CN110452842A - 乳双歧杆菌nbk-W13及其应用 - Google Patents

乳双歧杆菌nbk-W13及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种乳双歧杆菌nbk‑W13及其应用。本发明提供的乳双歧杆菌nbk‑W13具有较强的耐酸耐胆盐特性，且显著增强免疫力的功效。研究其在小鼠肠粘膜免疫中所起的作用，发现当免疫低下模型小鼠和正常小鼠口服该乳双歧杆菌14天后，其特异性细胞免疫功能、特异性体液免疫功能、非特异性免疫功能均得到有效提升。除此之外，乳双歧杆菌nbk‑W13的灭活菌体也有增强免疫力的作用。实验表明，乳双歧杆菌nbk‑W13冻干粉及其灭活菌粉均可通过调节小鼠免疫脏器系数，血清细胞因子浓度，抗体浓度以及肠道抗氧化能力等达到增强免疫力的作用。

Description

乳双歧杆菌nbk-W13及其应用
技术领域
本发明涉及一种微生物及其应用，具体地说，涉及一种乳双歧杆菌nbk-W13及其应用。
背景技术
乳双歧杆菌是人体肠道内的有益菌，具有调节肠道菌群，防治肠道疾病，增强机体免疫力等多种功能。目前市面上常见的乳双歧杆菌产品普遍存在，当活菌数不足时，不能充分发挥产品功效，且乳双歧杆菌存在稳定性不好，活菌数衰减较快等缺陷，因此，亟需开发具有多功效的乳双歧杆菌新菌株。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有增强肠粘膜免疫反应作用的乳双歧杆菌nbk-W13及其应用。
为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供一种乳双歧杆菌(Bifidobacteriumlactis)nbk-W13，菌株nbk-W13分离自中国健康婴儿的粪便，该乳双歧杆菌具有较强的耐酸耐胆盐特性，且显著增强免疫力的功效。乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)nbk-W13现已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏编号CGMCC No.17829，保藏日期2019年5月20日。
第二方面，本发明提供含有所述乳双歧杆菌nbk-W13的微生物菌剂。
第三方面，本发明提供乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉的制备方法，包括以下步骤：
1)种子液的制备；
2)扩大培养；
3)高密度发酵培养；
4)发酵液离心取沉淀，得到菌泥；
5)将菌泥与冻干保护剂混合后进行乳化包埋，得到乳化液；
6)乳化液经冷冻干燥，粉碎，即得乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉。
前述的方法，步骤1)和2)中所用种子培养基为：按质量百分数计，1～3％乳糖、1～3％蛋白胨、0.5～3％酵母浸膏、0.2～1％无水乙酸钠、0.2～1％柠檬酸铵、0.02～0.08％硫酸镁、0.02～0.08％硫酸锰、0.05％～0.1％L-半胱氨酸盐酸盐、0.05～0.1％吐温80和余量的水，pH值6.2～6.8。优选地，所用种子培养基为：1.5～2.5％乳糖、1.5～2.5％蛋白胨、1～2％酵母浸膏、0.4～0.6％无水乙酸钠、0.4～0.6％柠檬酸铵、0.04～0.06％硫酸镁、0.04～0.06％硫酸锰、0.06％～0.08％L-半胱氨酸盐酸盐、0.06～0.08％吐温80和余量的水。
步骤3)中所用发酵培养基为：按质量百分数计，1～3％乳糖、1～3％蛋白胨、0.5～3％酵母浸膏、0.2～1％无水乙酸钠、0.2～1％柠檬酸铵、0.02～0.08％硫酸镁、0.02～0.08％硫酸锰、0.05％～0.1％L-半胱氨酸盐酸盐、0.05～0.1％吐温80和余量的水，pH值6.2～7.0。优选地，所用发酵培养基为：1.5～2.5％乳糖、1.5～2.5％蛋白胨、1～2％酵母浸膏、0.4～0.6％无水乙酸钠、0.4～0.6％柠檬酸铵、0.04～0.06％硫酸镁、0.04～0.06％硫酸锰、0.06％～0.08％L-半胱氨酸盐酸盐、0.06～0.08％吐温80和余量的水。
前述的方法，步骤1)种子液的制备方法为：从斜面挑取一环菌种，接种于装有种子培养基的试管中，于30-40℃静置培养12-24h，即得种子液。优选培养条件为：35～40℃静置培养12-20h(优选37℃静置培养16h)。
本发明中，所述静置培养是指厌氧培养(严格厌氧)。
前述的方法，步骤2)扩大培养的具体方法为：将步骤1)所得种子液按2-8％v/v的接种量转接至装有种子培养基的三角瓶中，装液量50-100mL/250mL，于28-40℃静置培养8～24h，得到培养液。优选培养条件为：32-37℃培养15-18h。
前述的方法，步骤3)高密度发酵培养的具体方法为：将步骤2)所得培养液按4-10％v/v的接种量转接至装有发酵培养基的发酵罐中，装液量5-7L/10L，于30-42℃静置培养8-16h，得到发酵液。优选培养条件为：30-40℃静置培养10-15h。
前述的方法，步骤4)离心条件为：4000-8000rpm离心10-30min。
前述的方法，步骤5)具体为：步骤5)具体为：将菌泥与脱脂乳(即脱脂乳粉)、甘油和水按8-12：5-15：1-3：70-85(优选10:10:3:77)的重量比混合，在20-30℃条件下乳化20-40min，得到乳化液。
前述的方法，步骤6)冷冻干燥的具体方法为：将乳化液在-40--30℃下预冻1-3h，然后进行真空冷冻干燥，冷冻温度为-40-37℃，真空度为0.1-0.35MPa。
优选地，将乳化液在-40--35℃下预冻1.5-2.5h(优选-38℃下预冻2h)，然后进行真空冷冻干燥，冷冻温度为-35℃～25℃，真空度为0.2MPa。
第四方面，本发明提供按照上述方法制备的乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉，其中，所述冻干粉中活菌数为2000～6000亿CFU/g。
第五方面，本发明提供所述乳双歧杆菌nbk-W13的灭活菌粉，其制备方法包括：
1)种子液的制备；
2)扩大培养；
3)高密度发酵培养；
4)发酵液离心收集菌体；
5)菌体于120-140℃喷雾干燥；干燥后将其粉碎至40目，得到乳双歧杆菌nbk-W13灭活菌粉。
其中，步骤1)～4)与制备乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉的方法中步骤1)～4)相同。
第六方面，本发明提供所述的乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉或乳双歧杆菌nbk-W13的灭活菌粉在食品、药品或保健品领域中的应用。
本发明提供的乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉和/或灭活菌粉在制备的增强免疫力的食品、药品或保健品中可以作为活性成分，也可以作为辅料、添加剂，起到增强免疫力的作用。
第七方面，本发明提供一种复合益生菌发酵乳的制备方法，生牛乳经灭菌后，向其中加入生牛乳质量百分比5-10％的白砂糖，然后按保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、乳双歧杆菌nbk-W13 0.5-3:1-4:0.8-4的比例接入发酵菌种，总接种量为106-107CFU/mL，搅拌条件下，于30-42℃恒温发酵4-8h(最终发酵体系的pH＝4.5)，即得复合益生菌发酵乳。
优选地，生牛乳经灭菌后，向其中加入生牛乳质量百分比8％的白砂糖，然后按保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、所述乳双歧杆菌nbk-W13 1-2:2-3:1-2.5(优选1:2:1)的比例接入发酵菌种，总接种量为0.5×107-1×107CFU/mL(优选1×107CFU/mL)，搅拌条件下，于37℃恒温发酵4-6h(优选6h)，即得复合益生菌发酵乳。
第八方面，本发明提供一种乳双歧杆菌固体饮料，包括如下重量份的各组分：所述乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉1-4份，低聚果糖8-15份，低聚木糖8-15份、赤藓糖醇30-40份和抗性糊精35-45份。
优选地，所述乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉2-3份，低聚果糖8-12份，低聚木糖10-12份、赤藓糖醇32-36份和抗性糊精36-42份。
更优选地，所述乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉2份，低聚果糖10份，低聚木糖10份、赤藓糖醇32份和抗性糊精40份。
第九方面，本发明提供含有所述乳双歧杆菌nbk-W13菌剂、所述乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉或乳双歧杆菌nbk-W13灭活菌粉的组合物。
借由上述技术方案，本发明至少具有下列优点及有益效果：
本发明提供的乳双歧杆菌nbk-W13具有较强的耐酸耐胆盐特性，且显著增强免疫力的功效。研究其在小鼠肠粘膜免疫中所起的作用，发现当免疫低下模型小鼠和正常小鼠口服该乳双歧杆菌14天后，其特异性细胞免疫功能、特异性体液免疫功能、非特异性免疫功能均得到有效提升。除此之外，乳双歧杆菌nbk-W13的灭活菌体也有增强免疫力的作用。实验表明，乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉及其灭活菌粉均可通过调节小鼠免疫脏器系数，血清细胞因子浓度，抗体浓度以及肠道抗氧化能力等达到增强免疫力的作用。
附图说明
图1为本发明实施例5中乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉及其灭活菌粉对小鼠体重的影响。
图2为本发明实施例5中乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉及其灭活菌粉对小鼠免疫器官指数的影响。其中，*表示与模型组比较，P<0.05；**表示与模型比较，P<0.01。
图3为本发明实施例5中乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉及其灭活菌粉对小鼠血液白细胞总数的影响。其中，*表示与模型组比较，P<0.05。
图4为本发明实施例5中乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉及其灭活冻干粉对小鼠细胞因子IL-6含量的影响。其中，同列之间相同字母表示差异不显著，不同字母则表示差异显著，P<0.05。
图5为本发明实施例5中乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉及其灭活菌粉对小鼠肠粘膜SIgA的影响。其中，同列之间相同字母表示差异不显著，不同字母则表示差异显著，P<0.05。
图6为本发明实施例5中乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉及其灭活菌粉对小鼠肠道及血清中TNF-α活性的影响。其中，同列之间相同字母表示差异不显著，不同字母则表示差异显著，P<0.05。
图7为本发明实施例5中乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉及其灭活菌粉对小鼠肠粘膜DAO活性的影响。其中，相同字母表示差异不显著，不同字母表示差异显著，P<0.05。
图8为本发明实施例5中乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉及其灭活菌粉对小鼠结肠T-AOC含量的影响。其中，注：相同字母表示差异不显著，不同字母表示差异显著，P<0.05。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。
本发明中涉及到的百分号“％”，若未特别说明，是指质量百分比；但溶液的百分比，除另有规定外，是指100mL溶液中含有溶质的克数。
实施例1 乳双歧杆菌nbk-W13的筛选及鉴定
采集健康婴儿的粪便，经研磨后，无菌生理盐水稀释至合适梯度，于改良MRS琼脂平板上采用四区划线法划线后，在30～42℃培养箱中厌氧培养24-48h。挑选单菌落，镜检，划线，进一步纯化得到菌株nbk-W13。
菌株nbk-W13的微生物学特征及生理生化特性：
细胞形态
实验项目 结果
细胞形态 杆状
革兰氏染色 阳性
氧化酶 阴性
接触酶 阴性
理化实验结果
菌株nbk-W13的16S rDNA序列见SEQ ID NO:1。根据微生物学及分子生物学鉴定结果，将菌株nbk-W13鉴定为乳双歧杆菌。
实施例2 乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉的制备
乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉的制备方法包括以下步骤：
(1)将乳双歧杆菌nbk-W13接种至种子培养基中活化，得到一级种子液；
(2)将一级种子液接种至种子培养基中厌氧培养8～24h，得到二级种子液；
(3)将二级种子液接入发酵培养基中进行高密度发酵，离心取沉淀，得到菌泥；
(4)将菌泥与冻干保护剂混合后进行乳化包埋，得到乳化液；
(5)将得到的乳化液冷冻干燥，粉碎，得到乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉。
按质量百分比计，种子培养基的配方为：2％乳糖、1.2％蛋白胨、0.5％酵母浸膏、0.5％无水乙酸钠、0.4％柠檬酸铵、0.02％硫酸镁、0.06％硫酸锰、0.06％L-半胱氨酸盐酸盐，0.1％吐温80和余量的水，pH值6.8。
按质量百分比计，发酵培养基的配方为：2％乳糖、1％蛋白胨、0.5％酵母浸膏、0.5％无水乙酸钠、0.2％柠檬酸铵、0.06％硫酸镁、0.02％硫酸锰、0.06％L-半胱氨酸盐酸盐，0.1％吐温80和余量的水，pH值为6.4。
按质量百分比计，菌泥、脱脂乳、甘油和水分别为10:10:3:77。
乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉的具体制备方法如下：将乳双歧杆菌接种到装有种子培养基的试管中活化，得到一级种子液，再将一级种子液按照3％v/v的接种量转接至种子培养基中得到二级种子液，培养条件为37℃，厌氧培养(静置培养)15h；将二级种子液接入发酵培养基中进行高密度发酵，二级种子液接至发酵培养基中的接种量为5％v/v，培养条件为36℃，厌氧培养10h，待发酵液中菌体密度达到109CFU/mL，收集发酵液，离心取沉淀，得到菌泥，将菌泥加入保护剂进行乳化包埋，乳化时间25min；将乳化液在-38℃下预冷冻2h，将预冷冻后的乳化液进行真空冷冻干燥，冷冻温度为-35℃-25℃，真空度为0.2MPa；真空冷冻干燥后将其粉碎至40目，得到乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉，所得冻干粉中活菌数为4.8×1011CFU/g。
实施例3 乳双歧杆菌nbk-W13灭活菌粉的制备
按质量百分比计，种子培养基的配方为：1.5％乳糖、1.8％蛋白胨、0.5％酵母浸膏、0.5％无水乙酸钠、0.4％柠檬酸铵、0.02％硫酸镁、0.06％硫酸锰、0.06％L-半胱氨酸盐酸盐，0.1％吐温80和余量的水，pH值6.8；
按质量百分比计，发酵培养基的配方为：2％乳糖、1.3％蛋白胨、0.5％酵母浸膏、0.5％无水乙酸钠、0.2％柠檬酸铵、0.06％硫酸镁、0.02％硫酸锰、0.06％L-半胱氨酸盐酸盐，0.1％吐温80和余量的水，pH值为6.4。
乳双歧杆菌nbk-W13灭活菌粉的具体制备方法如下：
1)将乳双歧杆菌接种到装有种子培养基的试管中活化(37℃，20h)，得到一级种子液；
2)将一级种子液按照质量百分比为4％的接种量转接至种子培养基中得到二级种子液，培养条件为37℃，厌氧培养15h；
3)将二级种子液接入发酵培养基中进行高密度发酵，二级种子液接至发酵培养基中的接种量为4％v/v，培养条件为37℃，厌氧培养12h，待发酵液中菌体密度达到109CFU/mL，收集发酵液，8000rpm离心30min，获得菌体；
将菌体进行喷雾干燥，干燥温度为130℃；干燥后将其粉碎至40目，得到乳双歧杆菌nbk-W13灭活菌粉。
实施例4 耐酸耐胆盐实验
将实施例2得到的nbk-W13菌粉分别以1％(w/v)的接种量接于pH为6.0和pH为2.0的MRS培养基中培养3h后采用平板计数法进行活菌计数，结果见表1。
表1
可以看出，在pH 2.0的条件下，乳双歧杆菌nbk-W13在3h后仍有足够数量的活菌可以通过胃部环境。
将实施例2得到的nbk-W13菌粉分别以1％(w/v)的接种量接于胆盐浓度为0％(w/v)和胆盐浓度为0.4％的MRS培养基中培养3h后采用平板计数法进行活菌计数，结果见表2。
表2
可以看出，在0.4％的胆盐浓度下，乳双歧杆菌nbk-W13有较好的胆盐耐受性。
实施例5 乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉及其灭活菌粉在增强免疫低下小鼠免疫力中的应用
1、试验材料：
实验动物：SPF级BALB/c雄性小鼠70只，4-6周龄，18～22g。
试验对象：以实施例2和3所得乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉及灭活菌粉为样品。
2、动物分组、造模及给药方法
空白组小鼠腹腔注射生理盐水0.1mL/10g.bw，持续3d；实验组及模型组小鼠腹腔注射环磷酰胺80mg·kg-1·d-1，注射量为0.1ml/10g.bw，持续3d，造成免疫低下模型。
A空白对照组：每天灌胃生理盐水0.1ml/10g.bw，连续14d。
B模型组：每天灌胃生理盐水0.1ml/10g.bw，连续14d。
C nbk-W13灭活菌粉组：称取0.01g nbk-W13灭活菌粉于320ml无菌生理盐水中，即得nbk-W13灭活菌粉灌胃液，灌胃剂量为0.1ml/10g.bw，连续14d。
D nbk-W13菌粉组：称取0.01g nbk-W13菌粉于320ml无菌生理盐水中，即得nbk-W13菌粉灌胃液，灌胃剂量为0.1ml/10g.bw，连续14d。
实验期间记录小鼠体重和精神面貌，实验结束后，禁食不禁水12h后，摘眼球取血法处死小鼠，测试小鼠免疫器官指数、血液中白细胞数、NK细胞活性和巨噬细胞吞噬能力，采用酶联免疫法测定小鼠外周血免疫球蛋白含量和相关细胞因子的表达以及肠粘膜总抗氧化能力T-AOC，采用比色法分别测定肠粘膜中SIgA的含量和肠黏膜的通透性。
实验结果见图1～图8及表3～表4。
从图1可以看出，在造模结束后，实验组和模型组小鼠相比于空白组，体重均有下降，随着乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉组和灭活菌粉组灌胃时间的延长，实验组小鼠的体重逐渐恢复至接近空白组小鼠的水平，而模型组小鼠的体重呈现出下降趋势，表明乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉及其灭活菌粉对免疫低下小鼠的体重均具有一定的恢复作用。
脾脏与胸腺是体内的主要免疫器官，两者能反映免疫器官发育和免疫细胞的功能状况，间接反映机体的免疫水平。从图2可以看出，与模型组相比，乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉组及其灭活菌粉组的脾脏和胸腺指数均有明显下降，且两组之间有显著性差异，说明乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉组及其灭活菌粉组能显著增加小鼠免疫器官的指数。
白细胞计数能够反映免疫系统的损伤程度，由图3结果可以看出，与模型组相比，乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉及其灭活菌粉均能显著增加小鼠血液中白细胞总数，说明乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉及其灭活菌粉能有效降低免疫系统的损伤程度，起到调节免疫的作用。
NK细胞是机体重要的免疫细胞，能通过释放细胞因子对机体进行免疫功能调节，巨噬细胞吞噬活性是衡量机体非特异性免疫功能的重要标志之一。从表3结果可以看出，与模型组相比，nbk-W13冻干粉组及nbk-W13灭活菌粉组的NK细胞的杀伤活性和巨噬细胞的吞噬能力均有显著提高，表明乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉及其灭活菌粉有增强NK细胞的活性，活化巨噬细胞的作用，从而在提高机体的免疫反应中起到极其重要的作用。
表3 乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉及其灭活菌粉对小鼠NK细胞吞噬活性和巨噬细胞吞噬能力的影响
分组 NK细胞吞噬活性(％) 巨噬细胞吞噬能力(OD570nm)
空白对照组 52.16±3.98<sup>b</sup> 1.56±0.37<sup>a</sup>
模型组 44.53±5.26<sup>c</sup> 1.21±0.28<sup>d</sup>
nbk-W13灭活菌粉组 58.94±6.31<sup>a</sup> 1.39±0.21<sup>c</sup>
nbk-W13冻干粉组 60.37±5.15<sup>a</sup> 1.46±0.36<sup>b</sup>
注：同列之间相同字母表示差异不显著，不同字母则表示差异显著，P＜0.05。
细胞因子IL-6是机体活化的淋巴细胞产生的免疫活性物质，具有吞噬病毒，参与免疫反应的作用。细胞因子分泌量的多少，在一定程度上能够反映机体免疫系统免疫应答的水平和状态。图4的实验结果表明，乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉及其灭活菌粉能显著增加小鼠血清、结肠和回肠中IL-6的含量，表明乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉及其灭活菌粉对小鼠细胞因子IL-6的含量有一定的调节作用。
表4 乳双歧杆菌nbk-W13菌粉及其灭活菌粉对小鼠外周血免疫球蛋白含量的影响
组别 IgM(μg/mL) IgG(μg/mL)
空白对照组 1.36±0.21<sup>b</sup> 10.05±2.11<sup>a</sup>
模型组 0.47±0.19<sup>c</sup> 8.36±1.91<sup>b</sup>
nbk-W13灭活菌粉组 1.51±0.32<sup>a</sup> 9.78±2.33<sup>a</sup>
nbk-W13菌粉组 1.62±0.47<sup>a</sup> 10.21±3.27<sup>a</sup>
注：同列之间相同字母表示差异不显著，不同字母则表示差异显著，P<0.05。
IgM是脾脏和淋巴结产生的一种主要分布在血液中的免疫球蛋白，在初次体液免疫应答早期阶段发挥作用；IgG是再次体液免疫应答阶段产生的主要免疫球蛋白；两者均在体液免疫过程中发挥着重要的作用。由表4可以看出，模型组小鼠回肠和结肠中的免疫球蛋白含量较对照组明显下降，乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉组及其灭活菌粉组的免疫球蛋白IgM和IgG含量较模型组明显上升，说明nbk-W13冻干粉组及其灭活菌粉组可增强小鼠的肠道体液免疫功能，调节机体免疫系统平衡。
SIgA是肠粘膜固有层分泌的一种在体液免疫中发挥重要作用的抗体成分，在局部抗感染过程中发挥着重要的作用。由图5可以看出，乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉及其灭活菌粉能显著提高小鼠结肠和回肠中SIgA的含量，表明乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉及其灭活菌粉可增强小鼠肠粘膜的免疫调节作用。
TNF-α是在炎症反应中出现最早的、发挥作用最快的细胞因子，可激活单核巨噬细胞进而激发炎症的级联反应，是一种重要的促炎因子，在细胞免疫反应中发挥着重要的作用。由图5可以看出，相对于模型组，乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉组及其灭活菌粉组小鼠血清、结肠和回肠中的TNF-α含量明显降低，且nbk-W13冻干粉组降低的更为明显，说明乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉及其灭活菌粉可调节小鼠血清、结肠和回肠中的TNF-α水平，从而起到调节免疫功能的作用。
DAO是小鼠肠粘膜上皮细胞细胞质中具有高度活性的细胞内酶，在肠黏膜受损时，其上皮细胞释放DAO进入血液循环，血液中DAO随即升高，因此DAO常作为反应肠粘膜屏障的通透性及肠粘膜损伤程度的指标。由图7可以看出，模型组小鼠肠粘膜中DAO含量比对照组明显升高，造模成功，乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉组及其灭活菌粉组的小鼠的DAO含量水平相比于模型组显著降低，说明乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉及灭活菌粉可显著改善肠黏膜的通透性，有助于恢复肠道受损，保护肠道正常功能。
T-AOC反映了小鼠肠道的总抗氧化水平，当小鼠肠黏膜受损后，肠粘膜局部组织的抗氧化能力下降。图8显示，对模型组进行处理后，小鼠结肠内的T-AOC水平降低，造模成功，对小鼠灌胃乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉及灭活菌粉后，小鼠结肠内T-AOC水平显著升高，说明乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉及灭活菌粉可提高小鼠结肠的抗氧化能力，进而可以改善和修复肠黏膜的炎症损伤。
实施例6 复合益生菌发酵乳的制备
生牛乳经巴氏杀菌后，向其中加入生牛乳质量百分比8％的白砂糖，然后按保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、乳双歧杆菌nbk-W13 1:2:1的比例接入发酵菌种，总接种量为107CFU/mL，搅拌条件下，于37℃恒温发酵6h(最终发酵体系pH＝4.5)，发酵终止，即得复合益生菌发酵乳。
实施例7 乳双歧杆菌固体饮料的制备
将实施例2制备的乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉2％、低聚果糖10％、低聚木糖10％、赤藓糖醇32％和抗性糊精40％进行混合，得到具有增强免疫功能的乳双歧杆菌固体饮料。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之做一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
序列表
<110> 诺佰克（武汉）生物科技有限公司
<120> 乳双歧杆菌nbk-W13及其应用
<130> KHP191112866.5
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1351
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
ccggcttcgg gtgctaccca ctttcatgac ttgacgggcg gtgtgtacaa ggcccgggaa 60
cgcattcacc gcggcgttgc tgatccgcga ttactagcga ctccgccttc acgcagtcga 120
gttgcagact gcgatccgaa ctgagaccgg ttttcagcga tccgccccac gtcaccgtgt 180
cgcaccgcgt tgtaccggcc attgtagcat gcgtgaagcc ctggacgtaa ggggcatgat 240
gatctgacgt catccccacc ttcctccgag ttgaccccgg cggtcccaca tgagttcccg 300
gcatcacccg ctggcaacat gcggcgaggg ttgcgctcgt tgcgggactt aacccaacat 360
ctcacgacac gagctgacga cgaccatgca ccacctgtga accggccccg aagggaaacc 420
gtgtctccac ggcgatccgg cacatgtcaa gcccaggtaa ggttcttcgc gttgcatcga 480
attaatccgc atgctccgcc gcttgtgcgg gcccccgtca atttctttga gttttagcct 540
tgcggccgta ctccccaggc gggatgctta acgcgttggc tccgacacgg gacccgtgga 600
aagggcccca catccagcat ccaccgttta cggcgtggac taccagggta tctaatcctg 660
ttcgctcccc acgctttcgc tcctcagcgt cagtgacggc ccagagacct gccttcgcca 720
ttggtgttct tcccgatatc tacacattcc accgttacac cgggaattcc agtctcccct 780
accgcactcc agcccgcccg tacccggcgc agatccaccg ttaggcgatg gactttcaca 840
ccggacgcga cgaaccgcct acgagccctt tacgcccaat aaatccggat aacgctcgca 900
ccctacgtat taccgcggct gctggcacgt agttagccgg tgcttattcg aacaatccac 960
tcaacacggc cgaaaccgtg ccttgccctt gaacaaaagc ggtttacaac ccgaaggcct 1020
ccatcccgca cgcggcgtcg ctgcatcagg cttgcgccca ttgtgcaata ttccccactg 1080
ctgcctcccg taggagtctg ggccgtatct cagtcccaat gtggccggtc accctctcag 1140
gccggctacc cgtcaacgcc ttggtgggcc atcaccccgc caacaagctg ataggacgcg 1200
accccatccc atgccgcaaa agcatttccc accccaccat gcgatggagc ggagcatccg 1260
gtattaccac ccgttccagg agctattccg gtgcacaggg caggttggtc acgcattact 1320
cacccgttcg ccactctcac cccgacagca a 1351

Claims (10)

1.乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)nbk-W13，其特征在于，保藏编号为CGMCCNo.17829。
2.乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)种子液的制备；
2)扩大培养；
3)高密度发酵培养；
4)发酵液离心取沉淀，得到菌泥；
5)将菌泥与冻干保护剂混合后进行乳化包埋，得到乳化液；
6)乳化液经冷冻干燥，粉碎，即得乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1)和2)中所用种子培养基为：按质量百分数计，1～3％乳糖、1～3％蛋白胨、0.5～3％酵母浸膏、0.2～1％无水乙酸钠、0.2～1％柠檬酸铵、0.02～0.08％硫酸镁、0.02～0.08％硫酸锰、0.05％～0.1％L-半胱氨酸盐酸盐、0.05～0.1％吐温80和余量的水，pH值6.2～6.8；优选地，所用种子培养基为：1.5～2.5％乳糖、1.5～2.5％蛋白胨、1～2％酵母浸膏、0.4～0.6％无水乙酸钠、0.4～0.6％柠檬酸铵、0.04～0.06％硫酸镁、0.04～0.06％硫酸锰、0.06％～0.08％L-半胱氨酸盐酸盐、0.06～0.08％吐温80和余量的水；和/或
步骤3)中所用发酵培养基为：按质量百分数计，1～3％乳糖、1～3％蛋白胨、0.5～3％酵母浸膏、0.2～1％无水乙酸钠、0.2～1％柠檬酸铵、0.02～0.08％硫酸镁、0.02～0.08％硫酸锰、0.05％～0.1％L-半胱氨酸盐酸盐、0.05～0.1％吐温80和余量的水，pH值6.2～7.0；优选地，所用发酵培养基为：1.5～2.5％乳糖、1.5～2.5％蛋白胨、1～2％酵母浸膏、0.4～0.6％无水乙酸钠、0.4～0.6％柠檬酸铵、0.04～0.06％硫酸镁、0.04～0.06％硫酸锰、0.06％～0.08％L-半胱氨酸盐酸盐、0.06～0.08％吐温80和余量的水。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1)种子液的制备方法为：从斜面挑取一环菌种，接种于装有种子培养基的试管中，于30-40℃静置培养12-24h，即得种子液；优选培养条件为：35～40℃静置培养12-20h；和/或
步骤2)扩大培养的具体方法为：将步骤1)所得种子液按2-8％v/v的接种量转接至装有种子培养基的三角瓶中，装液量50-100mL/250mL，于28-40℃静置培养8～24h，得到培养液；优选培养条件为：32-37℃静置培养15-18h；和/或
步骤3)高密度发酵培养的具体方法为：将步骤2)所得培养液按4-10％v/v的接种量转接至装有发酵培养基的发酵罐中，装液量5-7L/10L，于30-42℃静置培养8-16h，得到发酵液；优选培养条件为：30-40℃静置培养10-15h。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤5)具体为：将菌泥与脱脂乳、甘油和水按8-12：5-15：1-3：70-85的重量比混合，在20-30℃条件下乳化20-40min，得到乳化液。
6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤6)冷冻干燥的具体方法为：
将乳化液在-40--30℃下预冻1-3h，然后进行真空冷冻干燥，冷冻温度为-40-37℃，真空度为0.1-0.35MPa。
7.按照权利要求2-6任一项所述方法制备的乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉，其中，所述冻干粉中活菌数为2000～6000亿CFU/g。
8.权利要求7所述的乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉或乳双歧杆菌nbk-W13的灭活菌粉在食品、药品或保健品领域中的应用。
9.复合益生菌发酵乳的制备方法，其特征在于，生牛乳经灭菌后，向其中加入生牛乳质量百分比5-10％的白砂糖，然后按保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、乳双歧杆菌nbk-W13 0.5-3:1-4:0.8-4的比例接入发酵菌种，总接种量为106-107CFU/mL，搅拌条件下，于30-42℃恒温发酵4-8h，即得复合益生菌发酵乳。
10.乳双歧杆菌固体饮料，其特征在于，包括如下重量份的各组分：权利要求7所述的乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉1-4份，低聚果糖8-15份，低聚木糖8-15份、赤藓糖醇30-40份和抗性糊精35-45份。
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Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110846253A (zh) * 2019-11-25 2020-02-28 山东中科嘉亿生物工程有限公司 一株能提高人体免疫力的乳双歧杆菌jybr-190及其在食品、药品中的应用
CN112870232A (zh) * 2019-11-29 2021-06-01 内蒙古伊利实业集团股份有限公司 乳双歧杆菌bl-99提升肠道细菌感染抗性和肠道免疫力的应用
CN113005066A (zh) * 2021-03-31 2021-06-22 盐城维康生物科技有限公司 抗过敏、增加免疫力、降血糖、降脂减肥的复合双歧杆菌制剂及其制备方法
CN113913322A (zh) * 2021-08-25 2022-01-11 微康益生菌(苏州)股份有限公司 乳双歧杆菌BLa80在缓解腹泻和提升肠道免疫能力中的应用
CN115137758A (zh) * 2022-06-08 2022-10-04 诺佰克（武汉）生物科技有限公司 一种有利于女性生殖道健康的益生菌的制备及其应用
CN115322937A (zh) * 2022-09-21 2022-11-11 微康益生菌(苏州)股份有限公司 一种提高乳双歧杆菌稳定性的培养方法及产品和应用
CN117243885A (zh) * 2023-11-15 2023-12-19 北京青藤谷禧干细胞科技研究院有限公司 一种改善皮肤的干细胞外泌体组合物及其制备方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1306021C (zh) * 2003-11-03 2007-03-21 东北农业大学 一种双歧杆菌冻干粉的制备方法及其产品和用途

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1306021C (zh) * 2003-11-03 2007-03-21 东北农业大学 一种双歧杆菌冻干粉的制备方法及其产品和用途

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LIU L,ET AL: "Expolysaccharides from Bifidobacterium animalis RH activates RAW 264.7 macrophages through toll-like receptor 4", 《FOOD & AGRICULTURAL IMMUNOLOGY》 *
万峰等: "婴儿源动物双歧杆菌消化道胁迫抗性及体外对免疫细胞活性影响的比较", 《食品科学》 *

Cited By (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110846253A (zh) * 2019-11-25 2020-02-28 山东中科嘉亿生物工程有限公司 一株能提高人体免疫力的乳双歧杆菌jybr-190及其在食品、药品中的应用
CN112870232A (zh) * 2019-11-29 2021-06-01 内蒙古伊利实业集团股份有限公司 乳双歧杆菌bl-99提升肠道细菌感染抗性和肠道免疫力的应用
CN113005066A (zh) * 2021-03-31 2021-06-22 盐城维康生物科技有限公司 抗过敏、增加免疫力、降血糖、降脂减肥的复合双歧杆菌制剂及其制备方法
CN113005066B (zh) * 2021-03-31 2023-07-21 江苏蓝泽生物科技有限公司 抗过敏、增加免疫力、降血糖、降脂减肥的复合双歧杆菌制剂及其制备方法
CN113913322A (zh) * 2021-08-25 2022-01-11 微康益生菌(苏州)股份有限公司 乳双歧杆菌BLa80在缓解腹泻和提升肠道免疫能力中的应用
CN115137758A (zh) * 2022-06-08 2022-10-04 诺佰克（武汉）生物科技有限公司 一种有利于女性生殖道健康的益生菌的制备及其应用
CN115137758B (zh) * 2022-06-08 2024-01-19 诺佰克（武汉）生物科技有限公司 一种有利于女性生殖道健康的益生菌的制备及其应用
CN115322937A (zh) * 2022-09-21 2022-11-11 微康益生菌(苏州)股份有限公司 一种提高乳双歧杆菌稳定性的培养方法及产品和应用
CN115322937B (zh) * 2022-09-21 2024-03-26 微康益生菌(苏州)股份有限公司 一种提高乳双歧杆菌稳定性的培养方法及产品和应用
CN117243885A (zh) * 2023-11-15 2023-12-19 北京青藤谷禧干细胞科技研究院有限公司 一种改善皮肤的干细胞外泌体组合物及其制备方法
CN117243885B (zh) * 2023-11-15 2024-01-26 北京青藤谷禧干细胞科技研究院有限公司 一种改善皮肤的干细胞外泌体组合物及其制备方法

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