CN208060540U - 一种用于脓毒症快速定量检测的多指标胶体金试剂盒 - Google Patents

Abstract

本实用新型涉及一种用于脓毒症快速定量检测的多指标胶体金试剂盒，其包括检测卡、比色卡和/或胶体金定量读数仪，检测卡包括上样垫、胶体金结合垫、具有检测线和质控线的承载膜、吸样垫及底板，指标为可溶性白细胞分化抗原14亚型、血清淀粉样蛋白A和C反应蛋白，胶体金结合垫包括结合垫本体和涂覆于结合垫本体上的胶体金标记抗体涂层，其中胶体金标记抗体涂层中的抗体为所述指标的抗体；本实用新型试剂盒可实现脓毒症的早期诊断，且同时分辨感染类型，该试剂盒诊断灵敏度高、结果可靠。

Description

一种用于脓毒症快速定量检测的多指标胶体金试剂盒

技术领域

本实用新型涉及生物技术诊断领域，具体涉及一种用于脓毒症快速定量检测的多指标胶体金试剂盒。

背景技术

脓毒症(sepsis)是感染引起的机体免疫系统过度反应导致抗炎介质释放入血的全身炎症反应综合征(SIRS)。脓毒症的病情凶险，病死率高，全球每天约14,000人死于其并发症。据国外流行病学调查显示，脓毒症的病死率已经超过心肌梗死，成为重症监护病房内非心脏病人死亡的主要原因。近年来，尽管抗感染治疗和器官功能支持技术取得了长足的进步，但脓毒症的病死率仍高达30％～60％。脓毒症治疗花费高，医疗资源消耗大，严重影响人类的生活质量，已经对人类健康造成巨大威胁。

治疗和预防脓毒症最有效的方法是以脓毒症的发病机制为基础进行治疗和预防，但遗憾的是目前脓毒症的发病机制仍未完全阐明。因此，早诊断早干预仍是降低死亡率的有效措施。许多生物学标志物在脓毒症的早期诊断、指导用药、预后评估方面一直是研究热点，其中，降钙素元(PCT)、C-反应蛋白(CRP)和白细胞介素在临床中应用最为广泛。但目前临床应用的各生物标志物存在诸多劣势和争议，如PCT在创伤、手术、中暑等非脓毒症状态时也有升高，特异性较差，而CRP的灵敏度和特异性较PCT更差，诊断的准确性均难以保证。

抗感染是脓毒症的主要治疗手段，而针对病毒、细菌感染的治疗及用药完全不同。通常针对细菌性感染，使用抗生素治疗；针对病毒性感染，使用抗病毒药物。如果误将病毒性感染当成细菌性感染进行处理，则会导致延误治疗使病情加重；无依据的滥用抗生素轻则导致体内菌群失调，出现呕吐、恶心等症状，加剧病情；重则使病原体产生抗药性造成更加严重的后果。因此，判别好感染类型后再用药十分必要。

可溶性白细胞分化抗原14亚型(sCD14-ST，Presepsin)，在感染早期就显著升高，尤其在脓毒症和严重脓毒症升高更加明显，且具有较高的诊断特异性。实验研究表明，血浆Presepsin浓度于感染2小时即开始上升，3小时达高峰，而PCT在感染后4小时才开始升高，1天后才达高峰，可见Presepsin对于脓毒症的早期诊断更有价值。此外，Presepsin浓度与脓毒症患者病死率密切相关，具有疾病分级和预后评估价值。

目前，临床上尚未见可兼顾早期诊断及感染分型的快速检测试剂盒，因此，提供一种检测结果更准确、更快速、使用更方便的即时检测产品，对于挽救更多的脓毒症患者的生命，提高预后效果，降低医疗花费压力等意义重大。

实用新型内容

本实用新型所要解决的技术问题是克服现有脓毒症标志物检测产品/方法的缺陷，提供一种检测准确率及检测效率更高，且可分辨感染类型的脓毒症早期诊断多指标胶体金试剂盒。该试剂盒可提高早期脓毒症诊断的准确性，明确感染类型指导精准治疗，解决现有脓毒症早期诊断的不足。此外，本发明检测卡适于全血样品，可在家庭、养老院、野外等场合应用。

为解决以上技术问题，本实用新型采用如下技术方案：

一种用于脓毒症快速定量检测的多指标胶体金试剂盒，其包括检测卡、比色卡和/或胶体金定量读数仪，检测卡包括上样垫、胶体金结合垫、具有检测线和质控线的承载膜、吸样垫及底板；所述指标为可溶性白细胞分化抗原14亚型、血清淀粉样蛋白A和C反应蛋白；所述的胶体金结合垫包括结合垫本体和涂覆于结合垫本体上的胶体金标记抗体涂层，其中胶体金标记抗体涂层中的抗体为所述指标的抗体；所述检测线有三条，该三条检测线相互分离且分别是能够与所述胶体金标记的抗体特异性结合的配对抗体或抗原形成的涂层。

所述的检测卡还包括疏水性外壳，外壳上有加样孔及检视窗。

上述的可溶性白细胞分化抗原14亚型(sCD14-ST)，又称Presepsin，是sCD14被组织蛋白酶D水解的N端片段构成的亚型。sCD14分布在血浆中，由mCD14脱落或细胞分泌产生，健康人血浆中sCD14浓度级别微克很低。相比PCT，Presepsin在感染患者中明显升高，其血浆浓度明显高于非感染者。脓毒症是医院常见的重大感染问题，依据血培养诊断脓毒症费时，而且阳性率低。PCT在感染4小时后升高，24小时候后达到高峰，而Presepsin 2小时后升高，3小时达到高峰。基于拯救脓毒症要早诊断和早治疗的原则，Presepsin是一个非常好的生物标记物，而且对脓毒症的严重程度和预后都有很好的评估作用。

血清淀粉样蛋白A(SAA)与C反应蛋白(CRP)都属急性时相蛋白，两者有一个最重要的不同之处：病毒感染时SAA显著升高，而CRP在无细菌感染的病毒感染中不升高或仅在一个狭窄围范内也许有小幅升高。SAA对细菌感染的敏感性类似于CRP。SAA作为病毒感染非特异性指标与CRP联合检测的应用，优势互补，对细菌和病毒感染的诊断和鉴别诊断又多了一份依据，更能体现单项指标不能反映的临床增值意义。SAA指标比CRP在早期感染中更为灵敏，升高更早，恢复时下降更快，幅度更大。在感染早期、微弱的炎症刺激SAA较CRP更灵敏可提供更好的鉴别。两者同时检测可对早期细菌和病毒感染的鉴别诊断提供有力的数据。

可溶性白细胞分化抗原14亚型、血清淀粉样蛋白A和C反应蛋白三项检测指标联合用于脓毒症的诊断，不但可实现脓毒症的早期诊断，更可实现对感染类型的分辨，可有助于提升治疗的及时性与准确性，从而提高治疗效果。

根据本实用新型的一个具体方面，所述上样垫、胶体金结合垫、承载膜及吸样垫依次相互交错粘贴在所述底板上。

根据本实用新型的一个优选方面，检测卡还包括滤血膜，该滤血膜覆设在上样垫上，上样垫、胶体金结合垫、承载膜及吸样垫依次相互交错粘贴在底板上。

根据本实用新型的又一优选方面，检测卡还包括助推垫，且检测卡由上样垫、胶体金结合垫、助推垫、承载膜及吸样垫依次相互交错粘贴在底板上构成。

根据本实用新型的还一优选方面，检测卡还包括滤血膜和助推垫，滤血膜覆设在上样垫上，上样垫、胶体金结合垫、助推垫、承载膜及吸样垫依次相互交错粘贴在底板上。

根据本实用新型的一个优选方面，承载膜仅有一条，三条检测线和质控线相互平行且沿着承载膜的长度方向依次设置在承载膜上。

进一步地，所述质控线位于所述承载膜靠近所述吸样垫的端部；所述三条检测线中靠近结合垫的检测线为可溶性白细胞分化抗原14亚型的配对抗体或抗原涂层，靠近质控线的检测线为C反应蛋白的配对抗体或抗原涂层，中间的检测线为血清淀粉样蛋白A的配对抗体或抗原涂层。

根据本实用新型的又一优选方面，所述承载膜包括三条承载分膜，所述三条检测线分别分布在三条承载分膜上。在各承载分膜上分别设置有质控线。Presepsin、SAA和CRP相对应的单克隆抗体、多克隆抗体，或相应的抗原分别包被在三条承载分膜上，每条承载分膜上平行设置质控线，包被羊抗鼠IgG、羊抗鸡IgY或羊抗兔IgG等抗体之一。

根据本实用新型的再一优选方面，检测卡包括三个独立的检测分卡，上样垫、结合垫、吸样垫和底板各有三条，每一条上样垫、结合垫、承载分膜、吸样垫和底板组装成一个检测分卡。或，滤血膜、上样垫、结合垫、助推垫、吸样垫和底板各有三条，每一条滤血膜、上样垫、结合垫、助推垫、承载分膜、吸样垫和底板组装成一个检测分卡。

优选地，助推垫的材质为玻璃纤维素膜或无纺布。

优选地，质控线通过包被包括但不限于羊抗鼠IgG、羊抗鸡IgY或羊抗兔IgG等形成。

优选地，承载膜为硝酸纤维素膜且为孔径5～12um的多孔样结构膜；上样垫、胶体金结合垫的材质为玻璃纤维素膜或无纺布，吸样垫的材质为吸水滤纸。

免疫胶体金技术是已知的。本实用新型所述的胶体金免疫标记抗体可采用本领域熟知的方法制备。

由于以上技术方案的实施，本实用新型所述试剂盒与现有技术相比具有如下优点：

本实用新型试剂盒包括快速检测脓毒症的检测卡，其采用Presepsin、SAA和CRP为标志物，可明显提前脓毒症的可诊断时间，且同时可分辨出感染类型(细菌感染或病毒感染)，在诊断试剂的研发方面属于首创，该试剂盒诊断灵敏度更高、特异性更强，临床监测的准确率高达95％以上。实现早期诊断、精确治疗及时阻止病人的病情恶化的目的，降低因检测不及时、不准确造成的漏诊、误诊，降低死亡率。

进一步地，本实用新型检测卡将原本只能应用于医院检验科的试剂盒，经过技术创新，通过增加滤血膜，使其可以方便、简易、准确的应用于脓毒症的自我检测和监测，可用于家庭、养老院及野外等环境的使用。其使用方法也仅是由病人或其家属针刺一滴血来实现脓毒症的自我检测和监测，使在正规治疗前了解并控制病情成为可能。

进一步地，本实用新型在结构上增加了助推垫，可以有效的去除背景干扰，从而进一步提高诊断灵敏度高和准确度，此外助推垫还有助于加快检测样品流动，提高检测效率，缩短检测时间，可以避免胶体金颗粒被PVC底板截留，提高产品性能。

附图说明

图1为本实用新型的实施例1的检测卡的主视结构示意图；

图2为本实用新型的实施例2的检测卡的主视结构示意图；

图3为本实用新型的实施例3的检测卡的立体结构示意图(含T1检测线)；

图4为本实用新型的实施例3的检测分卡的主视结构示意图(含T2检测线)；

图5为本实用新型的实施例3的检测分卡的主视结构示意图(含T3检测线)。

附图标记

附图标记：

1,1’,1”—上样垫 2,2’,2”—胶体金结合垫 3—承载膜 4，4’,4”—吸样垫

5,5’,5”—底板6,6’,6”—滤血膜 7，7’,7”—助推垫 T1、T2、T3—检测线

C,C’,C”—质控线 20，20’,20”—结合垫本体 30，30’,30”—承载分膜

21,21’,21”—胶体金标记抗体涂层

具体实施方式

实施例1

如图1所示，一种用于脓毒症快速定量检测的多指标胶体金试剂盒，其包括检测卡、比色卡和/或胶体金定量读数仪，检测卡包括上样垫1、胶体金结合垫2、具有检测线T和质控线C的承载膜3、吸样垫4、底板5、滤血膜6和助推垫7，滤血膜6覆设在上样垫1上，上样垫1、胶体金结合垫2、助推垫7、承载膜3及吸样垫4依次相互交错粘贴在底板5上。其中，承载膜3为硝酸纤维素膜且为孔径5～12um的多孔样结构膜；上样垫1、助推垫7、结合垫本体20的材质均为玻璃纤维素膜或无纺布，吸样垫4的材质为吸水滤纸。

进一步地，所述的指标为可溶性白细胞分化抗原14亚型、血清淀粉样蛋白A和C反应蛋白三种标志物，胶体金结合垫2包括结合垫本体20和涂覆于结合垫本体20上的胶体金标记抗体涂层21。其中，胶体金标记抗体涂层21中的抗体为所述指标的抗体；所述检测线有三条，相互分离，为分别能够与胶体金标记的抗体特异性结合的配对抗体或抗原形成的涂层。该检测线与质控线相互平行且沿着承载膜3的长度方向依次设置。质控线C位于检测垫3的靠近吸样垫4的端部；三条检测线中靠近助推垫7的检测线T1为可溶性白细胞分化抗原14亚型的配对抗体或抗原涂层，靠近质控线C的检测线T3为C反应蛋白的配对抗体或抗原涂层，中间的检测线T2为血清淀粉样蛋白A的配对抗体或抗原涂层。质控线C通过包被鼠IgG抗体形成。

本实施例各部件是这样组装到一起的，在干燥室内，温度20～25℃，湿度小于30％，取底板5，将已包被的承载膜3放置在底板5的中部粘贴，将胶体金结合垫2裁切成合适的宽度，在承载膜3上的检测线一侧搭接助推垫7，在助推垫7的另一侧搭接粘贴胶体金结合垫2，在胶体金结合垫2另一侧搭接粘贴上样垫1，滤血膜6覆设在上样垫1上，在承载膜3上的质控线一侧搭接吸样垫4，最后用裁剪机将贴好塑料板切成3～5mm宽的试纸条，再装入塑料卡壳内，形成检测卡。

本例试剂盒的检测方法如下：

(1)将检测试剂及样本平衡至室温，取出检测卡，平放；

(2)吸取血清、血浆或全血样本，加入洁净的离心管中，用样本稀释液进行稀释，充分混匀；

(3)用移液枪吸取稀释后的样本加入到上样垫的样本孔中，15～20分钟内进行定性分析或根据已预先设置在胶体金定量分析检测仪内的标准曲线对Presepsin、SAA和CRP的浓度进行计算并显示结果。

试剂卡与胶体金定量读数仪搭配，即可构成用于临床、现场等脓毒症的早期诊断检测。

本例检测卡的检测原理如下：

当样本加入到样品孔后，样本中含有的Presepsin、SAA和CRP抗原与胶体金标记的Presepsin、SAA和CRP抗体结合，借助毛细管作用，所形成的抗体-抗原免疫复合物沿硝酸纤维素膜层析至检测线，然后与固化在检测线上的Presepsin、SAA和CRP抗体结合。未结合的免疫复合物则继续层析至质控线被羊抗鼠IgG抗体捕获。

当反应结束后，根据色带颜色的深浅可进行定性判断，根据已预先设置在胶体金定量分析检测仪内的标准曲线对Presepsin、SAA和CRP的浓度进行计算并显示结果。

实施例2

如图2所示，本实施例提供一种用于脓毒症快速定量检测的多指标胶体金试剂盒，其基本同实施例1，不同的是，其承载膜3包括三个并排设置的承载分膜30，30’，30”，每个承载分膜30，30’，30”上都有一条检测线和质控线。其中，承载分膜30上的检测线T1为C反应蛋白的配对抗体或抗原涂层，检测分垫30’上的检测线T2为可溶性白细胞分化抗原14亚型的配对抗体或抗原涂层，检测分垫30”上的检测线T3为血清淀粉样蛋白A的配对抗体或抗原涂层。

本例试剂盒的制备、检测及检测原理同实施例1。

实施例3

如图3、图4、图5所示，本实施例提供一种用于脓毒症快速定量检测的多指标胶体金试剂盒，其基本同实施例1，不同的是，检测卡包括三个独立的检测分卡，滤血膜6、上样垫1、胶体金结合垫2、助推垫7、承载分膜30、吸样垫4和底板5分别有三条，每一条滤血膜6，6’，6”、上样垫1，1’，1”、胶体金结合垫2，2’，2”、助推垫7，7’,7”、承载分膜30，30’，30”、吸样垫4，4’，4”和底板5，5’，5”组装成一个检测分卡，每个检测分卡上的承载分膜30，30’，30”上分别形成一条检测线和一条质控线。

本例试剂盒的制备、检测及检测原理同实施例1。

实施例4

本实施例提供一种用于脓毒症快速定量检测的多指标胶体金试剂盒，其基本同实施例1，不同的是，没有助推垫7。结合垫2直接与检测垫3粘贴连接。本例试剂盒的检测及检测原理同实施例1。

综上，本实用新型试剂盒包括快速检测脓毒症的检测卡，其采用Presepsin、SAA和CRP为标志物，可明显提前脓毒症的可诊断时间，并可同时分辨感染类型(病毒感染或细菌感染)，在诊断试剂的研发方面属于首创，该试剂盒诊断灵敏度更高、特异性更强，有助于提高临床治疗的准确性与及时性。

以上对本实用新型做了详尽的描述，其目的在于让熟悉此领域技术的人士能够了解本实用新型的内容并加以实施，并不能以此限制本实用新型的保护范围，凡根据本实用新型的精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本实用新型的保护范围内。

Claims (10)

1.一种用于脓毒症快速定量检测的多指标胶体金试剂盒，其包括检测卡、比色卡和/或胶体金定量读数仪，所述检测卡包括上样垫(1)、胶体金结合垫(2)、具有检测线和质控线的承载膜(3)、吸样垫(4)及底板(5)，其特征在于：所述指标为可溶性白细胞分化抗原14亚型、血清淀粉样蛋白A和C反应蛋白，所述胶体金结合垫(2)包括结合垫本体(20)和涂覆于所述结合垫本体(20)上的胶体金标记抗体涂层(21)，其中所述胶体金标记抗体涂层(21)中的抗体为所述指标的抗体；所述检测线有三条，该三条检测线相互分离且分别是能够与所述胶体金标记的抗体特异性结合的配对抗体或抗原形成的涂层。

2.根据权利要求1所述的多指标胶体金试剂盒，其特征在于：所述检测卡还包括滤血膜(6)，该滤血膜(6)覆设在所述的上样垫(1)上，所述上样垫(1)、胶体金结合垫(2)、承载膜(3)及吸样垫(4)依次相互交错粘贴在底板(5)上。

3.根据权利要求1所述的多指标胶体金试剂盒，其特征在于：所述检测卡还包括助推垫(7)，且所述检测卡由所述上样垫(1)、胶体金结合垫(2)、助推垫(7)、承载膜(3)及吸样垫(4)依次相互交错粘贴在底板(5)上构成。

4.根据权利要求1所述的多指标胶体金试剂盒，其特征在于：所述检测卡还包括滤血膜(6)和助推垫(7)，所述滤血膜(6)覆设在所述的上样垫(1)上，所述上样垫(1)、胶体金结合垫(2)、助推垫(7)、承载膜(3)及吸样垫(4)依次相互交错粘贴在底板(5)上。

5.根据权利要求3或4所述的多指标胶体金试剂盒，其特征在于：所述助推垫(7)的材质为玻璃纤维素膜或无纺布。

6.根据权利要求1所述的多指标胶体金试剂盒，其特征在于：所述检测线和质控线相互平行且沿着所述承载膜(3)的长度方向依次设置。

7.根据权利要求6所述的多指标胶体金试剂盒，其特征在于：所述质控线位于所述承载膜(3)靠近所述吸样垫(4)的端部；所述三条检测线中靠近结合垫(2)的检测线为可溶性白细胞分化抗原14亚型的配对抗体或抗原涂层，靠近质控线的检测线为C反应蛋白的配对抗体或抗原涂层，中间的检测线为血清淀粉样蛋白A的配对抗体或抗原涂层。

8.根据权利要求1所述的多指标胶体金试剂盒，其特征在于：所述承载膜(3)包括三条承载分膜(30，30’，30”)，所述三条检测线分别分布在所述三条承载分膜(30，30’，30”)上。

9.根据权利要求8所述的多指标胶体金试剂盒，其特征在于：所述检测卡包括三个独立的检测分卡，所述上样垫(1，1’，1”)、结合垫(2，2’，2”)、吸样垫(4，4’，4”)和底板(5，5’，5”)各有三条，每一条上样垫(1，1’，1”)、结合垫(2，2’，2”)、承载分膜(30，30’，30”)、吸样垫(4，4’，4”)和底板(5，5’，5”)组装成一个所述的检测分卡。

10.根据权利要求1所述的多指标胶体金试剂盒，其特征在于：所述质控线通过包被羊抗鼠IgG、羊抗鸡IgY或羊抗兔IgG形成；所述承载膜(3)为硝酸纤维素膜且为孔径5～12um的多孔样结构膜；所述上样垫(1)和结合垫本体(20)的材质均为玻璃纤维素膜或无纺布；所述吸样垫(4)的材质为吸水滤纸。