CN110447415A - 一种增强罗汉果脱毒种苗抗性的方法 - Google Patents

一种增强罗汉果脱毒种苗抗性的方法 Download PDF

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黄荣明
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Abstract

一种增强罗汉果脱毒种苗抗性的方法,所述的方法在罗汉果脱毒种苗培育阶段采用氨基丁酸处理,所述的处理方式为用含有氨基丁酸的培养基培养幼苗或用氨基丁酸对幼苗进行灌根处理。本发明通过采用氨基丁酸抗性增强剂处理幼苗阶段的罗汉果种苗,激发罗汉果自身免疫功能,增强罗汉果植株的抗病抗虫能力,避免或减少罗汉果大田栽培期间的病虫害防治措施,降低农资和劳动力成本,降低罗汉果产品农残风险。

Description

一种增强罗汉果脱毒种苗抗性的方法
技术领域
本发明涉及罗汉果植物繁殖领域,特别涉及一种增强罗汉果脱毒种苗抗性的方法。
背景技术
罗汉果为葫芦科罗汉果属植物的成熟果实,主产于广西永福、临桂和龙胜等县,其性凉味甘,无毒,有润肺止咳、凉血、润肠通便的功效,是我国传统出口商品之一,在港澳地区、东南亚和欧美国家颇受欢迎。近年来,广西罗汉果产业发展迅猛,罗汉果种植面积不断扩大,越来越多的企业加入到罗汉果组培苗产业化生产的行列,在罗汉果种苗供应中,组培苗已得到越来越重视。组培苗规格统一,可供种苗数量大,技术上可以脱毒,但由于种种原因,广西罗汉果主产区均普遍发生病毒病,严重地块发病率达100%,受害植株减产25%~45%,严重的达50%以上,导致罗汉果品质下降,次果增加,造成了巨大的经济损失。当前对罗汉果危害最大的是病毒病,脱毒培养罗汉果种苗是去除病毒病的是一种有效措施。
罗汉果脱毒苗移栽至大田后,极易通过昆虫感染上病毒病,目前增强罗汉果脱毒种苗的抗性的相关研究近仅停留在基因工程上,如:
中国专利CN103233040B公开了一种培育抗病毒罗汉果的方法,该方法将多种病毒基因或多个不同功能基因片段拼接在一起作为RNAi的靶位点,并应用组成型表达启动子和增强子构建于植物表达载体,采用RNAi干扰的策略抑制罗汉果花叶病毒在罗汉果组织中的复制与表达,从而实现抗病毒的目标。增加抗性谱和抗性效果。
但上述采用RNAi干扰的策略操作复杂,属于基因工程领域,操作复杂,对操作环境要求严格,成本过高;而在罗汉果组培苗培育过程中使用抗性增强的研究尚未见有报道。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术之不足,提供一种增强罗汉果脱毒种苗抗性的方法,显著提高罗汉果脱毒种苗的抗病抗虫能力,降低罗汉果产品农残风险。
本发明的目的是通过下述方案来实现的:
本发明提供一种增强罗汉果脱毒种苗抗性的方法,所述的方法在罗汉果脱毒种苗培育阶段采用氨基丁酸处理,所述的处理方式为用含有氨基丁酸的培养基培养幼苗或用氨基丁酸对幼苗进行灌根处理;
优选地,所述氨基丁酸为α-氨基丁酸、β-氨基丁酸、γ-氨基丁酸中的至少一种;
优选地,所述氨基丁酸的浓度为500~5000ppm;
优选地,所述培育阶段为扩繁、生根、温室炼苗中的至少一个阶段;
优选地,所述扩繁阶段的培养条件为:在培养温度为26~30℃培养25~35天;所述扩繁培养基为:MS+0.1~2mg/L 6-BA+0.01~0.8mg/LNAA;
优选地,所述生根阶段的培养条件为:在培养温度为26~30℃下培养25~35天;所述生根培养基为:1/2MS+0.05~0.5mg/L 6-BA+0.01~0.05mg/LNAA+0.1~1mg/L IBA+0.5~1.5%AC;
优选地,将所述氨基丁酸处理后的罗汉果种苗按照组培苗正常培育、管理及移栽大田种植。
本发明通过采用氨基丁酸抗性增强剂处理幼苗阶段的罗汉果种苗,激发并持久发挥罗汉果自身免疫功能,增强罗汉果植株的抗病抗虫能力,避免或减少罗汉果大田栽培期间的病虫害防治措施,降低农资和劳动力成本,降低罗汉果产品农残风险。
本发明的有益效果:
1、本发明能够激发脱毒种苗自身免疫功能,能够在不进行基因操作的前提下提高罗汉果幼苗抗病性及其它抗逆能力,增强罗汉果植株生长发育阶段的抗病抗虫能力,降低罗汉果产品农残风险。
2、与传统的将抗虫、抗病、抗逆性基因导入到罗汉果体内的抗性育种相比,本发明对罗汉果幼苗期植株的抗性增强处理操作简单方便,降低农资和劳动力成本,省时、省工、操作方便。
附图说明
图1经氨基丁酸处理被病毒侵染的罗汉果叶片对照图。
其中,第一行:没有氨基丁酸处理,也没有病毒侵染的罗汉果叶片;
第二行:没有氨基丁酸处理,但被病毒侵染的罗汉果叶片;
第三行:氨基丁酸处理,再被病毒侵染的罗汉果叶片。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步解说。
实施例一
(1)无菌脱毒苗的扩繁:选取脱毒苗在超净工作台上切成带节茎段,接种在快繁培养基上培养。快繁培养基为:MS+6-BA 0.7mg/L+NAA0.07mg/L,pH为6.0,外加3000ppm的α-氨基丁酸。接种后置于每天光照12小时,光照强度为1500lx,置于培养温度为28℃,空气相对湿度为75%的条件下培养30天。
(2)生根培养:将步骤(1)快繁得到的种苗在超净工作台上切成带节茎段,并接种至生根培养基中进行诱导生根。接种后置于每天光照12小时,光照强度为2300lx,置于培养温度为26℃,空气相对湿度为75%的条件下培养30天。所述的生根培养基为:1/2MS+0.5mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA+0.1mg/L IBA+0.5%AC,pH为5.0。
(3)炼苗移栽:生根一个月后,打开其瓶口,取出生根苗洗净根上所带培养基,移栽到基质由泥炭土:珍珠岩:蛭石=3:2:1组成的基质中。用留有透气孔的薄膜覆盖,放置在温室培养,15天将薄膜揭去,按照组培苗正常培育、管理及移栽大田种植。
实施例二
(1)无菌脱毒苗的扩繁:选取脱毒苗在超净工作台上切成带节茎段,接种在快繁培养基上培养。快繁培养基为:MS+6-BA 0.1mg/L+NAA0.01mg/L,pH为5.0。接种后置于每天光照12小时,光照强度为1500lx,置于培养温度为26℃,空气相对湿度为75%的条件下培养25天。
(2)生根培养:将步骤(1)快繁得到的种苗在超净工作台上切成带节茎段,并接种至生根培养基中进行诱导生根。接种后置于每天光照12小时,光照强度为2300lx,置于培养温度为26℃,空气相对湿度为75%的条件下培养25天。所述的生根培养基为:1/2MS+0.05mg/L 6-BA+0.01mg/LNAA+0.1mg/L IBA+0.5%AC,pH为5.0,另加3000ppmβ-氨基丁酸。
(3)炼苗移栽:生根一个月后,打开其瓶口,取出生根苗洗净根上所带培养基,移栽到由泥炭土:珍珠岩:蛭石=3:2:1组成的基质中。用留有透气孔的薄膜覆盖,放置在温室培养,15天将薄膜揭去,按照组培苗正常培育、管理及移栽大田种植。
实施例三
(1)无菌脱毒苗的扩繁:选取脱毒苗在超净工作台上切成带节茎段,接种在快繁培养基上培养。快繁培养基为:MS+6-BA 2mg/L+NAA0.8mg/L,pH为5.5。接种后置于每天光照12小时,光照强度为1500lx,置于培养温度为30℃,空气相对湿度为75%的条件下培养35天。
(2)生根培养:将步骤(1)快繁得到的种苗在超净工作台上切成带节茎段,并接种至生根培养基中进行诱导生根。接种后置于每天光照12小时,光照强度为2300lx,置于培养温度为30℃,空气相对湿度为75%的条件下培养35天。所述的生根培养基为:1/2MS+0.5mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA+1mg/L IBA+1.5%AC,pH为6.0。
(3)炼苗移栽:生根一个月后,打开其瓶口,注入γ-氨基丁酸水溶液至终浓度5000ppm。5天后取出生根苗洗净根上所带培养基,移栽到由泥炭土:珍珠岩:蛭石=3:2:1组成的基质中。用留有透气孔的薄膜覆盖,放置在温室培养,15天将薄膜揭去,按照组培苗正常培育、管理及移栽大田种植。
实施例四
(1)无菌脱毒苗的扩繁:选取脱毒苗在超净工作台上切成带节茎段,接种在快繁培养基上培养。快繁培养基为:MS+6-BA 0.7mg/L+NAA0.07mg/L,pH 5.5,另加入1000ppm的α-氨基丁酸+1000ppmβ-氨基丁酸+1000ppmγ-氨基丁酸。接种后置于每天光照12小时,光照强度为1500lx,置于培养温度为28℃,空气相对湿度为75%的条件下培养30天。
(2)生根培养:将步骤(1)快繁得到的种苗在超净工作台上切成带节茎段,并接种至生根培养基中进行诱导生根。接种后置于每天光照12小时,光照强度为2300lx,置于培养温度为26℃,空气相对湿度为75%的条件下培养30天。所述的生根培养基为:1/2MS+0.3mg/L 6-BA+0.03mg/L NAA+0.5mg/L IBA+1.0%AC,pH为5.5。
(3)炼苗移栽:生根一个月后,打开其瓶口,注入α-氨基丁酸水溶液至终浓度2500ppm。5天后取出生根苗洗净根上所带培养基,移栽到由泥炭土:珍珠岩:蛭石=3:2:1组成的基质中。用留有透气孔的薄膜覆盖,放置在温室培养,15天将薄膜揭去,按照组培苗正常培育、管理及移栽大田种植。
实施例五
(1)无菌脱毒苗的扩繁:选取脱毒苗在超净工作台上切成带节茎段,接种在快繁培养基上培养。快繁培养基为:MS+6-BA 1.5mg/L+NAA0.5mg/L,pH 5.5。接种后置于每天光照12小时,光照强度为1500lx,置于培养温度为28℃,空气相对湿度为75%的条件下培养30天。
(2)生根培养:将步骤(1)快繁得到的种苗在超净工作台上切成带节茎段,并接种至生根培养基中进行诱导生根。接种后置于每天光照12小时,光照强度为2300lx,置于培养温度为28℃,空气相对湿度为75%的条件下培养30天。所述的生根培养基为:1/2MS+0.3mg/L 6-BA+0.03mg/L NAA+0.5mg/L IBA+1%AC,pH 5.5,另加入2500ppm的α-氨基丁酸+2500ppmβ-氨基丁酸。
(3)炼苗移栽:生根一个月后,打开其瓶口,取出生根苗洗净根上所带培养基,移栽到由泥炭土:珍珠岩:蛭石=3:2:1组成的基质中。用留有透气孔的薄膜覆盖,放置在温室培养,15天将薄膜揭去,按照组培苗正常培育、管理及移栽大田种植。
实施例六
(1)无菌脱毒苗的扩繁:选取脱毒苗在超净工作台上切成带节茎段,接种在快繁培养基上培养。快繁培养基为:MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.1mg/L,pH 5.5。接种后置于每天光照12小时,光照强度为1500lx,置于培养温度为28℃,空气相对湿度为75%的条件下培养32天。
(2)生根培养:将步骤(1)快繁得到的种苗在超净工作台上切成带节茎段,并接种至生根培养基中进行诱导生根。接种后置于每天光照12小时,光照强度为2300lx,置于培养温度为26℃,空气相对湿度为75%的条件下培养30天。所述的生根培养基为:1/2MS+0.4mg/L 6-BA+0.03mg/L NAA+0.8mg/L IBA+0.8%AC,pH 5.5。
(3)炼苗移栽:生根一个月后,打开其瓶口,注入α-氨基丁酸水溶液至终浓度500ppm。5天后取出生根苗洗净根上所带培养基,移栽到由泥炭土:珍珠岩:蛭石=3:2:1组成的基质中。用留有透气孔的薄膜覆盖,放置在温室培养,15天将薄膜揭去,按照组培苗正常培育、管理及移栽大田种植。
实施例七
(1)无菌脱毒苗的扩繁:选取脱毒苗在超净工作台上切成带节茎段,接种在快繁培养基上培养。快繁培养基为:MS+6-BA 0.7mg/L+NAA0.07mg/L,pH 5.5。接种后置于每天光照12小时,光照强度为1500lx,置于培养温度为28℃,空气相对湿度为75%的条件下培养30天。
(2)生根培养:将步骤(1)快繁得到的种苗在超净工作台上切成带节茎段,并接种至生根培养基中进行诱导生根。接种后置于每天光照12小时,光照强度为2300lx,置于培养温度为26℃,空气相对湿度为75%的条件下培养30天。所述的生根培养基为:1/2MS+0.25mg/L 6-BA+0.03mg/LNAA+0.5mg/L IBA+1.2%AC,pH 5.5。
(3)炼苗移栽:生根一个月后,打开其瓶口,注入α-氨基丁酸+β-氨基丁酸水溶液分别至终浓度5000ppm。5天后取出生根苗洗净根上所带培养基,移栽到由泥炭土:珍珠岩:蛭石=3:2:1组成的基质中。用留有透气孔的薄膜覆盖,放置在温室培养,15天将薄膜揭去,按照组培苗正常培育、管理及移栽大田种植。
实施例八
(1)无菌脱毒苗的扩繁:选取脱毒苗在超净工作台上切成带节茎段,接种在快繁培养基上培养。快繁培养基为:MS+6-BA 0.7mg/L+NAA0.07mg/L,pH 5.5。接种后置于每天光照12小时,光照强度为1500lx,置于培养温度为28℃,空气相对湿度为75%的条件下培养30天。
(2)生根培养:将步骤(1)快繁得到的种苗在超净工作台上切成带节茎段,并接种至生根培养基中进行诱导生根。接种后置于每天光照12小时,光照强度为2300lx,置于培养温度为26℃,空气相对湿度为75%的条件下培养30天。所述的生根培养基为:1/2MS+0.3mg/L 6-BA+0.02mg/L NAA+0.5mg/L IBA+1%AC,pH 5.5。
(3)炼苗移栽:生根一个月后,打开其瓶口,注入α-氨基丁酸+γ-氨基丁酸水溶液至各自终浓度3000ppm。5天后取出生根苗洗净根上所带培养基,移栽到由泥炭土:珍珠岩:蛭石=3:2:1组成的基质中。用留有透气孔的薄膜覆盖,放置在温室培养,15天将薄膜揭去,按照组培苗正常培育、管理及移栽大田种植。
实施例九
(1)无菌脱毒苗的扩繁:选取脱毒苗在超净工作台上切成带节茎段,接种在快繁培养基上培养。快繁培养基为:MS+6-BA 0.7mg/L+NAA 0.07mg/L,pH 5.5,另加入2500ppm的α-氨基丁酸+2500ppmβ-氨基丁酸+2500ppmγ-氨基丁酸。接种后置于每天光照12小时,光照强度为1500lx,置于培养温度为28℃,空气相对湿度为75%的条件下培养30天。
(2)生根培养:将步骤(1)快繁得到的种苗在超净工作台上切成带节茎段,并接种至生根培养基中进行诱导生根。接种后置于每天光照12小时,光照强度为2300lx,置于培养温度为26℃,空气相对湿度为75%的条件下培养30天。所述的生根培养基为:1/2MS+0.2mg/L 6-BA+0.03mg/L NAA+0.5mg/L IBA+1.0%AC,pH 5.5,另加2000ppmα-氨基丁酸。
(3)炼苗移栽:生根一个月后,打开其瓶口,取出生根苗洗净根上所带培养基,移栽到由泥炭土:珍珠岩:蛭石=3:2:1组成的基质中。用留有透气孔的薄膜覆盖,放置在温室培养,15天将薄膜揭去,按照组培苗正常培育、管理及移栽大田种植。
对比例1用于评价抗性增强剂氨基丁酸的作用
对比例1
与实施例9相比,在增殖、生根、温室炼苗中阶段培养基均不加入氨基丁酸,其他条件相同,具体如下:
(1)无菌脱毒苗的扩繁:选取脱毒苗在超净工作台上切成带节茎段,接种在快繁培养基上培养。快繁培养基为:MS+6-BA 0.7mg/L+NAA 0.07mg/L,pH 5.5。接种后置于每天光照12小时,光照强度为1500lx,置于培养温度为28℃,空气相对湿度为75%的条件下培养30天。
(2)生根培养:将步骤(1)快繁得到的种苗在超净工作台上切成带节茎段,并接种至生根培养基中进行诱导生根。接种后置于每天光照12小时,光照强度为2300lx,置于培养温度为26℃,空气相对湿度为75%的条件下培养30天。所述的生根培养基为:1/2MS+0.2mg/L 6-BA+0.03mg/L NAA+0.5mg/L IBA+1.0%AC,pH 5.5。
(3)炼苗移栽:生根一个月后,打开其瓶口,取出生根苗洗净根上所带培养基,移栽到由泥炭土:珍珠岩:蛭石=3:2:1组成的基质中。用留有透气孔的薄膜覆盖,放置在温室培养,15天将薄膜揭去,按照组培苗正常培育、管理及移栽大田种植。
结果与分析
在氨基丁酸处理后7天,人工接种病毒,15~20天后,观测实施例1~9和对比例1中的罗汉果叶片发病情况,根据发病症状评估抗病毒侵染的效果,结果见表1。
表1氨基丁酸处理后抗病毒侵染的效果检测表
图1表明,氨基丁酸处理后罗汉果对病毒病产生了抗性,能够抵御病毒病源的侵染,罗汉果幼苗在没有氨基丁酸处理的情况下,很容易被病毒侵染产生典型的感病症状。当用氨基丁酸处理后,罗汉果植株对病毒侵染的抗性得到极大的提高,
虽然,上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验,对本发明作了详尽的描述,但在本发明基础上,可以对之作一些修改或改进,这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此,在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进,均属于本发明要求保护的范围。

Claims (7)

1.一种增强罗汉果脱毒种苗抗性的方法,其特征在于,所述的方法在罗汉果脱毒种苗培育阶段采用氨基丁酸处理,所述的处理方式为用含有氨基丁酸的培养基培养幼苗或用氨基丁酸对幼苗进行灌根处理。
2.如权利要求1所述的一种增强罗汉果脱毒种苗抗性的方法,其特征在于,所述氨基丁酸为α-氨基丁酸、β-氨基丁酸、γ-氨基丁酸中的至少一种。
3.如权利要求1所述的一种增强罗汉果脱毒种苗抗性的方法,其特征在于,所述氨基丁酸的浓度为500~5000ppm。
4.如权利要求1所述的一种增强罗汉果脱毒种苗抗性的方法,其特征在于,所述培育阶段为扩繁、生根、温室炼苗中的至少一个阶段。
5.如权利要求4所述的一种增强罗汉果脱毒种苗抗性的方法,其特征在于,所述扩繁阶段的培养条件为:在培养温度为26~30℃培养25~35天;所述扩繁培养基为:MS+0.1~2mg/L 6-BA+0.01~0.8mg/L NAA。
6.如权利要求4所述的一种增强罗汉果脱毒种苗抗性的方法,其特征在于,所述生根阶段的培养条件为:在培养温度为26~30℃下培养25~35天;所述生根培养基为:1/2MS+0.05~0.5mg/L 6-BA+0.01~0.05mg/L NAA+0.1~1mg/L IBA+0.5~1.5%AC。
7.如权利要求1所述的一种增强罗汉果脱毒种苗抗性的方法,其特征在于,将所述氨基丁酸处理后的罗汉果种苗按照组培苗正常培育、管理及移栽大田种植。
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