CN110403948A - 苯乙醇苷化合物在制备抗炎药物中的应用及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了苯乙醇苷化合物在制备抗炎药物中的应用。所述6种苯乙醇苷化合物均分离自于广东紫珠，其中，3,4‑二羟基‑β‑苯乙基‑O‑α‑L‑鼠李糖吡喃‑(1→2)‑4‑O‑咖啡酰基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷为首次从紫珠属植物中分离得到。本发明首先通过验证广东紫珠醇提物对急、慢性炎症动物的抗炎活性；然后有目的的，针对性的从广东紫珠醇提物中分离出具有抗炎作用的6种苯乙醇苷化合物；经试验发现所述6种苯乙醇苷化合物对炎症因子TNF‑α、IL‑6和NO均有明显的抑制作用，其中alyssonoside抗炎活性最强；分子生物学实验表明forsythoside B和alyssonoside可以通过激活氧化应激通路发挥抗炎疗效，可制备成为抗炎药物、炎症因子抑制药物或Keap1‑Nrf2蛋白解离剂进行应用。

Description

苯乙醇苷化合物在制备抗炎药物中的应用及其制备方法
技术领域
本发明涉及抗炎药物技术领域，更具体地，涉及苯乙醇苷化合物在制备抗炎药物中的应用及其制备方法。
背景技术
广东紫珠(Callicarpa kwangtungensis Chun.)，为马鞭草科紫珠属代表性药用植物，主要分布在中国大陆南部。全株入药，性凉、味苦涩，具有收敛止血、散瘀和清热解毒之功效，在民间主要用于治疗上呼吸道感染、扁桃体炎、肺炎和外伤出血等。广东紫珠是中成药“抗宫炎片”和“妇炎康泡腾片”等的主要原料药材，广泛应用于妇科炎症制剂，为2015版《中国药典》收录药材品种。作为民间临床妇科炎症及各类出血症的常用药物，广东紫珠具有良好的开发前景。
由于广东紫珠良好药效，对其有效成分的分析和研究较多，其中主要集中在有效成分的分离、鉴定和药理作用方面，其中药理作用方面主要集中在抗氧化作用方面，在抗炎作用方面研究的较少，例如“广东紫珠抑菌有效部位的筛选(江西省林业科学，聂韡等)”虽然报道了广东紫珠的提取物具有一定的抑菌作用，但是并未明确记载具体发挥抑菌作用的化学组分；“广东紫珠中黄酮二葡萄糖醛酸苷类化合物的分离纯化及其抗炎活性(中国医药工业研究总院中药创新中心，许慧等)”记载了4个黄酮二葡萄糖醛酸苷类化合物的分离和抗炎作用；再如“不同采收期广东紫珠中两种抗炎活性成分的动态变化(中国药科大学天然药物活性组分与药效国家重点实验室，陈颖等)”记载了两种抗炎成分连翘酯苷B和金石蚕苷的含量变化的动态，但是并未明确记载其具体的抗炎作用。
为尽大可能的开发广东紫珠的药用价值，因此，有必要对其抗炎成分和用途进行研究和开发。
发明内容
本发明的目的在于提供苯乙醇苷化合物在制备抗炎药物中的应用。本发明所述六种苯乙醇苷化合物来自广东紫珠，从广东紫珠的正丁醇提取物中分离得到，其对3种经典急、慢性动物炎症模型(二甲苯致小鼠耳肿胀、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性升高及小鼠棉球肉芽肿模型)均表现出明显的抑制作用；同时对LPS诱导RAW264.7小鼠巨噬细胞中的炎症因子TNF-α、IL-6和炎症介质NO均有明显抑制作用，具有良好的抗炎活性，可制备成为抗炎药物进行应用。
本发明的另一目的在于提供苯乙醇苷化合物在作为Keap1-Nrf2蛋白解离剂中的应用。
本发明的再一目的在于提供所述苯乙醇苷化合物的制备方法。
本发明的上述目的是通过以下方案予以实现的：
苯乙醇苷化合物在制备抗炎药物中的应用，所述苯乙醇苷化合物均分离自于广东紫珠，其分别为毛蕊花糖苷、连翘酯苷B、金石蚕苷、3,4-二羟基-β-苯乙基-O-α-L-鼠李糖吡喃-(1→2)-O-β-D-芹糖呋喃-(1→6)-4-O-阿魏酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷、3,4-二羟基-β-苯乙基-O-α-L-鼠李糖吡喃-(1→2)-4-O-咖啡酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷、4-羟基-β-苯乙基-O-α-L-鼠李糖吡喃-(1→3)-4-O-咖啡酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷。
优选地，所述苯乙醇苷化合物的分离过程为：
S1.将干燥广东紫珠枝粉碎，并用甲醇提取，得到甲醇提取液，浓缩后得到浸膏；
S2.将浸膏加水溶解，并依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取；
S3.取正丁醇萃取物经AB-8型大孔树脂柱层析分离，以0％、20％、40％、70％、100％甲醇水溶液为洗脱液梯度洗脱，TLC检测合并得5个流份Fr.1～Fr.5；
S4.将流份40％甲醇水洗脱部分的浸膏经Diaion HP-20大孔树脂以0％、10％、20％、30％、40％、60％、100％甲醇水溶液为洗脱液梯度洗脱，即可得到所述苯乙醇苷化合物。
优选地，步骤S3和S4中所述大孔树脂柱层析分别为AB-8型大孔树脂柱层析和Diaion HP-20型大孔树脂柱层析。
优选地，步骤S3中甲醇水溶液梯度洗脱中甲醇的体积比依次为0％、20％、40％、70％、100％。
优选地，步骤S4中甲醇水溶液梯度洗脱中甲醇的体积比依次为0％、20％、40％、70％、100％。
优选地，所述苯乙醇苷化合物为连翘酯苷B和/或3,4-二羟基-β-苯乙基-O-α-L-鼠李糖吡喃-(1→2)-O-β-D-芹糖呋喃-(1→6)-4-O-阿魏酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷。
本发明同时还保护苯乙醇苷化合物在制备炎症因子抑制药物中的应用，所述炎症因子为TNF-α、IL-6或炎症介质NO中的一种或多种。
苯乙醇苷化合物在作为Keap1-Nrf2蛋白解离剂中的应用也在本发明的保护范围内。
优选地，所述药物或解离剂的剂型为胶囊剂或口服颗粒剂。
一种结构如下式所述的苯乙醇苷化合物的制备方法也在本发明的保护范围内，
其由如下步骤分离得到：
S1.将干燥广东紫珠枝粉碎，并用甲醇提取，得到甲醇提取液，浓缩后得到浸膏；
S2.将浸膏加水溶解，并依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取；
S3.取正丁醇萃取物经AB-8型大孔树脂柱层析分离，以0％、20％、40％、70％、100％甲醇水溶液为洗脱液梯度洗脱，TLC检测合并得5个流份Fr.1～Fr.5；
S4.将流份40％甲醇水洗脱部分的浸膏经Diaion HP-20大孔树脂以0％、10％、20％、30％、40％、60％、100％甲醇水溶液为洗脱液梯度洗脱，即可得到所述苯乙醇苷化合物。
优选地，步骤S3和S4中所述大孔树脂柱层析分别为AB-8型大孔树脂柱层析和Diaion HP-20型大孔树脂柱层析。
优选地，步骤S3中甲醇水溶液梯度洗脱中甲醇的体积比依次为0％、20％、40％、70％、100％。
优选地，步骤S4中甲醇水溶液梯度洗脱中甲醇的体积比依次为0％、20％、40％、70％、100％。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明首先通过验证广东紫珠醇提物对急、慢性炎症动物的抗炎活性；然后有目的的，针对性的从广东紫珠醇提物中分离出具有抗炎作用的6种苯乙醇苷化合物，分别为毛蕊花糖苷、连翘酯苷B、金石蚕苷、3,4-二羟基-β-苯乙基-O-α-L-鼠李糖吡喃-(1→2)-O-β-D-芹糖呋喃-(1→6)-4-O-阿魏酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷、3,4-二羟基-β-苯乙基-O-α-L-鼠李糖吡喃-(1→2)-4-O-咖啡酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷、4-羟基-β-苯乙基-O-α-L-鼠李糖吡喃-(1→3)-4-O-咖啡酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷，经试验发现所述6种苯乙醇苷化合物对炎症因子TNF-α、IL-6和NO均有明显的抑制作用，其中3,4-二羟基-β-苯乙基-O-α-L-鼠李糖吡喃-(1→2)-O-β-D-芹糖呋喃-(1→6)-4-O-阿魏酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷抗炎活性最强；分子生物学实验表明连翘酯苷B和3,4-二羟基-β-苯乙基-O-α-L-鼠李糖吡喃-(1→2)-O-β-D-芹糖呋喃-(1→6)-4-O-阿魏酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷可以通过激活氧化应激通路发挥抗炎疗效，可制备成为抗炎药物、炎症因子抑制药物或Keap1-Nrf2蛋白解离剂进行应用。
附图说明
图1为广东紫珠醇提物对小鼠肉芽肿的影响。
图2为广东紫珠醇提物对小鼠肉芽肿模型血清NO水平的影响。
图3为不同浓度苯乙醇苷对RAW264.7细胞TNF-α的影响。
图4为不同浓度苯乙醇苷对RAW264.7细胞IL-6的影响。
图5为不同药物浓度对RAW 264.7细胞NO含量的影响。
图6为连翘酯苷B、3,4-二羟基-β-苯乙基-O-α-L-鼠李糖吡喃-(1→2)-O-β-D-芹糖呋喃-(1→6)-4-O-阿魏酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷对Raw264.7细胞中HO-1/NQO-1蛋白表达影响。
图7为连翘酯苷B、3,4-二羟基-β-苯乙基-O-α-L-鼠李糖吡喃-(1→2)-O-β-D-芹糖呋喃-(1→6)-4-O-阿魏酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷对Raw264.7细胞Keap1和Nrf2蛋白表达影响。
图8为4-羟基-β-苯乙基-O-α-L-鼠李糖吡喃-(1→3)-4-O-咖啡酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷的氢谱图。
图9为4-羟基-β-苯乙基-O-α-L-鼠李糖吡喃-(1→3)-4-O-咖啡酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷的碳谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
以下实验所用广东紫珠栽培品于2016年购自于江西萍乡，经广州中医药大学中药鉴定学教研室彭光天副教授鉴定为马鞭草科(Verbenaceae)紫珠属(Callicarpa L.)植物广东紫珠(C.kwangtungensis Chun.)的地上部分，自然晾干，剪切粉碎后粗粉备用。
实施例1广东紫珠醇提物抗炎活性测试
分别选用了二甲苯致小鼠耳肿胀、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性升高及小鼠棉球肉芽肿模型评价广东紫珠醇提物对急、慢性炎症的抑制作用，并检测小鼠血清中炎症因子NO水平。
其中广东紫珠醇提物的制备过程为：将12kg干燥广东紫珠枝和叶粉碎过40目筛，然后置于渗漉筒中用甲醇反复提取，提取液合并减压浓缩后得到浸膏1kg。
1、广东紫珠醇提物对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响
二甲苯涂抹可引起小鼠发生明显耳肿胀，广东紫珠醇提物高、中、低剂量(给药量分别为200、100、50mg·kg-1)均可显著抑制小鼠耳肿胀程度，阳性对照药物为地塞米松组，其给药量为25mg·kg-1，其中高剂量组抑制作用最强，其抑制率可达70％，结果见表1。
表1广东紫珠醇提物对耳肿胀的抑制作用
组别 肿胀度(mg) 抑制率％
模型组 12.65±4.72<sup>###</sup> -
地塞米松组 2.61±1.54<sup>**</sup> 79.3
紫珠低剂量 4.53±2.08<sup>**</sup> 64.2
紫珠中剂量 6.05±4.08<sup>*</sup> 52.2
紫珠高剂量 3.80±2.39<sup>**</sup> 70.0
注：n＝10，与正常组比较，###P<0.001，与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。
2、广东紫珠醇提物对醋酸致小鼠腹膜通透性增加的影响
醋酸是一种常见的致炎物，可引起毛细血管通透性增加，伊文斯兰渗出增多，腹膜液吸光度增大，广东紫珠醇提物可剂量依赖性地降低醋酸刺激引起的腹膜通透性增加，结果见表2。
表2广东紫珠醇提物对小鼠腹膜通透性影响
组别 腹膜通透性 抑制率(％)
正常组 0.1101±0.0271 -
模型组 0.8241±0.1011<sup>###</sup> -
阳性药组 0.3208±0.1772<sup>***</sup> 61.0
紫珠低剂量 0.7373±0.1667<sup>*</sup> 10.5
紫珠中剂量 0.5325±0.1108<sup>***</sup> 35.4
紫珠高剂量 0.4879±0.0881<sup>***</sup> 40.8
注：n＝10，与正常组比较，###P<0.001，与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。
3、广东紫珠醇提物对棉球致小鼠慢性肉芽肿的影响
测试结果如图1所示，其中n＝10，与正常组比较，###P<0.001，与模型组比较，**P<0.01，***P<0.001；从中可知，术后七天广东紫珠醇提物各剂量组肉芽肿重量较模型组均有显著降低。
4、广东紫珠醇提物对棉球肉芽肿小鼠血清NO水平的影响
测试结果如图2所示，其中n＝10，与正常组比较，###P<0.001；与模型组比较，**P<0.01，***P<0.001；从中可知，广东紫珠醇提物给药各组与模型组相比，均可见血清NO水平明显降低，且具剂量依赖关系。
实施例2广东紫珠醇提物中抗炎活性的具体成分及其分离
1、苯乙醇苷化合物的制备
苯乙醇苷化合物为毛蕊花糖苷(acteoside)、连翘酯苷B(forsythoside B)、金石蚕苷(poliumoside)、3,4-二羟基-β-苯乙基-O-α-L-鼠李糖吡喃-(1→2)-O-β-D-芹糖呋喃-(1→6)-4-O-阿魏酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷(alyssonoside)、3,4-二羟基-β-苯乙基-O-α-L-鼠李糖吡喃-(1→2)-4-O-咖啡酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷(parvifloroside A)、4-羟基-β-苯乙基-O-α-L-鼠李糖吡喃-(1→3)-4-O-咖啡酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷(syringalide A 3'-α-L-rhanmnopyranoside)。均通过以下步骤，从广东紫珠中分离得到：
将12kg的干燥广东紫珠枝和叶粉碎过筛，然后置于渗漉筒中用甲醇反复提取，提取液合并减压浓缩后得到浸膏1kg。然后用适量蒸馏水溶解，再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，萃取液分别减压浓缩至干，得到石油醚部位85g，乙酸乙酯部位108g，正丁醇部位400g，水部位260g。取正丁醇萃取物(390g)经AB-8型大孔树脂柱层析，依次以0％、20％、40％、70％、100％甲醇梯度洗脱，TLC检测合并，减压浓缩得5个不同梯度甲醇洗脱组分Fr.1～Fr.5。Fr.3经Diaion HP-20型大孔树脂依次以0％、20％、40％、70％、100％甲醇梯度洗脱得到syringalide A 3'-α-L-rhanmnopyranoside(57mg)、parvifloroside A(53mg)、alyssonoside(359mg)、acteoside(429mg)、forsythoside B(1445mg)；poliumoside(516mg)。
其中，化合物parvifloroside A为首次从广东紫珠属植物中分离得到，其结构如下式所示：
化学名称为：3,4-二羟基-β-苯乙基-O-α-L-鼠李糖吡喃-(1→2)-4-O-咖啡酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷；其氢谱图和碳谱图请见图8和图9。
实施例3苯乙醇苷类成分的抗炎活性测试
采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定LPS诱导的RAW264.7细胞中TNF-α和IL-6的水平，Griess法测定LPS诱导的RAW264.7细胞中NO水平。
1、苯乙醇苷类成分对RAW264.7细胞TNF-α水平的影响
测试结果如图3所示。从图中可知，LPS诱导的模型组与空白组相比，TNF-α含量明显升高(P<0.001)，说明LPS诱导细胞产生炎症反应。与LPS组相比，6个苯乙醇苷组均能显著抑制TNF-α的释放量(P<0.001)。6个化合物分别设置不同剂量考察其对RAW264.7巨噬细胞TNF-α的影响，acteoside、forsythoside B、poliumoside、alyssonoside、parviflorosideA、syringalide A3'-α-L-rhanmnopyranoside的EC50(μM)值分别为20.58，28.00，69.25，19.35，73.06，76.70。其中，acteoside、alyssonoside、parvifloroside A抑制作用且呈剂量依赖关系，且alyssonoside抑制作用最明显。forsythoside B、poliumoside和syringalide A3'-α-L-rhanmnopyranoside给药组的TNF-α含量均有降低趋势，但不成剂量依赖关系。
2、不同剂量苯乙醇苷对IL-6浓度的影响
本实施例采用ELISA法检测苯乙醇苷对LPS诱导RAW264.7小鼠巨噬细胞产生IL-6的影响，测试结果如图4所示。与空白组相比，LPS诱导的模型组与空白组相比，IL-6含量明显升高(P<0.001)，说明LPS诱导细胞产生炎症反应。与LPS组相比，各药物组均能显著抑制IL-6的释放量(P<0.001)。由图4可知，化合物acteoside、alyssonoside、parviflorosideA、forsythoside B、poliumoside和syringalide A 3'-α-L-rhanmnopyranoside对促炎性细胞因子IL-6都有较强的抑制作用且呈剂量依赖关系。
3、不同浓度苯乙醇苷对RAW 264.7巨噬细胞NO含量的影响
测试结果如图5所示，苯乙醇苷作用24h后，细胞NO分泌量随着药物浓度的增大而减少，与LPS组相比，药物浓度为12.5-100μM时，对NO分泌量均呈现出极显著的抑制作用(P<0.01)；药物浓度为3.125μM和6.25μM时呈现出显著抑制作用(P<0.05)。
实施例4 2个苯乙醇苷类成分激活抗氧化通路的分子生物学研究
选择广东紫珠中含量最为丰富的forsythoside B和抗炎活性最佳的alyssonoside，从氧化应激角度研究该药材中苯乙醇苷类成分产生抗炎活性的原因。
LPS诱导的RAW264.7小鼠巨噬细胞中，2个苯乙醇苷forsythoside B和alyssonoside分别给药后，Ⅱ相解毒酶(HO-1、NQO-1)、核转录因子Nrf2及Keap1的蛋白表达量升高，表明这2个苯乙醇苷分子可以促使Keap1-Nrf2蛋白发生解离，从而激活抗氧化通路发挥抗炎疗效。
测试结果如图6和图7所示，其中图6为2种苯乙醇苷化合物对Raw264.7细胞中HO-1/NQO-1蛋白表达影响；图7为2种苯乙醇苷化合物对Raw264.7细胞Keap1和Nrf2蛋白表达影响。
由图6可知，与LPS组相比，forsythoside B、alyssonoside给药组在剂量为50，25，12.5μM时均能上调HO-1、NQO-1的表达量，且呈剂量依赖关系(P<0.05)。
由图7可知，与LPS组相比，alyssonoside给药组在剂量为50，25，12.5μM和forsythoside B给药组在剂量为50μM时均能上调Keap1和Nrf2的表达量，且呈剂量依赖关系(P<0.05)。而forsythoside B给药组在剂量为25和12.5μM时对Keap1的表达无显著影响。
由上可知，forsythoside B和alyssonoside可激活Keap1-Nrf2-ARE通路，后者激活作用强度优于前者，使Nrf2其从细胞质迁移进入细胞核，并在细胞核内积累，进一步与抗氧化反应原件结合，引起下游Ⅱ相解毒酶的表达升高，提高细胞的抗氧化应激能力，从而抑制炎症因子表达。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，对于本领域的普通技术人员来说，在上述说明及思路的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。

Claims (10)

1.苯乙醇苷化合物在制备抗炎药物中的应用，其特征在于，所述苯乙醇苷化合物均分离自于广东紫珠，其分别为毛蕊花糖苷、连翘酯苷B、金石蚕苷、3,4-二羟基-β-苯乙基-O-α-L-鼠李糖吡喃-(1→2)-O-β-D-芹糖呋喃-(1→6)-4-O-阿魏酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷、3,4-二羟基-β-苯乙基-O-α-L-鼠李糖吡喃-(1→2)-4-O-咖啡酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷、4-羟基-β-苯乙基-O-α-L-鼠李糖吡喃-(1→3)-4-O-咖啡酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷。
2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述苯乙醇苷化合物的分离过程为：
S1.将干燥广东紫珠枝叶粉碎，并用甲醇提取，得到甲醇提取液，浓缩后得到浸膏；
S2.将浸膏加水溶解，并依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取；
S3.取正丁醇萃取物经AB-8型大孔树脂柱层析分离，以0％、20％、40％、70％、100％甲醇水溶液为洗脱液梯度洗脱，TLC检测合并得5个流份Fr.1～Fr.5；
S4.将流份40％甲醇水洗脱部分的浸膏经Diaion HP-20大孔树脂以0％、10％、20％、30％、40％、60％、100％甲醇水溶液为洗脱液梯度洗脱，即可得到所述苯乙醇苷化合物。
3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，步骤S3和S4中所述大孔树脂柱层析分别为AB-8型大孔树脂柱层析和Diaion HP-20型大孔树脂柱层析。
4.根据权利要求2所述应用，其特征在于，步骤S3中甲醇水溶液梯度洗脱中甲醇的体积比依次为0％、20％、40％、70％、100％。
5.根据权利要求2所述应用，其特征在于，步骤S4中甲醇水溶液梯度洗脱中甲醇的体积比依次为0％、10％、20％、30％、40％、60％、100％。
6.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述苯乙醇苷化合物为连翘酯苷B和/或3,4-二羟基-β-苯乙基-O-α-L-鼠李糖吡喃-(1→2)-O-β-D-芹糖呋喃-(1→6)-4-O-阿魏酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷。
7.苯乙醇苷化合物在制备炎症因子抑制药物中的应用，其特征在于，所述炎症因子为TNF-α、IL-6或炎症介质NO中的一种或多种。
8.苯乙醇苷化合物在作为Keap1-Nrf2蛋白解离剂中的应用。
9.根据权利要求1至8任一所述应用，其特征在于，所述药物或解离剂的剂型为胶囊剂或口服颗粒剂。
10.一种苯乙醇苷化合物的制备方法，其特征在于，所述苯乙醇苷化合物的结构如下式所述：
其由如下步骤分离得到：
S1.将干燥广东紫珠枝叶粉碎，并用甲醇提取，得到甲醇提取液，浓缩后得到浸膏；
S2.将浸膏加水溶解，并依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取；
S3.取正丁醇萃取物经AB-8型大孔树脂柱层析分离，以0％、20％、40％、70％、100％甲醇水溶液为洗脱液梯度洗脱，TLC检测合并得5个流份Fr.1～Fr.5；
S4.将流份40％甲醇水洗脱部分的浸膏经Diaion HP-20大孔树脂以0％、10％、20％、30％、40％、60％、100％甲醇水溶液为洗脱液梯度洗脱，即可得到所述苯乙醇苷化合物。
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