CN110447460A - 一种羊肚菌液态菌种的培养方法 - Google Patents

一种羊肚菌液态菌种的培养方法 Download PDF

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刘传会
陈进林
丁玲
杨哲
邹丹
尚贞明
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    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01GHORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G18/00Cultivation of mushrooms

Abstract

本发明涉及一种羊肚菌液态菌种的培养方法,步骤一,母种的培育,母种培育包括羊肚菌子实体的分离,将所分离的部位接种的母种培养基上进行母种培育,得到母种;步骤二,液体培养基的制备,液体培养基包括基础原料及添加剂原料,将基础原料的组分定量添加到无菌水中后得到基础原料水溶液,再将添加剂原料的组分配置成添加剂原料标准溶液,最后将添加剂原料标准溶液定量添加至基础原料水溶液,得到液体培养基;步骤三,将步骤一母种接种到液体培养基上,震荡培养,得到羊肚菌液态菌种;添加剂原料为0.06mg/ml~0.14mg/ml的脱乙酰度壳聚糖。本发明的有益效果在于加入可溶性脱乙酰度壳聚糖可提高羊肚菌液态菌种的产量及质量。

Description

一种羊肚菌液态菌种的培养方法
技术领域
本发明涉及食用菌栽培领域,具体涉及一种羊肚菌液态菌种的培养方法。
背景技术
羊肚菌俗称羊雀菌、包谷菌等,具有极高的营养价值和药用价值,是一类大型的食用兼药用真菌,但是野生羊肚菌产量极低,需要人工栽培满足消费者要求。
目前,利用母种进行传统的固体培养基进行栽培羊肚菌菌种已经取得了相应的成果,但是仍存在母种需求大,菌丝菌龄差异大的技术缺陷,因此研究出可以培育出高产量高质量的羊肚菌菌种很有必要。
发明内容
本发明针对现有固体栽培羊肚菌菌种的方法需要母种量大,且菌丝质量差异大的技术问题,提供一种羊肚菌液态菌种的培养方法。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下:一种羊肚菌液态菌种的培养方法,其不同之处在于,所述羊肚菌液态菌种的培养方法包括:
步骤一,母种的培育,所述母种培育包括羊肚菌子实体的分离,将所分离的部位接种的母种培养基上进行母种培育,得到母种;
步骤二,液体培养基的制备,所述液体培养基包括基础原料及添加剂原料,将所述基础原料的组分定量添加到无菌水中后得到基础原料水溶液,再将添加剂原料的组分配置成添加剂原料标准溶液,最后将所述添加剂原料标准溶液定量添加至所述基础原料水溶液,得到所述液体培养基;
步骤三,将步骤一所述母种接种到所述液体培养基上,震荡培养,得到羊肚菌液态菌种;
所述基础原料包括以下质量浓度的组分:2.2%~4.2%玉米粉、0.5%~1.2%的葡萄糖、1.5%~2.5%的黄豆粉、0.1%~0.3%的KH2PO4及0.05%~0.16%的CaSO4;所述添加剂原料为0.06mg/ml~0.14mg/ml的脱乙酰度壳聚糖。
与现有技术相比,本发明的有益效果在于加入可溶性脱乙酰度壳聚糖可提高羊肚菌液态菌种的产量及质量。
在上述技术方案的基础上,本发明还可以做如下改进。
进一步,所述步骤一中,从所述羊肚菌子实体中分离出菌柄用酒精消毒后扩繁成PDA羊肚菌试管斜面母种,培育时间为5天~7天,培育温度为18℃~22℃。
进一步,所述步骤二中,所述添加剂原料选用脱乙酰度80%的壳聚糖或脱乙酰度90%的壳聚糖中的一种或两种。
进一步,所述脱乙酰度壳聚糖溶液的配置方法为:取0.5g脱乙酰度壳聚糖,溶解于0.5mol/L的盐酸中,再用1mol/L NaOH溶液调pH至6.0,定容到100ml,得到添加剂原料标准溶液;
经计算将所述添加剂原料标准溶液定量取出并添加至基础原料水溶液,得到所述液体培养基。
进一步,所述步骤三中,将所述母种接种在所述液体培养基上后先在20℃~22℃条件下静置培养36小时至48小时,再在15℃~25℃条件下在往复式摇床上震荡培养一周,振荡频率为90r/min~120r/min,振幅为6cm~10cm。
进一步,所述基础原料包括以下质量浓度的组分:3.5%玉米粉、0.9%的葡萄糖、2.0%的黄豆粉、0.3%的KH2PO4及0.15%的CaSO4;所述添加剂原料为0.09mg/ml的脱乙酰度壳聚糖。
进一步,所述步骤二中,所述添加剂原料选用脱乙酰度80%的壳聚糖及脱乙酰度90%的壳聚糖,所述脱乙酰度80%的壳聚糖及所述脱乙酰度90%的壳聚糖的质量比为(1~1.4):1
采用上述进一步方案的有益效果是配合科学的培养条件与合理的液体培养基配方共同作用,使菌种产量及质量进一步提高。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的原理和特征进行描述,所举实例只用于解释本发明,并非用于限定本发明的范围。
壳聚糖作为植物生长调节剂,具有促进农作物产量提高和改善农产品品质,还能抑制植物病原微生物的生长,增强作物抗性,在适宜条件内,壳聚糖对食用菌的生长代谢有促进作用。
实施例一
步骤一,母种的培育,所述母种培育包括羊肚菌子实体的分离,将所分离的部位接种的母种培养基上进行母种培育,得到母种;
步骤二,液体培养基的制备,所述液体培养基包括基础原料及添加剂原料,将所述基础原料的组分定量添加到无菌水中后得到基础原料水溶液,再将添加剂原料的组分配置成添加剂原料标准溶液,最后将所述添加剂原料标准溶液定量添加至所述基础原料水溶液,得到所述液体培养基;
步骤三,将步骤一所述母种接种到所述液体培养基上,震荡培养,得到羊肚菌液态菌种;
所述基础原料包括以下质量浓度的组分:3.5%玉米粉、0.9%的葡萄糖、2.0%的黄豆粉、0.3%的KH2PO4及0.15%的CaSO4;所述添加剂原料为0.09mg/ml的脱乙酰度壳聚糖。
所述步骤一中,从所述羊肚菌子实体中分离出菌柄用酒精消毒后扩繁成PDA羊肚菌试管斜面母种,培育时间为5天~7天,培育温度为18℃~22℃。
所述步骤二中,所述脱乙酰度壳聚糖溶液的配置方法为:取0.5g脱乙酰度壳聚糖,溶解于0.5mol/L的盐酸中,再用1mol/L NaOH溶液调pH至6.0,定容到100ml,得到添加剂原料标准溶液;所述添加剂原料选用脱乙酰度80%的壳聚糖及脱乙酰度90%的壳聚糖,所述脱乙酰度80%的壳聚糖及所述脱乙酰度90%的壳聚糖的质量比为1.25:1。
经计算将所述添加剂原料标准溶液定量取出并添加至基础原料水溶液,得到所述液体培养基。
所述步骤三中,将所述母种接种在所述液体培养基上后先在20℃~22℃条件下静置培养48小时,再在20℃条件下在往复式摇床上震荡培养一周,振荡频率为90r/min~120r/min,振幅为6cm~10cm。
实施例二
步骤一,母种的培育,所述母种培育包括羊肚菌子实体的分离,将所分离的部位接种的母种培养基上进行母种培育,得到母种;
步骤二,液体培养基的制备,所述液体培养基包括基础原料及添加剂原料,将所述基础原料的组分定量添加到无菌水中后得到基础原料水溶液,再将添加剂原料的组分配置成添加剂原料标准溶液,最后将所述添加剂原料标准溶液定量添加至所述基础原料水溶液,得到所述液体培养基;
步骤三,将步骤一所述母种接种到所述液体培养基上,震荡培养,得到羊肚菌液态菌种;
所述基础原料包括以下质量浓度的组分:4.0%玉米粉、1.2%的葡萄糖、2.5%的黄豆粉、0.3%的KH2PO4及0.09%的CaSO4;所述添加剂原料为0.12mg/ml的脱乙酰度壳聚糖。
所述步骤一中,从所述羊肚菌子实体中分离出菌柄用酒精消毒后扩繁成PDA羊肚菌试管斜面母种,培育时间为5天~7天,培育温度为18℃~22℃。
所述步骤二中,所述添加剂原料选用脱乙酰度80%的壳聚糖或脱乙酰度90%的壳聚糖中的一种或两种。
所述脱乙酰度壳聚糖溶液的配置方法为:取0.5g脱乙酰度壳聚糖,溶解于0.5mol/L的盐酸中,再用1mol/L NaOH溶液调pH至6.0,定容到100ml,得到添加剂原料标准溶液;所述添加剂原料选用脱乙酰度80%的壳聚糖及脱乙酰度90%的壳聚糖,所述脱乙酰度80%的壳聚糖及所述脱乙酰度90%的壳聚糖的质量比为1.4:1。
经计算将所述添加剂原料标准溶液定量取出并添加至基础原料水溶液,得到所述液体培养基。
所述步骤三中,将所述母种接种在所述液体培养基上后先在20℃~22℃条件下静置培养36小,再在22℃条件下在往复式摇床上震荡培养一周,振荡频率为90r/min~120r/min,振幅为6cm~10cm。
实施例三
步骤一,母种的培育,所述母种培育包括羊肚菌子实体的分离,将所分离的部位接种的母种培养基上进行母种培育,得到母种;
步骤二,液体培养基的制备,所述液体培养基包括基础原料及添加剂原料,将所述基础原料的组分定量添加到无菌水中后得到基础原料水溶液,再将添加剂原料的组分配置成添加剂原料标准溶液,最后将所述添加剂原料标准溶液定量添加至所述基础原料水溶液,得到所述液体培养基;
步骤三,将步骤一所述母种接种到所述液体培养基上,震荡培养,得到羊肚菌液态菌种;
所述基础原料包括以下质量浓度的组分4.1%玉米粉、0.8%的葡萄糖、2.2%的黄豆粉、0.3%的KH2PO4及0.08%的CaSO4;所述添加剂原料为0.12mg/ml的脱乙酰度壳聚糖。
所述步骤一中,从所述羊肚菌子实体中分离出菌柄用酒精消毒后扩繁成PDA羊肚菌试管斜面母种,培育时间为5天~7天,培育温度为20℃。
所述脱乙酰度壳聚糖溶液的配置方法为:取0.5g脱乙酰度壳聚糖,溶解于0.5mol/L的盐酸中,再用1mol/L NaOH溶液调pH至6.0,定容到100ml,得到添加剂原料标准溶液,所述添加剂原料选用脱乙酰度80%的壳聚糖。
经计算将所述添加剂原料标准溶液定量取出并添加至基础原料水溶液,得到所述液体培养基。
所述步骤三中,将所述母种接种在所述液体培养基上后先在20℃~22℃条件下静置培养40小时,再在23℃条件下在往复式摇床上震荡培养一周,振荡频率为90r/min~120r/min,振幅为6cm~10cm。
对比例
步骤一,母种的培育,所述母种培育包括羊肚菌子实体的分离,将所分离的部位接种的母种培养基上进行母种培育,得到母种;
步骤二,液体培养基的制备,所述液体培养基包括以下质量浓度的组分:3.5%玉米粉、0.9%的葡萄糖、2.0%的黄豆粉、0.3%的KH2PO4及0.15%的CaSO4
步骤三,将步骤一所述母种接种到所述液体培养基上,震荡培养,得到羊肚菌液态菌种;
所述步骤一中,从所述羊肚菌子实体中分离出菌柄用酒精消毒后扩繁成PDA羊肚菌试管斜面母种,培育时间为5天~7天,培育温度为18℃~22℃。
所述步骤三中,将所述母种接种在所述液体培养基上后先在20℃~22℃条件下静置培养48小时,再在20℃条件下在往复式摇床上震荡培养一周,振荡频率为90r/min~120r/min,振幅为6cm~10cm。
对实施例及对比例培育的羊肚菌菌种生长情况统计如表1所示:
表1 羊肚菌菌种生长情况统计表
上述实施例及对比例中,每150ml液体培养基接种2.0cm2
以上所述仅为本发明的较佳实施例,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种羊肚菌液态菌种的培养方法,其特征在于,所述羊肚菌液态菌种的培养方法包括:
步骤一,母种的培育,所述母种培育包括羊肚菌子实体的分离,将所分离的部位接种的母种培养基上进行母种培育,得到母种;
步骤二,液体培养基的制备,所述液体培养基包括基础原料及添加剂原料,将所述基础原料的组分定量添加到无菌水中后得到基础原料水溶液,再将添加剂原料的组分配置成添加剂原料标准溶液,最后将所述添加剂原料标准溶液定量添加至所述基础原料水溶液,得到所述液体培养基;
步骤三,将步骤一所述母种接种到所述液体培养基上,震荡培养,得到羊肚菌液态菌种;
所述基础原料包括以下质量浓度的组分:2.2%~4.2%玉米粉、0.5%~1.2%的葡萄糖、1.5%~2.5%的黄豆粉、0.1%~0.3%的KH2PO4及0.05%~0.16%的CaSO4;所述添加剂原料为0.06mg/ml~0.14mg/ml的脱乙酰度壳聚糖。
2.根据权利要求1所述一种羊肚菌液态菌种的培养方法,其特征在于,所述步骤一中,从所述羊肚菌子实体中分离出菌柄用酒精消毒后扩繁成PDA羊肚菌试管斜面母种,培育时间为5天~7天,培育温度为18℃~22℃。
3.根据权利要求1所述一种羊肚菌液态菌种的培养方法,其特征在于,所述步骤二中,所述添加剂原料选用脱乙酰度80%的壳聚糖或脱乙酰度90%的壳聚糖中的一种或两种。
4.根据权利要求1所述一种羊肚菌液态菌种的培养方法,其特征在于,所述脱乙酰度壳聚糖溶液的配置方法为:取0.5g脱乙酰度壳聚糖,溶解于0.5mol/L的盐酸中,再用1mol/LNaOH溶液调pH至6.0,定容到100ml,得到添加剂原料标准溶液;
经计算将所述添加剂原料标准溶液定量取出并添加至基础原料水溶液,得到所述液体培养基。
5.根据权利要求1所述一种羊肚菌液态菌种的培养方法,其特征在于,所述步骤三中,将所述母种接种在所述液体培养基上后先在20℃~22℃条件下静置培养36小时至48小时,再在15℃~25℃条件下在往复式摇床上震荡培养一周,振荡频率为90r/min~120r/min,振幅为6cm~10cm。
6.根据权利要求1所述一种羊肚菌液态菌种的培养方法,其特征在于,所述基础原料包括以下质量浓度的组分:3.5%玉米粉、0.9%的葡萄糖、2.0%的黄豆粉、0.3%的KH2PO4及0.15%的CaSO4;所述添加剂原料为0.09mg/ml的脱乙酰度壳聚糖。
7.根据权利要求1所述一种羊肚菌液态菌种的培养方法,其特征在于,所述步骤二中,所述添加剂原料选用脱乙酰度80%的壳聚糖及脱乙酰度90%的壳聚糖,所述脱乙酰度80%的壳聚糖及所述脱乙酰度90%的壳聚糖的质量比为(1~1.4):1。
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