CN109999023A - 卤化ⅱ型聚酮类抗生素在抑制乳腺癌细胞增殖中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了卤化Ⅱ型聚酮类抗生素在抑制乳腺癌细胞增殖中的应用，卤化Ⅱ型聚酮类抗生素能够对抑制乳腺癌细胞株shz‑88的增值有显著效果。

Description

卤化Ⅱ型聚酮类抗生素在抑制乳腺癌细胞增殖中的应用
技术领域
本发明属于医疗技术领域，具体涉及卤化Ⅱ型聚酮类抗生素在抑制乳腺癌细胞增殖中的应用。
背景技术
乳腺癌是我国女性常见的恶性肿瘤之一，为女性肿瘤第二大致死病因，严重危害了患者的身心健康和生命安全。近年来，我国乳腺癌发病率和死亡人数呈逐年上升，且具有年轻化的趋势。目前欠缺防治乳腺癌的有效药物，部分药物因其毒副作用限制了在临床上的应用。乳腺癌发病率高，侵袭性强，极易复发和转移，因此我们要寻求新的治疗药物降低或抑制乳腺癌的发生。卤化Ⅱ型聚酮类抗生素化合物是从贵州梵净山土壤链霉菌分离菌株Streptomyces sp.FJS31-2中分离得到的抗生素，对乳腺癌细胞株shz-88表现出了很好的抗肿瘤活性，有望为进一步开展药物防治乳腺癌研究以及在临床推广应用提供参考。
发明内容
本发明的目的是提供卤化Ⅱ型聚酮类抗生素在抑制乳腺癌细胞增殖中的应用，能够对抑制乳腺癌细胞的增值有显著效果，具体的对抑制乳腺癌细胞株shz-88的增值有显著效果。
本发明所采用的技术方案是，卤化Ⅱ型聚酮类抗生素在抑制乳腺癌细胞增殖中的应用，具体的涉及卤化Ⅱ型聚酮类抗生素在抑制乳腺癌细胞shz-88增殖中的应用。
本发明的其他特征还在于，
卤化Ⅱ型聚酮类抗生素化合物的结构为：
本发明的有益效果为，通过将卤化Ⅱ型聚酮类抗生素化合物用于临床治疗乳腺癌疾病，可以抑制乳腺癌细胞增殖，为治疗乳腺癌的临床研究提供了非常高的研究价值。
附图说明
图1LFA-1a与不同浓度的卤化Ⅱ型聚酮类抗生素化合物的荧光淬灭效果分析图
图2为卤化Ⅱ型聚酮类抗生素对PPARγ基因表达影响情况分析图；
图3为卤化Ⅱ型聚酮类抗生素对MAPK基因表达影响情况分析图；
图4为卤化Ⅱ型聚酮类抗生素对CREB基因表达影响情况分析图；
图5为卤化Ⅱ型聚酮类抗生素对GSK3B基因表达影响情况分析图；
图6为未加入卤化Ⅱ型聚酮类抗生素化合物的乳腺癌细胞显微镜下细胞数量图；
图7为加入浓度为2μM/mL的卤化Ⅱ型聚酮类抗生素化合物的乳腺癌细胞显微镜下细胞数量图；
图8为加入浓度为4μM/mL的卤化Ⅱ型聚酮类抗生素化合物的乳腺癌细胞显微镜下细胞数量图；
图9为加入浓度为8μM/mL的卤化Ⅱ型聚酮类抗生素化合物的乳腺癌细胞显微镜下细胞数量图；
图10为加入浓度为16μM/mL的卤化Ⅱ型聚酮类抗生素化合物的乳腺癌细胞显微镜下细胞数量图；
图11为加入浓度为32μM/mL的卤化Ⅱ型聚酮类抗生素化合物的乳腺癌细胞显微镜下细胞数量图；
图12为加入浓度为64μM/mL的卤化Ⅱ型聚酮类抗生素化合物的乳腺癌细胞显微镜下细胞数量图；
图13为加入浓度为128μM/mL的卤化Ⅱ型聚酮类抗生素化合物的乳腺癌细胞显微镜下细胞数量图；
图14为加入浓度为256μM/mL的卤化Ⅱ型聚酮类抗生素化合物的乳腺癌细胞显微镜下细胞数量图；
图15是乳腺癌细胞加入不同浓度卤化Ⅱ型聚酮类抗生素化合物后乳腺癌细胞存活率变化线形图。
图中，1.曲线a，2.曲线b，3曲线c，4.曲线d，5.曲线e，6.曲线f，7.曲线g，8.曲线h，9.曲线i，10.曲线j。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明进行详细说明。
整合素调控乳腺癌生长、侵袭和转移，是乳腺癌靶向药物治疗的重要靶点，卤化Ⅱ型聚酮类抗生素通过与乳腺癌细胞表面受体整合素a亚基LFA-1a/ITGAL结合，激动整合素LFA-1，从而使PI3K/Akt通路下游促进乳腺癌细胞凋亡和分裂的PPARγ基因、MAPK基因、CREB基因以及GSK3B基因的基因表达水平提高，加速乳腺癌细胞的凋亡和分裂，达到抑制乳腺癌细胞增殖的作用。
图1为LFA-1a与不同浓度的卤化Ⅱ型聚酮类抗生素化合物的荧光淬灭效果分析图，利用在线工具PharmMapper对卤化Ⅱ型聚酮类抗生素化合物可能的抗癌靶点进行了预测后得到的分析图，如图，横坐标代表蛋白在不同波长处的吸收，纵坐标代表荧光强度，曲线a1代表未加入卤化Ⅱ型聚酮类抗生素化合物的LFA-1a蛋白的荧光强度；曲线b2代表加入浓度为0.1μmol/L的卤化Ⅱ型聚酮类抗生素化合物的LFA-1a蛋白的荧光强度；曲线c3代表加入浓度为0.2μmol/L的卤化Ⅱ型聚酮类抗生素化合物的LFA-1a蛋白的荧光强度；以此类推，曲线d～g分别代表加入浓度为0.3μmol/L、0.4μmol/L、0.5μmol/L、0.6μmol/L、0.7μmol/L、0.8μmol/L、0.9μmol/L、1.0μmol/L的卤化Ⅱ型聚酮类抗生素化合物的LFA-1a蛋白的荧光强度。由此可见，随着卤化Ⅱ型聚酮类抗生素化合物浓度的增加，LFA-1a蛋白被结合的越来越多，剩余的蛋白含量越来越少，从而导致荧光强度越来越弱，不断下降。表明卤化Ⅱ型聚酮类抗生素与a亚基LFA-1a/ITGAL之间存在着相互作用。
结果表明该化合物很可能具有与整合素a亚基ITGAL(Integrin alpha-L，LFA-1a)等蛋白结合生物活性，卤化Ⅱ型聚酮类抗生素化合物与LFA-1a(αLβ2)具有结合效应。
如图2至5所示，Control代表不加卤化Ⅱ型聚酮类抗生素的细胞对照；8h、12h、16h代表向细胞加入浓度为20μM/ml的卤化Ⅱ型聚酮类抗生素孵育8h、12h、16h。
PPARγ基因、MAPK基因、CREB基因以及GSK3B基因均为PI3K/Akt通路的下游基因，且以上四种基因均是乳腺癌细胞的促凋亡基因，从图中可以看出，加入卤化Ⅱ型聚酮类抗生素后，PARγ基因、MAPK基因、CREB基因以及GSK3B的基因表达水平均有明显的提高，从而可以判断卤化Ⅱ型聚酮类抗生素可以提升PPARγ基因、MAPK基因、CREB基因以及GSK3B基因的基因表达水平。
为了更好的理解本发明的实质，下面将用卤化Ⅱ型聚酮类抗生素的药理实验来说明其在抑制乳腺癌细胞增殖中的应用：
(1)细胞复苏：取出-80℃冻存的乳腺癌细胞株shz-88，迅速放入37℃水浴中解冻；将细胞悬液转移至含2mL的完全培养基的15mL离心管中，800rpm，离心3min。取1mL完全培养基重新悬浮沉淀的细胞，并转移至含3mL完全培养基的细胞培养瓶中吹散均匀，置于37℃CO2培养箱培养。
(2)细胞传代：弃去培养瓶中的培养基，PBS液清洗2次，加入1mL0.25％胰蛋白酶消化倒置显微镜下观察细胞形态，收缩变圆时用3mL完全培养培养基终止消化。轻轻吹散细胞培养瓶内的贴壁细胞，将细胞悬液转移至15mL离心管，800rpm，离心3min。取1mL完全培养基重新悬浮沉淀的细胞，并转移至含3mL完全培养基的细胞培养瓶中吹散均匀，置于37℃、5％CO2培养箱中培养。
(3)细胞冻存：取出铺展至细胞培养瓶底部面积80％的细胞，PBS清洗2次，加入1mL0.25％胰蛋白酶消化倒置显微镜下观察细胞形态，收缩变圆时用3mL完全培养培养基终止消化。轻轻吹散细胞培养瓶内的贴壁细胞，将细胞悬液转移至15mL离心管，800rpm，离心3min。细胞沉淀用1mL冻存液重新悬浮后转移至1.8mL冻存管内，4℃放置30min，-20℃放置1h，置于-80℃保存。
(4)细胞给药：取出传代的细胞，弃掉培养瓶内的培养基，PBS清洗2次，加入1mL0.25％胰蛋白酶消化，当细胞收缩变圆时，3mL完全培养培养基终止消化。轻轻吹打细胞，使细胞培养瓶内的贴壁细胞充分脱落，收集细胞悬液转移至15mL离心管，800rpm，离心3min。细胞沉淀用完全培养基调整细胞浓度为5×104个/mL，取100μL细胞悬液，分别加入96孔板培养孔，置于37℃CO2培养箱培养24h。待细胞生长至培养孔的80％时，取6μL的卤化Ⅱ型聚酮类抗生素化合物母液加入到1.5mL离心管中，用完全培养基稀释至1mL。依次将该药物孔稀释成2μM、4μM、8μM、16μM、32μM、64μM、128μM、256μM等8个浓度作为测试浓度，每个药物组平行6个复孔，37℃、5％CO2培养箱作用24h后结束培养。
(5)吸光度测定：弃去96孔板内的液体，PBS清洗每个孔板至无化合物残留，加入90μL完全培养基和10μL cck8试剂，37℃继续孵育4h后终止培养，酶标仪于490nm处测定OD值。
实验分析如下：
本实验采取了不同浓度的卤化Ⅱ型聚酮类抗生素化合物对乳腺癌细胞株shz-88通过上述步骤进行实验，从图6～14中可以看出，当药物浓度在2、4μM时，在倒置显微镜下观察细胞形态及数量上与对照组并无明显差异；但当药物浓度在8μM时，细胞不仅在数量上有所减少，而且形态发生变化，部分细胞崩解；当药物浓度增大至16μM时，细胞形态收缩变圆增多，细胞崩解较为明显；当药物浓度增大至32μM时，细胞数量明显减少，几乎看不到正常形态的活细胞；随着剂量的加大，细胞死亡数目增加，当药物浓度增加至128μM时，绝大部分细胞漂浮，绝大数细胞死亡。
根据各组OD490值的平均值和标准差，按以下公式能够计算处细胞生长抑制率：
IC50(half maximal inhibitory concentration)是指药物的半抑制浓度。它能指示某一药物或者物质(抑制剂)在抑制某些生物程序，如细胞死亡一半时的浓度或剂量，IC50值可以用来衡量药物诱导凋亡的能力，即诱导能力越强，该数值越低，也可以反向说明某种细胞对药物的耐受程度。
本实验采用SPSS18.0及GraphPadPrism6.0统计软件来计算IC50，经计算，本实验中IC50的值为22.86μm，即乳腺癌细胞对卤化Ⅱ型聚酮类抗生素化合物的耐受程较低。
表1不同浓度卤化Ⅱ型聚酮类抗生素化合物对乳腺癌细胞抑制率分析表
如表1所示，卤化Ⅱ型聚酮类抗生素化合物的浓度越高，对乳腺癌细胞的细胞抑制率越高。
如图15所示，卤化Ⅱ型聚酮类抗生素化合物的浓度越高，对乳腺癌细胞的细胞存活率越低。

Claims (3)

1.卤化Ⅱ型聚酮类抗生素在抑制乳腺癌细胞增殖中的应用。
2.如权利要求1所述的卤化Ⅱ型聚酮类抗生素在抑制乳腺癌细胞增殖中的应用，具体的涉及卤化Ⅱ型聚酮类抗生素在抑制乳腺癌细胞株shz-88的增殖中的应用。
3.如权利要求1或2所述的卤化Ⅱ型聚酮类抗生素在抑制乳腺癌细胞增殖中的应用，其特征在于，所述卤化Ⅱ型聚酮类抗生素化合物的结构为：
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113045579A (zh) * 2019-12-26 2021-06-29 华东师范大学 多环不饱和缩酮化合物及其合成方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012010606A1 (en) * 2010-07-20 2012-01-26 Instituto Biomar, S.A. Hexacyclic polyketides as kinase inhibitors
WO2013166206A1 (en) * 2012-05-01 2013-11-07 The Regents Of The University Of California A prenylated anthracenone polyketide as an immunosuppressant
CN106432262A (zh) * 2016-06-03 2017-02-22 遵义医学院 一种链霉菌来源卤化聚酮化合物、制备方法及应用
CN107937453A (zh) * 2017-11-22 2018-04-20 遵义医学院 一种二氯取代的ii型卤化聚酮类化合物的制备方法及抗菌活性应用
CN107961233A (zh) * 2017-12-04 2018-04-27 遵义医学院 三氯取代的ii型卤化聚酮类化合物的应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012010606A1 (en) * 2010-07-20 2012-01-26 Instituto Biomar, S.A. Hexacyclic polyketides as kinase inhibitors
WO2013166206A1 (en) * 2012-05-01 2013-11-07 The Regents Of The University Of California A prenylated anthracenone polyketide as an immunosuppressant
CN106432262A (zh) * 2016-06-03 2017-02-22 遵义医学院 一种链霉菌来源卤化聚酮化合物、制备方法及应用
CN107937453A (zh) * 2017-11-22 2018-04-20 遵义医学院 一种二氯取代的ii型卤化聚酮类化合物的制备方法及抗菌活性应用
CN107961233A (zh) * 2017-12-04 2018-04-27 遵义医学院 三氯取代的ii型卤化聚酮类化合物的应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
YUHONG LU等: ""Zunyimycins B and C, New Chloroanthrabenzoxocinones Antibiotics against Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus and Enterococci from Streptomyces sp. FJS31-2"", 《MOLECULES》 *
王荫荫: ""卤化聚酮类抗生素zunyimycins抑菌及抗肿瘤活性初步分析"", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 *
王荫荫等: ""微生物来源卤化天然产物研究进展"", 《遵义医学院学报》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113045579A (zh) * 2019-12-26 2021-06-29 华东师范大学 多环不饱和缩酮化合物及其合成方法
CN113045579B (zh) * 2019-12-26 2023-02-03 华东师范大学 多环不饱和缩酮化合物及其合成方法

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