CN110487873A - 一种用于心衰标志物b型利钠肽检测的微流控光电化学传感器的制备方法 - Google Patents

一种用于心衰标志物b型利钠肽检测的微流控光电化学传感器的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种用于心衰标志物B型利钠肽检测的微流控光电化学传感器的制备方法。所述的微流控光电化学传感器包括微流控底板，微流控上芯片，微流控下芯片，上芯片与下芯片之间的隔膜四部分。其中，微流控上芯片包括电极槽用于放对电极，参比电极，工作电极，进样口及微通道，清洗口及微通道，微流控下芯片包括工作电极槽，气体阀门口及微通道；将光电化学三电极集成到微流控传感器上，利用泵的控制，可以实现自动检测，无需人为干扰可快速得到准确的检测结果。该微流控光电化学传感器可以实现对B型利钠肽的快速、高效、灵敏、自动化检测。

Description

一种用于心衰标志物B型利钠肽检测的微流控光电化学传感 器的制备方法
技术领域
本发明涉及一种微流控光电化学传感器，具体的说，设计一种用于心衰标志物B型利钠肽检测的微流控光电化学传感器的制备方法。
背景技术
心力衰竭是多种心血管疾病的严重和终末阶段，是全球慢性心血管疾病防治的重要内容。据统计，我国心衰患病率为0.9%，女性患病率高于男性，并且随着年龄增高，心衰患病率显著上升；专家介绍到：心衰是可防可治的，只要早期发现、早期治疗，治愈率可大大提高；因此早期诊断对心衰的预防和治疗具有重要的临床意义。
B型利钠肽是目前诊断心力衰竭的最佳标志物之一，对心衰的早期诊断具有重要意义。目前，对于心衰标志物的检测方法很多，如放射免疫分析法、免疫放射测量法、电化学发光分析法等，但多数检测方法繁琐，操作复杂，费用昂贵，检出限高，因此，建立一种快速、简便、灵敏的检测方法有重要意义。
本发明构建的微流控光电化学传感器是基于微流控传感技术和光电转换来确定待测物浓度的一类检测技术，微流控传感器具有体积小，试剂消耗少，仪器自动化，灵敏度高等优点，近年来，微流控传感器作为一种新型的分析平台具有微型化、自动化、集成化、快速和便携等优点，已经在很多领域获得了广泛的应用，例如分析化学、材料学、细胞生物学等领域。然而，基于微流控的光电化学传感器，通过可见光LED的照射，激发光电材料电子空穴对的分离，通过转化为电信号检测被测物质的浓度。本发明将光电化学传感器技术集成到微流控芯片上，实现了对心衰标志物B型利钠肽的快速、高效、灵敏的检测。
发明内容
本发明的目的是提供一种简单、快速、低成本、高灵敏的新型微流控光电化学传感器的制备方法，并将其应用于心衰标志物B型利钠肽的检测。
为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：
一种用于心衰标志物B型利钠肽检测的微流控光电化学传感器的制备方法，所述微流控光电化学传感器由微流控底板，微流控上芯片，微流控下芯片，上芯片与下芯片之间的隔膜四部分组成，其中，微流控上芯片包括电极槽用于放对电极，参比电极，工作电极，进样口及微通道，清洗口及微通道，微流控下芯片包括工作电极槽，气体阀门口及微通道；
其中，所述的微流控底板为氧化铟锡ITO导电玻璃，用于做工作电极和键合微流控通道；
其中，所述的微流控上芯片和下芯片之间的隔膜与气体阀门口及微通道，通过开关共同控制进样口和清洗口的开和关；
其中，所述的进样口及微通道包括B型利钠肽捕获抗体Ab1进样口及微通道，缓冲溶液PBS进样口及微通道，含抗坏血酸的缓冲溶液进样口及微通道，牛血清蛋白BSA进样口及微通道，B型利钠肽抗原BNP标准溶液进样口及微通道。
一种用于心衰标志物B型利钠肽检测的微流控光电化学传感器的制备方法，包括以下步骤：
（1）用计算机设计软件AUTOCAD设计和绘制微流控芯片的通道图形；
（2）利用设计的图形绘制掩模版，并且用标准的软光刻技术加工微流控聚二甲基硅氧烷PDMS芯片，包括微流控上芯片，下芯片，上芯片与下芯片之间的隔膜；
（3）将8 cm × 3 cm的ITO导电玻璃，依次用丙酮、乙醇和超纯水分别超声清洗30 min，氮气吹干；
（4）将20 µL、6.0 ~ 8.0 mg/mL的氧化锌ZnO溶液滴涂在ITO导电玻璃的导电面，室温下晾干，继续滴涂20 µL、3.0 ~ 5.0 mg/mL的碘氧铋/硫化铋BiOI/Bi2S3溶液，室温下晾干，再继续滴涂8 µL、2.0 ~ 4.0 mg/mL的聚多巴胺PDA，室温下晾干，得到ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA修饰的ITO导电玻璃；
（5）将上述步骤（2）中制备的微流控下芯片和步骤（4）中ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA修饰的ITO导电玻璃一起进行氧气等离子体处理，然后将微流控下芯片与ITO导电玻璃键合，再将其和上芯片与下芯片之间的隔膜一起进行氧气等离子体处理并进行键合，继续将其和微流控上芯片一起进行氧气等离子体处理，并进行键合，即完成微流控芯片制备；
（6）通过进样口5用注射泵以10 ~ 30 µL/min注射10 µg/mL的B型利钠肽捕获抗体Ab1，到微流控芯片工作电极槽中ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA，4 ℃冰箱中孵育40 ~ 60 min，进样口7注射缓冲溶液进行洗涤，得到ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA/Ab1；
（7）通过进样口6用注射泵以10 ~ 30 µL/min注射质量分数为0.1 ~ 1.0 %的牛血清蛋白BSA溶液到工作电极槽中ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA/Ab1，以封闭电极表面上未结合Ab1的非特异性活性位点，4 ℃冰箱中晾干，进样口7注射缓冲溶液进行洗涤，得到ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA/Ab1/BSA；
（8）通过进样口8用注射泵以10 ~ 30 µL/min注射0.1 pg/mL ~ 200 ng/mL不同浓度的B型利钠肽抗原BNP标准溶液到工作电极槽中ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA/Ab1/BSA，4℃冰箱中孵育40 ~ 60 min，进样口7注射缓冲溶液进行洗涤，制得了修饰完全的ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA/Ab1/BSA/BNP微流控光电化学传感器，即一种用于心衰标志物B型利钠肽检测的微流控光电化学传感器。
优选地，第（2）步中，所述的微流控图形绘制掩模版，其尺寸大小为电极槽直径为2000 ~ 3000 µm，连接三电极微通道宽度为800 ~ 900 µm，进样口直径为1000 ~ 1200 µm，进样通道宽度为600 ~ 800 µm，清洗微通道宽度为800 ~ 1000 µm，气体阀门微通道宽度为1000 ~ 1200 µm，气体阀门口直径为1000 ~ 1200 µm，所述微流控通道的进口和出口均具有弧度设计，保证液体流畅通过。
优选地，第（3）步中，ITO导电玻璃是工作电极，同时也是微流控芯片的底板。
优选地，第（4）步中，得到的ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA修饰的ITO导电玻璃，修饰ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA的位置对应微流控上芯片和微流控下芯片工作电极槽的位置。
优选地，第（5）步中，等离子体处理时间为30s ~ 60s，且最后键合的微流控芯片放入烘箱80 ℃下加热10分钟，使芯片间的键合更加牢固。
优选地，第（6）（7）（8）步中，微流控上芯片和下芯片之间的隔膜与气体阀门口及微通道，通过开关共同控制进样口和清洗口的开和关。
本发明的有益成果
(1) 本发明制备的微流控光电化学传感器可以克服传统光电化学传感器电解质需求量大、重复性差、使用寿命短等缺点，能定量的进行小分子、蛋白质的光电化学检测，具有广阔的应用前景。
(2) 本发明制备的微流控光电化学传感器具有检测灵敏度高、检出限低、重复性高等优点，同时三电极体系在微流控传感器上集成化，配合特定仪器，可以实现传感器的自动检测，无需人为干扰即可快速得到准确的检测结果。
(3) 本发明采用LED作为激发光源，实现对心衰标志物B型利钠肽的灵敏检测，该发明为实现在微流控芯片上的光电化学传感器提供了重要的基础和技术突破。
附图说明
图1是本发明提供的微流控上芯片示意图；
图2是本发明提供的微流控下芯片示意图；
图3是本发明提供的微流控上芯片与下芯片之间隔膜示意图；
图4是本发明提供的微流控光电化学传感器器件的结构示意图；
附图标记说明
1 参比电极槽；2 工作电极槽；3 对电极槽；4 清洗口及微通道；5 B型利钠肽捕获抗体Ab1进样口及微通道；6 牛血清蛋白BSA进样口及微通道；7 缓冲溶液进样口及微通道；8 B型利钠肽抗原BNP标准溶液进样口及微通道；9 抗坏血酸的缓冲溶液进样口及微通道；10，11，12，13，14，15，16，17，18，19为气体阀门口及微通道。
具体实施方式
实施例1
一种用于心衰标志物B型利钠肽检测的微流控光电化学传感器的制备方法，制备步骤如下：
（1）用计算机设计软件AUTOCAD设计和绘制微流控芯片的通道图形；
（2）利用设计的图形绘制掩模版，并且用标准的软光刻技术加工微流控聚二甲基硅氧烷PDMS芯片，包括微流控上芯片，下芯片，上芯片与下芯片之间的隔膜；
（3）将8 cm × 3 cm的ITO导电玻璃，依次用丙酮、乙醇和超纯水分别超声清洗30 min，氮气吹干；
（4）将20 µL、6.0 mg/mL的氧化锌ZnO溶液滴涂在ITO导电玻璃的导电面，室温下晾干，继续滴涂20 µL、3.0 mg/mL的碘氧铋/硫化铋BiOI/Bi2S3溶液，室温下晾干，再继续滴涂8 µL、2.0 mg/mL的聚多巴胺PDA，室温下晾干，得到ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA修饰的ITO导电玻璃；
（5）将上述步骤（2）中制备的微流控下芯片和步骤（4）中ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA修饰的ITO导电玻璃一起进行氧气等离子体处理，然后将微流控下芯片与ITO导电玻璃键合，再将其和上芯片与下芯片之间的隔膜一起进行氧气等离子体处理并进行键合，继续将其和微流控上芯片一起进行氧气等离子体处理，并进行键合，即完成微流控芯片制备；
（6）通过进样口5用注射泵以10 µL/min注射10 µg/mL的B型利钠肽捕获抗体Ab1，到微流控芯片工作电极槽中ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA，4 ℃冰箱中孵育40 min，进样口7注射缓冲溶液进行洗涤，得到ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA/Ab1；
（7）通过进样口6用注射泵以10 µL/min注射质量分数为0.1 %的牛血清蛋白BSA溶液到工作电极槽中ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA/Ab1，以封闭电极表面上未结合Ab1的非特异性活性位点，4 ℃冰箱中晾干，进样口7注射缓冲溶液进行洗涤，得到ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA/Ab1/BSA；
（8）通过进样口8用注射泵以10 µL/min注射0.1 pg/mL ~ 200 ng/mL不同浓度的B型利钠肽抗原BNP标准溶液到工作电极槽中ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA/Ab1/BSA，4 ℃冰箱中孵育40min，进样口7注射缓冲溶液进行洗涤，制得了修饰完全的ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA/Ab1/BSA/BNP微流控光电化学传感器，即一种用于心衰标志物B型利钠肽检测的微流控光电化学传感器。
实施例2
一种用于心衰标志物B型利钠肽检测的微流控光电化学传感器的制备方法，制备步骤如下：
（1）用计算机设计软件AUTOCAD设计和绘制微流控芯片的通道图形；
（2）利用设计的图形绘制掩模版，并且用标准的软光刻技术加工微流控聚二甲基硅氧烷PDMS芯片，包括微流控上芯片，下芯片，上芯片与下芯片之间的隔膜；
（3）将8 cm × 3 cm的ITO导电玻璃，依次用丙酮、乙醇和超纯水分别超声清洗30 min，氮气吹干；
（4）将20 µL、7.0 mg/mL的氧化锌ZnO溶液滴涂在ITO导电玻璃的导电面，室温下晾干，继续滴涂20 µL、4.0 mg/mL的碘氧铋/硫化铋BiOI/Bi2S3溶液，室温下晾干，再继续滴涂8 µL、3.0 mg/mL的聚多巴胺PDA，室温下晾干，得到ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA修饰的ITO导电玻璃；
（5）将上述步骤（2）中制备的微流控下芯片和步骤（4）中ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA修饰的ITO导电玻璃一起进行氧气等离子体处理，然后将微流控下芯片与ITO导电玻璃键合，再将其和上芯片与下芯片之间的隔膜一起进行氧气等离子体处理并进行键合，继续将其和微流控上芯片一起进行氧气等离子体处理，并进行键合，即完成微流控芯片制备；
（6）通过进样口5用注射泵以20 µL/min注射10 µg/mL的B型利钠肽捕获抗体Ab1，到微流控芯片工作电极槽中ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA，4 ℃冰箱中孵育50 min，进样口7注射缓冲溶液进行洗涤，得到ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA/Ab1；
（7）通过进样口6用注射泵以20 µL/min注射质量分数为0.5 %的牛血清蛋白BSA溶液到工作电极槽中ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA/Ab1，以封闭电极表面上未结合Ab1的非特异性活性位点，4 ℃冰箱中晾干，进样口7注射缓冲溶液进行洗涤，得到ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA/Ab1/BSA；
（8）通过进样口8用注射泵以20 µL/min注射0.1 pg/mL ~ 200 ng/mL不同浓度的B型利钠肽抗原BNP标准溶液到工作电极槽中ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA/Ab1/BSA，4℃冰箱中孵育50min，进样口7注射缓冲溶液进行洗涤，制得了修饰完全的ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA/Ab1/BSA/BNP微流控光电化学传感器，即一种用于心衰标志物B型利钠肽检测的微流控光电化学传感器。
实施例3
一种用于心衰标志物B型利钠肽检测的微流控光电化学传感器的制备方法，制备步骤如下：
（1）用计算机设计软件AUTOCAD设计和绘制微流控芯片的通道图形；
（2）利用设计的图形绘制掩模版，并且用标准的软光刻技术加工微流控聚二甲基硅氧烷PDMS芯片，包括微流控上芯片，下芯片，上芯片与下芯片之间的隔膜；
（3）将8 cm × 3 cm的ITO导电玻璃，依次用丙酮、乙醇和超纯水分别超声清洗30 min，氮气吹干；
（4）将20 µL、8.0 mg/mL的氧化锌ZnO溶液滴涂在ITO导电玻璃的导电面，室温下晾干，继续滴涂20 µL、5.0 mg/mL的碘氧铋/硫化铋BiOI/Bi2S3溶液，室温下晾干，再继续滴涂8 µL、4.0 mg/mL的聚多巴胺PDA，室温下晾干，得到ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA修饰的ITO导电玻璃；
（5）将上述步骤（2）中制备的微流控下芯片和步骤（4）中ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA修饰的ITO导电玻璃一起进行氧气等离子体处理，然后将微流控下芯片与ITO导电玻璃键合，再将其和上芯片与下芯片之间的隔膜一起进行氧气等离子体处理并进行键合，继续将其和微流控上芯片一起进行氧气等离子体处理，并进行键合，即完成微流控芯片制备；
（6）通过进样口5用注射泵以30 µL/min注射10 µg/mL的B型利钠肽捕获抗体Ab1，到微流控芯片工作电极槽中ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA，4 ℃冰箱中孵育60 min，进样口7注射缓冲溶液进行洗涤，得到ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA/Ab1；
（7）通过进样口6用注射泵以30 µL/min注射质量分数为1.0 %的牛血清蛋白BSA溶液到工作电极槽中ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA/Ab1，以封闭电极表面上未结合Ab1的非特异性活性位点，4 ℃冰箱中晾干，进样口7注射缓冲溶液进行洗涤，得到ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA/Ab1/BSA；
（8）通过进样口8用注射泵以30 µL/min注射0.1 pg/mL ~ 200 ng/mL不同浓度的B型利钠肽抗原BNP标准溶液到工作电极槽中ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA/Ab1/BSA，4℃冰箱中孵育60min，进样口7注射缓冲溶液进行洗涤，制得了修饰完全的ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA/Ab1/BSA/BNP微流控光电化学传感器，即一种用于心衰标志物B型利钠肽检测的微流控光电化学传感器。
实施例4
所述微流控微通道尺寸为电极槽直径为2000 µm，连接三电极微通道宽度为800 µm，进样口直径为1000 µm，进样通道宽度为600 µm，清洗微通道宽度为800 µm，气体阀门微通道宽度为1000 µm，气体阀门口直径为1000 µm，所述微流控通道的进口和出口均具有弧度设计，保证液体流畅通过。
实施例5
所述微流控微通道尺寸为电极槽直径为2500 µm，连接三电极微通道宽度为850 µm，进样口直径为1100 µm，进样通道宽度为700 µm，清洗微通道宽度为900 µm，气体阀门微通道宽度为1100 µm，气体阀门口直径为1100 µm，所述微流控通道的进口和出口均具有弧度设计，保证液体流畅通过。
实施例6
所述微流控微通道尺寸为电极槽直径为3000 µm，连接三电极微通道宽度为900 µm，进样口直径为1200 µm，进样通道宽度为800 µm，清洗微通道宽度为1000 µm，气体阀门微通道宽度为1200 µm，气体阀门口直径为1200 µm，所述微流控通道的进口和出口均具有弧度设计，保证液体流畅通过。
实施例7
所述的微流控光电化学传感器用于B型利钠肽的检测步骤如下：
(1) 使用电化学工作站以三电极体系进行测试，将参比电极和对电极分别插入电极槽1和3，将pH=7.4含0.1 mol/L抗坏血酸的缓冲溶液PBS通过进样口9注入，并且充满电极槽，在LED灯照射下进行测试；
(2) 用时间-电流法对B型利钠肽进行检测，设置电压为0.1 V，运行时间200 s；
(3) 当背景电流趋于稳定后，每隔10 s开灯持续照射10 s，然后记录光电流变化，绘制工作曲线；
(4) 用血清样品溶液代替B型利钠肽抗原BNP标准溶液，检测结果通过工作曲线查得。
实施例8
所述的微流控光电化学传感器用于B型利钠肽的检测步骤如下：
(1) 使用电化学工作站以三电极体系进行测试，将参比电极和对电极分别插入电极槽1和3，将pH=7.4含0.1 mol/L抗坏血酸的缓冲溶液PBS通过进样口9注入，并且充满电极槽，在LED灯照射下进行测试；
(2) 用时间-电流法对B型利钠肽进行检测，设置电压为0.1 V，运行时间200 s；
(3) 当背景电流趋于稳定后，每隔15 s开灯持续照射15 s，然后记录光电流变化，绘制工作曲线；
(4) 用血清样品溶液代替B型利钠肽抗原BNP标准溶液，检测结果通过工作曲线查得。
实施例9
所述的微流控光电化学传感器用于B型利钠肽的检测步骤如下：
(1) 使用电化学工作站以三电极体系进行测试，将参比电极和对电极分别插入电极槽1和3，将pH=7.4含0.1 mol/L抗坏血酸的缓冲溶液PBS通过进样口9注入，并且充满电极槽，在LED灯照射下进行测试；
(2) 用时间-电流法对B型利钠肽进行检测，设置电压为0.1 V，运行时间200 s；
(3) 当背景电流趋于稳定后，每隔20 s开灯持续照射20 s，然后记录光电流变化，绘制工作曲线；
(4) 用血清样品溶液代替B型利钠肽抗原BNP标准溶液，检测结果通过工作曲线查得。
实施例10实施例1~3所述微流控光电化学传感器对心衰标志物B型利钠肽BNP的检测范围为0.1 pg/mL~200 ng/mL，检测限为35 fg/mL；可以实现简单、快速、高灵敏和特异性检测。

Claims (7)

1.一种用于心衰标志物B型利钠肽检测的微流控光电化学传感器的制备方法，其特征在于，所述微流控光电化学传感器由微流控底板，微流控上芯片，微流控下芯片，上芯片与下芯片之间的隔膜四部分组成，其中，微流控上芯片包括电极槽用于放对电极，参比电极，工作电极，进样口及微通道，清洗口及微通道，微流控下芯片包括工作电极槽，气体阀门口及微通道；
其中，所述的微流控底板为氧化铟锡ITO导电玻璃，用于做工作电极和键合微流控通道；
其中，所述的微流控上芯片和下芯片之间的隔膜与气体阀门口及微通道，通过开关共同控制进样口和清洗口的开和关；
其中，所述的进样口及微通道包括B型利钠肽捕获抗体Ab1进样口及微通道，缓冲溶液PBS进样口及微通道，含抗坏血酸的缓冲溶液进样口及微通道，牛血清蛋白BSA进样口及微通道，B型利钠肽抗原BNP标准溶液进样口及微通道。
2.一种用于心衰标志物B型利钠肽检测的微流控光电化学传感器的制备方法，其特征在于，所述微流控光电化学传感器的制备步骤如下：
（1）用计算机设计软件AUTOCAD设计和绘制微流控的通道图形；
（2）利用设计的图形绘制掩模版，并且用标准的软光刻技术加工微流控聚二甲基硅氧烷PDMS芯片，包括微流控上芯片，下芯片，上芯片与下芯片之间的隔膜；
（3）将8 cm × 3 cm的ITO导电玻璃，依次用丙酮、乙醇和超纯水分别超声清洗30 min，氮气吹干；
（4）将20 µL、6.0 ~ 8.0 mg/mL的氧化锌ZnO溶液滴涂在ITO导电玻璃的导电面，室温下晾干，继续滴涂20 µL、3.0 ~ 5.0 mg/mL的碘氧铋/硫化铋BiOI/Bi2S3溶液，室温下晾干，再继续滴涂8 µL、2.0 ~ 4.0 mg/mL的聚多巴胺PDA，室温下晾干，得到ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA修饰的ITO导电玻璃；
（5）将上述步骤（2）中制备的微流控下芯片和步骤（4）中ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA修饰的ITO导电玻璃一起进行氧气等离子体处理，然后将微流控下芯片与ITO导电玻璃键合，再将其和上芯片与下芯片之间的隔膜一起进行氧气等离子体处理并进行键合，继续将其和微流控上芯片一起进行氧气等离子体处理，并进行键合，即完成微流控芯片制备；
（6）通过进样口5用注射泵以10 ~ 30 µL/min注射10 µg/mL的B型利钠肽捕获抗体Ab1，到微流控芯片工作电极槽中ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA，4 ℃冰箱中孵育40 ~ 60 min，进样口7注射缓冲溶液进行洗涤，得到ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA/Ab1；
（7）通过进样口6用注射泵以10 ~ 30 µL/min注射质量分数为0.1 ~ 1.0 %的牛血清蛋白BSA溶液到工作电极槽中ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA/Ab1，以封闭电极表面上未结合Ab1的非特异性活性位点，4 ℃冰箱中晾干，进样口7注射缓冲溶液进行洗涤，得到ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA/Ab1/BSA；
（8）通过进样口8用注射泵以10 ~ 30 µL/min注射0.1 pg/mL ~ 200 ng/mL不同浓度的B型利钠肽抗原BNP标准溶液到工作电极槽中ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA/Ab1/BSA，4℃冰箱中孵育40 ~ 60 min，进样口7注射缓冲溶液进行洗涤，制得了修饰完全的ZnO/BiOI/Bi2S3/PDA/Ab1/BSA/BNP微流控光电化学传感器，即一种用于心衰标志物B型利钠肽检测的微流控光电化学传感器。
3.如权利要求2所述的一种用于心衰标志物B型利钠肽检测的微流控光电化学传感器的制备方法，其特征在于，所述微流控微通道尺寸为电极槽直径为2000 ~ 3000 µm，连接三电极微通道宽度为800 ~ 900 µm，进样口直径为1000 ~ 1200 µm，进样通道宽度为600 ~800 µm，清洗微通道宽度为800 ~ 1000 µm，气体阀门微通道宽度为1000 ~ 1200 µm，气体阀门口直径为1000 ~ 1200 µm，所述微流控通道的进口和出口均具有弧度设计，保证液体流畅通过。
4.如权利要求2所述的一种用于心衰标志物B型利钠肽检测的微流控光电化学传感器的制备方法，其特征在于，所述光电化学的三电极集成于小型微流控传感器上。
5.如权利要求2所述的一种用于心衰标志物B型利钠肽检测的微流控光电化学传感器的制备方法，其特征在于，所述ITO导电玻璃为工作电极，同时也是微流控芯片的底板。
6.如权利要求2所述的一种用于心衰标志物B型利钠肽检测的微流控光电化学传感器的制备方法，其特征在于，所述心衰标志物为B型利钠肽。
7.如权利要求6所述微流控光电化学传感器检测B型利钠肽，其特征在于，步骤如下：
(1) 使用电化学工作站以三电极体系进行测试，将参比电极和对电极分别插入电极槽1和3，将pH=7.4含0.1 mol/L抗坏血酸的缓冲溶液PBS通过进样口9注入，并且充满电极槽，在LED灯照射下进行测试；
(2) 用时间-电流法对B型利钠肽进行检测，设置电压为0.1 V，运行时间200 s；
(3) 当背景电流趋于稳定后，每隔10 ~ 20 s开灯持续照射10 ~ 20 s，然后记录光电流变化，绘制工作曲线；
(4) 用血清样品溶液代替B型利钠肽抗原标准溶液，检测结果通过工作曲线查得。
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