CCR2或CCR9的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CCL3，它是识别并结合CCR1、CCR5或CCR9的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CCL4，它是识别并结合CCR1或CCR5或CCR9的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CCL5，它是识别并结合CCR1或CCR3或CCR4或CCR5的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CCL6，它是识别并结合CCR1的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CCL7，它是识别并结合CCR2或CCR9的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CCL8，它是识别并结合CCR1或CCR2或CCR2B或CCR5或CCR9的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CCL9，它是识别并结合CCR1的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CCL10，它是识别并结合CCR1的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CCL11，它是识别并结合CCR2或CCR3或CCR5或CCR9的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CCL13，它是识别并结合CCR2或CCR3或CCR5或CCR9的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CCL14，它是识别并结合CCR1或CCR9的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CCL15，它是识别并结合CCR1或CCR3的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CCL16，它是识别并结合CCR1、CCR2、CCR5或CCR8的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CCL17，它是识别并结合CCR4的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CCL19，它是识别并结合CCR7的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CCL20，它是识别并结合CCR6的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CCL21，它是识别并结合CCR7的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CCL22，它是识别并结合CCR4的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CCL23，它是识别并结合CCR1的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CCL24，它是识别并结合CCR3的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CCL25，它是识别并结合CCR9的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CCL26，它是识别并结合CCR3的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CCL27，它是识别并结合CCR10的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CCL28，它是识别并结合CCR3或CCR10的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CXCL1，它是识别并结合CXCR1或CXCR2的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CXCL2，它是识别并结合CXCR2的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CXCL3，它是识别并结合CXCR2的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CXCL4，其是识别并结合CXCR3B的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CXCL5，它是识别并结合CXCR2的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CXCL6，它是识别并结合CXCR1或CXCR2的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CXCL8，它是识别并结合CXCR1或CXCR2的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CXCL9，它是识别并结合CXCR3的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CXCL10，它是识别并结合CXCR3的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CXCL11，它是识别并结合CXCR3或CXCR7的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CXCL12，它是识别并结合CXCR4或CXCR7的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CXCL13，它是识别并结合CXCR5的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CXCL16，它是识别并结合CXCR6的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是LDGF-PBP，其是识别并结合CXCR2的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是XCL2，其是识别并结合XCR1的趋化因子。在另一个示例性实施方案中，靶向部分是CX3CL1，其是识别并结合CX3CR1的趋化因子。
在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白包含多种组合的靶向部分。在一个示例性实施方案中，本发明的嵌合蛋白可以包含两个靶向部分，其中两个靶向部分都是抗体或其衍生物。在另一个示例性实施方案中，本发明的嵌合蛋白可包含两个靶向部分，其中两个靶向部分都是细胞受体的天然配体。在另一个示例性实施方案中，本发明的嵌合蛋白可包含两个靶向部分，其中一个靶向部分是抗体或其衍生物，另一个靶向部分是细胞受体的天然配体。
在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白的识别结构域功能性地调节(非限制性地，部分或完全中和)目标靶(例如抗原、受体)，例如，显著抑制、降低或中和抗原具有的生物学效应。例如，多种识别结构域可以针对一种或多种肿瘤抗原，所述肿瘤抗原主动抑制例如患有肿瘤的患者的免疫系统，或具有抑制例如患有肿瘤的患者的免疫系统的能力。例如，在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白功能性调节免疫抑制信号(例如，检查点抑制剂)，例如，TIM-3、BTLA、PD-1、CTLA-4、B7-H4、GITR、半乳凝素-9、HVEM、PD-L1、PD-L2、B7-H3、CD244、CD160、TIGIT、SIRPα、ICOS、CD172a和TMIGD2中的一种或多种。例如，在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白经工程化以破坏、阻断、降低和/或抑制免疫抑制信号的传递，作为非限制性实例，PD-1与PD-L1或PD-L2的结合和/或CTLA-4与AP2M1、CD80、CD86、SHP-2和PPP2R5A中的一种或多种的结合。
在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白的识别结构域结合但不功能性调节目标靶(例如抗原、受体)，例如，识别结构域是结合抗体或类似于结合抗体。例如，在多个实施方案中，识别结构域仅靶向抗原或受体，但不显著抑制、降低或功能性调节抗原或受体具有的生物学效应。例如，上述一些较小抗体形式(例如，与例如完全抗体相比)具有靶向难以接近的表位的能力，并提供更广谱的特异性结合部位。在多个实施方案中，识别结构域结合与对其生物活性重要的抗原或受体位点(例如抗原的活性位点)物理分离的表位。
这种非中和结合可用于本发明的多个实施方案，包括其中本发明的嵌合蛋白用于通过效应抗原(例如本文所述的那些中的任何一种)直接或间接将活性免疫细胞募集至需要的位点的方法。例如，在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白可用于在减少或消除肿瘤的方法中通过CD8直接或间接地募集细胞毒性T细胞(例如，嵌合蛋白可包含抗CD8识别结构域和针对肿瘤抗原的识别结构域)。在这些实施方案中，需要直接或间接募集表达CD8的细胞毒性T细胞，但不能功能性调节CD8活性。相反，在这些实施方案中，CD8信号是肿瘤减少或消除作用的重要部分。作为进一步的实例，在减少或消除肿瘤的多个方法中，本发明的嵌合蛋白用于通过CLEC9A直接或间接募集树突细胞(DC)(例如，嵌合蛋白可包含抗CLEC9A识别结构域和针对肿瘤抗原的识别结构域)。在这样的实施方案中，需要直接或间接募集表达CLEC9A的DC，但不能功能性调节CLEC9A活性。相反，在这些实施方案中，CLEC9A信号传导是肿瘤减少或消除作用的重要部分。
在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白的识别结构域结合XCR1，例如树突细胞上的XCR1。例如，在一些实施方案中，识别结构域包含XCL1或非中和性抗XCR1试剂的全部或部分。
在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白的识别结构域结合免疫调节抗原(例如免疫刺激或免疫抑制性的)。在多个实施方案中，免疫调节抗原是以下一种或多种：4-1BB、OX-40、HVEM、GITR、CD27、CD28、CD30、CD40、ICOS配体；OX-40配体、LIGHT(CD258)、GITR配体、CD70、B7-1、B7-2、CD30配体、CD40配体、ICOS、ICOS配体、CD137配体和TL1A。在多个实施方案中，这种免疫刺激抗原在肿瘤细胞上表达。在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白的识别结构域结合但不功能性调节这些免疫刺激抗原，因此允许募集表达这些抗原的细胞而不降低或丧失其潜在的肿瘤减少或消除能力。
在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白的识别结构域可以处于包含两个具有中和活性的识别结构域的嵌合蛋白的情况下，或处于包含两个具有非中和(例如结合)活性的识别结构域的嵌合蛋白的情况下，或处于包含一个具有中和活性的识别结构域和一个具有非中和(例如结合)活性的识别结构域的嵌合蛋白的情况下。
在多个实施方案中，多特异性嵌合蛋白具有靶向部分，所述靶向部分具有特异性结合靶(例如抗原、受体)的识别结构域，所述靶是非细胞结构的一部分。在一些实施方案中，抗原或受体不是完整细胞或细胞结构的完整组分。在一些实施方案中，抗原或受体是细胞外抗原或受体。在一些实施方案中，靶是非蛋白质的非细胞标记物(marker)，包括但不限于核酸，包括DNA或RNA，例如从坏死肿瘤细胞释放的DNA，或细胞外沉积物如胆固醇。
在一些实施方案中，目标靶(例如抗原、受体)是基质或细胞外基质(ECM)的非细胞组分或与其相关的标记物的一部分。如本文所用，基质是指组织或器官的结缔和支持性框架。基质可以包括细胞的汇编(compilation)，例如成纤维细胞/肌成纤维细胞、神经胶质细胞、上皮细胞、脂肪细胞、免疫细胞、血管细胞、平滑肌细胞和免疫细胞以及细胞外基质(ECM)和细胞外分子。在多个实施方案中，目标靶(例如抗原、受体)是基质的非细胞组分的一部分，例如细胞外基质和细胞外分子。如本文所用，ECM是指存在于所有组织和器官中的非细胞组分。ECM由生物化学上不同的组分的大的集合组成，包括但不限于蛋白、糖蛋白、蛋白聚糖和多糖。ECM的这些成分通常由邻近细胞产生并通过胞吐作用分泌到ECM中。一旦分泌，ECM组分通常聚集形成复杂的大分子网络。在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白包含识别位于ECM任何组分上的靶(例如抗原或受体或非蛋白分子)的靶向部分。ECM的示例性成分包括但不限于蛋白聚糖、非蛋白聚糖多糖、纤维和其它ECM蛋白或ECM非蛋白例如多糖和/或脂质、或ECM相关分子(例如蛋白或非蛋白，例如多糖、核酸和/或脂质)。
在一些实施方案中，靶向部分识别ECM蛋白聚糖上的靶(例如抗原、受体)。蛋白聚糖是糖基化的蛋白。基础蛋白聚糖单元包括具有一个或多个共价连接的糖胺聚糖(GAG)链的核心蛋白。蛋白聚糖具有吸引带正电荷的钠离子(Na+)的净负电荷，其通过渗透作用吸引水分子，从而保持ECM和驻留细胞水合。蛋白聚糖也可有助于捕获和储存ECM中的生长因子。可被本发明的嵌合蛋白靶向的示例性蛋白聚糖包括但不限于硫酸乙酰肝素、硫酸软骨素和硫酸角质素。在一个实施方案中，靶向部分识别非蛋白聚糖的多糖类如透明质酸上的靶(例如抗原、受体)。
在一些实施方案中，靶向部分识别ECM纤维上的靶(例如抗原、受体)。ECM纤维包括胶原蛋白纤维和弹性蛋白纤维。在一些实施方案中，靶向部分识别胶原蛋白或胶原蛋白纤维上的一个或多个表位。胶原蛋白是ECM中最丰富的蛋白。胶原蛋白作为纤维状蛋白存在于ECM中，并为居留细胞提供结构支持。在一个或多个实施方案中，靶向部分识别并结合ECM中存在的多种类型的胶原蛋白，包括但不限于纤维胶原蛋白(I、II、III、V、XI型)、facit胶原蛋白(IX、XII、XIV型)、短链胶原蛋白(VIII、X型)、基底膜胶原蛋白(IV型)和/或VI、VII或XIII型胶原蛋白。弹性蛋白纤维为组织提供弹性，允许它们在需要时伸展，然后恢复到其原始状态。在一些实施方案中，靶部分识别弹性蛋白或弹性蛋白纤维上的一个或多个表位。
在一些实施方案中，靶向部分识别一种或多种ECM蛋白，包括但不限于腱生蛋白、纤连蛋白、纤维蛋白、层粘连蛋白或巢蛋白/内功素(nidogen/entactin)。
在一个实施方案中，靶向部分识别并结合腱生蛋白。糖蛋白的腱生蛋白(TN)家族包括至少四个成员：腱生蛋白-C、腱生蛋白-R、腱生蛋白-X和腱生蛋白W。腱生蛋白的一级结构包括在同一连续序列中排列的几个共同基序：氨末端七肽重复序列、表皮生长因子(EGF)样重复序列、III型纤连蛋白结构域重复序列和羧末端纤维蛋白原样球状结构域。每个蛋白成员与EGF样和III型纤连蛋白重复单元的数量和性质方面的典型变化相关。对于生腱蛋白-C，也特别存在亚型变体。已知生腱蛋白-C有超过27种剪接变体和/或亚型。在具体实施方案中，靶向部分识别并结合腱生蛋白-CA1。类似地，腱生蛋白-R也具有多种剪接变体和亚型。腱生蛋白-R通常以二聚体或三聚体存在。腱生蛋白-X是腱生蛋白家族的最大成员，已知以三聚体存在。腱生蛋白-W以三聚体存在。在一些实施方案中，靶向部分识别腱生蛋白上的一个或多个表位。在一些实施方案中，靶向部分识别腱生蛋白的单体和/或二聚体和/或三聚体和/或六聚体形式。
在一个实施方案中，靶向部分识别并结合纤连蛋白。纤连蛋白是糖蛋白，其将细胞与ECM中的胶原纤维连接，允许细胞移动通过ECM。通过结合整联蛋白，纤连蛋白解折叠以形成功能性二聚体。在一些实施方案中，靶向部分识别纤连蛋白的单体和/或二聚体形式。在一些实施方案中，靶向部分识别纤连蛋白上的一个或多个表位。在示例性实施方案中，靶向部分识别纤连蛋白胞外结构域A(EDA)或纤连蛋白胞外结构域B(EDB)。EDA水平升高与多种疾病和病症相关，包括银屑病、类风湿性关节炎、糖尿病和癌症。在一些实施方案中，靶向部分识别含有EDA亚型的纤连蛋白，并且可以用于将嵌合蛋白靶向患病细胞，包括癌细胞。在一些实施方案中，靶向部分识别含有EDB亚型的纤连蛋白。在一些实施方案中，这样的靶向部分可以用于将嵌合蛋白靶向肿瘤细胞，包括肿瘤新脉管系统。
在一个实施方案中，靶向部分识别并结合纤维蛋白。纤维蛋白是另一种经常在ECM的基质网络中发现的蛋白物质。纤维蛋白是通过蛋白酶凝血酶对纤维蛋白原的作用而形成的，这种作用导致纤维蛋白聚合。在一些实施方案中，靶向部分识别纤维蛋白上的一个或多个表位。在一些实施方案中，靶向部分识别单体形式以及聚合形式的纤维蛋白。
在一个实施方案中，靶向部分识别并结合层粘连蛋白。层粘连蛋白是基底层的主要成分，它是细胞和器官的蛋白网络基础。层粘连蛋白是含有α链、β链和γ链的异源三聚体蛋白。在一些实施方案中，靶向部分识别层粘连蛋白上的一个或多个表位。在一些实施方案中，靶向部分识别层粘连蛋白的单体、二聚体以及三聚体形式。
在一个实施方案中，靶向部分识别并结合巢蛋白或内功素。巢蛋白/内功素是高度保守的硫酸化糖蛋白家族。它们构成基底膜的主要结构组分，并起连接基底膜中的层粘连蛋白和胶原IV网络的作用。该家族的成员包括巢蛋白-1和巢蛋白-2。在多个实施方案中，靶向部分识别巢蛋白-1和/或巢蛋白-2上的表位。
在多个实施方案中，靶向部分包含抗原识别结构域，其识别存在于本文所述的任何靶(例如ECM蛋白)上的表位。在一个实施方案中，抗原识别结构域识别蛋白上存在的一个或多个线性表位。如本文所用，线性表位指蛋白上存在的任何连续氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗原识别结构域识别蛋白上存在的一个或多个构象表位。如本文所用，构象表位是指形成具有能够被抗原识别结构域识别的特征和/或形状和/或三级结构的三维表面的一个或多个氨基酸部分(其可以是不连续的)。
在多个实施方案中，靶向部分可以结合本文所述的任何靶(例如ECM蛋白)的全长和/或成熟形式和/或亚型和/或剪接变体和/或片段和/或任何其它天然存在或合成的类似物、变体或突变体。在多个实施方案中，靶向部分可以结合本文所述的任何形式的蛋白，包括单体、二聚体、三聚体、四聚体、异二聚体、多聚体和相关形式。在多个实施方案中，靶向部分可以结合本文所述的任何翻译后修饰形式的蛋白，例如糖基化和/或磷酸化形式。
在多个实施方案中，靶向部分包含识别胞外分子如DNA的抗原识别结构域。在一些实施方案中，靶向部分包含识别DNA的抗原识别结构域。在一个实施方案中，DNA从坏死或凋亡的肿瘤细胞或其它患病细胞脱落到细胞外间隙中。
在多个实施方案中，靶向部分包含识别与动脉粥样硬化斑块相关的一种或多种非细胞结构的抗原识别结构域。已知有两种类型的动脉粥样硬化斑块。纤维脂质(纤维-脂肪)斑块的特征在于动脉内膜下充满脂质的细胞的积聚。在内皮下面有纤维帽，其覆盖斑块的动脉粥样化核心。该核心包括具有升高的组织胆固醇和胆固醇酯含量的充满脂质的细胞(巨噬细胞和平滑肌细胞)、纤维蛋白、蛋白聚糖、胶原蛋白、弹性蛋白和细胞碎片。在晚期斑块中，斑块的中央核心通常含有细胞外胆固醇沉积物(从死细胞释放)，其形成具有空的针状裂缝的胆固醇晶体区域。在斑块的外围是较年轻的泡沫细胞和毛细管。纤维性斑块也位于动脉壁内的内膜下，导致壁的增厚和扩张，并且有时导致腔的局部点状变窄，且肌层有一些萎缩。纤维斑块含有胶原纤维(嗜酸性粒细胞)、钙沉淀(苏木精亲合性)和充满脂质的细胞。在一些实施方案中，靶向部分识别并结合这些斑块的一种或多种非细胞成分，例如纤维蛋白、蛋白聚糖、胶原、弹性蛋白、细胞碎片和钙或其它矿物质沉积物或沉淀。在一些实施方案中，细胞碎片是从死细胞释放的核酸，例如DNA或RNA。
在多个实施方案中，靶向部分包含抗原识别结构域，其识别在与神经变性疾病相关的脑斑中发现的一种或多种非细胞结构。在一些实施方案中，靶向部分识别并结合位于阿尔茨海默病患者脑中发现的淀粉样蛋白斑块中的一种或多种非细胞结构。例如，靶向部分可以识别并结合肽淀粉样蛋白β，其是淀粉样蛋白斑块的主要成分。在一些实施方案中，靶向部分识别并结合位于亨廷顿病患者中发现的脑斑中的一种或多种非细胞结构。在多个实施方案中，靶向部分识别并结合在与其它神经变性或肌肉骨骼疾病如路易体痴呆和包涵体肌炎有关的斑块中发现的一种或多种非细胞结构。
连接子和官能团
在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白可以包括一个或多个官能团、残基或部分。在多个实施方案中，所述一个或多个官能团、残基或部分连接或基因融合到本文所述的任何信号传导剂或靶向部分(例如SIRP1α)。在一些实施方案中，这些官能团、残基或部分赋予本发明的嵌合蛋白一种或多种所需的性质或功能。这类官能团的实例和将它们引入本发明的嵌合蛋白的技术的实例是本领域已知的，例如参见Remington's PharmaceuticalSciences,第16版,Mack Publishing Co.,Easton,Pa.(1980)。
在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白可以通过与另一种试剂缀合和/或融合来延长半衰期或以其它方式改善药物动力学和药代动力学性质。在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白可以与PEG、XTEN(例如，作为rPEG)、聚唾液酸(POLYXEN)、白蛋白(例如，人血清白蛋白或HAS)、弹性蛋白样蛋白(ELP)、PAS、HAP、GLK、CTP、转铁蛋白等中的一种或多种融合或缀合。在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白可以与抗体或抗体片段如Fc片段融合或缀合。例如，嵌合蛋白可以融合到人免疫球蛋白(Ig)G的Fc结构域的N末端或C末端。在多个实施方案中，将每个单独的嵌合蛋白与BioDrugs(2015)29:215–239中描述的一种或多种试剂融合，其全部内容通过引用并入本文。
在一些实施方案中，所述官能团、残基或部分包含合适的药学上可接受的聚合物，例如聚(乙二醇)(PEG)或其衍生物(例如甲氧基聚(乙二醇)或mPEG)。在一些实施方案中，PEG部分的结合增加了SIRP1α结合蛋白的半衰期和/或降低了免疫原性。通常，可以使用任何合适形式的聚乙二醇化，例如本领域用于抗体和抗体片段(包括但不限于单结构域抗体，例如VHH)的聚乙二醇化；参见，例如，Chapman,Nat.Biotechnol.,54,531-545(2002)；Veronese和Harris,Adv.Drug Deliv.Rev.54,453-456(2003),Harris和Chess,Nat.Rev.Drug.Discov.,2,(2003)和WO04060965，其全部内容在此引入作为参考。用于蛋白聚乙二醇化的多种试剂也是可商购的，例如，从Nektar Therapeutics，USA商购。在一些实施方案中，使用位点定向的聚乙二醇化，特别是通过半胱氨酸残基(参见，例如Yang等,Protein Engineering,16,10,761-770(2003)，其全部内容通过引用并入本文)。例如，为了这个目的，PEG可以连接到本发明的嵌合蛋白中天然存在的半胱氨酸残基上。在一些实施方案中，使用本领域已知的技术，本发明的嵌合蛋白经修饰以便适当地引入一个或多个用于PEG连接的半胱氨酸残基，或者可以将包含一个或多个用于PEG连接的半胱氨酸残基的氨基酸序列融合到本发明的嵌合蛋白的氨末端和/或羧末端。
在一些实施方案中，所述官能团、残基或部分包含N-连接或O-连接的糖基化。在一些实施方案中，N-连接或O-连接的糖基化作为共翻译和/或翻译后修饰的一部分引入。
在一些实施方案中，所述官能团、残基或部分包含一个或多个可检测标记或其它信号产生基团或部分。合适的标记(label)和用于附着、使用和检测它们的技术是本领域已知的，并且包括但不限于荧光标记(例如荧光素、异硫氰酸酯、罗丹明、藻红蛋白、藻蓝蛋白、别藻蓝蛋白、邻苯二醛和荧光素和荧光金属例如Eu或来自镧系的其它金属)、磷光标记、化学发光标记或生物发光标记(例如鲁米诺、异鲁米诺、热芳香吖啶酯、咪唑、吖啶盐、草酸酯、二氧乙烷或GFP及其类似物)、放射性同位素、金属、金属螯合物或金属阳离子或特别适合用于体内、体外或原位诊断和成像的其它金属或金属阳离子以及发色团和酶(例如苹果酸脱氢酶、葡萄球菌核酸酶、δ-V-类固醇异构酶、酵母醇脱氢酶、α-甘油磷酸脱氢酶、丙糖磷酸异构酶、生物素抗生物素过氧化物酶、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、天冬酰胺酶、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、核糖核酸酶、脲酶、过氧化氢酶、葡萄糖-VI-磷酸脱氢酶、糖化酶和乙酰胆碱酯酶)。其它合适的标记包括可以使用NMR或ESR光谱法检测的部分。本发明的这种标记的VHH和多肽可例如用于体外、体内或原位测定(包括本身已知的免疫测定，例如ELISA、RIA、EIA和其它"夹心测定"等)以及体内诊断和成像目的，这取决于特定标记的选择。
在一些实施方案中，所述官能团、残基或部分包含与嵌合蛋白连接或基因融合的标签(tag)。在一些实施方案中，嵌合蛋白可以包括单个标签或多个标签。例如，所述标签是不抑制或阻止嵌合蛋白与其靶或任何其它目标抗原如肿瘤抗原结合的肽、糖或DNA分子。在多个实施方案中，所述标签为至少约3-5个氨基酸长度、5-8个氨基酸长度、8-12个氨基酸长度、12-15个氨基酸长度或15-20个氨基酸长度。示例性的标签描述于例如美国专利公开号US2013/00558962中。在一些实施方案中，所述标签是亲和标签，例如谷胱甘肽-S-转移酶(GST)和组氨酸(His)标签。在一个实施方案中，嵌合蛋白包含His标签。
在一些实施方案中，官能团、残基或部分包含螯合基团，例如以螯合金属或金属阳离子之一。合适的螯合基团例如包括但不限于，二乙基三胺五乙酸(DTPA)或乙二胺四乙酸(EDTA)。
在一些实施方案中，所述官能团、残基或部分包含作为特异性结合对的一部分的官能团，例如生物素-(链霉)抗生物素蛋白结合对。这种官能团可用于将本发明的嵌合蛋白连接到与结合对另一半结合的另一蛋白、多肽或化合物上，即通过形成结合对。例如，本发明的嵌合蛋白可以与生物素缀合，并与另一种缀合有抗生物素蛋白或链霉抗生物素的蛋白、多肽、化合物或载体连接。例如，这种缀合的嵌合蛋白可以用作报告子，例如，在可检测的信号产生剂与抗生物素蛋白或抗生蛋白链菌素缀合的诊断系统中。这类结合对也可以例如用于将嵌合蛋白结合到载体上，包括适于药物目的的载体。一个非限制性的实例是Cao和Suresh,Journal of Drug Targeting,8,4,257(2000)所述的脂质体制剂。这类结合对也可以用于将治疗活性剂与本发明的嵌合蛋白连接。
在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白任选地包含一个或多个连接子。在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白包含连接靶向部分和信号传导剂的连接子。在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白包含信号传导剂内的连接子(例如在单链TNF的情况下，其可包含两个连接子以产生三聚体)。
在一些实施方案中，提供了编码作为单核苷酸序列与本文所述的任何连接子连接的本发明的嵌合蛋白的载体，并且可以用于制备这样的嵌合蛋白。
在一些实施方案中，连接子长度可以使靶向部分和信号传导剂与它们的受体有效结合。例如，在一些实施方案中，连接子长度允许靶向部分之一和信号传导剂与同一细胞上的受体有效结合，以及其它靶向部分与另一细胞有效结合。在本文其它地方提供了示例性的细胞配对。
在一些实施方案中，连接子长度至少等于靶向部分之一和信号传导剂对同一细胞上受体的结合位点之间的最小距离。在一些实施方案中，连接子长度是靶向部分之一和信号传导剂对同一细胞上受体的结合位点之间的最小距离的至少两倍、或三倍、或四倍、或五倍、或十倍、或二十倍、或25倍、或50倍、或一百倍、或更多倍。
如本文所述，连接子长度允许靶向部分之一和信号传导剂与同一细胞上的受体有效结合，所述结合是顺次的，例如靶向部分/受体结合先于信号传导剂/受体结合。
在一些实施方案中，在单个嵌合体中存在两个连接子，每个连接子均连接信号传导剂与靶向部分。在多个实施方案中，连接子的长度允许形成具有疾病细胞和效应细胞的位点而没有会阻止任一细胞调节的空间位阻。
本发明考虑使用多个连接子序列。在多个实施方案中，连接子可以衍生自天然存在的多结构域蛋白，或者是所需的经验性连接子，例如在Chichili等,(2013),ProteinSci.22(2):153-167,Chen等,(2013),Adv Drug Deliv Rev.65(10):1357-1369中描述的，其全部内容在此引入作为参考。在一些实施方案中，可以使用连接子设计数据库和计算机程序来设计连接子，例如Chen等,(2013),Adv Drug Deliv Rev.65(10):1357-1369和Crasto等,(2000),Protein Eng.13(5):309-312中描述的，其全部内容在此引入作为参考。在多个实施方案中，连接子可以是功能性的。例如，非限制性地，连接子可以起作用以改善本发明的嵌合蛋白的折叠和/或稳定性，改善表达，改善药代动力学，和/或改善生物活性。
在一些实施方案中，连接子是多肽。在一些实施方案中，连接子的长度小于约100个氨基酸。例如，连接子的长度可以小于约100、约95、约90、约85、约80、约75、约70、约65、约60、约55、约50、约45、约40、约35、约30、约25、约20、约19、约18、约17、约16、约15、约14、约13、约12、约11、约10、约9、约8、约7、约6、约5、约4、约3或约2个氨基酸。在一些实施方案中，连接子是多肽。在一些实施方案中，连接子的长度大于约100个氨基酸。例如，连接子的长度可以大于约100、约95、约90、约85、约80、约75、约70、约65、约60、约55、约50、约45、约40、约35、约30、约25、约20、约19、约18、约17、约16、约15、约14、约13、约12、约11、约10、约9、约8、约7、约6、约5、约4、约3或约2个氨基酸。在一些实施方案中，连接子是柔性的。在另一个实施方案中，连接体是刚性的。
在一些实施方案中，一个连接子将两个靶向部分彼此连接，并且该连接子长度较短，并且一个连接子连接靶向部分和信号传导剂，且该连接子比连接两个靶向部分的连接子长。例如，连接两个靶向部分的连接子和连接靶向部分和信号传导剂的连接子之间的氨基酸长度差异可以是约100、约95、约90、约85、约80、约75、约70、约65、约60、约55、约50、约45、约40、约35、约30、约25、约20、约19、约18、约17、约16、约15、约14、约13、约12、约11、约10、约9、约8、约7、约6、约5、约4、约3或约2个氨基酸。
在多个实施方案中，连接子基本上由甘氨酸和丝氨酸残基(例如，约30％、或约40％、或约50％、或约60％、或约70％、或约80％、或约90％、或约95％、或约97％的甘氨酸和丝氨酸)组成。例如，在一些实施方案中，连接子是(Gly4Ser)n，其中n是约1至约8，例如1、2、3、4、5、6、7或8(分别为SEQ ID NO：247-SEQ ID NO：254)。在一个实施方案中，连接子序列是GGSGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:255)。其它示例性的连接子包括但不限于具有以下序列的连接子：LE、GGGGS(SEQ ID NO:247)、(GGGGS)n(n＝1-4)(SEQ ID NO:247–SEQ ID NO:250)、(Gly)8(SEQ ID NO:256)、(Gly)6(SEQ ID NO:257)、(EAAAK)n(n＝1-3)(SEQ ID NO:258-SEQID NO:260)、A(EAAAK)nA(n＝2-5)(SEQ ID NO:261-SEQ ID NO:264)、AEAAAKEAAAKA(SEQID NO:261)、A(EAAAK)4ALEA(EAAAK)4A(SEQ ID NO:265)、PAPAP(SEQ ID NO:266)、KESGSVSSEQLAQFRSLD(SEQ ID NO:267)、EGKSSGSGSESKST(SEQ ID NO:268)、GSAGSAAGSGEF(SEQ ID NO:269)和(XP)n，其中X表示任意氨基酸，例如Ala、Lys或Glu。在多个实施方案中，所述连接子是GGS。
在一些实施方案中，所述连接子是GGGSE(SEQ ID NO:270)、GSESG(SEQ ID NO:271)、GSEGS(SEQ ID NO:272)、GEGGSGEGSSGEGSSSEGGGSEGGGSEGGGSEGGS(SEQ ID NO:273)和每4个氨基酸间隔随机放置的G、S和E的连接子中的一种或多种。
在一些实施方案中，连接子是抗体(例如IgG、IgA、IgD和IgE的，包括亚类(例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，以及IgA1和IgA2))的铰链区。在多个实施方案中，连接子是抗体(例如IgG、IgA、IgD和IgE，包括亚类(例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，以及IgA1和IgA2))的铰链区。在IgG、IgA、IgD和IgE类抗体中发现的铰链区起柔性间隔物的作用，允许Fab部分在空间中自由移动。与恒定区相反，铰链区在结构上是多样的，在免疫球蛋白类别和亚类之间在序列和长度上都不同。例如，铰链区的长度和柔性在IgG亚类之间是不同的。IgG1的铰链区包括216-231位氨基酸，并且因为它是自由柔性的，Fab片段可绕其对称轴旋转并在以两个重链间二硫键中的第一个为中心的球体内移动。IgG2具有比IgG1更短的铰链，具有12个氨基酸残基和四个二硫键。IgG2的铰链区缺少甘氨酸残基，相对较短，且含有通过额外的重链间二硫键稳定的刚性的聚脯氨酸双螺旋。这些特性限制了IgG2分子的柔性。IgG3与其它亚类的区别在于其独特的延伸铰链区(约为IgG1铰链区的四倍长)，含有62个氨基酸(包括21个脯氨酸和11个半胱氨酸)，形成非柔性的聚脯氨酸双螺旋。在IgG3中，Fab片段相对远离Fc片段，给予分子更大的柔性。IgG3中的延长铰链也导致其与其它亚类相比更高的分子量。IgG4的铰链区比IgG1的铰链区短，并且其柔性介于IgG1和IgG2的柔性之间。据报道，铰链区的柔性按IgG3＞IgG1＞IgG4＞IgG2的顺序降低。
根据结晶学研究，免疫球蛋白铰链区可进一步功能性地细分为三个区域：上铰链区、核心区和下铰链区。参见Shin等，1992Immunological Reviews 130:87。上铰链区包括从CH1的羧基端到铰链中限制运动的第一个残基(通常是在两个重链之间形成链间二硫键的第一个半胱氨酸残基)的氨基酸。上铰链区的长度与抗体的片段柔性相关。核心铰链区含有重链间二硫键，而下铰链区连接CH2结构域的氨末端并包括CH2中的残基。同上。野生型人IgG1的核心铰链区含有序列Cys-Pro-Pro-Cys(SEQ ID NO：274)，当通过形成二硫键而二聚化时，其产生被认为起枢轴作用的环状八肽，从而赋予柔性。在多个实施方案中，本发明的连接子包含任何抗体(例如IgG、IgA、IgD和IgE，包括亚类(例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，以及IgA1和IgA2))的上铰链区、核心区和下铰链区中的一个或两个或三个。铰链区也可以含有一个或多个糖基化位点，其包括许多结构上不同类型的位点用于糖附着。例如，IgA1在铰链区的17个氨基酸的区段内含有5个糖基化位点，赋予铰链区多肽对肠蛋白酶的抗性，这被认为是分泌型免疫球蛋白的有利特性。在多个实施方案中，本发明的连接子包含一个或多个糖基化位点。在多个实施方案中，所述连接子是人IgG4抗体的铰链-CH2-CH3结构域。
如果需要，本发明的嵌合蛋白可以与抗体Fc区连接，所述抗体Fc区包含CH2和CH3结构域之一或两者，以及任选的铰链区。例如，作为单核苷酸序列编码与Fc区连接的本发明的嵌合蛋白的载体可用于制备这样的多肽。
在一些实施方案中，连接子是合成的连接子，例如PEG。
在多个实施方案中，连接子可以是功能性的。例如，无限制地，连接子可以起作用以改善本发明的嵌合蛋白的折叠和/或稳定性，改善表达，改善药代动力学，和/或改善生物活性。在另一个实例中，连接子可以起到将嵌合蛋白靶向特定细胞类型或位置的作用。
嵌合蛋白的修饰和产生
在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白包含为VHH的靶向部分(例如SIRP1α)。在多个实施方案中，VHH不限于特定的生物来源或特定的制备方法。例如，VHH通常可以如下获得：(1)通过分离天然存在的重链抗体的VHH结构域；(2)通过表达编码天然存在的VHH结构域的核苷酸序列；(3)通过天然存在的VHH结构域的"人源化"或通过编码此类人源化VHH结构域的核酸的表达；(4)通过对来自任何动物物种，例如来自哺乳动物物种，例如来自人的天然存在的VH结构域进行"骆驼化"，或通过表达编码这种骆驼化VH结构域的核酸；(5)通过本领域描述的"结构域抗体"或"DAb"的"骆驼化"，或通过编码这种骆驼化VH结构域的核酸的表达；(6)通过使用合成或半合成技术制备蛋白、多肽或本领域已知的其它氨基酸序列；(7)通过使用本领域已知的核酸合成技术制备编码VHH的核酸，然后表达由此获得的核酸；和/或(8)通过前述一种或多种的任意组合。
在一个实施方案中，嵌合蛋白包含VHH，其对应于针对人SIRP1α的天然存在重链抗体的VHH结构域。在一些实施方案中，通常可以通过用SIRP1α分子适当免疫骆驼物种(即，以便产生针对SIRP1α的免疫应答和/或重链抗体)，通过从骆驼获得合适的生物样品(例如血液样品，或任何B细胞样品)，以及通过使用任何合适的已知技术，从样品开始产生针对SIRP1α的VHH序列，来产生或获得这样的VHH序列。在一些实施方案中，可以从骆驼VHH序列的原初文库中获得针对SIRP1α的天然存在的VHH结构域，例如，通过使用SIRP1α或其至少一个部分、片段、抗原决定簇或表位使用本领域已知的一种或多种筛选技术筛选这样的文库。这样的文库和技术例如描述于WO9937681、WO0190190、WO03025020和WO03035694中，其全部内容通过引用并入本文。在一些实施方案中，可使用源自原初VHH文库的改进的合成或半合成文库，例如通过例如随机诱变和/或CDR改组技术从原初VHH文库获得的VHH文库，如WO0043507中所述，其全部内容以引用的方式并入本文中。在一些实施方案中，获得针对SIRP1α的VHH序列的另一种技术涉及适当地免疫能够表达重链抗体(即，以便引起针对SIRP1α的免疫应答和/或重链抗体)的转基因哺乳动物，从转基因哺乳动物获得合适的生物样品(例如血液样品，或任何B细胞样品)，然后使用任何合适的已知技术，从样品开始产生针对SIRP1α的VHH序列。例如，为此目的，可以使用表达重链抗体的小鼠和WO02085945和WO04049794(其全部内容通过引用并入本文)中描述的其它方法和技术。
在一个实施方案中，嵌合蛋白包含VHH，其已被"人源化"，即通过用在来自人的常规4链抗体的VH结构域中的相应位置处存在的一个或多个氨基酸残基置换天然存在的VHH序列的氨基酸序列(且特别是框架序列中)中的一个或多个氨基酸残基。这可以使用本领域已知的人源化技术进行。在一些实施方案中，可以通过本领域已知的方法，例如通过VHH序列与天然存在的人VH结构域序列之间的比较，确定可能的人源化取代或人源化取代的组合。在一些实施方案中，选择人源化取代以使所得人源化VHH仍保留有利的功能特性。通常，作为人源化的结果，本发明的VHH可变得更"人样"，同时与相应的天然存在的VHH结构域相比仍保留有利的性质，例如降低的免疫原性。在多个实施方案中，本发明的人源化VHH可以以本领域已知的任何合适方式获得，因此不严格限于使用包含天然存在的VHH结构域的多肽作为起始材料获得的多肽。
在一个实施方案中，嵌合蛋白包含VHH，其已被"骆驼化"，即通过用骆驼重链抗体VHH结构域相应位置上存在的一个或多个氨基酸残基取代常规4链抗体天然存在VH结构域氨基酸序列中的一个或多个氨基酸残基。在一些实施方案中，将这种"骆驼化"取代插入在VH-VL界面处和/或所谓骆驼科(Camelidae)的标志残基处形成和/或存在的氨基酸位置(参见，例如，WO9404678，其全部内容通过引用并入本文)。在一些实施方案中，用作产生或设计骆驼化VHH的起始材料或起始点的VH序列是来自哺乳动物的VH序列，例如人的VH序列，如VH3序列。在多个实施方案中，骆驼化VHH可以以本领域已知的任何合适方式(即，如上文点(1)-(8)下所示)获得，且因此不严格限于使用包含天然存在的VH结构域的多肽作为起始材料获得的多肽。
在多个实施方案中，"人源化"和"骆驼化"两者可通过分别提供编码天然存在的VHH结构域或VH结构域的核苷酸序列且接着以本领域中已知的方式改变核苷酸序列中的一个或多个密码子以使得新核苷酸序列分别编码"人源化"或"骆驼化"VHH来进行。然后可以以本领域已知的方式表达该核酸，以提供本发明的所需VHH。或者，分别基于天然存在的VHH结构域或VH结构域的氨基酸序列，可设计本发明所需的人源化或骆驼化VHH的氨基酸序列，且接着使用本领域中已知的肽合成技术从头合成。此外，分别基于天然存在的VHH结构域或VH结构域的氨基酸序列或核苷酸序列，可以设计编码所需的人源化或骆驼化VHH的核苷酸序列，然后使用本领域已知的核酸合成技术从头合成，之后可以以本领域已知的方式表达由此获得的核酸，以提供本发明的所需VHH。用于从天然存在的VH序列或VHH序列开始获得本发明的VHH和/或编码其的核酸的其它合适方法和技术是本领域已知的，并且可以例如包括以合适方式组合一条或多条天然存在的VH序列(例如一条或多条FR序列和/或CDR序列)的一个或多个部分、一条或多条天然存在的VHH序列(例如一条或多条FR序列或CDR序列)的一个或多个部分和/或一条或多条合成或半合成序列，以提供本发明的VHH或编码其的核苷酸序列或核酸。
本文描述了产生本发明的嵌合蛋白的方法。例如，编码本发明的嵌合蛋白的DNA序列(例如，编码修饰的信号传导剂和靶向部分和连接子的DNA序列)可以使用本领域已知的方法化学合成。合成的DNA序列可以与其它合适的核苷酸序列连接，包括例如表达控制序列，以产生编码所需嵌合蛋白的基因表达构建体。因此，在多个实施方案中，本发明提供了包含编码本发明的嵌合蛋白的核苷酸序列的分离的核酸。
编码本发明的嵌合蛋白的核酸可引入(连接)到表达载体中，所述表达载体可通过转染、转化或转导技术引入宿主细胞中。例如，可以通过逆转录病毒转导将编码本发明的嵌合蛋白的核酸导入宿主细胞。示例性的宿主细胞是大肠杆菌细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、人胚肾293(HEK293)细胞、HeLa细胞、幼仓鼠肾(BHK)细胞、猴肾细胞(COS)、人肝细胞癌细胞(例如Hep G2)和骨髓瘤细胞。转化的宿主细胞可以在允许宿主细胞表达编码本发明的嵌合蛋白的基因的条件下生长。因此，在多个实施方案中，本发明提供了包含编码本发明的嵌合蛋白的核酸的表达载体。在多个实施方案中，本发明还提供了包含此类表达载体的宿主细胞。
具体的表达和纯化条件将根据所用的表达系统而变化。例如，如果基因要在大肠杆菌中表达，首先通过将工程化的基因定位在合适的细菌启动子(例如Trp或Tac)和原核信号序列的下游，将其克隆到表达载体中。在另一个实例中，如果工程化的基因要在真核宿主细胞如CHO细胞中表达，则首先将其插入到含有例如合适的真核启动子、分泌信号、增强子和多种内含子的表达载体中。可以使用转染、转化或转导技术将基因构建体引入宿主细胞。
本发明的嵌合蛋白可通过在允许蛋白表达的条件下培养用编码嵌合蛋白的表达载体转染的宿主细胞来产生。表达后，可以收获蛋白并使用本领域熟知的技术纯化，例如亲和标签如谷胱甘肽-S-转移酶(GST)和组氨酸标签或通过层析。
因此，在多个实施方案中，本发明提供了编码本发明的嵌合蛋白的核酸。在多个实施方案中，本发明提供了包含编码本发明的嵌合蛋白的核酸的宿主细胞。
在多个实施方案中，本发明的SIRP1α靶向部分或包含其的嵌合蛋白可以在体内表达，例如在患者体内表达。例如，在多个实施方案中，本发明的SIRP1α靶向部分或包含其的嵌合蛋白质可以以编码本发明的SIRP1α靶向部分或包含其的嵌合蛋白质的核酸的形式施用。在多个实施方案中，核酸是DNA或RNA。在一些实施方案中，本发明的SIRP1α靶向部分或包含其的嵌合蛋白由修饰的mRNA编码，即包含一个或多个修饰的核苷酸的mRNA。在一些实施方案中，修饰的mRNA包含美国专利号8,278,036中发现的一个或多个修饰，其全部内容通过引用并入本文。在一些实施方案中，修饰的mRNA包含m5C、m5U、m6A、s2U、Ψ和2'-O-甲基-U中的一个或多个。在一些实施方案中，本发明涉及施用编码一条或多条本发明的嵌合蛋白的修饰mRNA。在一些实施方案中，本发明涉及包含以上所述的基因治疗载体。在一些实施方案中，本发明涉及包含以上所述的基因治疗方法。在多个实施方案中，核酸是溶瘤病毒形式，例如腺病毒、呼肠孤病毒、麻疹病毒、单纯疱疹病毒、新城疫病毒或痘苗病毒。
药学上可接受的盐和赋形剂
本文所述的嵌合蛋白可以具有足够碱性的官能团，其可以与无机或有机酸反应，或者具有羧基，其可以与无机或有机碱反应，以形成药学上可接受的盐。如本领域所熟知的，药学上可接受的酸加成盐是由药学上可接受的酸形成的。这些盐包括例如以下列出的药学上可接受的盐：Journal of Pharmaceutical Science，66，2-19(1977)和TheHandbook of Pharmaceutical Salts；Properties,Selection,and Use.P.H.Stahl和C.G.Wermuth(编),Verlag,Zurich(瑞士)2002，其全部内容通过引用结合到本文中。
作为非限制性实例，药学上可接受的盐包括硫酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸性磷酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、鞣酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、糖二酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、樟脑磺酸盐、双羟萘酸盐、苯基乙酸盐、三氟乙酸盐、丙烯酸盐、氯苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、邻乙酰氧基苯甲酸盐、萘-2-苯甲酸盐、异丁酸盐、苯基丁酸盐、α-羟基丁酸盐、丁炔-1,4-二羧酸盐、己炔-1,4-二羧酸盐、癸酸盐、辛酸盐、肉桂酸盐、乙醇酸盐、庚酸盐、马尿酸盐、苹果酸盐、羟基马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、邻苯二甲酸盐、对苯二甲酸盐、丙酸盐、苯丙酸盐、癸二酸盐、辛二酸盐、对溴苯磺酸盐、氯苯磺酸盐、乙基磺酸盐、2-羟乙基磺酸盐、甲基磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、萘-1,5-磺酸盐、二甲苯磺酸盐和酒石酸盐。
术语"药学上可接受的盐"还指本发明组合物的盐，其具有酸性官能团，例如羧酸官能团和碱。合适的碱包括但不限于碱金属如钠、钾和锂的氢氧化物；碱土金属如钙和镁的氢氧化物；其它金属例如铝和锌的氢氧化物；氨和有机胺，例如未取代或羟基取代的单-、二-或三-烷基胺，二环己基胺；三丁胺；吡啶；N-甲基胺，N-乙胺；二乙胺；三乙胺；单-、双-或三-(2-OH-低级烷基胺)，例如单-、双-或三-(2-羟乙基)胺、2-羟基-叔丁胺或三-(羟甲基)甲胺、N,N-二-低级烷基-N-(羟基-低级烷基)-胺，例如N,N-二甲基-N-(2-羟乙基)胺或三-(2-羟乙基)胺；N-甲基-D-葡糖胺；以及氨基酸，例如精氨酸、赖氨酸等。
在一些实施方案中，本文所述的组合物是药学上可接受的盐的形式。
药物组合物和制剂
在多个实施方案中，本发明涉及包含本文所述嵌合蛋白和药学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物。本文所述的任何药物组合物可以作为包含药学上可接受的载体或媒介物的组合物的组分施用于受试者。这样的组合物可以任选地包含合适量的药学上可接受的赋形剂，以便提供用于适当施用的形式。
在多个实施方案中，药物赋形剂可以是液体，例如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的那些，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。药物赋形剂可以是例如盐水、阿拉伯胶、明胶、淀粉糊、滑石、角蛋白、胶态二氧化硅、尿素等。另外，可以使用助剂、稳定剂、增稠剂、润滑剂和着色剂。在一个实施方案中，当给予受试者时，药学上可接受的赋形剂是无菌的。当静脉内给予本文所述的任何药剂时，水是有用的赋形剂。盐水溶液和葡萄糖水溶液和甘油溶液也可用作液体赋形剂，特别是用于可注射溶液。合适的药物赋形剂还包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩岩(chalk)、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙二醇、水、乙醇等。如果需要，本文所述的任何试剂也可包含少量的润湿剂或乳化剂，或pH缓冲剂。合适的药物赋形剂的其它实例描述于Remington's Pharmaceutical Sciences 1447-1676(Alfonso R.Gennaro编，第19版，1995)，在此引入作为参考。
本发明包括多种制剂形式的所述药物组合物(和/或另外的治疗剂)。本文所述的任何本发明的药物组合物(和/或另外的治疗剂)可以采取溶液、悬浮液、乳液、滴剂、片剂、丸剂、胶囊、含液体胶囊、明胶胶囊、粉剂、缓释制剂、栓剂、乳液、气雾剂、喷雾剂、悬浮液、冻干粉末、冷冻悬浮液、干燥粉末的形式，或任何其它适合使用的形式。在一个实施方案中，组合物是胶囊的形式。在另一个实施方案中，组合物是片剂的形式。在另一个实施方案中，药物组合物被配制成软胶囊的形式。在另一个实施方案中，药物组合物被配制成明胶胶囊的形式。在另一个实施方案中，药物组合物被配制成液体。
如果需要，本发明的药物组合物(和/或另外的试剂)也可以包括增溶剂。同样，可以用本领域已知的合适的媒介物或递送装置递送所述试剂。本文概述的联合治疗可以在单一递送媒介物或递送装置中共同递送。
包含本发明的药物组合物(和/或其它试剂)的制剂可以方便地以单位剂型存在，并且可以通过药学领域公知的任何方法制备。这些方法通常包括将治疗剂与载体结合的步骤，所述载体构成一种或多种辅助成分。通常，通过将治疗剂与液体载体、精细分散的固体载体或两者均匀且紧密地结合，然后如果需要，将产品成形为所需制剂的剂型(例如，湿法或干法制粒、粉末混合等，然后使用本领域已知的常规方法压片)来制备制剂。
在多个实施方案中，本文所述的任何药物组合物(和/或其它药剂)根据常规方法配制成适于本文所述施用模式的组合物。
施用途径包括，例如：口服、皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外、舌下、鼻内、脑内、阴道内、经皮、直肠、吸入或局部施用。施用可以是局部或全身性的。在一些实施方案中，口服施用。在另一个实施方案中，施用是通过肠胃外注射。施用方式可由医师自行决定，并部分取决于医学状况的部位。在大多数情况下，施用导致本文所述的任何药剂释放到血流中。
在一个实施方案中，根据常规方法将本文所述的嵌合蛋白配制成适于口服施用的组合物。用于口服递送的组合物可以是例如片剂、锭剂、水性或油性悬浮液、颗粒、粉末、乳剂、胶囊、糖浆或酏剂的形式。口服施用的组合物可以包含一种或多种试剂，例如甜味剂，如果糖、阿司帕坦或糖精；调味剂，例如薄荷、冬青油或樱桃；着色剂；和防腐剂，以提供药学上怡人的制剂。此外，当为片剂或丸剂形式时，组合物可以被包衣以延迟在胃肠道中的崩解和吸收，从而在延长的时间段内提供持续的作用。围绕驱动本文所述的任何嵌合蛋白的渗透活性物的选择性渗透膜也适用于口服施用的组合物。在这些后面的平台中，来自胶囊周围环境的流体被驱动化合物吸收，该驱动化合物膨胀以通过孔置换试剂或试剂组合物。这些递送平台可以提供基本上零级的递送曲线，这与速释制剂的尖峰曲线相反。也可使用延时材料，例如单硬脂酸甘油酯或硬脂酸甘油酯。口服组合物可以包括标准赋形剂，例如甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素和碳酸镁。在一个实施方案中，赋形剂是药物级的。除了活性化合物之外，悬浮液可以含有助悬剂，例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂、黄芪胶等，及其混合物。
适于胃肠外施用(例如静脉内、肌内、腹膜内、皮下和关节内注射和输注)的剂型包括例如溶液、悬浮液、分散体、乳剂等。它们还可以以无菌固体组合物(例如冻干组合物)的形式制备，其可以在使用前立即溶解或悬浮在无菌可注射介质中。它们可以含有例如本领域已知的悬浮剂或分散剂。适于胃肠外施用的制剂组分包括无菌稀释剂，例如注射用水、盐水溶液、不挥发性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌剂，例如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂如EDTA；缓冲剂，例如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；和用于调节张力的试剂，例如氯化钠或葡萄糖。
对于静脉内施用，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、Cremophor ELTM(BASF，Parsippany，NJ)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。载体在制造和储存条件下应该是稳定的，并且应该是抗微生物的。载体可以是溶剂或分散介质，其含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)及其合适的混合物。
本文提供的组合物(单独或与其它合适的组分组合)可以制成气雾剂(即"喷雾")以通过吸入施用。气雾剂可以置于加压的可接受的推进剂中，例如二氯二氟甲烷、丙烷、氮气等。
本文所述的任何本发明的药物组合物(和/或其它药剂)可通过本领域普通技术人员公知的控释或缓释方式或通过递送装置施用。实例包括但不限于美国专利号3,845,770、3,916,899、3,536,809、3,598,123、4,008,719、5,674,533、5,059,595、5,591,767、5,120,548、5,073,543、5,639,476、5,354,556和5,733,556中公开的那些，其每一个在此通过引用全部并入。这种剂型可用于提供一种或多种活性成分的控释或缓释，例如使用羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、其它聚合物基质、凝胶、渗透膜、渗透系统、多层包衣、微粒、脂质体、微球或其组合，以提供不同比例的所需释放曲线。本领域技术人员已知的合适的控释或缓释制剂，包括本文所述的那些，可以容易地选择与本文所述的试剂的活性成分一起使用。因此，本发明提供了适于口服施用的单一单位剂型，例如但不限于适于控释或缓释的片剂、胶囊、凝胶胶囊和胶囊形片剂。
活性成分的控释或缓释可以由多种条件刺激，包括但不限于pH的变化、温度的变化、由适当波长的光的刺激、酶的浓度或可用性、水的浓度或可用性、或其它生理条件或化合物。
在另一个实施方案中，可将控释系统置于待治疗的靶区域附近，因此仅需要全身剂量的一部分(参见，例如，Goodson，In Medical Applications of Controlled Release,见上文,Vol.2,pp.115-138(1984))。可以使用Langer，1990，Science 249:1527-1533的综述中讨论的其它控释系统。
药物制剂优选是无菌的。灭菌可通过例如经无菌过滤膜过滤来完成。当组合物被冻干时，可在冻干和重构之前或之后进行过滤灭菌。
施用和剂量
应当理解，根据本发明施用的嵌合蛋白的实际剂量将根据特定的剂型和施用方式而变化。本领域技术人员可以考虑许多可以改变嵌合蛋白作用的因素(例如体重、性别、饮食、施用时间、施用途径、排泄速率、受试者的状况、药物组合、遗传性格(geneticdisposition)和反应敏感性)。施用可以在最大耐受剂量内连续进行，或者以一个或多个离散剂量进行。对于给定的一组条件，最佳的施用速率可以由本领域技术人员使用常规的施用剂量试验确定。
在一些实施方案中，嵌合蛋白的合适剂量为约0.01mg/kg至约10g/kg受试者体重，约0.01mg/kg至约1g/kg受试者体重，约0.01mg/kg至约100mg/kg患者体重，约0.01mg/kg至约10mg/kg患者体重，例如约0.01mg/kg，约0.02mg/kg，约0.03mg/kg、约0.04mg/kg、约0.05mg/kg、约0.06mg/kg、约0.07mg/kg、约0.08mg/kg、约0.09mg/kg、约0.1mg/kg，约0.2mg/kg、约0.3mg/kg、约0.4mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约0.8mg/kg、约0.9mg/kg，约1mg/kg、约1.1mg/kg、约1.2mg/kg、约1.3mg/kg、约1.4mg/kg、约1.5mg/kg、约1.6mg/kg、约1.7mg/kg，约1.8mg/kg、1.9mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg，约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg体重、约100mg/kg体重、约1g/kg体重、约10g/kg体重、包括其间的所有值和范围。
嵌合蛋白的单独剂量可以以单位剂型(例如片剂或胶囊)施用，每单位剂型包含例如约0.01mg至约100g、约0.01mg至约75g、约0.01mg至约50g、约0.01mg至约25g、约0.01mg至约10g、约0.01mg至约7.5g、约0.01mg至约5g、约0.01mg至约2.5g、约0.01mg至约1g、约0.01mg至约100mg、约0.1mg至约100mg、约0.1mg至约90mg、约0.1mg至约80mg、约0.1mg至约70mg、约0.1mg至约60mg、约0.1mg至约50mg、约0.1mg至约40mg活性成分、约0.1mg至约30mg、约0.1mg至约20mg、约0.1mg至约10mg、约0.1mg至约5mg、约0.1mg至约3mg、约0.1mg至约1mg/单位剂型、或约5mg至约80mg/单位剂型。例如，单位剂型可以是约0.01mg、约0.02mg、约0.03mg、约0.04mg、约0.05mg、约0.06mg、约0.07mg、约0.08mg、约0.09mg、约0.1mg、约0.2mg、约0.3mg、约0.4mg、约0.5mg、约0.6mg、约0.7mg、约0.8mg、约0.9mg、约1mg、约2mg、约3mg、约4mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg、约70mg、约75mg、约80mg、约85mg、约90mg、约95mg、约100mg、约200mg、约500mg、约1g、约2.5g、约5g、约10g、约25g、约50g、约75g、约100g，包括其间的所有数值和范围。
在一个实施方案中，嵌合蛋白以以下量施用：每日约0.01mg至约100g，每日约0.01mg至约75g，每日约0.01mg至约50g，每日约0.01mg至约25g，每日约0.01mg至约10g，每日约0.01mg至约7.5g，每日约0.01mg至约5g，每日约0.01mg至约2.5g，每日约0.01mg至约1g，每日约0.01mg至约100mg，每日约0.1mg至约100mg，每日约0.1mg至约95mg，每日约0.1mg至约90mg，每日约0.1mg至约85mg，每日约0.1mg至约80mg，每日约0.1mg至约75mg，每日约0.1mg至约70mg，每日约0.1mg至约65mg，每日约0.1mg至约60mg，每日约0.1mg至约55mg，每日约0.1mg至约50mg，每日约0.1mg至约45mg，每日约0.1mg至约40mg，每日约0.1mg至约35mg，每日约0.1mg至约30mg，每日约0.1mg至约25mg，每日约0.1mg至约20mg，每日约0.1mg至约15mg，每日约0.1mg至约10mg，每日约0.1mg至约5mg，每日约0.1mg至约3mg，每日约0.1mg至约1mg，或每日约5mg至约80mg。在多个实施方案中，嵌合蛋白以以下日剂量施用：约0.01mg、约0.02mg、约0.03mg、约0.04mg、约0.05mg、约0.06mg、约0.07mg、约0.08mg、约0.09mg、约0.1mg、约0.2mg、约0.3mg、约0.4mg、约0.5mg、约0.6mg、约0.7mg、约0.8mg、约0.9mg、约1mg、约2mg、约3mg、约4mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg、约70mg、约75mg、约80mg、约85mg、约95mg、约100mg、约200mg、约500mg、约1g、约2.5g、约5g、约7.5g、约10g、约25g、约50g、约75g、约100g，包括其间的所有数值和范围。
根据本发明的某些实施方案，包含嵌合蛋白的药物组合物可以例如每天施用一次以上(例如，每天约两次、约三次、约四次、约五次、约六次、约七次、约八次、约九次或约十次)、约每天一次、约每两天一次、约每三天一次、约每周一次、约每两周一次、约每月一次、约每两个月一次、约每三个月一次、约每六个月一次或约每年一次。
联合治疗和额外的治疗剂
在多个实施方案中，本发明的药物组合物与额外的治疗剂联合施用。联合施用可以是同时或相继的。
在一个实施方案中，将额外的治疗剂和本发明的嵌合蛋白同时施用于受试者。本文所用的术语"同时"是指以不超过约60分钟，例如不超过约30分钟、不超过约20分钟、不超过约10分钟、不超过约5分钟或不超过约1分钟的时间间隔施用额外的治疗剂和嵌合蛋白。额外的治疗剂和嵌合蛋白的施用可以通过同时施用单一制剂(例如，包含额外的治疗剂和嵌合蛋白的制剂)或施用单独的制剂(例如，包含额外的治疗剂的第一制剂和包含嵌合蛋白的第二制剂)来进行。
如果施用时间使得额外的治疗剂和嵌合蛋白的药理学活性在时间上重叠，从而发挥联合治疗效果，则联合施用不需要同时施用治疗剂。例如，可以顺序施用额外的治疗剂和嵌合蛋白。本文所用的术语"顺序"是指以大于约60分钟的时间间隔施用额外的治疗剂和嵌合蛋白。例如，连续施用额外的治疗剂和嵌合蛋白之间的时间可以是间隔超过约60分钟、超过约2小时、超过约5小时、超过约10小时、超过约1天、超过约2天、超过约3天、超过约1周、超过约2周或超过约1个月。最佳施用时间将取决于所给予的额外的治疗剂和嵌合蛋白的代谢速率、排泄速率和/或药物动力学活性。可以首先施用额外的治疗剂或嵌合蛋白细胞。
联合施用也不需要通过相同的施用途径将治疗剂施用于受试者。相反，每种治疗剂可以通过任何合适的途径施用，例如，肠胃外或非肠胃外。
在一些实施方案中，本文所述的嵌合蛋白在与另一种治疗剂共同施用时协同作用。在这样的实施方案中，嵌合蛋白和额外的治疗剂可以以低于单一治疗情况下使用所述药剂时所用的剂量施用。
在一些实施方案中，本发明涉及化疗剂作为额外的治疗剂。例如，但不限于，本发明的嵌合蛋白和化疗剂的这种组合可用于治疗癌症，如本文其它地方所述。化疗剂的实例包括，但不限于，烷化剂类，如噻替派(thiotepa)和CYTOXAN环磷酰胺；烷基磺酸酯类，如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶类，如苯佐替派(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美妥替派(meturedopa)和乌瑞替派(uredopa)；乙烯亚胺类和甲基蜜胺类，包括六甲密胺(altretamine)、曲他胺(triethylenemelamine)、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲基蜜胺(trimethylolomelamine)；多聚乙酰类(acetogenins)(例如布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone))；喜树碱(camptothecin)(包括合成类似物拓扑替康(topotecan))；苔藓抑素(bryostatin)；海绵抑素(cally statin)；CC-1065(包括其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物)；念珠藻环肽类(cryptophycins)(例如，念珠藻环肽1和念珠藻环肽8)；海兔抑素(dolastatin)；倍癌霉素(duocarmycin)(包括合成类似物KW-2189和CB1-TM1)；伊斯罗宾(eleutherobin)；水鬼蕉碱(pancratistatin)；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海绵抑素(spongistatin)；氮芥类，如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、胆磷酰胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、异环磷酰胺(ifosfamide)、氮芥(mechlorethamine)、氮芥氧化物盐酸盐(mechlorethamine oxidehydrochloride)、美法仑(melphalan)、新恩比兴(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、乌拉莫司汀(uracil mustard)；亚硝基脲类，如卡莫司汀(carmustine)、氯脲霉素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫斯汀(ranimnustine)；抗生素类，如烯二炔类抗生素(例如刺孢霉素(calicheamicin)，尤其是刺孢霉素γII和刺孢霉素ωII(参见例如Agnew,Chem.Intl.Ed.Engl.,33:183-186(1994))；达内霉素(dynemicin)，包括达内霉素A；双膦酸盐类，如氯屈膦酸盐(clodronate)；埃斯波霉素(esperamicin)；以及新制癌菌素发色团(neocarzinostatin chromophore)和相关色素蛋白烯二炔类抗生素发色团)、阿克拉霉素(aclacinomysin)、放线菌素(actinomycin)、安曲霉素(authramycin)、偶氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素(bleomycin)、放线菌素C(cactinomycin)、卡拉比星(carabicin)、洋红霉素(caminomycin)、嗜癌素(carzinophilin)、色霉素(chromomycinis)、放线菌素D(dactinomycin)、佐柔比星(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、ADRIAMYCIN多柔比星(doxorubicin)(包括吗啉代-多柔比星)、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯啉基-多柔比星和脱氧多柔比星)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素类(mitomycins)如丝裂霉素C、霉芬酸(mycophenolic acid)、诺加霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、泼非霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素(puromycin)、奎那霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑霉素(streptonigrin)、链佐星(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代谢物类，如甲氨蝶呤(methotrexate)和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物类，如迪诺特宁(denopterin)、甲氨蝶呤、蝶罗呤(pteropterin)、曲美沙特(trimetrexate)；嘌呤类似物类，如氟达拉滨(fludarabine)、6-巯基嘌呤、噻咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物类，如环胞苷(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-氮杂尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、双脱氧尿苷(dideoxyuridine)、脱氧氟尿苷(doxifluridine)、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；雄激素类，如卡芦睾酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、环硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾内酯(testolactone)；抗肾上腺药类，如氨鲁米特(minoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂，如亚叶酸(frolinic acid)；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamideglycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；贝斯布西(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依达曲沙(edatraxate)；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；依洛尼塞(elformithine)；依利醋铵(elliptinium acetate)；埃博霉素(epothilone)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟基脲；蘑菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidainine)；类美登素类(maytansinoids)，诸如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocins)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌达醇(mopidanmol)；二胺硝吖啶(nitraerine)；喷司他汀(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙基酰肼；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK多糖复合物(JHS Natural Products,Eugene,Oreg.)；雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西佐喃(sizofuran)；锗螺胺(spirogermanium)；替奴佐酸(tenuazonicacid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2',2"-三氯三乙胺；单端孢霉烯(trichothecenes)(例如T-2毒素、粘液霉素A(verracurin A)、杆孢菌素A(roridin A)和蛇形菌素(anguidine))；乌拉坦(urethan)；长春地辛(vindesine)；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；加西托星(gacytosine)；阿糖胞苷(arabinoside)(“Ara-C”)；环磷酰胺；噻替派；类紫杉醇类(taxoids)，例如TAXOL太平洋紫杉醇(paclitaxel)(Bristol-MyersSquibb Oncology，Princeton，N.J.)、ABRAXANE太平洋紫杉醇的不含聚氧乙烯化蓖麻油(Cremophor)的经白蛋白工程化的纳米粒子制剂(American Pharmaceutical Partners，Schaumberg，111.)以及TAXOTERE多西他赛(doxetaxel)(Rhone-Poulenc Rorer，Antony，France)；苯丁酸氮芥；GEMZAR吉西他滨(gemcitabine)；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物类，如顺铂(cisplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin)和卡铂(carboplatin)；长春碱(vinblastine)；铂；依托泊苷(etoposide)(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱(vincristine)；NAVELBINE.长春瑞滨(vinorelbine)；诺消灵(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；依达曲沙；柔红霉素(daunomycin)；氨基蝶呤(aminopterin)；希罗达(xeloda)；伊班膦酸盐(ibandronate)；伊立替康(irinotecan)(Camptosar、CPT-11)(包括伊立替康与5-FU的治疗方案)和亚叶酸(leucovorin))；拓扑异构酶抑制剂RFS2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视黄素类(retinoids)，如视黄酸(retinoic acid)；卡培他滨(capecitabine)；康普瑞汀(combretastatin)；亚叶酸(LV)；奥沙利铂(oxaliplatin)，包括奥沙利铂治疗方案(FOLFOX)；拉帕替尼(lapatinib)(Tykerb)；PKC-α、Raf、H-Ras、EGFR的抑制剂(例如埃罗替尼(erlotinib)(Tarceva))和VEGF-A的抑制剂，这些抑制剂减少细胞增殖；以及以上任一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物。另外，治疗方法还可以包括使用辐射。另外，治疗方法还可以包括施用光动力疗法。
在一个实施方案中，本发明涉及靶向剪接体的任何试剂，包括剪接体的任何组分，作为癌症治疗中的额外的治疗剂。
在一个实施方案中，本发明涉及在癌症治疗中作为额外的治疗剂的靶向Myc的任何试剂(即抗Myc治疗剂)。
在一些实施方案中，包括但不限于传染病应用，本发明涉及作为额外的治疗剂的抗感染药。在一些实施方案中，所述抗感染药是抗病毒剂，包括但不限于阿巴卡韦(Abacavir)、阿昔洛韦(Acyclovir)、阿德福韦(Adefovir)、安普那韦(Amprenavir)、阿扎那韦(Atazanavir)、西多福韦(Cidofovir)、达芦那韦(Darunavir)、地拉韦啶(Delavirdine)、去羟肌苷(Didanosine)、多可沙诺(Docosanol)、依非韦仑(Efavirenz)、埃替格韦(Elvitegravir)、恩曲他滨(Emtricitabine)、恩福韦地(Enfuvirtide)、依曲韦林(Etravirine)、泛昔洛韦(Famciclovir)和膦甲酸盐(Foscarnet)。在一些实施方案中，抗感染剂是抗细菌剂，包括但不限于头孢菌素类抗生素(头孢胺苄(cephalexin)、头孢呋辛(cefuroxime)、头孢羟胺苄(cefadroxil)、头孢唑林(cefazolin)、头孢噻吩(cephalothin)、头孢克洛(cefaclor)、头孢孟多(cefamandole)、头孢西丁(cefoxitin)、头孢丙烯(cefprozil)和头孢托罗酯(ceftobiprole))；氟喹诺酮类抗生素(fluoroquinoloneantibiotics)(环丙沙星(cipro)、左氟沙星(Levaquin)、氧氟沙星(floxin)、加替沙星(tequin)、莫西沙星(avelox)和诺氟沙星(norflox))；四环素类抗生素(四环素、米诺环素(minocycline)、羟四环素(oxytetracycline)和去氧环素(doxycycline))；青霉素类抗生素(阿莫西林(amoxicillin)、胺苄西林(ampicillin)、青霉素V、双氯西林(dicloxacillin)、羧苄西林(carbenicillin)、万古霉素(vancomycin)和甲氧西林(methicillin))；单酰胺环类抗生素(胺曲南(aztreonam))；以及碳青霉烯类抗生素(厄他培南(ertapenem)、多尼培南(doripenem)、亚胺培南(imipenem)/西司他丁(cilastatin)和美罗培南(meropenem))。在一些实施方案中，抗感染剂包括抗疟药(例如氯喹(chloroquine)、奎宁(quinine)、甲氟喹(mefloquine)、伯胺喹(primaquine)、去氧环素(doxycycline)、蒿甲醚(artemether)/苯芴醇(lumefantrine)、阿托伐醌(atovaquone)/氯胍(proguanil)和磺胺多辛(sulfadoxine)/乙胺嘧啶(pyrimethamine))、甲硝唑(metronidazole)、替硝唑(tinidazole)、伊维菌素(ivermectin)、双羟萘酸噻嘧啶(pyrantel pamoate)和阿苯达唑(albendazole)。
在一些实施方案中，包括但不限于自身免疫应用，额外的治疗剂是免疫抑制剂。在一些实施方案中，免疫抑制剂是抗炎剂，例如甾体抗炎剂或非甾体抗炎剂(NSAID)。类固醇，特别是肾上腺皮质类固醇及其合成类似物，是本领域公知的。可用于本发明的皮质类固醇的实例包括但不限于羟基曲安西龙(hydroxyltriamcinolone)、α-甲基地塞米松(alpha-methyl dexamethasone)、β-甲基地塞米松、二丙酸倍氯米松(beclomethasonedipropionate)、苯甲酸倍他米松(betamethasone benzoate)、二丙酸倍他米松、戊酸倍他米松、戊酸氯倍他索(clobetasol valerate)、地奈德(desonide)、去羟米松(desoxymethasone)、地塞米松(dexamethasone)、二乙酸二氟拉松(diflorasonediacetate)、戊酸二氟可龙(diflucortolone valerate)、氟氢缩松(fluadrenolone)、氟氯奈德(fluclorolone acetonide)、特戊酸氟美松(flumethasone pivalate)、氟轻松(fluosinolone acetonide)、醋酸氟轻松(fluocinonide)、氟可丁酯(flucortinebutylester)、氟可龙(fluocortolone)、醋酸氟泼尼定(fluprednidene/fluprednylidene)、氟氢缩松(flurandrenolone)、哈西奈德(halcinonide)、醋酸氢化可的松(hydrocortisone acetate)、丁酸氢化可的松(hydrocortisone butyrate)、甲泼尼龙(methylprednisolone)、曲安奈德(triamcinolone acetonide)、可的松(cortisone)、可托多松(cortodoxone)、醋酸氟轻松、氟氢可的松(fludrocortisone)、二醋酸二氟拉松(difluorosone diacetate)、丙酮化氟雄诺龙(fluradrenolone acetonide)、甲羟松(medrysone)、安西缩松(amcinafel)、安西非特(amcinafide)、倍他米松和其相应酯、氯泼尼松(chloroprednisone)、氯可托龙(clocortelone)、克西诺龙(clescinolone)、二氯松(dichlorisone)、二氟泼尼酯(difluprednate)、氟氯奈德(flucloronide)、氟尼缩松(flunisolide)、氟米龙(fluoromethalone)、氟培龙(fluperolone)、氟泼尼龙(fluprednisolone)、氢化可的松(hydrocortisone)、甲泼尼松(meprednisone)、帕拉米松(paramethasone)、泼尼松龙(prednisolone)、泼尼松(prednisone)、二丙酸倍他米松。可以用于本发明中的(NSAIDS)包括但不限于水杨酸、乙酰水杨酸、水杨酸甲酯、乙二醇水杨酸酯、水杨酰胺、苯甲基-2,5-二乙酰氧基苯甲酸、布洛芬(ibuprofen)、舒林酸(fulindac)、萘普生(naproxen)、酮洛芬(ketoprofen)、依托芬那酯(etofenamate)、保泰松(phenylbutazone)和吲哚美辛(indomethacin)。在一些实施方案中，免疫抑制剂可以是细胞抑制剂，例如烷化剂类、抗代谢物类(例如硫唑嘌呤、甲氨蝶呤)、细胞毒性抗生素类、抗体类(例如巴利昔单抗(basiliximab)、达克珠单抗(daclizumab)和莫罗单抗(muromonab))、抗免疫亲和素类(anti-immunophilins)(例如环孢素(cyclosporine)、他克莫司(tacrolimus)、西罗莫司(sirolimus))、干扰素类、阿片类(opioid)、TNF结合蛋白、霉酚酸酯类(mycophenolate)以及小生物剂(例如芬戈莫德(fingolimod)、多球壳素(myriocin))。其它抗炎剂描述于例如美国专利号4,537,776中，所述文献的完整内容以引用的方式并入本文。
在一些实施方案中，本发明涉及作为额外的治疗剂用于治疗肥胖的多种药剂。用于治疗肥胖的示例性药剂包括但不限于奥利司他(orlistat)(例如ALL1、XENICAL)、氯卡色林(loracaserin)(例如BELVIQ)、苯丁胺(phentermine)-托吡酯(topiramate)(例如QSYMIA)、西布曲明(sibutramme)(例如REDUCTIL或MERJDIA)、利莫那班(rimonabant)(ACOMPLLA)、艾塞那肽(例如BYETTA)、普兰林肽(pramlintide)(例如SYMLIN)苯丁胺、苄非他明(benzphetamine)、二乙胺苯酮(diethylpropion)、苯甲曲秦(phendimetrazme)、安非他酮(bupropion)和二甲双胍(metformin)。干扰身体吸收食物中的特殊营养的能力的剂在所述额外的药剂中，例如奥利司他(例如ALU、XENICAL)、葡甘露聚醣和瓜耳豆胶。抑制食欲的药剂也在所述额外的药剂中，例如儿茶酚胺类及其衍生物(如芬特明(phenteimine)和其它基于安非他明的药物)、多种抗抑郁剂和情绪稳定剂(例如安非他酮和托吡酯)、减食欲剂(例如迪西卷(dexedrine)、地高辛(digoxin))。增加身体代谢的药剂也在所述额外的药剂中。
在一些实施方案中，其它治疗剂可以选自食欲抑制剂、神经递质再摄取抑制剂、多巴胺能激动剂、血清素能激动剂、GABA能信号传导调节剂、抗惊厥剂、抗抑郁剂、单胺氧化酶抑制剂、P物质(NK1)受体拮抗剂、黑皮质素受体激动剂和拮抗剂、脂肪酶抑制剂、脂肪吸收抑制剂、能量摄取或代谢调控剂、骆驼受体调节剂、用于治疗成瘾的药剂、用于治疗代谢综合征的药剂、过氧化物酶体增殖物激活型受体(PPAR)调节剂；二肽基肽酶4(DPP-4)拮抗剂、用于治疗心血管疾病的药剂、用于治疗甘油三酯水平升高的药剂、用于治疗低HDL的药剂、用于治疗高胆固醇血症的药剂和用于治疗高血压的药剂。一些用于心血管疾病的剂包括他汀类药物(例如洛伐他汀(lovastatin)、阿托伐他汀(atorvastatin)、氟伐他汀(fluvastatin)、瑞舒伐他汀(rosuvastatin)、辛伐他汀(simvastatin)和帕伐他汀(pravastatin))和ω-3药剂(例如LOVAZA、EPANQVA、VASCEPA、酯化ω-3，一般有鱼油、磷虾油、海藻油)。在一些实施方案中，额外的药剂可以选自安非他明、苯并二氮平、磺酰脲、美格替奈(meglitinides)、噻唑烷二酮、双胍、β-阻断剂、XCE抑制剂、利尿剂、硝酸盐、钙离子通道阻断剂、芬特明、西布曲明、洛卡色林、西替利司他(cetilistat)、利莫那班、泰伦那班(taranabant)、托吡酯、加巴喷丁(gabapentin)、丙戊酸(valproate)、维加巴因(vigabatrin)、安非他酮、噻加宾(tiagabine)、舍曲林(sertraline)、费洛克汀(fluoxetine)、曲唑酮(trazodone)、唑尼沙胺(zonisamide)、哌醋甲(methylphenidate)、伐伦克林(varenicline)、那曲酮(naltrexone)、二乙胺苯酮、苯甲曲秦、雷帕格奈德(rcpaglini.de)、那格列奈(nateglinide)、格列美脲(glimepiride)、二甲双胍、吡格列酮(pioglitazone)、罗格列酮(rosiglilazone)和西他列汀(sitagliptin)。
在一些实施方案中，本发明涉及作为额外的治疗剂用于治疗糖尿病的药剂。示例性的抗糖尿病药物包括，但不限于，磺酰脲(例如DYMELOR(醋磺环已脲)、DIABINESE(氯磺丙脲)、ORINASE(甲磺丁脲)和TOLINASE(甲磺氮卓脲)、GLUCOTROL(格列甲嗪)、GLUCOTROL XL(延长释放)、DIABETA(格列本脲)、MICRONASE(格列本脲)、GLYNASE PRESTAB(格列本脲)和AMARYL(格列美脲))；双胍(例如二甲双胍(GLUCOPHAGE、GLUCOPHAGE XR、RIOMET、FORTAMET和GLUMETZA))；噻唑烷二酮(例如ACTOS(吡格列酮)和AVANDIA(罗格列酮)；α-葡萄糖苷酶抑制剂(例如PRECOSE(阿卡波糖)和GLYSET(米格列醇)；美格替奈(例如PRANDIN(瑞格列奈)和STARLIX(那格列奈))；二肽基肽酶IV(DPP-IV)抑制剂(例如JANUVIA(西他列汀)、NESINA(阿格列汀)、ONGLYZA(沙格列汀)和TRADJENTA(利格列汀))；钠-葡萄糖共转运蛋白2(SGLT2)抑制剂(例如INVOKANA(卡格列净))；和组合药丸(例如组合了格列本脲(磺酰脲)和二甲双胍的GLUCOVANCE、组合了格列甲嗪(磺酰脲)和二甲双胍的METAGLIP以及在一个药丸中使用二甲双胍与罗格列酮(AVANDIA)的AVANDAMET、KAZANO(阿格列酮和二甲双胍)、OSENI(阿格列汀加吡格列酮)、METFORMIN口服剂、ACTOS口服剂、BYETTA皮下剂、JANUVIA口服剂、WELCHOL口服剂、JANUMET口服剂、格列甲嗪口服剂、格列美脲口服剂、GLUCOPHAGE口服剂、LANTUS皮下剂、格列本脲口服剂、ONGLYZA口服剂、AMARYl口服剂、LANTUS SOLOSTAR皮下剂、BYDUREON皮下剂、LEVEMIR FLEXPEN皮下剂、ACTOPLUS MET口服剂、GLUMETZA口服剂、TRADJENTA口服剂、溴麦角环肽口服剂、KOMBIGLYZE XR口服剂、INVOKANA口服剂、PRANDIN口服剂、LEVEMIR皮下剂、PARLODEL口服剂、吡格列酮口服剂、NOVOLOG皮下剂、NOVOLOG FLEXPEN皮下剂、VICTOZA 2-PAK皮下剂、HUMALOG皮下剂、STARLIX口服剂、FORTAMET口服剂、GLUCOVANCE口服剂、GLUCOPHAGE XR口服剂、NOVOLOG Mix 70-30FLEXPEN皮下剂、GLYBURIDE-METFORMIN口服剂、阿卡波糖口服剂、SYMLINPEN 60皮下剂、GLUCOTROl XL口服剂、NOVOLIN R注射剂、GLUCOTROL口服剂、DUETACT口服剂、西他列汀口服剂、SYMLINPEN 120皮下剂、HUMALOGKWIKPEN皮下剂、JANUMET XR口服剂、GLIPIZIDE-METFORMIN口服剂、CYCLOSET口服剂、HUMALOG MIX 75-25皮下剂、那格列奈口服剂、HUMALOG Mix 75-25KWIKPEN皮下剂、优泌林70/30皮下剂、PRECOSE口服剂、APIDRA皮下剂、优泌林R注射剂、Jentadueto口服剂、Victoza 3-Pak皮下剂、Novolin 70/30皮下剂、NOVOLIN N皮下剂、地特胰岛素皮下剂、微粒化格列本脲口服剂、GLYNASE口服剂、优泌林N皮下剂、甘精胰岛素皮下剂、RIOMET口服剂、吡格列酮-二甲双胍口服剂、APIDRA SOLOSTAR皮下剂、赖脯胰岛素皮下剂、GLYSET口服剂、优泌林70/30Pen皮下剂、考来维仑口服剂、西他列汀-二甲双胍口服剂、DIABETA口服剂、常规人胰岛素注射剂、优泌林N Pen皮下剂、艾塞那肽皮下剂、HUMALOG Mix 50-50KWIKPEN皮下剂、利拉鲁肽皮下剂、KAZANO口服剂、瑞格列奈口服剂、氯磺丙脲口服剂、门冬胰岛素皮下剂、NOVOLOG Mix 70-30皮下剂、HUMALOG Mix 50-50皮下剂、沙格列汀口服剂、ACTOPLUSMet XR口服剂、米格列醇口服剂、NPH重组人胰岛素皮下剂、NPH胰岛素和常规人胰岛素皮下剂、甲磺氮卓脲口服剂、米非司酮口服剂、门冬胰岛素鱼精蛋白门冬胰岛素皮下剂、瑞格列奈-二甲双胍口服剂、沙格列汀-二甲双胍口服剂、利格列汀-二甲双胍口服剂、NESINA口服剂、OSENI口服剂、甲磺丁脲口服剂、赖脯胰岛素赖脯鱼精蛋白皮下剂、普兰林肽皮下剂、谷赖胰岛素皮下剂、吡格列酮-格列美脲口服剂、PRANDIMET口服剂、NOVOLOG PenFill皮下剂、利格列汀口服剂、艾塞那肽微球体皮下剂、KORLYM口服剂、阿格列汀口服剂、阿格列汀-吡格列酮口服剂、阿格列汀-二甲双胍口服剂、卡格列净口服剂、赖脯胰岛素(HUMALOG)；门冬胰岛素(NOVOLOG)；谷赖胰岛素(APIDRA)；Regular(NOVOLIN R或优泌林R)；NPH(NOVOLIN N或优泌林N)；甘精胰岛素(LANTUS)；地特胰岛素(LEVEMIR)；优泌林或NOVOLIN 70/30；和NOVOLOG Mix 70/30HUMALOG Mix 75/25或50/50。
在一些实施方案中，本发明涉及与输血的联合治疗。例如，本发明的组合物可以补充输血。在一些实施方案中，本发明涉及与铁补充剂的联合治疗。
在一些实施方案中，本发明涉及与一种或多种基于EPO的药剂的联合治疗。例如，本发明的组合物可以用作其它基于EPO的药剂的佐剂。在一些实施方案中，本发明的组合物用作其它基于EPO的药剂的维持疗法。其它基于EPO的药剂包括下列：依泊汀α，包括但不限于，DARBEPOETIN(ARANESP)、EPOCEPT(LUPIN PHARMA)、NANOKINE(NANOGENPHARMACEUTICAL)、EPOFIT(INTAS PHARMA)、EPOGEN(AMGEN)、EPOGIN、EPREX、(JANSSEN-CILAG)、BINOCRIT7(SANDOZ)、PROCRIT；依泊汀β，包括但不限于NEORECORMON(HOFFMANN–LAROCHE)、RECORMON、甲氧基聚乙二醇--依泊汀β(MIRCERA,ROCHE)；依泊汀δ，包括但不限于DYNEPO(促红细胞生成蛋白,SHIRE PLC)；依泊汀ω,包括但不限于EPOMAX；依泊汀ζ，包括但不限于SILAPO(STADA)和RETACRIT(HOSPIRA)及其他EPO，包括但不限于EPOCEPT(LUPINPHARMACEUTICALS)、EPOTRUST(PANACEA BIOTEC LTD)、ERYPRO SAFE(BIOCON LTD.)、REPOITIN(SERUM INSTITUTE OF INDIA LIMITED)、VINTOR(EMCURE PHARMACEUTICALS)、EPOFIT(INTAS PHARMA)、ERYKINE(INTAS BIOPHARMACEUTICA)、WEPOX(WOCKHARDTBIOTECH)、ESPOGEN(LG LIFE SCIENCES)、RELIPOIETIN(RELIANCE LIFE SCIENCES)、SHANPOIETIN(SHANTHA BIOTECHNICS LTD)、ZYROP(CADILA HEALTHCARE LTD.)、EPIAO(RHUEPO)(SHENYANG SUNSHINE PHARMACEUTICAL CO.LTD)、CINNAPOIETIN(CINNAGEN)。
在一些实施方案中，本发明涉及与一种或多种免疫调节剂的联合治疗，例如但不限于调节免疫检查点的药剂。在多个实施方案中，免疫调节剂靶向PD-1、PD-L1和PD-L2中的一种或多种。在多个实施方案中，免疫调节剂是PD-1抑制剂。在多个实施方案中，免疫调节剂是对PD-1、PD-L1和PD-L2中的一种或多种特异的抗体。例如，在一些实施方案中，免疫调节剂是抗体，例如但不限于，纳武单抗(ONO-4538/BMS-936558,MDX1106,OPDIVO,BRISTOLMYERS SQUIBB)、帕博利珠单抗(KEYTRUDA,MERCK)、pidilizumab(CT-011,CURE TECH)、MK-3475(MERCK)、BMS 936559(BRISTOL MYERS SQUIBB)、MPDL328OA(ROCHE)。在一些实施方案中，免疫调节剂靶向CD137或CD137L中的一种或多种。在多个实施方案中，免疫调节剂是对CD137或CD137L中的一种或多种具有特异性的抗体。例如，在一些实施方案中，免疫调节剂是抗体，例如但不限于乌瑞鲁单抗(Urelumab)(也称为BMS-663513和抗4-1BB抗体)。在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白与乌瑞鲁单抗(任选地与纳武单抗、利丽单抗(Lirilumab)和乌瑞鲁单抗中的一种或多种)组合用于治疗实体瘤和/或B细胞非霍奇金氏淋巴瘤和/或头颈癌和/或多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，免疫调节剂是靶向CTLA-4、AP2M1、CD80、CD86、SHP-2和PPP2R5A中的一种或多种的试剂。在多个实施方案中，免疫调节剂是对CTLA-4、AP2M1、CD80、CD86、SHP-2和PPP2R5A中的一种或多种特异的抗体。例如，在一些实施方案中，免疫调节剂是抗体，例如但不限于，依匹单抗(MDX-010，MDX-101，Yervoy，BMS)和/或替西木单抗(tremelimumab)(Pfizer)。在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白与依匹单抗(任选地与巴维昔单抗)组合用于治疗黑素瘤、前列腺癌和肺癌中的一种或多种。在多个实施方案中，免疫调节剂靶向CD20。在多个实施方案中，免疫调节剂是特异于CD20的抗体。例如，在一些实施方案中，免疫调节剂是抗体，例如但不限于奥法木单抗(GENMAB)、奥比妥珠单抗(obinutuzumab)(GAZYVA)、AME-133v(APPLIED MOLECULAR EVOLUTION)、奥瑞珠单抗(Ocrelizumab)(GENENTECH)、TRU-015(TRUBION/EMERGENT)、维妥珠单抗(IMMU-106)。
在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白在与嵌合抗原受体(CAR)T细胞疗法联合使用时发挥协同作用。在一个示例性的实施方案中，当与CAR T细胞疗法联合用于治疗肿瘤或癌症时，嵌合蛋白发挥协同作用。在一个实施方案中，当与CAR T细胞疗法联合用于治疗基于血液的肿瘤时，嵌合蛋白剂发挥协同作用。在一个实施方案中，当与CAR T细胞疗法联合用于治疗实体瘤时，嵌合蛋白发挥协同作用。例如，使用嵌合蛋白和CAR T细胞可以发挥协同作用以减少或消除肿瘤或癌症，或减缓肿瘤或癌症的生长和/或进展和/或转移。在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白诱导CAR T细胞分裂。在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白诱导CAR T细胞增殖。在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白防止CAR T细胞的无反应性。
在多个实施方案中，CAR T细胞疗法包括靶向抗原(例如肿瘤抗原)的CAR T细胞，所述抗原例如但不限于碳酸酐酶IX(CAIX)、5T4、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD38、CD47、CS1、CD138、Lewis-Y、L1-CAM、MUC16、ROR-1、IL13Rα2、gp100、前列腺干细胞抗原(PSCA)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、B细胞成熟抗原(BCMA)、人乳头状瘤病毒16E6型(HPV-16E6)、CD171、叶酸受体α(FR-α)、GD2、人表皮生长因子受体2(HER2)、间皮素、EGFRvIII、成纤维细胞活化蛋白(FAP)、癌胚抗原(CEA)和血管内皮生长因子受体2(VEGF-R2)，以及本领域公知的其它肿瘤抗原。其它示例性肿瘤抗原包括，但不限于MART-1/Melan-A、gp100、二肽基肽酶IV(DPPIV)、腺苷脱氨酶结合蛋白(ADAbp)、亲环蛋白b、结肠直肠相关抗原(CRC)-0017-1A/GA733、癌胚抗原(CEA)及其免疫原性表位CAP-1和CAP-2、etv6、aml1、前列腺特异性抗原(PSA)及其免疫原性表位PSA-1、PSA-2和PSA-3、T细胞受体/CD3-ζ链、MAGE-家族的肿瘤抗原(例如，MAGE-A1、MAGE-A2、MAGE-A3、MAGE-A4、MAGE-A5、MAGE-A6、MAGE-A7、MAGE-A8、MAGE-A9、MAGE-A10、MAGE-A11、MAGE-A12、MAGE-Xp2(MAGE-B2)、MAGE-Xp3(MAGE-B3)、MAGE-Xp4(MAGE-B4)、MAGE-C1、MAGE-C2、MAGE-C3、MAGE-C4、MAGE-C5)、GAGE-家族的肿瘤抗原(例如GAGE-1、GAGE-2、GAGE-3、GAGE-4、GAGE-5、GAGE-6、GAGE-7、GAGE-8，GAGE-9)、BAGE、RAGE、LAGE-1、NAG、GnT-V、MUM-1、CDK4、酪氨酸酶、p53、MUC家族、HER2/neu、p21ras、RCAS1、α-胎蛋白、E-钙黏着蛋白、α-连环蛋白、β-连环蛋白和γ-连环蛋白、p120ctn、gp100 Pmel117、PRAME、NY-ESO-1、cdc27、腺瘤性结肠息肉病蛋白(APC)、fodrin、连接蛋白37、Ig-独特型、p15、gp75、GM2和GD2神经节苷脂、病毒产物如人乳头瘤病毒蛋白、Smad家族肿瘤抗原、lmp-1、NA、EBV编码的核抗原(EBNA)-1、脑糖原磷酸化酶、SSX-1、SSX-2(HOM-MEL-40)、SSX-1、SSX-4、SSX-5、SCP-1CT-7、c-erbB-2、CD19、CD37、CD56、CD70、CD74、CD138、AGS16、MUC1、GPNMB、Ep-CAM、PD-L1和PD-L2。
CAR T细胞治疗的例子包括但不限于JCAR014(Juno Therapeutics)、JCAR015(Juno Therapeutics)、JCAR017(Juno Therapeutics)、JCAR018(Juno Therapeutics)、JCAR020(Juno Therapeutics)、JCAR023(Juno Therapeutics)、JCAR024(JunoTherapeutics)、CTL019(Novartis)、KTE-C19(Kite Pharma)、BPX-401(BellicumPharmaceuticals)、BPX-501(Bellicum Pharmaceuticals)、BPX-601(BellicumPharmaceuticals)、bb2121(Blubird Bio)、CD-19睡眠美容细胞(Ziopharm Oncology)、UCART19(Cellectis)、UCART123(Cellectis)、UCART38(Cellectis)、UCART1(Cellectis)、OXB-302(Oxford BioMedica、MB-101(Mustang Bio)和Innovative CellularTherapeutics开发的CAR T细胞。
在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白与一种或多种多发性硬化症(MS)治疗剂联合用于治疗MS的方法，所述MS治疗剂包括，但不限于3-干扰素、醋酸格拉默、T-干扰素、IFN-β-2(美国专利公开号2002/0025304)、螺锗(spirogermaniums)(例如N-(3-二甲基氨基丙基)-2-氮杂-8,8-二甲基-8-锗螺[4:5]癸烷、N-(3-二甲基氨基丙基)-2-氮杂-8,8-二乙基-8-锗螺[4:5]癸烷、N-(3-二甲基氨基丙基)-2-氮杂-8,8-二丙基-8-锗螺[4:5]癸烷和N-(3-二甲基氨基丙基)-2-氮杂-8,8-二丁基-8-甲锗螺烷[4:5]癸烷)、维生素D类似物(例如，1,25(OH)2D3(参见，例如，美国专利号5,716,946))、前列腺素(例如，拉坦前列素、溴莫尼定、PGE1、PGE2和PGE3，参见例如美国专利公开号2002/0004525)、四环素和衍生物(例如米诺环素和强力霉素，参见例如美国专利公开号20020022608)、VLA-4结合抗体(参见，例如，美国专利公开号2009/0202527)、促肾上腺皮质激素、皮质类固醇、强的松、甲泼尼龙、2-氯脱氧腺苷、米托蒽醌、磺胺柳氮烷、氨甲喋呤、硫唑嘌呤、环磷酰胺、环孢菌素、富马酸盐、抗CD20抗体(例如利妥昔单抗)和盐酸替扎尼定。
在一些实施方案中，嵌合蛋白与一种或多种治疗MS的一种或多种症状或副作用的治疗剂联合使用。这样的药剂包括但不限于金刚烷胺(amantadine)、巴氯芬(baclofen)、罂粟碱(papaverine)、美克洛嗪(meclizine)、羟嗪(hydroxyzine)、磺胺甲恶唑(sulfamethoxazole)、环丙沙星(ciprofloxacin)、多库酯钠(docusate)、培莫林(pemoline)、丹曲林(dantrolene)、去氨加压素(desmopressin)、地塞米松(dexamethasone)、托特罗定tolterodine()、苯妥英(phenyloin)、奥昔布宁(oxybutynin)、比沙可啶(bisacodyl)、文拉法辛(venlafaxine)、阿米替林(amitriptyline)、乌洛托品(methenamine)、氯硝西泮(clonazepam)、异烟肼(isoniazid)、伐地那非(vardenafil)、呋喃妥因(nitrofurantoin)、欧车前亲水性胶质素(psylliumhydrophilic mucilloid)、阿普他多(alprostadil)、加巴喷丁(gabapentin)、去甲替林(nortriptyline)、帕罗西汀(paroxetine)、溴丙胺太林(propantheline bromide)、莫达非尼(modafinil)、氟西汀(fluoxetine)、非那吡啶phenazopyridine()、甲基泼尼松龙(methylprednisolone)、卡马西平(carbamazepine)、丙咪嗪(imipramine)、地西泮(diazepam)、西地那非(sildenafil)、丁氨苯丙酮(bupropion)和舍曲林(sertraline)。
在一些实施方案中，嵌合蛋白与本文所述的一种或多种疾病修饰疗法(DMT)(例如表A的药剂)联合用于治疗多发性硬化的方法中。在一些实施方案中，与使用一种或多种本文所述的DMT(例如下表A中所列的药剂)而不使用一种或多种所公开的结合剂相比，本发明提供了改善的治疗效果。在一个实施方案中，嵌合蛋白和一种或多种DMT的组合产生协同治疗效果。
示例性的疾病改善疗法
MS疾病进展在疾病进展的最早阶段可能是最强并且是最具破坏性的。因此，与许多偿付政策和医生实践(例如，考虑到成本和副作用减轻)相反，对于患者的长期疾病状态来说，开始用最强烈的DMT治疗(例如，所谓的二线治疗)可能是最有益的。在一些实施方案中，用嵌合蛋白的方案与二线疗法的组合治疗患者。这种组合用于降低一种或多种二线疗法的副作用。在一些实施方案中，所述组合用于降低一种或多种二线治疗的施用频率或剂量。例如，在组合的情况下，上述表中所列的药剂的剂量可减少约50％、或约40％、或约30％、或约25％，和/或给药频率可减少到通常的一半、或通常的三分之一，或可从例如每日减少到隔日或每周、隔日减少到每周或每两周、每周减少到每两周或每月等。因此，在一些实施方案中，嵌合蛋白通过允许更方便的治疗方案而增加患者的依从性。此外，一些DMT具有建议的终生剂量限制，例如米托蒽醌，终生累积剂量应严格限制在140mg/m2，或2-3年的治疗。在一些实施方案中，通过允许使用该DMT的较低或较少频率给药，补充嵌合蛋白保护了患者对米托蒽醌的接近。
在一些实施方案中，患者是未接受过一种或多种DMT治疗的初次(naive)患者，并且嵌合蛋白用于缓冲二线治疗的副作用。因此，初次患者能够在疾病开始时受益于二线治疗的长期益处。在一些实施方案中，嵌合蛋白用作在使用二线治疗之前的进入治疗。例如，可以施用嵌合蛋白约3个月的初始治疗期以稳定疾病，然后可以将患者转变为二线药物的维持疗法。
一般认为，与接受过并且可能一种或多种DMT失败的患者相比，初次患者更可能对治疗有响应。在一些实施方案中，嵌合蛋白用于已经接受并且可能一种或多种DMT失败的患者。例如，在一些实施方案中，嵌合蛋白增加了在接受过并且可能一种或多种DMT失败的患者中的治疗效果，并且可以允许这些患者像初次患者一样应答。
在一些实施方案中，患者已经接受或正在接受用一种或多种DMT的治疗，并且反应不好。例如，患者可能对一种或多种DMT不反应或反应不佳。在一些实施方案中，患者对下述一种或多种不反应或反应不佳：特立氟胺(AUBAGIO(GENZYME))；干扰素β-1a(AVONEX(BIOGEN IDEC))、干扰素β-1b(BETASERON(BAYER HEALTHCAE PHARMACEUTICALS,INC.))、醋酸格拉默(COPAXONE(TEVA NEUROSCIENCE))、干扰素β-1b(EXTAVIA(NOVARTISPHARMACEUTICALS CORP.))、芬戈莫德(GILENYA(NOVARTIS PHARMACEUTICALS CORP.))、阿仑单抗(LERADMTA(GENZYME))、米托蒽醌(NOVANTRONE(EMD SERONO))、聚乙二醇化干扰素β-1a(PLEGRIDY(BIOGEN IDEC)、干扰素β-1a(REBIF(EMD SERONO,INC.)、富马酸二甲酯(BG-12)(TECFIDERA(BIOGEN IDEC)和那他珠单抗(TYSABRI(BIOGEN IDEC))。在一些实施方案中，一种或多种公开的结合剂导致患者中一种或多种DMT的治疗益处，并因而降低或消除对DMT的无反应性。例如，这为患者治疗备用了更高剂量或频率的一种或多种DMT。
在患有更具攻击性疾病的患者中，一种方法是诱导治疗模型，其中首先给予具有强效力但强安全性关注的疗法，随后是维持疗法。这种模型的实例可以包括用阿仑单抗进行的初始治疗，然后用IFN-β、GA或BG-12。在一些实施方案中，一种或多种公开的结合剂用于防止需要切换治疗以进行维持。在一些实施方案中，一种或多种公开的结合剂用于对一种或多种DMT的维持治疗，包括二线治疗。在一些实施方案中，一种或多种公开的结合剂用做诱导中的第一疗法，随后是另一DMT作为维持疗法，例如一线疗法。
在一些实施方案中，可以施用一种或多种公开的结合剂约3个月的初始治疗期以稳定疾病，然后可以将患者转变为一线药剂的维持疗法。
在多个实施方案中，一种或多种公开的结合剂用于降低DMT的一种或多种副作用，包括但不限于本文公开的任何试剂。例如，一种或多种公开的结合剂可以用于允许节省一种或多种DMT的剂量并因此导致较少副作用的方案中。例如，在一些实施方案中，一种或多种公开的结合剂可以降低AUBAGIO或相关试剂的一种或多种副作用，其可以包括毛发稀疏、腹泻、流感、恶心、异常肝测试和手或脚的异常麻木或刺痛(感觉异常)、白细胞水平，其可以增加感染的风险；血压升高；和严重的肝损伤。在一些实施方案中，一种或多种公开的结合剂可以减少降低AVONEX或相关试剂的一种或多种副作用，其包括注射后的流感样症状、抑郁、轻度贫血、肝脏异常、变态反应和心脏问题。在一些实施方案中，一种或多种公开的结合剂可以降低BETASERON或相关试剂的一种或多种副作用，所述副作用包括注射后的流感样症状、注射部位反应、过敏反应、抑郁、肝异常和低白血细胞计数。在一些实施方案中，所公开的一种或多种结合剂可以降低COPAXONE或相关试剂的一种或多种副作用，其包括注射部位反应、血管舒张(血管扩张)；胸痛；注射后立即产生的反应包括焦虑、胸痛、心悸、呼吸短促和潮红。在一些实施方案中，一种或多种公开的结合剂可以降低EXTAVIA或相关试剂的一种或多种副作用，其包括注射后的流感样症状、注射部位反应、过敏反应、抑郁、肝异常和低白细胞计数。在一些实施方案中，一种或多种公开的结合剂可以降低GILENYA或相关试剂的一种或多种副作用，器包括头痛、流感、腹泻、背痛、肝酶升高、咳嗽、首次给药后心率减慢、感染和眼肿胀。在一些实施方案中，一种或多种公开的结合剂可以降低LEMTRADA或相关试剂的一种或多种副作用，所述副作用包括皮疹、头痛、发热、鼻充血、恶心、尿路感染、疲劳、失眠、上呼吸道感染、荨麻疹、瘙痒、甲状腺病症、真菌感染、关节和四肢和背部疼痛、腹泻、呕吐、潮红和输注反应(包括恶心、荨麻疹、瘙痒、失眠、寒战、潮红、疲劳、呼吸短促、味觉改变、消化不良、眩晕、疼痛)。在一些实施方案中，一种或多种公开的结合剂可以减少NOVANTRONE或相关试剂的一种或多种副作用，其包括施用后24小时的蓝绿色尿；感染、骨髓抑制(疲劳、瘀伤、低血细胞计数)、恶心、头发稀少、膀胱感染、口疮和严重的肝和心脏损伤。在一些实施方案中，一种或多种公开的结合剂可以减少PLEGRIDY或相关试剂的一种或多种副作用，其包括注射后的流感样症状、注射部位反应、抑郁、轻度贫血、肝脏异常、变态反应和心脏问题。在一些实施方案中，一种或多种公开的结合剂可以减少REBIF或相关试剂的一种或多种副作用，所述副作用包括注射后的流感样症状、注射部位反应、肝脏异常、抑郁、过敏反应和低红细胞或白细胞计数。在一些实施方案中，一种或多种公开的结合剂可以减少TECFIDERA或相关试剂的一种或多种副作用，所述副作用包括潮红(皮肤上的热感或瘙痒和脸红)、胃肠问题(恶心、腹泻、腹痛)、皮疹、尿中有蛋白质、升高的肝酶；以及血液淋巴细胞(白细胞)计数的减少。在一些实施方案中，一种或多种公开的结合剂可以减少TYSABRI或相关试剂的一种或多种副作用，所述副作用包括头痛、疲劳、尿道感染、抑郁、呼吸道感染、关节痛、胃部不适、腹部不适、腹泻、阴道炎、臂或腿的疼痛、皮疹、输注2小时内的过敏性或超敏反应(头晕、发热、皮疹、瘙痒、恶心、潮红、低血压、呼吸困难、胸痛)。
在一些实施方案中，本发明涉及与一种或多种在WO 2013/10779、WO 2015/00736、WO 2015/007520、WO 2015/007542和WO 2015/007903中描述的嵌合试剂的联合治疗，其全部内容通过引用整体并入本文。
在一些实施方案中，本文所述的嵌合蛋白包括修饰的衍生物，即通过任何类型的分子共价连接到成分(composition)上，使得共价连接不阻碍成分的活性。例如，但不作为限制，衍生物包括通过以下方法修饰的成分：糖基化、脂质化、乙酰化、聚乙二醇化、磷酸化、酰胺化、通过已知的保护/封闭基团的衍生化、蛋白水解裂解、与细胞配体或其它蛋白的连接等。许多化学修饰中的任何一种都可以通过已知的技术进行，包括但不限于衣霉素的特异性化学裂解、乙酰化、甲酰化、代谢合成等。
在其它实施方案中，本文所述的嵌合蛋白还包含细胞毒性剂，在示例性实施方案中，所述细胞毒性剂包含毒素、化疗剂、放射性同位素和引起细胞凋亡或细胞死亡的试剂。这些试剂可以与本文所述的组合物缀合。
因此，本文所述的嵌合蛋白可以在翻译后修饰，以添加效应部分，例如化学连接子，可检测部分，例如荧光染料、酶、底物、生物发光材料、放射性材料和化学发光部分，或功能部分，例如抗生蛋白链菌素、抗生物素蛋白、生物素、细胞毒素、细胞毒剂和放射性材料。
示例性的细胞毒性剂包括，但不限于，甲氨蝶呤、氨基蝶呤、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、达卡巴嗪；烷化剂类，如氮芥、噻替派、苯丁酸氮芥、美法仑、卡莫司汀(BSNU)、丝裂霉素C、洛莫司汀(CCNU)、1-甲基亚硝基脲、环磷酰胺、氮芥、白消安、二溴甘露醇、链佐星(streptozotocin)、丝裂霉素C、顺-二氯二胺铂(II)(DDP)、顺铂和卡铂(伯尔定(paraplatin))；蒽环霉素类包括佐柔比星(先前的道诺霉素(daunomycin))、多柔比星(阿霉素(adriamycin))、地托比星(detorubicin)、卡米诺霉素(carminomycin)、伊达比星、表柔比星、米托蒽醌和比生群；抗生素类包括放线菌素D(dactinomycin/actinomycin D)、博来霉素、刺孢霉素、光辉霉素(mithramycin)和安曲霉素(anthramycin，AMC)；以及抗有丝分裂剂，如长春生物碱类(vinca alkaloids)、长春新碱(vincristine)和长春花碱(vinblastine)。其它细胞毒性剂包括太平洋紫杉醇(紫杉醇)、蓖麻毒素、假单胞菌外毒素、吉西他滨、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴乙锭、依米丁(emetine)、依托泊苷、替尼泊苷、秋水仙素(colchicin)、二羟基蒽二酮、1-脱氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因(procaine)、丁卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普萘洛尔(propranolol)、嘌呤霉素(puromycin)、丙卡巴肼、羟基脲、天冬酰胺酶、皮质类固醇、米托坦(O,P'-(DDD))、干扰素，以及这些细胞毒性剂的混合物。
其它细胞毒性剂包括但不限于，化疗剂，如卡铂、顺铂、太平洋紫杉醇、吉西他滨、刺孢霉素、多柔比星、5-氟尿嘧啶、丝裂霉素C、放线菌素D、环磷酰胺、长春新碱、博来霉素、VEGF拮抗剂、EGFR拮抗剂、铂类(platins)、紫杉醇类、伊立替康、5-氟尿嘧啶、吉西他滨、亚叶酸、类固醇类、环磷酰胺、美法仑、长春生物碱类(例如长春碱、长春新碱、长春地辛和长春瑞滨)、莫司汀类(mustines)、酪氨酸激酶抑制剂、放射疗法、性激素拮抗剂、选择性雄激素受体调节剂、选择性雌激素受体调节剂、PDGF拮抗剂、TNF拮抗剂、IL-1拮抗剂、白介素(例如IL-12或IL-2)、IL-12R拮抗剂、毒素缀合的单克隆抗体、肿瘤抗原特异性单克隆抗体、爱必妥(Erbitux)、安维汀(Avastin)、帕妥珠单抗(Pertuzumab)、抗CD20抗体、美罗华(Rituxan)、奥瑞珠单抗、奥法木单抗、DXL625、或其任何组合。来自植物和细菌的有毒酶，如蓖麻毒素、白喉毒素和假单胞菌毒素可以与这些治疗剂(例如抗体)缀合以产生细胞类型特异性杀伤试剂(Youle等,Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 77:5483(1980)；Gilliland等,Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 77:4539(1980)；Krolick等,Proc.Nat'lAcad.Sci.USA 77:5419(1980))。
其它细胞毒性剂包括如Goldenberg在美国专利号6,653,104中所描述的细胞毒性核糖核酸酶。本发明的实施方案还涉及放射免疫缀合物，其中在使用或不使用复合物形成剂的情况下，发射α或β粒子的放射性核种稳定偶合至嵌合蛋白。此类放射性核种包括β-发射体，如磷-32、钪-47、铜-67、镓-67、钇-88、钇-90、碘-125、碘-131、钐-153、镥-177、铼-186或铼-188；和α-发射体，如砹-211、铅-212、铋-212、铋-213或锕-225。
示例性的可检测部分还包括但不限于辣根过氧化酶、乙酰胆碱酯酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶和荧光素酶。其它说明性荧光材料包括但不限于罗丹明(rhodamine)、荧光素、异硫氰酸荧光素、伞形酮、二氯三嗪基胺、藻红蛋白和丹磺酰氯。其它示例性化学发光部分包括但不限于鲁米诺(luminol)。其它示例性生物发光材料包括但不限于荧光素和水母素(aequorin)。其它示例性放射性材料包括但不限于碘-125、碳-14、硫-35、氚和磷-32。
治疗方法
本文所描述的方法和组合物可应用于治疗多种疾病和病症，包括但不限于癌症、感染、免疫病症、贫血、自身免疫疾病、心血管疾病、创伤愈合、缺血相关疾病、神经退化性疾病、代谢疾病以及众多其它疾病和病症。
另外，任何本发明的药剂都可以用于治疗多种疾病和病症，或制造用于治疗多种疾病和病症的药物，包括但不限于癌症、感染、免疫病症、炎症性疾病或病况，以及自身免疫疾病。
在一些实施方案中，本发明涉及一种或多种以下疾病的治疗或患有一种或多种以下疾病的患者：慢性肉芽肿病、骨硬化病、特发性肺纤维化、弗瑞德赖希共济失调、特应性皮炎、查加斯病、癌症、心力衰竭、自身免疫性疾病、镰状细胞病、地中海贫血、失血、输血反应、糖尿病、维生素B12缺乏、胶原血管疾病、舒瓦克曼综合征、血小板减少性紫癜、乳糜泻、内分泌缺陷状态如甲状腺功能减退症或艾迪生病、自身免疫性疾病如克罗恩氏病、全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎或青少年型类风湿性关节炎、溃疡性结肠炎免疫病症如嗜酸性筋膜炎、低免疫球蛋白血症或胸腺瘤/胸腺癌、移植物抗宿主病、白血症前期、非血液综合征(例如唐氏综合征、Dubowwitz、Seckel)、费尔蒂综合征(Felty syndrome)、溶血性尿毒症综合征、脊髓发育不良综合征、夜间阵发性血红蛋白尿症、骨髓纤维瘤、全血细胞减少症、纯红细胞再生障碍、舍亨二氏紫癜(Schoenlein-Henoch purpura)、疟疾、蛋白质缺乏、月经过多、系统性硬化、肝硬化、低代谢状态和充血性心力衰竭。
在一些实施方案中，本发明涉及一种或多种以下疾病的治疗或患有一种或多种以下疾病的患者：慢性肉芽肿病、骨硬化病、特发性肺纤维化、弗瑞德赖希共济失调、特应性皮炎、查加斯病、分枝杆菌感染、癌症、硬皮病、肝炎、丙型肝炎、败血性休克和类风湿性关节炎。
在一些实施方案中，本发明涉及治疗患癌患者的治疗或患癌患者。如本文所使用，癌症是指可能干扰身体器官和系统的正常功能的任何不受控制的细胞生长，并且包括原发性和转移性肿瘤两种。原发性肿瘤或从其原始位置迁移并且种在重要器官的癌症可以通过受影响器官的功能减退而最终导致受试者死亡。转移是由于癌细胞从原发性肿瘤播散至身体其它部分而在远离原发性肿瘤位置出现的一个癌细胞或一组癌细胞。转移最终可能导致受试者死亡。举例来说，癌症可以包括良性和恶性癌症、息肉、增生以及休眠肿瘤或微转移。
可以治疗的示例性癌症包括但不限于上皮细胞癌(carcinoma)(例如多种亚型，包括例如腺癌、基底细胞癌、鳞状细胞癌和移行细胞癌)、肉瘤(包括例如骨肉瘤和软组织肉瘤)、白血病(包括例如急性骨髓性、急性成淋巴细胞性、慢性骨髓性、慢性淋巴细胞性和毛细胞性白血病)、淋巴瘤和骨髓瘤(包括例如霍奇金氏和非霍奇金氏淋巴瘤，轻链、非分泌性、MGUS和浆细胞瘤)和中枢神经系统癌(包括例如脑癌(例如神经胶质瘤(例如星形细胞瘤、少突神经胶质瘤和室管膜瘤))、脑膜瘤、垂体腺瘤和神经瘤，以及脊髓肿瘤(例如脑膜瘤和纤维神经瘤))。
可以治疗的示例性癌症包括但不限于基底细胞癌、胆道癌；膀胱癌；骨癌；脑和中枢神经系统癌症；乳腺癌；腹膜癌；宫颈癌；绒毛膜癌；结肠和直肠癌；结缔组织癌；消化系统癌症；子宫内膜癌；食道癌；眼癌；头颈癌；胃癌(包括胃肠癌)；成胶质细胞瘤；肝癌；肝细胞癌；上皮内赘瘤；肾脏癌或肾癌；喉癌；白血病；肝脏癌症；肺癌(例如小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞状细胞癌)；黑素瘤；骨髓瘤；成神经细胞瘤；口腔癌(唇、舌、口和咽)；卵巢癌；胰腺癌；前列腺癌；成视网膜细胞瘤；横纹肌肉瘤；直肠癌；呼吸系统癌症；唾液腺癌；肉瘤(例如卡波西肉瘤)；皮肤癌；鳞状细胞癌；胃癌；睾丸癌；甲状腺癌；子宫癌或子宫内膜癌；泌尿系统癌症；外阴癌；包括霍奇金氏淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤在内的淋巴瘤，以及B细胞淋巴瘤(包括低级/滤泡非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)；小淋巴细胞(SL)NHL；中级/滤泡NHL；中级弥漫性NHL；高级成免疫细胞NHL；高级成淋巴细胞NHL；高级小非核裂细胞NHL；巨大肿块NHL；套细胞淋巴瘤；AIDS相关淋巴瘤；和瓦氏巨球蛋白血症；慢性淋巴细胞性白血病(CLL)；急性成淋巴细胞性白血病(ALL)；毛细胞白血病；慢性成髓细胞性白血病；以及其它癌和肉瘤；和移植后淋巴组织增生性病症(PTLD)，以及与斑痣性错构瘤相关的异常血管增生、浮肿(例如，与脑肿瘤相关的浮肿)和梅格斯氏综合征。
在多个实施方案中，本发明涉及治疗Myc驱动的癌症，即过表达Myc的癌细胞。在一些实施方案中，癌细胞过表达c-Myc、N-Myc和/或L-Myc中的任何一种。在一些实施方案中，本发明的方法使癌细胞对用本文所述的任何一种抗癌治疗剂治疗敏感。在一些实施方案中，本发明的方法降低癌细胞的转录活性。
在一些实施方案中，本发明涉及微生物感染和/或慢性感染的治疗，或者患有微生物感染和/或慢性感染的患者。示例性感染包括但不限于查加斯病、HIV/AIDS、结核病、骨髓炎、乙型肝炎、丙型肝炎、爱波斯坦-巴尔病毒(Epstein-Barr virus)或细小病毒、T细胞性白血病病毒、细菌过度生长综合征、真菌或寄生虫感染。
在多个实施方案中，本发明的组合物用来治疗或预防一种或多种炎症性疾病或病况，如炎症、急性炎症、慢性炎症、呼吸道疾病、动脉粥样硬化、再狭窄、哮喘、过敏性鼻炎、特异性皮炎、脓毒性休克、类风湿性关节炎、炎症性肠病、炎症性盆腔病、疼痛、眼部炎症性疾病、脂泻病、莱氏综合征(Leigh Syndrome)、甘油激酶缺乏症、家族性嗜酸性粒细胞增多症(FE)、常染色体隐性痉挛性共济失调、喉部炎症性疾病；结核病、慢性胆囊炎、支气管扩张、硅肺病和其它尘肺病。
在多个实施方案中，本发明的组合物用来治疗或预防一种或多种自身免疫疾病或病况，如多发性硬化、糖尿病、狼疮、脂泻病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、古兰-巴雷综合征(Guillain-Barre syndrome)、硬皮病、古德帕斯彻氏综合征(Goodpasture's syndrome)、韦格纳氏肉芽肿病(Wegener's granulomatosis)、自身免疫性癫痫、拉斯马森氏脑炎(Rasmussen's encephalitis)、原发性胆汁性硬化、硬化性胆管炎、自身免疫性肝炎、艾迪生氏病(Addison's disease)、桥本氏甲状腺炎(Hashimoto's thyroiditis)、纤维肌痛症、美尼尔氏综合征(Menier's syndrome)；移植排斥反应(例如防止同种异体移植排斥)、恶性贫血、类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、皮肌炎、修格连氏综合征(Sjogren's syndrome)、红斑狼疮、多发性硬化、重症肌无力、瑞特氏综合征(Reiter's syndrome)、格雷夫氏病(Grave's disease)和其它自身免疫疾病。
在多个实施方案中，本发明的组合物用来治疗、控制或预防心血管疾病，如影响心脏和血管的疾病或病况，包括但不限于冠心病(CHD)、脑血管疾病(CVD)、主动脉瓣狭窄、末梢血管病、动脉粥样硬化、动脉硬化、心肌梗塞(心脏病发作)、脑血管疾病(中风)、短暂性缺血发作(TIA)、心绞痛(稳定的和不稳定的)、心房纤维性颤动、心律不齐、血管疾病和/或充血性心力衰竭。
在多个实施方案中，使用本发明的组合物来治疗或预防一种或多种代谢相关病症。在多个实施方案中，本发明可用于治疗、控制或预防糖尿病，包括1型糖尿病和2型糖尿病以及与肥胖相关的糖尿病。本发明的组合物和方法可用于治疗或预防糖尿病相关病症，包括但不限于糖尿病性肾病、高血糖症、糖耐量受损、胰岛素抗性、肥胖、脂质异常、血脂异常、高脂血症、高甘油三酯血症、高胆固醇血症、低HDL水平、高LDL水平、动脉粥样硬化及其后遗症、血管再狭窄、肠易激综合征、炎症性肠病(包括克罗恩氏病和溃疡性结肠炎)、其它炎性病况、胰腺炎、腹部肥胖、神经退化性疾病、视网膜病、赘生性病况、脂肪细胞肿瘤、脂肪细胞癌如脂肪肉瘤、前列腺癌和其它癌症(包括胃癌、乳腺癌、膀胱癌和结肠癌)、血管生成、阿尔兹海默病、牛皮癣、高血压、代谢综合征(例如，人存在以下病症中的三种或更多种：腹部肥胖、高甘油三酯血症、低HDL胆固醇、高血压和高空腹血浆葡萄糖)、卵巢雄激素过多症(多囊卵巢综合征)和胰岛素抗性是一个组成部分的其它病症，如睡眠呼吸暂停。本发明的组合物和方法可用于治疗、控制或预防肥胖(包括遗传性或环境性)和肥胖相关的病症。本文的肥胖相关病症与肥胖相关、由肥胖引起或者是肥胖的结果。肥胖相关病症的实例包括肥胖、糖尿病、过量进食、暴饮暴食和贪食症、高血压、血浆胰岛素浓度升高和胰岛素抗性、血脂异常、高脂血症、子宫内膜癌、乳腺癌、前列腺癌、肾癌和结肠癌、骨关节炎、阻塞性睡眠呼吸暂停、胆结石、心脏病、心律异常和心律不齐、心肌梗塞、充血性心力衰竭、冠心病、猝死、中风、多囊卵巢病、颅咽管瘤、普拉德-威利综合征(Prader-Willi Syndrome)、弗勒利希氏综合征(Frohlich's syndrome)、GH缺乏型受试者、正常变异性身材矮小、特纳氏综合征(Turner's syndrome)和表现出代谢活性降低或静息时能量消耗量(占总不含脂肪物质的百分比)降低的其它病理学病况，例如患有急性成淋巴细胞性白血病的儿童。肥胖相关病症的其它实例有代谢综合征、胰岛素抗性综合征、生殖激素异常、性功能障碍和生殖功能障碍如生育能力受损、不育症、男性性腺功能减退和女性多毛症、与母体肥胖相关的胎儿缺陷、胃肠动力障碍如肥胖相关的胃食管回流、呼吸障碍如肥胖性肺换气不足综合征(匹克威克综合征(Pickwickian syndrome))、呼吸急促、心血管病症、炎症如全身性血管炎症、动脉硬化、高胆固醇血症、下背部疼痛、胆囊疾病、高尿酸血症、痛风和肾癌，以及麻木风险增高。本发明的组合物和方法还可用于治疗阿尔兹海默病。
在多个实施方案中，本发明的组合物用来治疗或预防一种或多种呼吸道疾病，如特发性肺纤维化(IPF)、哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、支气管扩张、过敏性鼻炎、窦炎、肺血管收缩、炎症、过敏、呼吸受阻、呼吸窘迫综合征、囊性纤维化、肺高压、肺血管收缩、肺气肿、汉坦病毒肺综合征(Hantavirus pulmonary syndrome，HPS)、吕弗勒氏综合征(Loeffler'ssyndrome)、古德帕斯彻氏综合征(Goodpasture's syndrome)、胸膜炎、肺炎、肺水肿、肺纤维化、结节病、与呼吸道合胞病毒感染相关的并发症和其它呼吸道疾病。
在一些实施方案中，使用本发明来治疗或预防一种或多种神经退化性疾病。示例性神经退化性疾病包括但不限于弗里德希共济失调(Friedreich’s Ataxia)、多发性硬化(包括但不限于良性多发性硬化、复发-缓解型多发性硬化(RRMS)、继发性进行性多发性硬化(SPMS)、进行性复发性多发性硬化(PRMS)和原发性进行性多发性硬化(PPMS))、阿尔兹海默病(包括但不限于早期发作型阿尔兹海默病、晚期发作型阿尔兹海默病、家族性阿尔兹海默病(FAD))、帕金森氏病和帕金森氏综合征(包括但不限于特发性帕金森氏病、血管性帕金森氏综合征、药物诱发型帕金森氏综合征、路易体痴呆、遗传性帕金森氏病、青少年帕金森氏病)、亨廷顿氏病(Huntington'sdisease)、肌萎缩性侧索硬化(ALS，包括但不限于偶发性ALS、家族性ALS、西太平洋ALS、青少年ALS、平山病(Hiramaya Disease))。
在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白得以用于治疗创伤，例如非愈合性创伤、溃疡、烧伤或冻伤、慢性或急性创伤、开放性或闭合性创伤、内伤或外伤(示例性外伤有穿透性和非穿透性创伤)。在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白得以用于治疗缺血，作为非限制性实例，与急性冠状动脉综合征相关的缺血、急性肺损伤(ALI)、急性心肌梗塞(AMI)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、动脉阻塞性疾病、动脉硬化、关节软骨缺陷、无菌性全身性炎症、动脉粥样硬化性心血管疾病、自身免疫疾病、骨折、骨折、脑水肿、脑灌注不足、伯格氏病(Buerger's disease)、烧伤、癌症、心血管疾病、软骨损伤、脑梗塞、脑缺血、脑中风、脑血管疾病、化疗诱导的神经病、慢性感染、慢性肠系膜缺血、跛行、充血性心力衰竭、结缔组织损伤、挫伤、冠状动脉病(CAD)、严重型肢体缺血(CLI)、克罗恩氏病、深静脉血栓形成、深部创伤、溃疡愈合延迟、创伤愈合延迟、糖尿病(I型和II型)、糖尿病性神经病变、糖尿病诱导的缺血、弥漫性血管内凝血(DIC)、栓塞性脑缺血、冻伤、移植物抗宿主病、遗传性出血性毛细管扩张缺血性血管病、高氧性损伤、缺氧、炎症、炎症性肠病、炎性疾病、肌腱损伤、间歇性跛行、肠缺血、缺血、缺血性脑病、缺血性心脏病、缺血性末梢血管病、胎盘缺血、缺血性肾病、缺血性血管病、缺血性再灌注损伤、撕裂伤、左主冠状动脉疾病、肢体缺血、下肢缺血、心肌梗塞、心肌缺血、器官缺血、骨关节炎、骨质疏松症、骨肉瘤、帕金森氏病、末梢动脉病(PAD)、末梢动脉病、末梢缺血、末梢神经病、末梢血管病、癌前、肺水肿、肺栓塞、重塑障碍、肾缺血、视网膜缺血、视网膜病、败血症、皮肤溃疡、实体器官移植、脊髓损伤、中风、软骨下骨囊肿、血栓形成、血栓形成性脑缺血、组织缺血、短暂性缺血性发作(TIA)、外伤性脑损伤、溃疡性结肠炎、肾血管病、血管炎性病况、希佩尔-林道综合征(von Hippel-Lindausyndrome)或者组织或器官创伤。
在多个实施方案中，本发明涉及治疗一种或多种贫血，包括由慢性肾病(例如由透析)和/或抗癌剂(例如化疗和/或HIV治疗(例如齐多夫定(Zidovudine)(INN)或叠氮胸苷(AZT))、炎症性肠病(例如克罗恩氏病和溃疡性结肠炎)引起的贫血，与炎症性病况(例如关节炎、狼疮、IBD)相关的贫血，与糖尿病、精神分裂症、脑型疟相关的贫血，再生障碍性贫血和由癌症疗法(例如化疗和/或放射)导致的脊髓发育不良和多种骨髓发育不良综合征病(例如镰状细胞性贫血、血红蛋白SC病、血红蛋白C病、α地中海贫血和β地中海贫血、早产后新生儿贫血和相当的病况)。
在一些实施方案中，本发明涉及治疗贫血或患有贫血的患者，贫血即红细胞中发现的红细胞数目和/或血红蛋白量低于正常值的病况。在多个实施方案中，贫血可以是急性的或慢性的。举例来说，本发明的贫血包括但不限于缺铁性贫血、肾贫血、慢性疾病/炎症贫血、恶性贫血如大红细胞性胃液缺乏性贫血、青少年恶性贫血和先天性恶性贫血、癌症相关性贫血、抗癌相关性贫血(例如化疗相关性贫血、放射疗法相关性贫血)、单纯性红血球发育不良、伴随过量胚细胞的难治性贫血、再生障碍性贫血、X连锁铁粒幼细胞性贫血(siderobalsic anemia)、溶血性贫血、镰状细胞性贫血、由ESA产生受损引起的贫血、脊髓发育不良综合征、低色性贫血、小红细胞性贫血、铁粒幼细胞性贫血、自身免疫性溶血性贫血、库利氏贫血(Cooley's anemia)、地中海贫血、戴-布二氏贫血(Diamond Blackfananemia)、范科尼氏贫血(Fanconi's anemia)和药物诱导的免疫性溶血性贫血。贫血可以导致严重的症状，包括缺氧、慢性疲劳、注意力不集中、皮肤苍白、低血压、眩晕和心力衰竭。
在一些实施方案中，本发明涉及治疗由慢性肾衰竭引起的贫血。在一些实施方案中，本发明涉及治疗由使用一种或多种肾替代疗法，包括透析、血液透析、腹膜透析、血液过滤、血液透析过滤和肾移植引起的贫血。
在一些实施方案中，本发明涉及治疗没有进行透析的慢性肾病患者的贫血。举例来说，本发明涉及处在第1阶段CKD或第2阶段CKD或第3阶段CKD或第4阶段CKD或第5阶段CKD的患者。在一些实施方案中，本发明的患者是第4阶段CKD或第5阶段CKD。在一些实施方案中，本发明的患者已经进行了肾脏移植。在一些实施方案中，本发明涉及治疗患有急性肾损伤(AKI)的患者的贫血。
在一些实施方案中，贫血是化疗诱导的。举例来说，化疗可以是任何骨髓抑制性化疗。在一些实施方案中，化疗是来那度胺、沙利度胺、地塞米松、阿霉素(Adriamycin)和Doxil中的一种或多种。在一些实施方案中，化疗是一种或多种基于铂的药物，包括顺铂(例如PLATINOL)和卡铂(例如PARAPLATIN)。在一些实施方案中，化疗是本文描述的化疗剂中的任一种。在一些实施方案中，化疗是Groopman等,J Natl Cancer Inst(1999)91(19):1616-1634中描述的任何药剂，所述文献的内容以引用的方式并入本文。在一些实施方案中，本发明的组合物和方法用于治疗晚期阶段癌症患者(例如第IV阶段或第III阶段或第II阶段癌症)的化疗相关性贫血。在一些实施方案中，本发明的组合物和方法用于治疗接受剂量密集性化疗或其它侵袭性化疗方案的癌症患者的化疗相关性贫血。
在一些实施方案中，本发明涉及治疗患有一种或多种基于血液的癌症，如白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤的患者的贫血。此类癌症可以直接影响骨髓。另外，本发明涉及已经扩散至骨或骨髓的转移性癌症。在一些实施方案中，本发明涉及治疗进行放射疗法的患者的贫血。此类放射疗法可能损伤骨髓，从而降低其制造红细胞的能力。在其它实施方案中，本发明涉及治疗铁、维生素B12和叶酸中有一种或多种减少或缺乏的患者的贫血。在其它实施方案中，本发明涉及治疗失血过多(包括但不限于手术后或者由造成内部出血的肿瘤导致)的患者的贫血。在其它实施方案中，本发明涉及治疗慢性病贫血患者的贫血。
在一些实施方案中，本发明的方法和组合物刺激红细胞产生。在一些实施方案中，本发明的方法和组合物刺激骨髓中的定向红细胞祖细胞的分裂和分化。
本发明的某些实施方案尤其可用于治疗癌症患者的化疗诱导的贫血。在一些实施方案中，本发明的方法和组合物允许在癌症患者结束化疗后继续施用所述嵌合蛋白。在一些实施方案中，本发明的方法和组合物允许以相对于非癌症患者没有减少的剂量治疗癌症患者。在一些实施方案中，本发明的方法和组合物允许治疗正在接受化疗并且被认为可治愈的癌症患者。在多个实施方案中，所述癌症患者存在血栓史、近期手术、长期卧床休养或活动受限和用化疗剂进行治疗中的一项或多项。
试剂盒
本发明还提供了用于施用本文所描述的任何药剂(例如与或未与多种额外的治疗剂一起施用的嵌合蛋白)的试剂盒。该试剂盒是包括至少一种本文所描述的创造性药物组合物在内的材料或组分的组合体。因此，在一些实施方案中，该试剂盒含有至少一种本文所描述的药物组合物。
配置在试剂盒中的组分的确切性质取决于其预定目的。在一个实施方案中，该试剂盒被配置用于治疗人受试者的目的。
在该试剂盒中可以包括使用说明书。使用说明书典型地包括有形表示，其描述了使用该试剂盒的组分实现所期望的结果(如治疗癌症时)将要采用的技术。任选地，该试剂盒还含有本领域技术人员容易了解的其它有用组分，如稀释剂、缓冲剂、药学上可接受的载体、注射器、导管、敷涂器、吸移工具或测量工具、包扎材料或其它有用的附件。
装配在试剂盒中的材料和组分可以提供给从业人员，以保持其可操作性和效用的任何便利并且适合的方式储存。举例来说，这些组分可以在室温、冷藏温度或冷冻温度下提供。这些组分典型地包含在合适的包装材料中。在多个实施方案中，包装材料是由众所周知的方法构造，优选地以提供无菌、无污染的环境。包装材料可以具有指示试剂盒和/或其组分的内含物和/或目标的外部标签。
定义
如本文所使用，“一个/一种(a/an)”或“所述(the)”可以意指一个或多于一个。
除非特别指出或者根据上下文明显看出，如本文所使用的术语“或者”理解为包括且涵盖了“或者”和“和”两者。
此外，术语“约”当与引用的数值指示结合使用时意指，所引用的数值指示加或减所述引用的数值指示的至多10％，例如(加或减)所示值的10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％或0.01％。举例来说，语言“约50”覆盖45到55的范围。
“有效量”当与医学用途结合使用时是有效提供所关注的疾病的发病率的可测量治疗、预防或降低的量。
如本文所使用，如果活性和/或效果的读出在药剂或刺激物存在下相对于不存在此类调节降低了显著量，如至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约97％、至少约98％或更多、多达并且包括至少约100％，那么某性质“降低”。如本领域普通技术人员所理解，在一些实施方案中，活性降低并且一些下游读出将降低但其它可以增加。
相反地，如果活性和/或效果的读出在药剂或刺激物存在下相对于不存在此类药剂或刺激物增加了显著量，例如至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约97％、至少约98％或更多、多达并且包括至少约100％或更多、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约50倍、至少约100倍，那么活性“增加”。
如本文中所提及，除非另外规定，否则全部组成百分比都以总组合物的重量计。如本文所使用，词语“包括”和其变化形式旨在是非限制性的，使得在列表中对项目的列举不应排除也可以用于这项技术的组合物和方法中的其它类似项目。类似地，术语“可以(can/may)”和其变化形式意在是非限制性的，使得一个实施方案可以包含某些要素或特征的列举不排除本发明技术的不含有那些要素或特征的其它实施方案。
尽管开放性的术语“包含”作为术语如包括、含有或具有的同义词在本文中用以描述和要求本发明，但本发明或其实施方案可以可选地使用替代性术语如“由……组成”或“基本上由……组成”加以描述。
如本文所使用，词语“优选的”和“优选地”是指所述技术的在某些情况下提供某些益处的实施方案。然而，其它实施方案在相同或其它情况下也可以是优选的。此外，列举一个或多个优选实施方案不意指其它实施方案是无用的，并且不打算将其它实施方案从所述技术的范围中排除。
用于实现治疗效果所需要的本文所述的组合物的量可以出于特定目的根据常规程序凭经验确定。一般来说，对于出于治疗目的而施用治疗剂来说，治疗剂是以药学有效剂量给予。“药学有效量”、“药学有效剂量”、“治疗有效量”或“有效量”是指足以产生所期望的生理效果的量或能够实现所期望的结果、特别是用于治疗病症或疾病的量。如本文所使用，有效量将包括足以例如延迟病症或疾病的症状的发展、改变病症或疾病的症状的过程(例如，减缓疾病的症状的进展)、减少或消除病症或疾病的一种或多种症状或表现形式，以及逆转病症或疾病的症状的量。治疗益处还包括中断或减缓潜在疾病或病症的进展，无关于是否实现了改善。
有效量、毒性和治疗功效可以通过标准药物程序在细胞培养物或实验动物中测定，例如测定LD50(致死约50％群体的剂量)和ED50(在约50％群体中具有治疗有效性的剂量)。剂量可以取决于所用剂型和所用施用途径而变化。毒性与治疗效果之间的剂量比率是治疗指数并且可以表示为比率LD50/ED50。在一些实施方案中，展现较大治疗指数的组合物和方法是优选的。治疗有效剂量最初可以由体外测试(包括例如细胞培养物测定)加以估算。此外，剂量可以在动物模型中配制以实现包括如在细胞培养物中或在适当动物模型中测定的IC50的循环血浆浓度范围。所描述的组合物在血浆中的含量可以例如通过高效液相色谱法加以测量。任何特定剂量的效果都可以通过合适的生物测定来监控。剂量可以由医师确定并且根据需要调节以适应观察到的治疗效果。
在某些实施方案中，效果将引起至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约50％、至少约70％或至少约90％的可定量变化。在一些实施方案中，效果将引起约10％、约20％、约30％、约50％、约70％或甚至约90％或更大的可定量变化。治疗益处还包括中断或减缓潜在疾病或病症的进展，而无论是否实现了改善。
如本文所使用，“治疗方法”同样适用于组合物用于治疗本文所描述的疾病或病症的用途和/或组合物用于制造用以治疗本文所描述的疾病或病症的药物的一种和/或多种用途。通过以下非限制性实施例进一步说明本发明。
实施例
术语"AcTaferon"在本文中偶尔用于指基于干扰素的嵌合体。
在以下实施例中，除非另有说明，否则IFN的突变是相对于人IFN-α2。
Q124R突变代表减弱的人IFNα2突变体，其可在鼠模型中进行体内测试。具体地，Q124R是适用于小鼠的人IFN突变(即，它是在小鼠中起作用的人突变IFN)。参见Nat.Comm.2014；5:3016.doi:10.1038/ncomms4016，其全部内容在此引入作为参考。
实施例1.针对鼠SIRP1α的VHH结合SIRP1α并中和SIRP1α/CD47相互作用。
用鼠SIRP1α表达质粒瞬时转染HEK293T细胞，并在补充10％FBS的DMEM培养基中于37℃维持48小时。对细胞进行分离，用PBS洗涤，并用所示浓度的纯化的His-标记的VHH在补充有1％FBS的PBS中处理1小时。用PBS洗涤样品，并与偶联有Alexa488的抗-His抗体(RnD系统)在补充有1％FBS的PBS中孵育1小时。在FACSCalibur分析仪(BD Biosciences)上测量样品。
如图1A所示，在基于FACS的mSIRPA结合测定法中对表达鼠SIRP1α的细胞测试抗鼠SIRP1αVHH的系列稀释液。绘制荧光强度的几何平均值。抗鼠SIRP1αVHH特异性结合鼠SIRP1α(图1B)。
还检查了抗鼠SIRP1αVHH是否中和与CD47的相互作用(图1B)。
用鼠SIRP1α表达质粒瞬时转染HEK293T细胞，并在37℃下接种在含补充有指定浓度的1个抗鼠SIRP1αVHH的DMEM培养基的96孔板中1小时。接着，使用含有由偶联有SEAP(分泌的碱性磷酸酶)的鼠CD47(N-末端158个氨基酸)组成的融合蛋白的条件化培养基在37℃下处理细胞2小时。温育后，用PBS+0.05％Tween-20洗涤细胞4次，并根据制造商的说明书(ThermoFisher Scientific)使用PhosphaLight测定测量磷酸酶活性。
如图1B所示，在鼠CD47-鼠SIRPα结合测定中测试了抗鼠SIRP1αVHH的系列稀释液。一式三份测量的平均值-/+标准偏差绘制在图1B中。抗鼠SIRP1αVHH以剂量依赖性方式抑制CD47结合。数据证明抗鼠SIRP1αVHH中和了SIRP1α-CD47相互作用。
实施例2.SIRP1α双特异性嵌合体体内抗肿瘤作用
在B16模型中用抗小鼠Sirp1αVHH/人IFN Q124R嵌合体进行小鼠体内研究。
靶向SIRP1α的嵌合体(hIFNα2Q124R通过20xGGS-连接子偶联到对小鼠SIRP1α特异的N-末端中和VHH)在pHen6载体中构建，并且在大肠杆菌中进行His-标记的SIRP1a-嵌合体的大规模生产。培养细菌直到稳定期(OD600为0.7-0.8)，然后加入IPTG(Bioscientific)以激活LacZ启动子。培养过夜后收集细胞上清液。周质级分中的蛋白质通过使用蔗糖溶液的渗透压休克而释放，并在载有Kobalt离子(Clontech，Takara Biotechnology)的HiTrapSepharose树脂上通过固定化金属离子层析(IMAC)而纯化。结合蛋白后，用0.5％EMPIGEN(Calbiochem，Millipore)、0.5％CHAPS(Sigma-Aldrich)和PBS洗涤柱。咪唑(Merck)用于洗脱，并使用PD-10凝胶过滤柱(GE Healthcare)除去。用280nm处的吸光度确定蛋白质浓度，并通过SDS-PAGE评价纯度。使用LimulusAmebocyte Lysate(LAL)QCL-1000(Lonza)定量LPS水平。如果仍然存在，则使用Endotoxin Removal Resin(Thermo Scientific)去除LPS。如前所述(Nat.Comm.2014；5:3016.doi:10.1038/ncomms4016)，使用小鼠荧光素酶报道细胞系LL171通过对WHO国际小鼠IFNa标准Ga02-901-511的功能性测定，评价所有产物的生物学活性。
将小鼠保持在12/12小时光/暗周期的温度控制环境中的无病原体的条件下，随意接受食物和水。用30G胰岛素注射器，在50μl悬浮液中，在短暂镇静的小鼠(使用4％异氟烷)的剃毛的侧腹上，用5.106个B16-mCD20克隆细胞(用含有mCD20表达盒的质粒稳定转染的B16B16细胞)接种8周龄的雌性C57BL/6J小鼠(Charles River Laboratories，Saint-Germain Sur1'Arbresle，法国)。
肿瘤治疗在病灶周围(p.l.)进行，其在肿瘤边缘皮下给予，在肿瘤接种后第7天开始。小鼠(n＝5)在第7、8、9、10、11、14、15和16天接受SIRP1a-嵌合体处理。作为对照，用100μl PBS(n＝4)处理小鼠。每次处理给予5,500IU嵌合体，相当于35μg蛋白质(1.6mg/kg)。最后一次肿瘤治疗后一天，从尾静脉收集血液于EDTA包被的微空孔管(Sarstedt)中，并在Hemavet 950FS(Drew Scientific，Waterbury，USA)全血计数器中分析。WBC、淋巴细胞、嗜中性粒细胞和单核细胞以K/μl表示，rbc以M/μl表示，血红蛋白以g/dl表示，血细胞比容以％表示；血小板以K/μl表示，平均血小板体积以fL表示。
如图2A-B所示，与PBS对照(顶部曲线)相比，利用抗小鼠Sirp1αVHH/人IFN Q124R嵌合体(底部曲线)实现了显著的肿瘤生长抑制。此外，Sirp1αVHH/人IFN Q124R嵌合体显示是安全的，如通过多种基于血细胞的参数(白细胞计数("wbc")、淋巴细胞计数("ly")、嗜中性粒细胞计数("ne")、单核细胞计数("mo")、红细胞计数("rbc")、血红蛋白("hb")；血细胞比容("hct")、血小板("plt")和平均血小板体积("mpv"))评估的。重要的是，抗小鼠Sirp1αVHH/人IFN Q124R嵌合体和PBS在这些参数上几乎没有显示出差异。野生型干扰素已知在体内不能被很好地耐受。
实施例3.SIRP1α双特异性嵌合体
研究了抗小鼠Sirp1αVHH/抗小鼠PD-L1 VHH/人IFN Q124R双特异性嵌合体。具体地，进行FACS分析以定量小鼠PD-L1阳性B16细胞系中的STAT1磷酸化。
在37℃下，在补充有10％FBS的DMEM培养基中，用Sirp1α双特异性嵌合体刺激B16细胞15分钟。刺激后，通过在37℃下加入1体积Fix Buffer I(BD Biosciences)固定细胞10分钟，并通过在冰上在2体积Perm IIIBuffer I(BD Biosciences)中再悬浮而透化30分钟。样品用抗STAT1 pY701抗体(BD Biosciences)在4℃染色20分钟，用FACSCalibur(BDBiosciences)和CellQuest Pro版本4.0.2软件(BD Biosciences)分析。
如图3所示，B16细胞用100ng/ml的抗小鼠Sirp1αVHH/抗小鼠PD-L1VHH/人IFNQ124R双特异性嵌合体和Bcll10 VHH-人Q124R IFN嵌合体刺激，或在37℃下保持未刺激15分钟。在固定和透化后，细胞针对磷酸化STAT1染色并在FACS中分析。数据清楚地表明，与非靶向(Bcll10 VHH)嵌合体相比，PD-L1靶向显著增加了双特异性嵌合体的STAT1磷酸化。
实施例4：SIRP1α双特异性嵌合体
在这个实施例中，构建和表征了包含突变的人IFNα2和靶向人SIRP1α的重组仅重链抗体(VHH)的嵌合蛋白。
通过在FACS中对CD20阳性和CD20阴性外周血单核细胞(PBMC)中STAT1磷酸化进行定量，来检测上述嵌合蛋白。
嵌合蛋白的产生、生产和纯化
为了产生基于突变IFNα2的嵌合蛋白，编码野生型人IFNα2的核酸序列通过柔性20*Gly-Gly-Ser柔性连接子与靶向人SIRP1α的VHH的序列融合。所得核酸构建体中的野生型人IFNα2经突变具有下列突变之一：R33A、R144A、R144S、R144T、R144Y、R144L、R144I、A145G、A145H、A145Y、A145K、A145D、M148A、R149A和L153A。仅具有野生型IFNα2或与靶向人SIRP1α的VHH融合的野生型IFNα2的核酸构建体用作对照。
将上述公开的核酸构建体插入pHEN6C载体中用于细菌表达。用1mM IPTG诱导蛋白质表达过夜，使细胞沉淀，并使用TES(0.2M Tris pH8.0，0.5mM EDTA，0.5M蔗糖)和TES/4缓冲液制备周质提取物。根据制造商的指导使用TALON金属亲和树脂从提取物中纯化蛋白质，并使用PD10柱(GE Healthcare)从样品中除去咪唑。
PBMC中的STAT1磷酸化
使用Lymphoprep(StemCell Technologies)利用密度梯度离心分离来自健康供体的血沉棕黄层的PBMC。细胞用FACS缓冲液(2％FBS，1mM EDTA，在PBS中)洗涤两次，并在4℃用抗人CD20 FITC(SinoBiologicals)染色20分钟。洗涤两次后，细胞用野生型IFNα2、野生型IFNα2/SIRP1α嵌合蛋白或上述公开的突变IFNα2/SIRP1α嵌合蛋白之一的系列稀释液在37℃刺激15分钟。固定后(10分钟，37℃，Fix Buffer I；BD Biosciences)，透化(30分钟，在冰上，Perm IIIBuffer I；BD Biosciences)并洗涤，细胞用抗STAT1 pY701 Ab(BDBiosciences)染色。用FACSCalibur(BD Biosciences)采集样品，并用FlowJo 10.2版软件(LLC)分析。
结果
预见到CD20阳性和CD20阴性细胞对单独的野生型人IFNα2的敏感性相当。还预见到与CD20阴性细胞相比，野生型人IFNα2与靶向SIRP1α的VHH的融合将导致CD20阳性细胞中STAT1磷酸化显著增加，即ImmunoKine效应。
预见到具有突变IFNα2的嵌合蛋白在CD20阴性细胞中即使有活性也很小。进一步预见到，当CD20抗原在PBMC上表达时，具有突变的IFNα2的嵌合蛋白的活性丧失将得到大幅恢复。
实施例5.SIRP1α双特异性嵌合体体内抗肿瘤作用
在B16模型中用这些实施例的抗小鼠SIRP1αVHH/突变的人IFNα2嵌合蛋白进行小鼠体内研究。
在pHen6载体中构建编码SIRP1αVHH/突变的人IFNα2嵌合蛋白的核酸构建体，所述嵌合蛋白包含通过20xGGS-连接子偶联至对小鼠SIRP1α特异的N-末端中和VHH的突变的人IFNα2。所述人IFNα2中的突变选自R33A、R144A、R144S、R144T、R144Y、R144L、R144I、A145G、A145H、A145Y、A145K、A145D、M148A、R149A和L153A。在大肠杆菌中进行His-标记的SIRP1αVHH/突变的人IFNα2嵌合蛋白的大规模生产。培养细菌直到稳定期(OD600为0.7-0.8)，然后加入IPTG(BioScientific)以激活LacZ启动子。过夜培养后收集细胞上清液。周质级分中的蛋白质通过使用蔗糖溶液的渗压休克而释放，并在载有Kobalt离子的HiTrap Sepharose树脂(Clontech，Takara Biotechnology)上通过固定化金属离子层析(IMAC)而纯化。结合蛋白后，用0.5％EMPIGEN(Calbiochem，Millipore)、0.5％CHAPS(Sigma-Aldrich)和PBS洗涤柱。使用咪唑(Merck)洗脱，并使用PD-10凝胶过滤柱(GE Healthcare)除去。使用280nm处的吸光度确定蛋白质浓度，并通过SDS-PAGE评价纯度。LPS水平使用Limulus AmebocyteLysate(LAL)QCL-1000(Lonza)定量。如果仍然存在LPS，则使用Endotoxin Removal Resin(Thermo Scientific)去除。如之前所述(Nat.Comm.2014；5:3016.doi:10.1038/ncomms4016)，使用小鼠荧光素酶报道细胞系LL171通过针对WHO国际小鼠IFNα标准Ga02-901-511的功能性测定，评估所有产物的生物活性。
将小鼠保持在12/12小时的光/暗循环的温度控制环境中的无病原体条件下，随意接受食物和水。用30G胰岛素注射器，在50μl悬浮液中，在短暂镇静的小鼠(使用4％异氟烷)的剃毛侧腹上，用5.106个B16-mCD20克隆细胞(用含有mCD20表达盒的质粒稳定转染的B16B16细胞)接种8周龄的雌性C57BL/6J小鼠(Charles River Laboratories，Saint-Germain Sur1'Arbresle，法国)。
肿瘤治疗在病灶周围(p.l.)进行，其在肿瘤边缘皮下给予，在肿瘤接种后第7天开始。小鼠(n＝5)在第7、8、9、10、11、14、15和16天接受SIRP1α-嵌合体蛋白质处理。作为对照，用100μl PBS处理小鼠(n＝4)。每次处理给予经处理的小鼠5,500IU嵌合蛋白，相当于35μg蛋白质(1.6mg/kg)。最后一次肿瘤治疗后一天，从尾静脉收集血液于EDTA包被的微空管(Sarstedt)中，并在Hemavet950FS(Drew Scientific，Waterbury，USA)全血计数器中分析。WBC、淋巴细胞、嗜中性粒细胞和单核细胞以K/μl表示，rbc以M/μl表示，血红蛋白以g/dl表示，血细胞比容以％表示；血小板以K/μl表示，平均血小板体积以fL表示。
预见到与PBS对照相比，在用抗小鼠SIRP1αVHH/突变的人IFNα2嵌合蛋白处理的小鼠中看到肿瘤生长的显著抑制。还预见到SIRP1αVHH/突变的人IFNα嵌合体蛋白显示是安全的，如通过多种基于血细胞的参数(白细胞计数(wbc")、淋巴细胞计数("ly")、嗜中性粒细胞计数("ne")、单核细胞计数("mo")、红血细胞计数("rbc")、血红蛋白("hb")；血球密度("hct")、血小板("plt")和平均血小板体积("mpv"))评估的。进一步预见到，抗小鼠SIRP1αVHH/突变的人IFNα2嵌合蛋白和PBS在这些参数中几乎没有显示出差异。野生型干扰素已知在体内不能被很好地耐受。
等效物
尽管已经结合本发明的具体实施方案描述了本发明，但应理解，本发明能够进一步修改，并且本申请旨在覆盖整体遵循本发明原理并且包括对本公开的偏离的本发明的任何变化、用途或修改，所述偏离在本发明所属领域的已知或常规实践内，可以应用于上文所述的基本特征并且在所附权利要求的范围内。
本领域技术人员将认识到或能够仅仅使用常规实验来确定本文具体描述的具体实施方案的许多等价物。这些等价物旨在被包括在以下权利要求的范围内。
参考引用
本文引用的所有专利和出版物在此通过引用全部并入。
本文所讨论的出版物仅提供了在本申请的申请日之前的公开内容。在此没有任何内容被解释为承认本发明无权由于在先发明而先于这种公开。
如本文所用，所有标题仅用于组织，而不是要以任何方式限制本公开。任何单独部分的内容可以同样适用于所有部分。
序列表
<110> 根特大学（Universiteit Gent）
弗拉芒区生物技术研究所（VIB VZW）
奥里尼斯生物科学公司（Orionis Biosciences NV）
<120> 靶向嵌合蛋白及其用途
<130> ORN-027PC/114384-5027
<150> US 62/454,993
<151> 2017-02-06
<160> 276
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 504
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 1
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<223> 合成序列
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
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<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 3
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
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<223> 合成序列
<400> 4
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000
<210> 7
<400> 7
000
<210> 8
<400> 8
000
<210> 9
<400> 9
000
<210> 10
<400> 10
000
<210> 11
<400> 11
000
<210> 12
<400> 12
000
<210> 13
<400> 13
000
<210> 14
<400> 14
000
<210> 15
<400> 15
000
<210> 16
<400> 16
000
<210> 17
<400> 17
000
<210> 18
<400> 18
000
<210> 19
<400> 19
000
<210> 20
<400> 20
000
<210> 21
<400> 21
000
<210> 22
<400> 22
000
<210> 23
<400> 23
000
<210> 24
<400> 24
000
<210> 25
<400> 25
000
<210> 26
<400> 26
000
<210> 27
<400> 27
000
<210> 28
<400> 28
000
<210> 29
<400> 29
000
<210> 30
<400> 30
000
<210> 31
<400> 31
000
<210> 32
<400> 32
000
<210> 33
<400> 33
000
<210> 34
<400> 34
000
<210> 35
<400> 35
000
<210> 36
<400> 36
000
<210> 37
<400> 37
000
<210> 38
<400> 38
000
<210> 39
<400> 39
000
<210> 40
<400> 40
000
<210> 41
<400> 41
000
<210> 42
<400> 42
000
<210> 43
<400> 43
000
<210> 44
<400> 44
000
<210> 45
<400> 45
000
<210> 46
<211> 165
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 46
Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met
1 5 10 15
Leu Leu Ala Gln Met Arg Lys Ile Ser Leu Phe Ser Cys Leu Lys Asp
20 25 30
Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln
35 40 45
Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe
50 55 60
Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu
65 70 75 80
Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu
85 90 95
Ala Cys Val Ile Gln Gly Val Gly Val Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys
100 105 110
Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu
115 120 125
Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg
130 135 140
Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser
145 150 155 160
Leu Arg Ser Lys Glu
165
<210> 47
<211> 165
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 47
Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met
1 5 10 15
Leu Leu Ala Gln Met Arg Arg Ile Ser Leu Phe Ser Cys Leu Lys Asp
20 25 30
Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln
35 40 45
Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe
50 55 60
Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu
65 70 75 80
Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu
85 90 95
Ala Cys Val Ile Gln Gly Val Gly Val Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys
100 105 110
Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu
115 120 125
Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg
130 135 140
Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser
145 150 155 160
Leu Arg Ser Lys Glu
165
<210> 48
<211> 166
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 48
Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe Gln
1 5 10 15
Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys Leu
20 25 30
Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu Gln
35 40 45
Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln
50 55 60
Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp Asn
65 70 75 80
Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln Ile Asn
85 90 95
His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe Thr
100 105 110
Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly Arg
115 120 125
Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala Trp Thr
130 135 140
Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr Phe Ile Asn Arg Leu
145 150 155 160
Thr Gly Tyr Leu Arg Asn
165
<210> 49
<211> 167
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 49
Met Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Asn Arg Arg Ala Leu
1 5 10 15
Ile Leu Leu Ala Gln Met Arg Arg Ile Ser Pro Phe Ser Cys Leu Lys
20 25 30
Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Asp Gly Asn Gln
35 40 45
Phe Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln
50 55 60
Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu
65 70 75 80
Ser Leu Leu Glu Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp
85 90 95
Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly Val Glu Glu Thr Pro Leu
100 105 110
Met Asn Val Asp Ser Ile Leu Ala Val Lys Lys Tyr Phe Gln Arg Ile
115 120 125
Thr Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val
130 135 140
Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln
145 150 155 160
Glu Arg Leu Arg Arg Lys Glu
165
<210> 50
<211> 166
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 50
Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Asn Arg Arg Ala Leu Ile
1 5 10 15
Leu Leu Ala Gln Met Arg Arg Ile Ser Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp
20 25 30
Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe
35 40 45
Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Thr
50 55 60
Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Ser
65 70 75 80
Leu Leu Glu Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu
85 90 95
Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly Val Glu Glu Thr Pro Leu Met
100 105 110
Asn Val Asp Ser Ile Leu Ala Val Lys Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr
115 120 125
Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val
130 135 140
Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu
145 150 155 160
Arg Leu Arg Arg Lys Glu
165
<210> 51
<211> 166
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 51
Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Asn Arg Arg Thr Leu Met
1 5 10 15
Leu Leu Ala Gln Met Arg Arg Ile Ser Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp
20 25 30
Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe
35 40 45
Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Thr
50 55 60
Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Ser
65 70 75 80
Leu Leu Glu Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu
85 90 95
Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly Val Glu Glu Thr Pro Leu Met
100 105 110
Asn Val Asp Ser Ile Leu Ala Val Lys Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr
115 120 125
Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val
130 135 140
Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu
145 150 155 160
Arg Leu Arg Arg Lys Glu
165
<210> 52
<211> 166
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 52
Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Asn Arg Arg Ala Leu Ile
1 5 10 15
Leu Leu Ala Gln Met Arg Arg Ile Ser Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp
20 25 30
Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe
35 40 45
Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Thr
50 55 60
Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Ser
65 70 75 80
Leu Leu Glu Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu
85 90 95
Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly Val Glu Glu Thr Pro Leu Met
100 105 110
Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr
115 120 125
Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val
130 135 140
Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu
145 150 155 160
Arg Leu Arg Arg Lys Glu
165
<210> 53
<211> 167
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 53
Met Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Asn Arg Arg Ala Leu
1 5 10 15
Ile Leu Leu Ala Gln Met Arg Arg Ile Ser Pro Phe Ser Cys Leu Lys
20 25 30
Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Asp Gly Asn Gln
35 40 45
Phe Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln
50 55 60
Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu
65 70 75 80
Ser Leu Leu Glu Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp
85 90 95
Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly Val Glu Glu Thr Pro Leu
100 105 110
Met Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile
115 120 125
Thr Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val
130 135 140
Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln
145 150 155 160
Glu Arg Leu Arg Arg Lys Glu
165
<210> 54
<211> 167
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 54
Met Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Asn Arg Arg Ala Leu
1 5 10 15
Ile Leu Leu Ala Gln Met Arg Arg Ile Ser Pro Phe Ser Cys Leu Lys
20 25 30
Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Asp Gly Asn Gln
35 40 45
Phe Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln
50 55 60
Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu
65 70 75 80
Ser Leu Leu Glu Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp
85 90 95
Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly Val Glu Glu Thr Pro Leu
100 105 110
Met Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile
115 120 125
Thr Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val
130 135 140
Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Cys Thr Asn Leu Gln
145 150 155 160
Glu Arg Leu Arg Arg Lys Glu
165
<210> 55
<211> 165
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 55
Ala Pro Met Ala Glu Gly Gly Gly Gln Asn His His Glu Val Val Lys
1 5 10 15
Phe Met Asp Val Tyr Gln Arg Ser Tyr Cys His Pro Ile Glu Thr Leu
20 25 30
Val Asp Ile Phe Gln Glu Tyr Pro Asp Glu Ile Glu Tyr Ile Phe Lys
35 40 45
Pro Ser Cys Val Pro Leu Met Arg Cys Gly Gly Cys Cys Asn Asp Glu
50 55 60
Gly Leu Glu Cys Val Pro Thr Glu Glu Ser Asn Ile Thr Met Gln Ile
65 70 75 80
Met Arg Ile Lys Pro His Gln Gly Gln His Ile Gly Glu Met Ser Phe
85 90 95
Leu Gln His Asn Lys Cys Glu Cys Arg Pro Lys Lys Asp Arg Ala Arg
100 105 110
Gln Glu Asn Pro Cys Gly Pro Cys Ser Glu Arg Arg Lys His Leu Phe
115 120 125
Val Gln Asp Pro Gln Thr Cys Lys Cys Ser Cys Lys Asn Thr Asp Ser
130 135 140
Arg Cys Lys Ala Arg Gln Leu Glu Leu Asn Glu Arg Thr Cys Arg Cys
145 150 155 160
Asp Lys Pro Arg Arg
165
<210> 56
<211> 165
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 56
Ala Pro Met Ala Glu Gly Gly Gly Gln Asn His His Glu Val Val Lys
1 5 10 15
Phe Met Asp Val Tyr Gln Arg Ser Tyr Cys His Pro Ile Glu Thr Leu
20 25 30
Val Asp Ile Phe Gln Glu Tyr Pro Asp Glu Ile Glu Tyr Ile Phe Lys
35 40 45
Pro Ser Cys Val Pro Leu Met Arg Cys Gly Gly Cys Cys Asn Asp Glu
50 55 60
Gly Leu Glu Cys Val Pro Thr Glu Glu Ser Asn Ile Thr Met Gln Ile
65 70 75 80
Met Arg Ile Lys Pro His Gln Gly Gln His Ile Gly Glu Met Ser Phe
85 90 95
Leu Gln His Asn Lys Cys Glu Cys Arg Pro Lys Lys Asp Arg Ala Arg
100 105 110
Gln Glu Asn Pro Cys Gly Pro Cys Ser Glu Arg Arg Lys His Leu Phe
115 120 125
Val Gln Asp Pro Gln Thr Cys Lys Cys Ser Cys Lys Asn Thr Asp Ser
130 135 140
Arg Cys Lys Ala Arg Gln Leu Glu Leu Asn Glu Arg Thr Cys Arg Ser
145 150 155 160
Leu Thr Arg Lys Asp
165
<210> 57
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 57
Val Arg Ser Ser Ser Arg Thr Pro Ser Asp Lys Pro Val Ala His Val
1 5 10 15
Val Ala Asn Pro Gln Ala Glu Gly Gln Leu Gln Trp Leu Asn Arg Arg
20 25 30
Ala Asn Ala Leu Leu Ala Asn Gly Val Glu Leu Arg Asp Asn Gln Leu
35 40 45
Val Val Pro Ser Glu Gly Leu Tyr Leu Ile Tyr Ser Gln Val Leu Phe
50 55 60
Lys Gly Gln Gly Cys Pro Ser Thr His Val Leu Leu Thr His Thr Ile
65 70 75 80
Ser Arg Ile Ala Val Ser Tyr Gln Thr Lys Val Asn Leu Leu Ser Ala
85 90 95
Ile Lys Ser Pro Cys Gln Arg Glu Thr Pro Glu Gly Ala Glu Ala Lys
100 105 110
Pro Trp Tyr Glu Pro Ile Tyr Leu Gly Gly Val Phe Gln Leu Glu Lys
115 120 125
Gly Asp Arg Leu Ser Ala Glu Ile Asn Arg Pro Asp Tyr Leu Asp Phe
130 135 140
Ala Glu Ser Gly Gln Val Tyr Phe Gly Ile Ile Ala Leu
145 150 155
<210> 58
<211> 171
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 58
Leu Pro Gly Val Gly Leu Thr Pro Ser Ala Ala Gln Thr Ala Arg Gln
1 5 10 15
His Pro Lys Met His Leu Ala His Ser Asn Leu Lys Pro Ala Ala His
20 25 30
Leu Ile Gly Asp Pro Ser Lys Gln Asn Ser Leu Leu Trp Arg Ala Asn
35 40 45
Thr Asp Arg Ala Phe Leu Gln Asp Gly Phe Ser Leu Ser Asn Asn Ser
50 55 60
Leu Leu Val Pro Thr Ser Gly Ile Tyr Phe Val Tyr Ser Gln Val Val
65 70 75 80
Phe Ser Gly Lys Ala Tyr Ser Pro Lys Ala Thr Ser Ser Pro Leu Tyr
85 90 95
Leu Ala His Glu Val Gln Leu Phe Ser Ser Gln Tyr Pro Phe His Val
100 105 110
Pro Leu Leu Ser Ser Gln Lys Met Val Tyr Pro Gly Leu Gln Glu Pro
115 120 125
Trp Leu His Ser Met Tyr His Gly Ala Ala Phe Gln Leu Thr Gln Gly
130 135 140
Asp Gln Leu Ser Thr His Thr Asp Gly Ile Pro His Leu Val Leu Ser
145 150 155 160
Pro Ser Thr Val Phe Phe Gly Ala Phe Ala Leu
165 170
<210> 59
<211> 281
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 59
Met Ala Met Met Glu Val Gln Gly Gly Pro Ser Leu Gly Gln Thr Cys
1 5 10 15
Val Leu Ile Val Ile Phe Thr Val Leu Leu Gln Ser Leu Cys Val Ala
20 25 30
Val Thr Tyr Val Tyr Phe Thr Asn Glu Leu Lys Gln Met Gln Asp Lys
35 40 45
Tyr Ser Lys Ser Gly Ile Ala Cys Phe Leu Lys Glu Asp Asp Ser Tyr
50 55 60
Trp Asp Pro Asn Asp Glu Glu Ser Met Asn Ser Pro Cys Trp Gln Val
65 70 75 80
Lys Trp Gln Leu Arg Gln Leu Val Arg Lys Met Ile Leu Arg Thr Ser
85 90 95
Glu Glu Thr Ile Ser Thr Val Gln Glu Lys Gln Gln Asn Ile Ser Pro
100 105 110
Leu Val Arg Glu Arg Gly Pro Gln Arg Val Ala Ala His Ile Thr Gly
115 120 125
Thr Arg Gly Arg Ser Asn Thr Leu Ser Ser Pro Asn Ser Lys Asn Glu
130 135 140
Lys Ala Leu Gly Arg Lys Ile Asn Ser Trp Glu Ser Ser Arg Ser Gly
145 150 155 160
His Ser Phe Leu Ser Asn Leu His Leu Arg Asn Gly Glu Leu Val Ile
165 170 175
His Glu Lys Gly Phe Tyr Tyr Ile Tyr Ser Gln Thr Tyr Phe Arg Phe
180 185 190
Gln Glu Glu Ile Lys Glu Asn Thr Lys Asn Asp Lys Gln Met Val Gln
195 200 205
Tyr Ile Tyr Lys Tyr Thr Ser Tyr Pro Asp Pro Ile Leu Leu Met Lys
210 215 220
Ser Ala Arg Asn Ser Cys Trp Ser Lys Asp Ala Glu Tyr Gly Leu Tyr
225 230 235 240
Ser Ile Tyr Gln Gly Gly Ile Phe Glu Leu Lys Glu Asn Asp Arg Ile
245 250 255
Phe Val Ser Val Thr Asn Glu His Leu Ile Asp Met Asp His Glu Ala
260 265 270
Ser Phe Phe Gly Ala Phe Leu Val Gly
275 280
<210> 60
<211> 153
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 60
Ala Pro Val Arg Ser Leu Asn Cys Thr Leu Arg Asp Ser Gln Gln Lys
1 5 10 15
Ser Leu Val Met Ser Gly Pro Tyr Glu Leu Lys Ala Leu His Leu Gln
20 25 30
Gly Gln Asp Met Glu Gln Gln Val Val Phe Ser Met Ser Phe Val Gln
35 40 45
Gly Glu Glu Ser Asn Asp Lys Ile Pro Val Ala Leu Gly Leu Lys Glu
50 55 60
Lys Asn Leu Tyr Leu Ser Cys Val Leu Lys Asp Asp Lys Pro Thr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Glu Ser Val Asp Pro Lys Asn Tyr Pro Lys Lys Lys Met Glu
85 90 95
Lys Arg Phe Val Phe Asn Lys Ile Glu Ile Asn Asn Lys Leu Glu Phe
100 105 110
Glu Ser Ala Gln Phe Pro Asn Trp Tyr Ile Ser Thr Ser Gln Ala Glu
115 120 125
Asn Met Pro Val Phe Leu Gly Gly Thr Lys Gly Gly Gln Asp Ile Thr
130 135 140
Asp Phe Thr Met Gln Phe Val Ser Ser
145 150
<210> 61
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 61
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 62
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 62
His Lys Cys Asp Ile Thr Leu Gln Glu Ile Ile Lys Thr Leu Asn Ser
1 5 10 15
Leu Thr Glu Gln Lys Thr Leu Cys Thr Glu Leu Thr Val Thr Asp Ile
20 25 30
Phe Ala Ala Ser Lys Asn Thr Thr Glu Lys Glu Thr Phe Cys Arg Ala
35 40 45
Ala Thr Val Leu Arg Gln Phe Tyr Ser His His Glu Lys Asp Thr Arg
50 55 60
Cys Leu Gly Ala Thr Ala Gln Gln Phe His Arg His Lys Gln Leu Ile
65 70 75 80
Arg Phe Leu Lys Arg Leu Asp Arg Asn Leu Trp Gly Leu Ala Gly Leu
85 90 95
Asn Ser Cys Pro Val Lys Glu Ala Asn Gln Ser Thr Leu Glu Asn Phe
100 105 110
Leu Glu Arg Leu Lys Thr Ile Met Arg Glu Lys Tyr Ser Lys Cys Ser
115 120 125
Ser
<210> 63
<211> 185
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 63
Ala Pro Val Pro Pro Gly Glu Asp Ser Lys Asp Val Ala Ala Pro His
1 5 10 15
Arg Gln Pro Leu Thr Ser Ser Glu Arg Ile Asp Lys Gln Ile Arg Tyr
20 25 30
Ile Leu Asp Gly Ile Ser Ala Leu Arg Lys Glu Thr Cys Asn Lys Ser
35 40 45
Asn Met Cys Glu Ser Ser Lys Glu Ala Leu Ala Glu Asn Asn Leu Asn
50 55 60
Leu Pro Lys Met Ala Glu Lys Asp Gly Cys Phe Gln Ser Gly Phe Asn
65 70 75 80
Glu Glu Thr Cys Leu Val Lys Ile Ile Thr Gly Leu Leu Glu Phe Glu
85 90 95
Val Tyr Leu Glu Tyr Leu Gln Asn Arg Phe Glu Ser Ser Glu Glu Gln
100 105 110
Ala Arg Ala Val Gln Met Ser Thr Lys Val Leu Ile Gln Phe Leu Gln
115 120 125
Lys Lys Ala Lys Asn Leu Asp Ala Ile Thr Thr Pro Asp Pro Thr Thr
130 135 140
Asn Ala Ser Leu Thr Thr Lys Leu Gln Ala Gln Asn Gln Trp Leu Gln
145 150 155 160
Asp Met Thr Thr His Leu Ile Leu Arg Ser Phe Lys Glu Phe Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Leu Arg Ala Leu Arg Gln Met
180 185
<210> 64
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 64
Ser Pro Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg Glu Leu Ile Glu
1 5 10 15
Glu Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys Asn Gly
20 25 30
Ser Met Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met Tyr Cys Ala Ala
35 40 45
Leu Glu Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu Lys Thr
50 55 60
Gln Arg Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala Gly Gln
65 70 75 80
Phe Ser Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala Gln Phe
85 90 95
Val Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Arg
100 105 110
Phe Asn
<210> 65
<211> 194
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 65
Met Ala Ala Glu Pro Val Glu Asp Asn Cys Ile Asn Phe Val Ala Met
1 5 10 15
Lys Phe Ile Asp Asn Thr Leu Tyr Phe Ile Ala Glu Asp Asp Glu Asn
20 25 30
Leu Glu Ser Asp Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile
35 40 45
Arg Asn Leu Asn Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro
50 55 60
Leu Phe Glu Asp Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg
65 70 75 80
Thr Ile Phe Ile Ile Ser Met Tyr Lys Asp Ser Gln Pro Arg Gly Met
85 90 95
Ala Val Thr Ile Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys
100 105 110
Glu Asn Lys Ile Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile
115 120 125
Lys Asp Thr Lys Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Ser Val Pro Gly
130 135 140
His Asp Asn Lys Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe
145 150 155 160
Leu Ala Cys Glu Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys
165 170 175
Glu Asp Glu Leu Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu
180 185 190
Asp Leu
<210> 66
<211> 270
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 66
Met Lys Pro Lys Met Lys Tyr Ser Thr Asn Lys Ile Ser Thr Ala Lys
1 5 10 15
Trp Lys Asn Thr Ala Ser Lys Ala Leu Cys Phe Lys Leu Gly Lys Ser
20 25 30
Gln Gln Lys Ala Lys Glu Val Cys Pro Met Tyr Phe Met Lys Leu Arg
35 40 45
Ser Gly Leu Met Ile Lys Lys Glu Ala Cys Tyr Phe Arg Arg Glu Thr
50 55 60
Thr Lys Arg Pro Ser Leu Lys Thr Gly Arg Lys His Lys Arg His Leu
65 70 75 80
Val Leu Ala Ala Cys Gln Gln Gln Ser Thr Val Glu Cys Phe Ala Phe
85 90 95
Gly Ile Ser Gly Val Gln Lys Tyr Thr Arg Ala Leu His Asp Ser Ser
100 105 110
Ile Thr Gly Ile Ser Pro Ile Thr Glu Tyr Leu Ala Ser Leu Ser Thr
115 120 125
Tyr Asn Asp Gln Ser Ile Thr Phe Ala Leu Glu Asp Glu Ser Tyr Glu
130 135 140
Ile Tyr Val Glu Asp Leu Lys Lys Asp Glu Lys Lys Asp Lys Val Leu
145 150 155 160
Leu Ser Tyr Tyr Glu Ser Gln His Pro Ser Asn Glu Ser Gly Asp Gly
165 170 175
Val Asp Gly Lys Met Leu Met Val Thr Leu Ser Pro Thr Lys Asp Phe
180 185 190
Trp Leu His Ala Asn Asn Lys Glu His Ser Val Glu Leu His Lys Cys
195 200 205
Glu Lys Pro Leu Pro Asp Gln Ala Phe Phe Val Leu His Asn Met His
210 215 220
Ser Asn Cys Val Ser Phe Glu Cys Lys Thr Asp Pro Gly Val Phe Ile
225 230 235 240
Gly Val Lys Asp Asn His Leu Ala Leu Ile Lys Val Asp Ser Ser Glu
245 250 255
Asn Leu Cys Thr Glu Asn Ile Leu Phe Lys Leu Ser Glu Thr
260 265 270
<210> 67
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 67
Met Gly Val His Glu Cys Pro Ala Trp Leu Trp Leu Leu Leu Ser Leu
1 5 10 15
Leu Ser Leu Pro Leu Gly Leu Pro Val Leu Gly Ala Pro Pro Arg Leu
20 25 30
Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu
35 40 45
Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu
50 55 60
Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg
65 70 75 80
Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu
85 90 95
Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser
100 105 110
Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly
115 120 125
Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu
130 135 140
Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile
145 150 155 160
Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu
165 170 175
Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp
180 185 190
Arg
<210> 68
<211> 166
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 68
Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu
1 5 10 15
Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu His
20 25 30
Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe
35 40 45
Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp
50 55 60
Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu
65 70 75 80
Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp
85 90 95
Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu
100 105 110
Gly Ala Gln Lys Glu Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala
115 120 125
Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val
130 135 140
Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala
145 150 155 160
Cys Arg Thr Gly Asp Arg
165
<210> 69
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 69
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 70
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 70
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 71
<211> 440
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 71
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser
115 120 125
Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp
130 135 140
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
145 150 155 160
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys
180 185 190
Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
195 200 205
Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala
210 215 220
Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
225 230 235 240
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
245 250 255
Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val
260 265 270
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
275 280 285
Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
290 295 300
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly
305 310 315 320
Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
325 330 335
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr
340 345 350
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
355 360 365
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
370 375 380
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
385 390 395 400
Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe
405 410 415
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
420 425 430
Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440
<210> 72
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 72
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 73
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 73
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Arg Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Arg Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Phe Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 74
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 74
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Arg Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr
35 40 45
Arg Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Phe Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 75
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 75
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Arg Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr
35 40 45
Arg Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Cys Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Phe Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 76
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 76
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Arg Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr
35 40 45
Arg Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Cys Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Phe Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 77
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 77
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Gln Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Asp Ser Gly Glu Ser Thr Tyr Ala Glu Glu Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Thr Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Gly Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Lys Val Gly Tyr Asp Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 78
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 78
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Gln Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Asp Ser Gly Glu Ser Thr Tyr Ala Glu Glu Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Thr Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Gly Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Lys Val Gly Tyr Asp Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 79
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 79
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Gln Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Asp Ser Gly Glu Ser Thr Tyr Ala Glu Glu Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Thr Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Gly Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Val Arg Val Gly Tyr Asp Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 80
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 80
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Gln Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Asp Ser Gly Glu Ser Thr Tyr Ala Glu Glu Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Thr Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Gly Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Val Arg Val Gly Tyr Asp Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 81
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 81
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Asp Ser Gly Glu Ser Thr Tyr Ala Glu Glu Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Thr Ser Leu Asn Ala Glu Asp Thr Gly Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Val Arg Val Gly Tyr Asp Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 82
<211> 254
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 82
Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly
1 5 10 15
Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn
20 25 30
Leu Gly Ala Ile Thr Ala Ser Leu Gln Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser
35 40 45
Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly
50 55 60
Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln
65 70 75 80
Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu
85 90 95
Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu
100 105 110
Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly
115 120 125
Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn
130 135 140
Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val
145 150 155 160
Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp
165 170 175
Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser
180 185 190
Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Trp Leu Leu His Ile Phe Ile
195 200 205
Pro Phe Cys Ile Ile Ala Phe Ile Phe Ile Ala Thr Val Ile Ala Leu
210 215 220
Arg Lys Gln Leu Cys Gln Lys Leu Tyr Ser Ser Lys Asp Thr Thr Lys
225 230 235 240
Arg Pro Val Thr Thr Thr Lys Arg Glu Val Asn Ser Ala Ile
245 250
<210> 83
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 83
Met Ile Phe Leu Leu Leu Met Leu Ser Leu Glu Leu Gln Leu His Gln
1 5 10 15
Ile Ala Ala Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile
20 25 30
Glu His Gly Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser
35 40 45
His Val Asn Leu Gly Ala Ile Thr Ala Ser Leu Gln Lys Val Glu Asn
50 55 60
Asp Thr Ser Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu
65 70 75 80
Pro Leu Gly Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp
85 90 95
Glu Gly Gln Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr
100 105 110
Lys Tyr Leu Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr
115 120 125
His Ile Leu Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln
130 135 140
Ala Thr Gly Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val
145 150 155 160
Pro Ala Asn Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val
165 170 175
Thr Ser Val Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys
180 185 190
Val Phe Trp Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp
195 200 205
Leu Gln Ser Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Trp Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 84
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8)..(8)
<223> 具有序列SNTSESF的分支
<400> 84
Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Lys Phe Arg Val Thr Gln Leu Ala Pro
1 5 10 15
Lys Ala Gln Ile Lys Glu
20
<210> 85
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 85
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Arg Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Ile Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Arg Ile Tyr Asp Gly Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ala Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 86
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 86
Asp Ile Gln Met Thr Gln Phe Pro Ser Ser Leu Cys Ala Ser Gln Gly
1 5 10 15
Gly Lys Val Thr Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Tyr
20 25 30
Met Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
His Tyr Thr Ser Thr Leu Leu Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Ser Ile Ser Asn Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Asn Leu Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 87
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 87
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly His Ile Asn Pro Ser Ser Gly Phe Thr Thr Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Tyr Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Asp Tyr Asp Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 88
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 88
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Thr Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Phe Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 89
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 89
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Tyr Thr Ile Tyr Tyr Thr Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Tyr Gly Ser Phe Tyr Glu Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 90
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 90
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Leu Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Arg Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr
85 90 95
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 91
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 91
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Lys
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Phe Ser Ile His
20 25 30
Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ala Ala Ile Thr Trp Ser Gly Gly Ile Thr Tyr Tyr Glu Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Arg Ala Glu Ser Ser Trp Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 92
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 92
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Ala Ser Ile His
20 25 30
Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ala Val Ile Thr Trp Ser Gly Gly Ile Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Gly Asp Lys His Gln Ser Ser Trp Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 93
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 93
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Ser Ser Ile His
20 25 30
Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ala Ala Ile Thr Trp Ser Gly Gly Ile Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Leu
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Gly Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Arg Ala Gln Ser Ser Trp Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 94
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 94
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Gly Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Phe Ser Ile Asn
20 25 30
Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ala Leu Ile Ser Trp Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Glu Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Arg Val Asp Ser Asn Trp Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 95
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 95
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Ser Gly
20 25 30
Thr Met Gly Trp Phe Arg Arg Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ala Ser Ile Pro Trp Ser Gly Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Gln Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Val Lys Glu Arg Ser Thr Gly Trp Asp Phe Ala Ser Trp Gly Gln
100 105 110
Cys Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 96
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 96
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Leu Lys Gln Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Ser
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Ser Thr Gly Phe Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Arg Asp Ser Ser Gly Tyr His Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 97
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 97
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Gln Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Ser
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Ser Thr Gly Phe Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Arg Asp Ser Ser Gly Tyr His Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 98
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 98
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly His Glu Val Lys Gln Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Ser
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Ser Thr Gly Phe Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Arg Asp Ser Ser Gly Tyr His Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 99
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 99
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly His Glu Val Lys Gln Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Ser
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Ser Thr Gly Phe Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Arg Asp Ser Ser Gly Tyr His Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 100
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 100
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly His Glu Val Lys Gln Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Ser
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Ser Thr Gly Phe Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Arg Asp Ser Ser Gly Tyr His Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 101
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 101
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Thr Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Gln Arg Leu Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Lys Phe Gly Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Glu Glu Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Trp
85 90 95
Glu Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 102
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 102
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Gln Arg Leu Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Lys Phe Gly Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Trp
85 90 95
Glu Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 103
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 103
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Gln Arg Leu Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Lys Phe Gly Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Trp
85 90 95
Glu Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 104
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 104
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Gln Arg Leu Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Lys Phe Gly Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Trp
85 90 95
Glu Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 105
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 105
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Gly Trp Phe Gly Glu Leu Ala Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 106
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 106
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Leu Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 107
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 107
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Gly Trp Phe Gly Glu Leu Ala Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 108
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 108
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Leu Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 109
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 109
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 110
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 110
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 111
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 111
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ile Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ile Thr Phe Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Lys Leu Gly Thr Val Thr Thr Val Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 112
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 112
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 113
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 113
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Phe His Phe Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 114
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 114
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 115
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 115
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Gly Phe Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Thr Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Phe Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 116
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 116
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 117
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 117
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Asp Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Leu His Ala Asp Thr Gly Ile Thr Lys Phe Ser Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Arg Ile Gln Leu Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 118
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 118
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 119
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 119
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Gly Ile Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn His Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gln Gly Ile Ala Ala Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 120
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 120
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 121
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 121
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Val Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Gly Asn Ser Gly Asn Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Val Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 122
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 122
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 123
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 123
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Arg Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Phe His Phe Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 124
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 124
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 125
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 125
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Tyr Asp Tyr Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 126
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 126
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 127
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 127
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Ser Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Ala Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ser Ser Gly Trp Ser Arg Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 128
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 128
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 129
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 129
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Glu Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Asn Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Leu Phe Gly Ile Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Asp Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Tyr Ser Tyr Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 130
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 130
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 131
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 131
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Asn Arg Gly Arg Ile Glu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Arg Phe Arg Tyr Phe Asp Trp Phe Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 132
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 132
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 133
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 133
Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Thr Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Gly Gly Trp Leu Ser Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 134
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 134
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Leu Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Ser Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys
100 105
<210> 135
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 135
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Tyr
20 25 30
Ser Ile Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Met Trp Ala Gly Gly Gly Thr Asn Ser Asn Ser Val Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Ile Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Tyr Gly Asn Ser Pro Tyr Tyr Ala Ile Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 136
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 136
Asp Ile Val Thr Thr Gln Ser His Lys Leu Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Ser Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys
100 105
<210> 137
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 137
Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Ile Ser Asp
20 25 30
Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Leu
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Thr Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Arg Gly Gly Trp Leu Leu Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 138
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 138
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Ser Met Gly Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Asp Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Gly Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 139
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 139
Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Asp Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Phe Pro Arg Asp Asn Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu His Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Lys Glu Asn Trp Val Gly Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Leu Ser Ser
115
<210> 140
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 140
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ile Arg Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Ser
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Thr Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ala Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 141
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 141
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Asp Leu Val Thr Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Arg Ile Ser Cys Gln Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Pro Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Asp Pro Asn Tyr Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Ile Leu Thr Val Asp Arg Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ala Leu Thr Asp Trp Gly Gln Gly Thr Ser Leu Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 142
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 142
Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile
20 25 30
Tyr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Ala Thr Phe Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Thr Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Asn Asn Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 143
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 143
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Val Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Val Asn Pro Phe Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Met Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Ala Trp Gly Tyr Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 144
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 144
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Val Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Val Asn Pro Phe Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Met Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Ala Trp Gly Tyr Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 145
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 145
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Val Asn Pro Phe Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Met Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Ala Trp Gly Tyr Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 146
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 146
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Val Asn Pro Phe Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Met Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Ala Trp Gly Tyr Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 147
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 147
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Val Asn Pro Phe Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Met Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Ile Thr Ser Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Ala Trp Gly Tyr Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 148
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 148
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Thr Glu Ser Val Glu Tyr Tyr
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Val Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Val Asp Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Ser Leu Glu Glu Glu Asp Ala Ala Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Arg
85 90 95
Arg Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 149
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 149
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Thr Glu Ser Val Glu Tyr Tyr
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Val Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Val Asp Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Arg
85 90 95
Arg Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 150
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 150
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Thr Glu Ser Val Glu Tyr Tyr
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Val Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Val Asp Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Arg
85 90 95
Arg Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 151
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 151
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Thr Glu Ser Val Glu Tyr Tyr
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Val Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Val Asp Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Arg
85 90 95
Arg Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 152
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 152
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Gly Asp Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Leu Val Thr Ser Met Val Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 153
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 153
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ala Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Ala Leu Pro Gln Lys Tyr Val
20 25 30
Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Glu Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Thr Met Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Val Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Tyr Ser Thr Asp Arg Ser Gly Asn His
85 90 95
Arg Val Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 154
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 154
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Gly Glu Gln Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Trp Asn Tyr Gly Tyr Tyr Asp Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 155
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 155
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Phe Gly Thr Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Ile
85 90 95
Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 156
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 156
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Gly Trp Phe Gly Glu Leu Ala Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 157
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 157
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Leu Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Glu Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 158
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 158
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Arg Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Leu His Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 159
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 159
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ile Ser Arg Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 160
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 160
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Gly Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Gln Leu Tyr Ser Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 161
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 161
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Gly Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser His Ser Leu Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 162
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 162
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Ser Gly Ser Gly Gly Phe Thr Phe Ser Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Ser Ala Val Tyr Ser Cys
85 90 95
Ala Lys Val Leu Val Gly Phe Asn Asn Gly Cys Trp Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 163
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 163
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr
35 40 45
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Asn Asp His
85 90 95
Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 164
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 164
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Gly Asp Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Leu Val Thr Ser Met Val Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 165
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 165
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Ala Leu Pro Gln Lys Tyr Val
20 25 30
Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Glu Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Thr Met Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Val Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Tyr Ser Thr Asp Arg Ser Gly Asn His
85 90 95
Arg Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 166
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 166
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Gly Trp Phe Gly Glu Leu Ala Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 167
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 167
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Leu Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 168
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 168
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Asn Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Arg Lys Gly Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 169
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 169
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Asn Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Arg Lys Gly Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 170
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 170
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Asn Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Arg Lys Gly Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 171
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 171
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Tyr Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Asn Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val
65 70 75 80
Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Arg Lys Gly Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 172
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 172
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Tyr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Asn Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Arg Lys Gly Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 173
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 173
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Tyr Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Asn Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Arg Lys Gly Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 174
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 174
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Arg Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Asn Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val
65 70 75 80
Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Arg Lys Gly Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 175
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 175
Gln Ile Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Arg Ile Asp Pro Asn Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Arg Lys Gly Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 176
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 176
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Arg Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Asn Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Arg Lys Gly Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 177
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 177
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 178
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 178
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 179
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 179
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala
65 70 75 80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 180
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 180
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 181
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 181
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Ile Pro Pro Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Asn Ile Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 182
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 182
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 183
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 183
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 184
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 184
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ala
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 185
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 185
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 186
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 186
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Arg Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ile Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Asp Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Tyr Asp Ser Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Glu
115
<210> 187
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 187
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ile Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys Gly Tyr Asp Ser Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Ile Val Ser Ala
115
<210> 188
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 188
Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Arg Gly Val Thr Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Met
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Phe
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Ala Asn Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Leu Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 189
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 189
Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Val Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Ile
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Phe
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Ala Asn Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Leu Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 190
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 190
Glu Val Lys Leu Phe Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Asn Pro Asp Ser Thr Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Pro Gly Asp Tyr Gly Tyr Asp Phe Asp Cys Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 191
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 191
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ser Leu Leu Trp Phe Ser Thr Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 192
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 192
Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Phe
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Ala Asn Asp Thr Ala Ile Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Leu Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 193
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 193
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Ala Arg Gln Ile Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Leu Gly Ser Val Gln
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ile Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Tyr Asp Ala Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Ser Val Ser Glu
115
<210> 194
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 194
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Thr Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Ser Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Tyr Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gln Arg Asp Trp Leu Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 195
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 195
Glu Glu Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ile Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Tyr Asp Ala Gly Phe Ala Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Ala Ser Ala
115
<210> 196
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 196
Gln Ile Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Arg Gly Val Thr Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Met
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Val Leu
65 70 75 80
Thr Met Asn Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Leu Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 197
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 197
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Arg Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Asp Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Tyr Asp Ser Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 198
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 198
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Ser Ser Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Trp
85 90 95
Glu Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
<210> 199
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 199
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Ser Ser Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Trp
85 90 95
Glu Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 200
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 200
Ser Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Lys Phe Leu Leu Val Ser Ala Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ala Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ile Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr Thr Ser Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 201
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 201
Ser Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Lys Phe Leu Leu Val Ser Ala Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp
20 25 30
Val Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Asn Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Thr Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr Thr Ser Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 202
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 202
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Tyr Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ile Ile Val His Ser
20 25 30
Asn Ala Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 203
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 203
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Leu Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Tyr Trp Asn Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Val Trp
35 40 45
Ile Tyr Asn Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Ala Ala Ser Tyr Phe Cys His Gln Trp Arg Ser Tyr Pro
85 90 95
Pro Thr Leu Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 204
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 204
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Asn Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Gly Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 205
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 205
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Ser Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Ser Trp
85 90 95
Glu Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 206
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 206
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Asn Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Ser Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 207
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 207
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Ser Tyr Ser Tyr Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Trp
85 90 95
Glu Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 208
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 208
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ala Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr Thr Ser Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 209
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 209
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Ser Ser Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Asn Asp Thr Ala Asn Tyr Tyr Cys Gln His Ser Trp
85 90 95
Glu Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 210
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 210
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Gly Gly Ser Asn Phe Asp Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Trp Thr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 211
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 211
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Gly Gly Ser Asn Phe Asp Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Trp Thr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 212
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 212
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Gly Gly Ser Asn Phe Asp Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Trp Thr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 213
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 213
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Gly Gly Ser Asn Phe Asp Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Trp Thr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 214
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 214
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 215
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 215
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Ile
50 55 60
Pro Pro Arg Phe Ser Gly Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Asn Asn Ile Glu Ser Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 216
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 216
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 217
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 217
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 218
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 218
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 219
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 219
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 220
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 220
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 221
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 221
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 222
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 222
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 223
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 223
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 224
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 224
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 225
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 225
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr
20 25 30
Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Trp Ala
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Ser Cys
85 90 95
Ala Ala Ser Gln Ala Pro Ile Thr Ile Ala Thr Met Met Lys Pro Phe
100 105 110
Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 226
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 226
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr
20 25 30
Ala Lys Cys Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Trp Val
35 40 45
Ser Cys Ile Ser Ser Ser Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Ala Arg His Gly Gly Pro Leu Thr Val Glu Tyr Phe Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 227
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 227
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Tyr Tyr
20 25 30
Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ala Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ser Cys Ile Ser Gly Gly Asp Asn Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Gly Gly Trp Lys Tyr Cys Ser Gly Tyr Asp Pro Glu Tyr Ile
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 228
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 228
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Phe Ser Gln Tyr
20 25 30
Asp Val Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val
35 40 45
Ala Phe Ser Ser Ser Gly Gly Arg Thr Ile Tyr Pro Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Thr Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Thr Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Lys
85 90 95
Ile Asp Trp Tyr Leu Asn Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 229
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 229
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Val Asp Ala Ser Asn Ser
20 25 30
Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Thr Gly Gly Gly Leu Ile Ala Tyr Thr Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Glu Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn
85 90 95
Thr Ile Asn Ser Arg Asp Gly Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 230
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 230
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Ile Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Ile Val Ser Trp Tyr Arg Arg Ala Arg Gly Lys Gln Arg Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gly Ile Ser Asn Gly Gly Thr Thr Lys Tyr Ala Glu Ser Val Leu
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Asn Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Gly Leu Asn Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Leu Cys Lys
85 90 95
Val Arg Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 231
<211> 130
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 231
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu Ser Thr Val Leu Ile Asn
20 25 30
Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn
85 90 95
Ala Asp Val Tyr Pro Gln Asp Tyr Gly Leu Gly Tyr Val Glu Gly Lys
100 105 110
Val Tyr Tyr Gly His Asp Tyr Trp Gly Thr Gly Thr Leu Val Thr Val
115 120 125
Ser Ser
130
<210> 232
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 232
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Val Ser Asn Tyr Ala Met Gly Trp Gly Arg Gln Ala Pro Gly Thr Gln
35 40 45
Arg Glu Leu Val Ala Ser Ile Ser Asn Gly Asp Thr Thr Asn Tyr Ala
50 55 60
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn
65 70 75 80
Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val
85 90 95
Tyr Tyr Cys Phe Glu His Gln Val Ala Gly Leu Thr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 233
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (27)..(27)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (32)..(32)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (75)..(75)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 233
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Xaa Ala Leu Lys Ile Xaa
20 25 30
Val Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val
35 40 45
Ala Ala Ile Thr Ser Gly Gly Arg Thr Asn Tyr Ser Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gly Asp Asn Ala Xaa Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Arg
85 90 95
Glu Trp Asn Ser Gly Tyr Pro Pro Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Gln Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 234
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 234
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Gly
20 25 30
Thr Met Gly Trp Phe Arg Arg Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ala Ser Ile Pro Trp Ser Gly Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Gln Asn Thr Val Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Phe Lys Glu Arg Ser Thr Gly Trp Asp Phe Ala Ser Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Ile Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 235
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 235
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Thr Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr
20 25 30
Gly Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ser Phe Ile Ser Gly Ser Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Pro Trp Gly Pro Pro Ser Ile Ala Thr Met Thr Ser Tyr
100 105 110
Glu Tyr Lys His Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 236
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 236
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Thr Met Ile Trp Leu Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Phe Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Asp Lys Asp Gly Asn Thr Asn Tyr Val Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Ala Val Ser Arg Asp Asn Thr Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Thr
85 90 95
Lys His Gly Ser Ser Ala Arg Gly Gln Gly Thr Arg Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 237
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 237
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Glu Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Asn Ser Gly Gly Gly Ile Thr Tyr Arg Gly Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Glu
85 90 95
Asn Gly Gly Ser Ser Tyr Arg Arg Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 238
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 238
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Arg Ser Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Thr Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 239
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 239
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Arg Ser Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Thr Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 240
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 240
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Arg Ser Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Thr Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 241
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 241
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Arg Ser Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Thr Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 242
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 242
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Arg Ser Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Thr Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 243
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 243
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Thr Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 244
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 244
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 245
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 245
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Phe Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 246
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 246
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Phe Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 247
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 247
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 248
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 248
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10
<210> 249
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 249
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 250
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 250
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 251
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 251
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25
<210> 252
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 252
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25 30
<210> 253
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 253
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Ser
35
<210> 254
<211> 40
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 254
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
35 40
<210> 255
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 255
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 256
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 256
Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 257
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 257
Gly Gly Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 258
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 258
Glu Ala Ala Ala Lys
1 5
<210> 259
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 259
Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys
1 5 10
<210> 260
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 260
Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys
1 5 10 15
<210> 261
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 261
Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala
1 5 10
<210> 262
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 262
Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys
1 5 10 15
Ala
<210> 263
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 263
Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys
1 5 10 15
Glu Ala Ala Ala Lys Ala
20
<210> 264
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 264
Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys
1 5 10 15
Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala
20 25
<210> 265
<211> 46
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 265
Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys
1 5 10 15
Glu Ala Ala Ala Lys Ala Leu Glu Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala
20 25 30
Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala
35 40 45
<210> 266
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 266
Pro Ala Pro Ala Pro
1 5
<210> 267
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 267
Lys Glu Ser Gly Ser Val Ser Ser Glu Gln Leu Ala Gln Phe Arg Ser
1 5 10 15
Leu Asp
<210> 268
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 268
Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr
1 5 10
<210> 269
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 269
Gly Ser Ala Gly Ser Ala Ala Gly Ser Gly Glu Phe
1 5 10
<210> 270
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 270
Gly Gly Gly Ser Glu
1 5
<210> 271
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 271
Gly Ser Glu Ser Gly
1 5
<210> 272
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 272
Gly Ser Glu Gly Ser
1 5
<210> 273
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 273
Gly Glu Gly Gly Ser Gly Glu Gly Ser Ser Gly Glu Gly Ser Ser Ser
1 5 10 15
Glu Gly Gly Gly Ser Glu Gly Gly Gly Ser Glu Gly Gly Gly Ser Glu
20 25 30
Gly Gly Ser
35
<210> 274
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 274
Cys Pro Pro Cys
1
<210> 275
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 275
Glu Glu Phe Gly Asn Gln
1 5
<210> 276
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 合成序列
<400> 276
Glu Glu Phe Asp Gly Asn Gln
1 5

Claims (31)

1.一种嵌合蛋白，其包含：
(a)靶向部分，所述靶向部分包含识别并结合SIRP1α的识别结构域；和
(b)修饰的信号传导剂，所述修饰的信号传导剂具有一个或多个突变，与野生型信号传导剂相比，所述突变赋予相对于野生型信号传导剂改善的安全性，并且
其中所述靶向部分和修饰的信号传导剂任选地与一个或多个连接子连接。
2.根据权利要求1所述的嵌合蛋白，其还包含一个或多个额外的靶向部分。
3.根据权利要求2所述的嵌合蛋白，其中所述一个或多个额外的靶向部分包含识别并结合肿瘤细胞上的抗原或受体的识别结构域。
4.根据权利要求2所述的嵌合蛋白，其中所述一个或多个额外的靶向部分包含识别并结合免疫细胞上的抗原或受体的识别结构域。
5.根据权利要求4所述的嵌合蛋白，其中免疫细胞选自巨噬细胞、单核细胞和树突细胞。
6.根据权利要求2-5任一项所述的嵌合蛋白，其中所述一个或多个额外的靶向部分识别PD-L1、PD-L2、PD-1和Clec9A中的一个或多个。
7.根据上述权利要求任一项所述的嵌合蛋白，其中识别结构域包含全长抗体、单结构域抗体、重组的仅重链抗体(VHH)、单链抗体(scFv)、鲨鱼仅重链抗体(VNAR)、微蛋白(例如半胱氨酸结蛋白、打结素)、darpin、anticalin、adnectin、适体、Fv、Fab、Fab'、F(ab')2、肽模拟物分子、受体的天然配体或合成分子。
8.根据上述权利要求任一项所述的嵌合蛋白，其中识别结构域功能性地调节目标抗原或受体。
9.根据上述权利要求任一项所述的嵌合蛋白，其中识别结构域识别并结合但不功能性地调节目标抗原或受体。
10.根据上述权利要求任一项所述的嵌合蛋白，其中修饰的信号传导剂包含一个或多个突变，所述突变在信号传导剂的受体处赋予相对于野生型信号传导剂降低的亲和力或活性。
11.根据上述权利要求任一项所述的嵌合蛋白，其中修饰的信号传导剂包含一个或多个突变，所述突变相对于野生型信号传导剂赋予受体显著降低或消除的亲和力或活性。
12.根据上述权利要求任一项所述的嵌合蛋白，其中修饰的信号传导剂包含以下两者：(a)一个或多个突变，其赋予受体相对于野生型信号传导剂显著降低或消除的亲和力，和(b)一个或多个突变，其赋予受体相对于野生型信号传导剂降低的亲和力或活性；并且其中所述受体是不同的。
13.根据权利要求10所述的嵌合蛋白，其中所述一个或多个突变允许活性被减弱。
14.根据权利要求13所述的嵌合蛋白，其中激动或拮抗活性被减弱。
15.根据权利要求13或14所述的嵌合蛋白，其中修饰的信号传导剂包含一个或多个突变，所述突变将其活性从激动转变为拮抗。
16.根据权利要求10所述的嵌合蛋白，其中突变赋予降低的亲和力或活性，所述亲和力或活性可通过与一个或多个靶向部分连接而恢复。
17.根据权利要求11所述的嵌合蛋白，其中突变赋予显著降低或消除的亲和力或活性，所述亲和力或活性基本上不能通过与一个或多个靶向部分连接而恢复。
18.根据上述权利要求任一项所述的嵌合蛋白，其中修饰的信号传导剂选自干扰素、白细胞介素和肿瘤坏死因子中的一种或多种。
19.根据上述权利要求任一项所述的嵌合蛋白，其中信号传导剂是干扰素。
20.根据上述权利要求任一项所述的嵌合蛋白，其中嵌合蛋白适用于患有以下一种或多种的患者：癌症、感染、免疫病症、自身免疫疾病、心血管疾病、创伤、缺血相关疾病、神经变性疾病和/或代谢疾病。
21.一种嵌合蛋白，其包含：
(a)第一靶向部分，其包含识别并结合SIRP1α的识别结构域；
(b)第二靶向部分，其包含识别并结合PD-1的识别结构域；和
(b)人干扰素α2，其具有一个或多个突变，与野生型信号传导剂相比，所述突变在信号传导剂的受体处赋予降低的亲和力或活性，所述突变任选地选自L153A、R149A、M148A、R144X1、A145X2、R33A，其中
X1选自A、S、T、Y、L和I，
X2选自G、H、Y、K和D，并且
其中所述靶向部分和修饰的信号传导剂任选地与一个或多个连接子连接。
22.一种重组核酸组合物，其编码根据上述权利要求任一项所述的一种或多种嵌合蛋白。
23.一种宿主细胞，其包含根据权利要求22所述的核酸。
24.一种治疗癌症的方法，包括给有此需要的患者施用有效量的根据上述权利要求任一项所述的嵌合蛋白。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述癌症选自以下一种或多种：基底细胞癌、胆道癌；膀胱癌；骨癌；脑和中枢神经系统癌症；乳腺癌；腹膜癌；宫颈癌；绒毛膜癌；结肠和直肠癌；结缔组织癌；消化系统癌症；子宫内膜癌；食道癌；眼癌；头颈癌；胃癌(包括胃肠癌)；成胶质细胞瘤；肝细胞癌；肝癌；上皮内赘瘤；肾脏癌或肾癌；喉癌；白血病；肝脏癌症；肺癌(例如，小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞状细胞癌)；黑素瘤；骨髓瘤；成神经细胞瘤；口腔癌(唇、舌、口和咽)；卵巢癌；胰腺癌；前列腺癌；成视网膜细胞瘤；横纹肌肉瘤；直肠癌；呼吸系统癌症；唾液腺癌；肉瘤；皮肤癌；鳞状细胞癌；胃癌；睾丸癌；甲状腺癌；子宫癌或子宫内膜癌；泌尿系统癌症；外阴癌；包括霍奇金氏淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤在内的淋巴瘤，以及B细胞淋巴瘤(包括低级/滤泡非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)；小淋巴细胞(SL)NHL；中级/滤泡NHL；中级弥漫性NHL；高级成免疫细胞NHL；高级成淋巴细胞NHL；高级小非核裂细胞NHL；巨大肿块NHL；套细胞淋巴瘤；AIDS相关淋巴瘤；和瓦氏巨球蛋白血症；慢性淋巴细胞白血病(CLL)；急性成淋巴细胞性白血病(ALL)；毛细胞白血病；慢性成髓细胞性白血病；以及其它癌和肉瘤；和移植后淋巴组织增生性病症(PTLD)，以及与斑痣性错构瘤相关的异常血管增生、浮肿(例如，与脑肿瘤相关的浮肿)和梅格斯氏综合征。
26.根据权利要求24或25任一项所述的方法，其中所述癌症过表达Myc蛋白。
27.根据权利要求24-26任一项所述的方法，其中所述方法诱导和/或增强巨噬细胞对癌细胞的吞噬作用。
28.根据上述权利要求任一项所述的嵌合蛋白，其用作药物。
29.根据上述权利要求任一项所述的嵌合蛋白，其用于治疗癌症。
30.根据上述权利要求任一项所述的嵌合蛋白，其用于治疗肝炎。
31.根据上述权利要求任一项所述的嵌合蛋白在制备药物中的用途。
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