CN110483619A - 一种源于碎米荠的抗氧化硒多肽及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

一种源于碎米荠的抗氧化硒多肽，其特征在于：其氨基酸序列为Gly‑Arg‑Val‑Gly‑Ser‑Ser‑Ser‑SeCys，所述SeCys为硒代半胱氨酸。一种制备源于碎米荠的抗氧化硒多肽的方法，包括打粉、酶解、超滤分离、离子交换层析分离和RP‑HPLC分离。本发明改变了现有抗氧化剂和硒补充剂的提取与运用的思路和方法，消除了人工合成抗氧化剂所可能引起的副作用，所提取得到的碎米荠抗氧化硒多肽是天然抗氧化剂和天然硒补充剂，可以取代传统的合成抗氧化剂同时具有补硒的效果。

Description

一种源于碎米荠的抗氧化硒多肽及其制备方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，涉及一种源于碎米荠的抗氧化硒多肽及其制备方法。
背景技术
多肽是由氨基酸按照一定的顺序排列组合而成的蛋白质片段，具有一定的生理功能。在人类的生命活动中，肽在体内的消化吸收优于游离的氨基酸。某些短肽在提供人体生长、发育所必需的营养物质的同时，还能够防病治病，调节人体机能，这些具有生物活性的多肽被称为生物活性肽。研究发现，很多不同来源的多肽都具有抗氧化能力，如大豆多肽和玉米多肽。而硒作为人体必需的微量元素，具有抗氧化、抗疲劳等功能性，但我国72％的区域为缺硒地区，30％为严重缺硒地区，而且我们日常食用的粮食蔬菜等食物中硒含量都较低，难以充足的补充我们日常所需要的硒，所以适当的补硒是必要的。硒可分为有机硒和无机硒，其中有机硒的生物利用度远高于无机硒，同时在毒性方面远低于无机硒。因此食用有机硒为最佳的补硒方式，有机硒主要分为硒蛋白和硒多糖两大类，其中硒多肽中的硒主要以硒代蛋氨酸(SeMet)和硒代半胱氨酸(SeCys)的形式存在。所以抗氧化硒多肽具有补硒和抗氧化的功效，是一种良好的功能性因子。
堇叶碎米荠是一种药食两用的超富硒植物，其硒含量高达1400mg/kg，其中有机硒含量远高于富硒酵母和富硒花生等物质。当前市面上的富硒产品，大多为植物或微生物制品，有机硒主要以SeMet为主，而堇叶碎米荠硒多肽中的硒主要以SeCys为主，能够弥补当前市场上补硒方式单一的现象。有研究表明碎米荠蛋白具有一定的抗氧化活性，表明碎米荠蛋白中含有具有抗氧化活性的氨基酸序列，通过适当的蛋白酶酶解碎米荠硒蛋白有利于释放具有高抗氧化活性的肽段，从而富集出具备抗氧化活性的硒多肽。硒多肽作为微量元素硒与生物活性肽的有机结合，理论上应兼有两者的生物活性。有研究者通过对比普通多肽与富硒多肽的生物活性，发现硒多肽生物活性更强。因此，有必要对碎米荠进行深入系统研究，对于碎米荠的综合开发和利用提供重要的科学依据。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一种源于碎米荠的抗氧化硒多肽及其制备方法，本发明制得的碎米荠抗氧化硒多肽抗氧化活性高，弥补了天然抗氧化剂的缺陷，消除了人们对人工合成抗氧化剂安全性的担忧。
本发明，一种源于碎米荠的抗氧化硒多肽，其特征在于：其氨基酸序列为Gly-Arg-Val-Gly-Ser-Ser-Ser-SeCys，所述SeCys为硒代半胱氨酸。
一种制备源于碎米荠的抗氧化硒多肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、将碎米荠整株烘干打粉，用无水乙醇脱色2h，以6400r/min离心15min，将沉淀风干，得到碎米荠粉末；
S2、将步骤S1中所述碎米荠粉末加入pH为8.5的缓冲液中，所述碎米荠粉末和缓冲液的比例为1g：40mL，再加入碱性蛋白酶进行第一次酶解，酶解温度、时间和酶-底物配比分别为50℃、4h和3000U/g，然后加入酸性蛋白酶进行第二次酶解，所述酶解温度、时间和酶-底物配比分别为50℃、4h和3000U/g，沸水浴灭酶15min后迅速冷却至室温，6400r/min离心15min，取上清液备用；
S3、将步骤S2中所述上清液利用膜过滤系统进行超滤分离，利用分子量截留范围不同的超滤膜对酶解产物进行分离，得到不同分子量的多肽，包括>3000Da和≤3000Da的组分；
S4、收集步骤S3中所述>3000Da和≤3000Da的组分中具有最佳抗氧化活性的组分1，所述组分1经过SephadexDEAE-FF离子交换层析(长30cm，直径2.7cm)进行分离，以含0-1mol/LNaCl的0.05mol/L、pH8.5Tris-HCl缓冲液进行线性梯度洗脱，流速为0.5ml/min，收集各组分比较其抗氧化活性，得到抗氧化强的组分2；
S5、采用RP-HPLC反相高效液相色谱进一步纯化步骤S4中所述组分2，所述反相高效液相色谱的色谱柱为C18，所述反相高效液相色谱洗脱条件为：柱温为20℃，洗脱液包括流动相A和流动相B，流动相A为纯乙腈，流动相B组成为0.05％三氟乙酸、5％乙腈和94.95％纯水，洗脱液流速为10mL/min，洗脱条件为0～5min 10％A、5～30min 100％A～50％A、30～35min 50％A～80％A、35～40min80％A、40～45min 80％A～100％A和45～50min 100％A，收集各组分，真空浓缩后冷冻干燥，比较各组分的抗氧化性能，抗氧化性能最强的组分即碎米荠抗氧化硒多肽。
一种源于碎米荠的抗氧化硒多肽在抗氧化功能性食品中的应用。
本发明的有益效果是：本发明以超富硒植物堇叶碎米荠为原料，采用蛋白酶直接酶解提取硒多肽，通过分离制备的到高抗氧化活性的硒多肽Gly-Arg-Val-Gly-Ser-Ser-Ser-SeCys。本发明改变了现有抗氧化剂和硒补充剂的提取与运用的思路和方法，消除了人工合成抗氧化剂所可能引起的副作用，所提取得到的碎米荠抗氧化硒多肽是天然抗氧化剂和天然硒补充剂，可以取代传统的合成抗氧化剂同时具有补硒的效果。
附图说明
图1为本发明的实施例1经Sephadex DEAE-FF离子交换层析后的图谱。
图2为本发明的实施例1经Sephadex DEAE-FF离子交换层析后各组分的多肽和硒含量。
图3为本发明的实施例1经Sephadex DEAE-FF离子交换层析后各组分清除DPPH自由基能力比较图。
图4为本发明的实施例1经Sephadex DEAE-FF离子交换层析后各组分清除羟自由基能力比较图。
图5为本发明的实施例1经Sephadex DEAE-FF离子交换层析后各组分清楚ABTS自由基能力比较图。
图6为本发明的实施例1经Sephadex DEAE-FF离子交换层析后各组分清楚超氧阴离子自由基能力比较图。
图7为本发明的实施例1组分CPA1的RP-HPLC图谱。
图8为本发明的实施例1组分CPAR1经RP-HPLC纯化后各组分抗氧化能力比较图。
图9为本发明的实施例1组分CPAR13纯化硒多肽质谱图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明了，下面结合具体实施方式并参照附图，对本发明进一步详细说明。应该理解，这些描述只是示例性的，而并非要限制本发明的范围。此外，在以下说明中，省略了对公知结构和技术的描述，以避免不必要地混淆本发明的概念。
实施例1
(1)堇叶碎米荠的酶解
将碎米荠整株烘干打粉，用无水乙醇脱色2h，以6400r/min离心15min，将沉淀风干，按照料液比1:40g/ml加入pH为8.5的碱溶液，加入碱性蛋白酶对碎米荠粉末进行酶解，温度为50℃、酶解时间为4h、酶-底物配比为4000U/g，然后加入酸性蛋白酶，温度为50℃、酶解时间为4h、酶-底物配比为3000U/g。沸水浴中灭酶15min，然后迅速冷却至室温，置于离心机中，以6400r/min离心15min，取上清液干燥，为碎米荠硒多肽粗提物。
(2)酶解产物的分离
利用膜过滤系统对碎米荠多肽溶液进行超滤分离，利用分子量截留范围不同的超滤膜对酶解产物进行分离，得到不同分子量的多肽，包括>3000Da，≤3000Da等组分。
(3)酶解产物的纯化
将得到的酶解产物分为2个分子量范围不同的组分，分别为分子量大于3000Da的组分和分子量小于3000Da的组分；收集具有最佳抗氧化活性的组分，再经过SephadexDEAE-FF离子交换层析(长30cm，直径2.7cm)进行分离，以含0-1mol/LNaCl的0.05mol/L、pH8.5Tris-HCl缓冲液进行线性梯度洗脱，流速为0.5ml/min，洗脱曲线如图1所示，制得的富硒多肽中多肽含量为38.3g/100g，硒含量为1100mg/kg。富硒多肽经DEAE-Sepharose FF凝胶分离得到五个峰，分别为120～240min(CPA1)，250～330min(CPA2)，340～450min(CPA3)，460～590min(CPA4)，600～700min(CPA5)。
对所得多肽进行多肽和硒含量的测定得到图2，如图所示CPA5多肽含量最高为59.0g/100g，硒含量为215μg/g；CPA1硒含量最高为531μg/g，多肽含量最高为32g/100g；CPA3多肽含量为44.7g/100g，硒含量为518μg/g。
对所得多肽组分进行DPPH·清除率的测定，如图3及下表所示，5种富硒多肽均对DPPH自由基有较好的清除，且清除能力与富硒多肽的浓度有关，随多肽浓度增大对DPPH自由基的清除能力逐渐增加，其中CPA1对DPPH自由基的清除能力在不同浓度下均优于SP和其他四种富硒多肽，从清除50％DPPH自由基浓度(IC50浓度)来看，六种抗氧化剂中CPA1清除DPPH自由基能力最强，可能是由于其中CPA1的硒含量最高。DPPH是一种稳定的以氮为中心的自由基，可能是由于硒影响多肽的性质，暴露更多位点，使其更多的与DPPH自由基结合。
对所得多肽组分进行OH·清除率的测定，如图4和下表所示，在低中浓度时CPA1清除羟自由基能力皆高于其它几种多肽。高浓度时几种多肽清除羟自由基能力大致相同。从IC50浓度来看CPA1清除羟自由基的能力最大。可能由于CPA1中硒含量最高，与羟自由基反应更为迅速，反应更完全。
对所得多肽组分进行ABTS+·清除率的测定，如图5和下表所示，CPA1清除ABTS自由基的能力最强。从IC50浓度来看，CPA1清除ABTS自由基的能力远远高于其它几个多肽组分，可能与CPA1中硒含量最高有关系。
对所得多肽组分进行O2 -·清除率的测定，如图6和下表所示，CPA1清除超氧阴离子自由基的能力强于其它五个多肽组分，从IC50浓度来看六种抗氧化剂的清除超氧阴离子能力依次为：VC>CPA1>CPA5>SP>CPA3>CPA4>CPA2，可能是几种多肽中硒含量和多肽结构多种因素的影响。
可见，组分CPA1的抗氧化性能最强。
对抗氧化强的组分CPA1再采用RP-HPLC反相高效液相色谱进一步纯化，所用色谱柱为Waters xBriidge PrepC18(250mm×19mm，5μm)，紫外检测波长为220nm，柱温为20℃，流速为10ml/min，流动相为A为纯乙腈，B为含有0.05％三氟乙酸、5％乙腈，94.95％水，采用二元梯度洗脱，洗脱条件为：0～5min，10％A；5～30min，100％A～50％A；30～35min，50％A～80％A；35～40min，80％A；40～45min，80％A～100％A；45～50min，100％A。洗脱曲线如图7所示，对15组分进行收集，浓缩，冻干后，配置各组分浓度为0.1mg/mL的多肽溶液，对各组分进行抗氧化分析得到图8所示。15个组分对4种自由基均具有一定的捕获自由基的能力，说明各组分都可能存在提供电子或氢的物质，可以与自由基直接反应，形成稳定的物质，或与中间体反应，使氧化反应无法顺利进行，从而降低自由基的含量。在经C18高效制备液相色谱分离得到的15个组分中CPAR13在清除DPPH自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基方面表现最优，清除率分别为86.2％、21.3％和40.6％，其次为CPAR11，清除率分别为81.4％、17.8％和36.7％，均比SP清除自由基能力强。CPAR13在清除ABTS+自由基方面也表现良好，清除率为42.9％。CPAR14在清除ABTS+自由基方面最强，清除率为43.4％。二者在清除ABTS+自由基方面清除率相差不大，且都比SP捕获自由基能力强。所以根据15中硒多肽在四种自由基清除实验中的结果，发现CPAR13为抗氧化能力最优的组分。
通过测定上述15种组分的多肽含量、硒含量及体外抗氧化活性，发现随着硒含量的增大，抗氧化能力不断增强，说明富硒抗氧化硒多肽中硒含量与清除自由基能力之间存在一定的关系，对富硒多肽中相关成分与清除自由基能力进行Pearson双变量相关性分析，结果下表所示。
注：**表示P＜0.01水平上相关性显著，*表示P＜0.05水平上相关性显著。
从上表中可以看出富硒多肽中硒含量与抗氧化能力在P＜0.05的水平上显著正相关，特别是与清除DPPH自由基、超氧阴离子自由基和ABTS+自由基能力方面在P＜0.01水平上极显著正相关。但富硒多肽中多肽含量与其清除自由基能力的相关性系数均小于0.5，相关性较弱，特别是与羟自由基、超氧阴离子自由基和ABTS+自由基清除能力的相关性系数均小于0.2，说明多肽含量与此三种清除自由基的能力无相关性。这表明虽然在硒多肽中硒与多肽均有清除自由基的能力，但在富硒多肽中硒在清除自由基上所起的作用远远大于多肽的作用。可能是因为：1、在硒多肽中硒与多肽在抗氧化方面存在协同作用，硒影响或直接构成多肽的活性中心，增强多肽的抗氧化能力。2、硒是一种既可以带正电又可以带负电的非金属元素，可以催化甚至直接参与清除自由基的过程。
因此，组分CPAR13为本发明所述的碎米荠抗氧化硒多肽。采用LC-MS/MS鉴定其氨基酸序列为Gly-Arg-Val-Gly-Ser-Ser-Ser-SeCys(GRVGSSSC)(如图5)。
实施例2
对实施例1中得到的天然抗氧化硒多肽通过D-半乳糖致衰小鼠模型研究其体内抗氧化活性。
选取60只ICR雄性小鼠，保持饲养室室内湿度为60±5％和环境温度为23±2℃的条件下饲养，12h交替循环光照和黑暗，饲养期间小鼠自由饮水饮食。前期小鼠适应性喂养7d，随后按随机数字表法将小鼠分为6组：衰老模型组，空白对照组、硒蛋白组、碎米荠硒多肽低剂量组、碎米荠硒多肽中剂量组、碎米荠硒多肽高剂量组。剂量设计依据：若成人(体重为50kg)日摄入量为100μg(以硒计)，则中剂量组小鼠日摄入量为成人用量的10倍为20μg/kg·BW，则低剂量组和高剂量组分别为10μg/kg·BW和40μg/kg·BW，小鼠每日灌胃量为0.1mL，具体灌胃如下表所示。
除空白对照组背部皮下注射0.1mL/d的生理盐水外，其它各组皮下注射D-半乳糖200mg/(kg·d)(D-半乳糖注射液由灭菌的生理盐水配制)，以上各组注射均按照0.1mL/(10g·BW)的标准操作。小鼠连续灌胃5周，每周称体重，按照体重调整小鼠的灌胃量和注射量。末次给药后禁食12h，称体重，戊巴比妥钠溶液麻醉，摘眼球取血并用颈椎脱臼法处死。
测定小鼠血液、肝脏和心脏中总超氧化物歧化酶(SOD)活力、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力、还原型谷胱甘肽(GSH)含量和丙二醛(MDA)含量，测定小鼠肝脏蛋白质羰基含量。
处死小鼠后，取小鼠肝脏和心脏，分别用冰生理盐水冲洗干净，后用滤纸将表面的水吸干，取0.2～0.4g小鼠组织，按照1:9(w/v)加入冰生理盐水，用高速匀浆机制备得10％的组织匀浆液，9000r/min离心10min，取上清待测。血清、肝脏和心脏匀浆抗氧化活性的测定按照南京建成生物工程研究所生产的试剂盒测定小鼠血液、肝脏和心脏中总超氧化物歧化酶(SOD)活力、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力、还原型谷胱甘肽(GSH)含量和丙二醛(MDA)含量，测定小鼠肝脏蛋白质羰基含量。采用SPSS 23.0进行统计分析，采用t检验对组间差异进行分析。
还原型谷胱甘肽(GSH)测定试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)测定试剂盒、总超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒、丙二醛(MDA)测定试剂盒、蛋白质羰基含量测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所。
碎米荠硒多肽对小鼠血清抗氧化活性的影响：
碎米荠硒多肽对小鼠肝脏抗氧化活性的影响：
碎米荠硒多肽对小鼠心脏抗氧化活性的影响：
经本实施例测定，结果如以上表格所示，发现碎米荠硒多肽能够提高小鼠体内SOD和GSH-Px活力、降低MDA和蛋白质羰基含量、提高GSH含量，具有良好的抗氧化功能；碎米荠硒多肽抗氧化强弱与其摄入量有关，在一定剂量范围内存在量效关系。
应当理解的是，本发明的上述具体实施方式仅仅用于示例性说明或解释本发明的原理，而不构成对本发明的限制。因此，在不偏离本发明的精神和范围的情况下所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。此外，本发明所附权利要求旨在涵盖落入所附权利要求范围和边界、或者这种范围和边界的等同形式内的全部变化和修改例。

Claims (3)

1.一种源于碎米荠的抗氧化硒多肽，其特征在于：其氨基酸序列为Gly-Arg-Val-Gly-Ser-Ser-Ser-SeCys，所述SeCys为硒代半胱氨酸。
2.一种制备如权利要求1所述的源于碎米荠的抗氧化硒多肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、打粉：将碎米荠整株烘干打粉，用无水乙醇脱色2h，以6400r/min离心15min，将沉淀风干，得到碎米荠粉末；
S2、酶解：将步骤S1中所述碎米荠粉末加入pH为8.5的缓冲液中，所述碎米荠粉末和缓冲液的比例为1g：40mL，再加入碱性蛋白酶进行第一次酶解，酶解温度、时间和酶-底物配比分别为50℃、4h和3000U/g，然后加入酸性蛋白酶进行第二次酶解，所述酶解温度、时间和酶-底物配比分别为50℃、4h和3000U/g，沸水浴灭酶15min后迅速冷却至室温，6400r/min离心15min，取上清液备用；
S3、超滤分离：将步骤S2中所述上清液并利用膜过滤系统进行超滤分离，利用分子量截留范围不同的超滤膜对酶解产物进行分离，得到不同分子量的多肽，包括>3000Da和≤3000Da的组分；
S4、离子交换层析分离：收集步骤S3中所述>3000Da和≤3000Da的组分中具有最佳抗氧化活性的1，所述组分1经过SephadexDEAE-FF离子交换层析进行分离，以含0-1mol/LNaCl的0.05mol/L、pH8.5Tris-HCl缓冲液进行线性梯度洗脱，流速为0.5ml/min，收集各组分比较其抗氧化活性，得到抗氧化强的组分2；
S5、RP-HPLC分离：采用RP-HPLC反相高效液相色谱进一步纯化步骤S4中所述组分2，所述反相高效液相色谱的色谱柱为C18，所述反相高效液相色谱洗脱条件为：柱温为20℃，洗脱液包括流动相A和流动相B，流动相A为纯乙腈，流动相B组成为0.05％三氟乙酸、5％乙腈和94.95％纯水，洗脱液流速为10mL/min，洗脱条件为0～5min 10％A、5～30min 100％A～50％A、30～35min50％A～80％A、35～40min 80％A、40～45min 80％A～100％A和45～50min 100％A，收集各组分，真空浓缩后冷冻干燥，比较各组分的抗氧化性能，抗氧化性能最强的组分即碎米荠抗氧化硒多肽。
3.一种如权利要求1所述的源于碎米荠的抗氧化硒多肽在抗氧化功能性食品中的应用。
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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111493325A (zh) * 2020-05-07 2020-08-07 恩施德源健康科技发展有限公司 植物硒肽在制备改善肥胖及代谢综合征组合物中的应用
CN112129864A (zh) * 2020-09-24 2020-12-25 江南大学 一种富硒植物干粉中硒形态测定的方法
CN113388656A (zh) * 2021-06-01 2021-09-14 恩施土家族苗族自治州农业科学院(恩施土家族苗族自治州硒应用技术与产品开发研究院) 一种碎米荠生物活性肽及其应用
CN114478692A (zh) * 2021-12-24 2022-05-13 华南农业大学 一种高抗氧化活性富硒肽及其应用
CN115669912A (zh) * 2022-11-04 2023-02-03 中盐西南盐业有限公司 一种加碘富硒食用盐及其制备方法
CN116584659A (zh) * 2023-05-23 2023-08-15 山东至善硒生物科技有限公司 一种含有硒多肽的产品及其制备方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007028979A1 (en) * 2005-09-06 2007-03-15 Isis Innovation Limited Plant transformation
CN104086471A (zh) * 2014-07-25 2014-10-08 恩施土家族苗族自治州农业科学院 从聚硒植物碎米荠中提取硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸的方法
CN104231038A (zh) * 2014-08-25 2014-12-24 华中农业大学 一种脱色壶瓶碎米荠含硒蛋白的提取、纯化方法
CN108157579A (zh) * 2018-01-08 2018-06-15 恩施德源健康科技发展有限公司 一种高有机硒含量的堇叶碎米荠硒多肽的制备方法
CN109303794A (zh) * 2017-07-27 2019-02-05 恩施硒德生物工程有限公司 一种富硒堇叶碎米荠提取物及其在肝脏保护方面的应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007028979A1 (en) * 2005-09-06 2007-03-15 Isis Innovation Limited Plant transformation
CN104086471A (zh) * 2014-07-25 2014-10-08 恩施土家族苗族自治州农业科学院 从聚硒植物碎米荠中提取硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸的方法
CN104231038A (zh) * 2014-08-25 2014-12-24 华中农业大学 一种脱色壶瓶碎米荠含硒蛋白的提取、纯化方法
CN109303794A (zh) * 2017-07-27 2019-02-05 恩施硒德生物工程有限公司 一种富硒堇叶碎米荠提取物及其在肝脏保护方面的应用
CN108157579A (zh) * 2018-01-08 2018-06-15 恩施德源健康科技发展有限公司 一种高有机硒含量的堇叶碎米荠硒多肽的制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ESZTER BORBÁLA BOTH ET AL: "Selenolanthionine is the major water-soluble selenium compound in the selenium tolerant plant Cardamine violifolia", 《BIOCHIM BIOPHYS ACTA GEN SUBJ》 *
杜朝东等: "富硒碎米荠不同提取物抗氧化性能研究", 《食品与机械》 *

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111493325A (zh) * 2020-05-07 2020-08-07 恩施德源健康科技发展有限公司 植物硒肽在制备改善肥胖及代谢综合征组合物中的应用
CN112129864A (zh) * 2020-09-24 2020-12-25 江南大学 一种富硒植物干粉中硒形态测定的方法
CN113388656A (zh) * 2021-06-01 2021-09-14 恩施土家族苗族自治州农业科学院(恩施土家族苗族自治州硒应用技术与产品开发研究院) 一种碎米荠生物活性肽及其应用
CN113388656B (zh) * 2021-06-01 2022-08-16 恩施土家族苗族自治州农业科学院(恩施土家族苗族自治州硒应用技术与产品开发研究院) 一种碎米荠生物活性肽及其应用
CN114478692A (zh) * 2021-12-24 2022-05-13 华南农业大学 一种高抗氧化活性富硒肽及其应用
CN114478692B (zh) * 2021-12-24 2023-03-21 华南农业大学 一种高抗氧化活性富硒肽及其应用
CN115669912A (zh) * 2022-11-04 2023-02-03 中盐西南盐业有限公司 一种加碘富硒食用盐及其制备方法
CN115669912B (zh) * 2022-11-04 2024-04-30 中盐西南盐业有限公司 一种加碘富硒食用盐及其制备方法
CN116584659A (zh) * 2023-05-23 2023-08-15 山东至善硒生物科技有限公司 一种含有硒多肽的产品及其制备方法

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