CN110426486A - 中药制剂中浙麦冬的鉴别方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种中药制剂中浙麦冬的鉴别方法,本发明采用超声提取法、萃取法对供试品溶液进行处理,简单易行,可操作性强;本发明提供的中药制剂中浙麦冬的薄层鉴别方法,具有简便快捷、分离效果好、专属性强、检测成本低的特点,易于推广应用,具有高效液相色谱法、质谱法等所不能体现的优势;本发明对现有文献及标准调查发现,现有的麦冬薄层鉴别只能鉴别出是否含有麦冬成分,但不能区分麦冬产地,本发明具有专属性更强,不仅能鉴别出中药制剂的麦冬成分,更能鉴别出是否为浙麦冬。
Description
(一)技术领域
本发明涉及中药制剂中浙麦冬的鉴别方法,特别涉及中药制剂中浙麦冬的薄层鉴别方法。
(二)背景技术
麦冬又称麦门冬,为百合科Liliaceae植物麦冬Ophiopogon japonicus(L.f)Ker-Gawl.的干燥块根。麦冬具有养阴生津、润肺清心之功效。主要用于肺燥干咳,阴虚痨嗽,喉痹咽痛,津伤口渴,内热消渴,心烦失眠,肠燥便秘等症。麦冬按产地及品种不同可分为浙麦冬、川麦冬。浙麦冬主产于浙江省的杭州附近和慈溪,采收年限一般为三年,川麦冬主产区四川绵阳地区的三台县,采收年限为一年。历代本草均认为浙麦冬为道地药材,质量最佳,川麦冬次之。
虽然2015版药典麦冬项下没有对浙麦冬和川麦冬进行区分,但是浙麦冬作为道地药材的优质性不仅体现在历代本草的描述中,还体现在相关文献研究中。同一基源的中药材由于产地不同、采收季节不同和生长年限不同而存在差别,使得化学组成不同,影响其质量和疗效。文献报道也表明浙麦冬和川麦冬在化学组成上及药学上的确存在差异,而且有文献研究通过斑马鱼模型在巨噬细胞吞噬功能及促胃肠道蠕动两个方面表明浙麦冬在免疫调节方面明显优于川麦冬。所以2015年版《浙江省炮制规范》对浙麦冬和川麦冬进行区分,将浙麦冬作为独立的项收录在“麦冬”条目下。但是浙麦冬人工种植生长年限长、产量低、经济效益差,加上浙江省经济的发展和土地资源匮乏,使得浙麦冬的栽培面积越来越小,导致浙麦冬来源稀少,价格昂贵。
麦冬可与其他药材配伍,制成多种中药制剂品种,例如以麦冬为君药的参麦注射液、生脉饮、生脉胶囊等,还有一些处方中含麦冬如羚羊清肺颗粒、清咽润喉丸、清热解毒口服液、清喉咽合剂等。市场调研发现由于浙麦冬来源稀少,价格昂贵等因素导致以浙麦冬入药的中药制剂目前相对较少。因此需要确认中成药是否采用浙麦冬投料生产,并在成品制剂中检出确认,使浙麦冬的优质性同样体现在以浙麦冬入药的中药制剂中。
目前国家、地方标准及药学研究均缺乏在成品制剂中鉴定浙麦冬的方法,主要的技术难度在于浙麦冬药材经过了提取纯化等复杂工艺后最终成为制剂的过程中某些成分和含量已经发生了变化,文献和专利中能调研到的浙麦冬药材鉴定方法,如外观判别及液相指纹图谱等化学实验方法并不适用制剂中浙麦冬的鉴定,目前还没有特别明确有效的方法能区分中药制剂成品中的浙麦冬和川麦冬。
(三)发明内容
就现有技术及标准而言,缺少用于区分含麦冬的中药制剂中浙麦冬及川麦冬的鉴别方法。本发明的目的在于提供一种操作简便快捷、分离效果好、专属性强的薄层色谱鉴别方法,解决现有技术存在的问题,本发明同时有助于完善与浙麦冬有关的药品质量标准。
本发明的技术方案如下:
一种中药制剂中浙麦冬的鉴别方法,所述方法包括以下步骤:
(1)对照药材溶液的制备:
取浙麦冬对照药材,加乙醇溶液超声提取(超声功率500W,提取时间30分钟),提取液蒸干,加水溶解后用有机溶剂萃取,萃取液蒸干,加甲醇溶解,作为对照药材溶液;
所述乙醇溶液为乙醇的水溶液,其中乙醇的体积分数为50~95%;
所述乙醇溶液的体积用量以浙麦冬对照药材的质量计为3~15mL/g;
所述水的体积用量以浙麦冬对照药材的质量计为3~15mL/g;
所述有机溶剂为酯类、醚类或酮类有机溶剂,特别优选乙酸乙酯,所述有机溶剂萃取的次数为1~5次,每次有机溶剂的体积用量以浙麦冬对照药材的质量计为3~15mL/g;
所述甲醇的体积用量以浙麦冬对照药材的质量计为0.1~1mL/g;
(2)供试品溶液的制备:
当待测样品为液体状时,取待测液体样品,加有机溶剂萃取,萃取液蒸干,加甲醇溶解,作为供试品溶液;
所述待测液体样品例如可以为参麦注射液;
所述有机溶剂为酯类、醚类或酮类有机溶剂,特别优选乙酸乙酯,所述有机溶剂的萃取次数为2~4次,每次有机溶剂的体积用量为待测液体样品体积的1~3倍;
所述甲醇的体积用量为待测液体样品体积的0.001~0.1倍;
或者,
当待测样品为固体状时,取待测固体样品,粉碎,加乙醇溶液超声提取(超声功率500W,提取时间为30分钟),提取液蒸干,加水溶解后用有机溶剂萃取,萃取液蒸干,加甲醇溶解,作为供试品溶液;
所述乙醇溶液为乙醇的水溶液,其中乙醇的体积分数为50~95%;
所述乙醇溶液的体积用量以待测固体样品的质量计为3~15mL/g;
所述水的体积用量以待测固体样品的质量计为3~15mL/g;
所述有机溶剂为酯类、醚类或酮类有机溶剂,特别优选乙酸乙酯,所述有机溶剂萃取的次数为1~5次,每次有机溶剂的体积用量以待测固体样品的质量计为3~15mL/g;
所述甲醇的体积用量以待测固体样品的质量计为0.01~1mL/g;
(3)点样
用毛细管点样器分别吸取对照药材溶液、供试品溶液,依次点于同一硅胶G薄层板上;
所述对照药材溶液、供试品溶液各自的点样量在2~30uL;
(4)展开
以环己烷、乙酸乙酯、丙酮的混合液作为展开剂,将步骤(3)点样后的薄层板置于层析缸中,展开,取出,晾干;
所述展开剂中环己烷、乙酸乙酯、丙酮的体积份数分别为3~10份、1~5份、0.5~5份,优选4份、2份、1份;
(5)鉴别
将步骤(4)得到的薄层板喷以2~50wt%硫酸乙醇溶液,加热(95~115℃)至斑点显色清晰,之后置于紫外光(365nm)下检视,若供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的亮蓝色荧光主斑点时,可知供试品中含有浙麦冬;
所述亮蓝色荧光主斑点有3个,在Rf=0.28、0.38、0.52的位置上。
本发明的有益效果为:
1)本发明采用超声提取法、萃取法对供试品溶液进行处理,简单易行,可操作性强。
2)本发明提供的中药制剂中浙麦冬的薄层鉴别方法,具有简便快捷、分离效果好、专属性强、检测成本低的特点,易于推广应用。具有高效液相色谱法、质谱法等所不能体现的优势。
3)本发明对现有文献及标准调查发现,现有的麦冬薄层鉴别只能鉴别出是否含有麦冬成分,但不能区分麦冬产地。本发明具有专属性更强,不仅能鉴别出中药制剂的麦冬成分,更能鉴别出是否为浙麦冬。
(四)附图说明
图1:国标方法参麦注射液的鉴别,1~4浙麦冬投料的“登峰牌”参麦注射液,10~15川麦冬投料的参麦注射液,5、9麦冬对照药材,6浙麦冬对照药材,7红参对照药材,8川麦冬对照药材。
图2:浙麦冬薄层色谱条件试验,Merk硅胶G板,A展开剂:环己烷-乙酸乙酯-丙酮(4:3:3),B展开剂:氯仿-甲醇-水(70:20:3)下层液,A中:1红参对照药材,2、7浙麦冬对照药材,3~6浙麦冬投料的“登峰牌”参麦注射液,8川麦冬投料的参麦注射液,9川麦冬对照药材,B中:1、6浙麦冬对照药材,2~5浙麦冬投料的“登峰牌”参麦注射液,7川麦冬对照药材,8红参对照药材。
图3:浙麦冬薄层色谱条件试验,Merk硅胶G板,展开剂:环己烷-乙酸乙酯-丙酮(4:3:3),2~5浙麦冬投料的不同规格(10、20、50、100ml)的“登峰牌”参麦注射液,1、6浙麦冬对照药材,7红参对照药材,8、15川麦冬对照药材,9~14川麦冬投料的各个厂家的参麦注射液。
图4:浙麦冬薄层色谱条件试验,Merk硅胶G板,展开剂:环己烷-乙酸乙酯-丙酮(4:2:1),2~5浙麦冬投料的不同规格的“登峰牌”参麦注射液,1、6浙麦冬对照药材,7红参对照药材,8、15川麦冬对照药材,9~14川麦冬投料的各个厂家参麦注射液。
图5:薄层色谱薄层板比较,青岛海洋化工有限公司硅胶G板,展开剂:环己烷-乙酸乙酯-丙酮(4:2:1),2~5浙麦冬投料的不同规格的“登峰牌”参麦注射液,1、6浙麦冬对照药材,7红参对照药材,8、15川麦冬对照药材,9~14川麦冬投料的各个厂家参麦注射液。
图6:相同薄层色谱薄层板,不同湿度比较,Merk高效板硅胶G板,展开剂:环己烷-乙酸乙酯-丙酮(4:2:1),1~4浙麦冬投料的不同规格的“登峰牌”参麦注射液,5浙麦冬对照药材,6红参对照药材,7、14川麦冬对照药材,8~13川麦冬投料的各个厂家参麦注射液。
(五)具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述,但本发明的保护范围并不仅限于此。
实施例1
1仪器与试药
1.1仪器
薄层色谱成像系统(上海科哲生化科技有限公司,GoodSee-20E)。
1.2试药
红参对照药材(批号:121045-200604,中国药品生物制品检定所);浙麦冬对照药材(批号:20171009,浙江省食品药品检验研究院);麦冬对照药材(批号:181009,中国药品食品检定所);川麦冬对照药材(采购的川麦冬药材,批号:03010560118009);无水乙醇、正丁醇、乙酸乙酯、环己烷、丙酮、氯仿、甲醇均为分析级,水为Milli-Q自制纯化水。
市场购置参麦注射液信息如下:
表1参麦注射液样品信息
2国家标准方法比较
参麦注射液国标方法:取本品40ml,加盐酸3ml,置水浴中加热1小时,放冷,加乙醚40ml振摇提取,乙醚液蒸干,残渣加三氯甲烷1ml使溶解,作为供试品溶液。另取麦冬对照药材2g,加水煎煮30分钟,滤过,滤液浓缩至约40ml,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典四部通则0502)试验,吸取上述两种溶液各5~10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以二氯甲烷-丙酮(4:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
观察图1可得,现国家标准方法虽能同时鉴别出注射液中麦冬成分,但是可观察到不同来源浙麦冬与川麦冬投料的参麦注射液斑点之间没有任何差异,在Rf=0.67左右相同位置都显一黑色斑点。
3本发明鉴别方法
3.1提取液的筛选
3.1.1选取水饱和正丁醇作为提取液
取本品50mL,加水饱和正丁醇振摇提取4次,每次20mL,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1mL使溶解,作为供试品溶液。另取浙麦冬对照药材3g,加90%乙醇25ml,超声处理30min,放冷,滤过,蒸干,加水15ml,加乙酸乙酯振摇提取4次,每次20ml,乙酸乙酯液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验,吸取对照药材溶液5μL,供试品溶液5μL,分别点于同一硅胶G薄层板上。
展开系统A:环己烷-乙酸乙酯-丙酮(4:3:3),展开系统B:氯仿-甲醇-水(70:20:3)下层液,喷以10%硫酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色,置紫外光(365nm)下检视。
由图2可知水饱和正丁醇作为萃取剂不能有效地区分使用浙麦冬与川麦冬的参麦注射液,展开剂A层析结果可区分浙麦冬与川麦冬对照药材,而展开剂B层析结果人参皂苷斑点干扰大。
3.1.2选取乙酸乙酯作为提取液
以环己烷-乙酸乙酯-丙酮(4:3:3)为展开剂,喷以10%硫酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色,置紫外光(365nm)下检视。图3显示使用浙麦冬投料的“登峰牌”参麦注射液(2-5)与使用川麦投料冬的参麦注射液(9-14)斑点有明显的差异。
3.2展开剂的优化
在上述基础上对展开系统进行进一步优化,图3中上半部分斑点比较密集,下半部分斑点比较少,故调节环己烷-乙酸乙酯-丙酮的比例来优化展开系统的极性。采用环己烷-乙酸乙酯-丙酮(4:2:1)进行展开,见图4,此比例的分离度较好,浙麦冬投料的“登峰牌”参麦注射液产品供试品溶液色谱中,在与浙麦冬对照药材色谱Rf=0.28、0.38、0.52左右相应的位置上,显三个相同颜色的亮蓝色荧光斑点,而川麦冬投料的参麦注射液产品供试品溶液色谱无对应斑点,能鉴别参麦注射液产品是否用浙麦冬投料。因此最终选择环己烷-乙酸乙酯-丙酮(4:2:1)为展开剂,乙酸乙酯作为提取液。点样量经过试验,浙麦冬对照药材溶液选择3μL,样品选择5μL比较合适。
薄层色谱条件汇总如下:
取本品50mL,加乙酸乙酯振摇提取4次,每次20mL,乙酸乙酯液蒸干,残渣加甲醇1mL使溶解,作为供试品溶液。另取浙麦冬对照药材3g,加90%乙醇25ml,超声处理30min,放冷,滤过,蒸干,加水15ml,加乙酸乙酯振摇提取4次,每次20ml,乙酸乙酯液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验,吸取对照药材溶液3μL,供试品溶液5μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷-乙酸乙酯-丙酮(4:2:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,加热至斑点显色清晰,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的亮蓝色荧光主斑点。
3.3不同薄层板及温湿度的考察
使用青岛海洋化工有限公司、Merk公司生产的不同硅胶G板,以环己烷-乙酸乙酯-丙酮(4:2:1)为展开剂并显色,结果斑点均能得到良好的分离,含浙麦冬与川麦冬的参麦注射液区分明显,见图4、5。另对不同湿度环境也进行了考察,相对湿度30%或67%,对色谱分离影响不大,说明环境湿度对结果无影响。见图4、6。
Claims (8)
1.一种中药制剂中浙麦冬的鉴别方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:
(1)对照药材溶液的制备:
取浙麦冬对照药材,加乙醇溶液超声提取,提取液蒸干,加水溶解后用有机溶剂萃取,萃取液蒸干,加甲醇溶解,作为对照药材溶液;
(2)供试品溶液的制备:
当待测样品为液体状时,取待测液体样品,加有机溶剂萃取,萃取液蒸干,加甲醇溶解,作为供试品溶液;
或者,
当待测样品为固体状时,取待测固体样品,粉碎,加乙醇溶液超声提取,提取液蒸干,加水溶解后用有机溶剂萃取,萃取液蒸干,加甲醇溶解,作为供试品溶液;
(3)点样
用毛细管点样器分别吸取对照药材溶液、供试品溶液,依次点于同一硅胶G薄层板上;
(4)展开
以环己烷、乙酸乙酯、丙酮的混合液作为展开剂,将步骤(3)点样后的薄层板置于层析缸中,展开,取出,晾干;
所述展开剂中环己烷、乙酸乙酯、丙酮的体积份数分别为3~10份、1~5份、0.5~5份;
(5)鉴别
将步骤(4)得到的薄层板喷以2~50wt%硫酸乙醇溶液,加热至斑点显色清晰,之后置于紫外光下检视,若供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的亮蓝色荧光主斑点时,可知供试品中含有浙麦冬。
2.如权利要求1所述的中药制剂中浙麦冬的鉴别方法,其特征在于,步骤(1)或(2)中,所述超声提取的超声功率为500W,提取时间为30分钟。
3.如权利要求1所述的中药制剂中浙麦冬的鉴别方法,其特征在于,步骤(1)或(2)中,所述乙醇溶液为乙醇的水溶液,其中乙醇的体积分数为50~95%。
4.如权利要求1所述的中药制剂中浙麦冬的鉴别方法,其特征在于,步骤(1)或(2)中,所述有机溶剂为酯类、醚类或酮类有机溶剂。
5.如权利要求1所述的中药制剂中浙麦冬的鉴别方法,其特征在于,步骤(1)或(2)中,所述有机溶剂为乙酸乙酯。
6.如权利要求1所述的中药制剂中浙麦冬的鉴别方法,其特征在于,步骤(3)中,所述对照药材溶液、供试品溶液各自的点样量在2~30uL。
7.如权利要求1所述的中药制剂中浙麦冬的鉴别方法,其特征在于,步骤(4)中,所述展开剂中环己烷、乙酸乙酯、丙酮的体积份数分别为4份、2份、1份。
8.如权利要求1所述的中药制剂中浙麦冬的鉴别方法,其特征在于,步骤(5)中,所述亮蓝色荧光主斑点有3个,在Rf=0.28、0.38、0.52的位置上。
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