CN110522759B - miR-517b-3p抑制剂在治疗紫杉醇耐药乳腺癌中的应用 - Google Patents

miR-517b-3p抑制剂在治疗紫杉醇耐药乳腺癌中的应用 Download PDF

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    • A61P35/00—Antineoplastic agents
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Abstract

本发明公开了miR‑517b‑3p抑制剂在治疗紫杉醇耐药乳腺癌中的应用，本发明本研究应用miRNA抑制剂来提高耐药乳腺癌细胞对紫杉醇的反应性。本研究发现miR‑517b‑3p在紫杉醇耐药乳腺癌细胞中表达显著高于紫杉醇敏感乳腺癌细胞。合成miR‑517b‑3p抑制剂，可特异性靶向抑制乳腺癌细胞中miR‑517b‑3p的表达。发现miR‑517b‑3p抑制剂可以显著增加紫杉醇对耐药乳腺癌细胞的细胞毒性。miR‑517b‑3p抑制剂联合紫杉醇用药将为耐药乳腺癌治疗提供有效的途径。

Description

miR-517b-3p抑制剂在治疗紫杉醇耐药乳腺癌中的应用
技术领域
本发明涉及乳腺癌的治疗技术领域，更具体地，涉及miR-517b-3p抑制剂在治疗紫杉醇耐药乳腺癌中的应用。
背景技术
乳腺癌是女性最常见的肿瘤之一，其高发病率严重威胁着女性的身体健康。目前，乳腺癌的治疗以手术治疗结合化疗、放疗为主。
紫杉醇自1992年美国FDA批准应用于肿瘤临床以来，一直是抗肿瘤药物研究的热点，广泛应用于乳腺癌、卵巢癌、肺癌、胃肠道肿瘤、头颈部肿瘤等的治疗。紫杉醇是目前乳腺癌化疗的临床一线用药，通过与游离的微管蛋白结合，促进微管蛋白装配成稳定的微管，同时抑制其解聚，导致丧失了正常功能的微管束的产生和微管的固定，发挥干扰细胞有丝分裂和分裂间期细胞功能所必需的微管网络而起抗肿瘤作用。
然而，临床上使用紫杉醇进行化疗时，肿瘤对紫杉醇的化疗抵抗使得紫杉醇的药效降低，肿瘤对紫杉醇的耐药性已成为限制该药物临床应用的一个主要原因。
尽管已经报道的肿瘤耐药机制越来越多，已有各种针对这些可能机制设计的一些临床试验，以试图解决紫杉醇耐药问题。然而这些临床试验的效果仍然有限。
miRNA是近年来发现的一类长度约22nt的非编码小RNA分子，广泛参与调控胚胎发育、细胞增殖、凋亡、分化及肿瘤发生发展等多种生理病理进程，研究显示miRNA在调节肿瘤细胞对化疗药物敏感性中也起着重要作用，近年来随着miRNA在肿瘤发生和耐药性获得过程中的研究不断深入，有可能筛选出逆转乳腺癌紫杉醇耐药及提高乳腺癌临床化疗效果的相关分子。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种miR-517b-3p抑制剂可以显著增加紫杉醇耐药乳腺癌细胞的化疗敏感性。为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案予以实现的：
发明人偶然发现，紫杉醇耐药乳腺癌细胞MCF-7/Taxol和紫杉醇敏感乳腺癌细胞MCF-7中，miR-517b-3p(其核苷酸序列如SEQ ID NO：2，5’-AUCGUGCAUCCCUUUAGAGUGU-3’)在紫杉醇耐药乳腺癌细胞中表达量显著上调。进一步研究发现miR-517b-3p抑制剂可以增强紫杉醇疗效或抑制乳腺癌对紫杉醇的耐药性。进一步发现miR-517b-3p抑制剂联合紫杉醇用药将为耐药乳腺癌治疗提供有效的途径。
因此本发明要求保护以下内容：
miR-517b-3p抑制剂在制备降低耐药癌症细胞的耐药性的药物中的应用，所述药物为紫杉醇。
miR-517b-3p抑制剂在制备提高耐药癌症细胞对药物诱导的细胞凋亡敏化作用的药物中的应用，所述药物为紫杉醇。
miR-517b-3p抑制剂在制备抑制耐药癌症细胞的迁移和/或侵袭力的药物中的应用，所述药物为紫杉醇。
miR-517b-3p抑制剂在制备紫杉醇治疗癌症的增效剂药物中的应用。
优选地，所述癌症为乳腺癌。
优选地，所述miR-517b-3p抑制剂为RNA单链，序列如下：5’-ACACUCUAAAGGGAUGCACGAU-3’，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，每个核苷酸都被2’-甲氧基修饰。与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
目前乳腺癌紫杉醇耐药问题仍然缺乏有效的解决方法。本研究应用miRNA抑制剂来提高耐药乳腺癌细胞对紫杉醇的反应性。本研究发现miR-517b-3p在紫杉醇耐药乳腺癌细胞中表达显著高于紫杉醇敏感乳腺癌细胞。合成miR-517b-3p抑制剂，可特异性靶向抑制乳腺癌细胞中miR-517b-3p的表达。发现miR-517b-3p抑制剂可以显著增加紫杉醇对耐药乳腺癌细胞的细胞毒性。miR-517b-3p抑制剂联合紫杉醇用药将为耐药乳腺癌治疗提供有效的途径。
附图说明
图1为紫杉醇耐药乳腺癌细胞MCF-7/Taxol和紫杉醇敏感乳腺癌细胞MCF-7中miR-517b-3p的相对表达量。
图2为在紫杉醇耐药乳腺癌细胞MCF-7/Taxol中miR-517b-3p抑制剂对miR-517b-3p表达的抑制作用。
图3为miR-517b-3p抑制剂对紫杉醇对耐药乳腺癌细胞MCF-7/Taxol细胞毒性的影响。
图4为MCF-7/Taxol中miR-517b-3p抑制剂对紫杉醇诱导的耐药肿瘤细胞凋亡的影响。
图5为miR-517b-3p抑制剂对MCF-7/Taxol耐药细胞迁移和侵袭力的影响。
具体实施方式
下面结合说明书附图和具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
实施例1 miR-517b-3p在腺癌细胞中表达差异
一、实验方法
人紫杉醇耐药乳腺癌细胞MCF-7/Taxol和人紫杉醇敏感乳腺癌细胞MCF-7，其培养条件如下：用含10％的胎牛血清的DMEM高糖培养基，于含5％二氧化碳的37℃恒温培养箱中进行细胞培养。Trizol法分别提取MCF-7/Taxol和MCF-7细胞的RNA，采用实时荧光定量PCR实验分析MCF-7/Taxol耐药细胞和MCF-7敏感细胞中miR-517b-3p的表达量。
二、实验结果
如图1显示，实时荧光定量PCR实验证实miR-517b-3p在紫杉醇耐药乳腺癌细胞中的表达的确显著高于敏感细胞。
实施例2 miR-517b-3p抑制剂靶向miR-517b-3p的表达
一、实验方法
合成miR-517b-3p抑制剂，所述抑制剂为RNA单链，序列如下：5’-ACACUCUAAAGGGAUGCACGAU-3’，其中每个核苷酸都被2’-甲氧基修饰。将miR-517b-3p抑制剂转染MCF-7/Taxol细胞。
所用细胞模型为人紫杉醇耐药乳腺癌细胞MCF-7/Taxol，在MCF-7/Taxol细胞中分别转染50nM的miR-517b-3p抑制剂或50nM的阴性对照，用荧光定量PCR实验检测细胞内miR-517b-3p的表达变化。
二、实验结果
如图2显示，将miR-517b-3p抑制剂转染MCF-7/Taxol细胞，可特异性靶向抑制乳腺癌细胞中miR-517b-3p的表达。
实施例3 miR-517b-3p抑制剂显著增加紫杉醇对耐药乳腺癌细胞的细胞毒性
一、实验方法
随后采用紫杉醇耐药乳腺癌细胞MCF-7/Taxol，给予紫杉醇，观察miR-517b-3p抑制剂对紫杉醇细胞毒性的影响。
在MCF-7/Taxol细胞中首先转染50nM的阴性对照或miR-517b-3p抑制剂，48小时后，分别给予0.25、0.5、1、2.5、5、10、20μmol/L的紫杉醇，48小时后使用MTT方法测定细胞存活率。
二、实验结果
如图3显示，发现miR-517b-3p抑制剂在MCF-7/Taxol细胞中，可以显著增加紫杉醇对耐药乳腺癌细胞的细胞毒性，显著逆转MCF-7/Taxol细胞的紫杉醇耐药性。
实施例4 miR-517b-3p抑制剂提高了紫杉醇耐药乳腺癌细胞对紫杉醇诱导的细胞凋亡的敏化作用
一、实验方法
在MCF-7/Taxol细胞中首先转染50nM的阴性对照或miR-517b-3p抑制剂，48小时后，给予8μmol/L的紫杉醇，12小时后使用annexin-V/FITC方法测定细胞凋亡率。
二、实验结果
如图4显示，给药后，与阴性对照组相比，miR-517b-3p抑制剂大大提高了紫杉醇耐药乳腺癌细胞对紫杉醇诱导的细胞凋亡敏化作用。
实施例5 miR-517b-3p抑制剂抑制耐药乳腺癌细胞的迁移和侵袭力
一、实验方法
在MCF-7/Taxol细胞中首先转染50nM的阴性对照或miR-517b-3p抑制剂，48小时后，使用不加Matrigel的Transweill实验测定miR-517b-3p抑制剂对耐药肿瘤细胞迁移力的影响；使用加Matrigel的Transweill实验测定miR-517b-3p抑制剂对耐药肿瘤细胞侵袭力的影响。
二、实验结果
如图5显示，与阴性对照组相比，miR-517b-3p抑制剂还显著抑制了MCF-7/Taxol耐药细胞的迁移和侵袭力。
序列表
<110> 广州医科大学
<120> miR-517b-3p抑制剂在治疗紫杉醇耐药乳腺癌中的应用
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
acacucuaaa gggaugcacg au 22
<210> 2
<211> 22
<212> RNA
<213> Homo sapiens
<400> 2
aucgugcauc ccuuuagagu gu 22

Claims (2)

1.miR-517b-3p抑制剂在制备降低耐药癌症细胞的耐药性的药物中的应用，其特征在于，所述药物为紫杉醇，所述癌症为乳腺癌，所述miR-517b-3p抑制剂为RNA单链，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，每个核苷酸都被2’-甲氧基修饰。
2.miR-517b-3p抑制剂在制备紫杉醇治疗癌症的增效剂药物中的应用，其特征在于，所述癌症为乳腺癌，所述miR-517b-3p抑制剂为RNA单链，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，每个核苷酸都被2’-甲氧基修饰。
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