CN110396490A - 一种培养短短小芽孢杆菌的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种培养短短小芽孢杆菌的方法，涉及生物农药领域。该方法采用含有如下组分的发酵培养基培养短短小芽孢杆菌：糖蜜5‑7g/L，玉米淀粉7‑9g/L，黄豆饼粉14‑16g/L，玉米浆9‑11g/L，酵母粉4‑6g/L，氯化铵4‑5g/L，碳酸钙4.5‑5g/L，磷酸氢二钾1.2‑1.7g/L，硫酸锌1.8‑2.2g/L，pH7.0‑7.5。本发明培养短短小芽孢杆菌的方法，能够在较短的时间内，获得较多的活菌，且芽孢含量较高。

Description

一种培养短短小芽孢杆菌的方法
技术领域
本发明涉及生物农药领域，具体涉及一种培养短短小芽孢杆菌的方法。
背景技术
在全世界范围内，水稻稻瘟病是最严重的水稻病害之一，造成水稻减产10-20％。水稻稻瘟病全年均可对水稻造成严重影响，危害水稻的各部位，有苗稻瘟病、叶瘟、叶枕瘟。
短短小芽孢杆菌TW对水稻稻瘟病有较好防治效果，但是发酵时间过长，发酵液中活菌含量和芽孢含量不够高。
发明内容
本发明的目的是提供一种培养短短小芽孢杆菌的方法，能够在较短的时间内，获得较多的活菌，且芽孢含量较高。
本发明的目的采用如下技术方案实现。
一种培养短短小芽孢杆菌的方法，采用含有如下组分的发酵培养基培养短短小芽孢杆菌：糖蜜5～7g/L，玉米淀粉7～9g/L，黄豆饼粉14～16g/L，玉米浆9～11g/L，酵母粉4～6g/L，氯化铵4～5g/L，碳酸钙4.5～5g/L，磷酸氢二钾1.2～1.7g/L，硫酸锌1.8～2.2g/L，pH7.0-7.5。
优选的技术方案中，所述发酵培养基培养含有如下组分：糖蜜6g/L，玉米淀粉8g/L，黄豆饼粉15g/L，玉米浆10g/L，酵母粉5g/L，氯化铵4.5g/L，碳酸钙5g/L，磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸锌2g/L，pH7.0～7.5。
优选的技术方案中，培养温度为28～32℃。
优选的技术方案中，培养时间为30～40h。
优选的技术方案中，将短短小芽孢杆菌接种PDA培养基，获得种子液；将种子液接种发酵培养基进行培养。
本发明培养短短小芽孢杆菌的方法，能够在较短的时间内，获得较多的活菌，且芽孢含量较高。发酵培养基1中缺少了玉米浆或K2HPO4·3H2O或ZnSO4·7H2O，或者以氯化钾替代磷酸氢二钾，以硫酸锰替代硫酸锌，发酵液中活菌含量最高只能达到本发明培养基的10％，且芽孢率不高于40％。
具体实施方式
短短小芽孢杆菌TW公开于专利号为ZL2010105720087的发明专利中。
实施例1采用本发明培养基培养短短小芽孢杆菌TW
用无菌牙签挑取事先在LB固体培养基上划线培养好的短短小芽孢杆菌TW单菌落，接种于装有5mL PDA液体培养液的容积为20mL的三角瓶中，于30℃、200rpm条件下振荡培养16h，得到一级种子液。将获得的5mL种子液全部接种于装有400mLPDA培养液的溶积为1000mL的三角瓶中，于30℃、200rpm条件下振荡培养16h，得到二级种子液。将所得的400mL培养液接种于20L发酵培养基1中。
发酵培养基1，含有如下组分：糖蜜6g/L，玉米淀粉8g/L，黄豆饼粉15g/L，玉米浆10g/L，酵母粉5g/L，氯化铵4.5g/L，碳酸钙5g/L，K2HPO4·3H2O1.5g/L，ZnSO4·7H2O2g/L，pH7.0，溶剂为水。发酵条件：控制发酵液pH为7.0-7.2，溶氧100％，搅拌转速350rpm，发酵温度30℃，发酵48小时。分别于发酵24h、36h和48h取样，检测发酵液活菌含量和芽孢率。
另外分别以对照培养基1-8替换发酵培养基1，在下述条件下发酵：控制发酵液pH为7.0-7.2，溶氧100％，搅拌转速350rpm，发酵温度30℃，发酵时间48小时。分别于发酵24h、36h和48h取样，检测发酵液活菌含量和芽孢率。
其中对照培养基1，含有如下组分：大豆粉5g/L，玉米粉5g/L，淀粉5g/L，蔗糖1.25g/L，酵母粉1.25g/L，碳酸钙1g/L，MnSO4 0.05g/L，溶剂为水。
对照培养基2，含有如下组分：葡萄糖10g/L，黄豆饼粉25g/L，蛋白胨4g/L，氯化钠2g/L，硫酸铵6g/L，碳酸钙4g/L，硫酸镁4g/L。
对照培养基4含有如下组分：糖蜜6g/L，玉米淀粉8g/L，黄豆饼粉15g/L，酵母粉5g/L，氯化铵4.5g/L，碳酸钙5g/L，K2HPO4·3H2O1.5g/L，ZnSO4·7H2O2g/L，pH7.0，溶剂为水。
对照培养基5含有如下组分：糖蜜6g/L，玉米淀粉8g/L，黄豆饼粉15g/L，玉米浆10g/L，酵母粉5g/L，氯化铵4.5g/L，碳酸钙5g/L，ZnSO4·7H2O2g/L，pH7.0，溶剂为水。
对照培养基6含有如下组分：糖蜜6g/L，玉米淀粉8g/L，黄豆饼粉15g/L，玉米浆10g/L，酵母粉5g/L，氯化铵4.5g/L，碳酸钙5g/L，KCl0.52g/L，ZnSO4·7H2O2g/L，pH7.0，溶剂为水。
对照培养基7含有如下组分：糖蜜6g/L，玉米淀粉8g/L，黄豆饼粉15g/L，玉米浆10g/L，酵母粉5g/L，氯化铵4.5g/L，碳酸钙5g/L，K2HPO4·3H2O1.5g/L，pH7.0。溶剂为水。
对照培养基8含有如下组分：糖蜜6g/L，玉米淀粉8g/L，黄豆饼粉15g/L，玉米浆10g/L，酵母粉5g/L，氯化铵4.5g/L，碳酸钙5g/L，K2HPO4·3H2O1.5g/L，硫酸锰1.06g/L，pH7.0，溶剂为水。
表1各培养基不同发酵时间活菌含量(cfu/mL)和芽孢率(％)
由表1可见，采用发酵培养基1，能够显著提高活菌含量和芽孢率，培养36h时，活菌含量达到5.53×1010cfu/mL，芽孢率达到98％。发酵培养基1中缺少了玉米浆或K2HPO4·3H2O或ZnSO4·7H2O，或者以氯化钾替代磷酸氢二钾，以硫酸锰替代硫酸锌，发酵液中活菌含量最高只能达到发酵培养基1的10％，且芽孢率不高于40％。
实施例2
用无菌牙签挑取事先在LB固体培养基上划线培养好的短短小芽孢杆菌TW单菌落，接种于装有5mL PDA液体培养基的容积为20mL的三角瓶中，于30℃、200rpm条件下振荡培养16h，得到一级种子液。将获得的5mL种子液全部接种于装有400mL PDA液体培养基的容积为1000mL的三角瓶中，于30℃、200rpm条件下振荡培养16h，得到二级种子液。将所得的400mL培养液接种于20L发酵培养基2中。
发酵培养基2，含有如下组分：糖蜜5g/L，玉米淀粉9g/L，黄豆饼粉14g/L，玉米浆9g/L，酵母粉6g/L，氯化铵5g/L，碳酸钙4.5g/L，K2HPO4·3H2O1.2g/L，ZnSO4·7H2O1.8g/L，pH7.0，溶剂为水。发酵条件：控制发酵液pH7.0-7.2，溶氧100％，搅拌转速350rpm，发酵温度为30℃，发酵48小时。分别于发酵24h、36h和48h取样，检测发酵液活菌含量和芽孢率。结果如表2。
表2培养基2不同发酵时间活菌含量(cfu/mL)和芽孢率(％)

Claims (5)

1.一种培养短短小芽孢杆菌的方法，其特征在于采用含有如下组分的发酵培养基培养短短小芽孢杆菌：糖蜜5～7g/L，玉米淀粉7～9g/L，黄豆饼粉14～16g/L，玉米浆9～11g/L，酵母粉4～6g/L，氯化铵4～5g/L，碳酸钙4.5～5g/L，磷酸氢二钾1.2～1.7g/L，硫酸锌1.8～2.2g/L，pH7.0-7.5。
2.根据权利要求1所述培养短短小芽孢杆菌的方法，其特征在于所述发酵培养基培养含有如下组分：糖蜜6g/L，玉米淀粉8g/L，黄豆饼粉15g/L，玉米浆10g/L，酵母粉5g/L，氯化铵4.5g/L，碳酸钙5g/L，磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸锌2g/L，pH7.0～7.5。
3.根据权利要求1或2所述培养短短小芽孢杆菌的方法，其特征在于培养温度为28～32℃。
4.根据权利要求3所述培养短短小芽孢杆菌的方法，其特征在于培养时间为30～40h。
5.根据权利要求4所述培养短短小芽孢杆菌的方法，其特征在于将短短小芽孢杆菌接种PDA培养基，获得种子液；将种子液接种发酵培养基进行培养。
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