CN2499831Y - 一种检测装置 - Google Patents

Abstract

本实用新型涉及一种检测装置,其特征在于由衬板(5)、加样垫片(2)、加样端保护层(1)、显色标记抗体区(3)、附着有多条检测抗体线和对照抗体线的层析纤维薄膜层(4)、手持端吸水片(6)及手持端保护层组成(7),在纤维薄膜层上喷涂多条检测抗体线(8、9、10、11、12、13、14),通过喷涂不同量或不同亲和常数的抗体使得每条检测线的显色灵敏度不同,并按顺序依次改变,使之达到半定量的目的。本实用新型为评价心肌损伤和心肌梗塞提供一个简便而有效的检测工具。

Description

一种检测装置

技术领域

本实用新型涉及一种测试装置，它可用于人体血中或体液中心肌损伤标志物如肌钙蛋白含量的测定，从而为心肌损伤和心肌梗塞的早期临床诊断提供有用的依据。

技术背景

急性冠状动脉综合征是临床的常见疾病，心肌损伤和心肌梗塞的早期诊断对医生而言一直是一个大的挑战，能否尽快的对心肌损伤作出诊断是治疗心梗的关键，它直接关系到病人的生存及预后。心肌梗塞的传统诊断方法是根据病人的症状加上心电图的变化作出的，由于很多病人的心电图没有明显变化，从而给许多心梗的诊断造成了困难。美国1997年的一项研究指出，心梗病人中具有典型心电图变化者(ST段改变)只占50％，而其它病人的心电图无明显改变，许多病人因无明显心电图变化而误诊出院，在这些误诊出院的病人中有许多人在出院后不久就发生大面积心梗而死亡，也有许多病人即使在抢救后得以维持生命，但由于诊治的延误使得预后很差。可见，心梗诊断现行的传统方法有很大的局限性，正是由于这一局限性，近些年来在西方发达国家临床诊断领域掀起了一个新热点，也就是心肌损伤标志物的研究和应用，这些标志物主要包括心肌肌钙蛋白、肌红蛋白和肌酸激酶同功酶等。

肌钙蛋白是心肌细胞内的一种蛋白质，在正常人体的血液中不会检测到这种蛋白。在心肌受损及心梗发作时，坏死心肌细胞中的肌钙蛋白因细胞破碎而释放入血，因此当在病人的血中检测出这种蛋白时，即可说明心肌细胞发生坏死，从而为心梗早期诊断提供依据。关于心肌肌钙蛋白的基础研究已有很多报道，其潜在的临床应用价值已被广泛接受。

随着现代免疫学的发展，利用免疫检测方法对疾病进行检测已广泛应用于临床检验，现在常用的方法包括放射免疫法及酶标免疫法等多种方法。这些方法都存在着一些普遍的特点，第一是测试时间较长，测试时间一般由几小时到十几小时；第二是必须由经过特殊训练的化验员进行操作，普通人员甚至包括大多数医生都不能进行操作；第三是需使用较昂贵的仪器，使得这些检验只能在医院的化验室中进行，即使有些医生知道如何进行操作，但由于仪器设备的限制，使得相关检测也无法在急诊室和抢救室或医生诊室中进行。正是由于这些特点的存在使得现行化验的周期较长，而对心梗病人的抢救必须争分夺秒。由于传统检测方法的局限性，给心肌损伤标志物的检测造成了难题，我们可以想象一个急诊的心梗病人需要等待几小时甚至十几小时才能得到测试结果会是什么情景。对心梗病人检测的关键在于是否能快速的得到检验结果，如果不能快速的得到检验结果，再好的检测指标也无用。

发明内容

本实用新型的目的是要提供一种快速检测人体血中或体液中心肌损伤标志物的半定量检测装置，它可在不用任何仪器的条件下，只用几滴血在几分钟之内可半定量地检测血中心肌肌钙蛋白的含量，从而为“微小心肌损伤”和“心肌梗塞”的诊断和鉴别诊断以及心肌梗塞程度的评价，提供一种快速简便的检测工具。

为了达到上述目的，本实用新型采用的检测装置是由衬板、样品垫片、加样端保护层、显色颗粒垫片、附着有多条抗体线的层析纤维薄膜、手持端吸水片及手持端保护层组成，所述样品垫片位于加样端保护层与衬板之间、手持端吸水片位于手持端保护层与衬板之间，所述显色颗粒垫片位于加样端吸水片与层析纤维薄膜之间，并与样品垫片和纤维薄膜的边缘相接，所述附着有多条抗体线的层析纤维薄膜设置在衬板上位于显色颗粒垫片与手持端之间，并与手持端吸水片的边缘相连，层析纤维薄膜上附着的抗体由多条检测抗体线和一条对照线组成，这些检测线也可以在使用时临时喷涂。层析纤维薄膜上有二条以上检测肌钙蛋白的抗体检测线，通过在每条检测线上喷涂不同量或不同亲和力的抗肌钙蛋白的抗体，使得每条检测线所对应的显色灵敏度不同，检测抗体线的显色灵敏度是指该抗体线显色所需的最低抗原浓度，每条检测线所对应的显色灵敏度按从加样端到手持端方向依次改变(以依次递增为主，但也可依次递减)，由于每条检测线显色时所需的抗原浓度不同，通过观察检测线显色的数目，可达到半定量检测肌钙蛋白的目的。

1、本实用新型的主要组成部分及材料：

1)抗心肌肌钙蛋白抗体对：选择高亲和力抗心肌肌钙蛋白的特异性抗体用于胶体金颗粒的包被，另外选择一种或多种不同亲和力的抗体用于层析纤维薄膜上检测线的喷涂，胶体金抗体的结合位点和检测线抗体的结合位点不应重叠。

2)显色颗粒：可用胶体金颗粒(美国SIGMA公司产品)，也可用有色乳胶颗粒(加拿大BHT公司出售)。

3)显色颗粒垫片：可用玻璃纤维或纤维素垫片。

4)层析纤维薄膜：可用硝酸纤维薄膜、硝酸和醋酸混合纤维薄膜、尼龙纤维薄膜等。这类维薄膜的选用为有关技术人员所熟知。

5)衬板：可用PVC等材料。

6)样品垫片：可用玻璃纤维或纤维素垫片等材料。

7)加样端保护层：可用不干胶带等材料。

8)手持端吸水片：可用滤纸或纤维素垫片等吸水材料。

9)手持端保护层：可用不干胶带等材料。

10)对照控制线所用的抗体：可用抗IgG抗体或抗BSA抗体。

2、本实用新型的技术实现方案：

1)显色颗粒抗体标记：

抗体的胶体金标记的方法是将抗心肌肌钙蛋白的特异抗体与胶体金按一定比例混合，使得抗体吸附于胶体金表面，然后再加入BSA或其它非特异性蛋白溶液进行封闭，将该金标抗体涂抹在显色颗粒垫片上，其具体步骤已为同类技术人员所熟悉，这里不再祥述。

2)多条检测带的抗体选择及喷涂包被：

在层析纤维薄膜上平行喷涂多条宽约1毫米左右的检测抗体线(可用英国BBI公司出售的蛋白连续点样机进行喷涂划线)，这些检测线所对应的肌钙蛋白显色灵敏度各不相同，距离加样端最远的检测线灵敏度相对最高，距离加样端最近的检测线灵敏度相对最低，位于中间的检测线灵敏度中等。在本装置中个检测线对抗原的显色灵敏度可由喷涂在该线上的抗体量以及所选用抗体的亲和力所控制，喷涂的抗体量越大，显色灵敏度就大，所选用抗体的亲和常数越高，显色灵敏度也就越高。所以通过在各检测线上选用不同的抗体喷涂量以及选用不同亲和力的抗心肌肌钙蛋白的特异抗体，可调整每条检测线对肌钙蛋白的敏感度。在本装置中，在距加样端最近的检测线上喷涂较少量的且亲和常数较低的抗体，从而使得该检测线的灵敏度较低；在距加样端最远的检测线上喷涂大量的且亲和常数较高的抗体，从而使得该检测线的灵敏度最大；在这二者中间的检测线上喷涂中等量的且亲和常数中等的抗体，使得位于中间的检测线的灵敏度为中等。

3)对照控制线抗体选择及喷涂包被：

用磷酸缓冲液将抗IgG抗体稀释10倍，然后用蛋白连续点样机(英国BBI公司出售)将抗IgG抗体喷涂在层析纤维薄膜上形成宽1毫米左右的对照控制线，对照控制线距离加样端最远。

4)各部件的组合：

在衬板的中部贴上层析纤维薄膜，纤维薄膜上各条检测线的相对位置为较低灵敏度的检测线距离加样端较近，较高灵敏度的检测线距离加样端较远。在层析纤维薄膜与加样端之间放置带有金标抗体的显色颗粒垫片，该垫片与层析纤维薄膜相接并有小量重叠。在显色颗粒垫片靠近加样端的位置放置样品垫片，样品垫片与显色颗粒垫片部分相接。在层析纤维薄膜手持端的位置贴上手持端吸水片，各部件由衬板将之固定在一起。样品端可贴上加样端保护层，手持端可贴上手持端保护层。

5)检测过程及原理：

在使用本装置进行检测时，可将测试条的样品端的样品垫片与待测样品进行接触，样品液体中所含的心肌肌钙蛋白将随液体向手持端(终末端)移动，依次经过显色颗粒垫片、较低灵敏度的检测线、较高灵敏度的检测线、对照控制线，最后到达手持端吸水片。当液体经过显色颗粒垫片时将带动金标抗体一起向终末端移动，在移动过程中，样品液体中的心肌肌钙蛋白将与金标抗体发生特异性结合形成金标抗体—肌钙蛋白复合物，如果样品中肌钙蛋白的含量低于较高灵敏度检测线的灵敏度，高灵敏度检测线和低灵敏度检测线都不显色；如果样品中肌钙蛋白的含量高于较高灵敏度检测线的灵敏度，但低于较低灵敏度检测线的灵敏度，只有较高灵敏度检测线显色，而低灵敏度检测线不显色；如果样品中肌钙蛋白的含量高于较低灵敏度检测线的灵敏度，金标抗体—肌钙蛋白复合物将使较高灵敏度检测线和较低灵敏度的检测线同时显色。所以，通过观测有几条检测线显色，可得知样品中肌钙蛋白含量的区间范围，从而达到半定量的目的。

心肌损伤标志物包括肌钙蛋白、肌红蛋白和肌酸激酶同功酶，通过将本装置中抗肌钙蛋白抗体换成抗肌红蛋白或抗肌酸激酶同功酶抗体，本装置还可用于肌红蛋白和肌酸激酶同功酶的半定量检测。

本实用新型所具有的特点：

1)半定量：本实用新型可半定量检测心肌肌钙蛋白含量，弥补了现有

        的检测试纸只能定性不能定量的确点。

2)速度快：几分钟之内就可得到检测结果，弥补了传统检测方法检测

        时间长的缺点。

3)操作简便：全部操作过程只有一步，即在本检测装置上加上几滴血

        或几滴待测液体样品，然后通过观察检测线颜色的变化及显

        色的数目，便可得知检测结果。操作人员不必经过特殊训练，

        一般人员都可操作。

4)不需任何仪器：节省设备投资，并且在任何地点都可进行操作。

附图说明

图1是根据本实用新型实用新型提出的心肌肌钙蛋白含量半定量检测装置的俯视结构示意图；

图2是本实用新型的侧视图。

图3是根据本实用新型提出的“微小心肌损伤”及“心肌梗塞”鉴别诊断测试卡的俯视结构示意图；

图4是本实例的侧视图。

具体实施方式

本实用新型的具体结构由以下二个实例及其附图作进一步说明。

实例一：半定量心肌肌钙蛋白含量测试卡

本实用新型的结构如图1和图2所示，本检测装置是由衬板5、样品垫片2、加样端保护层1、显色颗粒垫片3、附着有多条抗体线的层析纤维薄膜4、手持端吸水片6及手持端保护层7组成，所述样品垫片位于加样端保护层与衬板之间、手持端吸水片位于手持端保护层与衬板之间，所述显色颗粒垫片(显色标记抗体区)位于样品垫片与层析纤维薄膜之间，并与样品垫片和纤维薄膜的边缘相接，所述附着有多条抗体线的层析纤维薄膜设置在衬板上位于显色颗粒垫片(显色标记抗体区)与手持端之间，并与手持端吸水片的边缘相连，层析纤维薄膜上附着的抗体由多条检测抗体线8、9、10，11，12，13，14和一条对照线15组成。每条检测线所分别对应的检测灵敏度各不相同，并按从加样端到手持端方向依次递增，通过控制每条检测线上抗心肌肌钙蛋白抗体的亲和性及抗体用量，使得检测线14的显色灵敏度达到0.1ng/ml、检测线13的显色灵敏度达到0.4ng/ml、检测线12的显色灵敏度达到0.8ng/ml、检测线11的显色灵敏度达到1.5ng/ml、检测线10的显色灵敏度达到3ng/ml、检测线9的显色灵敏度达到5ng/ml、检测线8的显色灵敏度达到10ng/ml。每条检测线的显色灵敏度可受所用抗体的亲和力及抗体用量的控制，抗体的亲和常数越高，显色灵敏度越高，抗体的用量约大，显色灵敏度也越高，每条检测线上抗体的具体用量以及抗体的选择，可由本专业的一般技术人员在制作时通过几次常规实验得出。在使用本装置时，需将几滴待测样品与样品端接触，几分钟后通过观察检测带的显色数目即可对被测样品中肌钙蛋白含量进行半定量分析。如果只有对照线15显色，所有检测线都不显色，说明被测样品中肌钙蛋白含量低于0.1ng/ml；如果检测线14一条检测线显色，其它检测线8，9，10，11，12，13不显色，说明被测样品中肌钙蛋白含量在0.1ng/ml至0.4ng/ml之间；如果检测线13，14二条检测线显色，其它检测线8，9，10，11，12不显色，说明被测样品中肌钙蛋白含量在0.4ng/ml至0.8ng/ml之间；如果检测线12，13，14三条检测线显色，其它检测线8，9，10，11不显色，说明被测样品中肌钙蛋白含量在0.8ng/ml至1.5ng/ml之间；如果检测线11，12，13，14四条检测线显色，其它检测线8，9，10不显色，说明被测样品中肌钙蛋白含量在1.5ng/ml至3ng/ml之间；如果检测线10，11，12，13，14五条检测线显色，检测线8，9不显色，说明被测样品中肌钙蛋白含量在3ng/ml至5ng/ml之间；如果检测线9，10，11，12，13，14六条检测线显色，检测线8不显色，说明被测样品中肌钙蛋白含量在5ng/ml至10ng/ml之间；如果七条检测线都显色，说明被测样品中肌钙蛋白含量在10ng/ml以上。

实例二：“微小心肌损伤”及“心肌梗塞”鉴别诊断测试卡。

本实例通过半定量测定心肌肌钙蛋白含量的区间，可用于“微小心肌损伤”及“心肌梗塞”的诊断及鉴别诊断。在本实例中，检测线由二条抗心肌肌钙蛋白抗体组成，在制作时将一条检测线的显色灵敏度调至为正常值上限(upper limit of normal)，将另一条检测线的显色灵敏度调至为心梗阳性水平决定值(decision limit for AMI)。当样品中肌钙蛋白含量高于正常临界值上限，但低于心梗阳性水平决定值时，只有一条检测线显色，提示患者为微小心肌损伤(minor myocardial damage，MMD)；当样品中肌钙蛋白含量高于心梗阳性水平决定值时，而条检测线都显色，提示患者为心肌梗塞(Acute myocardial infarction，AMI)。本装置的结构如图3和图4所示，与实例一相似，它是由衬板5、样品垫片2、加样端保护层1、显色标记抗体区(显色颗粒垫片)3、附着有多条抗体线的层析纤维薄膜4、手持端吸水片6及手持端保护层7组成，所述样品垫片位于加样端保护层与衬板之间、手持端吸水片位于手持端保护层与衬板之间，所述显色标记抗体区位于样品垫片与层析纤维薄膜之间并与样品垫片和纤维薄膜的边缘相接，所述附着有多条抗体线的层析纤维薄膜设置在衬板上位于显色标记抗体区与手持端之间并与手持端吸水片的边缘相连，层析纤维薄膜上附着的抗体由二条检测抗体线8、9和一条对照线10组成。每条检测抗体线所分别对应的检测灵敏度按从加样端到手持端方向依次递增，在检测抗体线9处喷涂大量高亲和力的抗心肌肌钙蛋白抗体，使得该检测线9的检测灵敏度较高，并通过控制该线上抗体的亲和性及抗体用量使得该线的检测灵敏度(即显色灵敏度)达到检测“微小心肌损伤”的灵敏度；在检测抗体线8处喷涂中等量高亲和力的抗心肌肌钙蛋白抗体，使得该检测线8的检测灵敏度低于检测线9的检测灵敏度，并通过控制该线上抗体的亲和性及抗体用量使得该线的检测灵敏度达到检测“心肌梗塞”的灵敏度。在使用本装置进行检测时，可将几滴被测样品与本装置的样品端接触，几分钟后，如果只有对照线10显色，所有检测线都不显色，说明被测样品正常；如果检测线9显色，而检测线8不显色，说明被测对象为“微小心肌损伤”；如果检测线8和检测线9二条检测线都显色，说明被测对象为心肌梗塞。

本实用新型要求保护检测装置的结构，凡使用本实用新型结构的检测装置，均属于本实用新型的保护范围。

Claims (2)

1、一种检测装置，其特征在于由衬板(5)、加样端样品垫片(2)、加样端保护层(1)、显色颗粒垫片(3)、层析纤维薄膜层(4)、手持端吸水片(6)及手持端保护层(7)组成，所述样品垫片(2)位于加样端保护层(1)与衬板(5)之间、手持端吸水片(6)位于手持端保护层(7)与衬板(5)之间，所述显色颗粒垫片(3)位于样品垫片(2)与层析纤维薄膜层(4)之间，并与样品垫片(2)和纤维薄膜层(4)的边缘相接，所述层析纤维薄膜(4)位于显色颗粒垫片(3)与手持端吸水片(6)之间，并与手持端吸水片(6)的边缘相连。

2、根据权利要求1的检测装置，其特征在于层析纤维薄膜层(4)上附着有至少二条检测抗体线和一条对照线。

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