CN110423708A

CN110423708A - 一种木葡糖醋酸杆菌及其应用

Info

Publication number: CN110423708A
Application number: CN201910613756.6A
Authority: CN
Inventors: 高宪枫
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2019-07-09
Filing date: 2019-07-09
Publication date: 2019-11-08

Abstract

本发明提供了一种木葡糖醋酸杆菌及其应用，属于微生物技术领域。本发明的木葡糖醋酸杆菌分类命名为木葡糖醋酸杆菌(Komagataeibacter xylinus)FM883，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 2019127。所述的木葡糖醋酸杆菌FM883可用于制备细菌纤维素膜。制备的细菌纤维素具备特殊的网络结构，并且制备过程简单，成本低，得到的细菌纤维素膜和发酵液均可用于开发新型的发酵饮品。

Description

一种木葡糖醋酸杆菌及其应用

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种木葡糖醋酸杆菌及其在制备细菌纤维素膜上的应用。

背景技术

细菌纤维素(Bacterial cellulose，BC)是细菌产生的一种胞外产物，是吡喃型葡萄糖单体通过β-1,4-糖苷键连接而形成的一种无分支、大分子直链聚合物，具有(C₆H₁₀O₅)_n的组成，直链间彼此平行，不呈螺旋构象，无分支结构。具有生物可降解性；结晶度高；持水性和透水透气性高；机械强度高(直径在0.01-0.1nm)，有很高的杨氏模量；生物合成具有可调控性等优点。细菌纤维素可作为增稠剂、结合剂、成型剂、分散剂和纤维食品等，1992年被美国食品和药物管理局认定为安全的膳食纤维。

细菌纤维素产业在日本、美国已形成年产值上亿元的市场，进入食品、医药、纺织、化工、果油等行业。目前，我国细菌纤维素产量低、成本高，主要技术障碍是发酵水平低，无法实现产业化。因此需要进一步选育高产的生产菌株，提高细菌纤维素的发酵得率。

发明内容

为此，需要提供一种高产细菌纤维素膜的菌株，开发新型发酵饮品，解决产量及成本的问题。

为实现上述目的，发明人提供了如下技术方案：

一种木葡糖醋酸杆菌，所述的木葡糖醋酸杆菌分类命名为木葡糖醋酸杆菌(Komagataeibacter xylinus)FM883，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO:M 2019127，保藏日期2019年3月21日，保藏地址为中国，武汉，武汉大学。

所述的木葡糖醋酸杆菌在细菌纤维素膜制备中的应用。

进一步的，所述的制备方法包括以下步骤：

菌株的活化：用接种环将木葡糖醋酸杆菌菌株FM883划线于固体培养基平板上，25-35℃培养36-60h；

种子液的制备：将上一步获得的木葡糖醋酸杆菌菌株FM883的单菌落接种于种子培养基中，25-35℃振荡培养18-28h；

发酵液的制备：按8-12％接种量将上一步获得的种子液转入发酵培养基中，25-35℃静置培养3-13天，得到的上层菌膜即为细菌纤维素膜。

其中，所述的固体培养基的成分包括葡萄糖1.5-2.5％,酵母膏0.5-1.0％,K₂HPO₄0.1-0.2％,MgSO₄1-2％,乙醇1.5-2.5％,琼脂1.5-2.5％，自然pH值。

所述的种子培养基的成分包括葡萄糖1.5-2.5％,酵母膏0.5-1.0％,K₂HPO₄0.1-0.2％,MgSO₄1-2％,乙醇1.5-2.5％,自然pH值。

所述的发酵培养基的成分包括葡萄糖1.5-2.5％,酵母膏0.5-1.0％,K₂HPO₄0.1-0.2％,MgSO₄1-2％,乙醇1.5-2.5％,自然pH值。

所述的木葡糖醋酸杆菌在制备不同风味细菌纤维素膜中的应用。

进一步的，所述的制备方法包括以下步骤：

发酵培养：将木葡糖醋酸杆菌菌株FM883的种子液按8-12％的接种量接种于果汁培养基，或蔬菜汁培养基，或茶汤培养基中，25-35℃恒温培养8-12天；

杀菌冷却：90-95℃，10-15min；120-125℃，15-25min；室温冷却即可。

其中，所述的果汁培养基或蔬菜汁培养基的配制方法为浓缩的胡萝卜汁或橙汁或椰子汁用纯水按体积比1:3-1:5的比例稀释，加入2-4％的白砂糖，混匀，分装，105-110℃灭菌10-15min，冷却。所述的果汁培养基还包括苹果汁培养基，所述的蔬菜汁培养基还包括西红柿汁培养基。

所述的茶汤培养基的配制方法为茶叶与纯水按1克茶叶配200-300mL水的比例配比，90-100℃煮茶10-15min，加入10-15％的白砂糖，搅拌至溶解即可。

本发明的有益效果是：

(1)利用FM883菌株制备的细菌纤维素具备特殊的网络结构，并且制备过程简单，成本低。

(2)FM883菌株具有较好的耐酸性能，可在酸性条件下发酵培养。

(3)利用FM883菌株在果汁、蔬菜汁和茶汤等培养基中可以产生高品质可食用细菌纤维素，且发酵液还可用于制备新型发酵饮品。

附图说明

图1为具体实施方式所述的菌株FM883的菌落形态，图中左图为菌落在整个培养皿上的形态，右图为平板上菌落的局部放大图。

图2为具体实施方式所述的菌株FM883的SEM图。

图3为具体实施方式所述的菌株FM883的TEM图。

图4为具体实施方式所述的菌株FM883的系统发育树。

图5为具体实施方式所述的菌株FM883分泌的细菌纤维素，图中左图为烧杯中细菌纤维素的主视图，右图为烧杯中细菌纤维素的俯视图。

图6为具体实施方式所述的菌株FM883分泌的细菌纤维素的SEM图。

图7为具体实施方式所述的菌株FM883分泌的细菌纤维素的TEM图。

图8为具体实施方式所述的菌株FM883分泌的细菌纤维素的FT-IR图。

图9为具体实施方式所述的菌株FM883分泌的细菌纤维素的XRD图。

具体实施方式

为详细说明技术方案的技术内容、所实现目的及效果，以下结合具体实施例并配合附图详予说明。

实施例1菌株的分离鉴定

1.试验材料

菌株：FM883，分离自红茶菌发酵液，现保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 2019127。

固体培养基：葡萄糖2％,酵母膏0.5％,K₂HPO₄0.1％,MgSO₄1.5％,乙醇2％,琼脂2％，pH值自然。

2.菌株FM883的分离

取1mL红茶菌的发酵菌液，加到装有9mL超纯水的试管中，震荡混匀，即制成10^-1样品悬液，依次将样品原液进行梯度稀释至10^-2和10^-3。取200μL各稀释液，分别滴加到固体培养基平板上，并涂布平板至干燥，每个梯度重复3次。涂布后的平板置于30℃恒温培养3天。观察平板上菌落的形态、大小、颜色、表明干湿情况、边缘状态和透明度等特征，挑取具有代表性的单菌落，并计数、纯化、20％甘油-80℃保存，从而分离得到菌株，为了方便描述，将分离所得的菌株命名为FM883。

3.菌株FM883的鉴定

3.1形态学鉴定

对菌株FM883的理化特性等进行鉴定，菌株FM883为革兰氏阴性菌，其菌落形态如图1所示，菌株FM883的菌落较小、圆形、米白、表面光滑且湿润、微隆、边缘整齐、不透明。

菌株FM883委托中国典型培养物保藏中心进行SEM和TEM扫描。菌株FM883的SEM扫描如图2所示，TEM扫描如图3所示。其生理生化特性研究委托中国典型培养物保藏中心完成，结果见表1和表2。实验结果表明，菌株FM883可以很好的利用葡萄糖、癸酸盐、D-核糖、5-酮基-葡萄糖酸盐和糖原，且利用葡萄糖和七叶灵等可以产酸。

表1菌株FM883生理生化特性–碳源同化

注：表中“+”为阳性反应；“-”为阴性反应。

表2菌株FM883生理生化特性–利用碳源产酸

注：表中“+”为阳性反应；“-”为阴性反应；“W”为弱阳性反应。

3.2分子生物学鉴定

采用苯酚-氯仿法对菌株FM883进行DNA提取，以提取所获得的菌株DNA为模板，以细菌通用引物进行PCR扩增。引物序列如下：

正向引物F：5′-GAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′(SEQ ID NO：1)

反向引物R：5′-ACGGCTACCTTGTTACGACTT-3′(SEQ ID NO：2)

PCR扩增反应体系(25μL体系)：1μL模板、0.5μL 0.01mol·L^-1dNTP、2.5μL 10×Buffer、引物各1μL和0.3μL(5U·μL^-1)Taq酶。

PCR扩增反应程序：94℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火45s，72℃延伸1min30s，35个循环；最后72℃延伸10min。

PCR产物的测序与分析：将PCR扩增产物送到上海博尚生物技术有限公司进行测序，测得的核苷酸序列有1364bp，如下：

gtcggctgcgtccttgcggttcgctcaccggcttaaggtcaaaccaactcccatggtgtgacgggcggtgtgtacaaggcccgggaacgtattcaccgcggcatgctgatccgcgattactagcgattccaccttcatgcactcgagttgcagagtgcaatccgaactgagacggctttttgagatcggctcggtgtcaccacctggcttcccactgtcaccgccattgtagcacgtgtgtagcccaggacataagggccatgaggacttgacgtcatccccaccttcctccggcttgtcaccggcagttcctttagagtgcccacccaaacgtgatggcaactaaaggcgagggttgcgctcgttgcgggacttaacccaacatctcacgacacgagctgacgacagccatgcagcacctgtgctggaggtctcttgcgagaaatgcccatctctggacacggcctccgcatgtcaagccctggtaaggttctgcgcgttgcttcgaattaaaccacatgctccaccgcttgtgcgggcccccgtcaattcctttgagtttcaaccttgcggccgtactccccaggcggtgtgcttatcgcgttaactacgacactgaatgacaaagtcacccaacatccagcacacatcgtttacagcgtggactaccagggtatctaatcctgtttgctccccacgctttcgcgcctcagcgtcagtcatgagccaggttgccgccttcgccaccggtgttcttcccaatatctacgaatttcacctctacactgggaattccacaaccctctctcacactctagtcgccacgtatcaaatgcagcccccaggttaagcccgggaatttcacatctgactgtgtcaaccgcctacgcgccctttacgcccagtcattccgagcaacgcttgcccccttcgtattaccgcggctgctggcacgaagttagccggggcttcttctgcgggtaccgtcatcatcgtccccgctgaaagtgctttacaatccgaaaaccttcttcacacacgcggcattgctggatcaggcttgcgcccattgtccaatattccccactgctgcctcccgtaggagtctgggccgtgtctcagtcccagtgtggctgatcatcctctcagaccagctatcgatcatcgccttggtaggcctttaccccaccaactagctaatcgaacgcaggttcctccacaggcgacttgcgcctttgaccctcaggtgtcatgcggtattagcttcagtttcccaaagttatcccccacccgtggatagatccctacgcgttactcacccgtccgccactaaccccgaaaggttcgtgcgacttgcatggtaa(SEQ ID NO.3)

将测得的序列经NCBI比对，并构建系统发育树，见图4。由图2得出，菌株FM883与木葡糖醋酸杆菌(Komagataeibacter xylinus)在进化位置上最为接近。通过上述的鉴定，可确定该菌株FM883属于木葡糖醋酸杆菌(Komagataeibacter xylinus)。

Komagataeibacter于2012年从葡萄糖酸醋酐菌属Gluconacetobacter中被分离出来并命名，其中Komagataeibacter xylinus属于Gluconacetobacterxylinus类群(http://www.bacterio.net/)【Yamada Y,Yukphan P,Vu H T L,et al.Subdivision of the genusGluconacetobacter Yamada,Hoshino and Ishikawa 1998:the proposal ofKomagatabacter gen.nov.for strains accommodated to the Gluconacetobacterxylinus group in theα-Proteobacteria[J].Annals of Microbiology,2012,62(2):849-859.】。

实施例2细菌纤维素膜的制备及特性分析

1.细菌纤维素膜的制备

(1)木葡糖醋酸杆菌菌株FM883的活化：用接种环将木葡糖醋酸杆菌菌株FM883划线于固体培养基平板上，并于恒温培养箱中培养48h，并且培养温度为30℃。其中，固体培养基的配方为：葡萄糖2％,酵母膏0.5％,K₂HPO₄0.1％,MgSO₄1.5％,乙醇2％,琼脂2％，pH值自然。

(2)制备种子液：将步骤(1)所获得的木葡糖醋酸杆菌菌株FM883的单菌落接种于种子培养基中，并将其置于恒温振荡摇床中培养24h，温度30℃，转速150rpm。其中，种子培养基的配方为：葡萄糖2％,酵母膏0.5％,K₂HPO₄0.1％,MgSO₄1.5％,乙醇2％,pH值自然。

(3)制备菌株发酵液：按10％接种量将步骤(2)所获得的种子液转入已消毒灭菌的发酵培养基中培养，温度30℃，静置培养3-13天，得到的上层菌膜即为细菌纤维素膜。其中，发酵培养基的配方为：葡萄糖2％,酵母膏0.5％,K₂HPO₄0.1％,MgSO₄1.5％,乙醇2％,pH值自然。

实验结果：目前，生产细菌纤维素的菌株的pH耐受性一般在5.0左右，FM883菌株培养后的发酵液pH为2.3-2.7，证明本菌株的耐酸性良好。FM883菌株发酵3天时开始产膜，随着时间的延长，膜产量逐渐提高，第3天到第10天膜产量迅速增长，第10天到第13天膜产量增长速度明显减缓。从时间和成本考虑，发酵10天是FM883菌株产细菌纤维素膜的优选条件，制备得到的细菌纤维素膜如图5所示，产量为344.3g/L(湿重)。

2.细菌纤维素膜特性分析

以发酵培养10天的获得的细菌纤维素膜进行以下测试。

(1)切片进行食品感官分析

实验结果：菌株FM883分泌的细菌纤维素色泽为乳白色，组织状态完整、表面光滑质地均匀，无异味，口感较脆。

(2)细菌纤维素膜的力学性能：采用质构仪测试中最常用的测试模式Textureprofile analysis(TPA)，能得到相关的质构参数有：硬度、凝聚性、弹性、回复性、粘附性、咀嚼性和脆性等，并以市售的椰果为对照。

TPA测试的测试参数为：预压速度为1.0mm/s，下压速度为1.0mm/s，回复速度为1.0mm/s，下压距离为2mm，两次压缩之间的停留时间为5s，触发力为5g。每组测试均做6次平行测定，实验结果取平均值。

实验结果：TPA测试得到的压缩-拉伸曲线求出相关的质构参数如表3所示。FM883所产的细菌纤维素与对照品相比，硬度、弹性、耐咀性大。另外，对细菌纤维素进行感官评价，该细菌纤维素Q弹爽口，易下咽，无残渣。

表3细菌纤维素膜相关质构参数

(3)光学显微镜

菌株FM883所产的细菌纤维素膜委托中国典型培养物保藏中心进行SEM和TEM扫描。

实验结果：菌株FM883分泌的细菌纤维素的SEM图见图6，菌株FM883分泌的细菌纤维素的TEM图见图7。结果显示，菌株FM883所产细菌纤维素具有网络结构，纤维带10-70nm。

(4)光谱分析

菌株FM883所产的细菌纤维素膜进行FT-IR和XRD测试。

细菌纤维素通过碱处理及真空冷冻干燥后，粉碎。利用溴化钾固体压片法，取样品1mg与干燥的溴化钾200mg在玛瑙研钵中混合均匀，充分研磨后(使颗粒达到约2μm)，采用红外光谱仪(Nicolet AVATAR 360)对细菌纤维素样品在波长为400-4000cm^-1的范围内进行测试。

采用上海仁特检测仪器有限公司的Miniflex 600台式X射线衍射仪，通过XRD的辐射源Cu Kα(λ＝1.5406nm)，管电压40kV，管电流15mA，测试范围8-80°，扫描速度10°/min，步长0.02°对细菌纤维素的结晶性进行分析。

实验结果：菌株FM883分泌的细菌纤维素的FT-IR表征如图8所示。菌株FM883分泌的细菌纤维素的XRD表征如图9所示。结果显示，菌株FM883所产细菌纤维素具有醇羟基的特征峰，且菌株FM883所产细菌纤维素为纤维素I型。

实施例3菌株FM883在不同培养基中的产膜情况

1.培养基

(1)胡萝卜汁培养基：取50mL浓缩胡萝卜汁，加入250mL的超纯水，加入7.5g的白砂糖，混匀，分装，每份100mL，105℃灭菌10min(灭菌锅最低105℃)。浓缩胡萝卜汁的稀释方案：1份的胡萝卜汁用5倍的水稀释；1L胡萝卜汁加30g白砂糖。

(2)橙汁培养基：取50mL浓缩橙汁，加入250mL的超纯水，加入7.5g的白砂糖，混匀，分装，每份100mL，105℃灭菌10min(灭菌锅最低105℃)。浓缩橙汁的稀释方案：1份的橙汁用5倍的水稀释；1L橙汁加30g白砂糖。

(3)椰子水培养基：取50mL浓缩椰子水，加入719mL的超纯水，加入22.8g的白砂糖，混匀，分装，每份100mL，105℃灭菌10min(灭菌锅最低105℃)。浓缩的椰子水的稀释方案：1份的椰子水用14.2份的水稀释；1L椰子水加30g白砂糖。

(4)红茶水培养基：4克红茶，加入800mL水，100℃煮10min，加入100g白糖。

2.发酵实验：菌株FM883的种子液(种子液的制备方法见实施例2)分别按10％接种量接种于100mL上述不同培养基的烧杯中，30℃恒温培养10天。

3.杀菌冷却工艺为：(1)95℃，10min；(2)121℃，20min；(3)室温冷却即可。得到的上层固体即为细菌纤维素膜，下层液体为发酵液。

4.实验结果

FM883菌株在不同培养基中的产膜率见表4，各细菌纤维素膜及其发酵液的口感如下：

(1)胡萝卜汁培养：胡萝卜汁培养基原始pH为4.36，发酵10天后pH为3.20；可产细菌纤维素，发酵液风味较好。

(2)橙汁培养：橙汁培养基原始pH为3.36，发酵10天后pH为2.63；细菌纤维素膜带有橙的风味特征，发酵液中橙的单宁风味较为纯正，略有醋酸风味，但无杂味、异味。

(3)红茶水培养：在红茶水培养基中发酵10天后pH为2.62；细菌纤维素膜很硬，略有纤维感，发酵液甜中带酸。

(4)椰子汁培养：在椰子汁培养基中发酵10天后pH为4.83；可产细菌纤维素膜，发酵液有甜感。

表4 FM883菌株在不同培养基中的产膜率

实验结果显示，菌株FM883在各种果汁、蔬菜汁和茶汤等培养基中发酵均可产细菌纤维素，且发酵液风味好，其中在胡萝卜汁和橙子中细菌纤维素产膜率较高。另外，菌株FM883还可以在苹果汁培养基、西红柿汁培养基等果蔬培养基中发酵产生不同风味的细菌纤维素膜。

综上所述，菌株FM883具有良好的耐酸性能，可在酸性条件下发酵产生细菌纤维素膜。菌株FM883在各种果汁、蔬菜汁和茶汤等培养基中发酵可生产不同风味的细菌纤维素膜，且发酵液风味纯正，口感好。发酵获得的菌膜和菌液均可用于开发新型的发酵饮品。因此，木葡糖醋酸杆菌FM886在制备新型发酵饮品上具有广阔的应用前景。

需要说明的是，尽管在本文中已经对上述各实施例进行了描述，但并非因此限制本发明的专利保护范围。因此，基于本发明的创新理念，对本文所述实施例进行的变更和修改，或利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，直接或间接地将以上技术方案运用在其他相关的技术领域，均包括在本发明的专利保护范围之内。

序列表

<110> 高宪枫

<120> 一种木葡糖醋酸杆菌及其应用

<130> 2019

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 19

<212> DNA

<213> 细菌(Bacteria)

<400> 1

gagtttgatc ctggctcag 19

<210> 2

<211> 21

<212> DNA

<213> 细菌(Bacteria)

<400> 2

acggctacct tgttacgact t 21

<210> 3

<211> 1364

<212> DNA

<213> 木葡糖醋酸杆菌(Komagataeibacter xylinus)

<400> 3

gtcggctgcg tccttgcggt tcgctcaccg gcttaaggtc aaaccaactc ccatggtgtg 60

acgggcggtg tgtacaaggc ccgggaacgt attcaccgcg gcatgctgat ccgcgattac 120

tagcgattcc accttcatgc actcgagttg cagagtgcaa tccgaactga gacggctttt 180

tgagatcggc tcggtgtcac cacctggctt cccactgtca ccgccattgt agcacgtgtg 240

tagcccagga cataagggcc atgaggactt gacgtcatcc ccaccttcct ccggcttgtc 300

accggcagtt cctttagagt gcccacccaa acgtgatggc aactaaaggc gagggttgcg 360

ctcgttgcgg gacttaaccc aacatctcac gacacgagct gacgacagcc atgcagcacc 420

tgtgctggag gtctcttgcg agaaatgccc atctctggac acggcctccg catgtcaagc 480

cctggtaagg ttctgcgcgt tgcttcgaat taaaccacat gctccaccgc ttgtgcgggc 540

ccccgtcaat tcctttgagt ttcaaccttg cggccgtact ccccaggcgg tgtgcttatc 600

gcgttaacta cgacactgaa tgacaaagtc acccaacatc cagcacacat cgtttacagc 660

gtggactacc agggtatcta atcctgtttg ctccccacgc tttcgcgcct cagcgtcagt 720

catgagccag gttgccgcct tcgccaccgg tgttcttccc aatatctacg aatttcacct 780

ctacactggg aattccacaa ccctctctca cactctagtc gccacgtatc aaatgcagcc 840

cccaggttaa gcccgggaat ttcacatctg actgtgtcaa ccgcctacgc gccctttacg 900

cccagtcatt ccgagcaacg cttgccccct tcgtattacc gcggctgctg gcacgaagtt 960

agccggggct tcttctgcgg gtaccgtcat catcgtcccc gctgaaagtg ctttacaatc 1020

cgaaaacctt cttcacacac gcggcattgc tggatcaggc ttgcgcccat tgtccaatat 1080

tccccactgc tgcctcccgt aggagtctgg gccgtgtctc agtcccagtg tggctgatca 1140

tcctctcaga ccagctatcg atcatcgcct tggtaggcct ttaccccacc aactagctaa 1200

tcgaacgcag gttcctccac aggcgacttg cgcctttgac cctcaggtgt catgcggtat 1260

tagcttcagt ttcccaaagt tatcccccac ccgtggatag atccctacgc gttactcacc 1320

cgtccgccac taaccccgaa aggttcgtgc gacttgcatg gtaa 1364

Claims

1.一种木葡糖醋酸杆菌，其特征在于：所述的木葡糖醋酸杆菌分类命名为木葡糖醋酸杆菌(Komagataeibacter xylinus)FM883，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:M 2019127，保藏日期2019年3月21日，保藏地址为中国，武汉，武汉大学。

2.一种如权利要求1所述的木葡糖醋酸杆菌在细菌纤维素膜制备中的应用。

3.根据权利要求2所述的木葡糖醋酸杆菌在细菌纤维素膜制备中的应用，其特征在于：所述的制备方法包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的木葡糖醋酸杆菌在细菌纤维素膜制备中的应用，其特征在于：所述的固体培养基的成分包括葡萄糖1.5-2.5％,酵母膏0.5-1.0％,K₂HPO₄ 0.1-0.2％,MgSO₄ 1-2％,乙醇1.5-2.5％,琼脂1.5-2.5％，自然pH值。

5.根据权利要求3所述的木葡糖醋酸杆菌在细菌纤维素膜制备中的应用，其特征在于：所述的种子培养基的成分包括葡萄糖1.5-2.5％,酵母膏0.5-1.0％,K₂HPO₄ 0.1-0.2％,MgSO₄ 1-2％,乙醇1.5-2.5％,自然pH值。

6.根据权利要求3所述的木葡糖醋酸杆菌在细菌纤维素膜制备中的应用，其特征在于：所述的发酵培养基的成分包括葡萄糖1.5-2.5％,酵母膏0.5-1.0％,K₂HPO₄ 0.1-0.2％,MgSO₄ 1-2％,乙醇1.5-2.5％,自然pH值。

7.根据权利要求1所述的木葡糖醋酸杆菌在制备不同风味细菌纤维素膜中的应用，其特征在于：所述的制备方法包括以下步骤：

8.根据权利要求7所述的木葡糖醋酸杆菌在制备不同风味细菌纤维素膜中的应用，其特征在于：所述的果汁培养基或蔬菜汁培养基的配制方法为浓缩的胡萝卜汁或橙汁或椰子汁用纯水按体积比1:3-1:5的比例稀释，加入2-4％的白砂糖，混匀，分装，105-110℃灭菌10-15min，冷却。

9.根据权利要求7所述的木葡糖醋酸杆菌在制备不同风味细菌纤维素膜中的应用，其特征在于：所述的茶汤培养基的配制方法为茶叶与纯水按1克茶叶配200-300mL水的比例配比，90-100℃煮茶10-15min，加入10-15％的白砂糖，搅拌至溶解即可。